KR20110068958A

KR20110068958A - 지치 추출물을 유효성분으로 하는 비만개선용 약제학적 조성물

Info

Publication number: KR20110068958A
Application number: KR1020110044173A
Authority: KR
Inventors: 남종현
Original assignee: 남종현
Priority date: 2011-05-11
Filing date: 2011-05-11
Publication date: 2011-06-22

Abstract

본 발명은 비만개선용 약제학적 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 지치 추출물을 유효성분으로 하는 비만개선용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

Description

지치 추출물을 유효성분으로 하는 비만개선용 약제학적 조성물{Pharmaceutical composition for improving obesity which comprises extract of lithospermum erythrorhizon as an active component}

본 발명은 지방간 개선제 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 토마토 전초 추출물 등을 이용한 지방간 개선제 조성물에 관한 것이다.

지방간이란 정상적인 지방대사가 이루어지지 못함으로써 간에 지질, 특히 중성지방(트리클리세라이드)이 과도하게 축적되어 간세포 절반 이상에서 지방 공포(空胞)가 관찰되는 상태의 질환을 말한다.

임상적으로는 간세포의 5% 이상에서 지방이 관찰되거나 간 100mg 당 지방이 5mg 이상일 때를 지방간으로 분류한다. 최근 들어서는 생활 수준의 향상에 따른 고지방, 고열량의 식생활, 문명의 발달로 인한 운동부족 등으로 인하여 지방간 환자가 급증하고 있으며, 연령층도 10대부터 50, 60대 이후까지 전반적으로 발병되고 있다. 지방간은 방치될 경우 간염, 간경변증, 간암 등으로 진행될 수 있다.

지방간의 원인으로서는 알코올, 당뇨, 비만, 영양불량증(장기간의 저단백식, 고지방식, 기아, 비타민 부족, 과잉의 당질 섭취), 약물의 남용(김성훈 외, "복부초음파로 진단된 지방간의 원인" 가정의학회지 175(1995.12) pp.785-794) 등이 보고 되어 있다.

지방간은 콜레스테롤 지방간, 인지질 지방간, 중성지방에 의한 지방간으로 분류되고 가장 일반적인 지방간은 중성지방이 간 내에 비정상적으로 축적된 경우의 지방간이다.

현재 시중에서 판매되고 있는 지방간 치료제로서는 레가론™(부광약품), 리카바™(유한양행), 헤파리겐™(보령제약), 헤파멜즈™(한화제약) 등이 예시될 수 있으며, 종래 기술로서는 지방간 치료에 제니스테인 등을 이용하는 대한민국 공개특허 제2006-0028561호 등이 예시될 수 있다.

본 발명의 기술적 과제는 토마토 전초 추출물 등을 이용한 지방간 개선제 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 기술적 과제는 이하에서 제시될 것이다.

본 발명은 토마토 전초 추출물 등을 유효성분으로 포함하는 지방간 개선제 조성물에 관한 것이다.

본 발명자는 토마토 전초, 사상자 및 지치의 50% 에탄올 추출물을 제조하고, 상기 추출물을 실험동물에 고지방식이 또는 알콜과 함께 투여하였을 때, 고지방식이 또는 알콜 투여에 의하여 유발된 실험동물의 혈액 중의 글루타민산피루브산트랜스아미나아제(이하 "GPT") 및 글루타민산옥살로아세트산트랜스아미나아제(이하 "GOT")의 증가된 활성이 저하되고, 간의 총콜레스테롤과 중성지방의 농도가 저하됨을 확인할 수 있었다. 상기에서 GPT 및 GOT는 간이 알콜, 비만 등이 원인이 되어 손상을 입을 경우 간으로부터 혈액 중으로 분비되기 때문에 간 기능 장애를 나타내는 일반적인 지표로서 사용되고 있는 효소로서, 혈액 중의 GPT 및 GOT의 활성을 저하시킬 수 있는 물질은 지방간 개선 등 간 기능을 개선할 수 있다고 알려져 있다(M. Hayashi, et al., Nippon Yakuri gaku Zasshi, 100, 391-399(1992)).

본 발명의 지방간 개선제 조성물은 이러한 실험 결과에 기초하여 완성된 것으로서, 토마토 전초 추출물, 사상자 추출물 및 지치 추출물(이하 "토마토 전초 추출물 등")로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 추출물을 포함함을 특징으로 한다.

본 명세서에서, "지방간"이란, 앞서 분류한 바의 세가지 가지의 유형 즉 콜레스테롤 지방간, 인지질 지방간 및 중성지방 지방간을 모두 포함하는 의미이며, 지방간의 원인에 따른 유형 즉 알콜성 지방간과 비알콜성 지방간을 모두 포함하는 의미이다. 그것은 알콜성 지방간이든지 비알콜성 지방간이든지를 불문하고 지방간은 간 내에 콜레스테롤 또는 중성지방의 축적으로 나타나는데, 하기 실험예는 토마토 전초 추출물 등이 실험동물 간의 총 콜레스테롤 함량 및 중성지방의 함량을 낮추는 활성을 지니고 있음을 보여주고 있기 때문이다.

또한 본 명세서에서, 상기 "개선"이란 증상의 예방, 개선, 치료 또는 이러한 증상의 발현 지연을 포함하는 의미이다.

또한 본 명세서에서, "토마토 전초 추출물"은 추출 방법을 불문하고 추출 대상인 토마토 잎, 줄기, 꽃, 뿌리 또는 이들의 혼합물을 메탄올, 에탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 포화노말부탄올, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 물 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 얻어진 추출물과 그 추출물에서 상기 열거된 용매로 분획된 추출물을 포함하는 의미로서 이해된다. 추출 방법을 불문하므로, 추출 대상인 토마토 잎, 줄기, 꽃, 뿌리 또는 이들의 혼합물을 추출 용매에 침지시키는 단계를 통하여 추출되는 한, 추출 방법은 냉침, 환류, 가온, 초음파 등 임의의 방식이 모두 적용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 그럼에도 상기 "토마토 전초 추출물"은 바람직하게는 추출 대상인 토마토 잎, 줄기, 꽃, 뿌리 또는 이들의 혼합물을 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하고 얻어진 것으로서, 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물을 포함하는 의미이다.

또한 본 명세서에서, "사상자(Torilis japonica) 추출물"은 추출 대상이 사상자 잎, 줄기, 꽃, 뿌리 또는 이들의 혼합물인 점을 제외하고는 상기 "토마토 전초 추출물"과 동일하게 정의될 수 있다.

또한 본 명세서에서, "지치(Lithospermum erythrorhizon) 추출물"도 마찬가지로 추출 대상이 지치 잎, 줄기, 꽃 뿌리 또는 이들의 혼합물인 점을 제외하고는 상기 "토마토 전초 추출물"과 동일하게 정의될 수 있다.

본 명세서에서 특별히 정의되지 아니한 기타의 용어는 국어사전적 의미나 당업계에서 일반적으로 받아들여지고 있는 의미를 따른다.

한편 본 발명의 지방간 개선제 조성물은 그 유효성분인 토마토 전초 추출물 등을 지방간 개선 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 99.900 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 지방간 개선 효과를 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

한편, 지방간은 방치될 경우 간염, 간경변증, 간암 등으로 진행될 수 있다.

따라서 상기 토마토 전초 추출물 등은 지방간이 원인이 되어 발생하는 질병인 간염, 간경병증 또는 간암의 예방 목적으로 유용하게 사용될 수도 있다.

그러므로 다른 측면에 있어서, 본 발명은 상기 토마토 전초 추출물 등을 유효성분으로 포함하는 지방간이 원인이 되어 발생하는 질병의 예방을 위한 조성물로서도 파악될 수 있다.

본 발명의 지방간이 원인이 되어 발생하는 질병의 예방을 위한 조성물에 있어서, 그것의 유효성분의 바람직한 양태, 그것의 함량 등과 관련하여서는 전술한 바의 본 발명의 지방간 개선제 조성물과 관련하여 설명한 바가 그대로 유효하다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 상기 토마토 전초 추출물 등을 유효성분으로 포함하는 숙취 해소용 조성물에 관한 것이다.

과음 후 경험하게 되는 매스꺼움, 두통 등의 숙취(hangover) 현상은 알콜 대사 과정에서 발생하는 알데히드 때문에 나타나는 증상이다. 일반적으로 간에는 알콜분해효소(ADH)와 알데히드분해효소(ALDH)가 존재하여 알콜이 인체에 유입되면, 알콜은 ADH에 의해 아세트알데히드로 전환되고, 아세트알데히드는 ALDH에 의해 인체에 무해한 아세테이트로 전환되게 된다.

하기 실시예에서 확인되는 바와 같이 상기 토마토 전초 추출물 등이 ADH 활성과 ALDH의 활성을 촉진시킨다는 점에서 숙취 해소 용도로도 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 숙취 해소용 조성물은 그 유효성분으로서, 특히 토마토 전초 추출물과 오리나무 추출물 그리고 마가목 추출물을 포함하는 것이 바람직하다. 그것은 아래의 실험예가 보여주는 바와 같이 토마토 전초 추출물이 오리나무 추출물 그리고 마가목 추출물과 혼합될 경우에 ADH 활성과 ALDH의 활성을 현저하게 높이기 때문이다.

여기서 오리나무 추출물과 마가목 추출물은 각각 추출 대상이 오리나무 잎, 줄기, 꽃, 뿌리 또는 이들의 혼합물 및 마가목 잎, 줄기, 꽃, 뿌리 또는 이들의 혼합물인 점을 제외하고는 상기 "토마토 전초 추출물"과 동일하게 정의될 수 있다.

본 발명의 숙취 해소용 조성물에 있어서도, 그것의 유효성분의 바람직한 양태, 그것의 함량 등과 관련하여서는 전술한 바의 본 발명의 지방간 개선제 조성물과 관련하여 설명한 바가 그대로 유효하다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 상기 토마토 전초 추출물 등을 유효성분으로 포함하는 비만 개선제 조성물에 관한 것이다.

비만은 열량의 섭취와 소비의 불균형으로 발생하는 대사성 질환이며 과잉된 열량으로 인해 지방 조직이 비정상적으로 증가된 상태를 말한다[Kopelman PG. Neuroendocrine function in obesity. Clinical Endocrinology 28:675-689, 1998; Clinical Obesity (eds. Kopelman PG, Stock MJ) 248-89 (Blackwell Science, Oxford 1998]. 남자는 체지방이 체중의 25％, 여자는 체중의 30％ 이상일 때 비만으로 보며, 임상적으로는 BMI(Body Mass Index: 체질량지수)가 25.0 내지 30.0를 과체중으로 정의하고 30.0 이상인 경우를 비만으로 정의한다.

비만의 원인으로는 고지방·고열량의 식생활, 바쁜 사회적 환경에 따른 운동 부족, 내분비 이상 등 환경적 요인과 유전적 요인을 들 수 있는데, 이 중 비만의 50 내지 70% 정도가 환경적 요인에 의한 것으로 알려져 있고, 나머지가 유전적 요인에 의한 것으로 알려져 있다.

본 명세서에서, "비만"은 그것이 환경적 요인에 의한 비만이든 또는 유전적 요인에 의한 비만이든 지방조직이 비정상적으로 증가된 상태를 의미하며 체질량지수의 구분에 따른 비만(BMI이 30.0 이상인 경우)과 과체중(BMI이 25~30)인 경우을 포함하는 의미이다.

본 발명의 비만 개선제 조성물에 있어서, 그 유효성분의 바람직한 양태, 그것의 함량 등과 관련하여서는 본 발명의 지방간 개선제 조성물과 관련하여 전술한 바가 그대로 유효하다.

한편 비만이 발생하여 그 상태가 지속되면 여러 질환의 원인으로 작용하는데, 그러한 질환으로서 대표적으로 고혈압, 당뇨병 등의 대사성 질환을 들 수 있다(김창종, 비만과 건강, 2002, 중앙대학교출판부).

따라서 본 발명은 다른 측면에 있어서, 상기 토마토 전초 추출물 등을 유효성분으로 포함하는 비만이 원인이 되어 발생하는 질병의 예방을 위한 조성물로서도 파악될 수 있다.

또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 상기 토마토 전초 추출물 등을 유효성분으로 포함하는 다이어트용 조성물에 관한 것이다.

본 명세서에서 "다이어트"란 체중 상태가 비만이나 과체중은 아니지만 미용이나 건강 목적으로 체중/체지방의 감소가 바람직하거나 필요한 상태로서 정의된다. 통상 본 발명의 다이어트용 조성물은 정상인의 미용이나 건강 목적으로 사용하기 위하여 제조될 수 있다.

본 발명의 다이어트용 조성물에 있어서, 그 유효성분의 바람직한 양태, 그것의 함량 등과 관련하여서는 본 발명의 지방간 개선제 조성물과 관련하여 전술한 바가 그대로 유효하다.

한편, 본 발명의 지방간 개선제 조성물, 지방간이 원인이 되어 발생하는 질병의 예방용 조성물, 숙취 해소용 조성물, 비만 개선제 조성물, 비만이 원인이 되어 발생하는 질환의 예방용 조성물 및 다이어트용 조성물(이하 통칭하여 "본 발명의 조성물")은 구체적인 양태에 있어서, 음료 등의 식품 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.

감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.

생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다.

미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.

또한 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다.

이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005중량％ 내지 약 0.5중량％ 범위를 의미한다.

사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다.

사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.

사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.

사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.

본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 경구용 제형(정제, 현탁액, 과립, 에멀젼, 캡슐, 시럽 등), 비경구형 제형(멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액), 국소형 제형(용액, 크림, 연고, 겔, 로션, 패치) 등으로 제조될 수 있다.

상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성(충분히 낮은 독성)을 지니지 않는다는 의미이다.

약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등), 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산, 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 정제화제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 들 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.

부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 본 발명의 약제학적 조성물이 수성 현탁제로 제조될 경우에 적합한 부형제로서는 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다. 주사액으로 제조되는 경우 적합한 부형제로서는 링거액, 등장 염화나트륨 등을 들 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있고, 경우에 따라서는 국소적으로 투여될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니된다.

전술한 바에 따르면, 본 발명은 토마토 전초 추출물 등을 이용한 지방간 개선제 조성물을 제공할 수 있다. 또한 본 발명은 토마토 전초 추출물 등을 이용한 지방간이 원인이 되어 발생하는 간염, 간경변증 또는 간암의 예방용 조성물, 숙취 해소용 조성물, 비만 개선제 조성물, 비만이 원인이 되어 발생하는 질환인 고혈압 또는 당뇨병의 예방용 조성물, 다이어트용 조성물도 제공할 수 있다.

상기 본 발명의 조성물들은 음료 등의 식품 조성물 또는 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.

이하 본 발명을 참조예, 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 참조예, 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 참조예 > 오리나무 추출물 및 마가목 추출물의 제조

<참조예 1> 오리나마 추출물의 제조

오리나무의 잎, 줄기, 뿌리를 취하여 세정한 후 물기를 없애고 세절한 후 그 세절물 1kg를 5ℓℓ의 50% 에탄올에 침지시켜 50℃의 온도에서 10시간 동안 추출하고 추출 잔사를 제거한 후, 감암농축하여 추출용매를 제거하고 고형상의 추출물을 얻었다.

<참조예 2> 마가목 추출물의 제조

마가목의 잎, 줄기, 뿌리를 취하여 세정한 후 물기를 없애고 세절한 후 그 세절물 1kg를 5ℓ의 50% 에탄올에 침지시켜 50℃의 온도에서 10시간 동안 추출하고 추출 잔사를 제거한 후, 감암농축하여 추출용매를 제거하고 고형상의 추출물을 얻었다.

< 실시예 > 토마토 전초 , 지치 및 사상자 추출물의 제조

<실시예 1> 토마토 전초 추출물의 제조

토마토 전초 세절물 1kg를 5ℓ의 50% 에탄올에 침지시켜 50℃의 온도에서 10시간 동안 추출하고 추출 잔사를 제거한 후, 감암농축하여 추출용매를 제거하고 고형상의 추출물을 얻었다.

<실시예 2> 사상자 추출물의 제조

사장자 세절물 1kg를 5ℓ의 50% 에탄올에 침지시켜 50℃의 온도에서 10시간 동안 추출하고 추출 잔사를 제거한 후, 감암농축하여 추출용매를 제거하고 고형상의 추출물을 얻었다.

<실시예 3> 지치 추출물의 제조

지치 세절물 1kg를 5ℓ의 50% 에탄올에 침지시켜 50℃의 온도에서 10시간 동안 추출하고 추출 잔사를 제거한 후, 감암농축하여 추출용매를 제거하고 고형상의 추출물을 얻었다.

< 실험예 > 간 기능 개선 활성 실험, 숙취 해소 활성 실험 및 비만 억제 활성 실험

<실험예 1> 간 기능 개선 활성 실험

<실험예 1-1> 비만에 의해 유발된 지방간 개선 활성 실험

<실험예 1-1-1> GPT 및 GOT 활성의 측정

실험동물은 체중 220±8.9g 6주령의 Sprague-Dawley계 특정 병원균 부재 랫드 {(주)중앙실험동물, 대한민국}을 구입하여 실험시작 전까지 물과 사료를 충분히 제공하며 5마리씩 분리 사육하여 2주간 시험환경에 적응시킨 후 사용하였다.

5마리를 1군으로 하여 음성대조군(정상군)에는 정상식이{AIN-76 사료, (주)피드랩}, 양성대조군에는 고지방식이{정상식이+ 30%(중량부, 정상식이 100중량부 기준 30중량부)) fat 혼합}를, 실험군(3개의 군)에는 고지방식이에 20mg/kg의 상기 각 실시예의 추출물을 첨가하여 급여하였고 이를 6주간 실시하였다. 동물사육실의 온도(21±2℃), 습도(60±5%) 및 조명시간(12L/12D)은 자동으로 조절되도록 하였고, 물과 식이는 자유로이 먹도록 하였다.

이렇게 사육이 종료된 실험쥐의 간 손상 지표 효소 활성도를 측정하였다. 실험동물의 복부 대정맥으로부터 혈액(2ml)을 채취하여 그 혈액을 20분 동안 4500xg로 원심분리하여 혈청만을 분리한 후 GPT 및 GOT 측정용 키트{(주)아산 제약}로 GPT 및 GOT의 활성을 측정하여 아래의 [표 1]에 나타내었다.

GPT 및 GOT의 활성

구분	GPT(IU/L)	GOT(IU/L)
음성대조군	24.21±1.32	58.94±3.24
양성대조군	43.36±2.71	97.59±4.62
실험군 1(실시예 1의 추출물 투여군)	28.92±3.13**	65.73±2.83**
실험군 2(실시예 2의 추출물 투여군)	32.51±2.65**	72.64±3.49**
실험군 3(실시예 3의 추출물 투여군)	35.74±2.43**	81.82±5.27*
는 p<0.05이고 *는 p<0.01임

<실험예 1-1-2> 간 지질 농도 분석

상기 각 실시예 추출물의 투여에 따른 간 지질 농도 변화를 아래와 같이 Zlatkis 등의 방법[Zlatkis A., Zak B., Anal. biochem, 29, 143-148, 1969]에 따라 수행하였다.

상기 <실험예 1-1-1>에서 실험이 종료된 각 실험군의 쥐를 도살하여 간을 적출한 다음, 1g의 간 조직에 2ml의 saline을 첨가하고 균질화기(homogenizer)로 곱게 갈아 3ml의 클로로포름과 메탄올 용액(클로로포름: 메탄올=2:1)으로 지질을 추출하였다. 그 다음 상기 추출액을 10분 동안 3000rpm에서 원심분리하여 상등액인 클로로포름 층을 회수한 다음 클로로포름을 제거한 것을 시료로 하여 총콜레스테롤 및 중성지방의 함량을 각각 시판 키트{총콜레스테롤, AM 202-K, (주) 아산제약; 중성지방, AM 157S-K, (주)아산제약}을 이용하여 측정하였고, 결과를 아래의 [표 2]에 나타내었다.

간 조직의 총콜레스테롤 및 중성 지방의 농도

구분	총콜레스테롤(mg/㎗)	중성지방(mg/㎗)
음성대조군	143.53±3.73	68.93±4.24
양성대조군	325.92±7.34	178.84±3.25
실험군 1(실시예 1의 추출물 투여군)	243.63±2.93**	125.37±4.26**
실험군 2(실시예 2의 추출물 투여군)	282.95±4.47**	156.53±5.65**
실험군 3(실시예 3의 추출물 투여군)	295.84±5.25**	164.72±3.36*
는 p<0.05이고 *는 p<0.01임

<실험예 1-2> 알콜 투여에 의한 지방간 개선 활성 실험

<실험예 1-2-1> GPT 및 GOT 활성의 측정

상기 <실험예 1>의 2주간 순화시킨 실험동물에 2주간 정상식이를 급여하면서, 5마리를 1군으로 하여 음성대조군(정상군)에는 알콜과 상기 각 실시예의 추출물을 투여하지 않았고, 양성대조군에는 20% 알콜(15mg/kg/day)을 경구투여하였으며, 실험군에는 2주 동안 20% 알콜(15mg/kg/day)을 경구투여함과 함께 상기 각 실시예의 추출물(20mg/kg/day)을 경구투여하였다. 식이는 AIN-76 사료{(주)피드랩}를 사용하였다.

이렇게 알콜을 투여한 후의 GPT 및 GOT의 활성은 상기 <실험예 1-1-1>과 동일한 방법으로 측정하였고, 결과를 아래의 [표 3]에 나타내었다.

*GPT 및 GOT의 활성

구분	GPT(IU/L)	GOT(IU/L)
음성대조군	23.17±2.42	60.47±4.28
양성대조군	46.82±3.54	112.52±3.47
실험군 1(실시예 1의 추출물 투여군)	29.63±4.27**	72.54±3.36**
실험군 2(실시예 2의 추출물 투여군)	38.31±4.89*	82.37±2.69**
실험군 3(실시예 3의 추출물 투여군)	41.62±1.62*	88.61±4.85**
는 p<0.05이고 *는 p<0.01임

<실험예 1-2-2> 간 지질 농도 분석

상기 <실험예 1-2-1>에서 실험이 종료된 각 실험군의 쥐를 도살하여 간을 적출한 다음 상기 <실험예 1-1-2>와 동일한 방법으로 간 지질 농도를 측정하였다. 결과를 아래의 [표 4]에 나타내었다.

간 조직의 총콜레스테롤 및 중성 지방의 농도

구분	총콜레스테롤(mg/㎗)	중성지방(mg/㎗)
음성대조군	132.72.±4.75	65.64±3.21
양성대조군	335.24.±5.63	182.92±4.83
실험군 1(실시예 1의 추출물 투여군)	264.74±3.82**	138.47±5.50**
실험군 2(실시예 2의 추출물 투여군)	284.58±5.37**	159.04±5.33**
실험군 3(실시예 3의 추출물 투여군)	287.64±4.08**	165.54±3.92**
는 p<0.05이고 *는 p<0.01임

<실험예 2> 숙취 해소 활성 실험

상기 각 실시예의 추출물이 숙취 해소 활성을 가지는가를 알콜탈수소화효소(ADH)와 알데히드탈수소화효소(ALDH) 활성을 통하여 측정하였다.

ADH 및 ALDH의 활성은 보스티안 등의 방법[Bostian KA, et al. Biochem. J. 173:787-798(1978)]을 약간 변형하여 실시하였다.

먼저 ADH 분획 및 ALDH 분획을 S9 랫드 간 균질화물(Moltox Co., Boone, Nc, USA)로부터 얻었고, ADH 활성 분석을 위한 반응 혼합물은 0.05 mg의 상기 각 실시예의 추출물(또는 참조예의 추출물과의 혼합물), 1.4 ㎖의 증류수, 0.75 ㎖의 1M Tris-HCl(pH 8.8), 0.3 ㎖의 20mM NAD+, 0.3 ㎖의 에탄올 및 0.15 ㎖의 ADH 분획으로 이루어져 있고, ALDH 활성 분석을 위한 반응 혼합물은 0.5 mg의 상기 각 실시예의 추출물(또는 참조예의 추출물과의 혼합물), 2.1 ㎖의 증류수, 0.3 ㎖의 1M Tris-HCl(pH 8.8), 0.1 ㎖의 20mM NAD+, 0.1 ㎖의 3M KCl, 0.1 ㎖의 0.33 M 2-머르캅토에탄올 및 0.1 ㎖의 ALDH 분획으로 이루어져 있다.

활성의 측정은 30℃에서 5분간 반응시킨 후, NAD+로부터 NADH의 생성 비율을 340nm에서의 흡광도를 이용하여 측정하였고, 결과를 아래의 [표 5]에 나타내었다.

ADH 및 ALDH 활성

구분	총콜레스테롤(mg/㎗)	중성지방(mg/㎗)
음성대조군	1.0±0.13	1.0±0.11
실험군 1(실시예 1의 추출물 투여군)	1.97±0.14**	2.04±0.28**
실험군 2(실시예 2의 추출물 투여군)	1.63±0.24**	1.58±0.16**
실험군 3(실시예 3의 추출물 투여군)	1.59±0.05**	1.61±0.19**
실험군 4(혼합물)	2.54±0.14**	2.75±0.22**
* 실험군 4는 참조예의 추출물 2가지와 실시예 1의 추출물을 동량으로 혼합한 것임. 는 p<0.05이고 *는 p<0.01임

<실험예 3> 비만 억제 활성 실험

상기 <실험예 1-1-1>에서 6주간 사육이 종료된 후 각 군의 랫드의 몸무게 변화량(사육 종료 후의 체중 - 초기 체중)을(MEAN±SD)를 측정하여 아래의 [표 6]에 나타내었다.

체중 변화량(단위: g)

구분	체중 변화량
음성대조군	127.07±12.34
양성대조군	159.54±15.86
실험군 1(실시예 1의 추출물 투여군)	95.84±13.02**
실험군 2(실시예 2의 추출물 투여군)	111.92±9.32*
실험군 3(실시예 3의 추출물 투여군)	108.52±13.40*
는 p<0.05이고 *는 p<0.01임

통계 처리

모든 실험 결과는 Mean±SD 값으로 나타냈다. ANOVA 분석을 실시하고, Duncan 테스트로 유의차를 검증하였다.

Claims

지치 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만개선용 약제학적조성물.
제1항에 있어서,
상기 지치 추출물은 지치 잎, 줄기, 꽃, 뿌리 또는 이들의 혼합물을 에탄올, 물 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 얻어진 추출물인 것을 특징으로 하는 비만개선용 약제학적 조성물.