CN115490661B - 红树来源真菌中抗氧化活性化合物及其制备方法 - Google Patents

红树来源真菌中抗氧化活性化合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及红树来源真菌中抗氧化活性化合物及其制备方法，所述红树来源真菌中抗氧化活性化合物具有化合物1‑11所示的结构：

Description

红树来源真菌中抗氧化活性化合物及其制备方法
技术领域
本发明属于红树内生真菌次级代谢产物领域，具体涉及红树来源真菌中抗氧化活性化合物及其制备方法。
背景技术
海洋来源的内生真菌结构新颖活性独特的化合物重要来源之一，申请人先前从红树尖瓣海莲内生真菌TGM112中分离获得系列杀虫活性的混元萜类化合物；后又从另一株红树尖瓣海莲内生真菌(CN201910431601.0、CN201910427992.9)中分离获得系列苯并吡喃酮衍生物。本发明申请人对真菌HJ004(保藏编号：CGMCC No.17674)做进一步研究，发现了系列新的色原酮衍生物及其他抗氧化活性化合物。
发明内容
本发明提供一种红树来源真菌中抗氧化活性化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述红树来源真菌中抗氧化活性化合物具有化合物1-11所示的结构：
本发明的另一实施方案提供红树来源真菌HJ004在同时制备化合物1-11中的应用。
本发明的另一实施方案提供红树来源真菌HJ004在同时制备抗氧化活性化合物1、2或3中的应用。
本发明的另一实施提供一种利用红树来源真菌HJ004同时制备化合物1-11的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将红树来源真菌HJ004接入发酵培养基中，26～28℃静置培养30天得发酵物；
(2)步骤(1)得到的发酵物用等体积的乙酸乙酯萃取2～4次，合并萃取液后减压浓缩得到浸膏；
(3)步骤(2)得到的浸膏经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集两个柱体积，根据极性大小分成7个组分，其中梯度100:0～90:10洗脱得到的为组分1，梯度80:20～70:30洗脱得到的为组分2，梯度60:40洗脱得到的为组分3，梯度50:50洗脱得到的为组分4，梯度40:60～30:70洗脱得到的为组分5，梯度20:80～10:90洗脱得到的为组分6，梯度0:100洗脱得到的为组分7；其中组分2先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝9:1-7:3的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，减压浓缩后再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH＝1:1的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝73:27，得到化合物5；其中组分3先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝9:1-1:3的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，按极性大小分为3a-3d四个组分，其中3b组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝45:55，得到化合物4和化合物6；3c组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝40:60，得到化合物3和化合物9；3d组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝45:55，得到化合物10和化合物11；其中组分4先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝9:1-0:1的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，按极性大小分为4a-4d四个组分，其中4b组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝35:65，得到化合物1和化合物2；4c组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝30:70，得到化合物7和化合物8。
其中所述洗脱剂或流动相的比例均为体积比；所述发酵培养基为固体大米培养基(配方为每100g大米加100ml水、3.0g葡萄糖和3.0g海盐)
本发明的另一实施方案提供上述化合物1-11或其药学上可接受的盐在制备抗氧剂中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述化合物1、5、7-8或其药学上可接受的盐在制备抗氧剂中的应用。
一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以上述化合物1-11或其药学上可接受的盐作为有效成分。该药物组合物还可包括其他抗氧剂。该药物组合物还可包括药学上可接的辅料。该药物组合物的剂型优选固体制剂或液体制剂等。
本发明中术语“药学上可接受的盐”是指非毒性的无机或有机酸和/或碱的加成盐，可参见“Salt selection for basic drugs”,Int.J.Pharm.(1986),33,201–217。
本发明涉及的“红树来源真菌HJ004”的菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2019年4月24日；保藏编号：CGMCC No.17674；分类命名：Daldinia eschscholtzii。在中国专利申请号：CN201910431601.0、CN201910427992.9中有明确记载。
应理解，在本发明范围内，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1是化合物1-3的1H-1H COSY和HMBC相关图；
图2是化合物1的X-ray图；
图3是化合物3的NOE相关图；
图4a是化合物2的ECD图，4b是化合物3的CD图；
图5是化合物1的1H NMR图；
图6是化合物1的13C NMR图；
图7是化合物1的DEPT-135图；
图8是化合物1的HSQC图；
图9是化合物2的1H NMR图；
图10是化合物2的13C NMR图；
图11是化合物2的DEPT-135图；
图12是化合物2的HSQC图；
图13是化合物3的1H NMR图；
图14是化合物3的13C NMR图；
图15是化合物3的DEPT-135图；
图16是化合物3的HSQC图。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1
(1)配制发酵培养基：配方为每个锥形瓶(1L)中加入3g海盐、3g葡萄糖、100mL蒸馏水中和100g大米。120℃灭25–30分钟。共发酵60瓶。
将红树来源真菌HJ004接入发酵培养基中，于26～28℃静置培养30天得发酵物；
(2)将步骤(1)得到的发酵物等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯相后减压浓缩得到浸膏67g；
(3)步骤(2)得到的浸膏经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集两个柱体积，根据极性大小分成7个组分，其中梯度100:0～90:10洗脱得到的为组分1，梯度80:20～70:30洗脱得到的为组分2，梯度60:40洗脱得到的为组分3，梯度50:50洗脱得到的为组分4，梯度40:60～30:70洗脱得到的为组分5，梯度20:80～10:90洗脱得到的为组分6，梯度0:100洗脱得到的为组分7；其中组分2先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝9:1-7:3的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，减压浓缩后再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH＝1:1的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝73:27，得到化合物5(6.0mg)；其中组分3先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝9:1-1:3的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，按极性大小分为3a-3d四个组分，其中3b组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝45:55，得到化合物4(4.0mg)和化合物6(3.0mg)；；3c组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝40:60，得到化合物3(15.0mg)和化合物9(36.0mg)；3d组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝45:55，得到化合物10(6.0mg)和化合物11(21.0mg)；其中组分4先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝9:1-0:1的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，按极性大小分为4a-4d四个组分，其中4b组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝35:65，得到化合物1(15.0mg)和化合物2(9.0mg)；4c组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝30:70，得到化合物7(15.0mg)和化合物8(12.0mg)。所述洗脱剂或流动相的比例均为体积比。
经NMR、MS等结构确证，化合物4-11的NMR、MS等结构确证数据与已知报道一致，化合物1-11的结构确证数据如下：
化合物1：UV(MeOH)λmax(logε)230(1.18)270(0.20)304(0.58)nm；IR(KBr)νmax3562,3250,2982,1685,1625cm-1；1H and 13C NMR见表1；HRESIMS m/z 263.0911[M+H]+(calcd for C14H15O5,263.0914).
化合物2：[α]25 D+3.4(c 0.2,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)216(1.63)249(1.26)280(0.38)288(0.39)nm；ECD(c 0.2,MeOH)λmax(Δε)219(-3.1)260(1.1)nm；IR(KBr)νmax 3550,3017,2981,1638,1617cm-1；1H and 13C NMR见表1；HRESIMS m/z 205.0867[M-H]-(calcdfor C12H13O3,205.0870).
化合物3：[α]25 D-38.5(c 0.2,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)223(2.69)nm；
ECD(c 0.2,MeOH)λmax(Δε)218(+30.2),243(-8.4)nm；IR(KBr)νmax 3549,3473,3414,3020,2980,1717,1460cm-1；1H and 13C NMR见表1；HRESIMS m/z 221.1144[M+Na]+(calcd for C11H18O3Na,221.1148).
化合物4为无色油状，ESIMS m/z:229.1[M+Na]+，推测出其分子量为206.1，分子式为C11H10O4。在1H NMR谱中给出一个分子内氢键信号δH 11.94(s)，两个芳香氢信号δH 7.14(d,J＝8.8Hz)和δH 6.71(d,J＝8.8Hz)，一个烯氢信号δH 6.13(s)，一个连氧甲基信号δH3.91(s)，一个甲基信号δH 2.44(s)。在13C NMR谱中给出了11个碳信号，包括一个羰基碳信号δC 183.5，六个芳香碳信号δC 167.7,153.7,146.5,140.2,118.5,111.2，两个烯碳信号δC109.9,109.6，一个连氧甲基碳信号δC 57.3，一个甲基碳信号δC 20.8，化合物4为5-hydroxy-8-methoxy-2-methylchromon(Rao,C.R.；Venkateswarlu,V.Recl.Trav.Chim.Pay.B.1956,75,1321.)。
化合物5为无色油状，ESIMS m/z:199.0[M+Na]+，推测出其分子量为176.0，分子式为C10H8O3。在1H NMR谱中给出一个分子内氢键信号δH 12.52(s)，三个芳香氢信号δH 7.47(t,J＝8.4Hz),δH 6.82(t,J＝8.4Hz)和δH 6.75(t,J＝8.4Hz)，一个烯氢信号δH 6.10(s)，一个甲基信号δH 2.37(s)。在13C NMR谱中给出了10个碳信号，包括一个羰基碳信号δC183.6，六个芳香碳信号δC 167.8,160.9,156.9,135.2,111.3,110.5，两个烯碳信号δC109.2,106.9，一个甲基碳信号δC 20.7，确定化合物5为5-hydroxy-2-methyl-4H-chromen-4-one(Dai,J.Q.；Krohn,K.；Floerke,U.；Draeger,S.；Schulz,B.；Kiss-Szikszai,A.；Antus,S.；Kurtan,T.；van Ree,T.Eur.J.Org.Chem.2006,15,3498.)。
化合物6为无色油状，ESIMS m/z:195.2[M+H]+，推测出其分子量为194.2，分子式为C11H14O3。在1H NMR谱中给出三个芳香氢信号δH 7.15(t,J＝8.4Hz),δH6.53(d,J＝8.4Hz)和7.25(t,J＝8.0Hz)，两个连氧次甲基信号δH 4.95(dd,J＝4.4,2.0Hz)和4.24(m)，一个连氧甲基信号δH 3.87(s)，一个亚甲基δH[2.06(m),1.69(m)]，一个甲基信号δH 1.43(d,J＝6.4Hz)。在13C NMR谱中给出了11个碳信号，包括六个芳香碳信号δC 158.7,156.0,129.5,113.4,110.2,101.9，两个连氧次甲基碳信号δC 67.9,59.6，一个连氧甲基碳信号δC 55.7，一个亚甲基碳信号δC 37.0，一个甲基碳信号δC 21.2，确定化合物6为(2R,4R)-3,4-dihydro-5-methoxy-2-methyl-2H-1-benzopyran-4-ol(Yang,W.C.；Chen,Y.；Cai,R.L.；Zou,G.；Wang,B.；She,Z.G.Chem.Biodivers.2020,17,e2000192.)。化合物7为无色油状，ESIMS m/z:243.1[M+Na]+，推测出其分子量为220.1，分子式为C12H12O4。在1H NMR谱中给出一个分子内氢键信号δH 12.82(s)，两个芳香氢信号δH 6.32(d,J＝1.6Hz)和δH 6.16(d,J＝1.6Hz)，一个烯氢信号δH6.14(s)，两个亚甲基信号δH 2.57(t,J＝7.6Hz)和δH 1.66(m)，一个甲基信号δH0.93(t,J＝7.6Hz)。在13C NMR谱中给出了12个碳信号，包括一个羰基碳信号δC 181.8，六个芳香碳信号δC 164.3,161.5,157.8,103.5,98.8,93.8，两个烯碳信号δC170.4,107.4，两个亚甲基碳信号δC 35.0,19.4，一个甲基碳信号δC 13.3，确定化合物7为5,7-dihydroxy-2-propylchromone(Kato,H.；Li,W.；Koike,M.；Wang,Y.H.,Koike,K.Phytochemistry.2010,71,1925.)。
化合物8为无色油状，ESIMS m/z:193.1[M+H]+，推测出其分子量为192.0，分子式为C10H8O4。1H NMR谱给出了两个芳香氢信号δH 6.84(d,J＝8.4Hz)和6.75(d,J＝8.0Hz)，一个烯氢信号δH 6.34(s)，一个甲基信号δH 2.29(s)。在13C NMR谱中给出了10个碳信号，包括一个羰基碳信号δC 182.1，六个芳香碳信号δC 151.9,149.3,133.5,125.2,115.0,111.8，两个烯碳信号δC164.9,110.8，一个甲基碳信号δC19.8，确定化合物8为5,8-dihydroxy-2-methyl-4H-1-benzopyran-4-one(Rao,C.R.；Venkateswarlu,V.Recl.Trav.Chim.Pay.B.1956,75,1321.)。
化合物9为白色针状晶体，ESIMS m/z:213.2[M+H]+，推测出其分子量为212.2，分子式为C12H20O3。1H NMR谱给出了一个烯氢信号δH 5.46(q,J＝12.4,6.4Hz)，五个甲基信号δH0.80(d,J＝6.8Hz),1.21(s),1.18(s),1.52(s)和1.54(d,J＝6.8Hz)，三个次甲基信号δH2.16(m),3.43(d,J＝1.2Hz)和4.60(d,J＝11.2Hz)，13C NMR谱给出了12个碳信号，包括一个酯羰基信号δC 178.3，两个烯碳信号δC126.3和131.6，五个甲基碳信号δC 10.2,13.1,13.6,22.6,26.4，三个次甲基碳信号δC 31.1,76.4,88.1，一个季碳信号δC 44.0。通过偶合常数的计算，JH3-H4＝1.2Hz,JH4-H5＝11.2Hz，确定化合物的相对构型，确定化合物9为helicascolide A(Poch,G.K.；Gloer,J.B.J.Nat.Prod.1989,52,257.)。
化合物10为无色油状，ESIMS m/z:229.2[M+H]+，推测出其分子量为228.2，分子式为C12H20O4。在1H NMR谱中给出一个烯氢信号δH 5.63(t,J＝6.0Hz)，两个连氧次甲基信号δH4.68(d,J＝10.8Hz),δH 3.49(s)，一个连氧亚甲基信号δH4.18(m)，一个次甲基信号δH 2.25(dd,J＝13.1,6.5Hz)，三个甲基信号δH 1.63(s),δH 1.30(s),δH 1.27(s)和δH 0.90(d,J＝10.8Hz)。在13C NMR谱中给出了12个碳信号，包括一个羰基碳信号δC 180.0，两个烯碳信号δC 133.1,131.1，两个连氧次甲基碳信号δC 87.5,76.9，一个连氧亚甲基碳信号δC 58.9，一个季碳信号δC 44.3，四个甲基碳信号δC 26.6,22.8,13.8,11.0，确定化合物10为helicascolide D(Liao,H.X.；Zheng,C.J.；Huang,G.L.；Mei,R.Q.；Nong,X.H.；Shao T.M.；Chen,G.Y.；Wang,C.Y.J.Nat.Prod.2019,82,2211.)。
化合物11为无色针状晶体，ESIMS m/z:271.1[M+H]+，推测出其分子量为270.1，分子式为C14H22O5。1H NMR谱给出了一个烯碳信号δH 5.58(t,J＝6.8Hz)，三个次甲基信号δH2.24(m),3.51(s)和4.71(d,J＝11.2Hz)，一个亚甲基信号δH 4.68(m)以及五个甲基信号δH0.90(d,J＝6.8Hz),1.27(s),1.31(s),1.69(s)和2.02(s)。13C NMR谱给出了14个碳信号，包括两个羰基碳信号δC 177.3和171.1，两个烯碳信号δC 136.4和125.4，一个季碳信号δC44.3，3个次甲基碳信号δC 86.8,77.0和31.2，一个亚甲基碳信号δC 60.6以及五个甲基碳信号δC 26.5,22.7,20.9,13.8和11.2，确定化合物11为helicascolide E(Liao,H.X.；Zheng,C.J.；Huang,G.L.；Mei,R.Q.；Nong,X.H.；Shao T.M.；Chen,G.Y.；Wang,C.Y.J.Nat.Prod.2019,82,2211.)。
表1.化合物1-3的1H NMR(400MHz)和13C NMR(100MHz)
实施例2
取化合物1(2.0mg)将其溶于5mL二氯甲烷-甲醇(体积比4:1)的混合溶剂中，室温静置48小时后，自然析出晶体，其晶体结构以HyPix衍射仪(Rigaku XtaLAB Synergy R,HyPix diffractometer X)采用Cu Kα射线在120.02(10)K下扫描收集衍射数据。测量晶体尺寸为0.14×0.13×0.12mm。
化合物1晶型的数据为：斜方晶系，空间群P212121，晶胞参数为 α＝90°,β＝90°,γ＝90°,/> Z＝4,Dx＝1.381g/cm3,μ(Cu Kα)＝0.89mm-1,F(000)＝548,1824个可观测点[I>2ζ(I)]，可观测点精修最终偏离因子R＝0.0491,wR＝0.0812,Flack常数为0.02(6)。
实施例3抗氧化活性测试
对化合物1-11进行抗氧化活性测试，以ABTS自由基清除法评价化合物1-11的抗氧化能力。用等体积的ABTS溶液和氧化剂溶液配制ABTS母液。ABTS工作液在室温下保存12-16小时，然后用PBS缓冲液稀释ABTS工作液，使得稀释后的ABTS工作液的吸光度减去相应的PBS空白对照后，在734nm处的吸光度约为0.7。在每个检测4孔中加入200μL的ABTS稀释工作液和10μL的样品，轻轻混匀，室温孵育2-6分钟，然后用全波长多功能酶标仪测定734nm处的吸光度。PBS缓冲液作为空白对照，trolox作为阳性对照。各样品的抗氧化能力计算为抗氧化能力＝[(A空白组-A化合物)/A空白组]×100％。最后，利用SPSS软件计算IC50值。结果表明，测试化合物的IC50值在5.57-195.03μM范围内，均强于阳性对照trolox(IC50值为292.12μM)。其中化合物1、5、7、8的具体数值如下：

Claims (10)

1.一种红树来源真菌中抗氧化活性化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述红树来源真菌中抗氧化活性化合物具有化合物1-3所示的结构：
2.红树来源真菌HJ004在同时制备化合物1-11中的应用，所述红树来源真菌HJ004的菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2019年4月24日；保藏编号：CGMCC No.
17674；分类命名：Daldinia eschscholtzii；
化合物1-11的结构如下：
。
3.红树来源真菌HJ004在同时制备抗氧化活性化合物1、2或3中的应用，所述红树来源真菌HJ004的菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2019年4月24日；保藏编号：CGMCC No.17674；分类命名：Daldinia eschscholtzii；
化合物1-3的结构如下：
4.一种利用红树来源真菌HJ004同时制备化合物1-11的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将红树来源真菌HJ004接入发酵培养基中，26～28℃静置培养30天得发酵物；
(2)步骤(1)得到的发酵物用等体积的乙酸乙酯萃取2～4次，合并萃取液后减压浓缩得到浸膏；
(3)步骤(2)得到的浸膏经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，
50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集两个柱体积，根据极性大小分成7个组分，其中梯度100:0～90:10洗脱得到的为组分1，梯度80:20～70:30洗脱得到的为组分2，梯度60:40洗脱得到的为组分3，梯度50:50洗脱得到的为组分4，梯度40:60～30:70洗脱得到的为组分5，梯度20:80～10:90洗脱得到的为组分6，梯度0:100洗脱得到的为组分7；其中组分2先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝9:1-7:3的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，减压浓缩后再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH＝1:1的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为WatersC18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝73:27，得到化合物5；其中组分3先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝9:1-1:3的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，按极性大小分为3a-3d四个组分，其中3b组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝45:55，得到化合物4和化合物6；3c组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝40:60，得到化合物3和化合物9；3d组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝45:55，得到化合物10和化合物11；其中组分4先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝9:1-0:1的混合溶剂，洗脱4-5个柱体积，按极性大小分为4a-4d四个组分，其中4b组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝35:65，得到化合物1和化合物2；4c组分再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H2O＝30:70，得到化合物7和化合物8；
所述红树来源真菌HJ004的菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2019年4月24日；保藏编号：CGMCC No.17674；分类命名：Daldiniaeschscholtzii；
化合物1-11的结构如下：
。
5.权利要求4所述的方法，其特征在于所述发酵培养基为固体大米培养基。
6.权利要求1所述的化合物1-3或其药学上可接受的盐在制备抗氧剂中的应用。
7.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以权利要求1所述化合物1-3或其药学上可接受的盐作为有效成分。
8.权利要求7所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还可包括其他抗氧剂。
9.权利要求7-8任一项所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还包括药学上可接的辅料。
10.权利要求9所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的剂型选自固体制剂或液体制剂。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115724816B (zh) * 2022-08-09 2023-11-24 海南师范大学 红树来源真菌中色原酮晶型及其制备与应用
CN115490661B (zh) * 2022-08-09 2023-09-08 海南师范大学 红树来源真菌中抗氧化活性化合物及其制备方法

Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5409952A (en) * 1990-04-27 1995-04-25 Adir Et Compagnie Heterocyclic compounds: 2-styryl-4H-1-benzopyran-4-ones
CN1882560A (zh) * 2003-10-28 2006-12-20 雷迪美国治疗公司 杂环化合物及其产生和使用方法
CN101171241A (zh) * 2005-03-11 2008-04-30 密执安州立大学董事会 抗细胞凋亡的bcl-2家族成员的色烯-4-酮抑制剂及其应用
WO2014177593A1 (en) * 2013-04-29 2014-11-06 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Amorfrutin analogs as ppargamma-modulators
CN105732602A (zh) * 2015-09-23 2016-07-06 常州寅盛药业有限公司 作为ns4b抑制剂的苯并呋喃类似物
CN106432168A (zh) * 2016-09-19 2017-02-22 海南师范大学 红树尖瓣海莲内生真菌来源的抗弧菌活性化合物及其制备方法
CN107828663A (zh) * 2017-06-05 2018-03-23 海南师范大学 一种吲哚二萜类化合物晶体及其作为抗肿瘤药物的应用
CN107827805A (zh) * 2017-06-05 2018-03-23 海南师范大学 一种红树植物木果楝真菌来源的吲哚二萜类化合物及其制备方法与应用
CN109824689A (zh) * 2018-12-04 2019-05-31 海南师范大学 一种红树内生真菌中混源萜类化合物及其制备方法与应用
CN110229127A (zh) * 2019-07-22 2019-09-13 海南师范大学 一种红树内生真菌来源的丁内酯类化合物及其制备方法与应用
CN110257255A (zh) * 2019-05-22 2019-09-20 海南师范大学 红树尖瓣海莲内生真菌来源的苯并吡喃酮衍生物及其制备方法与应用
CN110283728A (zh) * 2019-05-22 2019-09-27 海南师范大学 红树尖瓣海莲内生真菌来源的四氢萘酮衍生物及其制备方法与应用
CN111533777A (zh) * 2020-04-12 2020-08-14 海南师范大学 一种由红树内生真菌制备甾类化合物的方法
CN113350329A (zh) * 2020-03-06 2021-09-07 南京施江医药科技有限公司 黄芩类化合物及其抑制线粒体氧化磷酸化通路的应用
CN114621092A (zh) * 2022-03-08 2022-06-14 海南师范大学 一种红树植物来源真菌中酚类化合物及其制备方法
CN115490661A (zh) * 2022-08-09 2022-12-20 海南师范大学 红树来源真菌中抗氧化活性化合物及其制备方法
CN115724816A (zh) * 2022-08-09 2023-03-03 海南师范大学 红树来源真菌中色原酮晶型及其制备与应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1627873A4 (en) * 2003-05-29 2007-12-05 New Ind Res Organization BENZOFURAN-BASED COMPOUND AND MEDICINAL COMPOSITION CONTAINING THE SAME

Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5409952A (en) * 1990-04-27 1995-04-25 Adir Et Compagnie Heterocyclic compounds: 2-styryl-4H-1-benzopyran-4-ones
CN1882560A (zh) * 2003-10-28 2006-12-20 雷迪美国治疗公司 杂环化合物及其产生和使用方法
CN101171241A (zh) * 2005-03-11 2008-04-30 密执安州立大学董事会 抗细胞凋亡的bcl-2家族成员的色烯-4-酮抑制剂及其应用
WO2014177593A1 (en) * 2013-04-29 2014-11-06 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Amorfrutin analogs as ppargamma-modulators
CN105732602A (zh) * 2015-09-23 2016-07-06 常州寅盛药业有限公司 作为ns4b抑制剂的苯并呋喃类似物
CN106432168A (zh) * 2016-09-19 2017-02-22 海南师范大学 红树尖瓣海莲内生真菌来源的抗弧菌活性化合物及其制备方法
CN107828663A (zh) * 2017-06-05 2018-03-23 海南师范大学 一种吲哚二萜类化合物晶体及其作为抗肿瘤药物的应用
CN107827805A (zh) * 2017-06-05 2018-03-23 海南师范大学 一种红树植物木果楝真菌来源的吲哚二萜类化合物及其制备方法与应用
CN109824689A (zh) * 2018-12-04 2019-05-31 海南师范大学 一种红树内生真菌中混源萜类化合物及其制备方法与应用
CN110257255A (zh) * 2019-05-22 2019-09-20 海南师范大学 红树尖瓣海莲内生真菌来源的苯并吡喃酮衍生物及其制备方法与应用
CN110283728A (zh) * 2019-05-22 2019-09-27 海南师范大学 红树尖瓣海莲内生真菌来源的四氢萘酮衍生物及其制备方法与应用
CN110229127A (zh) * 2019-07-22 2019-09-13 海南师范大学 一种红树内生真菌来源的丁内酯类化合物及其制备方法与应用
CN113350329A (zh) * 2020-03-06 2021-09-07 南京施江医药科技有限公司 黄芩类化合物及其抑制线粒体氧化磷酸化通路的应用
CN111533777A (zh) * 2020-04-12 2020-08-14 海南师范大学 一种由红树内生真菌制备甾类化合物的方法
CN114621092A (zh) * 2022-03-08 2022-06-14 海南师范大学 一种红树植物来源真菌中酚类化合物及其制备方法
CN115490661A (zh) * 2022-08-09 2022-12-20 海南师范大学 红树来源真菌中抗氧化活性化合物及其制备方法
CN115724816A (zh) * 2022-08-09 2023-03-03 海南师范大学 红树来源真菌中色原酮晶型及其制备与应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
一株地衣内生真菌Daldinia childiae的化学成分;周璇等;《菌物学报》;第40卷(第01期);第40-47页 *

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