CN115501165A - 一种用于头皮护理的组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于头皮护理的组合物及其制备方法与应用。所述组合物包含植物乳杆菌的肽溶液作为活性成分。本发明方案将植物乳杆菌的肽溶液制备成组合物，制备得到的组合物温和不刺激，基本无细胞毒性，可以有效促进人毛乳头细胞的血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子‑1分泌，增强毛发生长及防止脱发。

Description

一种用于头皮护理的组合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于日化产品技术领域，具体涉及一种用于头皮护理的组合物及其制备方法与应用。
背景技术
脂溢性脱发是当今最主要的脱发类型，而且偏于年轻化，对患者的社会互动和心理健康造成严重影响。
毛发的生长和发育会被毛囊正常生长周期的改变影响，周期性变化受细胞间信号传导、生长因子、激素、神经肽、药物等多种因素的调控。为此，针对病因，改善头发生长期和休止期的比率等有效措施能促进头发生长。近年来，不同信号通路在毛囊三个时期的作用机制已经被揭示出来。其中，血管内皮生长因子(VEGF)在毛囊发展中扮演着重要的角色，不仅可以刺激血管生成，改善头皮供血，还可以调节毛囊细胞增殖和细胞迁移，激活毛发生长周期中的生长期，促使毛囊从退行期向生长期过渡，最终达到生发的效果。肿瘤坏死因子(TNF)、转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等在毛囊生长期发挥主要作用，调控这些因子延长毛囊的生长期，延缓毛囊进入退行期，从而减少脱发。因此，这些信号蛋白就成为生发的关键靶点。
目前，公认的脱发治疗手段包括直接植入毛囊或使用非那雄胺或米诺地尔等药物干预，尽管这些促进头发生长的药物具有临床疗效，但长期使用会造成各种不良反应。因此，安全性好、生物活性高的天然活性防脱生发成分已成为研究热点。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种用于头皮护理的组合物。
本发明还提出一种上述组合物的制备方法。
本发明还提出一种上述组合物的应用。
本发明还提出一种防脱生发组合物。
根据本发明的一个方面，提出了一种用于头皮护理的组合物，包含植物乳杆菌的肽溶液作为活性成分。
在本发明的一些实施方式中，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌ATCC 8014。
在本发明的一些实施方式中，所述植物乳杆菌的肽溶液包括分子量小于8000Da的肽。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物为药物组合物或化妆品组合物。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物还包括药用载体和/或药用辅料。
在本发明的一些实施方式中，所述药用载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、黏合剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、甜味剂和香味剂中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述赋形剂包括水。
在本发明的一些实施方式中，所述填充剂包括淀粉和蔗糖中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述黏合剂包括纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述湿润剂包括甘油。
在本发明的一些实施方式中，所述崩解剂包括琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述吸收促进剂包括季铵化合物。
在本发明的一些实施方式中，所述表面活性剂包括十六烷醇。
在本发明的一些实施方式中，所述吸附载体包括高岭土和皂黏土中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述润滑剂包括滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁和聚乙二醇中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物中植物乳杆菌的肽溶液的浓度为1～50μg/mL。
在本发明的第二方面，提出了上述组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：将所述植物乳杆菌进行破碎，收集破碎得到的溶液；将所述溶液采用蛋白酶水解1-10h，即得。
在本发明的一些实施方式中，所述破碎采用高压均质。
在本发明的一些实施方式中，所述高压均质的压力为800-1200bar，循环次数为10-100次。
在本发明的一些实施方式中，所述高压均质的压力为900-1200bar，循环次数为50-100次。
在本发明的一些实施方式中，所述高压均质的压力为1000bar，循环次数为70次。
在本发明的一些实施方式中，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、弹性蛋白酶和胰蛋白酶中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述溶液与所述蛋白酶的添加质量比为(1～10)：1。
在本发明的一些实施方式中，所述蛋白酶的添加量为0.005-5g。
在本发明的一些实施方式中，所述蛋白酶的酶解温度为25～60℃。
在本发明的一些实施方式中，所述蛋白酶的酶解温度为40～60℃。
在本发明的一些实施方式中，所述蛋白酶的酶解温度为50℃。
在本发明的一些实施方式中，所述蛋白酶的酶解的pH为6～8。
在本发明的第三方面，提出了上述组合物的应用，所述应用为在制备用于头皮护理中试剂的应用。
在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备用于促进毛发生长和/或毛囊再生和/或用于预防或治疗毛发脱落的产品中的应用。
在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备促进人毛乳头细胞增殖及抑制人毛乳头细胞死亡的产品中的应用。
在本发明的一些实施方式中，上述产品为药品、化妆品或医疗器械。
在本发明的一些实施方式中，所述药品还包括药用载体和/或药用辅料。
在本发明的一些实施方式中，所述药用载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、黏合剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、甜味剂和香味剂中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述赋形剂包括水。
在本发明的一些实施方式中，所述填充剂包括淀粉和蔗糖中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述黏合剂包括纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述湿润剂包括甘油。
在本发明的一些实施方式中，所述崩解剂包括琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述吸收促进剂包括季铵化合物。
在本发明的一些实施方式中，所述表面活性剂包括十六烷醇。
在本发明的一些实施方式中，所述吸附载体包括高岭土和皂黏土中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述润滑剂包括滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁和聚乙二醇中的至少一种。
在本发明的一些实施方式中，所述医疗器械为凝胶。
在本发明的一些实施方式中，所述产品的形式为粉剂、膏剂、凝胶、滴剂、栓剂、锭剂、颗粒、胶囊剂、喷雾、片、丸和溶液中的一种。
在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备人毛乳头细胞的血管内皮生长因子分泌促进剂中的应用。
在本发明的一些实施方式中，所述应用为在制备胰岛素样生长因子-1的分泌促进剂中的应用。
在本发明的第四方面，提出了一种防脱生发组合物，所述组合物的制备原料包括：上述用于头皮护理的组合物、螯合剂、保湿剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、稳定剂、柔顺剂。
在本发明的一些实施方式中，所述螯合剂包括EDTA 2Na。
在本发明的一些实施方式中，所述保湿剂包括甘油。
在本发明的一些实施方式中，所述增稠剂包括卡波姆。
在本发明的一些实施方式中，所述乳化剂包括鲸蜡硬脂基葡糖苷。在本发明的一些实施方式中，所述防腐剂包括科莱恩甲酯和苯氧乙醇。
在本发明的一些实施方式中，所述稳定剂包括GTCC。
在本发明的一些实施方式中，所述柔顺剂包括异壬酸异壬酯、硬脂酸酯和KF-96A-6CS。
在本发明的一些实施方式中，所述硬脂酸酯包括甘油硬脂酸酯和PEG-100硬脂酸酯。
在本发明的一些实施方式中，所述组合物包括以下质量百分比的制备原料：上述组合物8％～22％、螯合剂0.01％～0.05％、保湿剂3％～8％、增稠剂0.1％～0.5％、乳化剂1％～6％、防腐剂0.2％～1％、稳定剂3％～8％、柔顺剂3％～16％。
在本发明的一些实施方式中，所述防脱生发组合物包括以下质量百分比的制备原料：上述用于头皮护理的组合物8％～22％、EDTA 2Na0.01％～0.05％、甘油3％～8％、卡波姆0.1％～0.5％、鲸蜡硬脂基葡糖苷0.1％～0.5％、科莱恩甲酯0.1％～0.5％、GTCC3％～8％、异壬酸异壬酯0.5％～4％、鲸蜡硬脂醇1％～5％、硬脂酸酯1％～5％、KF-96A-6CS0.5％～2％和苯氧乙醇0.1％～0.5％。
在本发明的一些实施方式中，所述防脱生发组合物的制备方法包括以下步骤：
S1、将上述植物乳杆菌肽组合物、EDTA、卡波姆、甘油和水混匀后作为水相；
S2、将上述鲸蜡硬脂基葡糖苷、科莱恩甲酯、GTCC、异壬酸异壬酯、鲸蜡硬脂醇、硬脂酸酯、KF-96A-6CS和苯氧乙醇混匀后作为油相；
S3、将步骤S1制备得到的水相加入到步骤S2制备得到的油相中，混合均匀后进行均质，即得。
在本发明的一些实施方式中，所述水相的制备的温度为80～90℃。
在本发明的一些实施方式中，所述油相的制备的温度为80～90℃。
在本发明的一些实施方式中，所述均质的条件为8000～12000rpm均质2～5min。
根据本发明的一些的实施方式，至少具有以下有益效果：本发明方案将植物乳杆菌的肽溶液制备成组合物，制备得到的组合物温和不刺激，基本无细胞毒性，可以有效促进人毛乳头细胞的血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子-1分泌，增强毛发生长及防止脱发。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明，其中：
图1为本发明测试例中的不同均质条件下的植物乳杆菌破壁镜检图；
图2为本发明测试例中的植物乳杆菌肽组合物对人毛乳头细胞活力的影响结果图；
图3为本发明测试例中的植物乳杆菌肽组合物对人毛乳头细胞的血管内皮生长因子(VEGF)分泌的影响结果图；
图4为本发明测试例中的植物乳杆菌肽组合物对人毛乳头细胞的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)分泌的影响结果图；
图5为本发明测试例中的植物乳杆菌肽组合物对生长期头发比例的影响的分析结果图；
图6为本发明测试例中的植物乳杆菌肽组合物对休止头发比例的影响的分析结果图。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
下述实施例中涉及的培养基及其制备方法如下：
MRS液体培养基的配制：称取8g葡萄糖溶于64mL去离子水中，得到葡萄糖溶液，再取蛋白胨4g，牛肉膏4g，酵母粉1.6g，柠檬酸三铵0.8g，乙酸钠2g，硫酸镁80mg，硫酸锰16mg，磷酸氢二钾0.8g，吐温-800.4g，溶于336mL去离子水中，加热助溶，冷却至室温后分别调节pH至5.7±0.2，分装于锥形瓶中，并用牛皮纸封口，121℃高压灭菌30min，冷却至室温，阴凉干燥处备用，使用前喷洒75％酒精消毒再放入超净台中紫外灭菌。
MRS固体培养基的配制：取8g葡萄糖溶于64mL去离子水，取蛋白胨4g，牛肉膏4g，酵母粉1.6g，柠檬酸三铵0.8g，乙酸钠2g，硫酸镁80mg，硫酸锰16mg，磷酸氢二钾0.8g，吐温-800.4g，溶于336mL去离子水中，加热助溶，冷却至室温后加入8g琼脂，分别调节pH至5.7±0.2，121℃高压灭菌30min，将培养基冷却至50至60℃后倒入培养皿，每个培养皿约倾倒15-20mL的培养基，冷却凝固后置于4℃冰箱备用。
下述实施例中涉及的植物乳杆菌的培养方法如下：
植物乳杆菌的培养：在超净台中，将锥形瓶瓶口在火焰上灼烧消毒，用10mL移液枪将葡萄糖溶液平均注入锥形瓶中，然后用1mL移液枪将植物乳杆菌菌液接种到培养基中，放入恒温生化培养箱中37℃培养16h。用无菌接种环在植物乳杆菌菌液中浸泡2～3秒后，在固体平板培养基中画线，将培养物在37℃恒温培养箱中培养一天，观察菌落，确认为纯培养物后，放在4℃冰箱中保存。
实施例1
本实施例制备了一种植物乳杆菌肽溶液，具体过程为：
1、种子培养基的制备
分别挑取植物乳杆菌ATCC8014菌株(购自北京北纳生物保藏管理中心，菌种编号BNCC 336421)单菌落接种在装有30mL液体益生菌培养基(MRS液体培养基)的锥形瓶中，在培养箱37℃条件下，静置培养16h，可作为益生菌种子液。
2、扩大培养
将培养好的益生菌种子液按照体积比10％的比例分别加入不同含有新鲜无菌锥形瓶中加入装有300mL培养基的500mL摇瓶中，静置培养16h，得到培养好的菌液。
3、植物乳杆菌的收集
将菌液分装到50mL离心管内，质量相同的离心管放入离心机中以4500rpm离心5min，固液分离，分别收集沉淀和上清，将沉淀用生理盐水洗涤2～3次，除去培养基，集中于离心管称重并记录，控制每管菌体湿重约20g，收集得到植物乳杆菌菌体，放入-20℃冰箱冷冻保存备用，上清液即为植物乳杆菌的溶菌液。
4、植物乳杆菌的破壁处理
将步骤3收集得到的菌体湿重约20g，加去离子水至200g，再用去离子水调节菌体浊度，使得菌液在λ＝600nm处的吸光度为100左右，然后使用高压均质机物理法破壁，压力为800bar，流出液重新倒回漏斗，循环100次。
5、菌液酶解
在电子天平上取一定量的破壁液和木瓜蛋白酶，质量比为5:1，用1mol/L NaOH调pH至7.0，在55℃下水浴搅拌酶解，酶解1小时，酶解后将水浴温度升至沸腾，将酶解液在沸水浴中加热10min，冷却后用无水柠檬酸调节pH至6左右，将酶解液分装到离心管内，在高速离心机中以8000rpm离心6min，用注射器吸取上清液，后超滤离心收集滤液，-20℃冰箱冷冻备用。
实施例2
本实施例制备了一种植物乳杆菌肽溶液，具体过程为：
1、植物乳杆菌的破壁处理
将实施例1中的步骤3收集得到的植物乳杆菌菌体进行破壁处理，菌体湿重约20g，加去离子水至200g，再用去离子水调节菌体浊度，使得菌液在λ＝600nm处的吸光度为100左右，然后使用高压均质机物理法破壁，压力为1000bar，流出液重新倒回漏斗，循环70次，得到破壁液。
2、菌液酶解
在电子天平上取一定量的破壁液和木瓜蛋白酶，质量比为5:1，用1mol/L NaOH调pH至7.0，在55℃下水浴搅拌酶解，酶解3小时，酶解后将水浴温度升至沸腾，将酶解液在沸水浴中加热10min，冷却后用无水柠檬酸调节pH至6左右，将酶解液分装到离心管内，在高速离心机中以8000rpm离心6min，用注射器吸取上清液，后超滤离心收集滤液，-20℃冰箱冷冻备用。
实施例3
本实施例制备了一种植物乳杆菌肽溶液，具体过程为：
1、植物乳杆菌的破壁处理
将实施例1中的步骤3收集得到的植物乳杆菌菌体进行破壁处理，菌体湿重约20g，加去离子水至200g，再用去离子水调节菌体浊度，使得菌液在λ＝600nm处的吸光度为100左右，然后使用高压均质机物理法破壁，压力为1200bar，流出液重新倒回漏斗，循环10次。
2、菌液酶解
在电子天平上取一定量的破壁液和木瓜蛋白酶，质量比为5:1，用1mol/L NaOH调pH至7.0，在55℃下水浴搅拌酶解，酶解10小时，酶解后将水浴温度升至沸腾，将酶解液在沸水浴中加热10min，冷却后用无水柠檬酸调节pH至6左右，将酶解液分装到离心管内，在高速离心机中以8000rpm离心6min，用注射器吸取上清液，后超滤离心收集滤液，-20℃冰箱冷冻备用。
实施例4
本实施例制备了一种植物乳杆菌肽溶液，具体过程为：
1、植物乳杆菌的破壁处理
将实施例1中的步骤3收集得到的植物乳杆菌菌体进行破壁处理，菌体湿重约20g，加去离子水至200g，再用去离子水调节菌体浊度，使得菌液在λ＝600nm处的吸光度为100左右，然后使用高压均质机物理法破壁，压力为1000bar，流出液重新倒回漏斗，循环70次。
2、菌液酶解
在电子天平上取一定量的破壁液和弹性蛋白酶，质量比为5:1，用1mol/L NaOH调pH至7.0，在40℃下水浴搅拌酶解，酶解3小时，酶解后将水浴温度升至沸腾，将酶解液在沸水浴中加热10min，冷却后用无水柠檬酸调节pH至6左右，将酶解液分装到离心管内，在高速离心机中以8000rpm离心6min，用注射器吸取上清液，后超滤离心收集滤液，-20℃冰箱冷冻备用。
实施例5
本实施例制备了一种植物乳杆菌肽溶液，具体过程为：
1、植物乳杆菌的破壁处理
将实施例1中的步骤3收集得到的植物乳杆菌菌体进行破壁处理，菌体湿重约20g，加去离子水至200g，再用去离子水调节菌体浊度，使得菌液在λ＝600nm处的吸光度为100左右，然后使用高压均质机物理法破壁，压力为1000bar，流出液重新倒回漏斗，循环70次。
2、菌液酶解
在电子天平上取一定量的破壁液和胰蛋白酶，质量比为5:1，用1mol/L NaOH调pH至7.0，在35℃下水浴搅拌酶解，酶解3小时，酶解后将水浴温度升至沸腾，将酶解液在沸水浴中加热10min，冷却后用无水柠檬酸调节pH至6左右，将酶解液分装到离心管内，在高速离心机中以8000rpm离心6min，用注射器吸取上清液，后超滤离心收集滤液，-20℃冰箱冷冻备用。
实施例6
本实施例制备了一种植物乳杆菌肽溶液，具体过程为：
1、植物乳杆菌的破壁处理
将实施例1中的步骤3收集得到的植物乳杆菌菌体进行破壁处理，菌体湿重约20g，加去离子水至200g，再用去离子水调节菌体浊度，使得菌液在λ＝600nm处的吸光度为100左右，然后使用高压均质机物理法破壁，压力为1000bar，流出液重新倒回漏斗，循环70次。
2、菌液酶解
在电子天平上取一定量的破壁液和枯草杆菌蛋白酶，质量比为5:1，用1mol/LNaOH调pH至7.0，在50℃下水浴搅拌酶解，酶解3小时，酶解后将水浴温度升至沸腾，将酶解液在沸水浴中加热10min，冷却后用无水柠檬酸调节pH至6左右，将酶解液分装到离心管内，在高速离心机中以8000rpm离心6min，用注射器吸取上清液，后超滤离心收集滤液，-20℃冰箱冷冻备用。
实施例7
本实施例制备了一种植物乳杆菌肽溶液，具体过程为：
1、植物乳杆菌的破壁处理
将实施例1中的步骤3收集得到的植物乳杆菌菌体进行破壁处理，菌体湿重约20g，加去离子水至200g，再用去离子水调节菌体浊度，使得菌液在λ＝600nm处的吸光度为100左右，然后使用高压均质机物理法破壁，压力为1000bar，流出液重新倒回漏斗，循环70次。
2、菌液酶解
在电子天平上取一定量的破壁液和碱性蛋白酶，质量比为5:1，用1mol/L NaOH调pH至7.0，在55℃下水浴搅拌酶解，酶解3小时，酶解后将水浴温度升至沸腾，将酶解液在沸水浴中加热10min，冷却后用无水柠檬酸调节pH至6左右，将酶解液分装到离心管内，在高速离心机中以8000rpm离心6min，用注射器吸取上清液，后超滤离心收集滤液，-20℃冰箱冷冻备用。
实施例8
本实施例制备了一种植物乳杆菌肽溶液，具体过程为：
1、植物乳杆菌的破壁处理
将实施例1中的步骤3收集得到的植物乳杆菌菌体进行破壁处理，菌体湿重约20g，加去离子水至200g，再用去离子水调节菌体浊度，使得菌液在λ＝600nm处的吸光度为100左右，然后使用高压均质机物理法破壁，压力为1000bar，流出液重新倒回漏斗，循环70次。
2、菌液酶解
在电子天平上取一定量的破壁液和菠萝蛋白酶，质量比为5:1，用1mol/L NaOH调pH至7.0，在60℃下水浴搅拌酶解，酶解3小时，酶解后将水浴温度升至沸腾，将酶解液在沸水浴中加热10min，冷却后用无水柠檬酸调节pH至6左右，将酶解液分装到离心管内，在高速离心机中以8000rpm离心6min，用注射器吸取上清液，后超滤离心收集滤液，-20℃冰箱冷冻备用。
实施例9
本实施例制备了一种防脱生发组合物，其中，植物乳杆菌肽组合物为实施例6制备得到的植物乳杆菌肽溶液，制备原料及原料的用量如表1所示：
表1
Figure BDA0003859509390000111
具体制备方法如下：
(1)取适量植物乳杆菌肽组合物与去离子水、EDTA、甘油等物质于烧杯中，在机械搅拌和85℃水浴条件下混合均匀成为一相，作为水相。其中，植物乳杆菌肽组合物的含量为10％。
(2)取适量GTCC、鲸蜡硬脂醇、甘油硬脂酸酯等物质于烧杯中，在机械搅拌和85℃水浴条件下混合均匀成为一相，作为油相。
(3)将上述水相加入到油相中，快速搅拌均匀，趁热均质，通过均质机在10000rpm条件下均质3min，均质完成后至于室温下保存，即获得防脱生发产品。
实施例10
本实施例制备了一种防脱生发组合物，其中，植物乳杆菌肽组合物为实施例6制备得到的植物乳杆菌肽溶液，制备方法同实施例9一致，制备原料及原料的用量如表2所示：
表2
Figure BDA0003859509390000121
对比例1
本对比例制备了一种防脱生发组合物，其中，植物乳杆菌破壁液为实施例6的植物乳杆菌破壁处理得到的溶液，制备方法同实施例9一致，制备原料及原料的用量如表3所示：
表3
Figure BDA0003859509390000122
Figure BDA0003859509390000131
对比例2
本对比例制备了一种防脱生发组合物，其中，植物乳杆菌溶菌液为实施例1收集得到的上清液，制备方法同实施例9一致，制备原料及原料的用量如表4所示：
表4
Figure BDA0003859509390000132
对比例3
本对比例制备了一种防脱生发组合物，制备方法同实施例9一致，制备原料及原料的用量如表5所示：
表5
Figure BDA0003859509390000133
Figure BDA0003859509390000141
试验例
1、本试验例测试了实施例1-8制备的植物乳杆菌肽溶液和实施例2的破壁处理后的溶液的分子量。
方案如下：将实施例1-8所制备得到的植物乳杆菌肽溶液和实施例2的破壁处理后的溶液采用凝胶色谱法分析检测其分子量的分布。凝胶色谱法分析采用Waters2695高效液相色谱仪色谱柱：TSKgel 3000SWXL 7.8mm×300mm；流动相：0.1mol/L硫酸钠，0.1mol/L磷酸钠缓冲溶液(PH＝6.7)；流速：0.5mL/min；柱温：30℃；紫外检测波长：220nm、280nm。结果如表6所示。
表6
Figure BDA0003859509390000142
Figure BDA0003859509390000151
结果如表6所示，从表6中可以看出，实施例6中得到的植物乳杆菌的肽溶液中的肽分布在0-8000Da的区间最多，为90.50％，因此，选用实施例6制备得到的肽溶液进行后续实验。
2、均质条件的筛选
将实施例1中的步骤3收集得到的植物乳杆菌菌体，取5管分别进行破壁处理，菌体湿重约20g，加去离子水至200g，再用去离子水调节菌体浊度，使得菌液在λ＝600nm处的吸光度为100左右，然后使用高压均质机物理法破壁，每管菌体破壁的条件分别为压力为1200bar，流出液重新倒回漏斗，循环10次；压力为1000bar，流出液重新倒回漏斗，循环20次；压力为1000bar，流出液重新倒回漏斗，循环50次；压力为1000bar，流出液重新倒回漏斗，循环70次；压力为800bar，流出液重新倒回漏斗，循环100次。将各管不同均质条件下进行破壁处理的植物乳杆菌进行镜检，结果如图1所示。
结果如图1所示，从图中可以看出，压力为1000bar，流出液重新倒回漏斗，循环70次的均质条件得到的基本菌体基本裂解完全，因此选择其作为最优均质条件。
3、植物乳杆菌多肽对人毛乳头细胞活力的影响
实验方法：选择接近对数期生长的人毛乳头细胞(购自青旗(上海)生物技术发展有限公司)(细胞汇合度达到70％-80％时)，用一次性滴管弃上清液，用PBS清洗2-3遍，加入胰酶约2mL(铺盖平板为准)，在37℃消化3.5分钟，吹打细胞，可以吹打下来，立即加完全培养基DMEM++(含FBS和双抗的DMEM)终止反应，并多次吹打细胞收集到15mL的无菌离心管中，在1000rpm离心5分钟，缓慢吸取并弃掉上清液，加入适量的DMEM++，重悬细胞。细胞计数，并按照1.5×105个/mL的密度接种于24孔板中，每孔1mL，于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。
去除DMEM++培养基，用磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗2次，洗的时候吸去残余液体。加入DMEM(100μL，无FBS，无双抗)培养基，实验组为每孔中加入实施例6制备得到的植物乳杆菌肽溶液10μL并混合，不同孔中的植物乳杆菌肽溶液(将实施例6制备得到的植物乳杆菌肽溶液冻干后用DMEM溶液配制)的终浓度分别为(0μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL)，阴性对照孔以PBS代替样品溶液，实验重复3-5次。于37℃，5％CO2培养箱中静置24h。细胞培养24h后小心抽吸掉培养液，并用PBS洗两遍。加入浓度为0.5mg/mL的MTT溶液100μL/孔(MTT溶液要用外用DMEM培养基配置(无双抗，无FBS)。继续培养4h，抽吸掉MTT溶液。加入DMSO150μL/孔，用酶标仪低速震荡10min，使结晶物充分溶解。酶标仪测OD490。利用以下公式计算人毛乳头细胞的细胞活力：细胞活力(％)＝待测样品吸光度值/对照组吸光度值×100％。
实验结果如图2所示，从图中可以看出，本发明实施例6中制备得到的植物乳杆菌肽溶液加入量为0～1μg/mL时，可以提高人毛乳头细胞活力，无毒副作用，在浓度为5～50μg/mL时，细胞活力也较高，基本无毒副作用。
4、植物乳杆菌多肽对人毛乳头细胞VEGF分泌的影响
选择接近对数期生长的人毛乳头细胞(细胞汇合度达到70％-80％时)，用一次性滴管弃上清液，用PBS清洗2-3遍，加入胰酶约2mL(铺盖平板为准)，在37℃消化3.5分钟，吹打细胞，可以吹打下来，立即加完全培养基DMEM++(含FBS和双抗的DMEM)终止反应，并多次吹打细胞收集到15mL的无菌离心管中，在1000rpm离心5分钟，缓慢吸取并弃掉上清液，加入适量的DMEM++，重悬细胞。细胞计数，并按照1.5×105个/mL的密度接种于24孔板中，每孔1mL，于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。
倒掉DMEM++培养基，用PBS冲洗2-3次，洗的时候吸去残余液体。实验组为每孔中加入实施例6制备得到的植物乳杆菌肽溶液1mL并混合，不同孔中的植物乳杆菌肽溶液(将实施例6制备得到的植物乳杆菌肽溶液冻干后用DMEM溶液配制)的终浓度分别为(0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL)，阳性对照组加入1mL DMEM溶液，每组6个平行，于37℃，5％CO2培养箱中静置培养48h。细胞加样培养48h后，取细胞上清液用Elisa试剂盒对上清液中的VEGF含量进行测定。
实验结果如图3所示，从图中可以看出，本发明实施例6中制备得到的植物乳杆菌肽溶液对人毛乳头细胞的血管内皮生长因子(VEGF)分泌的影响，随植物乳杆菌多肽浓度的增加而增加。
5、植物乳杆菌多肽对人毛乳头细胞IGF-1分泌的影响
选择接近对数期生长的人毛乳头细胞(细胞汇合度达到70％-80％时)，用一次性滴管弃上清液，用PBS清洗2-3遍，加入胰酶约2mL(铺盖平板为准)，在37℃消化3.5分钟，吹打细胞，可以吹打下来，立即加完全培养基DMEM++(含FBS和双抗的DMEM)终止反应，并多次吹打细胞收集到15mL的无菌离心管中，在1000rpm离心5分钟，缓慢吸取并弃掉上清液，加入适量的DMEM++，重悬细胞。细胞计数，并按照1.5×105个/mL的密度接种于24孔板中，每孔1mL，于37℃、5％CO2培养箱中培养24h。
倒掉DMEM++培养基，用PBS冲洗2-3次，洗的时候吸去残余液体。实验组为每孔中加入实施例6制备得到的植物乳杆菌肽溶液1mL并混合，不同孔中的植物乳杆菌肽溶液(将实施例6制备得到的植物乳杆菌肽溶液冻干后用DMEM溶液配制)的终浓度分别为(0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL)，阳性对照组加入1mL DMEM溶液，每组6个平行，于37℃，5％CO2培养箱中静置培养48h。细胞加样培养48h后，取细胞上清液用Elisa试剂盒对上清液中的IGF-1含量进行测定。
实验结果如图4所示，从图中可以看出，本发明实施例6中制备得到的植物乳杆菌肽溶液对人毛乳头细胞的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)分泌的影响，随植物乳杆菌多肽浓度的增加而增加。
6、植物乳杆菌多肽对生长期头发增长率和休止期头发下降率的影响
根据Hamilton-Norwood分型脱发程度，选择脱发程度在2级到4级的受试者30名，年龄范围25-50周岁，分为5组。在受试者头上选取区域(1.5cm*1.5cm)，刮掉毛发，每日分别涂抹等量实施例9-10和对比例1-3制备得到的防脱生发组合物。受试者在连续使用测试产品0周、4周、8周和12周后，分别测试生长期和休止期的头发比例。
实验结果如图5-6所示，从图5中可以看出，采用本申请方案的植物乳杆菌肽组合物可以有效的提高生长期头发的增长率；从图6中可以看出，采用本申请方案的植物乳杆菌肽组合物可以有效的降低休止期头发的比率。
上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

Claims (10)

1.一种用于头皮护理的组合物，其特征在于，包含植物乳杆菌的肽溶液作为活性成分。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌ATCC8014。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述植物乳杆菌的肽溶液包括分子量小于8000Da的肽。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将所述植物乳杆菌进行破碎，收集破碎得到的溶液；将所述溶液采用蛋白酶水解1-10h，即得。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述破碎采用高压均质；优选地，所述高压均质的压力为800-1200bar，循环次数为10-100次。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、弹性蛋白酶和胰蛋白酶中的至少一种。
7.权利要求1-3任一项所述的组合物在制备用于促进毛发生长和/或毛囊再生和/或预防或治疗毛发脱落的产品中的应用。
8.权利要求1-3任一项所述的组合物在制备促进人毛乳头细胞增殖及抑制人毛乳头细胞死亡的产品中的应用。
9.权利要求1-3任一项所述的组合物在制备人毛乳头细胞的血管内皮生长因子和/或胰岛素样生长因子-1的分泌促进剂中的应用。
10.一种防脱生发组合物，其特征在于，所述组合物包括以下质量百分比的制备原料：权利要求1-3任一项所述的组合物8％～22％、螯合剂0.01％～0.05％、保湿剂3％～8％、增稠剂0.1％～0.5％、乳化剂1％～6％、防腐剂0.2％～1％、稳定剂3％～8％和柔顺剂3％～16％。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103525914A (zh) * 2013-09-23 2014-01-22 光明乳业股份有限公司 一种计数植物乳杆菌活菌数的方法及其引物和试剂盒
CN103667106A (zh) * 2013-10-10 2014-03-26 南京农业大学 一种植物乳杆菌、其细菌素以及培养与分离纯化方法
JP2014172896A (ja) * 2013-03-12 2014-09-22 Kyoei Kagaku Kogyo Kk 毛髪用組成物
WO2018062751A1 (ko) * 2016-09-27 2018-04-05 (주)아모레퍼시픽 락토바실러스 플란타룸의 용출물을 포함하는 모발 또는 두피용 조성물
US20180256490A1 (en) * 2015-09-30 2018-09-13 Amorepacific Corporation Composition for preventing hair loss or promoting hair growth comprising extracellular follicle derived from lactic acid bacteria
KR20190065498A (ko) * 2017-12-01 2019-06-12 신라대학교 산학협력단 유산균 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 발모 촉진용 조성물
JP2022068040A (ja) * 2020-10-21 2022-05-09 日清食品ホールディングス株式会社 発毛・育毛効果を有する乳酸菌

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014172896A (ja) * 2013-03-12 2014-09-22 Kyoei Kagaku Kogyo Kk 毛髪用組成物
CN103525914A (zh) * 2013-09-23 2014-01-22 光明乳业股份有限公司 一种计数植物乳杆菌活菌数的方法及其引物和试剂盒
CN103667106A (zh) * 2013-10-10 2014-03-26 南京农业大学 一种植物乳杆菌、其细菌素以及培养与分离纯化方法
US20180256490A1 (en) * 2015-09-30 2018-09-13 Amorepacific Corporation Composition for preventing hair loss or promoting hair growth comprising extracellular follicle derived from lactic acid bacteria
WO2018062751A1 (ko) * 2016-09-27 2018-04-05 (주)아모레퍼시픽 락토바실러스 플란타룸의 용출물을 포함하는 모발 또는 두피용 조성물
CN110494125A (zh) * 2016-09-27 2019-11-22 株式会社爱茉莉太平洋 包含植物乳杆菌的溶菌液的毛发或头皮用组合物
KR20190065498A (ko) * 2017-12-01 2019-06-12 신라대학교 산학협력단 유산균 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 발모 촉진용 조성물
JP2022068040A (ja) * 2020-10-21 2022-05-09 日清食品ホールディングス株式会社 発毛・育毛効果を有する乳酸菌

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YOUNG MIN WOO等: "The effect of Lactobacillus plantarum hydrolysates promoting VEGF production on vascular growth and hair growth of C57BL/6 mice", JOURNAL OF ANALYTICAL SCIENCE AND TECHNOLOGY, vol. 10, no. 1, pages 1 - 9, XP055842845, DOI: 10.1186/s40543-019-0178-0 *

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