CN115443134A - 细胞结合分子与喜树碱类似物的偶联物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种喜树碱类似物与式(I)细胞结合分子的偶联物，其中R1,R2,R3,R4,R5,X,L,n,m,T和

Description

细胞结合分子与喜树碱类似物的偶联物
技术领域
本发明涉及用于靶向治疗的喜树碱类似物与细胞表面受体结合分子的偶联物。本发明还涉及含有喜树碱类似物与细胞结合分子偶联物的组合物在治疗癌症、自免疫系统疾病和感染性疾病上的应用。
技术背景
癌症靶向治疗旨在通过将药物更好地靶向肿瘤，并避开健康组织而使副作用最小或克服副作用。其中一种策略是抗体-药物偶联物(ADC)，它通过有条件稳定的连接子将对肿瘤精确识别的抗体与高效细胞毒性药物(有效载荷)结合，从而提高后者在肿瘤中的局部浓度(健康组织中的若干倍)。在过去的四十年中，制药行业对ADC投入了巨额资金，开展深入研究。美国FDA批准了8个ADC药物，分别命为Mylotarg(gemtuzumab ozogamicin)，Adcetris(brentuximab vedotin)，Kadcyla(ado-trastuzumab emtansine)，Besponsa(inotuzumab ozogamicin)，Polivy(polatuzumab vedotin-piiq)，Enhertu(fam-trastuzumab deruxtecan-nxki)，Padcev(enfortumab vedotin-ejfv)，Trodelvy(sacituzumab govitecan)，100多种ADC新药正处于临床开发阶段(Chau，C.H.等，Lancet.2019，394，793-804)。
众所周知，ADC复合物中的有效载荷-连接子组分对于ADC的同质性、循环系统中的稳定性、药代动力学特征、耐受性和整体治疗效果有很大影响(Zhao，R.Y.等(2011)J.Med.Chem.54，3606；Acchionea，M.等(2012)mAbs，4，362；Doronina，S.等，(2006)Bioconjug Chem，17，114；Hamann，P.等.(2005)Bioconjug Chem.16，346)。尽管人们进行了广泛的研究来改善ADC的这些参数，但迄今为止，选择的有效载荷仍然多来自美登素(maytansin)(DM1和DM4)，澳瑞他汀(auruistatin)(MMAE和MMAF)，加利车霉素(calicheamicin)，吡咯并[2，1-c][1，4]苯二氮杂卓(PBD)二聚体，喜树碱(camptothecin)，海兔毒素(duocarmysin)和tubulysin(Leung，D.，等，Antibodies(Basel).2020，9：E2.doi：10.3390/antib9010002；Khongorzul，P.，等，Mol Cancer Res.2020，18：3-19.doi：10.1158/1541-7786.MCR-19-0582；Chau，C.H.，等，Lancet.2019，394：793-804.doi：10.1016/S0140-6736(19)31774-X)。
在这些有效载荷中，用喜树碱(CPT)构建的ADC已被证明具有更宽的治疗指数(TI)，许多临床试验已经证明，其中的两个ADC化合物，Enhertu(fam-trastuzumabderuxtecan-nxki或DS-8201a)和Sacituzumab govitecan(IMMU-132或hRS7-SN-38)在实体瘤治疗时，具有显著的临床益处(PFS和OS)(Pondé，N.，等，Curr Treat OptionsOncol.2019Apr 1；20(5)：37.doi：10.1007/s11864-019-0633-6；Kaplon，H.，等，MAbs.2020，12(1)：1703531，10.1080/19420862.2019.1703531)。喜树碱(CPT)是一种有效的抗肿瘤剂，1958年从中国本土喜树(Camptotheca acuminata)的提取物中被成功分离，已在传统中药中被广泛使用了数百年。喜树碱可通过与DNA酶拓扑异构酶I相互作用，形成可逆的酶-喜树碱-DNA三元复合物，引起细胞死亡(Wu Du，Tetrahedron 59(2003)8649-8687)。在过去的五十年中有许多喜树碱类似物结构被公开，如下所示：
Figure GDA0003907478750000021
喜树碱、
Figure GDA0003907478750000022
20-脱氧喜树碱、
Figure GDA0003907478750000023
10-甲氧基喜树碱、
Figure GDA0003907478750000024
9-甲氧基喜树碱、
Figure GDA0003907478750000025
10-羟基喜树碱、
Figure GDA0003907478750000026
19-脱氢喜树碱、
Figure GDA0003907478750000031
拓扑替康、
Figure GDA0003907478750000032
伊立替康(camtosar)、
Figure GDA0003907478750000033
Simmitecan、
Figure GDA0003907478750000034
SN-38、
Figure GDA0003907478750000035
Silatecan、
Figure GDA0003907478750000036
可司替康(Karenitecin)、
Figure GDA0003907478750000037
伊喜替康、
Figure GDA0003907478750000038
Lurtotecan、
Figure GDA0003907478750000039
GI-149893、
Figure GDA0003907478750000041
9-甘氨酸酰胺喜树碱盐酸盐(MLS000756803)、
Figure GDA0003907478750000042
10，11-亚甲二氧基喜树碱(Mdo-CPT)、
Figure GDA0003907478750000043
吉马替康、
Figure GDA0003907478750000044
倍罗替康(Belotecan)、
Figure GDA0003907478750000045
鲁比替康(Rubitecan)或IDEC-132类似物、
Figure GDA0003907478750000046
依洛替康(Elomotecan)(BN-80927)、
Figure GDA0003907478750000047
9-氨基喜树碱(9-AC)、
Figure GDA0003907478750000051
10-氨基喜树碱(10-AC)、
Figure GDA0003907478750000052
11-氰基喜树碱(NSC609951)、
Figure GDA0003907478750000053
7-乙酰基-喜树碱(SCHEMBL6851483)、
Figure GDA0003907478750000054
7-羟甲基喜树碱、
Figure GDA0003907478750000055
10-氨基-11-羟基喜树碱(BDBM50285230)、
Figure GDA0003907478750000056
二氟替康(Diflomotecan)、
Figure GDA0003907478750000057
喜树碱20-O-丙酸酯(CZ-48)、
Figure GDA0003907478750000061
喜树碱氯乙酸酯(DL5FFZ93W4)、
Figure GDA0003907478750000062
喜树碱赖氨酸酯(NSC610457)、
Figure GDA0003907478750000063
Sacituzumab govitecan(Immu-132)(mAb是靶向Trop2单克隆抗体)、
Figure GDA0003907478750000064
Trastuzumab deruxtecan(DS-8201a)(mAb是靶向Her2单克隆抗体，曲妥珠单抗)、
Figure GDA0003907478750000065
(Jeffrey S.等US2019/0343828)、
Figure GDA0003907478750000071
(Li W.等，ACS Med Chem Lett.2019，10(10)：1386–1392)。
因为喜树碱(CPT)及其大多数衍生物都极难溶于生理缓冲液，在1970年代以来开展的初步临床试验中，药物不良反应率很高。喜树碱类ADC的偶联物聚集可高达80％(Burke，P.等Bioconjugate Chem.2009，20，6，1242-1250)，因此限制了其大规模生产，由于聚集体产生的系统性副作用，也限制了临床试验的开展。到目前为止，美国FDA仅批准了三种水溶性CPT衍生物，用于癌症化疗，包括拓扑替康，伊立替康和倍罗替康(Palakurthi，S.，Expert Opin Drug Deliv.2015；12(12)：1911-21；Shang，X.F.等，Med Res Rev.2018，38(3)：775-828)以及一种水溶性CPT衍生物偶联的ADC，Enhertu(fam-trastuzumabderuxtecan-nxki或DS-8201a)，用于Her2实体瘤的靶向免疫治疗(Modi S等，N Engl JMed.2020，382(7)：610-621.doi：10.1056/NEJMoa1914510；Keam，S.J.，Drugs.2020Apr；80(5)：501-508.doi：10.1007/s40265-020-01281-4)。我们已经在水溶性CPT衍生物ADC方面进行了一段时间的研究，应用亲水性支链连接子与CPT类似物偶联(请参考PCT/CN2019/092614)，以扩大产生的ADC的治疗窗口。本发明公开了一种水溶性CPT衍生物的ADC，其中，CPT类似物的C-10位置与O或NH相连，这对水溶性的提高至关重要，而C-11位置与吸电子基团或较大的基团相连，可以保持与天然CPT相当的高细胞毒性。
发明内容
本发明包括了喜树碱类似物与细胞结合分子的偶联物、喜树碱类似物-连接子和喜树碱类似物，它们的制备和使用方法，以及用于制备的中间体。本发明的喜树碱类似物是水溶性的并且在血液循环中稳定，一旦偶联物上的喜树碱类似物或喜树碱类似物-连接子的代谢物从无序生长的细胞内或者在细胞附近被释放出来，能够引起细胞死亡。
在一个实施例中，喜树碱类似物的偶联物具有如式(I)的结构：
Figure GDA0003907478750000072
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶型晶体结构；或其同位素，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中T是靶向或结合配体；L是可释放连接子；-----是独立地连接L到括号内的R1，R2，R3或R5的原子的连接键；n为1-30，m为1-10；
括号内是一种具有活性的喜树碱类似物，其中：
R1和R2独立地是H；直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)，氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基、烷基羧酸；C2-C6杂烷基，烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟；NH2或OH；
R3独立地是H、C(O)NH、C(O)O、SO2R6、SO3R6、PR6R6’、POR6R6’、CH2OP(O)(OR6)2、C(O)OP(O)(OR6)2、PO(OR6)(OR6’)、P(O)(OR6)OP(O)(OR6’)2、C(O)R6、C(O)NHR6；C1-C6直链或支链烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；C5～C12糖苷、NH2或OH；
R4是卤素(F、Cl、Br、或I)、CN、NO2、SO3H、OR6、SR6、S(O2)R6、NHR6、N(R6)(R6’)、C(O)XR6、N+(R6)(R6’)(R6”)；
X是NH或O；
R5是H、C(O)O、C(O)NH、R6C(O)、直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、烷基羧酸；C2-C6碳酸酯、脲、杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；
R6、R6’、和R6”独立地是C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐；
此外，R1、R2、R3和R6独立地可缺省，和R2、R3、X、C-10和C-9可以共同形成5-、6-或7-元杂环。
在另一个实施例中，喜树碱类似物物与结合分子的连接子L具有下式结构：--Ww-(Aa)r-Vv--；其中：--W--是延展体单元；w是0或1；每个-Aa-独立地是一个氨基酸单元；r独立地是0至12的整数；--V--是一个间隔体单元；v为0、1或2。延展体W独立地包含自毁灭间隔体，肽单元，腙键，二硫键或硫醚键。
在另一个实施例中，细胞表面结合分子T可以是任何种类，目前已知或即将被知的细胞结合配体，例如肽和非肽。通常，结合分子T是抗体；单链抗体；与靶细胞结合的抗体片段；单克隆抗体；单链单克隆抗体；结合靶细胞的单克隆抗体片段；嵌合抗体；结合靶细胞的嵌合抗体片段；结构域抗体；结合靶细胞的结构域抗体片段；adnectin类抗体；DARPins；淋巴因子；激素；维生素；生长因子；集落刺激因子；营养转运分子(转铁蛋白)以及结合在白蛋白、聚合物、树状大分子、脂质体、纳米颗粒、囊泡或(病毒)衣壳上的肽、蛋白质、抗体或小分子。优选结合分子T是单克隆抗体。
在另一方面，式(I)中的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可被用于治疗人或动物的癌症、自身免疫性疾病或传染病。
附图的简要说明
图1显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图2显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图3显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图4显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图5显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图6显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图7显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图8显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图9显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图10显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图11显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图12显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图13显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图14显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图15显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图16显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图17显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图18显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图19显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成及其与抗体偶联。
图20显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成及其与抗体偶联。
图21显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图22显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成及其与抗体偶联。
图23显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成及其与抗体偶联。
图24显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成及其与抗体偶联。
图25显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成及其与抗体偶联。
图26显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成及其与抗体偶联。
图27显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图28显示了用以制备喜树碱类似物偶联物的可偶联连接子的合成。
图29-1显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图29-2显示了用于偶联物的喜树碱类似物的结构。
图30显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图31显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图32显示了含有可偶联连接子的喜树碱类似物的合成。
图33显示了抗体-喜树碱类似物偶联物的结构。
图34显示了靶向Her2的抗体-CPT衍生物偶联物C1-031，C1-238，C1-397，C1-407，C1-411，C1-414，C1-424和C1-428与T-DM1在人胃肿瘤N87细胞模型上体内抗肿瘤作用的比较，静脉注射，剂量为6mg/kg。
图35显示了靶向Her2的抗体-CPT衍生物偶联物C1-031,C1-226,C1-238,C1-397,C1-407,C1-411,C1-414,C1-424,C1-428与T-DM1在人胃肿瘤N87细胞模型上体内抗肿瘤作用的比较，静脉注射，剂量为150mg/kg。
图36显示了靶向EGFR的抗体-CPT衍生物偶联物C1-031，C1-200，C1-214，C1-226，C1-305，C1-306，C1-311，C1-362，C1-402，C-407和C1-419在人NSCLC肿瘤HCC827细胞模型上抗肿瘤效果，静脉注射，剂量为6mg/kg。
定义
“烷基”是指在烷烃上除去一个或两个氢原子而产生的脂肪烃基团或单价基团。它可以是直链或是支链的，在链中具有C1-C8(1-8个碳原子)。“支链”是指直链烷基上连接有一个或多个低碳数的烷基，如甲基、乙基或丙基。示例性的烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、3-戊基、辛基、壬基、癸基、环戊基、环己基、2，2-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、2，2-二甲基戊基、2，3-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2，3，4-三甲基戊基、3-甲基-己基、2，2-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、3，5-二甲基己基、2，4-二甲基戊基、2-甲基庚基、3-甲基庚基、正庚基、异庚基、正辛基和异辛基。C1-C8烷基可以是未被取代的或被一个或多个基团取代，包括但不限于C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2，-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-SR'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2和-CN；其中每个R'独立地选自于C1-C8烷基和芳基。
“卤素”指氟、氯、溴或碘原子；优选氟和氯原子。
“杂烷基”指其中1至4个碳原子独立地被选自O、S和N的杂原子所取代的C2-C8烷基。
“碳环”指含有3到8个碳原子的饱和或不饱和单环，或含有7到13个碳原子的饱和或不饱和双环。单环碳环有3到6个环原子，典型的有5或6个环原子。双环碳环有7到12个环原子，构成[4，5]、[5，5]、[5，6]或[6，6]的双环系统，或有9个或10个环原子，构成[5、6]或[6，6]的双环系统。具有代表性的C3-C8的碳环包括但不限于：-环丙基、-环丁基、-环戊基、-环戊二烯基、-环己基、-环己烯基、-1，3-环己二烯基、-1，4-环己二烯基、-环庚基、-1，3-环庚二烯基、-1，3，5-环庚三烯基、-环辛基和-环辛二烯基。
C3-C8碳环”是指3、4、5、6、7或8元饱和或不饱和非芳族碳环。C3-C8碳环”可以是未被取代的或被一个或多个基团取代，包括但不限于C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-SR'、-S(O)R'、-S(O)2R'、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中每个R'独立地选自C1-C8烷基和芳基。
“烯基”指含有碳-碳双键的直链或支链脂肪烃基团，链内含有2-8个碳原子。示例性的烯基包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基。
“炔基”是指含有碳-碳三键的脂族烃基，该碳-碳三键可以是在链中具有2至8个碳原子的直链或支链。示例性的炔基包括乙炔基，丙炔基，正丁炔基，2-丁炔基，3-甲基丁炔基，5-戊炔基，正戊炔基，己炔基，庚烯基和辛炔基。
“亚烷基”是指含1-18个碳原子的饱和的支炼或直链或环状烃基，并带有两个通过从母体烷烃的相同或两个不同碳原子上除去两个氢原子而产生的一价自由基。典型的亚烷基包括但不限于：亚甲基(-CH2-)、1，2-乙基(-CH2CH2-)、1，3-丙基(-CH2CH2CH2-)、1，4-丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。
“亚烯基”指含2-18个碳原子的不饱和的支炼或直链或环状烃基，并带有两个通过从母体烯烃的相同或两个不同碳原子上除去两个氢原子而产生的一价自由基。典型的亚烯基包括但不限于：1，2-亚乙基(-CH＝CH-)。
“亚炔基”指含2-18个碳原子的不饱和的支炼或直链或环状烃基，并带有两个通过从母体炔的相同或两个不同碳原子上除去两个氢原子而产生的一价自由基。典型的亚炔基包括但不限于：乙炔、炔丙基和4-戊炔基。
“芳基”或“芳香基”指由一个或多个环组成的芳香或杂芳香基团，包含三至十四个碳原子，优选六至十个碳原子。术语“杂芳香基团”是指芳香基团上的一个或几个碳，最优是一个、两个、三个或四个碳原子，被氧(O)、氮(N)、硅(Si)、硒(Se)、磷(P)或(S)所取代，优选被氧、硫和氮所取代而产生的基团。术语“芳基”或“芳香基”也指其中一个或几个氢原子独立地被-R’、卤素、-OR’，-SR’、-NR’R”、-N＝NR’、-N＝R’、-NR'R”、-NO2、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2OR’、-OS(O)2OR’、-PR’R”、-P(O)R’R”、-P(OR’)(OR”)、-P(O)(OR’)(OR”)或-OP(O)(OR’)(OR”)所取代而产生的芳香基团。其中R’和R”独立地为氢、烷基、烯基、炔基、杂烷基、芳基、芳烷基、羰基或其药用盐。
“杂环”指其中一到四个环碳原子独立地被O、N、S、Se、B、Si或P等杂原子所取代而产生的的环结构。优选的杂原子是O、N和S。在《化学与物理手册》第78版的225-226页(TheHandbook of Chemistry and Physics，78th Edition，CRC Press，Inc.，1997-1998，第225至226页)上也有杂环化合物的相关描述，在此引作参考。优选的非芳基杂环包括环氧基、氮丙啶基、硫杂丙基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、环氧乙烷基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢吡喃基、二恶烷基、二氧戊环基、呱啶基、呱嗪基、吗啉基、吡喃基、咪唑啉基、吡咯啉基、吡唑啉基、噻唑烷基、四氢噻喃基、二噻烷基、硫代吗啉基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢吡啶基、二氢吡啶基、四氢嘧啶基、二氢噻喃基、氮杂环庚烷基，以及上述基团与苯基缩合得到的稠环体系。
术语“杂芳基”或“芳基杂环”是指含3到14，优选5至10个原子的芳香性杂环、包含单环、双环或多环。示例包括吡咯基、吡啶基、吡唑基、噻吩基、嘧啶基、吡嗪基、四唑基、吲哚基、喹啉基、嘌呤基、咪唑基、噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、1，2，4-噻二唑基、异噻唑基、三唑基、四唑基、异喹啉基、苯并噻吩基、异苯并呋喃基、吡唑基、咔唑基、苯并咪唑基、异恶唑基、吡啶基-N-氧化物，以及上述基团与苯基缩合得到的稠环体系。
“烷基”、“环烷基”、“烯基”、“炔基”、“芳基”、“杂芳基”、“杂环”等，也包含各自对应的“亚烷基”、“亚环烷基”、“亚烯基”、“亚炔基”、“亚芳基”、“亚杂芳基”、“亚杂环”等，为论述方便，本专利申请对它们未做完全区分。
“芳烷基”指一类非环烷基，其中一个与碳原子(通常为末端或sp3碳原子)键合的氢原子被芳基取代。典型的芳烷基包括芐基、2-苯基乙-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘基甲基、2-萘基乙-1-基、2-萘基乙-1-基、萘并芐基、2-萘基苯基-1-基等。
“杂芳烷基”指一类非环烷基，其中一个与碳原子(通常为末端或sp3碳原子)键合的氢原子被杂芳基取代。杂芳烷基的实例有2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基。
“羟基保护基”的实例包括甲氧基甲基醚、2-甲氧基乙氧基甲基醚、四氢吡喃基醚、芐基醚、对甲氧基芐基醚、三甲基甲硅醚、三乙基硅醚、三异丙基硅醚、叔丁基二甲基硅醚、三苯基甲基硅醚、乙酸酯、取代乙酸酯、特戊酸酯、苯甲酸酯、甲磺酸酯和对甲苯磺酸酯。
“离去基团”指可以被另一个官能团取代的官能团。这些离去基团是本领域公知的、实例包括卤化物(如氯化物、溴化物和碘化物)、甲磺酰基、对甲苯磺酰基和三氟甲磺酰基。优选的离去基团选自硝基苯氧基；N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)；苯氧基；二硝基苯氧基；五氟苯氧基；四氟苯氧基；二氟苯氧基；一氟苯氧基；五氯苯氧基；三氟甲磺酰基；咪唑基；氯苯氧基；四氯苯氧基；1-羟基苯并三唑基；甲苯磺酰基；甲磺酰基；2-乙基-5-苯基异恶唑-3'-磺酰基，酸酐或与其它酸酐作用形成的酸酐，例如乙酸酐、甲酸酐；或与多肽缩合试剂、Mitsunobu反应试剂作用生成的中间体。
以下缩写为本发明所采用，其定义为：Boc，叔丁氧基羰基；BroP，溴代十四烷基鏻六氟磷酸盐；CDI，1，1'-羰基二咪唑；DCC，二环己基碳二亚胺；DCE，二氯乙烷；二氯甲烷，二氯甲烷；DEAD，偶氮二甲酸二乙酯；DIAD，偶氮二甲酸二异丙基酯；DIBAL-H，二异丁基氢化铝；DIPEA或DEA，二异丙基乙胺；DEPC，二乙基氰基磷酸酯；DMA，N，N-二甲基乙酰胺；DMAP，4-(N，N-二甲基氨基)吡啶；DMF，N，N-二甲基甲酰胺；DMSO，二甲基亚砜；DTPA，二亚乙基三胺五乙酸；DTT，二硫苏糖醇；EDC，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；ESI-MS，电喷雾质谱；乙酸乙酯，乙酸乙酯；Fmoc，N-(9-芴基甲氧基羰基)；HATU，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐；HOBt，1-羟基苯并三唑；HPLC，高效液相色谱；NHS，N-羟基琥珀酰亚胺；MeCN，乙腈；甲醇，甲醇；MMP，4-甲基吗啉；PAB，对氨基苯甲酸；PBS，磷酸盐缓冲液(pH 7.0-7.5)；Ph，苯基；Phe，L-苯丙氨酸；PyBrop，溴-三-吡咯烷-鏻六氟磷酸盐；PEG，聚乙二醇；SEC，尺寸排阻色谱；TCEP，三(2-羧乙基)膦；三氟乙酸，三氟乙酸；THF，四氢呋喃；Val，缬氨酸；TLC，薄层色谱；UV是紫外线。
“氨基酸”可以是天然或非天然的，优选α-氨基酸。天然氨基酸可以由遗传密码所编码，它们是丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、色氨酸和缬氨酸。非天然氨基酸是蛋白质氨基酸的衍生物，包括羟脯氨酸、羊毛硫氨酸、2-氨基异丁酸、脱氢丙氨酸、γ-氨基丁酸(神经递质)、鸟氨酸、瓜氨酸、β-丙氨酸(3-氨基丙酸)、γ-羧基谷氨酸、硒代半胱氨酸(存在于许多非真核以及大多数真核细胞中、但不是由DNA直接进行编码)、吡咯赖氨酸(仅在一些古细菌和一种细菌中发现)、N-甲酰基甲硫氨酸(通常是细菌、线粒体和叶绿体中蛋白质中最初的氨基酸)、5-羟色氨酸、L-二羟基苯丙氨酸、三碘甲腺原氨酸、L-3，4-二羟基苯丙氨酸(DOPA)和O-磷酸丝氨酸。术语“氨基酸”还包括氨基酸类似物和模拟物。类似物是具有与天然氨基酸相同结构通式H2N(R)CHCO2H的化合物，其中R在天然氨基酸里。类似物的实例包括高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸-亚砜和甲硫氨酸甲基锍。更优的是氨基酸模拟物，它是具有与α-氨基酸的化学结构不同、但是作用方式类似的化合物。天然氨基酸多为“L”立体化学构型，“非天然氨基酸”也用于代表“D”构型的氨基酸。在本专利申请中使用1至8个氨基酸时、其序列优选为蛋白水解酶可识别的序列。许多水解酶识别序列是本领域已知的，可以参见：Matayoshi等.Science 247：954(1990)；Dunn等.Meth.Enzymol.241：254(1994)；Seidah等.Meth.Enzymol.244：175(1994)；Thornberry，Meth.Enzymol.244：615(1994)；Weber等.Meth.Enzymol.244：595(1994)；Smith等.Meth.Enzymol.244：412(1994)；及Bouvier等.Meth.Enzymol.248：614(1995)；此处引作参考。特别是选自以下序列：Val-Cit、Ala-Val、Ala-Ala、Val-Val、Val-Ala-Val、Lys-Lys、Ala-Asn-Val、Val-Leu-Lys、Cit-Cit、Val-Lys、Ala-Ala-Asn、Asp-Lys、Asp-Glu、Glu-Lys、Lys、Cit、Ser及Glu。
“糖苷”是糖通过糖苷键在其异头碳上与另一基团键合得到的分子。糖苷可以通过O-(产生O-糖苷)、N-(产生糖基胺)、S-(产生硫代糖苷)或C-(产生C-糖苷)糖苷键连接，其实验式为Cm(H2O)n(其中m可以不同于n，m、n<36)，本发明中的糖苷包括葡萄糖(右旋糖)、果糖(左旋糖)、阿洛糖、阿卓糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔罗糖、半乳糖胺、氨基葡萄糖、唾液酸、N-乙酰氨基葡萄糖、磺基奎诺糖(6-脱氧-6-磺基-D-吡喃葡萄糖)、核糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖、山梨糖醇、甘露醇、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、麦芽糖糊精、棉子糖、葡萄糖醛酸(葡糖苷酸)和水苏糖。它可以是D或L的构型、5原子环状呋喃糖的形式、6原子环状吡喃糖的形式，或是非环形式、α-异构体(异头碳的-OH在Haworth投影碳原子平面之下)、或β-异构体(异头碳的-OH在Haworth投影碳原子平面之上)。本发明中亦称为单糖、二糖、多元醇或含3-6个糖单元的低聚糖。
本发明中的“抗体”指全长免疫球蛋白分子或全长免疫球蛋白分子的免疫活性部分，如含有抗原结合位点的分子，该结合位点免疫特异性地与靶标抗原或部分靶标抗原结合，靶标包括但不限于，癌细胞或产生与自身免疫疾病相关的自免疫抗体的细胞。本发明中的免疫球蛋白可以是免疫球蛋白的任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或子类。免疫球蛋白可以来自任何物种，但优选的免疫球蛋白来源于人、鼠或兔。本发明的抗体优选是单克隆抗体，包括但不限于多克隆、单克隆、双特异性、人、人源化或嵌合抗体，单链抗体，Fv、Fab片段、F(ab')片段、F(ab')2片段、由Fab表达库产生的片段，抗独特型(抗Id)抗体，CDR和任何能免疫特异性地结合癌细胞抗原、病毒抗原或微生物抗原的上述结构的表位结合片段。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从大体上均质的抗体群体中获得的抗体，即，除了可能少量存在的可能的天然突变以外，构成该群体的各个抗体是相同的。单克隆抗体针对单个抗原位点具有高度特异性。修饰语“单克隆”表示从大体上同质的抗体群体获得的抗体的特征，而不应解释为要求通过任何特定方法生产抗体。
“完整抗体”是包含适于抗体类别的，抗原结合可变区以及轻链恒定域(CL)和重链恒定域CH1、CH2、CH3和CH4的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。
“抗体片段”为完整抗体的一部分，包含其抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab，Fab'，F(ab')sub2和Fv片段，双抗体，三抗体，四抗体，线性抗体，单链抗体分子，scFv，scFv-Fc，由抗体片段形成的多特异性抗体片断，由Fab表达文库产生的片段，或上述任一项的表位结合片段，它们免疫特异性结合靶抗原(例如癌细胞抗原，病毒抗原或微生物抗原)。
“抗原”是抗体特异性结合的实体。
术语“特异性的结合”和“特异性地结合”是指抗体或抗体衍生物将以高度选择性的方式与其靶抗原的相应表位结合，而不与多种其他抗原结合。通常，抗体或抗体衍生物以至少约1×10-7M，优选10-8M至10-9M，10-10M，10-11M或10-12M的亲和力与特定抗原结合，结合的亲和力比与特定抗原或紧密相关抗原以外的、非特异性抗原(例如，BSA，酪蛋白)结合的亲和力至少大两倍。
“对映异构体”，也称为“光学异构体”，是两个立体异构体中的一个，它们是彼此的镜像，不可重迭(不等同)，就像人的左右手，除非沿着某一平面被翻转，它们是不可重迭的(仅通过改变方向不能让双手重迭)。化合物中的单个手性原子或类似的结构特征使得该化合物具有两种可能的结构，它们不可重迭，是彼此的镜像。在某一化合物中存在的多个手性特征增加了可能存在的构型的数目，其中可能会有一些互为镜像。对映体纯的化合物是指在检测方法的能力范围内，仅具有同一种手性的样品。在对称的环境中，两个对映体可以使平面偏振光(+/-)在相反的方向上等量旋转(偏振光可以被认为是不对称的介质)，除此之外，它们具有相同的化学性质和物理性质。由于这个原因，它们有时也被称为光学异构体。光学活性异构体及其等量的对映体的混合物被称为外消旋体，它对平面偏振光无净旋转，因为每个正旋转(+)都被负旋转(-)完全抵消。通常两个对映异构体与其他的对映异构体物质发生不同的化学反应。由于许多生物分子是对映体，因此有时两种对映体对生物有机体的影响存在显著差异。例如，在药物中，通常只有一种对映体可以发生想要的生理作用、而另一种对映体或是活性较低、或无活性，有时甚至产生不良反应。基于这样的发现，可以开发仅由一种对映体(“对映体纯”)组成的药物以增强药理学效力，有时还可以消除一些副作用。
同位素是特定化学元素的质子数相同，中子数不同的不同核素。同一元素的所有同位素具有相同数量的质子。一个原子序数指定一个特定的元素，但非同位素；特定元素原子可以有不同的中子数。核子(质子和中子)的数量是原子的质量数，特定元素的每个同位素具有不同的质量数。例如、碳-12、碳-13和碳-14是碳元素的三种同位素，质量数分别为12，13和14。碳的原子序数为6，意味着每个碳原子都有6个质子，因此这些同位素的中子数分别为6、7和8。氢原子有三种同位素：氕(1H)、氘(2H)和氚(3H)，氘的质量是氕的两倍，氚的质量是氕的三倍。通过动力学同位素效应，同位素替代实验可用于确定化学反应的机理。同位素替代实验还可用于研究外源化合物通过吸收和分布机制进入体内后，身体如何对它产生作用，体内物质的代谢变化(例如通过细胞色素P450或葡萄糖醛酸转移酶等代谢酶的作用)，以及药物代谢产物的排泄途径，是为药代动力学(PK)研究。同位素替代实验可用于研究药物的生化和生理作用，包括在动物(包括人类)、微生物或生物组合(例如感染)上所显现出来的作用，是为药效学(PD)研究。两种研究共同影响药物的剂量，益处和不利影响。同位素可以包含稳定的(非放射性)或不稳定的元素。同位素取代的药物可能具有与原始药物不同的治疗功效。通过同位素标记本发明公开的化合物，可用于药物和/或底物组织分布测定。特别优选氚(3H)和碳14(14C)标记的化合物，因为易于制备和容易被检测。此外，用较重的同位素如氘(2H)替代可以提供某些治疗优势，这是由于代谢稳定性更高，例如体内半衰期延长或剂量要求降低，因此在某些情况下可能是优选方案。本发明公开的同位素标记的化合物，包括其药物盐，酯和前药，可以通过本领域已知的任何方法来制备。也可以用12C代替天然12C，可以获得同样的益处。
“药学上”或“药学上可接受的”是指当分子实体和组合物适当地施用于动物或人时，不会产生不利、过敏或其他不良反应。
“药学上可接受的溶剂化物”或“溶剂化物”是指一种或多种溶剂分子与本发明公开的化合物的结合物。用于制备溶剂合物的溶剂的实例包括，但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。
“药学上可接受的辅料”包括任何载体、稀释剂、佐剂或其它，例如防腐剂或抗氧化剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。这些介质和药剂用于药物活性物质在本领域内是熟知的。任何传统介质或药剂，除非与活性成分不兼容，也可以考虑将其用于治疗组合物中。补充活性成分也可以加入组合物中，成为合适的治疗组合。
如本文所用，“药用盐”是本发明公开化合物的衍生物，通过制备母体化合物的酸盐或碱盐来获得。药学上可接受的盐包括由无毒无机酸或有机酸与母体化合物形成的常规无毒盐或季铵盐。例如，所述常规无毒盐包括衍生自无机酸(例如盐酸、氢溴酸盐、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等)的盐；以及由有机酸(例如乙酸、丙酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、苯磺酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、甲苯磺酸、草酸、富马酸、马来酸及乳酸等制备的盐。另外的加成盐包括铵盐，如三甲胺、葡甲胺、丙三醇等的盐、金属盐、如钠、钾、钙、锌或镁盐。
本发明的药用盐可由含有碱性或酸性部分的母体化合物，通过常规化学方法合成。通常而言，这些盐可以通过在水或有机溶剂中或两者的混合物中，向母体化合物里，加入等当量的适当碱或酸来制备。一般来说，乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是非水介质的首选。适用盐的列表见于1985年由麦克出版公司出版的《雷明顿药物科学》(Remington'sPharmaceutical Sciences)，其内容纳入本发明作参考。
术语“治疗有效量”是指有效治疗哺乳动物疾病或病症的偶联物的量。治疗癌症时，治疗有效量的偶联物可减少癌细胞的数量；减小肿瘤的大小；抑制(即，在一定程度上减缓，最佳情况下，停止)癌细胞浸润到外周器官；抑制(即，在一定程度上减缓，最佳情况下，停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状的程度。就药物可以抑制生长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，它可能是细胞抑制性和/或细胞毒性的。对于癌症治疗，疗效可以，例如，通过评估疾病进展时间(TTP)和/或确定反应率(RR)。
如本文所用，术语“药学上可接受的形式”是指公开的化合物的形式，包括但不限于药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物、多晶型物、异构体、前药和同位素标记的衍生物。在一个实施方案中，“药学上可接受的形式”包括但不限于药学上可接受的盐、酯、前药和同位素标记的衍生物。在一些实施方式中，“药学上可接受的形式”包括但不限于药学上可接受的异构体及其立体异构体、前药和同位素标记的衍生物。
术语“实质”或“实质上”是指混合物或样品的多数，即>50％，优选超过50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。
本发明所设想的取代基和变量的组合仅指那些可以形成稳定化合物的组合。本文所用的术语“稳定”是指在制造时保持稳定，在用于本文详述的目的(例如，对受试者的治疗性或预防性给药)的时间段内，保持化合物完整性。
本发明的化合物是，在制备之后，优选地被分离和纯化，获得的含量等于或大于95％(“纯的”)的组合物，然后如本文所述被使用或配制。在某些实施方案中，本发明的化合物纯度超过99％。
术语“细胞毒活性”是指药物或喜树碱偶联物或喜树碱偶联物的细胞内代谢物的细胞杀伤作用。细胞毒活性可用IC50值表示，即使一半细胞存活的浓度(摩尔或质量/单位体积)。
术语“细胞抑制活性”是指药物或喜树碱类似物偶联物或喜树碱偶联物的细胞内代谢物的抗增殖作用。
如本文所用，术语“细胞毒性剂”是指具有细胞毒活性并导致细胞破坏的物质。该术语旨在包括化学治疗剂和毒素，例如小分子毒素或源于细菌、真菌、植物或动物的酶活性毒素，包括它们的合成类似物和衍生物。
“施用”或“给药”是指以任何方式向受试者转移、递送、引入或运输药物或其他药剂。这些方式包括口服、局部接触、静脉内、腹膜内、肌肉内、病灶内、鼻内、皮下或鞘内给药。本发明还考虑使用装置或器械来施用药剂。这种装置可以使用主动或被动型传输，而且可以是缓释或快速释放递送装置。
就癌症而言，术语“治疗”包括以下任何一项或全部：阻止肿瘤细胞或癌细胞生长、复制，减轻整体肿瘤量，以及改善与该疾病相关的一个或多个症状。
就自身免疫性疾病而言，术语“治疗”包括以下任一项或全部：阻止与自身免疫性疾病相关的细胞的复制，包括但不限于能够产生自身免疫性抗体的细胞，减轻自身免疫性抗体量和改善自身免疫性疾病的一个或多个症状。
就传染病而言、术语“治疗”包括以下任何一项或全部：阻止引起传染病的病原体的生长、增殖或复制，以及改善传染病的一个或多个症状。
术语“癌”和“癌的”是指或描述哺乳动物的生理状况或病症，其通常以不受调节的细胞生长为特征。“肿瘤”包括一种或多种癌细胞。
如本文所用，“自身免疫疾病”是指由个体自身组织或蛋白质引起并针对个体自身组织或蛋白质的疾病或病症。
如本文所用，“患者”是指向其施用本发明的喜树碱偶联物的受试者。患者包括但不限于人、大鼠、小鼠、豚鼠、非人灵长类动物、猪、山羊、牛、马、狗、猫、鸟和家禽。通常，患者是大鼠、小鼠、狗、人类或非人类灵长类动物，尤其是人类。
“哺乳动物”或“动物”的实例包括但不限于人、鼠、家鼠、豚鼠、猴、猪、山羊、牛、马、狗、猫、鸟和家禽。
除非上下文另有说明，否则术语“治疗”或“治疗”是指治疗性和预防性治疗，其目的是抑制或减缓(减轻)不希望的生理变化或障碍，例如癌症的发展或扩散。出于本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于症状的缓解、疾病程度的减轻、疾病的稳定(即不恶化)状态、疾病进展的延迟或减缓、改善或缓和疾病状态，以及缓解(无论是部分的还是全部的)，无论是可检测的还是不可检测的。“治疗”还可以指与未接受治疗的预期生存期相比，延长生存期。需要治疗的人包括那些已经患有该病症或障碍的人以及易于患有这种疾病或疾病的人。
药物-连接子-结合配体偶联物
如上所述，本发明提供了如式(I)的细胞表面结合分子-喜树碱类似物的偶联物：
Figure GDA0003907478750000191
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中T是靶向或结合配体；L是可释放的连接子；-----是L独立地连接到括号内的R1，R2，R3或R5的原子的连接键；n为1-30，m为1-10；
括号内是一种具有活性的喜树碱类似物，其中：
R1和R2独立地为H；直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基、烷基羧酸的，或羰基；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、氨基烷基羰基、氧基烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟；NH2或OH；
R3独立地是H、C(O)NH、C(O)O、SO2R6、SO3R6、PR6R6’、POR6R6’、CH2OP(O)(OR6)2、C(O)OP(O)(OR6)2、PO(OR6)(OR6’)、P(O)(OR6)OP(O)(OR6’)2、C(O)R6、C(O)NHR6；直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基、烷基羧酸的、或羰基；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、氨基烷基羰基、氧基烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟；NH2或OH；
R4卤素(F、Cl、Br、或I)、CN、NO2、SO3H、OR6、SR6、S(O2)R6、NHR6、N(R6)(R6’)、C(O)XR6、N+(R6)(R6’)(R6”)；
X是NH或O；
R5是H、C(O)O、C(O)NH、R6C(O)、直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、烷基羧酸；碳酸酯、脲、杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚的C2-C6、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；
R6、R6’、和R6”独立地是H、C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基的C2-C6酰胺或氨基酸；或药用盐；
此外，R1、R2、R3和R6独立地可缺省，和R2、R3、X、C-10和C-9可以共同形成5-、6-或7-元杂环.
在另一个实施例中，喜树碱类似物的偶联物具有式(II)结构：
Figure GDA0003907478750000211
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中T是靶向或结合配体；L是可释放的连接子；n是1-30，m是1-10；
括号内是一种有效喜树碱类似物，其中：
R1是直链或支链C1-C6烷基、烷氧基、烷基氨基(包括伯、仲、叔氨基或季铵)、氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基或烷基羧酸的；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氧基环烷基、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、氨基烷基羰基、氧基烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟的；NH，或O；
R2是H，直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、氨基烷基醇、氨基烷基胺、氧基烷基醇、氧基烷基胺、氨基烷基、氧基烷基或烷基羧酸的；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；NH2或OH；
R3独立地是H，R6NHC(O)，R6OC(O)，SO2R6，SO3R6，PR6R6’，POR6R6’，CH2OP(O)(OR6)2，C(O)OP(O)(OR6)2，PO(OR6)(OR6’)，P(O)(OR6)OP(O)(OR6’)2，R6C(O)，C(O)N R6R6’；直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸的；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基的，烷基醚，烷基酯，烷基酰胺，肟；C5～C12糖苷；
R4是卤素(F，Cl，Br，or I)，CN，NO2，SO3H，OR6，SR6，S(O2)R6，NHR6，N(R6)(R6’)，C(O)XR6，N+(R6)(R6’)(R6”)；
X是NH或O；
R5是H，C(O)OR6，C(O)NHR6，R6C(O)，直连或支链C1-C6烷基，烷基醇，烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)，烷基羧酸；C2-C6碳酸酯、脲、杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；
R6，R6’，和R6”独立地是H，C1-C6烷基，烷基醇，烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)，烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐；
此外，R1可以缺省且C-7直接与L连接，且R2，R3，X，C-10和C-9可以共同形成5-，6-或7-元杂环。
式(II)括号内的示例性化合物具有以下结构：
Figure GDA0003907478750000221
Figure GDA0003907478750000231
Figure GDA0003907478750000241
Figure GDA0003907478750000251
Figure GDA0003907478750000261
Figure GDA0003907478750000271
Figure GDA0003907478750000281
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中R6和R6’的定义与前文相同。
其中
Figure GDA0003907478750000291
是连接到式(II)的连接子L的连接点。
在另一个具体的实施例中，细胞结合分子-喜树碱类似物的偶联物具有式(III)的结构：
Figure GDA0003907478750000292
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中T是靶向或结合配体；L是可释放的连接子；n是1-30，m是1-10；
括号内是一种具有活性的喜树碱类似物，其中：
R1是直链或支链C1-C6烷基、烷氧基、烷基氨基(包括伯、仲、叔氨基或季铵)、氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氧基环烷基、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、氨基烷基羰基、氧基烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基醚、氨基烷基醚、氧基烷基酯、氨基烷基酯、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟；NH或O；
R2是NH、NR6、-N+R6R6’-、O、S、直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、氨基烷基醇、氨基烷基胺、氧基烷基醇、氧基烷基胺、氨基烷基、氧基烷基或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；氧基烷基醚、氨基烷基醚、氧基烷基酯、氨基烷基酯、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺；
R3是H、R6NHC(O)、R6OC(O)、SO2R6、SO3R6、PR6R6’、POR6R6’、CH2OP(O)(OR6)2、C(O)OP(O)(OR6)2、PO(OR6)(OR6’)、P(O)(OR6)OP(O)(OR6’)2、R6C(O)、C(O)N R6R6’；直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；C5～C12糖苷；
R4是卤素(F、Cl、Br、或I)、CN、NO2、SO3H、OR6、SR6、S(O2)R6、NHR6、N(R6)(R6’)、C(O)XR6、N+(R6)(R6’)(R6”)；
X是NH或O；
R5是H、C(O)OR6、C(O)NHR6、R6C(O)、直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、烷基羧酸；C2-C6碳酸酯、尿素、杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；
R6、R6’、和R6”独立地是H、C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐；
此外，R2独立地缺省且C-9直接与L连接，且R2、R3、X、C-10和C-9可以共同形成5-、6-或7-元杂环。
式(III)括号内的示例性化合物具有以下结构：
Figure GDA0003907478750000301
Figure GDA0003907478750000311
Figure GDA0003907478750000321
Figure GDA0003907478750000331
Figure GDA0003907478750000341
Figure GDA0003907478750000351
Figure GDA0003907478750000361
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中R6，和R6’独立地是H、C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐；
在另一个实施例中，细胞结合分子-喜树碱类似物的偶联物具有式(IV)：
Figure GDA0003907478750000362
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中T是靶向或结合配体；L是可释放的连接子；n为1-30且m为1-10；
括号内是一种有效喜树碱类似物，其中：
R1和R2独立地是H、NR6R6’、-N+R6R6’R6”、OH、SH、C1-C6直链或支链烷基、烷氧基、烷基氨基(包括伯、仲、叔氨基或季铵)、氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氧基环烷基、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、氨基烷基羰基、氧基烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基醚、氨基烷基醚、氧基烷基酯、氨基烷基酯、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟；NH2或OH；
R3独立地是-NHC(O)-、-C(O)-、SO2-、-SO2NH-、-NR6SO2-、R6NHC(O)、R6OC(O)、SO2R6、SO3R6、PR6R6’、POR6R6’、CH2OP(O)(OR6)2、C(O)OP(O)(OR6)2、PO(OR6)(OR6’)、P(O)(OR6)OP(O)(OR6’)2、R6C(O)、C(O)N R6R6’；直连或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯胺、仲胺、叔胺)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；
R4是卤素(F、Cl、Br、或I)、CN、NO2、SO3H、OR6、SR6、S(O2)R6、NH(R6)S(O2)R6’、N(R6)(R6’)、C(O)XR6、N+(R6)(R6’)(R6”)；
X是NH或O；
R5是H、C(O)OR6、C(O)NHR6、R6C(O)、直连或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、烷基羧酸；C2-C6碳酸酯、尿素、杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；
R6、R6’、和R6”独立地是H、C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐；
在另一个实施例中，R3独立地缺省且C-10的X直接与L连接，且R2、R3、X、C-10和C-9可以共同形成5-、6-或7-元杂环。
式(IV)括号内的示例性化合物具有以下结构：
Figure GDA0003907478750000371
Figure GDA0003907478750000381
Figure GDA0003907478750000391
Figure GDA0003907478750000401
Figure GDA0003907478750000411
Figure GDA0003907478750000421
Figure GDA0003907478750000431
Figure GDA0003907478750000441
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；其中
Figure GDA0003907478750000442
R6和R6’的定义如前文所述；
在另一个实施例中，细胞结合分子-喜树碱类似物的偶联物具有式(V)的结构：
Figure GDA0003907478750000443
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中T是靶向或结合配体；L是可释放的连接子；n为1-30，m为1-10；
括号内是一种具有活性的喜树碱类似物，其中：
R1和R2独立地是H、NR6R6’、-N+R6R6’R6”、OH、SH、直链或支链C1-C6烷基、烷氧基、烷基氨基(包括伯、仲、叔氨基或季铵)、氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氧基环烷基、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、氨基烷基羰基、氧基烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基醚、氨基烷基醚、氧基烷基酯、氨基烷基酯、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟；NH2或OH；
R3独立地是R6NHC(O)-、R6C(O)-、R6SO2、-SO2NHR6、R6OC(O)、R6’SO2R6-、SO3R6、PR6R6’、POR6R6’、CH2OP(O)(OR6)2、C(O)OP(O)(OR6)2、PO(OR6)(OR6’)、P(O)(OR6)OP(O)(OR6’)2、R6C(O)、C(O)N R6R6’；直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯胺、仲胺、叔胺)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；
R4是卤素(F、Cl、Br、or I)、CN、NO2、SO3H、OR6、SR6、S(O2)R6、NH(R6)S(O2)R6’、N(R6)(R6’)、C(O)XR6、N+(R6)(R6’)(R6”)；
X是NH或O；
R5是C(O)O、C(O)NH、R6C(O)、直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、烷基羧酸；C2-C6碳酸酯、尿素、杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；
R6、R6’、和R6”独立地是H、C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐；
此外、R5独立地缺省且C-20的O直接与L连接，且R2、R3、X、C-10和C-9可以共同形成5-、6-或7-元杂环。
式(V)括号内的示例性化合物具有以下结构：
Figure GDA0003907478750000451
Figure GDA0003907478750000461
Figure GDA0003907478750000471
Figure GDA0003907478750000481
Figure GDA0003907478750000491
Figure GDA0003907478750000501
Figure GDA0003907478750000511
Figure GDA0003907478750000521
Figure GDA0003907478750000531
Figure GDA0003907478750000541
Figure GDA0003907478750000551
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；其中
Figure GDA0003907478750000552
R6和R6’如前文所定义；
在另一个实施例中，合成制备喜树碱类似物及它们与本发明的细胞表面受体结合分子的偶联物的路线，包括但不限于图1-32所示。
在另一个实施例中，可释放的连接子(L)是由选自C、N、O、S、Si和P等原子构成的链状结构，共价连接细胞表面结合配体(T)与有效的喜树碱类似物。连接子可具有多种长度，例如在约2至约100个原子的范围内。用于形成连接子的原子可以以任何化学方式组合，例如形成亚烷基，亚烯基和亚炔基，醚，聚氧化烯，酯，胺，亚胺，多胺，肼，酰胺，脲，氨基脲，卡巴脲，烷氧基胺，氨基甲酸酯，氨基酸，酰氧基胺，异羟肟酸等。另外，应当注意到的是，形成可释放的连接子(L)的原子可以是饱和的或不饱和的，或者可以是自由基，或者可以彼此成环以形成二价环状结构，包括环烷烃，环状醚，环胺，亚芳基，杂亚芳基等。
术语“可释放的连接子”是指连接子上包含至少一个可在生理条件下被破坏的键，例如pH、酸、碱、氧化作用、代谢、生化或酶不稳定的键。应当理解，导致键断裂不一定是生物或代谢过程、而可能是一个化学反应、例如水解或取代反应，这种生理条件的例子有：pH值比细胞浆内pH低的内涵体，恶性细胞内存在的毫摩尔浓度的大量谷胱甘肽，它能够与细胞内硫醇发生二硫键交换反应；
偶联物的可释放连接子L可以具有下式的结构：--Ww-(Aa)r-Vv--；其中：--W--是延展体单元；w是0或1；每个-Aa-独立地是一个氨基酸单元；r独立地是0至12的整数；--V--是一个间隔体单元；v为0、1或2。
当延展体—Ww—存在时，它起着连接着细胞结合分子(T)和氨基酸单元—Aa—或者间隔体—V—(当—Aa—不存在时)的作用。延展体W中可以独立地包含自毁灭间隔体，肽单元，腙键，二硫键或硫醚键。此时，细胞结合分子(T)含有一个能够与延展体上相应功能团成键的基团。在细胞结合分子上固有或通过化学方式产生的用于连接的功能团，包括但不限于：巯基，氨基，羟基，羰基，糖的异头羟基，以及羧基等，优选的功能团为巯基，羧基和氨基。巯基可以通过还原细胞结合分子(如抗体)分子内的双硫键生成。巯基也可以通过细胞结合分子中赖氨酸的氨基与2-亚氨基硫烷(Traut试剂)或者硫内酯或者其他的巯基生成试剂反应产生，比如先用含双硫键的连接子或硫酯修饰细胞结合分子，再分别通过还原或水解生成巯基。
连接在T上的W的例子如下所示：
Figure GDA0003907478750000561
Figure GDA0003907478750000571
Figure GDA0003907478750000581
Figure GDA0003907478750000582
其中R20、R21选自–C1-C9亚烷基-、-C1-C7碳环-、-O-(C1-C8烷基)-、-亚芳基-、-C1-C9亚烷基-亚芳基-、-亚芳基、-C1-C9亚烷基-、-C1-C9亚烷基-(C1-C8碳环)-、-(C3-C7碳环)-C1-C9亚烷基-、-C3-C8杂环基、-C1-C10亚烷基-(C3-C8杂环)-、-(C3-C8杂环)-C1-C9亚烷基-、-(CH2CH2O)k-、-(CH(CH3)CH2O)k-和-(CH2CH2O)k-CH2-；k是1-20的整数；R’和R’'独立地为H或CH3。
在另一个实施例中，如上所述的W与T的共价连接可以通过各种化学反应实现。
酰胺键形成的示例如下：
Figure GDA0003907478750000591
其中延展体单元含有一个活性反应位点E，E可以与细胞结合分子上的伯胺或仲胺反应生成酰胺键。E的例子包括但不限于，羟基琥珀酰亚胺酯(NHS和S-NHS等)，4-硝基苯基酯，五氟苯基酯，四氟苯基酯(包括S-四氟苯基酯)，酸酐，酰氯，磺酰氯，异氰酸酯和异硫氰酸酯等。
用硫醚或双硫键连接的示例：
Figure GDA0003907478750000592
其中延展体单元含有一个能够与巯基反应的位点，可以和细胞结合分子T之间形成硫醚或双硫键。为形成双硫键，细胞结合分子T上的巯基既可以通过还原分子内双硫键生成，也可以通过其他化学过程修饰细胞结合分子T而生成。
在本发明的另一个方面，延展体上也可以有一个能够与醛基(-CHO)或酮基(-C(＝O)R)反应的活性基团，以修饰细胞结合分子上的醛基或酮基。比如，细胞结合分子T的糖，通过用氧化剂例如高碘酸钠氧化就可以生成醛基或酮基。再比如，抗体(或蛋白质或多肽)N端氨基酸上的胺可以和5-磷酸吡哆醛(PLP)反应，而引入酮基(Scheck&Francis，ACSChem.Biol.2007，2，247-251)。这些醛基或酮基(-C＝O)可以和延展体上的活性反应基团例如酰肼，肟，伯胺或仲胺，肼，缩氨基硫脲，肼羧酸酯或芳基肼反应，从而将二者连接在一起。
用腙，肟或亚胺连接的示例如下：
Figure GDA0003907478750000601
其中R20和R21的定义如前所述，R25指一个氨基酸的取代基。
另外本发明另一方面，延展体(可以含有一个隔离体V和/或一个氨基酸)可以先和细胞结合分子T链接，然后再将这个细胞结合分子-延展体片段与一个喜树碱类似物共轭连接，连接过程可以在缓冲水溶液里进行。下面是一些按照这种方式分两步偶联的例子(连接在R16上的药物被省略)：
Figure GDA0003907478750000602
Figure GDA0003907478750000611
其中E包括但不仅限于，羟基琥珀酰亚胺酯(NHS和S-NHS等)，4-硝基苯基酯，五氟苯基酯，四氟苯基酯(包括S-四氟苯基酯)，酸酐，酰氯，磺酰氯，异氰酸酯和异硫氰酸酯等。R’和R”分别为H或CH3；R20，R16和Ar的定义同前文；R26为H，F或NO2；J为F，Cl，Br，I，甲苯磺酸酯基(TsO)或甲磺酸酯基(MsO)，其中
Figure GDA0003907478750000612
含有至少一个喜树碱类似物，如
Figure GDA0003907478750000613
所示。
本发明另一方面，延展体也可以先和喜树碱类似物连接，然后再与细胞结合分子T在pH为3 -10(优选为5.0-8.5)的缓冲水溶液(可含有上限至50％的有机溶剂)中偶联。这种两步偶联的示例为：
Figure GDA0003907478750000614
Figure GDA0003907478750000621
其中E包括但不仅限于，羟基琥珀酰亚胺酯(NHS和S-NHS等)、4-硝基苯基酯、五氟苯基酯、四氟苯基酯(包括S-四氟苯基酯)、酸酐、酰氯、磺酰氯、异氰酸酯和异硫氰酸酯等。R’和R”分别为H或CH3；R20、R16和Ar的定义同前文；R26为H、F或NO2；J为F、Cl、Br、I、甲苯磺酸酯基(TsO)或甲磺酸酯基(MsO)，其中
Figure GDA0003907478750000622
含有至少一个喜树碱类似物。
当氨基酸单元(--Aa--)存在时，隔离体存在时，它连接延展体和隔离体，隔离体缺失时，它连接延展体和喜树碱类似物，如果延展体和隔离体都缺失时，它直接连接细胞结合分子T和喜树碱类似物。--(Aa)r—可以是天然或非天然氨基酸，可以是二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或者十二肽单元，r为0-12之间的整数。在这里，氨基酸一般地指氨基烷基羧酸，其中烷基可以是被诸如烷基，酰基，羟烷基，巯烷基，氨烷基或羧烷基等基团取代的烷基。天然及非天然氨基酸和多肽的结构在G.C.Barrett和D.T.Elmore所著的《Amino Acid and Peptides》(Cambridge University Press，2004)书里有详细说明。另外，氨基酸也指β氨基酸，γ氨基酸和分子内含有甲基、苄基、羟甲基、巯甲基、羧基、羧甲基或胍基丙基等的长链氨基酸。优选的氨基酸为精胺酸、天冬酰胺酸、天冬氨酸、瓜氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、谷氨酸、亮氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸等。
氨基酸单元可以被一种或多种酶，包括在肿瘤相关蛋白水解酶，所酶解而释放出喜树碱类似物。在一实施例中，喜树碱类似物被释放后在体内被质子化。
当隔离体(-V-)存在时，氨基酸单元存在时，它连接氨基酸单元和喜树碱类似物，氨基酸单元缺失时，它连接延伸体和喜树碱类似物。当氨基酸单元和延伸体都缺失时，隔离体连接喜树碱类似物和细胞结合分子T。隔离体中可以包含一些功能团，以提高偶联物的水溶性，生物传送，获得适宜的肾清除，摄入，吸收，生物分布，以及生物利用度。隔离体有两种基本类型：自毁灭型和非自毁灭型。非自毁灭型隔离体指喜树碱类似物-连接子-细胞结合分子或喜树碱类似物-连接子的氨基酸单元断裂(特别是酶解之后)，部分或全部的隔离体仍然连接在喜树碱类似物上。自毁灭型包括电子结构类似对氨基苄基氨基甲酰基(PAB)的芳香族化合物，2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物，杂环PAB衍生物，β-葡糖醛酸，邻或对氨基苄基缩醛，或以下结构之一：
Figure GDA0003907478750000631
Figure GDA0003907478750000632
(*)标记的原子是隔离体，可释放的连接子单元，喜树碱类似物或细胞结合分子T的连接点；X、Y和Z3独立地为NH，O或S；Z2独立地为H、NH、O或S；v为0或1；Q独立地为H，OH，C1～C6烷基、(OCH2CH2)n、F、Cl、Br、I、OR17、SR17、NR17R18、N＝NR17、N＝R17、NR17R18、NO2、SOR17R18、SO2R17、SO3R17、OSO3R17、PR17R18、POR17R18、PO2R17R18、OPO(OR17)(OR18)、OCH2PO(OR17)(OR18)，其中R17和R18独立地为H，C1-C8烷基，C2-C8烯烃基、炔烃基、杂烷基，C3-C8芳基、杂环基、碳环基、环烷基、杂环烷基、杂芳烷基、烷羰基或药用的正离子盐；v是1-20的整数。
非自我毁灭间隔体(-V-)的例子：
Figure GDA0003907478750000633
Figure GDA0003907478750000641
Figure GDA0003907478750000651
Figure GDA0003907478750000652
6-马来酰亚胺己酰基(MC)，
Figure GDA0003907478750000653
马来酰亚胺丙酰基(MP)，
Figure GDA0003907478750000654
缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)，
Figure GDA0003907478750000655
丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)，
Figure GDA0003907478750000656
赖氨酸-苯丙氨酸(lys-phe)，
Figure GDA0003907478750000657
对氨基芐氧基-羰基(PAB)，
Figure GDA0003907478750000658
4-硫代戊酸基(SPP)，
Figure GDA0003907478750000659
4-硫丁酰基(SPDB)，
Figure GDA00039074787500006510
4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1酰基(MCC)，
Figure GDA00039074787500006511
马来酰亚胺乙基(ME)，
Figure GDA00039074787500006512
4-硫-2-羟基磺酰基-丁酰基(2-Sulfo-SPDB)，
Figure GDA00039074787500006513
芳基硫醇(PySS)，(4-乙酰基)氨基苯酰基(SIAB)，
Figure GDA00039074787500006514
氧基苄硫基，
Figure GDA00039074787500006515
氨基苄硫基，
Figure GDA0003907478750000661
二氧基苄硫基，
Figure GDA0003907478750000662
二氨基苄硫基，
Figure GDA0003907478750000663
氨基氧基苄基硫醚基，
Figure GDA0003907478750000664
烷氧基氨基(AOA)，
Figure GDA0003907478750000665
亚乙基氧基(EO)，
Figure GDA0003907478750000666
4-甲基-4-二硫代戊酸(MPDP)，
Figure GDA0003907478750000667
三唑，
Figure GDA0003907478750000668
二硫基，
Figure GDA0003907478750000669
烷基磺酰基
Figure GDA00039074787500006610
烷基磺酰胺，
Figure GDA00039074787500006611
磺基双酰胺，
Figure GDA00039074787500006612
膦二酰胺，
Figure GDA00039074787500006613
烷基膦酰胺，
Figure GDA00039074787500006614
次膦酸，
Figure GDA00039074787500006615
N-甲基膦酰胺酸，
Figure GDA00039074787500006616
N，N'-二甲基膦酰胺酸，
Figure GDA00039074787500006617
N，N'-二甲基膦二酰胺，
Figure GDA00039074787500006618
肼，
Figure GDA00039074787500006619
乙脒；
Figure GDA00039074787500006620
肟，
Figure GDA00039074787500006621
二乙酰肼，
Figure GDA00039074787500006622
氨基乙基胺，
Figure GDA00039074787500006623
氨基乙基-氨基乙基胺，
Figure GDA00039074787500006624
Figure GDA00039074787500006625
Figure GDA0003907478750000671
或L-或D-，或含有1-20个氨基酸的天然或非天然肽；
其中“*”和
Figure GDA0003907478750000672
是间隔体或可释放的连接子，喜树碱类似物和/或结合分子的连接点；m为1～10；n为1～20；X2、X3、X4、X5或X6独立地选自NH、NHNH、N(R12)、N(R12)N(R12’)、O、S、C1-C6烷基，C2-C 6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8芳基、Ar-烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基；CH2OR12、CH2SR12、CH2NHR12或1～8个氨基酸；其中R12和R12’独立地为H、C1-C8烷基；C2-C8杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8芳基、Ar-烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基、1-8个碳原子的酯、醚或酰胺；或如式(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p的聚环氧乙烷单元，其中p为0至约1000的整数，或它们的组合。
可断裂连接子L中包含至少一个在生理条件下被破坏的键或pH、酸、碱、氧化作用、代谢、生化或酶不稳定的键，其具有以下结构之一：
-(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n(OCH2CH2)t-，-(CR15R16)m(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-，-(Aa)r-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)t-，-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-，-(CR15R16)m-(CR17＝CR18)(CR19R20)n(Aa)t(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(Aa)t(NR21CO)(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(OCO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2-CH2)r-，-(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m-(CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(NR21CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(OCO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m-(CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m-苯基-CO(Aa)t-(CR17R18)n-，-(CR15R16)m-呋喃-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-(CR15R6)m-恶唑-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-(CR15R16)m噻唑基CO-(Aa)t(CCR17R18)n-，-(CR15R16)t-噻吩-CO(CR17R18)n-，-(CR15R16)t-咪唑-CO-(CR17R18)n-，-(CR15R16)t-吗啉-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-(CR15R16)t-呱嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-(CR15R16)tN-甲基呱嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-(CR15R16)m-(Aa)t苯基-，-(CR15R16)m-(Aa)tfuryl-，-(CR15R16)m-恶唑(Aa)t-，-(CR15R16)m-噻唑基(Aa)t-，-(CR15R16)m-噻吩-(Aa)t-，-(CR15R16)m-咪唑(Aa)t-，-(CR15R16)m-吗啉-(Aa)t-，-(CR15R16)m-呱嗪-(Aa)t-，-(CR15R16)m-N-甲基呱嗪-(Aa)t-，-K(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n(OCH2CH2)t-，-K-(CR15R16)m(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-，-K(Aa)r-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)t-，-K-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-，-K(CR15R16)m(CR17＝CR18)(CR19R20)n(Aa)t(OCH2-CH2)r，-K(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR5R6)m(Aa)t(NR21CO)-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m-(OCO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m(O-CNR17)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m(CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m(NR21CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m-(OCO)(Aa)t(CR19R20)n(O-CH2CH2)r-，-K(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K-(CR15R16)m(CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m-苯基-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-K-(CR15R16)m-furyl-CO-(Aa)t(CR17R18)n-，-K(CR15R16)m-恶唑-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-K(CR15R16)m-噻吩-CO(Aa)t-(CR17R18)n-，-K(CR15R16)t-噻吩-CO(CR17R18)n-，-K(CR15R16)t咪唑-CO-(CR17R18)n-，-K-(CR5R6)t吗啉-CO(Aa)t-(CR17R18)n-，-K(CR15R16)t-呱嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-K-(CR15R16)t-N-甲基呱嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-K(CR15R16)m(Aa)t苯基，-K(CR15R16)m-(Aa)t呋喃-，-K(CR15R16)m-恶唑-(Aa)t-，-K(CR15R16)m-噻吩(Aa)t-，-K(CR15R16)m-噻吩-(Aa)t-，-K(CR15R16)m-咪唑(Aa)t-，-K(CR15R16)m-吗啉(Aa)t-，-K(CR15R16)m呱嗪(Aa)tG，-K(CR5R6)m-N-甲基-呱嗪(Aa)t-；其中Aa，m，n，在前文已有定义；t和r独立地为0–100；R13，R14，R15，R16，R17，R18，R19，R20，何R21独立地选自H；卤素；C1～C8烷基或杂烷基，C2～C8芳基、烯基、炔基、醚、酯、胺或酰胺，C3～C8芳基，这些基团均可以被以下成分所取代：一个或多个卤素，CN，NR12R12’，CF3，OR12，Aryl，杂环，S(O)R12，SO2R12，-CO2H，-SO3H，-OR12，-CO2R12，-CONR12，-PO2R12R13，-PO3H或P(O)R12R12’R13；K是NH，NR12，-SS-，-C(＝O)-，-C(＝O)NH-，-C(＝O)O-，-C＝NH-O-，-C＝N-NH-，-C(＝O)NH-NH-，O，S，Se，B，Het(具有C3-C12的杂环或杂芳环)；或含有相同或不同的1-20个氨基酸的肽。
在本发明的另一方面，连接子L优选含有氨基、磺酰胺、磷酰胺或氨基酸基团，其中式(Iq)可以作为支链连接至连接子L。连接子L中的氨基酸优选自天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、鸟氨酸或酪氨酸，其中的官能团如氨基、羧基或苯氧基中的一个或两个可以连接如式(I-q)的长支链：
Figure GDA0003907478750000691
其中
Figure GDA0003907478750000692
是与连接子中的磺酰基、磷酸酯、氨基或羰基相连的位点，优选连接至天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、鸟氨酸或酪氨酸的羰基、氨基或苯氧基；G1是NH、NHNH、C(＝O)、NHNHC(O)、C(＝O)NH、C(＝NH)NH、CH2、CH2C(O)、C(O)O、NHC(O)NH或(Aa)r、(r＝1-12)；G2是NH、NHNH、C(＝O)、NHNHC(O)、C(＝O)NH、C(＝NH)NH、CH2、C(O)O、NHC(O)NH、O、S、B、P(O)(OH)、NHP(O)(OH)、NHP(O)(OH)NH、CH2P(O)(OH)NH、OP(O)(OH)O、CH2P(O)(OH)O、NHS(O)2、NHS(O)2NH、CH2S(O)2NH、OS(O)2O、CH2S(O)2O、Ar、ArCH2、ArO、ArNH、ArS、ArNR1、(Aa)r、(r＝1-12)；X1和X2独立地是O、CH2、S、NH、N(R12)、+NH(R12)、+N(R12)(R13)、C(O)、OC(O)、OC(O)O、NHSO2NH、NHP(O)(NH)2、SO2NH、P(O)(NH)2、NHS(O)NH、NHP(O)(OH)(NH)、OC(O)NH、NHC(O)NH；Y2是O、NH、NR1、CH2.S.Ar；G3是OH、SH、OR1、SR1、OC(O)R1、NHC(O)R12、C(O)R12、CH3、NH2、NR12、+NH(R12)、+N(R12)(R13)、C(O)OH、C(O)NH2、NHC(O)NH2、BH2、BR12R13、P(O)(OH)2、NHP(O)(OH)2、NHP(O)(NH2)2、S(O)2(OH)、(CH2)q1C(O)OH、(CH2)q1P(O)(OH)2、C(O)(CH2)q1C(O)OH、OC(O)(CH2)q1C(O)OH、NHC(O)(CH2)q1C(O)OH、CO(CH2)q1P(O)(OH)2、NHC(O)O(CH2)q1-C(O)OH、OC(O)NH-(CH2)q1C(O)OH、NHCO(CH2)q1P(O)(OH)2、NHC(O)(NH)(CH2)q1C(O)OH、CONH(CH2)q1P(O)(OH)2、NHS(O)2(CH2)q1C(O)OH、CO(CH2)q1S(O)2(OH)、NHS(O)2NH-(CH2)q1C(O)OH、OS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH、NHCO(CH2)q1S(O)2(OH)、NHP(O)(OH)(NH)-(CH2)q1C(O)OH、CONH(CH2)q1S(O)(OH)、OP(O)(OH)2、(CH2)q1P(O)(NH)2、NHS(O)2(OH)、NHS(O)2NH2、CH2S(O)2NH2、OS(O)2OH、OS(O)2OR1、CH2S(O)2OR1、Ar、ArR12、ArOH、ArNH2、ArSH、ArNHR12、或(Aa)q1；p1、p2和p3独立地是0-30但不同时为0；q1和q2独立地为0-24；优选地，G3是直链或支链的C2-C50聚羧酸或C-2-C50聚烷基胺、C6-C90寡糖或多糖、C6-C50含季铵阳离子和羧酸阴离子的两性离子或含季铵阳离子和磺酸阴离子的两性离子(PSB)、可生物降解的聚合物，如聚乳酸/乙醇酸(PLGA)、聚(丙烯酸酯)、脱乙酰壳多糖、N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺的共聚物、聚[2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酸胆碱](PMPC)、聚-L-谷氨酸、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚(乙二醇)(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、聚(乙二醇)改性肽、聚(乙二醇)改性脂质体、聚(乙二醇)改性烷基羧酸、聚(乙二醇)改性烷基胺、透明质酸(HA)(糖胺聚糖)、肝素或硫酸乙酰肝素(HSGAG)、硫酸软骨素或硫酸皮素(CSGAG)、聚(乙二醇)改性的烷基硫酸盐、聚(乙二醇)改性的烷基磷酸盐或聚(乙二醇)改性的烷基季铵盐。
更优选地，式(I-q)选自：
Figure GDA0003907478750000701
Figure GDA0003907478750000711
其中G1、p1、p2、p3、Aa、r、X2、q1、m1与前文定义相同。
另一方面，本发明的结合分子(T)可以是目前已知的或即将公开的，能够与具有治疗意义或者可以被生物学方式修饰的细胞的部分相结合、复合或反应的任何种类的分子。结合分子的作用是将喜树碱类似物递送至与结合分子(T)反应的特定靶细胞群。
在本发明的另一个方面，CPT衍生物与细胞结合分子的偶联物具有如下式(IIq-1)、(IIq-2)、(IIq-3)、(IIq-4)、(IIq-5)，(IIq-6)，(IIq-7)，(IIq-8)的结构：
Figure GDA0003907478750000712
Figure GDA0003907478750000721
Figure GDA0003907478750000731
其中R'和R”独立地为H、Me、Et、iPr、iBu、Bz(CH2C6H5)、CH2COOH、CH2CH2COOH、CH2CONH2、CH2CH2CONH2、CH2CH2CH2CH2NH2、CH2CH2SCH3、CH2OH、CH2CH2CH2NHC(＝NH)NH2、CH(OH)CH3、CH2C6H4OH、CH2C3N2H3；p1和p2独立地是0～24；q1是1～18；q3是0～6；q4是0～4；m’和m”独立地为0～6；m”’是0或1；mAb是细胞结合分子，优选为抗体；NH-药物是上面列出的化合物II-1～II-61、III-1～III-51、IV-1～IV-47和V-1～V-61；n是1～20；
Figure GDA0003907478750000732
是与NH-Drug连接的位点。
如式(IIq-1)、(IIq-2)、(IIq-3)、(IIq-4)、(IIq-5)、(IIq-6)、(IIq-7)、(IIq-8)的偶联物是通过如下式(IIq-9)、(IIq-10)、(IIq-11)、(IIq-12)、(IIq-13)、(IIq-14)、(IIq-15)、(IIq-16)与含有硫基的细胞结合分子反应而制备：
Figure GDA0003907478750000741
Figure GDA0003907478750000751
其中R'和R”独立地为H、Me、Et、iPr、iBu、Bz(CH2C6H5)、CH2COOH、CH2CH2COOH、CH2CONH2、CH2CH2CONH2、CH2CH2CH2CH2NH2、CH2CH2SCH3、CH2OH、CH2CH2CH2NHC(＝NH)NH2、CH(OH)CH3、CH2C6H4OH、CH2C3N2H3；p1和p2独立地是0～24；q1是1～18；q3是0～6；q4是0～4；m’和m”独立地是0～6；m”’是0或1；NH-Drug是如上所列的化合物II-1～II-61，III-1～III-51，IV-1～IV-47，和V-1～V-61；
Figure GDA0003907478750000752
是与NH-Drug连接的位点。
蛋白质，特别是抗体中的游离硫基可以通过还原蛋白质的链间二硫原子而生成，还原剂选自二硫苏糖醇(DTT)，二硫赤藓糖醇(DTE)，L-谷胱甘肽(GSH)，三(2-羧乙基)膦(TCEP)，2-巯基乙胺(β-MEA)，或/和β巯基乙醇(β-ME，2-ME)，反应在pH5.0～8.5.缓冲液中进行。用TCEP还原蛋白质的两个或多个二硫键可以在与式(IIq-9)、(IIq-10)、(IIq-11)、(IIq-12)、(IIq-13)、(IIq-14)、(IIq-15)、或(IIq-16)发生偶联反应之前或同时进行。硫基也可以通过蛋白质上的氨基(赖氨酸残基)与Traut试剂(2-亚氨基硫烷)或γ-硫代丁内酯反应生成。蛋白质与同Traut试剂(2-亚氨基硫杂环戊烷)或γ-硫代丁内酯化合物反应可以与同式(IIq-9)、(IIq-10)、(IIq-11)、(IIq-12)、(IIq-13)、(IIq-14)、(IIq-15)、或(IIq-16)的偶联反应在一锅中(同时)进行。
细胞结合剂T包括，但不仅限于，大分子量蛋白质，例如完整抗体(多克隆抗体，单克隆抗体)；单链抗体；抗体片段如Fab，Fab'，F(ab')2，Fv(Parham，J.Immunol.1983，131，2895-2902)，由Fab表达库产生的片段，抗独特型(抗-Id)抗体；CDR；上述任何抗体的表位结合片段，能免疫特异性结合癌细胞抗原，病毒抗原，微生物抗原；干扰素(如I，II，III型)；多肽；淋巴因子如IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，GM-CSF，干扰素-γ(IFN-γ)；激素例如胰岛素，TRH(促甲状腺激素释放激素)，MSH(促黑素细胞激素)，类固醇激素如雄激素和雌激素；生长因子和集落刺激因子，如表皮生长因子(EGF)，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，转化生长因子(TGF)，如TGFα，TGFβ，胰岛素和胰岛素样生长因子(IGF-I，IGF-II)，G-CSF，M-CSF和GM-CSF(Burgess，Immunology Today 1984，5，155-158)；牛痘生长因子(VGF)；成纤维细胞生长因子(FGF)；小分子量的蛋白质；多肽；肽和肽激素，如铃蟾肽，胃泌素，胃泌素释放肽；血小板衍生的生长因子；白细胞介素和细胞因子，例如，白细胞介素-2(IL-2)，白细胞介素-6(IL-6)，白血病抑制因子，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)；维生素，如叶酸；脱辅基蛋白和糖蛋白，如转铁蛋白(O'Keefe等，J.Biol.Chem.1985 260 932-937)；糖结合蛋白或脂蛋白，如凝集素；细胞营养传递分子；小分子抑制剂，如前列腺特异性膜抗原(PSMA)抑制剂和小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，非肽或任何其它细胞结合分子或物质，如生物活性聚合物(Dhar，等，Proc.Natl.Acad.Sci.2008，105，17356-61)，生物活性树状聚合物(Lee，等，Nat.Biotechnol.2005，23，1517-26；Almutairi，等；Proc.Natl.Acad.Sci.2009，106，685-90)，纳米颗粒(Liong，等，ACS Nano，2008，19，1309-12；Medarova，等，Nat.Med.2007，13，372-7；Javier，等，Bioconjugate Chem.2008，19，1309-12)，脂质体(Medinai，等，Curr.Phar.Des.2004，10，2981-9)和病毒外壳(Flenniken，等，Viruses Nanotechnol.2009，327，71-93)。一般而言，如果适当的单克隆抗体是可用的，则优选单克隆抗体作为细胞表面结合剂。
优选地，T选自抗体，单链抗体、与靶细胞结合的抗体片段、单克隆抗体、单链单克隆抗体、或结合靶细胞的单克隆抗体片段、或嵌合抗体、与靶细胞结合的嵌合抗体片段、域抗体、与靶细胞结合的域抗体片段、模拟抗体的adnectins、DARPins、淋巴因子、激素、维生素、生长因子、菌落刺激因子、营养转运分子(转铁蛋白)、在白蛋白、聚合物、树状聚合物、脂质体、纳米颗粒、囊泡或(病毒)衣壳上连接的细胞结合多肽、蛋白质或小分子。
更优选地，细胞结合剂/分子T能够抗以下细胞：肿瘤细胞、病毒感染细胞、微生物感染细胞、寄生虫感染细胞、自身免疫细胞、活化的肿瘤细胞、骨髓细胞、活化的T细胞、B细胞、或黑色素细胞或任何表达下列抗原或受体的某种疾病的细胞：CD1、CD1a、CD1b、CD1c、CD1d、CD1e、CD2、CD3、CD3d、CD3e、CD3g、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD8a、CD8b、CD9、CD10、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CD12w、CD13、CD14、CD15、CD16、CD16a、CD16b、CDw17、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD25、CD26、CD27、CD28、CD29、CD30、CD31、CD32、CD32a、CD32b、CD33、CD34、CD35、CD36、CD37、CD38、CD39、CD40、CD41、CD42、CD42a、CD42b、CD42c、CD42d、CD43、CD44、CD45、CD46、CD47、CD48、CD49b、CD49c、CD49c、CD49d、CD49f、CD50、CD51、CD52、CD53、CD54、CD55、CD56、CD57、CD58、CD59、CD60、CD60a、CD60b、CD60c、CD61、CD62E、CD62L、CD62P、CD63、CD64、CD65、CD65s、CD66、CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e、CD66f、CD67、CD68、CD69、CD70、CD71、CD72、CD73、CD74、CD75、CD75s、CD76、CD77、CD78、CD79、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CD84、CD85、CD85a、CD85b、CD85c、CD85d、CD85e、CD85f、CD85g、CD85g、CD85i、CD85j、CD85k、CD85m、CD86、CD87、CD88、CD89、CD90、CD91、CD92、CD93、CD94、CD95、CD96、CD97、CD98、CD99、CD100、CD101、CD102、CD103、CD104、CD105、CD106、CD107、CD107a、CD107b、CD108、CD109、CD110、CD111、CD112、CD113、CD114、CD115、CD116、CD117、CD118、CD119、CD120、CD120a、CD120b、CD121、CD121a、CD121b、CD122、CD123、CD123a、CD124、CD125、CD126、CD127、CD128、CD129、CD130、CD131、CD132、CD133、CD134、CD135、CD136、CD137、CD138、CD139、CD140、CD140a、CD140b、CD141、CD142、CD143、CD144、CD145、CDw145、CD146、CD147、CD148、CD149、CD150、CD151、CD152、CD153、CD154、CD155、CD156、CD156a、CD156b、CD156c、CD156d、CD157、CD158、CD158a、CD158b1、CD158b2、CD158c、CD158d、CD158e1、CD158e2、CD158f2、CD158g、CD158h、CD158i、CD158j、CD158k、CD159、CD159a、CD159b、CD159c、CD160、CD161、CD162、CD163、CD164、CD165、CD166、CD167、CD167a、CD167b、CD168、CD169、CD170、CD171、CD172、CD172a、CD172b、CD172g、CD173、CD174、CD175、CD175s、CD176、CD177、CD178、CD179、CD179a、CD179b、CD180、CD181、CD182、CD183、CD184、CD185、CD186、CDw186、CD187、CD188、CD189、CD190、CD191、CD192、CD193、CD194、CD195、CD196、CD197、CD198、CD199、CDw198、CDw199、CD200、CD201、CD202、CD202(a、b)、CD203、CD203c、CD204、CD205、CD206、CD207、CD208、CD209、CD210、CDw210a、CDw210b、CD211、CD212、CD213、CD213a1、CD213a2、CD214、CD215、CD216、CD217、CD218、CD218a、CD218、CD21b9、CD220、CD221、CD222、CD223、CD224、CD225、CD226、CD227、CD228、CD229、CD230、CD231、CD232、CD233、CD234、CD235、CD235a、CD235b、CD236、CD237、CD238、CD239、CD240、CD240ce、CD240d、CD241、CD242、CD243、CD244、CD245、CD246、CD247、CD248、CD249、CD250、CD251、CD252、CD253、CD254、CD255、CD256、CD257、CD258、CD259、CD260、CD261、CD262、CD263、CD264、CD265、CD266、CD267、CD268、CD269、CD270、CD271、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD277、CD278、CD279、CD281、CD282、CD283、CD284、CD285、CD286、CD287、CD288、CD289、CD290、CD291、CD292、CD293、CD294、CD295、CD296、CD297、CD298、CD299、CD300、CD300a、CD300b、CD300c、CD301、CD302、CD303、CD304、CD305、CD306、CD307、CD307a、CD307b、CD307c、CD307d、CD307e、CD307f、CD308、CD309、CD310、CD311、CD312、CD313、CD314、CD315、CD316、CD317、CD318、CD319、CD320、CD321、CD322、CD323、CD324、CD325、CD326、CD327、CD328、CD329、CD330、CD331、CD332、CD333、CD334、CD335、CD336、CD337、CD338、CD339、CD340、CD341、CD342、CD343、CD344、CD345、CD346、CD347、CD348、CD349、CD350、CD351、CD352、CD353、CD354、CD355、CD356、CD357、CD358、CD359、CD360、CD361、CD362、CD363、CD364、CD365、CD366、CD367、CD368、CD369、CD370、CD371、CD372、CD373、CD374、CD375、CD376、CD377、CD378、CD379、CD381、CD382、CD383、CD384、CD385、CD386、CD387、CD388、CD389、CRIPTO、CRIPTO、CR、CR1、CRGF、CRIPTO、CXCR5、LY64、TDGF1、4-1BB、APO2、ASLG659、BMPR1B、4-1BB、5AC、5T4(Trophoblast糖蛋白，TPBG，WNT-活化抑制因子1或WAIF1)，腺癌抗原，AGS-5，AGS-22M6，启动素受体激酶1，AFP，AKAP-4，ALK，α整合素，αvβ6，氨基肽酶N，淀粉样蛋白β，雄激素受体，促血管新生蛋白因子2，促血管新生蛋白因子3，膜联蛋白A1，炭疽毒素保护性抗原，抗转移蛋白受体，AOC3(VAP-1)，B7-H3，炭疽杆菌，BAFF(B细胞启动因子)，BCMA，B淋巴瘤细胞，bcr-abl，蛙皮素，BORIS，C5，C242抗原，CA125(糖抗原125，MUC16)，CA-IX(或CAIX，碳酸酐酶9)，CALLA，CanAg，犬红斑狼疮IL31，碳酸酐酶IX，心肌肌凝蛋白，CCL11(C-C片段趋化因子11)，CCR4(C-C趋化因子受体4，CD194)，CCR5，CD3E(ε)，CEA(癌胚抗原)，CEACAM3，CEACAM5(癌胚抗原)，CFD(因子D)，Ch4D5，胆囊收缩素2(CCK2R)，CLDN18(Claudin-18)，CLDN18.1(Claudin-18.1)，CLDN18.2(Claudin-18.2)，丛生因子A，cMet，CRIPTO，FCSF1R(集落刺激因子1受体，CD115)，CSF2(集落刺激因子2，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF))，CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)，CTAA16.88肿瘤抗原，CXCR4(CD184)，C-X-C趋化因子受体4，环状ADP核糖核酸酶，细胞周期蛋白B1，CYP1B1，巨细胞病毒，巨细胞病毒糖蛋白B，Dabigatran，DLL3(类Δ配体3)，DLL4(类Δ配体4)，DPP4(双肽-肽酶4)，DR5(死亡受体5)，大肠杆菌shiga毒素类型-1，大肠杆菌shiga毒素类型-2，ED-B，EGFL7(类EGF结构域蛋白7)，EGFR，EGFRII，EGFRvIII，内皮因子，内皮素B受体，内毒素，EpCAM(上皮细胞粘附分子)，EphA2，Episialin，ERBB2(表皮生长因子受体2)，ERBB3，ERG(TMPRSS2 ETS融合基因)，大肠杆菌，ETV6-AML，FAP(成纤维细胞活化蛋白α)，FCGR1，甲胎蛋白，纤维蛋白IIβ链，纤连蛋白额外结构域-B，FOLR(叶酸受体)，叶酸受体α，叶酸水解酶，Fos相关抗原1，呼吸道合胞病毒的F蛋白，卷曲受体，岩藻糖GM1，GD2神经节苷脂，G-28(细胞表面抗原糖脂)，GD3独特型，GloboH，Glypican 3，N-羟乙酰神经氨酸，GM3，GMCSF受体α链，生长分化因子，GP100，GPNMB(跨膜糖蛋白NMB)，GUCY2C(鸟苷酸环化酶2C)，鸟苷酸环化酶C(GC-C)，肠鸟苷酸环化酶，鸟苷酸环化酶C受体，热稳定肠毒素受体(hSTAR)，热休克蛋白，血凝素，乙肝表面抗原，乙型肝炎病毒，HER1(人类表皮生长因子受体1)，HER2，HER2/neu，HER3(ERBB-3)，IgG4，HGF/SF(肝细胞生长因子/分散因子)，HHGFR，HIV-1，组蛋白复合物，HLA-DR(人类白细胞抗原)，HLA-DR10，HLA-DRB，HMWMAA，人类绒毛膜促性腺激素，HNGF,人类分散因子受体激酶，HPV E6/E7，Hsp90，hTERT，ICAM-1(细胞间粘附分子1)，独特型，IGF1R(IGF–1，类胰岛素生长因子1受体)，IGHE，IFN-γ，流感血凝素，IgE，IgE Fc区，IGHE，白介素(包括IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-6R，IL-7，IL-8，IL-9，IL-10，IL-11，IL-12，IL-13，IL-15，IL-17，IL-17A，IL-18，IL-19，IL-20，IL-21，IL-22，IL-23，IL-27，IL-28)，IL31RA，ILGF2(类胰岛素生长因子2)，整合蛋白(α4、αIIbβ3、αvβ3、α4β7、α5β1、α6β4、α7β7、αllβ3、α5β5、αvβ5)，干扰素γ诱导蛋白质，ITGA2，ITGB2，KIR2D，Kapa Ig，LCK，Le，Legumain，Lewis-Y抗原，LFA-1(淋巴细胞功能相关抗原1，CD11a)，LHRH，LINGO-1，脂磷壁酸，LIV1A，LMP2，LTA，MAD-CT-1，MAD-CT-2，MAGE-1，MAGE-2，MAGE-3，MAGE A1，MAGE A3，MAGE 4，MART1，MCP-1，MIF(巨噬细胞迁移抑制因子，或糖基抑制因子(GIF))，MS4A1(跨膜4结构域亚家族A成员1)，MSLN(间皮素)，MUC1(粘蛋白1，细胞表面相关(MUC1)或多态性上皮粘蛋白(PEM))，MUC1-KLH，MUC16(CA125)，MCP1(单核细胞趋化蛋白1)，MelanA/MART1，ML-IAP，MPG，MS4A1(跨膜4域亚家族A)，MYCN，髓磷脂相关糖蛋白，Myostatin，NA17，NARP-1，NCA-90(粒细胞抗原)，Nectin-4(ASG-22ME)，NGF，神经细胞凋亡调控蛋白酶1，NOGO-A，Notch受体，核仁素，Neu致癌基因产物，NY-BR-1，NY-ESO-1，OX-40，OxLDL(氧化低密度脂蛋白)，OY-TES1，P21，p53非突变体，P97，PAP，抗(N-羟乙酰神经氨酸)抗体结合部位，PAX3，PAX5，PCSK9，PDCD1(PD-1、程序性细胞死亡蛋白1)，PDGF-Rα(α血小板源生长因子受体)，PDGFR-β，PDL-1，PLAC1，类PLAP睾丸碱性磷酸酶，血小板衍生生长因子受体β，磷酸钠联合转运体，PMEL 17，聚唾液酸，蛋白酶3(PR1)，前列腺癌，PS(磷脂酰丝氨酸)，前列腺癌细胞，铜绿假单胞菌，PSMA，PSA，PSCA，狂犬病病毒糖蛋白，RHD(Rh多肽1(RhPI))，Rhesus因子，RANKL，RhoC，Ras突变，RGS5，ROBO4，呼吸道合胞病毒，RON，ROR1，肉瘤易位断点，SART3，Sclerostin，SLAMF7(SLAM成员7)，Selectin P，SDC1(多配体蛋白聚糖1)，系统性红斑狼疮(a)，生长调节素C，SIP(1-磷酸鞘氨醇)，生长激素抑制素，精子蛋白17，SSX2，STEAP1(6-跨膜上皮前列腺抗原1)，STEAP2，STn，TAG-72(肿瘤相关糖蛋白72)，存活素，T细胞受体，T细胞跨膜蛋白，TEM1(肿瘤血管内皮标记1)，TENB2，Tenascin C(TN-C)，TGF-α，TGF-β(转化生长因子β)，TGF-β1，TGF-β2(转化生长因子2)，Tie(CD202b)，Tie2，TIM-1(CDX-014)，Tn，TNF，TNF-α，TNFRSF8，TNFRSF10B(肿瘤坏死因子受体超家族成员10B)，TNFRSF13B(肿瘤坏死因子受体超家族成员13B)，TPBG(滋养细胞糖蛋白)，TRAIL-R1(TNF相关坏死诱导配体受体1)，TRAILR2(死亡受体5(DR5))，肿瘤相关的钙信号传感子2，肿瘤特异的糖基化MUC1，TWEAK受体，TYRP1(糖蛋白75)，TRP-1(Trop1)，TRP-2(Trop2)，酪氨酸酶，VCAM-1，VEGF，VEGF-A，VEGF-2，VEGFR-1，VEGFR-2，vimentin，WT1，XAGE 1，表达胰岛素生长因子受体的细胞，或表达表皮生长因子受体的细胞。
在另一个具体实施例中，细胞结合分子可以是选自以下的配体或受体激动剂：叶酸衍生物(与叶酸受体结合、在卵巢癌和其他恶性肿瘤中超表达的蛋白质)(Low，PS等2008，Acc.Chem.Res.41，120-9)、谷氨酸脲衍生物(与前列腺特异性膜抗原结合、前列腺癌细胞的表面标志物)(Hillier，SM等，2009，Cancer Res.69，6932-40)；生长抑制素(也称为生长激素抑制激素(GHIH)或生长激素释放抑制因子(SRIF)或生长激素释放抑制激素)及其类似物，如奥曲肽(Sandostatin)和兰瑞肽(Somatuline)(特别是用于神经内分泌肿瘤，产生GH的垂体腺瘤、副神经节瘤、非功能性垂体腺瘤、嗜铬细胞瘤)(Ginj，M.，等，2006，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103，16436-41)，以下瘤中生长激素抑制素受体亚型(sst1、sst2、sst3、sst4和sst5)：分泌GH的垂体腺瘤(Reubi JC，L和olt，AM1984J.Clin.Endocrinol Metab 59：1148–51；Re ubi JC，L和olt AM 1987J ClinEndocrinol Metab 65：65–73；Moyse E，等，J Clin Endocrinol Metab 61：98–103)，胃肠胰腺肿瘤(Reubi JC，等，1987J Clin Endocrinol Metab 65：1127–34；Reubi，J.C，等，1990Cancer Res 50：5969–77)，嗜铬细胞瘤(Epel-baum J，等1995J Clin EndocrinolMetab 80：1837–44；Reubi J C等，1992J Clin Endocrinol Metab 74：1082–9)，神经母细胞瘤(Prevost G，1996Neuroendocrinology 63：188–197；Moertel，C.L，等1994Am J ClinPath 102：752–756)，甲状腺髓样癌(Reubi，J.C，等1991Lab Invest64：567–573)，小细胞肺癌(Sagman U，等，1990Cancer 66：2129–2133)，脑膜瘤、成神经管细胞瘤或胶质瘤(ReubiJC，等1986J Clin Endocrinol Metab 63：433–8；Reubi JC，等1987Cancer Res 47：5758–64；Fruhwald，M.C，等1999Pediatr Res 45：697–708)，乳腺癌(Reubi JC，等1990Int JCancer 46：416–20；Srkalovic G，等1990J Clin Endocrinol Metab 70：661–669)，淋巴瘤(Reubi JC，等1992，Int J Cancer50：895–900)，肾细胞癌(Reubi JC，等1992，Cancer Res52：6074–6078)，间充质肿瘤(Reubi JC，等1996Cancer Res 56：1922–31)，前列腺癌(ReubiJ C，等1995，J.Clin.Endocrinol Metab 80：2806–14；等1989，Prostate 14：191–208；Halmos G，等J.Clin.Endo-crinol Metab 85：2564–71)，卵巢癌(Halmos，G，等，2000J ClinEndocrinol Metab 85：3509–12；Reubi JC，等1991Am J Pathol 138：1267–72)，胃癌(Reubi JC，等1999，Int J Cancer 81：376–86；Miller，G.V，1992Br J Cancer 66：391–95)，肝癌(Kouroumalis E，等1998Gut 42：442–7；Reubi J C，等1999Gut 45：66–774)及鼻咽癌(Loh K.S，等，2002Virchows Arch 441：444–8)；芳香磺酰胺(碳酸酐酶IX特异性)(缺氧和肾细胞癌的标志物)(Neri，D.，等，Nat.Rev.Drug Discov.2011，10，767-7)；垂体腺苷酸环化酶启动肽(PACAP)(PAC1)(用于嗜铬细胞瘤和副神经节瘤)；血管活肠肽(VIP)及其受体亚型(VPAC1，VPAC2)；α-黑素细胞刺激素(α-MSH)受体；胆囊收缩素(CCK)或胃泌素受体及其受体亚型(CCK1(以前称为CCK-A)和CCK2；铃蟾肽(Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2)或胃泌素释放肽(GRP)及其受体子类(BB1，GRP受体子类(BB2)、BB3和BB4)(Ohlsson，B.，等，1999，Sc和.J.Gastroenterology 34(12)：1224–9；Weber，HC，2009，Cur.Opin.Endocri.Diab.Obesity 16(1)：66–71，Gonzalez N，等，2008，Cur.Opin.Endocri.Diab.Obesity 15(1)，58-64)；神经降压素受体及其受体亚型(NTR1，NTR2，NTR3)；物质P受体及其受体亚型(例如神经胶质肿瘤的NK1受体，Hennig I M，等1995Int.J.Cancer 61，786–792)；神经肽Y(NPY)受体及其受体亚型(Y1–Y6)；归巢肽包括RGD(Arg-Gly-Asp)、NGR(Asn-Gly-Arg)、二聚和多聚环状RGD肽(如cRGDfV)(Laakkonen P，Vuorinen K.2010，Integr Biol(Camb).2(7–8)：326–337；Chen K，Chen X.2011，Theranostics.1：189–200；Garanger E，等，Anti-Cancer Agents Med Chem.7(5)：552–558；Kerr，JS等，Anticancer Research，19(2A)，959-968；Thumshirn，G，等，2003Chem.Eur.J.9，2717-2725)，及TAASGVRSMH或LTLRWVGLMS(硫酸软骨素蛋白多糖NG2受体)和F3肽(与细胞表面表达的核仁素受体结合的31个氨基酸肽)(Zitzmann，S.，2002Cancer Res.，62，18，5139–5143；Temminga，K.，2005，Drug Resistance Updates，8，381–402；P.Laakkonen和K.Vuorinen，2010Integrative Biol，2(7-8)，326–337；M.A.Burg，1999Cancer Res.，59(12)，2869–2874；K.Porkka等2002，Proc.Nat.Acad.Sci.USA 99(11)，7444-9)；细胞穿透肽(CPPs)(Nakase I，等，2012，J.Control Release.159(2),181–188)；肽激素，例如促黄体激素释放激素(LHRH)的激动剂和拮抗剂，促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂，通过靶向卵泡刺激素(FSH)和促黄体激素(LH)以及睾酮产生而作用，如布舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt)、戈那瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、戈舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2)、组氨瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-Bn)-Leu-Arg-Pro-NHEt)、亮丙瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt)、那法瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、曲普瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、纳法瑞林、地洛林、阿贝瑞林(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-isopropylLys-Pro-DAla-NH2)、西曲瑞克(Ac-D-2Nal-D-4-chloro-Phe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2)、地加瑞克(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-4-aminoPhe(L-hydroorotyl)-D-4-aminoPhe(carba-moyl)-Leu-isopropylLys-Pro-D-Ala-NH2)和甘乃利(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-(N9，N10-diethyl)-homoArg-Leu-(N9，N10-diethyl)-homoArg-Pro-D-Ala-NH2)(Thundimadathil，J.，J.AminoAcids，2012，967347；Boccon-Gibod，L.；等，2011，Therapeutic Advances in Urology 3(3)：127–140；Debruyne，F.，2006，Future Oncology，2(6)，677–696；Schally A.V；Nagy，A.1999Eur J Endocrinol 141：1–14；Koppan M，等1999Prostate 38：151–158)；模式识别受体(PRRs)，如Toll样受体(TLRs)、C型凝集素和结节状的受体(NLRs)(Fukata，M.等，2009，Semin.Immunol.21，242–253；Maisonneuve，C.等，2014，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 111，1–6；Botos，I.等，2011，Structure 19，447–459；Means，T K等，2000，Life Sci.68，241–258)，其分子量范围从小分子(咪喹莫特、鸟嘌和腺苷类似物)到大型和复杂的生物大分子，如脂多糖(LPS)、核酸(CpG DNA，polyI：C)和脂肽(Pam3CSK4)(Kasturi，S P等，2011，Nature470，543–547；Lane，T.，2001，JR Soc.Med.94，316；Hotz，C.，和Bourquin，C.，2012，Oncoimmunology 1，227-228；Dudek，A Z等，2007，Clin.Cancer Res.13，7119–25)；降钙素受体，它是一种32-氨基酸神经肽，主要通过其对破骨细胞和肾脏的作用参与钙水平的调节(Zaidi M，等，1990Crit Rev Clin Lab Sci 28，109–174；Gorn，A H，等1995J Clin Invest95：2680–91)；整合素受体及其受体子类(如αVβ1，αVβ3，αVβ5，αVβ6，α6β4，α7β1，αLβ2，αIIbβ3等)，通常在血管生成中起重要作用，在多种细胞，特别是破骨细胞、内皮细胞和肿瘤细胞的表面表达(Ruoslahti，E.等，1994Cell 77，477-8；Albelda，SM等，1990Cancer Res.，50，6757-64)。短肽，GRGDSPK和环状RGD五肽，如环(RGDfV)(L1)及其衍生物(环(-N(Me)R-GDfV)、环(R-Sar-DfV)、环-(RG-N(Me)D-fV)、环(RGD-N(Me)fV)、环(RGDf-N(Me)V-)(西仑吉肽))具有对整合素受体高亲和力(Dechantsreiter，MA等，1999J.Med.Chem.42，3033-40，Goodman，SL，等，2002J.Med.Chem.45，1045-51)。
细胞结合分子或配体或细胞受体激动剂可以是基于Ig和非基于Ig的蛋白质分子。基于Ig的框架结构可以选自但不限于，纳米抗体(VHH的衍生物(骆驼科动物Ig))(Muyldermans S.，2013Annu Rev Biochem.82，775–97)；结构域抗体(dAb，VH或VL结构域的衍生物)(Holt，L.J，等，2003，Trends Biotechnol.21，484–90)；双特异性T细胞接头(BiTE、双特异性双抗体)(Baeuerle，P.A等，2009，Curr.Opin.Mol.Ther.11，22–30)；双重亲和力复位向剂(DART，双特异性双抗体)(Moore PA P等.2011，Blood 117(17)，4542–51)；四价串联抗体(TandAb，二聚双特异性双抗体)(Cochlovius，B等.2000，Cancer Res.60(16)：4336–4341)。非Ig框架结构可以选自，但不限于，Anticalin(Lipocalins的衍生物)(SkerraA.2008，FEBS J.，275(11)：2677–83；Beste G等，1999Proc.Nat.Acad.USA.96(5)：1898–903；Skerra，A.2000Biochim Biophys Acta，1482(1-2)：337–50；Skerra，A.2007，CurrOpin Biotechnol.18(4)：295–304；Skerra，A.2008，FEBS J.275(11)：2677–83)；Adnectin(第10个FN3(纤连蛋白))(Koide，A等，1998J.Mol.Biol.，284(4)：1141–51；Batori V，2002，Protein Eng.15(12)：1015–20；Tolcher，A.W，2011，Clin.Cancer Res.17(2)：363–71；Hackel，B.J，2010，Protein Eng.Des.Sel.23(4)：211–19)；设计的锚蛋白重复蛋白(DARPins)(锚蛋白重复(AR)蛋白的衍生物)(Boersma，Y L等，2011Curr OpinBiotechnol.22(6)：849–57)，例如DARPin C9、DARPin Ec4及DARPin E69_LZ3_E01(WinklerJ等，2009Mol Cancer Ther.8(9)，2674–83；Patricia MK.M.等，Clin Cancer Res.2011；17(1)：100–10；Boersma Y.L等，2011J.Biol.Chem.286(48)，41273–85)；Avimer(域A/低密度脂蛋白(LDL)受体)(Boersma Y.L，2011J.Biol.Chem.286(48)：41273–41285；Silverman J等，2005Nat.Biotechnol.，23(12)：1556–61)。
专利申请的细胞结合分子/配体或细胞受体激动剂的小分子结构的例子如下：LB01(叶酸)、LB02(PMSA配体)、LB03(PMSA配体)、LB04(PMSA配体)、LB05(生长抑制素)、LB06(生长抑制素)、LB07(奥曲肽、生长抑制素类似物)、LB08(兰瑞肽、生长抑制素类似物)、LB09(伐普肽(Sanvar)、生长抑制素类似物)、LB10(CAIX配体)、LB11(CAIX配体)、LB12(胃泌素释放肽受体(GRPr)、MBA)、LB13(促黄体激素释放激素(LH-RH)和GnRH配体)、LB14(促黄体激素释放激素(LH-RH)和GnRH配体)、LB15(GnRH拮抗剂、Abarelix)、LB16(钴胺素、维生素B12类似物)、LB17(钴胺素、维生素B12类似物)、LB18(用于αvβ3整联蛋白受体、环状RGD五肽)、LB19(VEGF受体的异二价肽配体)、LB20(神经髓质素B)、LB21(蛙皮素，作用于G蛋白偶联受体)、LB22(TLR2，作用于类Toll受体)、LB23(作用于雄性激素受体)、LB24(西仑吉肽或环(-RGDfV-)结合物，作用于αv整合素受体)LB25(利福布汀类似物)、LB26(利福布汀类似物)、LB27(利福布汀类似物)、LB28(氟氢可的松)、LB29(地塞米松)、LB30(丙酸氟替卡松)、LB31(丙酸倍氯米松)、LB32(醋酸曲安奈德)、LB33(泼尼松龙)、LB35(甲基强的松龙)、LB36(倍他米松)、LB37(伊立替康类似物)、LB38(克唑替尼类似物)、LB39(硼替佐米类似物)、LB40(卡菲佐米类似物)、LB41(卡非佐米类似物)、LB42(亮丙瑞林类似物)、LB43(曲普瑞林类似物)、LB44(克林霉素)、LB45(利拉鲁肽类似物)、LB46(半长春新碱类似物)、LB47(瑞他帕林类似物)、LB48(丁布尔类似物)、LB49(长春碱类似物)、LB50(利西森肽类似物)、LB51(奥西丁尼类似物)、LB52(核苷类似物)、LB53(厄洛替尼类似物)和LB5 4(拉帕替尼类似物)，其结构如下所示：
Figure GDA0003907478750000851
LB01(叶酸),
Figure GDA0003907478750000852
LB02(PMSA配体),
Figure GDA0003907478750000853
LB03(PMSA配体),
Figure GDA0003907478750000854
LB04(PMSA配体),
Figure GDA0003907478750000855
LB05(生长激素抑制素),
Figure GDA0003907478750000856
LB06(生长激素抑制素),
Figure GDA0003907478750000861
LB07(奥曲肽、生长抑制素类似物),
Figure GDA0003907478750000862
LB08(兰肽、生长抑制素类似物),
Figure GDA0003907478750000863
LB09(氨肽(Sanvar)、生长抑制素类似物),
Figure GDA0003907478750000864
LB10(CAIX配体),
Figure GDA0003907478750000865
LB11(CAIX配体),
Figure GDA0003907478750000871
LB12(胃泌素释放肽受体(GRPr)，MBA),
Figure GDA0003907478750000872
LB13(促黄体激素释放激素(LH-RH)和促性腺激素释放激素GnRH配体),
Figure GDA0003907478750000873
LB14(促黄体激素释放激素(LH-RH)和促性腺激素释放激素GnRH配体),
Figure GDA0003907478750000874
LB15(GnRH拮抗物、阿巴瑞克),
Figure GDA0003907478750000875
R19是5’-脱氧腺苷，Me,OH,CN；LB16(钴胺素，维生素B12类似物),
Figure GDA0003907478750000881
R19是5’-脱氧腺苷，Me,OH,CN；
LB17(钴胺素，维生素B12类似物),
Figure GDA0003907478750000882
LB18(环RGD五肽，作用于αvβ3整联蛋白受体),
Figure GDA0003907478750000883
LB19(异源二价肽配体偶联物，作用于血管内皮生长因子VEGF受体),
Figure GDA0003907478750000884
LB20(神经髓质素B),
Figure GDA0003907478750000885
LB21(蛙皮素偶联物，作用于G蛋白偶联受体)，
Figure GDA0003907478750000886
LB22(TLR2偶联物，作用于类Toll受体)，
Figure GDA0003907478750000887
LB23(雄激素受体)，
Figure GDA0003907478750000891
LB24(西伦吉肽/环(-RGDfV-)偶联物，作用于αv整合素受体)
Figure GDA0003907478750000892
LB25(利福布汀类似物)，
Figure GDA0003907478750000893
LB26(利福布汀类似物)，
Figure GDA0003907478750000894
LB27(利福布汀类似物)，
Figure GDA0003907478750000895
LB28(氟氢可的松)，
Figure GDA0003907478750000901
LB29(地塞米松)，
Figure GDA0003907478750000902
LB30(丙酸氟替卡松),
Figure GDA0003907478750000903
LB31(倍氯米松丙酸酯),
Figure GDA0003907478750000904
LB32(曲安奈德),
Figure GDA0003907478750000905
LB33(泼尼松),
Figure GDA0003907478750000906
LB34(泼尼松龙),
Figure GDA0003907478750000911
LB35(甲基强的松龙),
Figure GDA0003907478750000912
LB36(倍氟美松),
Figure GDA0003907478750000913
LB37(伊立替康类似物),
Figure GDA0003907478750000914
LB38(克唑替尼类似物),
Figure GDA0003907478750000915
LB39(硼替佐米类似物)，其中Y5是N、CH、C(Cl)、C(CH3)或C(COOR1)；R1是H、C1-C6烷基、C3-C8芳基；
Figure GDA0003907478750000916
LB40(卡菲佐米类似物),
Figure GDA0003907478750000917
LB41(卡菲佐米类似物),
Figure GDA0003907478750000921
LB42(亮丙瑞利类似物),
Figure GDA0003907478750000922
LB43(曲普瑞林类似物),
Figure GDA0003907478750000923
LB44(克林霉素),
Figure GDA0003907478750000924
LB45(利拉鲁肽类似物),
Figure GDA0003907478750000925
LB46(索马鲁肽类似物),
Figure GDA0003907478750000926
LB47(瑞他帕林类似物),
Figure GDA0003907478750000931
LB48(丁布尔类似物),
Figure GDA0003907478750000932
LB49(长春碱类似物),
Figure GDA0003907478750000933
LB50(利西森肽类似物),
Figure GDA0003907478750000934
LB51(奥西丁尼类似物),
Figure GDA0003907478750000935
LB52(核苷类似物),
Figure GDA0003907478750000936
LB53(埃罗替尼类似物),
Figure GDA0003907478750000941
LB54(拉帕替尼类似物)，
其中
Figure GDA0003907478750000942
是连接子的连接位置；X4和Y1独立地是O、NH、NHNH、NR1、S、C(O)O、C(O)NH、OC(O)NH、OC(O)O、NHC(O)NH、NHC(O)S、OC(O)N(R1)、N(R1)C(O)N(R1)、CH2、C(O)NHNHC(O)和C(O)NR1；X1是H、CH2、OH、O、C(O)、C(O)NH、C(O)N(R1)、R1、NHR1、NR1、C(O)R1或C(O)O；X5是H、CH3、F或Cl；M1和M2独立地是H、Na、K、Ca、Mg、NH4、N(R1R1’R2R3)；R1、R1’、R2和R3定义同式(I)。
偶联物的制备
在本发明的另一方面，优选地，合成的喜树碱类似物含有连接子L和反应基团Lv，如式(VI)，(VII)，(VIII)，(IX)和(X)所示，可以容易地与细胞结合分子T或经修饰的细胞结合分子T反应，分别形成如式(I)，(II)，(III)，(IV)和(V)的偶联物：
Figure GDA0003907478750000943
Figure GDA0003907478750000951
其中R1，R2，R3，R4，R5，L，X和m与前文式(I)中的定义相同；
Lv为一反应官能团，可以与细胞结合分子上的硫醇、胺、羧酸、硒醇、苯酚或羟基发生反应。它包括，但不限于，卤素(如氟、氯、溴、碘)；马来酰亚胺基；甲磺酰基；甲苯磺酰基；三氟甲磺酰基；硝基苯氧基；N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)；苯氧基；二硝基苯氧基；五氟苯氧基；四氟苯氧基；三氟苯氧基；二氟苯氧基；一氟苯氧基；五氯苯氧基；咪唑基；一氯苯氧基；二氯苯氧基；三氯苯氧基；四氯苯氧基；N-(苯并三唑基)氧基；2-乙基-5-苯基异恶唑基-3′-磺酰基；苯氧二唑基磺酰基；2-乙基-5-苯基异恶唑基；苯氧二唑基；恶二唑基；不饱和碳(碳-碳、碳-氮、碳-硫、碳-磷、硫-氮、磷-氮、氧-氮或碳-氧之间的双键或三键)；或与Mitsunobu反应试剂作用生成的中间体。缩合剂的例子如下：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-环己基-N'-(2-吗啉代-乙基)碳二亚胺甲基对甲苯磺酸盐(CMC或CME-CDI)、1，1'-羰基二咪唑(CDI)、(O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(1H-苯并三唑-1-基)-六氟磷酸铵(HBTU)、(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)-六氟磷酸盐(BOP)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基六氟磷酸盐(PyBOP)、氰基膦酸二乙酯(DEPC)、氯-N，N，N'，N'-四甲基甲脒六氟磷酸盐、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶3-氧六氟磷酸盐(HATU)、1-[(二甲氨基)(吗啉代)亚甲基]-1H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-1-鎓3-氧六氟磷酸盐(HDMA)、2-氯-1，3-二甲基-咪唑六氟磷酸盐(CIP)、六氟磷酸氯代吡咯烷酮鎓(PyCloP)、氟-N，N，N'，N'-双(四亚甲基)甲脒六氟磷酸盐(BTFFH)、N，N，N'，N'-四甲基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲六氟磷酸盐、O-(2-氧代-1(2H)吡啶基)-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TPTU)、S-(1-氧代-2-吡啶基)N，N，N'，N'-四甲基硫脲四氟硼酸盐、O-[(乙氧基羰基)-氰基甲基氨基]-N，N，N'，N'-六氟磷酸四甲基脲(HOTU)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基氨基氧基)二甲氨基-吗啉代-六氟磷酸盐(COMU)、O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-双(四亚甲基)六氟磷酸盐(HBPyU)、N-芐基-N'-环己基-碳二亚胺(有或没有聚合物结合)、二吡咯烷基(N-琥珀酰亚胺基氧基)碳鎓六氟磷酸盐(HSPyU)、氯二吡咯烷基六氟磷酸盐(PyClU)、2-氯-1，3-二甲基咪唑四氟硼酸盐(CIB)、(苯并三唑-1-基氧基)二呱啶碳六氟磷酸盐(HBPipU)、O-(6-氯苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TCTU)、溴代(二甲基氨基)-六氟磷酸盐(BroP)、丙基膦酸酐(PPACA、
Figure GDA0003907478750000961
)、2-吗啉代乙基异氰化物(MEI)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(N-琥珀酰亚胺基)六氟磷酸盐(HSTU)、2-溴-1-乙基-吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP)、O-[(乙氧基羰基)氰基-亚甲基氨基]-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TOTU)、4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉氯化物(MMTM、DMTMM)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(N-琥珀酰亚胺基)脲四氟硼酸(TSTU)、O-(3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TDBTU)、1，1'-(偶氮二羰基)-二呱啶(ADD)、二-(4-氯芐基)偶氮二羧酸酯(DCAD)、偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD)、偶氮二羧酸二异丙酯(DIAD)、偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)。另外，Lv可以是酸酐，酸自身缩合或与其它C1-C8酸酐作用形成的酸酐；
优选的Lv包含以下物质：卤化物(如氟化物、氯化物、溴化物和碘化物)、甲磺酰基(mesyl)、甲苯磺酰基(tosyl)、三氟甲基磺酰基(triflate)、三氟甲基磺酸酯、硝基苯氧基、N-琥珀酰亚胺基(NHS)、苯氧基；二硝基苯氧基；五氟苯氧基、四氟苯氧基、三氟苯氧基、二氟苯氧基、一氟苯氧基、五氯苯氧基、1H-咪唑-1-基、一氯苯氧基、二氯苯氧基、三氯苯氧基、四氯苯氧基、N-(苯并三唑基)氧基、2-乙基-5-苯基异恶唑-3′-磺酰基、苯基恶二唑-磺酰基、2-乙基-5-苯基异恶唑基、苯基恶二唑基、恶二唑基、不饱和碳(碳-碳、碳-氮、碳-硫、碳-磷、硫-氮、磷-氮、氧-氮或碳-氧之间的双键或三键)，或以下结构之一：
Figure GDA0003907478750000971
二硫化物；
Figure GDA0003907478750000972
卤代乙酰基；
Figure GDA0003907478750000973
酰卤；
Figure GDA0003907478750000974
N-羟基琥珀酰亚胺酯；
Figure GDA0003907478750000975
马来酰亚胺；
Figure GDA0003907478750000976
单取代马来酰亚胺；
Figure GDA0003907478750000977
二取代马来酰亚胺；
Figure GDA0003907478750000978
单取代的琥珀酰亚胺；
Figure GDA0003907478750000979
二取代马来酰亚胺；
Figure GDA00039074787500009710
取代马来酸；-CHO醛；
Figure GDA00039074787500009711
乙烯磺酰基；
Figure GDA00039074787500009712
丙烯酰基；
Figure GDA00039074787500009713
2-(甲苯磺酰氧基)乙酰基；
Figure GDA00039074787500009714
2-(甲磺酰氧基)乙酰基；
Figure GDA00039074787500009715
2-(硝基苯氧基)乙酰基；
Figure GDA00039074787500009716
2-(二硝基苯基)乙酰基；
Figure GDA00039074787500009717
2-(氟代苯氧基)-乙酰基；
Figure GDA00039074787500009718
2-(二氟苯氧基)-乙酰基；
Figure GDA00039074787500009719
2-((三氟甲基磺酰基)氧基)乙酰基；
Figure GDA00039074787500009720
酮或醛，
Figure GDA00039074787500009721
2-(五氟苯氧基)乙酰基；
Figure GDA00039074787500009722
甲基砜苯基恶二唑(ODA)；
Figure GDA00039074787500009723
酸酐，
Figure GDA00039074787500009724
烷氧基氨；
Figure GDA00039074787500009725
叠氮基，
Figure GDA00039074787500009726
炔基，或
Figure GDA00039074787500009727
酰肼；其中，X1’是F、Cl、Br、I或Lv3；X2’是O、NH、N(R1)或CH2；R3是H、芳基或杂芳基，其中一个或多个H原子可独立地被-R1、-卤素、-OR1、-SR1、-NR1R2、-NO2、-S(O)R1、-S(O)2R1或-COOR1取代；Lv3是离去基团，选自F、Cl、Br、I；硝基苯氧基；N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)；苯氧基；二硝基苯氧基；五氟苯氧基；四氟苯氧基；二氟苯氧基；单氟苯氧基；五氯苯氧基；三氟甲磺酰基；咪唑基；二氯苯氧基；四氯苯氧基；1-羟基苯并三唑基；甲苯甲磺酰基；甲磺酰基；2-乙基-5-苯基异恶唑-3′-磺酰基，酸酐或与其它酸酐作用形成的酸酐，例如乙酸酐、甲酸酐；或与多肽缩合试剂、Mitsunobu反应试剂作用生成的中间体。
在偶联的过程中，在与喜树碱类似物偶联之前，通过使用含双功能团的连接子，细胞结合分子可以被修饰，连接更具特异性的多肽，蛋白，药物分子或其他功能性分子。这些含双功能团的连接子包括连接胺-非选择性功能团的连接子(琥珀酰亚胺酯(NHS酯)-二氮环丙烯(SDA)，琥珀酰亚胺酯-叠氮化物)，连接胺-巯基的连接子(NHS酯-马来酰亚胺，NHS酯-吡啶二巯基，NHS酯-卤代乙酰基)，连接巯基-糖的连接子(马来酰亚胺-酰肼，吡啶二巯基-酰肼)，连接羟基-巯基的连接子(异氰酸酯-马来酰亚胺)，连接胺-DNA的连接子(NHS酯/补骨脂素)和连接胺-羧基的连接子(碳二亚胺)等。
在使用琥珀酰亚胺(NHS)-二氮环丙烯(SDA)连接子时，连接子上的NHS酯可以首先和细胞结合分子骨架上的胺反应(在pH为6-9的缓冲溶液里)，形成一个稳定的酰胺键。然后，在波长为330-370nm的长波照射下，二氮环丙烯被活化并产生卡宾活性中间体，该中间体再和特异性多肽、蛋白或者其他功能性分子上的胺反应。这两步反应的次序也可以改变为：先让功能性分子上的胺和连接子上的NHS酯反应，然后再在光(330-370nm)的照射下与细胞结合分子进行化学反应。琥珀酰亚胺(NHS)-二氮环丙烯(SDA)连接子也可以是可断裂的(就像SDAD连接子一样，内部包含双硫键)。
Figure GDA0003907478750000981
在使用NHS酯/叠氮化物连接子时，NHS酯可以首先和细胞结合分子骨架上的胺在pH6-9的缓冲溶液里反应，形成一个稳定的酰胺键。然后，通过Huisgen叠氮-炔环加成反应，特定的多肽、蛋白质或其他功能性分子上的炔基和交联剂另一端的叠氮进行反应，并形成1,2,3-三唑(点击化学)。另外，NHS酯也可以先与功能性分子上的胺在pH为6-9的缓冲溶液里反应，形成稳定的酰胺键，然后结合分子上的炔基与连接子另一端的叠氮基团进行Huisgen叠氮-炔环加成反应，并形成1,2,3-三唑连接。
Figure GDA0003907478750000991
在胺-巯基连接时，NHS酯可以首先和细胞结合分子骨架上的胺在pH＝6～9的缓冲溶液里反应，形成一个稳定的酰胺键。然后，在pH为4.5～8.5的条件下，更具特异性的多肽、蛋白质或其他功能性分子上的巯基和连接子另一端的马来酰亚胺，吡啶二巯基或卤代乙酰基反应，并形成硫醚或双硫键。偶联反应的次序也可以根据情况改变。例如，功能性分子上的氨基也可以首先和连接子反应生成酰胺键，然后再与细胞结合分子上的巯基进行反应。以及，在pH为4.5～7.0的条件下，功能性分子上的巯基可以先与连接子反应形成硫醚或者双硫键，然后再在pH为6～9的条件下与细胞结合分子上的氨基反应形成酰胺键。
Figure GDA0003907478750000992
在巯基-糖连接时，在pH为4.5～8的条件下，细胞结合分子上的巯基可以首先与马来酰亚胺或吡啶二巯基反应形成硫醚或双硫键。然后，功能性分子上的羰基(醛/酮)再与酰肼反应生成腙键。除此以外，在pH为4.5～8的条件下，功能分子上的巯基也可以首先和连接子反应形成硫醚或者双硫键，然后再与细胞结合分子上的糖、氧化糖或者羰基(醛/酮)反应生成腙键。
Figure GDA0003907478750000993
在羟基-巯基连接时，在pH为6～8的条件下，细胞结合分子上的巯基可以首先和马来酰亚胺或者吡啶二巯基反应生成硫醚或双硫键。然后，在pH为8～9的条件下，再让功能性分子上的羟基与异氰酸酯反应生成氨基甲酸酯。另外，功能性分子上的巯基也可以先和连接子在pH为6～8的条件下反应生成硫醚或双硫键。然后，再与细胞结合分子上的羟基在pH为8～9的条件反应生成氨基甲酸酯。
Figure GDA0003907478750000994
在本发明的另一个方面，用于本发明中的抗体的生产包括体内或体外方法或其组合。生产多克隆抗受体肽抗体的方法在本领域是公知的，例如美国专利4,493,795中所述。通常是通过将骨髓瘤细胞，与已经用所需抗原免疫的小鼠的脾细胞融合，来制备单克隆抗体(
Figure GDA0003907478750001001
G.；Milstein，C.Nature 1975，256：495-497)。详细的过程在“Antibodies--ALaboratory Manual，Harlow and Lane，eds.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York(1988)”中有描述，此处引作参考。具体地，可以用目标抗原，如从靶细胞、完整的病毒、灭活的全病毒和病毒蛋白质分离的抗原，来免疫小鼠，大鼠，仓鼠或任何其它哺乳动物而制备。通常使用聚乙二醇(PEG)6000将脾细胞与骨髓瘤细胞融合。通过对HAT(次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶)的敏感性来筛选融合细胞。通过它们免疫反应特异性受体的能力或抑制靶细胞上的受体活性的能力，可以确定实施本发明的单克隆抗体的杂交瘤。
用于本发明中的单克隆抗体的生产在单克隆杂交瘤培养物里进行，其中包含营养培养基和能分泌具有合适抗原特异性的抗体分子的杂交瘤。培养物在合适的条件下保持足够长的一段时间，以使杂交瘤将抗体分子分泌到培养基。然后收集含有抗体的培养基。使用通过公知的技术进一步分离抗体分子，如蛋白质A亲和层析，阴离子、阳离子、疏水或体积排阻色谱法(特别是通过蛋白质A亲和层析和体积排阻色谱法)，离心，差异溶解度或任何其他纯化蛋白质的标准技术。
可用于制备这些组合物的培养基在本领域中是公知的，并且可商业获得，也包括合成培养基。一个合成的培养基的例子是Dulbecco最少必需培养基(DMEM；Dulbecco等.，Virol.1959,8，396)补充有4.5g/ml葡萄糖，20mM谷氨酰胺，20％胎牛血清，以及消泡剂如聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。
另外，生产抗体的细胞系也可以通过融合以外的技术来获得，例如将成瘤DNA移植至B淋巴细胞，或成瘤病毒转染，如爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV，也称为人类疱疹病毒4(HHV-4))或卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)，见于美国专利4,341,761；4,399,121；4,427,783；4,444,887；4,451,570；4,466,917；4,472,500；4,491,632；4,493,890。单克隆抗体也可以通过含末端羧基的抗受体肽或肽制备，这些都为如本领域所公知，可参考文献Niman等.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1983，80：4949-4953；Geysen等.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1985，82：178-182；Lei等.Biochemistry 1995，34(20)：6675-6688。通常，作为产生抗受体肽单克隆抗体的免疫原，抗受体肽或肽类似物可以单独使用或连接至免疫原性载体。
用作本发明中结合分子的单克隆抗体也可以通过其他本领域已知的技术获得。特别有用的是制造完整人源抗体的方法。一种方法是噬菌体显示技术，它使用亲和富集的方式，能选择与抗原特异性结合的人源抗体。噬菌体展示技术在文献中也有详细描述，噬菌体展示库的构建和筛选在本领域也是众所周知的，可参考文献Dente等，Gene.1994,148(1)：7-13；Little等，Biotechnol Adv.1994,12(3)：539-55；Clackson等.，Nature 1991,352：264-628；Huse等.，Science 1989,246：1275-1281。
通过与非人如小鼠细胞融合的杂交瘤产生的单克隆抗体，可以被人源化以避免产生人类抗小鼠抗体。常见的抗体人源化方法是互补决定区移植技术，这些方法也已被详细地描述，如美国专利5,859,205和6,797,492；Liu等，Immunol Rev.2008，222：9-27；Almagro等，Front Biosci.2008,13：1619-33；Lazar等，MolImmunol.2007,44(8)：1986-98；Li等，Proc.Natl.Acad.Sci.U S A.2006,103(10)：3557-62，此处引为参考。完整人抗体也可以通过用免疫原免疫携带大部分的人类球蛋白重轻链的转基因小鼠、兔子、猴子或其他哺乳动物来制备。这些老鼠的例子有：Xenomouse(Abgenix/Amgen)，HuMAb-Mouse(Medarex/BMS)和VelociMouse(Regeneron)，参考美国专利6,596,541，6,207,418，6,150,584，6,111,166，6,075,181，5,922,545，5,661,016，5,545,806，5,436,149和5,569,825。用于人类治疗时，小鼠的可变区域和人的恒定区域也可以被融合，成为“嵌合抗体”，它在人类身上的免疫原性显著低于小鼠单抗(Kipriyanov等，MolBiotechnol.2004,26：39-60；Houdebine，CurrOpinBiotechnol.2002,13：625-9)。另外，在抗体可变区域的定点诱变能导致抗体具有较高的亲和性和特异性(Brannigan等，Nat Rev Mol Cell Biol.2002,3：964-70；Adams等，J Immunol Methods.1999，231：249-60)，mAb抗体恒定区域的改变可以提高其介导结合和细胞毒性的效应功能。
恶性肿瘤细胞抗原的免疫特异性抗体也可以从商业途径获得或通过任何已知方法生产，例如化学合成或重组表达技术。对恶性肿瘤细胞抗原具有免疫特异性的抗体的核苷酸序列编码可以商业获得，例如从GenBank数据库或类似数据库，文献出版物获得，或从常规克隆和测序得到。
除了抗体之外，与目标细胞上的表位或相应的受体相互作用(结合、阻断、靶向或其他类型作用)的一种肽或蛋白质也可以作为结合分子。这些肽或蛋白质可能是任何随机的肽或蛋白质，它们对表位或相应的受体有亲和力，不一定非得是免疫球蛋白家族成员。这些肽可以通过类似噬菌体显示抗体的技术分离出来(Szardenings，J Recept SignalTransduct Res.2003；23(4)：307-49)。从随机肽库中获得的肽与抗体和抗体片段类似，可以偶联或连接至大分子或其他物质，包括但不限于白蛋白、聚合物、脂质体、纳米颗粒、树状分子，这样的连接应当能保留肽或蛋白质的抗原结合特异性。
用于治疗癌症、自身免疫性疾病和/或传染性疾病的，喜树碱类似物偶联物中抗体的例子包括，但不限于3F8(抗GD2)，阿巴单抗(抗CA-125)，阿昔单抗(抗CD41(整联蛋白α-IIb)，阿达木单抗(抗TNF-α)，Adecatumumab(抗EpCAM，CD326)，阿非莫单抗(抗TNF-α)，Afutuzumab(抗CD20)，Alacizumab单抗(抗VEGFR2)，ALD518(抗IL-6)，Alemtuzumab(Campath，MabCampath，抗CD52)，Altumomab(抗CEA)，Anatumomab(抗TAG-72)，Anrukinzumab(IMA-638，抗-IL-13)，Apolizumab(抗-HLA-DR)，阿奇单抗(抗-CEA)，阿塞珠单抗(抗-L-选择蛋白，CD62L)，Atlizumab(tocilizumab，Actemra，RoActemra，抗-IL-6受体)，Atorolimumab(抗-Rhesus因子)，Bapineuzumab(抗-β淀粉样蛋白)，Basiliximab(Simulect，抗CD25(IL-2受体的α链))，Bavituximab(抗磷脂酰丝氨酸)，Bectumomab(LymphoScan，抗-CD22)，贝利单抗(Benlysta，LymphoStat-B，抗BAFF)，Benralizumab(抗CD125)，Bertilimumab(抗CCL11(eotaxin-1))，Besilesomab(Scintimun，抗CEA相关抗原)，贝伐单抗(Avastin，抗VEGF-A)，Biciromab(FibriScint，抗纤维蛋白IIβ链)，Bivatuzumab(抗-CD44v6)，Blinatumomab(BiTE，抗CD19)，Brentuximab(cAC10，抗-CD30TNRSF8)，Briakinumab(抗IL-12，IL-23)，Canakinumab(Ilaris，抗IL-1)，Cantuzumab(C242，抗CanAg)，Capromab，Catumaxomab(Removab，抗EpCAM，抗CD3)，CC49(抗TAG-72)，Cedelizumab(抗CD4)，Certolizumab单抗(Cimzia，抗TNF-α)，西妥昔单抗(爱必妥，IMC-C225，抗EGFR)，Citatuzumab bogatox(抗EpCAM)，Cixutumumab(抗IGF-1)，Clenoliximab(抗CD4)，Clivatuzu-mab(抗MUC1)，Conatumumab(抗TRAIL-R2)，CR6261(抗流感A血凝素)，Dacetuzumab(抗CD40)，Daclizumab(Zenapax，抗CD25(IL-2受体α链))，Daratumumab(抗CD38(环ADP核糖水解酶)，Denosumab(Prolia，抗RANKL)，Detumomab(抗B淋巴瘤细胞)，Dorlimomab，Dorlixizumab，Ecromeximab(抗GD3神经节苷脂)，Eculizumab(Soliris，抗-C5)，Edobacomab(抗内毒素)，Edrecolomab(Panorex，MAb17-1A，抗-EpCAM)，Efalizumab(Raptiva，抗LFA-1(CD11a))，Efungumab(Mycograb，抗Hsp90)，Elotuzumab(抗SLAMF7)，Elsilimomab(抗IL-6)，Enlimomab单抗(抗ICAM-1(CD54))，Epitumomab(抗episialin)，依他珠单抗(抗-CD22)，Erlizumab(抗-ITGB2(CD18))，Ertumaxomab(Rexomun，抗HER2/neu，CD3)，依他拉单抗(Abegrin，抗整联蛋白αvβ3)，Exbivirumab(抗乙肝表面抗原)，Fanolesomab(NeutroSpec，抗CD15)，Faralimomab(抗干扰素受体)，Farletuzumab(抗叶酸受体1)，Felvizumab(抗呼吸道合胞病毒)，Fezakinumab(抗-IL-22)，Figitumumab(抗-IGF-1受体)，Fontolizumab(抗-IFN-γ)，Foravirumab(抗狂犬病病毒糖蛋白)，Fresolimumab(抗TGF-β)，Galiximab(抗CD80)，Gantenerumab(抗β淀粉样蛋白)，Gavilimomab(抗CD147(basigin))，Gemtuzumab(抗CD33)，Girentuximab(抗碳酸酐酶9)，Glembatumumab(CR011，抗GPNMB)，Golimumab(Simponi，抗-TNF-α)，Gomiliximab(抗-CD23(IgE受体))，抗HLA-DR抗体，Ibalizumab(抗-CD4)，Ibritumomab(抗CD20)，Igovomab(Indimacis-125，抗CA-125)，Imciromab(Myoscint，抗心肌肌凝蛋白)，Infliximab(Remicade，抗TNF-α)，Intetumumab(抗CD51)，Inolimomab(抗CD25(IL-2受体α链)，伊珠单抗(抗-CD22)，Ipilimumab(抗CD152)，Iratumumab(抗CD30(TNFRSF8))，Keliximab(抗-CD4)，Labetuzumab(CEA-Cide，抗CEA)，Lebrikizumab(抗IL-13)，Lemalesomab(抗NCA-90(粒细胞抗原))，Lerdelimumab(抗TGFβ2)，Lexatumumab(抗TRAIL-R2)，Libivirumab(抗乙肝表面抗原)，Lintuzumab(抗CD33)，鲁米木单抗(抗CD40)，鲁米单抗(抗CD23(IgE受体))，Mapatumumab(抗TRAIL-R1)，马西莫单抗(抗T-细胞受体)，马妥珠单抗(抗EGFR)，Mepolizumab(Bosatria，抗IL-5)，Metelimumab(抗TGFβ1)，Milatuzumab(抗CD74)，Minretumomab(抗TAG-72)，Mitumomab(BEC-2，抗GD3神经节苷脂)，Morolimumab(抗恒河猴因子)，Motavizumab(Numax，抗呼吸道合胞病毒)，Muromonab-CD3(Orthoclone OKT3，抗CD3)，Nacolomab(抗C242)，Naptumomab(抗5T4)，那他珠单抗(Tysabri，抗整联蛋白α4)，奈巴单抗(抗内毒素)，Necitumumab(抗EGFR)，Nerelimomab(抗-TNF-α)，Nimotuzumab(Theracim，Theraloc，抗-EGFR)，Nofetumomab，Ocrelizumab(抗CD20)，奥利木单抗(Afolimomab，抗LFA-1(CD11a))，Ofatumumab(Arzerra，抗CD20)，Olaratumab(抗PDGF-Rα)，Omalizumab(Xolair，抗IgE Fc区)Oportuzumab(抗EpCAM)，Oregovomab(OvaRex，抗CA-125)，Otelixizumab(抗CD3)，Pagibaximab(抗脂磷壁酸)，Palivizumab(Synagis，Abbosynagis，抗呼吸道合胞病毒)，帕尼单抗(Vectibix，ABX-EGF，抗EGFR)，Panobacumab(抗铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa))，帕考珠单抗(抗IL-4)，Pemtumomab(Theragyn，抗MUC1)，Pertuzumab(Omnitarg，2C4，抗HER2/neu)，Pexelizumab(抗C5)，Pintumomab(抗腺癌抗原)，Priliximab(抗-D4)，Pritumumab(抗波形蛋白)，PRO140(抗-CCR5)，Racotumomab(1E10，抗-N-羟乙酰神经氨酸(NeuGc，NGNA)-神经节苷脂GM3))，Rafivirumab(抗狂犬病病毒糖蛋白)，Ramucirumab(抗VEGFR2)，Ranibizumab(Lucentis，抗VEGF-A)，Raxibacumab(抗炭疽毒素，保护性抗原)，Regavirumab(抗巨细胞病毒糖蛋白B)，Reslizumab(抗-IL-5)，Rilotumumab(抗-HGF)，Rituximab(MabThera，Rituxanmab，抗-CD20)，Robatumumab(抗-IGF-1受体)，Rontalizumab(抗IFN-α)，Rovelizumab(LeukAr-rest，抗CD11，CD18)，Ruplizumab(Antova，抗CD154(CD40L))，Satumomab(抗TAG-72)，Sevirumab(抗巨细胞病毒)，Sibrotuzumab(抗FAP)，西法木单抗(抗IFN-α)，Siltuximab(抗IL-6)，Siplizumab(抗CD2)，MI 95(抗CD33)，Solanezumab(抗β淀粉状蛋白)，Sonepcizumab(1-磷酸鞘氨醇)，Sontuzumab(抗-episialin)，Stamulumab(抗-myostatin)，Sulesomab(LeukoScan，抗NCA-90(粒细胞抗原))，Tacatuzumab(抗α甲胎蛋白)，Tadocizumab(抗整联蛋白αIIbβ3)，Talizumab(抗IgE)，Tanezumab(anti-NGF)，Taplitumomab(抗CD19)，Tefibazumab(Aurexis，(抗凝聚因子A))，Telimomab，Tenatumomab(抗腱生蛋白C)，Teneliximab(抗CD40)，Teplizumab(抗CD3)，TGN1412(抗CD28)，Ticilimumab(Tremelimumab，抗-CTLA-4)，Tigatuzumab(抗TRAIL-R2)，TNX-650(抗IL-13)，Tocilizumab(Atlizumab，Actemra，RoActemra，抗IL-6受体)，Toralizumab(抗CD154(CD40L))，Tositumomab(抗CD20)，曲妥珠单抗(赫赛汀，抗HER2/neu)，Tremelimumab(抗CTLA-4)，Tucotuzumab celmoleukin(抗EpCAM)，Tuvirumab(抗乙型肝炎病毒)，Urtoxazumab(抗大肠杆菌)，Ustekinumab(Stelara，抗-IL-12，IL-23)，Vapaliximab(抗-AOC3(VAP-1))，维多珠单抗(抗整联蛋白α4β7)，维妥珠单抗(抗CD20)，Vepalimomab(抗AOC3(VAP-1))，Visilizumab(Nuvion，抗CD3)，Vitaxin(抗血管整合素avb3)，Volociximab(抗整联蛋白α5β1)，Votumumab(HumaSPECT，抗肿瘤抗原CTAA16.88)，Zalutumumab(HuMax-EGFR，抗EGFR)，Zanolimumab(HuMax-CD4，抗-CD4)，Ziralimumab(抗-CD147(basigin))，Zolimomab(抗-CD5)，依那西普
Figure GDA0003907478750001041
Alefacept
Figure GDA0003907478750001042
Abatacept
Figure GDA0003907478750001043
Rilonacept(Arcalyst)，14F7(抗IRP-2(铁调节蛋白2))，14G2a(抗GD2神经节苷脂，源于Nat.Cancer Inst.，治疗黑素瘤和实体瘤)，J591(抗-PSMA，源于WeillCornell医学院，治疗前列腺癌)，225.28S(抗HMW-MAA(高分子量黑素瘤相关抗原))，SorinRadiofarmaci SRL(源于意大利米兰，治疗黑色素瘤)，COL-1(抗CEACAM3，CGM1，源于NatCancer Inst.，治疗结肠直肠癌和胃癌)，CYT-356(
Figure GDA0003907478750001044
治疗前列腺癌)，HNK20(OraVax Inc.，治疗呼吸道合胞病毒感染)，ImmuRAIT(源于Immunomedics，治疗NHL)，Lym-1(抗HLA-DR10，Peregrine Pharm，治疗癌症)，MAK-195F(抗TNF(肿瘤坏死因子，TNFA，TNF-α，TNFSF2)，源于Abbott/Knoll，治疗脓毒症中毒性休克)，MEDI-500(T10B9，抗CD3，TRαβ(T细胞受体α/β)，源于MedImmune Inc，治疗移植物抗宿主疾病病)，RING SCAN(抗TAG 72(肿瘤相关糖蛋白72)，源于Neoprobe Corp.，治疗乳腺癌，结肠癌和直肠癌)，Avicidin(抗EPCAM(上皮细胞粘附分子))，抗-TACSTD1(肿瘤相关钙信号转导1)，抗GA733-2(胃肠肿瘤相关蛋白2)，抗EGP-2(上皮糖蛋白2)，抗KSA，KS1/4抗原，M4S，肿瘤抗原17-1A，CD326(源于NeoRx公司，治疗结肠癌，卵巢癌，前列腺癌和NHL)，抗Trop2人源化抗体hRS7，LymphoCide(源于Immunomedics)，Smart ID10(源于Protein Design Labs)，Oncolym(源于TechnicloneInc)，Allomune(源于BioTransplant)，抗VEGF(源于Genentech)，CEAcide(源于Immunomedics)，IMC-1C11(源于ImClone Systems)和Cetuximab(源于ImClone)。
其他可作为结合配体的抗体，包括但不限于，以下抗原的抗体：氨肽酶N(CD13)，膜联蛋白A1，B7-H3(CD276，各种癌症)，CA125(卵巢癌)，CA15-3(各种癌症)，CA19-9(各种癌症)，L6(各种癌症)，路易斯Y(各种癌症)，路易斯X(各种癌症)，甲胎蛋白(各种癌症)，CA242(结直肠癌)，胎盘碱性磷酸酶(各种癌症)，前列腺特异抗原(前列腺癌)，前列腺酸磷酸酶(前列腺癌)，表皮生长因子(各种癌症)，CD2(霍奇金症，NHL淋巴瘤，多发性骨髓瘤)，CD3ε(T细胞淋巴瘤，肺癌，乳腺癌，胃癌，卵巢癌，自身免疫性疾病，恶性腹水)，CD19(B细胞恶性肿瘤)，CD20(非霍奇金淋巴瘤)，CD22(白血病，淋巴瘤，多发性骨髓瘤，SLE)，CD30(霍奇金淋巴瘤)，CD33(白血病，自身免疫性疾病)，CD38(多发性骨髓瘤)，CD40(淋巴瘤，多发性骨髓瘤，白血病(CLL))，CD51(转移性黑色素瘤，肉瘤)，CD52(白血病)，CD56(小细胞肺癌，卵巢癌，梅克细胞癌，以及液体肿瘤，多发性骨髓瘤)，CD66e(各种癌症)，CD70(转移性肾细胞癌和非霍奇金淋巴瘤)，CD74(多发性骨髓瘤)，CD80(淋巴瘤)，CD98(各种癌症)，粘液素(各种癌症)，CD221(实体肿瘤)、CD227(乳腺癌、卵巢癌)、CD262(非小细胞肺癌及其他癌症)、CD309(卵巢癌)、CD326(实体肿瘤)、CEACAM3(结肠直肠癌、胃癌)、CEACAM5(癌胚抗原，CEA，CD66e)(乳腺，结直肠癌和肺癌)，DLL4，EGFR(表皮生长因子受体，各种癌症)，CTLA4(黑色素瘤)，CXCR4(CD184，血液肿瘤，实体肿瘤)，Endoglin(CD105，实体瘤)，EPCAM(上皮细胞粘附分子，膀胱癌，头颈癌，结肠癌，NHL前列腺癌，卵巢癌)，ERBB2(表皮生长因子受体2，肺癌，乳腺癌，前列腺癌)，FCGR1(自身免疫性疾病)，FOLR(叶酸受体，卵巢癌)，GD2神经节苷(各种癌症)，G-28(细胞表面抗原糖脂质，黑色素瘤)，GD3独特型(各自癌症)，热休克蛋白(各种癌症)，HER1(肺癌，胃癌)，HER2(乳腺癌，肺癌和卵巢癌)，HLA-DR10(NHL)，HLA-DRB(NHL，B细胞白血病)，人绒毛膜促性腺激素(各种癌症)，IGF1R(类胰岛素生长因子1受体，实体瘤，血癌)，IL-2受体(白介素2受体，T细胞白血病和淋巴瘤)，IL-6R(白介素6受体，多发性骨髓瘤，风湿性关节炎，Castleman病，白细胞介素6依赖肿瘤)，整合蛋白(αvβ3、α5β1、α6β4、αllβ3、α5β5、αvβ5，各种癌症)，MAGE-1(各种癌症)，MAGE-2(各种癌症)，MAGE-3(各种癌症)，MAGE 4(各种癌症)，抗转铁蛋白受体(各种癌症)，p97(黑色素瘤)，MS4A1(跨膜4结构域亚家族A成员1，非霍奇金B细胞淋巴瘤，白血病)，MUC1或MUC1-KLH(乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、支气管癌和α胃肠道癌)，MUC16(CA125)(卵巢癌)，CEA(结直肠癌)，gp100(黑色素瘤)，MART1(黑色素瘤)，MPG(黑素瘤)，MS4A1(跨膜4结构域亚家族A成员1，小细胞肺癌，NHL)，Nucleolin，Neu癌基因产物(各自癌症)，P21(各种癌)，抗(N-羟乙酰神经氨酸)抗体结合部位(乳腺癌，黑色素瘤)，类PLAP睾丸碱性磷酸酶(卵巢癌、睾丸癌)，PSMA(前列腺瘤)，PSA(前列腺癌)，ROBO4，TAG 72(肿瘤相关糖蛋白72，AML，胃癌、结肠直肠癌、卵巢癌)，T细胞跨膜蛋白(各种癌症)，Tie(CD202b)，TNFRSF10B(肿瘤坏死因子受体超家族成员10B，各种癌症)，TNFRSF13B(肿瘤坏死因子受体超家族成员13B，多发性骨髓瘤，NHL，其他癌症，RA和SLE)，TPBG(滋养细胞糖蛋白，肾细胞癌)，TRAIL-R1(TNF相关坏死诱导配体受体1，淋巴瘤，NHL，结直肠癌，肺癌)，VCAM-1(CD106，黑色素瘤)，VEGF，VEGF-a，VEGF-2(CD309)(各种癌症)。其它可被抗体识别的，肿瘤相关抗原已被总结和评述(Gerber，等，mAbs2009，1：3，247-253；Novellino等，CancerImmunolImmunother.2005，54(3)，187-207；Franke，等，Cancer BiotherRadiopharm.2000，15，459-76)。这些抗原的例子包括：许多其他分化簇(CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD9、CD10、CD11a、CD11b、CD11c、CD12w、CD14、CD15、CD16、CDw17、CD18、CD21、CD23、CD24、CD25、CD26、CD27、CD28、CD29、CD31、CD32、CD34、CD35、CD36、CD37、CD41、CD42、CD43、CD44、CD45、CD46、CD47、CD48、CD49b、CD49c、CD53、CD54、CD55、CD58、CD59、CD61、CD62E、CD62L、CD62P、CD63、CD68、CD69、CD71、CD72、CD79、CD81、CD82、CD83、CD86、CD87、CD88、CD89、CD90、CD91、CD95、CD96、CD100、CD103、CD105、CD106、CD109、CD117、CD120、CD127、CD133、CD134、CD135、CD138、CD141、CD142、CD143、CD144、CD147、CD151、CD152、CD154、CD156、CD158、CD163、CD166、.CD168、CD184、CDw186、CD195、CD202(a、b)、CD209、CD235a、CD271、CD303、CD304)、膜联蛋白A1、核仁素、内皮糖蛋白(CD105)、ROBO4、氨基肽酶N、Δ-样4(DLL4)、VEGFR-2(CD309)、CXCR49、CD184)、Tie2、B7-H3、WT1、MUC1、LMP2、HPV E6 E7、EGFRvIII、EGFR、HER-2/neu、独特型、MAGE A3、P53 nonmutant、NY-ESO-1、GD2、CEA、MelanA/MART1、Ras突变、gp100、p53突变体、Proteinase3(PR1)、BCR-abl、Tyrosinase、Survivin、hTERT、Sarcoma translocationbreakpoints、EphA2、PAP、ML-IAP、AFP、EpCAM、ERG(TMPRSS2 ETS融合基因)、NA17、PAX3、ALK、Androgen受体、细胞周期素B1、聚唾液酸、MYCN、RhoC、TRP-2、GD3、Fucosyl GM1、间皮素、PSCA、MAGE A1、sLe(a)、CYP1B1、PLAC1、GM3、BORIS、Tn、GloboH、ETV6-AML、NY-BR-1、RGS5、SART3、STn、碳酸酐酶IX、PAX5、OY-TES1、精子蛋白17、LCK、HMWMAA、AKAP-4、SSX2、XAGE1、B7H3、豆荚蛋白、Tie 2、Page4、VEGFR2、MAD-CT-1、FAP、PDGFR-β、MAD-CT-2、Fos蛋白相关抗原1。
在另一具体的实施例中，本专利申请的喜树碱类似物与细胞结合分子的偶联物被用于治疗癌症的组合物和方法。这些癌症包括但不限于，肾上腺皮质癌、肛门癌、膀胱癌、大脑肿瘤(脑干神经胶质瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、幕上原始神经外胚层和松果体肿瘤、视觉通路和下丘脑胶质瘤)、乳腺癌、类癌肿瘤、胃肠道癌症、未知小细胞癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、肝外胆管癌、尤因家族肿瘤(PNET)、颅内生殖细胞肿瘤、眼癌、眼内黑色素瘤、胆囊癌、胃癌(胃癌)、性腺外生殖细胞瘤、孕周滋养细胞瘤、头颈癌、下咽癌、胰岛细胞癌、肾癌(肾细胞癌)、喉癌、白血病(急性淋巴细胞，急性髓系，慢性淋巴细胞，慢性粒细胞，毛细胞)、嘴唇和口腔癌症、肝癌、肺癌(非小细胞，小细胞)、淋巴瘤(艾滋病相关，中枢神经系统，皮肤T细胞，霍奇金病，非霍奇金病)、恶性间皮瘤、黑色素瘤、梅克尔细胞癌、转移性鳞状颈癌与隐匿性原发性癌、多发性骨髓瘤和其他浆细胞肿瘤、蕈样肉芽肿、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌(上皮、生殖细胞瘤、低恶性肿瘤)、胰腺癌(外分泌，胰岛细胞癌)、副鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、浆细胞肿瘤、前列腺癌横纹肌肉瘤、直肠癌、肾细胞癌(肾癌)、肾盂和输尿管(移行细胞)、唾腺癌、赛塞里综合症、皮肤癌(皮肤T细胞淋巴瘤，卡波西氏肉瘤，黑色素瘤)、小肠肿瘤、软组织肉瘤、胃癌、睾丸癌、胸腺瘤(恶性)、甲状腺癌、尿道癌症、子宫癌、不寻常的少年癌症、阴道肿瘤、外阴肿瘤和维尔姆斯瘤。
在另一具体的实施例中，本专利申请的喜树碱类似物与细胞结合分子的偶联物被用于治疗或预防自身免疫疾病的组合物和方法。自身免疫性疾病包括但不限于，Achlorhydra自身免疫性活动性慢性肝炎、急性播散性脑脊髓炎、急性出血性脑白质炎、艾迪生病、无精症、斑秃、肌萎缩侧索硬化症、强直性脊柱炎、抗GBM/TBM肾炎、抗磷脂综合征、抗异常酶综合征、关节炎、特应性过敏、特应性皮炎、自身免疫性再生障碍性贫血、自身免疫性心肌病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病、自身免疫性淋巴组织增生综合征、自身免疫性周围神经病、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性多内分泌综合征I、II和III型、自身免疫性黄体酮皮炎、自身免疫性血小板减少性紫癜、自身免疫性葡萄膜炎、Balo病/Balo同心硬化症、Bechets综合征、Berger氏病、Bickerstaff脑炎、Blau综合征、大疱性类天疱疮、Castleman病、Chagas病、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、慢性复发性多灶性骨髓炎、慢性莱姆病、慢性阻塞性肺病、Churg-Strauss综合征、瘢痕性类天疱疮、乳糜泄、Cogan综合征、冷凝集素病、补体成分2缺乏症、颅骨动脉炎、CREST综合征、Crohns病(特发性炎症性肠病)、库欣综合征、皮肤白细胞增多性血管炎、德戈氏病、Dercum氏病、疱疹样皮炎、皮肌炎、1型糖尿病、弥漫性皮肤系统性硬化症、Dressler综合征、盘状红斑狼疮、湿疹、子宫内膜异位症、附着点炎相关的关节炎、Eosinophilic筋膜炎、大疱性表皮松解症、结节性红斑、特发性混合性冷球蛋白血症、伊文氏综合征、纤维发育不良性骨化症、纤维肌痛、纤维化性肌炎、纤维性肺泡炎、胃炎、胃肠类天疱疮、巨细胞动脉炎、肾小球肾炎、古德帕斯丘尔综合征、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、溶血性贫血、过敏性紫癜、妊娠性肝炎、化脓性汗腺炎、休斯综合征(抗磷脂综合征)、低丙球蛋白血症、特发性炎性脱髓鞘疾病、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(自身免疫性血小板减少性紫癜)、IgA肾病(伯杰氏病)、包涵体肌炎、炎性脱髓鞘性多神经炎、间质性膀胱炎、过敏性肠综合征、少年特发性关节炎、青少年类风湿性关节炎、川崎氏病、朗伯-伊顿重症肌无力综合征、白细胞碎屑性血管炎、扁平苔癣、硬化性硬化症、线状IgA疾病(LAD)、Lou Gehrig病(也称肌萎缩侧索硬化症)、狼疮性肝炎、红斑狼疮、Majeed综合征、美尼尔氏病、显微镜下多动脉炎、米勒-费希尔综合征、混合性结缔组织病、硬斑病、穆罕默德-哈贝曼病、麦考利综合征、多发性骨髓瘤、多发性硬化症、重症肌无力、肌炎、嗜睡症、视神经脊髓炎(Devic病)、神经性肌强直、眼睑瘢痕性类天疱疮、Opsoclonus myoclonus综合征、Ord甲状腺炎、回文风湿病、PANDAS(与链球菌相关的小儿自身免疫性神经精神病)、Paraneoplastic小脑变性、阵发性睡眠性血红蛋白尿症、ParryRomberg综合征、Parsonnage-Turner综合征、睫状体平部炎、天疱疮、寻常型天疱疮、贫血、周围脑脊髓炎、POEMS综合征、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、进行性炎症性神经病变、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、坏疽性皮肤炎、纯红细胞再生障碍、Rasmussen脑炎、雷诺现象、复发性多软骨炎、赖特综合征、不宁腿综合症、后神经纤维化、类风湿性关节炎、类风湿热、结节病、精神分裂症、施密特综合征、Schnitzler综合征、施尼茨勒综合征、巩膜炎、硬皮病、干燥综合征、脊椎关节病、粘稠血症、Still病、僵人综合征、亚急性细菌性心内膜炎、苏萨克综合征、Sweet综合征、小舞蹈病、交感神经性贫血、Takayasu动脉炎、颞动脉炎(巨细胞动脉炎)、Tolosa-Hunt综合征、横贯性脊髓炎、溃疡性结肠炎(特发性炎性肠病)、未分化结缔组织病、未分化脊柱关节病、血管炎、白癜风、韦格纳肉芽肿病、威尔逊氏综合征、威斯科特-奥尔德里奇综合征。
在另一个具体的实施例中，在用于治疗或预防自身免疫性疾病的偶联物上的结合分子，包括但不限于，抗弹性蛋白抗体、Abys抗上皮细胞抗体、抗地下室膜IV型胶原蛋白抗体、抗核抗体、抗ds DNA、抗ss DNA、抗心磷脂抗体IgM、IgG、抗乳糜泻抗体、抗磷脂抗体IgK、IgG、抗SM抗体、抗线粒体抗体、甲状腺抗体、微粒体抗体、T细胞抗体、甲状腺球蛋白抗体、抗SCL-70、抗Jo、抗U.sub.1RNP、抗La/SSB、抗SSA、抗SSB、抗壁细胞抗体、抗组蛋白、抗RNP、C-ANCA、P-ANCA、抗着丝粒、抗纤维蛋白原、抗GBM抗体、抗神经节苷脂抗体、抗Desmogein 3抗体、抗p62抗体、抗sp100抗体、抗线粒体(M2)抗体、类风湿因子抗体、抗MCV抗体、抗拓扑异构酶抗体、抗中性粒细胞胞质(cANCA)抗体。
在某些优选的实施例中，本专利中偶联物上的结合分子，可以与自身免疫性疾病相关的启动淋巴细胞上表达的受体或受体复合物相结合。受体或受体复合物包含，免疫球蛋白基因超家族成员(例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD22、CD28、CD30、CD33、CD37、CD38、CD56、CD70、CD79、CD79b、CD90、CD125、CD137、CD138、CD147、CD152/CTLA-4、PD-1或ICOS)，TNF受体超家族成员(例如CD27、CD40、CD95/Fas、CD134/OX40、CD137/4-1BB、INF-R1、TNFR-2、RANK、TACI、BCMA、骨保护素、Apo2/TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRAIL-R3、TRAIL-R4和APO-3)，整合蛋白，细胞因子受体，趋化因子受体，主要组织兼容性蛋白，凝集素(C型、S型或I型)或补体控制蛋白。
在另一个具体实施例中，可用的对病毒或微生物抗原具有免疫特异性的结合配体是人源化或人单克隆抗体。“病毒抗原”包括但不限于，任何能够引发免疫应答的病毒肽，多肽蛋白(例如HIV gp120、HIV nef、RSV F糖蛋白、流感病毒神经氨酸苷酶、流感病毒血凝素、HTLV Tax、疱疹单纯疱疹病毒糖蛋白(例如gB、gC、gD和gE)和乙型肝炎表面抗原)。“微生物抗原”包括但不限于，任何能够引发免疫应答的微生物肽，多肽，蛋白质，糖，多糖或脂质分子(例如细菌，真菌，致病原生动物或酵母多肽，包括如LPS和荚膜多糖)。可用于治疗病毒或微生物感染的抗体的实例，包括但不限于：帕利珠单抗，它是用于治疗RSV感染的，人源化抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体；PRO542，是一种CD4融合抗体，用于治疗HIV感染；奥斯他韦，是一种用于治疗乙型肝炎病毒的人抗体；PROTVIR，是一种人源化IgG1抗体，用于治疗巨细胞病毒，和抗LPS抗体。
通过本专利申请中的细胞结合分子-喜树碱类似物偶联物可用于治疗感染性疾病。这些感染性疾病包括但不限于，不动杆菌属感染、放线菌病、非洲昏睡病(非洲锥虫病)、艾滋病(获得性免疫缺陷综合症)、阿米巴病、无形体病、炭疽、溶血性耶尔森菌感染、阿根廷出血热、蛔虫病、曲霉病、星状病毒感染、巴贝斯虫病、蜡状芽孢杆菌感染、细菌性肺炎、细菌性阴道炎、类杆菌感染、小袋虫病、蛔虫感染、BK病毒感染、黑色发结节病、人芽囊原虫感染、芽生菌病、玻利维亚出血热、疏螺旋体感染、肉毒中毒(和婴儿肉毒中毒)、巴西出血热、布鲁氏杆菌病、伯克霍尔德氏菌感染、布鲁里溃疡、杯状病毒感染(诺如病毒和沙波病毒)、弯曲杆菌病、念珠菌病(念珠菌病、鹅口疮)、猫抓病、蜂窝组织炎、Chagas病(美洲锥虫病)、子囊、水痘、衣原体、肺炎衣原体感染、霍乱、色素母细胞瘤、华支睾吸虫、艰难梭状芽孢杆菌感染、球孢子菌病、科罗拉多蜱热病、普通感冒(急性病毒性鼻咽炎、急性鼻炎)、克雅氏病、克里米亚-刚果出血热、隐球菌病、隐孢子虫病、皮肤幼虫迁徙、环孢子虫病、肠杆菌感染、肠道病毒感染、流行性斑疹伤寒、传染性红斑(第五种疾病)、急疹、姜片虫病、肝片吸虫病、致命性家族性失眠、丝虫病、产气荚膜梭菌食物中毒、自由活体阿米巴感染、梭杆菌感染、气性坏疽(梭菌性肌坏死)、地丝菌病、格斯特曼-斯特拉斯勒-谢克尔病综合征、贾第鞭毛虫病、马鼻疽、淋病、肉芽肿性腹泻(第五性病)、A群链球菌感染、B群链球菌感染、流感嗜血杆菌感染、手足口病(HFMD)、汉坦病毒肺综合征、幽门螺杆菌感染、溶血性尿毒综合征、肾综合征出血热、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、单纯性疱疹、组织胞浆菌病、钩虫感染、人类博卡病毒感染、人类Ewingii埃里希体病、人类粒细胞无形体病、人类偏肺病毒感染、人类单核细胞埃里希体病、人乳头瘤病毒感染、人副流感病毒感染、膜壳绦虫病、艾巴氏病毒传染性单核细胞增多症(单)、流行性感冒、等孢子虫病、川崎病、角膜炎、金格杆菌感染、库鲁病、拉沙热、军团病(退伍军人症)、军团病(庞蒂亚克热)、利什曼病、莱姆病、淋巴丝虫病(象皮病)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎、疟疾、马尔堡出血热、麻疹、类鼻疽病(惠氏病)、脑膜炎、脑膜炎球菌病、后殖吸虫病、微孢子虫病、传染性软疣、腮腺炎、小鼠斑疹伤寒(地方性斑疹伤寒)、支原体肺炎、足菌肿、蝇蛆病、新生儿结膜炎(新生儿眼病)、变异型克雅氏病(vCJD、nvCJD)、诺卡氏菌病、盘尾丝虫病(河盲症)、副球孢子菌病(南美芽生菌病)、肺吸虫病、巴斯德氏菌病、头虱、体虱、阴虱、盆腔炎、百日咳、鼠疫、肺炎球菌感染、肺孢子虫肺炎、肺炎、脊髓灰质炎、普氏菌感染、原发性阿米巴脑膜脑炎、进行性多灶性白质脑病、鹦鹉热、Q热、狂犬病、鼠咬热、呼吸道合胞病毒感染、鼻孢子虫病、鼻病毒感染、立克次体感染、立克次体痘、裂谷热、落基山斑疹热、轮状病毒感染、风疹、沙门氏菌病、SARS(严重急性呼吸综合征)、疥疮、血吸虫病、败血症、志贺氏菌病(Bacillary痢疾)、带状疱疹(带状疱疹)、天花(天花)、孢子丝菌、葡萄球菌食物中毒、感染金黄色葡萄球菌、粪类圆线虫病、梅毒、绦虫病、破伤风、须癣(Barber痒)、头皮癣、体癣、股癣、手癣、掌黑癣、足癣、甲癣(灰指甲)、花斑癣、弓蛔虫病(眼幼虫移行症)、弓蛔虫病(内脏幼虫移行症)、弓形体病、旋毛虫病、滴虫病、鞭虫病(鞭虫感染)、肺结核、兔热病、解脲脲原体感染、委内瑞拉马脑炎、委内瑞拉出血热、病毒性肺炎、西尼罗河热、白毛结节病(白癣)、假结核耶尔森氏菌、耶尔森氏鼠疫杆菌肠道病、黄热病、接合菌病。
本发明的细胞结合剂，优选为抗体，对抗的病原菌株包括但不限于，鲍氏不动杆菌、以色列放线菌、放线菌和丙酸杆菌、布氏锥虫、HIV(人免疫缺陷病毒病毒)、溶组织内阿米巴、无形体属、炭疽芽孢杆菌、溶血弧菌、胡宁病毒、蛔虫属、曲霉属、星状病毒科、巴贝虫属、蜡状芽孢杆菌、多种细菌、拟杆菌属、大肠杆菌、蛔虫属、BK病毒、结节菌、人芽囊原虫、皮炎芽生菌、马丘波病毒、疏螺旋体属、肉毒梭菌、清风藤属、布鲁氏菌属、通常为洋葱伯克霍尔德菌和其他伯克霍尔德氏菌种、溃疡分枝杆菌、杯状病毒科、弯曲杆菌属、通常为白色假丝酵母和其他假丝酵母属、汉赛巴尔通体、A群链球菌和葡萄球菌、克氏锥虫、杜克雷嗜血杆菌、水痘带状疹病毒(VZV)、沙眼衣原体、科罗拉多蜱热病毒、鼻病毒、冠状病毒、CJD朊病毒、克里米亚-刚果出血热病毒、新型隐球菌、隐孢子虫属、巴西钩虫、多种寄生虫、环孢子虫、带状绦虫、巨细胞病毒、登革热病毒(DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4)-黄病毒、脆弱双歧杆菌、白喉棒状杆菌、裂头绦虫、麦地那龙线虫、埃博拉病毒、棘球绦虫属、埃立克体肠球菌属、肠道病毒属、普氏立克次体、细小病毒B19、人疱疹病毒6和人疱疹病毒7、布氏姜片虫、肝片吸虫和巨大片吸虫、FFI朊病毒、丝虫目超家族、产气荚膜梭菌、梭杆菌属、其他梭状芽孢杆菌、白地霉、GSS朊病毒、肠道贾第虫、伯克霍尔德氏菌、刺孢小芽孢杆菌和革兰氏假丝酵母、淋球菌、肉芽肿克雷伯氏菌、化脓性链球菌、无乳链球菌、流感嗜血杆菌、肠道病毒，主要是柯萨奇A病毒和肠道病毒71、辛诺柏病毒、幽门螺旋杆菌、大肠杆菌O157：H7、布尼亚病毒科、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2、荚膜组织胞浆菌、十二指肠腺瘤和壶腹癌流感嗜血杆菌、人博卡病毒、埃里希体、嗜吞噬细胞无嗜血杆菌、人偏肺病毒、查菲埃里希体、人乳头瘤病毒、人副流感病毒、微小膜壳绦虫和缩小膜壳绦虫、艾巴氏病毒、正粘病毒科家族、贝氏等孢球虫、金格杆菌、肺炎克雷伯菌、克雷伯氏菌、嗜肺军团菌、嗜肺军团菌、嗜肺军团菌、利什曼原虫属、麻风分枝杆菌和结核分枝杆菌、钩端螺旋体属、单核细胞增多性李斯特氏菌、伯氏疏螺旋体和其他疏螺旋体属物种、班氏旋毛虫和马来丝虫、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)疟原虫属、马尔堡病毒、麻疹病毒、类鼻疽伯克霍尔德氏菌、脑膜炎奈瑟氏球菌、横川后殖吸虫、小孢子虫目门、传染性软疣病毒(MCV)、腮腺炎病毒、伤寒立克次氏体、肺炎支原体、多种细菌和真菌寄生双翅蝇幼虫、沙眼衣原体和淋病奈瑟菌、vCJD朊病毒、诺卡氏菌和其他诺卡氏菌属、盘尾丝虫属、盘鲍拟亚科、副龙属西马尼和其他副属、巴斯德氏菌属、头虱、人体虱、百日咳博德特氏菌鼠疫耶尔森氏菌、肺炎链球菌、肺炎球菌、脊髓灰质炎病毒、普雷沃氏菌属、奈氏格氏杆菌、JC病毒、鹦鹉热衣原体、伯氏考克斯体、狂犬病病毒、单链球菌和螺旋菌、呼吸道合胞病毒、鼻孢子菌、鼻病毒、立克次体属、由小株立克次体、裂谷热病毒、立克次体立克次体、轮状病毒、风疹、沙门氏菌属、SARS冠状病毒、人疥螨、血吸虫属、体细胞属、志贺菌属、水痘带状疱疹病毒、大天花或小天花、申克孢子丝菌、金黄色葡萄球菌属、金黄色葡萄球菌、链球菌化脓、圆线虫、梅毒螺旋体、绦虫属、破伤风、癣属癣音铀、癣属、絮状表皮癣菌、红色毛癣菌、须毛癣菌、红色毛癣菌、威尼克外瓶黴、毛癣菌属属、细胞死亡属、弓箭毒或弓箭毒、刚地弓形虫、旋毛虫、阴道毛滴虫、三丘里三种、结核分枝杆菌、弗朗西拉图拉菌、尿素和马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、霍乱弧菌、瓜纳里托病毒、西尼罗河病毒、白吉利丝孢酵母、假结核耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、黄热病病毒、毛霉菌目阶(毛霉菌病)和虫霉目阶(虫霉属真菌病)、毛霉菌目绿脓杆菌、弯曲杆菌(弧菌)、气单胞菌、艾氏菌、耶尔森氏菌、志贺痢疾杆菌、志贺氏杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、雅司螺旋体、奋森氏螺旋体、伯氏疏螺旋体、细螺旋体、卡氏肺孢子虫、流产布鲁氏菌、布鲁杆菌、布鲁氏菌、支原体属、普氏立克次体、恙虫病立克次氏体、衣原体属、致病性真菌(烟曲霉、白色念珠菌、荚膜组织胞浆菌)、原生动物(溶组织内阿米巴、Tenas毛滴虫、Hominis毛滴虫、冈比亚锥虫、罗得西亚锥虫、罗氏利什曼原虫、热带利什曼原虫、巴西利什曼原虫、肺孢子虫肺炎、间日疟原虫、恶性疟原虫、疟原虫疟疾)或Helminiths(日本血吸虫、曼氏血吸虫、埃及血吸虫和钩虫)。
用作本专利申请中的细胞结合剂，治疗病毒性疾病的其他抗体，包括但不限于，抗下列致病性病毒抗原的抗体：痘病毒、疱疹病毒、腺病毒、小黄病毒、肠病毒、小核糖核酸病毒、细小病毒、呼肠病毒、逆转录病毒、流感病毒、副流感病毒、腮腺炎、麻疹、呼吸道合胞病毒、风疹、虫媒病毒、弹状病毒、沙门氏菌、非a/非b型肝炎病毒、鼻病毒、冠状病毒、罗托病毒；致癌病毒，如HBV(肝细胞癌)、人乳头状瘤病毒HPV(宫颈癌、肛门癌)、卡波济氏肉瘤相关的疱疹病毒(卡波济氏肉瘤肉瘤)、人类疱疹病毒第四型(鼻咽癌、伯基特淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤)、MCPyV瘤病毒(默克尔细胞癌)、SV40(猿猴病毒40)、HCV(肝细胞癌)、HTLV-1(成人T细胞白血病/淋巴瘤)；免疫紊乱导致病毒，如人类免疫缺陷病毒(艾滋病)；中枢神经系统病毒，如JCV(进行性多灶性脑白质病)、丙型肝炎病毒MeV(亚急性硬化性全脑炎)、LCV(淋巴细胞性脉络丛脑膜炎)、亚博病毒脑炎、正粘病毒(脑炎性脑炎)、RV(狂犬病)、长鼻病毒、疱疹病毒脑膜炎、拉姆齐亨特综合征II型、脊髓灰质炎病毒(脊髓灰质炎病毒、后脊髓灰质炎综合征)、HTLV-1(热带麻痹性麻痹))；巨细胞病毒(巨细胞病毒视网膜炎、HSV(疱疹性角膜炎)；心血管病毒，如CBV(心包炎、心肌炎)；呼吸系统/急性病毒性鼻内炎/病毒性肺炎病毒，如爱泼斯坦-巴尔病毒[(EBV感染/传染性单核病)、巨细胞病毒、非典冠状病毒(严重急性呼吸综合征)或正黏液病毒、流感病毒a/b/c(流感/禽流感)、副粘病毒、人类副流感病毒、RSV(人类呼吸道合胞病毒)、hMPV；消化系统病毒，如(MuV(Mumps)腮腺炎病毒、巨细胞病毒(巨细胞病毒食管炎)、腺病毒(腺病毒感染)、轮状病毒、诺瓦克病毒、星状病毒、冠状病毒、HBV乙型肝炎病毒、CBV、HAV(甲型肝炎病毒)、HCV(丙型肝炎病毒)、HDV(丁型肝炎病毒)、HEV(戊型肝炎病毒)、HGV(G型肝炎病毒)；泌尿生殖病毒，如BK病毒、MuV病毒(腮腺炎)。
更进一步，本发明也包括本发明中偶联物和可接受的载体，以治疗癌症和自身免疫性疾病。治疗癌症和自身免疫性疾病的方法可以在体外，体内或离体实施。体外用途的实例包括用它处理细胞培养物，以杀死除了不表达靶抗原的变体以外的所有细胞；或者杀死表达不需要的抗原的变体。离体使用的例子包括在进行移植(HSCT)之前对造血干细胞(HSC)进行处理，以杀死患病或恶性肿瘤细胞。例如，在癌症治疗中的自体移植之前或在自身免疫性疾病的治疗中从骨髓中去除肿瘤细胞或淋巴细胞，或在移植之前为了防止移植物抗宿主疾病从同种异体骨髓或组织中除去T细胞和其他淋巴细胞。这样的临床离体治疗可以按如下步骤进行：从患者或其他个体收获骨髓，然后在含有血清的培养基中约37℃下孵育约15分钟至约48小时，在该培养基中加入本发明的偶联物，浓度范围从约1pM至0.1mM。具体的药物浓度和孵育时间(＝剂量)应当由专业临床医师决定。孵育后，用含血清的培养基洗涤骨髓细胞，并按照已知的方法通过静脉注射给患者。若患者在骨髓采集和再输注治疗细胞之间，还接受其它治疗(例如消融化疗或全身辐射疗程)的情况下，应使用标准医疗设备将处理后的骨髓细胞在液氮中冷冻储存。
稳定的偶联物应当在药物制剂中“保持其生物学活性”，例如，如果偶联物的生物活性在给定时间内，例如12个月，按照抗原结合测定和/或体外细胞毒性测定的方法，生物活性可以保持在相差20％以内，优选10％(在测定误差内)。
对于临床体内使用，本发明的偶联物将以溶液或冻干固体形式提供，其可以溶解在无菌注射用水中。适当的偶联物给药方案如下：每天一次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每次四周一次或每月一次、共8-54周，静脉给药。注射的剂量是在50至1000mL生理盐水中，可任选地向其中加入人血清白蛋白(例如0.5至1mL人血清白蛋白浓缩溶液，100mg/mL)。每周的剂量约为50μg至20mg/kg体重，静脉注射(每次注射10μg至200mg/kg的范围)。治疗后4-54周，患者可能会接受第二个疗程。关于给药方式，辅料，稀释剂，剂量，时间等的具体临床方案可以由熟练的临床医生确定。
用体内或者离体杀死特定细胞的方法，可以治疗的疾病的实例包括任何类型的恶性肿瘤、自身免疫疾病、移植排异和感染疾病(病毒、细菌或寄生虫)。
获得满意的生物学效应所需的偶联物的量将取决于许多因素，包括偶联物的化学特性，效力和生物利用度，疾病类型，患者的种族，患者的疾病状态，给药途径，这些决定了所需剂量，给药方式和给药方案。
一般而言，可以通过包含本发明的药物为含0.1至10％w/v偶联物的生理缓冲水溶液，用于肠胃外施用。典型剂量范围为1μg/kg至0.1g/kg体重每天、每周、每两周、每三周或每月一次，优选的剂量范围是人体等效剂量0.01mg/kg至20mg/kg体重每周，每两周，每三周或每月一次。待给药物的优选剂量可能取决于下列变量，如疾病的类型或病症的进展，患者的总体健康状况，所选化合物的相对生物学功效，药物的制剂，给药方式(静脉内，肌肉内或其他)，药物在确定的给药途径的药代动力学特性，给药速度(推注或连续输注)和给药方案(在给定时间内重复次数)。
本发明的偶联物还能够以单位剂量形式给药，其中术语“单位剂量”是指能够给予患者的单次剂量，并且可以很容易地处置和包装，同时活性偶联物本身或如下文所述的药学上可接受的组合物，保持物理和化学上稳定的单位剂量。典型的每天/每周/每两周/每月总剂量范围是从0.01至100mg/kg体重。作为一般指导原则，人类的单位剂量范围为1mg到3000mg每天/每周/每两周/每三周/每月。单位剂量优选1至500mg，一月一次至四次，更优选为1mg至100mg，每周/每两周/每三周一次。本文提供的偶联物可以通过与一种或多种药学上可接受的辅料混合而配制成药物组合物。这样的单位剂量组合物可以通过口服给药，如片剂，简单胶囊或软凝胶胶囊的形式的药物；或鼻内给药，如粉剂，滴鼻剂或气雾剂的药物；或皮肤给药，如使用局部用软膏，乳膏，乳液，凝胶或喷雾剂或通过透皮贴剂给药。所述组合物可以方便地以单位剂型给药，并且可以通过药学领域公知的一般方法制备，例如在Remington：The Science and Practice of Pharmacy，21th ed.；Lippincott Williams&Wilkins：Philadelphia，PA，2005.中所述的方法。
优选的制剂包括药物组合物，首选口服或非肠道给药。对于口服给药剂型，如片剂、粉剂、胶囊剂、片剂(锭剂)等可以包含一种或多种以下组分或有类似性质的其它化合物：粘合剂、比如微晶纤维素或黄耆胶；稀释剂，比如淀粉或乳糖；分散剂，比如淀粉和纤维素衍生物；润滑剂，比如硬脂酸镁；助流剂，比如二氧化硅胶体；甜味剂，比如蔗糖或糖精；增味剂，比如薄荷或水杨酸甲酯。胶囊可以是硬胶囊或软胶囊的形式，一般由明胶混合物，或与塑化剂混合制得，淀粉胶囊也是如此。另外，单位剂形可以包含各种其他原料，改变其物理形式，例如包覆糖衣，虫胶或肠溶剂。其它的口服剂型如糖浆或酏剂可以含有甜味剂，防腐剂，颜料，着色剂和调味剂。另外，活性化合物可以通过不同的处理和配方，使其成为可快速溶解的剂型，控释剂型或缓释剂，其中的缓释剂是较好的剂型。片剂首选包含乳糖、玉米淀粉、硅酸镁、交联羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯酮、硬脂酸镁、滑石等组合的剂型中。
非肠道给药的液体药剂包括无菌的水溶液或非水溶液、悬浮液和乳剂。液体药剂也可以含有粘合剂、缓冲液、防腐剂、螯合剂、甜味剂、调味剂和着色剂等等。非水溶剂包括醇、丙二醇、聚乙二醇、植物油比如橄榄油和有机脂类，比如油酸乙酯。水性溶剂包括了水、醇、缓冲试剂和盐的混合物，特别是，生物相容性的、可降解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯聚合物或者聚乙二醇/聚丙三醇共聚物可作为控制活性药物释放的辅料。静脉注射中的辅料可以包括液体和营养补充物、电解质补充物、以及基于林格氏葡萄糖的辅料，以及类似的辅料。本发明的活性药物其它可行的非肠道给药系统，包括乙烯-醋酸乙烯酯共聚物微粒，植入式渗透泵和脂质体。
其它可行的给药方式包括吸入剂，包括干粉剂、气雾剂和水滴剂。吸入剂可以是含有如聚乙二醇-9-月桂醚、甘胆酸盐、脱氧胆酸盐或油质的溶液，可以通过滴鼻剂，鼻内胶体的形式给药。口含药剂包括如锭剂、糖果锭剂等，可含有调味剂如蔗糖、阿拉伯胶以及其它辅料如甘胆酸盐等。栓剂适合于单位剂量的形式，以固体如可可油为载体，也可以加入水杨酸。皮肤局部用药剂型、以膏药、乳剂、洗液、贴片、凝胶、喷雾剂、气雾剂或油剂为首选。凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇类以及它们的混合物可以作为药物载剂。皮肤给药的剂型可以是贴片、乳剂、缓冲溶液、溶解或分散在聚合物或粘合剂中。
在另一个具体实施例中，发明申请的偶联物可以与其它的已知或即将已知的治疗药物，如化疗药物、放射疗法、免疫疗法药物、自身免疫疾病药物、抗感染药物或其它抗体药物偶联物共同作用，达到协同效果。在另一个具体实施例中，协同药物或放射治疗可以在本发明的共轭药物给药之前或之后给药或施行。可以是在本发明的偶联药物给药之前或之后1小时、12小时、一天、一星期、二星期、三星期、一个月、也可以是几个月进行。
在其他实施例中，协同药物包括但不限于：
1)化疗药物：a)烷基化剂，如氮芥：氯苯那普，氯普那嗪，环磷酰胺，达喀尔巴嗪，雌二醇氮芥，异环磷酰胺，氮芥，盐酸二甲氧胺，氧化二氮芥，盐酸氨氯地平，麦考酚酸，卫矛醇，呱泊溴烷，新氮芥，苯芥胆甾醇，松龙苯芥，噻替呱，曲磷胺对，尿嘧啶；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新、比折来新及其合成类似物)；多卡霉素(包括KW-2189和CBI-TMI、及其合成类似物)；苯并二氮卓二聚体(例如吡咯苯并二氮卓(PBD)或托美霉素，吲哚苯并二氮卓，咪唑苯并噻二氮卓或恶唑烷苯并二氮卓的二聚体)；亚硝基脲(卡莫司汀，洛莫司汀，氯化梭菌素，福莫司汀，尼莫司汀，拉莫司汀)；烷基磺酸盐(白苏芬、树苏芬、磺胺异丙磺胺和皮苏芬)；三氮烯(达喀尔巴嗪)；含铂化合物(卡铂，顺铂，奥沙利铂)；吖丙啶类，如苯并二氢吡喃酮，卡洛酮，美妥替派和乌雷多巴；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺，三亚乙基三胺，三乙基磷酰胺，三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基甲基胺；b)植物生物碱：如长春花生物碱(长春新碱，长春碱，长春地辛，长春瑞滨，去甲长春碱)；紫杉醇类(紫杉醇，多西紫杉醇及其类似物)；美登素类(DM1、DM2、DM3、DM4、美登素、安沙霉素及其类似物)；cryptophycin(特别是cryptophycin 1和cryptophycin 8)；埃博霉素，软珊瑚醇，迪莫利德，草苔虫内酯，海兔毒素，澳瑞他汀，cephalostatin；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑制素；c)DNA拓扑异构酶抑制剂，例如依托泊苷替尼(9-氨基喜树碱，喜树碱，克立那托，多拉霉素，依托泊苷，磷酸依托泊苷，伊立替康，米托蒽醌，诺消灵，视黄酸(视黄醇)，替尼泊苷，拓扑替康，9-硝基喜树碱(RFS 2000))；丝裂霉素(丝裂霉素C)；d)抗代谢物，例如抗叶酸剂，DHFR抑制剂(甲氨蝶呤，曲麦克特，二甲叶酸，蝶罗呤，氨喋呤(4-氨基苯甲酸)或其他叶酸类似物)；IMP脱氢酶抑制剂(麦考酚酸，噻唑呋林，利巴韦林，EICAR)；核糖核苷酸还原酶抑制剂(羟基脲，去铁胺)；嘧啶类似物，尿嘧啶类似物(安西他滨，阿扎胞苷，6-氮尿嘧啶，卡培他滨(希罗达)，卡莫氟，阿糖胞苷，双脱氧尿苷，脱氧氟尿苷，依诺他滨，5-氟尿嘧啶，氟尿苷，ratitrexed(Tomudex)；胞嘧啶类似物(阿糖胞苷，胞嘧啶阿拉伯糖苷，氟达拉滨)；嘌呤类似物(硫唑嘌呤，氟达拉滨，巯嘌呤，硫胺素，硫鸟嘌呤)；叶酸补充剂，如弗洛林酸；e)激素疗法剂，如受体拮抗剂，抗雌激素(甲地孕酮，雷洛昔芬，他莫昔芬)，LHRH兴奋剂(戈斯他林，醋酸亮丙瑞林)；抗雄激素药(比卡鲁胺，氟他胺，卡鲁司酮，丙酸倍他雄酮，表雄甾醇，戈舍瑞林，亮丙瑞林，美替利定，尼鲁米特，睾内酯，曲洛司坦及其他雄激素抑制剂)；维甲类化合物，维生素D3类似物(CB1093，EB1089，KH1060，胆钙化醇，麦角钙化甾醇)；光动力疗法剂(维替泊芬，酞菁，光敏剂Pc4，去甲氧基-竹红菌素A)；细胞因子(干扰素-α，干扰素-γ，肿瘤坏死因子(TNF)，含TNF的人蛋白)；f)激酶抑制剂，如BIBW 2992(抗-EGFR/Erb2)，伊马替尼，吉非替尼，呱加他尼，索拉非尼，达沙替尼，舒尼替尼，厄洛替尼，尼洛替尼，拉帕替尼，阿西替尼，帕唑帕尼，凡德他尼，E7080(抗VEGFR2)，mubritinib，普纳替尼(AP24534)，bafetinib(INNO-406)，bosutinib(SKI-606)，卡博替尼，维莫德吉，iniparib，鲁索利替尼，CYT387，阿西替尼，tivozanib，索拉非尼，贝伐单抗，西妥昔单抗，曲妥珠单抗，雷珠单抗，帕尼单抗，伊斯平斯；g)聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂，如奥拉帕里、尼拉帕里、依尼帕里、塔拉佐帕里、维利帕里、维利帕里、CEP 9722(Cephalon)、E7016(Eisai)、BGB-290(Beigene)、3-氨基苯甲酰酰胺；h)抗生素，如烯二炔类抗生素(卡奇霉素，特别是卡奇霉素γ1，δ1，α1和β1(参考J.Med.Chem.1996，39(11)，2103-2117；Angew Chem Intl.Ed.Engl.1994，33：183-186)，达因霉素，包括达因霉素A和脱氧米霉素，埃斯培拉霉素，卡塔尔霉素，C-1027，maduropeptin，新卡嗪奥斯汀和相关色蛋白烯二炔抗生素)，aclacinomysins，放线菌素，安曲霉素，重氮丝氨酸，博来霉素，卡诺霉素，卡拉霉素，洋红霉素，嗜癌素，色霉素，达金霉素，柔红霉素，去柔红霉素，6-重氮-5-氧代-L-去甲亮氨酸，阿霉素，吗啉-阿霉素，氰基吗啉-阿霉素，2-吡咯啉阿霉素和脱氧柔红霉素，表柔比星，阿柔比星，伊达比星，马可霉素，nitomycin，霉酚酸，诺加霉素，橄榄霉素，peplomycin，potfiromycin，嘌呤霉素，奎拉霉素，罗道霉素，链黑霉素，链脲霉素，杀结核菌素，乌苯美司，净司他丁，佐柔比星；i)其他，如聚酮化合物(番荔素)，特别是bullatacin和bullatacinone；吉西他滨，环氧酶素(如卡菲偌米布)，硼替佐米，沙利度胺，来那度胺，pomalidomide，tosedostat，zybrestat，PLX4032，STA-9090，Stimuvax，allovectin-7，Xegeva，Provenge，Yervoy，异戊二烯化抑制剂(如洛伐他汀)，多巴胺能神经毒素(如星形孢菌素)，放线菌素(如放线菌素D，更生霉素)，博莱霉素(如博来霉素A2，博莱霉素B2，培洛霉素)，蒽环类抗生素(如柔红霉素)，鹅膏毒素，阿霉素(亚德里亚霉素)，伊达比星，表柔比星，吡柔比星，佐柔比星，米托蒽醌，MDR抑制剂(如维拉帕米)，Ca2+ATP酶抑制剂(如毒胡萝卜素)，组蛋白去乙酰酶抑制剂(伏立诺他，罗米地辛，帕比司他，丙戊酸，Mocetinostat(MGCD0103)，Belinostat，PCI-24781，恩替诺特，SB939，Resminostat，Givinostat，AR-42，CUDC-101，萝卜硫素，曲古抑菌素A)；塞来昔布，格列酮类，表没食子儿茶素没食子酸酯，双硫仑，Salinosporamide A；抗肾上腺药物，如氨鲁米特，米托坦，曲洛司坦，醋葡醛内酯，醛磷酰胺，氨基乙酰丙酸，安吖啶，阿拉伯糖苷，bestrabucil，比生群，edatraxate，defofamine，美可辛，地吖醌，依氟鸟氨酸(DFMO)，elfomithine，依利醋铵，依托格鲁，硝酸镓，胞嘧啶，羟基脲，伊班膦酸盐，香菇多糖，氯尼达明，米托胍腙，米托蒽醌，莫呱达醇，二胺硝吖啶，喷司他丁，蛋氨氮芥，吡柔比星，鬼臼酸，2-乙肼，甲基苄肼；
Figure GDA0003907478750001181
呱嗪二酮丙烷；根霉素；西佐；螺环锗；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；三氯三乙胺；单端孢霉烯(特别是T-2毒素，疣孢菌素A，杆孢菌素A和anguidine)，聚氨酯，siRNA，反义药物和核酸分解酶；
2)自身免疫疾病药物，包括但不限于，环孢菌素、环孢菌素A、氨基己酸、硫唑嘌呤、溴隐亭、苯丁酸氮芥、氯喹、环磷酰胺、皮质类固醇(例如安西奈德、倍他米松、布地奈德、氢化可的松、氟尼缩松、丙酸氟替卡松、氟可龙达那唑、地塞米松、曲安奈德、二丙酸倍氯米松)、DHEA、依那西普、羟基氯喹、英夫利昔单抗、美洛昔康、甲氨蝶呤、麦考酚酸酯、泼尼松、西罗莫司、他克莫司；
3)抗传染病剂包括，但不限于：a).氨基糖苷类：丁胺卡那霉素、武夷霉素庆大霉素(奈替米星、西索米星、异帕米星)、潮霉素、卡那霉素(丁胺卡那霉素、阿贝卡星、氨基去氧卡那霉素、地贝卡星、妥布霉素)、新霉素(新霉素B、巴龙霉素、核糖霉素)、奈替米星、大观霉素、链霉素、妥布霉素、甲基姿苏霉素；b).酰胺醇类：叠氮氯霉素、氯霉素、氟甲砜霉素、甲砜霉素；c).安沙霉素类：格尔德霉素、除莠霉素；d).碳青霉烯类：比阿培南、多尼培南、厄他培南、亚胺培南/西司他丁、美罗培南、帕尼培南；e).头孢类：碳头孢烯(氯碳头孢)、头孢乙腈、头孢克洛、头孢拉定、头孢羟氨苄、头孢罗宁、头孢噻啶、头孢噻吩或头孢菌素、头孢氨苄、头孢来星、头孢孟多、头孢匹林、头孢三嗪、头孢氮氟、头孢西酮、头孢唑啉、头孢拉宗、头孢卡品、头孢达肟、头孢吡肟、头孢米诺、头孢西丁、头孢丙烯、头孢沙定、头孢替唑、头孢呋辛、头孢克肟、头孢地尼头孢妥仑、头孢吡肟、头孢他美、头孢甲肟、头孢地嗪、头孢尼西、头孢哌酮、头孢雷特、头孢噻肟、头孢替安、头孢唑兰、头孢氨苄、头孢咪唑、头孢匹胺、头孢匹罗、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢喹肟、头孢磺啶、头孢他啶、头孢特仑、头孢布烯、头孢噻林、头孢唑肟、头孢、头孢曲松、头孢呋辛、头孢唑喃、头霉素(头孢西丁、头孢替坦、头孢美唑)氧头孢烯(氟氧头孢、拉氧头孢)；f).糖肽：博来霉素、万古霉素(奥利万星、特拉万星)、替考拉宁(达巴万星)雷莫拉宁；g).甘氨酰：如替加环素；h).β-内酰胺酶抑制剂：青霉烷(舒巴坦、他唑巴坦)、克拉维烷(克拉维酸)；i).林可酰胺类：克林霉素、林可霉素；j).脂肽：达托霉素、A54145、钙依赖性抗生素(CDA)；k).大环内酯类：阿奇霉素、喹红霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、氟红霉素、交沙霉素、酮内酯类(泰利霉素、喹红霉素)麦迪霉素、美奥卡霉素、竹桃霉素、利福霉素(利福平、利福平、利福布汀、利福喷丁)、罗他霉素、罗红霉素、壮观霉素、螺旋霉素、他克莫司(FK506)、醋竹桃霉素、泰利霉素；l).单环β-内酰胺抗生素：氨曲南、替吉莫南；m).唑烷酮类：利奈唑胺；n).青霉素类：阿莫西林、氨苄西林(匹氨西林、海他西林、巴氨西林、美坦西林、酞氨西林)叠氮西林、阿洛西林、青霉素、苄星青霉素、苯氧基苄星青霉素、氯甲西林、普鲁卡因青霉素、羧苄青霉素(卡茚西林)、邻氯青霉素、双氯青霉素、先锋霉素、氟氯西林、美西林(氮卓脒青霉素双酯)、美洛西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、醋甲西林、青霉素、奈西林、青霉素、哌拉西林、苯丙西林、磺苄西林、替莫西林、替卡西林；o).多肽：杆菌肽、多粘菌素E、多粘菌素B；p).喹诺酮类药物：阿拉沙星、巴洛沙星、环丙沙星、克林沙星、达氟沙星、二氟沙星、依诺沙星、恩诺沙星、Floxin、加雷沙星、加替沙星、吉米沙星、格帕沙星、曲伐沙星卡诺、左氧氟沙星、洛美沙星、麻保沙星、莫西沙星、那氟沙星、诺氟沙星、奥比沙星、氧氟沙星、培氟沙星、曲伐沙星、格帕沙星、西他沙星、司帕沙星、替马沙星、妥舒沙星、曲伐沙星；q).菌素：普那霉素、奎奴普丁/达福普汀)；r).磺胺类药物：磺胺米隆、百浪多息、磺胺醋酰、磺胺甲、磺胺、柳氮磺胺吡啶、磺胺异恶唑、甲氧苄氨嘧啶、甲氧苄啶-磺胺甲基异恶唑(复方新诺明)；s).类固醇抗菌药物：如夫西地酸；t).四环素类：强力霉素、金霉素、氯羟四环素、地美环素、赖甲环素、氯甲烯土霉素、美他环素、米诺环素、土霉素、青哌四环素、罗利环素、四环素、甘氨酰(如替加环素)；u).其他类型的抗生素：番荔枝科、胂凡纳明、细菌萜醇抑制剂(杆菌肽)、DADAL/AR抑制剂(环丝氨酸)、dictyostatin、海绵内酯、艾榴塞洛素、埃博霉素、乙胺丁醇、依托泊苷、法罗培南、夫西地酸、痢特灵、异烟肼、laulimalide、甲硝唑、莫匹罗星、mycolactones、NAM合成抑制剂(如磷霉素)、呋喃妥因、紫杉醇、平板霉素、吡嗪酰胺、奎奴普丁/达福普汀、利福平、他唑巴坦替硝唑、番荔枝内酯；
4)抗病毒的药物：a).进入/融合抑制剂：aplaviroc、马拉韦罗、维立韦罗、gp41的(恩夫韦)、PRO140、CD4(Ibalizumab)；b).整合酶抑制剂：拉替拉韦、埃替拉韦、globoidnanA；c).成熟抑制剂：贝韦立马、vivecon；d).神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦；e).核苷和核苷酸：阿巴卡韦、阿昔洛韦、阿德福韦、氨多索韦、apricitabine、溴夫定、西多福韦克拉夫定、右艾夫他滨、去羟肌苷(DDI)、艾夫他滨、恩曲他滨(FTC)、恩替卡韦、泛昔洛韦、氟脲嘧啶(5-FU)、3'-氟取代的2'，3'-二脱氧核苷衍生物(例如，3'-氟-2'，3'-二脱氧胸苷(FLT)和3'-氟-2'，3'-双脱氧(FLG)福米韦生、更昔洛韦、碘苷、拉米夫定(3TC)、L-核苷(如β-L-胸苷、β-L-2'-脱氧胞苷)、喷昔洛韦、Racivir、利巴韦林、stampidine、司他夫定(d4T的)、他利韦林(伟拉咪定)、替比夫定、替诺福韦、伐昔洛韦三氟胸苷、缬更昔洛韦、扎西他滨(DDC)、齐多夫定(AZT)；f).非核苷类：金刚烷胺、ateviridine、卡普韦林、二芳基嘧啶(依曲韦林、利匹韦林)、地拉韦啶、二十二烷醇、乙米韦林、依法韦仑、膦甲酸(磷酰基甲酸)、咪喹莫特、干扰素α、洛韦胺、洛德腺苷、他巴唑、奈韦拉平、NOV-205、聚乙二醇干扰素α、鬼臼毒素、利福平、金刚乙胺、瑞喹莫德(R-848)、醋胺金刚烷；g).蛋白酶抑制剂：安普那韦、阿扎那韦、博赛泼维、达芦那韦、福沙那韦、茚地那韦、洛匹那韦、奈非那韦、pleconaril、利托那韦、沙奎那韦、特拉匹韦(VX-950)替拉那韦；h).其他类型的抗病毒的药物：抗体酶、阿比朵尔、calanolides A、浅蓝菌素、蓝藻-N、二芳基嘧啶、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、膦甲酸钠、格瑞弗森、他利韦林(伟拉咪定)、羟基脲、KP-1461、米替福新、普来可那立、合成抑制剂、利巴韦林、seliciclib；
5)放射治疗使用的放射性同位素。放射性同位素(放射性核素)的实例有3H，11C，14C，18F，32P，35S，64Cu，68Ga，86Y，99Tc，111In，123I，124I，125I，131I，133Xe，177Lu，211At或213Bi。放射性同位素标记的抗体可用于受体靶向成像实验，或者可用于如本发明的抗体-药物偶联物的靶向治疗(Wu等，Nature Biotechnology 2005，23(9)：1137-1146)。细胞结合分子，例如抗体可以连结配合试剂，用文献(Current Protocols in Immunology，Volumes 1and 2，Coligen等，Ed.Wiley-Interscience，New York，N.Y.，Pubs.(1991))所述的方法与放射性金属结合、络合或生成复合物。可以络合金属离子的配体包括DOTA，DOTP，DOTMA，DTPA和TETA(Macrocyclics，Dallas，TX)等；
6)作为协同剂的其它细胞结合分子-药物偶联物。优选的协同偶联物上的细胞毒性分子为：喜树碱类似物、美登素生物碱类似物、紫杉醇(紫杉烷)类似物、CC-1065类似物、柔红霉素和多柔比星化合物、鹅膏毒素类似物、苯并二氮杂二聚体(如吡咯苯并二氮卓(PBD)、托马霉素、安曲霉素、吲哚苯并噻二氮卓类、咪唑苯并噻二氮卓类或恶唑烷苯并二氮卓的二聚体)、加利西霉素和烯二炔类抗生素化合物、放线菌素、重氮丝氨酸、博莱霉素、表柔比星、他莫昔芬、伊达比星、海兔毒素、澳瑞他汀(如MMAE、MMAF、澳瑞他汀PYE、澳瑞他汀TP、澳瑞他汀2-AQ、6-AQ、EB(AEB)和EFP(AEFP))、多卡米星、格尔德霉素、氨甲喋呤、噻替派、长春碱、长春新碱、hemiasterlin、纳沙酰胺、小金霉素、radiosumin、互花米草素、microsclerodermin、噻吩甲酰胺、埃斯呱霉素、PNU-159682，以及它们的类似物及衍生物；
7)其他免疫治疗药物例如：咪喹莫特，干扰素(如α，β)，粒细胞集落刺激因子，细胞因子，白介素(IL-1-IL-35)，抗体(如曲妥珠单抗，帕妥珠单抗，贝伐单抗，西妥昔单抗，帕尼单抗，英夫利昔单抗，阿达木单抗，巴利昔单抗，达利珠单抗，奥马珠单抗，PD-1或PD-L1)，蛋白-结合药物(如Abraxane)，偶联下列药物的抗体：卡奇霉素衍生物，美登素衍生物(DM1和DM4)，CC-1065，SN-38，伊喜替康，拓扑替康，拓扑异构酶I抑制剂，多卡霉素，PBD或IGN小沟结合剂，有效的紫杉醇衍生物，阿霉素，澳瑞他汀抗有丝分裂药物，例如曲妥珠单抗-DM1，Trastuzumab deruxtecan(DS-8201a)，Inotuzumab ozogamicin，Brentuximab vedotin，Sacituzumab govitecan，Glembatumumab vedotin，Lorvotuzumab mertansine，AN-152LMB2，TP-38，VB4-845，Cantuzumab mertansine，AVE9633，SAR3419，CAT-8015(抗-CD22)，IMGN388，Mirvetuximab soravtansine(IMGN853)，Enfortumab vedotin，Milatuzumab-doxorubicin，SGN-75(抗CD70)，抗Her3-依喜替康，抗-Trop2-依喜替康，抗-CD79b-MMAE，抗-Her2-MMAE，抗-Trop2-MMAE，抗-Her2-MMAF，抗-Trop2-MMAF，抗-CD22-卡奇霉素衍生物，抗-CD22-MMAE，抗-Her2-澳瑞他汀衍生物，抗Muc1-澳瑞他汀衍生物，抗-cMet-澳瑞他汀衍生物或抗Claudin18.2-澳瑞他汀衍生物；
8)上述任何药物的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
在另一种协同免疫疗法中，免疫检查点抑制剂抗体，TCR(T细胞受体)T细胞抗体，CAR(嵌合抗原受体)T细胞抗体或B细胞受体(BCR)抗体，Natural killer(NK)细胞抗体或细胞毒细胞的抗体，或抗-CD3，CD4，CD8，CD16(FcγRIII)，CD19，CD20，CD22，CD25，CD27，CD30，CD33，CD37，CD38，CD40，CD40L，CD45RA，CD45RO，CD56，CD57，CD57bright，CD70，CD79，CD79b，CD123，CD125，CD138，TNFβ，Fas配体，MHC I类分子(HLA-A，B，C)，VEGF或NKR-P1抗原的抗体，优选与本专利的偶联物一起用于协同治疗。
在另一个实施方案中，包含治疗有效剂量的结构式为(I)至(VII)的偶联物，或本发明中描述的其它任何偶联物的药物组合物，可以与其他治疗剂，如化学治疗剂，放射治疗剂，免疫治疗剂，自身免疫病症治疗剂，抗感染剂或其他偶联物协同给药，以有效治疗或预防癌症或自身免疫疾病或感染性疾病。协同剂优选自以下药物中的一种或几种：阿巴西普、醋酸阿比特龙、对乙酰氨基酚/氢可酮、阿达木单抗、ADXS31-142、ADXS-HER2、阿法替尼马来酸盐、阿仑单抗、曲妥珠单抗、苯丙胺/右苯丙胺、阿那曲唑、阿扎那韦、Atezolizumab、阿托伐他汀、阿昔替尼、贝林、BCG Live、贝伐单抗、卡巴他赛、卡博替、贝沙罗汀、blinatumomab、硼替佐米、波舒替尼、brentuximab vedotin、布地奈德、布地奈德/福莫特罗、丁丙诺啡、卡培他滨、卡非佐米、塞来考昔、ceritinib、西妥昔单抗、环孢素、西那卡塞、克里唑替尼、达比加群、达拉菲尼、阿法达贝汀、地瑞那韦、甲磺酸伊马替尼、达沙替尼、地尼白介素、狄诺塞麦、双丙戊酸钠、右兰索拉唑、右呱甲酯、Dinutuximab、多西环素、度洛西汀、恩曲他滨/利匹韦林/替诺福韦地索普西富马酸盐、恩曲他滨/替诺福韦/依法韦仑、依诺肝素、恩杂鲁胺、阿法依泊汀、厄洛替尼、埃索美拉唑、依折麦布、依折麦布/辛伐他汀、非诺贝特、非格司亭、芬戈莫德、丙酸氟替卡松、氟替卡松/沙美特罗、氟维司群、吉非替尼、格拉替雷、醋酸戈舍瑞林、伊马替尼、替伊莫单抗、依鲁替尼、胰岛素门冬胰岛素、地特胰岛素、甘精胰岛素、赖脯胰岛素、干扰素β1a、干扰素β1b、拉帕替尼、Ipilimumab、异丙托溴铵/沙丁胺醇、醋酸兰乐肽、来那度胺、联合二甲苯磺酸盐、来曲唑、左甲状腺素、左旋甲状腺素、利多卡因、利奈唑胺、利拉鲁肽、MEDI4736、美金刚、呱醋甲酯、美托洛尔、莫达非尼、莫米松、尼罗替尼、Nivolumab、奥法木单抗、奥立他珠单抗、帕唑帕尼、派姆单抗、培美曲塞、帕妥珠单抗、肺炎球菌结合疫苗、泊马度胺、普瑞巴林、喹硫平、雷贝拉唑氯化镭223、雷洛昔芬、拉替拉韦、雷莫瑞单抗、雷珠单抗、瑞格菲尼、利妥昔单抗、利伐沙班、罗米地辛、罗苏伐他汀、鲁索替尼磷酸盐、沙丁胺醇、司维拉明、西地那非、siltuximab、西他列汀、西他列汀/二甲双胍、索非那新、索拉非尼、舒尼替尼、他达拉非、他莫昔芬、替拉普韦、替西罗莫司、替诺福韦/恩曲他滨、睾酮凝胶、沙利度胺(Talidex)、噻托溴铵、托瑞米芬、曲美替尼、曲妥珠单抗、Tretinoin、尤特克单抗、缬沙坦、凡德他尼、维罗非尼、伏立诺他、阿柏西普、Zostavax及其类似物、衍生物、药学上可接受的盐、载体、稀释剂或辅料或上述的组合。
另外，本发明还涉及偶联物的制备方法。本发明的偶联物可以通过本领域技术人员公知的方法制备。偶联物中喜树碱类似物可以通过采用或者应用后文所述合成方法而制备，或经本领域技术人员调整后来合成。适当的修饰和替代对于本领域技术人员而言将是显而易见的和众所周知的，并且可以从科学文献中容易地获得。这些方法可以参见：R.C.Larock，Comprehensive Organic Transformations，第二版，Wiley-VCH Publishers出版，1999。
进行本申请所述的反应时，可能有必要保护部分活性官能团，例如羟基、氨基、亚氨基、巯基和羧基，以避免副反应的发生。保护官能团的常见方法可参见P.G.Wuts andT.W.Greene，Greene's Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley-Interscience出版；第四版(2006)。有些反应可能需要在酸碱存在时，或在适当的溶剂中进行。对酸、碱和溶剂并没有特别的限制，只要没有不利的影响，任何常规的酸、碱以及溶剂都可以在这里使用。反应可以在广泛的温度范围内进行。总的来说，反应温度通常在-80℃-150℃之间比较容易操作(在室温与100℃之间更好)。反应所需的时间同样可以在很大的范围里变化，这取决于多种因素，尤其是反应温度和所用溶剂的性质。一般地说，理想条件下的反应，3至20小时的反应时间就足够了。
反应结束后的后处理操作可以按常规方法进行。例如，可以通过把溶剂从反应体系中蒸掉的方式回收反应产物。或者，如果必要的话，在把溶剂蒸出后，可以先把剩余物倒入水中，再用与水不互溶的有机溶剂萃取，最后，蒸出萃取溶剂。此外，如有需要，产物还可通过各种常见的方法进一步纯化，如重结晶、析出沉淀或各种色谱层析的方法，如柱层析和制备薄板层析法。本发明中的喜树碱类似物及其偶联物的合成见图1-32。
本发明的细胞结合分子与喜树碱类似物的偶联也在实施例中有进一步的描述。当然，本发明并不局限于下述实施例。
实施例
以下实施例进一步描述本发明，这些实施例无意于限制本发明的范围。除非另有说明，以下示例中所述的细胞系根据美国典型培养物保藏中心(ATCC)或德国不伦瑞克的德国Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DMSZ)或中国科学院上海细胞培养所指定的条件进行培养。除非另有说明，细胞培养试剂来自InvitrogenCorp.。氨基酸和它们的衍生物以及预装的树脂来自默克化工国际公司或Synthetech公司，或肽国际公司或Chembridge国际公司或西格玛奥德里奇(默克公司)。一些连接子，NHS酯/马来酰亚胺的连接子(AMAS，BMPS，GMBS，MBS，SMCC，EMCS或Sulfo-EMCS，SMPB，SMPH，LC-SMCC，Sulfo-KMUS，SM(PEG)4，SM(PEG)6，SM(PEG)8，SM(PEG)12，SM(PEG)24)；NHS酯/吡啶基二硫醇(SPDP，LC-SPDP或Sulfo-LC-SPDP，SMPT，Sulfo-LC-SMPT)；NHS酯/卤代乙酰(SIA，SBAP，SIAB或Sulfo-SIAB)；NHS酯/重氮(SDA或Sulfo-SDA，LC-SDA或Sulfo-LC-SDA，SDAD或Sulfo-SDAD)；马来酰亚胺/酰肼(BMPH，EMCH，MPBH，KMUH)；吡啶基二硫醇/酰肼(PDPH)；异氰酸酯/马来酰亚胺(PMPI)购自Thermo Fisher Scientific Co.SPDB和SPP连接子根据参考文献(Cumber，A.等人，Bioconjugate Chem。，1992，3，397-401)制备。Roche的曲妥珠单抗在中国的药店采购。Trop-2抗体是Sacituzumab的生物衍生物，公司内部生产。EGFR抗体指Nimotuzumab，是从中国药店购买的。PEG和PEG衍生物购自中国浙江省嘉兴市BiomatrikInc。拓扑替康及其衍生物或主要中间体，来自若干公司，例如中国成都天源天然产物有限公司，中国苏州光明生物医学有限公司。实验动物通过中国南京的GemPharmatech有限公司和中国上海的SLAC实验动物有限公司，购自国家模型小鼠资源中心。T-DM1是通过中国香港的一家药店从罗氏公司购买的。购买的所有其他试剂和溶剂均为可用的最高等级，无需进一步纯化即可使用。EDC(EDCI)，PFP，HATU，TATU，PyBrOP，DIPEA，TEA，PPTS，DMAP，BrOP，p-TSA，DTT，EDTA，TCEP，NHS，三氟乙酸，Ellman试剂，Traut试剂(2-亚氨基硫杂环戊烷)，γ-硫代丁内酯和所有其他化学试剂以及无水溶剂均来自Sigma-Aldrich International(Merck)或Aladdin Chemical(Shanghai)Ltd。所有无水溶剂均通过商业途径获得，并在氮气下保存在Sure-seal瓶中。在Varain PreStar HPLC上进行制备HPLC分离(乙腈/水，含有甲酸或三氟乙酸)。NMR光谱在Bruker 500MHz仪器上分析测得。化学位移(δ)以百万分数(ppm)为单位报告，以四甲基硅烷(0.00ppm)为参考值，偶合常数(J)以Hz为单位报告。质谱数据在装有Acquity UPLC分离模块和Acquity TUV检测器的Waters Xevo G2 QTOF质谱上获得的。
实施例1.(S)-(1-((4-乙基-4，9-二羟基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃[3'，4'；6，7]吲哚并[[1，2-b]喹啉-10-基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2)的合成。
Figure GDA0003907478750001241
向10-羟基喜树碱(2g，5.49mmol)的乙酸(10mL)溶液中加入4-叔丁氧基羰基氨基哌啶(4.4g，21.9mmol)和37％甲醛(1.8g，21.9mmol)的乙酸(15mL)溶液。将反应混合物加热至约60℃并搅拌2小时，然后去除乙酸。在10mL甲醇中重结晶，得到化合物2(2.1g，68％收率)，为黄色粉末状固体。ESI-MS m/z：[M+H]+C31H36N4O7：计算值577.26；实测值577.26。
实施例2.(S)-10-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)-4-乙基-4，9-二羟基-1H-吡喃并[3'，4'；6，7]吲哚并[1，2]-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(3)的合成。
Figure GDA0003907478750001242
将化合物2(150mg，0.26mmol)溶解于二氯甲烷和三氟乙酸(2mL/6mL)的混合物中，并在室温搅拌1小时。然后将混合物浓缩并在真空泵上干燥，得到化合物3(120mg，100％收率)，为黄色固体。ESI-MS m/z：[M+H]+C26H28N4O5：计算值477.21；实测值477.21。
实施例3.化合物(S)-4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(1-((4-乙基-4，9-二羟基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-10-基)甲基)哌啶-4-基)丁酰胺(5)的合成。
Figure GDA0003907478750001251
将化合物3(62mg，0.13mmol)和五氟苯基4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸酯(化合物4，56mg，0.16mmol)溶于DMF(5mL)，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(45μL，0.16mmol)，将反应升温至室温，搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物5(44mg，54％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C34H35N5O8：计算值642.25；实测值642.25。
实施例4.(S)-五氟苯基30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-27，31-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代-26，32-二氮杂三十六烷-36-甲酸酯(7)的合成。
Figure GDA0003907478750001252
将化合物6(100mg，0.13mmol)溶于二氯甲烷(5mL)的溶液中，加入五氟苯酚(48mg，0.26mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(50mg，0.26mmol)。将反应物在室温搅拌2小时，并用二氯甲烷(50mL)稀释，用水(2×10mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物7(120mg，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C40H57F5N4O15：计算值929.37；实测值929.37。
实施例5.(S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-N1-(4-((1-(((S)-4-乙基-4，9-二羟基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'；6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-10-基)甲基)哌啶-4-基)氨基)-4-氧代丁基)-N5-(2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代二十五烷-25-基)戊二酰胺(8)的合成。
Figure GDA0003907478750001261
将化合物3(60mg，0.126mmol)和化合物7(97mg，0.105mmol)溶于DMF(5mL)中，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(37μL，0.21mmol)。将反应升温至室温，搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物8(50mg，39％收率)。ESI-MSm/z：[M+H]+C60H84N8O19：计算值1221.59；实测值1221.59。
实施例6.3-(2-(2-(2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(10)的合成。
Figure GDA0003907478750001262
将化合物9(1.32g，5.7mmol)溶解于DMF(10mL)中，加入4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸(1.04g，5.7mmol)，随后依次加入HATU(2.6g，6.8mmol)和三乙胺(0.96mL，6.8mmol)，并在室温下搅拌反应1小时，用二氯甲烷(100mL)稀释，用水(2×10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残余物通过柱色谱法(乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到化合物10(1.8g，80％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C19H30N2O7：计算值399.21；实测值399.21。
实施例7.3-(2-(2-(4-(2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)乙氧基)乙氧基)丙酸(11)的合成。
Figure GDA0003907478750001263
将化合物10(0.40g，1.0mmol)溶解于二氯甲烷和三氟乙酸(12mL/4mL)的混合溶液中，并在室温搅拌1小时。然后将混合物浓缩，与二氯甲烷浓缩两次，并在真空泵上干燥，得到呈黄色固体的化合物11(0.34g，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C15H22N2O7：计算值343.14；实测值343.14。
实施例8.五氟苯基3-(2-(2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁亚氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸酯(12)的合成。
Figure GDA0003907478750001271
将化合物11(0.34g，1.0mmol)溶于二氯甲烷(30mL)的溶液中，加入五氟苯酚(0.46g，2.5mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.57g，3.0mmol)。将反应物在室温搅拌2小时，并用二氯甲烷(50mL)稀释，用水(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物12(0.51g，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C21H22F5N2O7：计算值509.13；实测值509.13。
实施例9.N，N-二甲基哌啶-4-胺的(13)合成。
Figure GDA0003907478750001272
将N-Boc哌啶酮(10g，0.05mol)溶于甲醇(100mL)中，加入二甲胺水溶液(25mL，0.22mol)，与10％Pd/C(1g)在室温下催化加氢搅拌过夜。过滤后，将滤液浓缩并与二氯甲烷共浓缩3次(3×80mL)，并在真空泵上干燥以除去所有二甲基胺。将盐酸/甲醇(4M，50mL)加入到残余物中，并在室温搅拌30分钟。沉淀出大量白色固体，将混合物过滤，得到白色固体13(9g，90％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C7H16N2，计算值129.13；实测值129.13。
实施例10.(9H-芴-9-基)甲基4-(二甲氨基)哌啶-1-甲酸酯(14)的合成。
Figure GDA0003907478750001273
将化合物13(2.0g，9.9mmol)溶解在1，4-二恶烷和水(30mL/50mL)的混合溶液中，并加入碳酸氢钠(2.5g，29.8mmol)，将混合物冷却至0℃，滴加9-芴基甲氧基羰基氯(3.1g，11.9mmol)的1，4-二恶烷(10mL)溶液。加完后，温度逐渐升高到室温，将反应物搅拌1小时。加入100mL的1M盐酸，并将混合物用乙酸乙酯(3×50mL)洗涤，用碳酸钠将水相调节至pH～10，然后用二氯甲烷(3×50mL)萃取。用水(50mL)洗涤合并的有机相，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过柱色谱法(甲醇/二氯甲烷)纯化，得到化合物14(2.75g，79％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C22H26N2O2，计算值351.20；实测值351.20。
实施例11.(S)-叔丁基(1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸酯(15)的合成。
Figure GDA0003907478750001274
将对氨基苄醇(5.0g，0.04mol)和Boc-L-丙氨酸(8.0g，0.042mol)溶解在无水THF(100mL)中，加入2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉(11g，0.044mol)并在室温搅拌过夜。将反应混合物倒入水(300mL)中，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，合并的有机相用水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物与乙酸乙酯/石油醚(1；3)一起研磨，过滤，得到化合物15(9.8g，84％收率)，为白色固体。ESI-MS m/z：[M+H]+C15H22N2O4：计算值295.16；实测值295.16。
实施例12.(S)-叔丁基(1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸酯(16)的合成。
Figure GDA0003907478750001281
将化合物3(3.5g，11.9mmol)和四溴化碳(5.9g，17.8mmol)溶解在二氯甲烷(80mL)中，冷却至约0℃，并加入三苯基膦(4.7g，17.8mmol)。反应升温至室温并搅拌30分钟，然后加入20g硅胶，混合，并在旋转浓缩仪上干燥，并上样至硅胶柱(100g硅胶)上，并用石油醚/乙酸乙酯洗脱，得到化合物16(2.6g，62％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C15H21BrN2O3：计算值357.07；实测值357.07。
实施例13.(S)-1-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N-(4-(2-(叔丁氧基羰基)氨基)丙酰胺基)苄基)-N，N-二甲基哌啶-4-溴化胺(17)的合成。
Figure GDA0003907478750001282
将化合物16(2.3g，6.4mmol)和化合物14(2.7g，7.7mmol)溶解于无水THF(50mL)中，并在室温下搅拌过夜。在旋转浓缩仪上除去大部分THF后，将乙酸乙酯(50mL)加入到残余物中。过滤得到的浆液，得到白色固体(4.5g，100％收率)。ESI-MS m/z：M+C37H47N4O5：计算值627.35；实测值627.35。
实施例14.(S)-N-(4-(2-(叔丁氧羰基)氨基)丙酰胺基)苄基)-N，N-二甲基哌啶-4-溴化胺(18)的合成。
Figure GDA0003907478750001283
将化合物17(1.0g，1.41mmol)溶解的DMF(5mL)中，并加入哌啶(1mL)。在室温搅拌30分钟后，加入30mL乙酸乙酯，并搅拌10分钟。过滤混合物，得到白色粉末状固体(550mg，80％收率)。ESI-MS m/z：M+C22H37N4O3：计算值405.29；实测值405.29。
实施例15.N-(4-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰胺基)苄基)-1-((S)-4-乙基-4，9-二羟基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-10-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-溴化胺(19)的合成。
Figure GDA0003907478750001291
向10-羟基喜树碱(375mg，1.03mmol)的乙酸(5mL)溶液中加入化合物18(550mg，1.13mmol)和37％甲醛(92mg，1.13mmol)的乙酸溶液(5mL)。将该混合物加热至约65℃并搅拌1小时，然后浓缩，与无水甲醇浓缩。用二氯甲烷和少量甲醇重结晶，得到化合物19(0.5g，63％收率)，为黄色粉末。ESI-MS m/z：M+C43H53N6O8：计算值781.39；实测值781.39。
实施例16.N-(4-((S)-2-氨基丙氨基)苄基)-1-(((S)-4-乙基-4，9-二羟基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-10-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-溴化胺(20)的合成。
Figure GDA0003907478750001292
将化合物19(50mg，0.058mmol)溶解于二氯甲烷和三氟乙酸(2mL/6mL)的混合溶液中，并在室温搅拌30分钟。然后将混合物浓缩并在真空泵上干燥，得到呈黄色固体的化合物20(44mg，100％收率)。ESI-MS m/z：M+C38H45N6O6：计算值681.34；实测值681.34。
实施例17.N-(4-((S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)丙酰胺基)苄基)-1-(((S)-4-乙基-4，9-二羟基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-10-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-甲酸铵(21)的合成。
Figure GDA0003907478750001301
将化合物20(88mg，0.116mmol)和化合物4(49mg，0.140mmol)溶于DMF(5mL)中，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(40μL，0.232mmol)溶解。反应升温至室温。搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物21(66mg，68％收率)。ESI-MS m/z：M+C46H52N7O9：计算值846.38；实测值846.38。
实施例18.N-(4-((9S，17S)-9-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰氨基)-17-甲基-6，10，15-三氧代-2-氧杂-5，11，16-三氮杂十八烷酰胺基)苄基)-1-(((S)-4-乙基-4，9-二羟基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-10-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-甲酸铵(22)的合成。
Figure GDA0003907478750001302
将化合物20(44mg，0.058mmol)和化合物7(60mg，0.065mmol)溶于DMF(5mL)中，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(20μL，0.116mmol)溶解。反应升温至室温。搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物22(51mg，58％收率)。ESI-MS m/z：M+C72H101N10O20：计算值1425.72；实测值1425.72。
实施例19.1-(2-氨基-4-氟-5-甲氧基苯基)-2-氯乙酮(24d)的合成。
Figure GDA0003907478750001303
将溶于二氯甲烷(20mL)的3-氟-4-甲氧基苯胺(5g，35.4mmol)溶液，滴加冰水冷却的三氯化硼(1M的二氯甲烷，38.9mL)溶液。将反应搅拌10分钟，然后加入氯乙腈(3.2g，42.5mmol)和三氯化铝(5.2g，38.9mmol)。加完后，将反应升温至室温然后回流过夜。然后将反应混合物冷却至约0℃，用2M盐酸(80mL)淬灭并在室温持续搅拌2个小时。分离各层，水相用二氯甲烷(3×80mL)萃取。用水(100mL)洗涤合并的有机相，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，在硅胶柱上纯化，用石油醚/乙酸乙酯洗脱，得到化合物24d(2g，26％收率)为黄色固体。ESI-MS m/z：[M+H]+C9H9ClFNO2：计算值218.03；实测值218.03。
实施例20.(S)-11-(氯甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(26d)的合成。
Figure GDA0003907478750001311
将化合物24d(0.50g，2.29mmol)和化合物25(0.57g，2.19mmol)溶解在无水甲苯(40mL)中，并加入对甲苯磺酸(42mg，0.219mmol)。将悬浮液加热回流2天，然后冷却至室温。除去约三分之二的甲苯后，将残余物过滤并将滤饼用二氯甲烷洗涤，风干以得到化合物26d(0.7g，72％收率)为灰色粉末状固体。ESI-MS m/z：[M+H]+C22H18ClFN2O5：计算值445.09；实测值445.09。
实施例21.N-(4-((S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酰胺基)苄基)-1-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氯化胺(27)的合成。
Figure GDA0003907478750001312
在0℃下，将化合物26d(218mg，0.49mmol)，化合物18(200mg，0.49mmol)的DMF(5mL)混合物搅拌30分钟，然后加入三乙胺(63μL，0.45mmol)，继续搅拌1小时。浓缩反应物，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物27(240mg，59％收率)，为黄色固体。ESI-MS m/z：M+C44H54FN6O8：计算值813.40；实测值813.40。
实施例22.N-(4-((S)-2-氨基丙氨基)苄基)-1-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氨鎓(28)的合成。
Figure GDA0003907478750001321
将化合物27(50mg，0.06mmol)溶解于二氯甲烷和三氟乙酸(2mL/6mL)的混合溶液中，并在室温搅拌30分钟。然后将混合物浓缩并在真空泵上干燥，得到化合物28(42mg，100％收率)为黄色固体。ESI-MS m/z：M+C39H46FN6O6：计算值713.35；实测值713.35。
实施例23.N-(4-((30S，38S)-30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺)-38-甲基-27，31，36-三氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂-26，32，37-三氮杂三十九烷酰胺基)苄基)-1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-甲酸铵(29)的合成。
Figure GDA0003907478750001322
将化合物28(47mg，0.060mmol)和化合物7(60mg，0.066mmol)溶于DMF(5mL)中，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(21μL，0.12mmol)溶解。反应升温至室温搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物29(23mg，25％收率)。ESI-MS m/z：M+C73H102FN10O20：计算值1457.73；实测值1457.73。
实施例24.(S)-11-(氨甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(30)的合成。
Figure GDA0003907478750001323
将化合物26d(80mg，0.18mmol)溶解于乙醇(5mL)中，加入六亚甲基四胺(76mg，0.54mmol)，并将混合物回流90分钟，然后冷却至室温。加入浓盐酸(100μL)，并搅拌30分钟。浓缩后，获得灰白色固体，通过制备型HPLC纯化(乙腈/含有甲酸的水)，得到化合物30(40mg，52％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C22H20FN3O5：计算值426.14；实测值426.14。
实施例25.(S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-N1-(4-((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃-[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-10-基)甲基)氨基)-4-氧代丁基)-N5-(2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷-25-基)戊二酰胺(31)的合成。
Figure GDA0003907478750001331
将化合物30(40mg，0.094mmol)和化合物7(120mg，0.13mmol)溶于DMF(5mL)中，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(33μL，0.188mmol)。反应升温至室温。搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物31(55mg，50％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C56H76FN7O19：计算值1170.52；实测值1170.52。
实施例26.叔丁基(1-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸酯(32)的合成。
Figure GDA0003907478750001332
将4-(叔丁氧基羰基氨基)哌啶(2g，10mmol)溶解在甲醇(30mL)中，然后加入37％甲醛(1.6g，20mmol)与10％Pd/C(0.2g)催化加氢(1atm)搅拌过夜并过滤。浓缩滤液，得到化合物32(2.1g，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C11H22N2O2：计算值215.17；实测值215.17。
实施例27.(S)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌啶-1-氯化鎓(33)的合成。
Figure GDA0003907478750001341
将化合物26d(50mg，0.112mmol)和化合物32(26mg，0.123mmol)的DMF(3mL)溶液在室温下持续搅拌2小时。通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化反应溶液，得到化合物6(33mg，47％收率)。ESI-MS m/z：[M]+C33H40FN4O7：计算值623.29；实测值623.29。
实施例28.(S)-4-氨基-1-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌啶-1-鎓(34)的合成。
Figure GDA0003907478750001342
将化合物33(30mg，0.053mmol)溶解于二氯甲烷和三氟乙酸(3mL/1mL)的混合溶液中，并在室温搅拌30分钟。然后将混合物浓缩并在真空泵上干燥以得到化合物34(33mg，100％收率)。ESI-MS m/z：[M]+C28H32N4O5：计算值477.21；实测值477.21。
实施例29.4-((S)-30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺)-27，31-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂-26，32-二氮杂三十六烷酰胺基)-1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌啶-1-甲酸鎓(35)的合成。
Figure GDA0003907478750001343
将化合物34(30mg，0.053mmol)和化合物7(60mg，0.079mmol)溶于DMF(5mL)中，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(18L，0.106mmol)。反应升温至室温搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物35(15mg，21％收率)。ESI-MSm/z：[M]+C62H88FN8O19：计算值1267.61；实测值1267.61。
实施例30.(9H-芴-9-基)4-甲基哌嗪-1-羧酸甲酯(36)的合成。
Figure GDA0003907478750001351
将1-甲基哌嗪(5.0g，50.0mmol)溶解在1，4-二恶烷和水(60mL/100mL)的混合溶液中，加入碳酸氢钠(12.6g，150mmol)，并将混合物冷却至0℃，随后滴加9-芴基甲氧基羰基氯(15.5g，60.0mmol)的1，4-二恶烷(20mL)溶液。加完后，温度逐渐升高到室温，将反应物搅拌3小时。加入300mL的1M盐酸，并用乙酸乙酯(2×100mL)洗涤混合物，用碳酸钠将水相调节至pH～10，然后用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。用水(250mL)洗涤合并的有机相，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过柱色谱法(甲醇/二氯甲烷)纯化，得到化合物36(6.5g，40％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C20H22N2O2，计算值323.17；实测值323.19。
实施例31.(S)-4-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-1-(4-(2-(叔丁氧基羰基)氨基)丙酰胺基)苄基)-1-甲基哌嗪-1-溴化鎓(37)的合成。
Figure GDA0003907478750001352
将化合物16(2.3g，6.4mmol)和化合物36(2.1g，6.4mmol)溶解于无水THF(100mL)中，并在室温下搅拌过夜。在旋转浓缩仪上除去大部分THF后，将乙酸乙酯(200mL)加入到残余物中。过滤得到的浆液，得到白色固体(3.8g，87％收率)。ESI-MS m/z：M+C35H43N4O5：计算值599.32；实测值599.32。
实施例32.(S)-1-(4-(2-(叔丁氧羰基)氨基)丙酰胺基)苄基)-1-甲基哌嗪-1-溴化鎓(38)的合成。
Figure GDA0003907478750001353
将化合物37(3.12g，4.6mmol)溶解的DMF(25mL)中，并加入哌啶(3mL)。在室温搅拌2小时后，加入200mL乙酸乙酯，并搅拌10分钟。过滤混合物，得到白色固体(1.54g，77％收率)。ESI-MS m/z：M+C20H33N4O3：计算值377.26；实测值377.26。
实施例33.1-(4-((S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酰胺基)苄基)-4-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌嗪-1-鎓(39)的合成。
Figure GDA0003907478750001361
在0℃下，将化合物38(0.30g，0.66mmol)，化合物26d(0.25g，0.56mmol)的DMF(10mL)混合物搅拌30分钟，然后加入N，N-二异丙基乙胺(49μL，0.28mmol)并将反应物升温至室温搅拌过夜，浓缩并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物39(0.40g，80％收率)。ESI-MS m/z：M+C42H50FN6O8：计算值785.37；实测值785.37。
实施例34.1-(4-((S)-2-氨基丙酰胺基)苄基)-4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'；6，7]吲哚并[[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌嗪-1-鎓(40)的合成。
Figure GDA0003907478750001362
将化合物39(0.30g，0.35mmol)溶解于二氯甲烷和三氟乙酸(3mL/3mL)的混合溶液中，并在室温搅拌30分钟。然后将混合物浓缩并在真空泵上干燥，得到化合物40(0.27g，100％收率)为黄色固体。ESI-MS m/z：M+C37H42FN6O6：计算值477.21；实测值477.21。
实施例35.1-(4-((S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)丙酰胺基)苄基)-4-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌嗪(41)的合成。
Figure GDA0003907478750001363
将化合物40(50mg，0.065mmol)和化合物4(30mg，0.098mmol)溶解在DMF(3mL)中，然后加入N，N-二异丙基乙胺(45μL，0.26mmol)。将反应在室温下搅拌30分钟，浓缩，并通过制备型C-18HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物41(37mg，61％收率)。ESI-MS m/z：M+C45H49FN7O9：计算值850.36；实测值850.36。
实施例36.1-(4-((30S，38S)-30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺)-38-甲基-27，31，36-三氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂-26，32，37-三氮杂-三十九烷酰胺基)苄基)-4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌嗪-1-甲酸鎓(42)
Figure GDA0003907478750001371
将化合物40(70mg，0.092mmol)溶解在DMF(2mL)中，加入化合物7(70mg，0.092mmol)的DMF(2mL)溶液，然后依次加入HATU(52mg，0.138mmol)和三乙胺(52μL，0.368mmol)，随后在室温搅拌30分钟。浓缩后，将残余物通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物43(50.9mg，37％收率)。ESI-MS m/z：[M+]+C71H98FN10O20：计算值1429.69；实测值1429.69。
实施例37.1-(4-((S)-17-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2-甲基-4，14-二氧代-7，10-二氧代-3，13-二氮杂癸酰胺)苄基)-4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌嗪-1-甲酸鎓(43)的合成。
Figure GDA0003907478750001372
将化合物40(0.10g，0.13mmol)的DMF(1mL)溶液和化合物12(66mg，0.13mmol)的DMF(2mL)溶液混合，然后加入N，N-二异丙基乙胺(90μL，0.52mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物43(50.9mg，39％收率)。ESI-MS m/z：M+C52H62N8O12：计算值1009.45；实测值1009.45。
实施例38.(S)-3-(叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸(44)的合成。
Figure GDA0003907478750001381
在冰水浴中向2-氨基-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(1g，4.90mmol)的碳酸氢钠饱和溶液(20mL)中加入2，5-二氧代2，5-甲基的二氢-1H-吡咯-1-羧酸甲酯(1.52g，9.80mmol)。将反应物搅拌30分钟，然后倒入含有100mL乙酸乙酯的分液漏斗中，并分离有机相，用50mL水和50mL盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物4(1.39g，72％收率)。
实施例39.(S)-五氟苯基3-(叔丁氧基羰基)氨基)-2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸酯(45)的合成。
Figure GDA0003907478750001382
向化合物44(0.10g，0.35mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中，加入五氟苯酚(97mg，0.52mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.13g，0.7mmol)。将反应物在室温搅拌2小时，并用二氯甲烷(50mL)稀释，用水(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物45(0.16g，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C18H15F5N2O6：计算值451.09；实测值451.09。
实施例40.化合物46的合成。
Figure GDA0003907478750001383
将化合物40(0.05g，0.065mmol)和化合物45(45mg，0.10mmol)溶解在DMF(3mL)中，然后加入N，N-二异丙基乙胺(45μL，0.26mmol)。将反应物在室温下搅拌1小时，浓缩并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物46(35mg，52％收率)。ESI-MS m/z：M+C49H56FN8O11：计算值951.41；实测值951.41。
实施例41.1-(4-((S)-2-((S)-3-氨基-2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)丙酰胺基)苄基)-4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌嗪-1-鎓(47)的合成。
Figure GDA0003907478750001391
将化合物46(35mg，0.03mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)中，并与三氟乙酸(1mL)反应。在室温搅拌1小时后，将反应混合物浓缩，与二氯甲烷浓缩两次，并在真空泵上干燥，得到化合物47(30.4mg，96％收率)。ESI-MS m/z：M+C44H48FN8O9：计算值851.35；实测值851.35。
实施例42.(S)-叔丁基(1-(4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(48)的合成。
Figure GDA0003907478750001392
将化合物26d(50mg，0.11mmol)溶解于DMF(3mL)中，然后加入哌啶-4-基氨基甲酸叔丁基酯(25mg，0.12mmol)，并在室温搅拌5小时。将混合物浓缩并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物48(30mg，45％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C32H37FN4O7：计算值609.26；实测值609.26。
实施例43.(S)-11-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-1H-吡喃[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(49)的合成。
Figure GDA0003907478750001393
将化合物48(30mg，0.03mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)中，并和三氟乙酸(2mL)反应。在室温搅拌1小时后，将混合物浓缩，与二氯甲烷浓缩两次，并在真空泵上干燥，得到化合物49(25.4mg，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C27H30FN45：计算值509.21；实测值509.21。
实施例44.(S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-N1-(4-((1-((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)哌啶-4-基)氨基)-4-氧代丁基)-N5-(2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷-25-基)戊二酰胺(50)的合成。
Figure GDA0003907478750001401
将化合物49(25.4mg，0.05mmol)溶解在DMF(2mL)中，加入化合物7(38.1mg，0.05mmol)，然后加入HATU(28.5mg，0.08mmol)和三乙胺(14μL，0.1mmol))，并在室温下搅拌反应物1小时，浓缩并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物50(14.4mg，23％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C61H85FN8O19：计算值1253.59；实测值1253.59。
实施例45.叔丁基双(2-(2，2，2-三氟乙酰胺基)乙基)氨基甲酸酯(51)的合成。
Figure GDA0003907478750001402
在0℃下，在30分钟内向二亚乙基三胺(6.18g，60mmol)的二氯甲烷(120mL)溶液中滴加三氟乙酸乙酯(18.75g，132mmol)的二氯甲烷(60mL)溶液，然后升温至室温并搅拌1小时。在室温下逐滴加入二碳酸二叔丁酯(28.78g，132mmol)和三乙胺(13.33g，132mmol)的二氯甲烷(60mL)溶液，并搅拌过夜。将反应混合物用饱和碳酸钠(2×200mL)，水(2×200mL)，盐水(200mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯)纯化，得到白色固体(17.4g，73.3％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C13H19F6N3O4：计算值396.30；实测值396.28。
实施例46.叔丁基双(2-氨基乙基)氨基甲酸酯(52)的合成。
Figure GDA0003907478750001403
将化合物51(4.28g，10.8mmol)溶解于甲醇(50mL)中，并在室温下与氢氧化钠(5.42g，135mmol)的水(50mL)溶液搅拌3小时。将反应浓缩，用二氯甲烷(3×100mL)萃取，将有机相用盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物3(1.8g，82％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C9H21N3O2计算值204.28；实测值204.12。
实施例47.4，4'-((((叔丁氧基羰基)氮杂二基)双(乙烷-2，1-二基))双(氮杂二基))双(4-氧代丁酸)(53)的合成。
Figure GDA0003907478750001411
将化合物52(1.8g，8.8mmol)溶解在二氯甲烷(150mL)中，加入琥珀酸酐(2.2g，22.1mmol)。在室温搅拌过夜，将反应浓缩并在硅胶柱上纯化，用二氯甲烷/甲醇洗脱，得到化合物53(2.99g，84％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C17H29N3O8：计算值404.43；实测值404.11。
实施例48.双((S)-4-乙基-4-羟基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-9-基)4，4'-((((叔丁氧基羰基)氮杂二基)双(乙烷-2，1-二基))双(氮杂二基))双(4-氧代丁酸酯)(54)的合成。
Figure GDA0003907478750001412
向化合物53(853mg，2.1mmol)和化合物5(1.71g，4.7mmol)的DMF(100mL)溶液中，依次加入三乙胺(948mg，9.4mmol)和HATU(1.79g，4.7mmol)。将所得混合物搅拌过夜，然后浓缩，通过硅胶柱纯化(甲醇/二氯甲烷)，得到化合物54(2.84g，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C57H57N7O16：计算值1097.10；实测值1097.65。
实施例49.双(((S)-4-乙基-4-羟基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃-[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-9-基)4，4'-((氮杂二基(乙烷-2，1-二基))双(氮杂二基))双(4-氧代丁酸酯)(55)的合成。
Figure GDA0003907478750001421
将化合物54(2.84g，2.1mmol)溶解在二氯甲烷(40mL)中，并加入三氟乙酸(20mL)。将反应物在室温搅拌1小时，然后浓缩，得到化合物55(3.3g，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C52H49N7O14：计算值996.98；实测值996.60。
实施例50.(S)-4-乙基-4-羟基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-9-基30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-37-(2-(4-(((S)-4-乙基-4-羟基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-9-基)氧基)-4-氧代丁酰胺基)乙基)-27，31，36，41-四氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代-26，32，37，40-四氮杂四十四烷-44-酸酯(56)
Figure GDA0003907478750001422
向化合物55(614mg，0.60mmol)和化合物53(470mg，0.60mmol)的DMF(20mL)溶液中，依次加入三乙胺(249mg，2.5mmol)和HATU(234mg，0.60mmol)。将所得混合物搅拌40分钟，然后浓缩，通过硅胶柱(甲醇/二氯甲烷)纯化，得到化合物56(46mg，5％收率)。ESI-MSm/z：[M+H]+C86H105N11O28：计算值17410.81；实测值1742.01。
实施例51.(S)-4-乙基-4-羟基-9-甲氧基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(57)的合成。
Figure GDA0003907478750001423
将10-羟基喜树碱(2.5g，6.86mmol)溶解在DMF(150mL)中，加入碳酸钾(1.90g，13.72mmol)和碘甲烷(1.17g，8.23mmol)，并在室温搅拌过夜。将石油醚(150mL)和乙酸乙酯(150mL)的混合溶剂加入到反应混合物中并搅拌。沉淀出黄色固体，并通过过滤收集，然后分散在水(20mL)中。逐滴加入1N盐酸直至pH为7，并再次过滤混合物，得到化合物57(1.0g，38％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C21H18N2O5计算值379.38；实测值379.05。
实施例52.双(((S)-4-乙基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-4-基)(((叔丁氧基羰基)氮杂二基)双(乙烷-2，1-二基))二氨基甲酸酯(59)的合成。
Figure GDA0003907478750001431
将化合物57(350mg，0.9mmol)，4-二甲基氨基吡啶(339mg，2.8mmol)和三光气(93mg，0.34mmol)在氦气下研磨，均匀混合，然后滴加无水二氯甲烷(8mL)并搅拌10分钟。将化合物52(64mg，0.34mmol)溶解在无水二氯甲烷(4mL)溶液中，然后加入三乙胺(93mg，0.9mmol)。搅拌15分钟后，将溶液浓缩，并通过硅胶柱(甲醇/二氯甲烷)纯化，得到化合物59(200mg，22％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C53H53N7O14：计算值1013.03；实测值1013.26。
实施例53.双(((S)-4-乙基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-4-基)(氮杂二(乙烷-2，1-二基))二氨基甲酸酯(60)的合成。
Figure GDA0003907478750001432
将化合物59(200mg，0.2mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)中，并与三氟乙酸(5mL)反应4小时。浓缩反应混合物，得到化合物60(0.43g，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C48H45N7O12：计算值912.91；实测值912.62。
实施例54.双(((S)-4-乙基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-4-基)((4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基)氮杂二炔基)双(乙烷-2，1-二基))二氨基甲酸酯(61)
Figure GDA0003907478750001441
向化合物59(249mg，0.27mmol)和化合物7(60mg，0.32mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入三乙胺(112μL，0.81mmol)和HATU(104mg，0.27mmol)。将反应搅拌40分钟，然后用水(20mL)洗涤。浓缩有机相，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物61(50mg)。ESI-MS m/z：[M+H]+C56H52N8O15计算值1078.06；实测值1078.77。
实施例55.(S)-N，N'-(((((2S，20S)-11-(叔丁氧基羰基)-2，20-二甲基-4，7，15，18-四氧代-3，8，11，14，19-五氮杂二十一烷-1，21-二酰基)双(氮杂二酰基))双(4，1-亚苯基))双(亚甲基))双(1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃-[3'，4'：6，7]吲哚[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓)(62)的合成。
Figure GDA0003907478750001442
将化合物40(96mg，0.132mmol)和化合物53(26mg，0.066mmol)溶解在DMF(3mL)中，并冷却至0℃。随后加入HATU(50mg，0.132mmol)和N，N-N-二异丙基乙胺(46μL，0.264mmol)，加入完成后，在0℃下，搅拌30分钟。将粗反应混合物直接在制备型HPLC上纯化(乙腈/含有0.1％甲酸的水)，得到化合物62(80mg，67％收率)。ESI-MS m/z：[M]2+C91H109F2N15O18：计算值868.90；实测值868.90。
实施例56.(S)-N，N'-(((((2S，20S)-2，20-二甲基-4，7，15，18-四氧代-3，8，11，14，19-五氮杂二十一烷-1，21-二酰基)双(氮杂二基)双(4，1-亚苯基))双(亚甲基))双(1-((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃[3'，4'；6，7]吲哚并[[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓)(63)的合成。
Figure GDA0003907478750001451
将化合物62(80mg，0.043mmol)溶解于二氯甲烷和三氟乙酸(3mL/1mL)的混合溶液中，并在室温搅拌30分钟。浓缩反应混合物，得到化合物63(100％收率)。ESI-MS m/z：[M]2+C86H101F2N15O16：计算值818.87；实测值818.87。
实施例57.(S)-N，N'-((((2S，20S)-11-((S)-30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-27，31-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂-26，32-二氮杂三十六烷-36-酰基)-2，20-二甲基-4，7，15，18-四氧代-3，8，11，14，19-五氮杂二十一烷-1，21-二酰基)双(氮杂二酰基))双(4，1-亚苯基))双(亚甲基))双(1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓)(64)的合成。
Figure GDA0003907478750001452
在0℃下，向化合物63(74mg，0.043mmol)和化合物7(39mg，0.0516mmol)的DMF(3mL)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(15μL，0.086mmol)，随后将升温至室温并搅拌2小时。浓缩后，将残余物通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物64(12mg)。ESI-MS m/z：[M+]2+C120H157F2N19O30：计算值1191.06；实测值1191.06。
实施例58.(S)-4-乙基-8-氟-4，9-二羟基-11-甲基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(103)的合成。
Figure GDA0003907478750001461
将1-(2-氨基-4-氟-5-羟基苯基)乙酮(0.41g，2.5mmol)和化合物25(0.62g，2.5mmol)溶于无水甲苯(40mL)，加入对甲苯磺酸(46mg，0.25mmol)。将悬浮液加热回流3天，然后冷却至室温。除去溶剂后，残余物通过柱色谱纯化，得到化合物103(0.69g，73％收率)，为灰色粉末状固体。ESI-MS m/z：[M+H]+C21H17FN2O5：计算值397.11；实测值397.16。
实施例59.(S)-9-(2-溴乙氧基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-甲基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(104)的合成。
Figure GDA0003907478750001462
在80℃下，将化合物103(0.69g，1.74mmol)，无水1，2-二溴乙烷(6.4g，34.8mmol)和无水碳酸钾(1.2g，8.7mmol)的无水DMF(10mL)混合物机械搅拌16小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物，并用DMF充分洗涤过滤的残余物。将合并的滤液和洗涤液真空浓缩至干，得到深色残余物。残余物通过柱色谱法纯化(0-5％甲醇/二氯甲烷)，得到化合物104(0.74g，85％)。ESI-MS m/z：[M+H]+C23H20BrFN2O5：计算值503.05；实测值503.05。
实施例60.(S)-9-(2-溴乙氧基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-甲基-10-硝基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(105)的合成。
Figure GDA0003907478750001463
在0℃下，向搅拌的浓硫酸(1mL)中缓慢加入化合物104(0.74g，1.47mmol)，将得到的澄清溶液冷却至-10℃。将预冷至-10℃的浓硫酸(0.5mL)和发烟硝酸(0.5mL)的混合物滴加至-10℃的冷却反应混合物中。使反应混合物升温至0℃，再搅拌1小时，然后缓慢倾倒于冰屑上。将黄色沉淀物过滤并用水，冷乙醇和乙醚洗涤。将含水滤液再次通过硅藻土垫过滤，并将硅藻土滤饼用30％甲醇/二氯甲烷(50mL)萃取。浓缩有机溶剂，得到另外的黄色固体。将合并的黄色固体与乙醇打浆，得到化合物105(0.74g，92％)。ESI-MS m/z[M+H]+：C23H19BrFN3O7：计算值548.04；实测值548.14。
实施例61.(S)-10-氨基-9-(2-溴乙氧基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-甲基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(106)的合成。
Figure GDA0003907478750001471
在0℃下，向搅拌的浓盐酸溶液(18mL)中分批加入化合物105(0.50g，0.91mmol)，并在15分钟后将所得的澄清溶液冷却至-10℃，随后分批向反应混合物中加入二氧化锡(0.86g，4.55mmol)，并使反应混合物升温至室温。搅拌1.5小时，然后缓慢倒在冰屑上。将沉淀物过滤并用乙醇和乙醚洗涤，并将含水滤液用10％甲醇/二氯甲烷萃取。将有机溶液与滤沉淀物合并溶解在30％甲醇/二氯甲烷中，然后通过短硅胶垫过滤，用30％甲醇/二氯甲烷洗脱。除去有机溶剂，得到化合物106(0.44g，94％收率)，无需进一步纯化即可用于下一步。
实施例62.(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-16-甲基-2，3，12，15-四氢-[1，4]恶嗪并[3，2-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-10，13(1H，9H)-二酮(107)的合成。
Figure GDA0003907478750001472
将化合物106(0.44g，0.85mmol)的DMSO(4mL)溶液和碳酸氢钠(0.10g，1.19mmol)在70℃搅拌4小时，并用盐酸(0.1M，8ml)和水(40mL)稀释。过滤沉淀的固体，溶于少量的10％甲醇/二氯甲烷中，并通过柱色谱法纯化，用(1：20-1：6)甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到化合物107(0.24g，66％)。ESI-MS m/z：[M+H]+C23H20FN3O5：计算值438.14；实测值438.14。
实施例63.(S)-叔丁基(2-(9-乙基-5-氟-9-羟基-16-甲基-10，13-二氧代-2，3，9，10-四氢-[1，4]恶嗪并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-1(12H，13H，15H)-基)乙基)氨基甲酸酯(108)的合成。
Figure GDA0003907478750001481
向化合物107(0.20g，0.456mmol)的无水DMF(2mL)拌溶液中加入碘化钠(0.68g，4.56mmol)和(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.82g，4.56mmol)，将混合物在120℃加热18小时。将反应混合物冷却至室温。浓缩至真空干燥，并通过柱色谱法纯化(0-5％甲醇/二氯甲烷)，得到化合物108(0.19g，75％)。ESI-MS m/z：[M+H]+C30H33FN4O7：计算值581.23；实测值581.40。
实施例64.(S)-1-(2-氨基乙基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-16-甲基-2，3，12，15-四氢-[1，4]恶嗪并[3，2-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-10，13(1H，9H)-二酮(109)的合成。
Figure GDA0003907478750001482
向化合物108(0.19g，0.327mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(2.5mL)，并将反应混合物在室温搅拌30分钟，浓缩反应混合物，与二氯甲烷共浓缩三次，得到化合物109，无需进一步纯化即可用于下一步。
实施例65.化合物110的合成。
Figure GDA0003907478750001483
将上一步得到的化合物109和化合物7(0.45g，0.49mmol)溶解在DMF(5mL)中，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(172μL，0.98mmol)。反应升温至室温，搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物110(359mg，60％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C59H81FN8O19：计算值1224.56；实测值1224.78。
实施例66.二叔丁基4，4'-(((2R，3S)-2，3-双(((苄氧基)羰基)-氨基)琥珀酰)双(氮杂二酰))二丁酸酯(172)的合成。
Figure GDA0003907478750001491
向化合物171(4.25g，10.21mmol)的DMA(70mL)溶液中加入4-氨基丁酸叔丁酯(3.25g，20.42mmol)，DMAP(4.47g，36.65mmol)和EDC·盐酸(7.00g，36.65mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：10)洗脱，得到化合物172(6.50g，91％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C36H50N4O10计算值699.35；实测值699.55。
实施例67.二叔丁基4，4'-(((2R，3S)-2，3-二氨基琥珀酰)-双(氮杂二酰))二丁酸酯(173)的合成。
Figure GDA0003907478750001492
将化合物172(2.50g，3.58mmol)的甲醇(100mL)溶液与10％Pd/C(0.30g，50％wt)在室温催化加氢反应18小时。然后通过硅藻土过滤除去Pd/C催化剂，并用甲醇(～70mL)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到化合物173，为黄色泡沫，无需进一步纯化即可用于下一步(1.54g，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C20H38N2O6：计算值431.28；实测值431.50。
实施例68.二叔丁基4，4'-((2R，3R)-2，3-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)琥珀酰)双(氮杂二基))二丁酸酯(174)的合成。
Figure GDA0003907478750001493
向4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸(1.35g，7.39mmol)和化合物173(1.54g，～3.58mmol)的DMF(60mL)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(2.2mL，12.56mmol)和HATU(4.77g，12.56mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：10)洗脱，得到标题化合物(2.35g，86％收率)。ESI-MS m/z[M+H]+：计算值761.36，实测值761.36。
实施例69.4，4'-(((2R，3R)-2，3-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)琥珀酰)双(氮杂二基))二丁酸(175)的合成。
Figure GDA0003907478750001501
向化合物174(2.30g，3.02mmol)的二氯甲烷(20mL)混合溶液中加入三氟乙酸(10mL)。将混合物搅拌30分钟，用甲苯(20mL)稀释，浓缩，得到标题化合物(1.69g，86％收率)。ESI-MS m/z[M+H]+：C28H36N6O12计算值649.24，实测值649.30。
实施例70.双(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)4，4'-((2R，3R)-2，3-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)琥珀酰)双(氮杂二基))二丁酸酯(176)的合成。
Figure GDA0003907478750001502
向化合物175(1.10g，1.69mmol)的DMA(30mL)溶液加入N-羟基琥珀酰亚胺(1-羟基吡咯烷-2，5-二酮)(0.58g，5.08mmol)和EDC·盐酸(1.25g，6.54mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：10)洗脱，得到标题化合物(1.30g，91％收率)。ESI-MS m/z[M+H]+：C36H42N8O16 8计算值43.27，实测值843.50。
实施例71.(S)-N，N'-((((2S，10S，11S，19S)-10，11-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-2，19-二甲基-4，9，12，17-四氧代-3，8，13，18-四氮二十烷-1，20-二酰基)双(氮杂二基))双(4，1-亚苯基))双(亚甲基))双(1-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，4，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓(177)的合成。
Figure GDA0003907478750001511
将化合物28(94mg，0.12mmol)和化合物176(55mg，0.066mmol)溶于DMA(5mL)中，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(84μL，0.48mmol)。反应升温至室温搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物177(23mg，19％收率)。ESI-MS m/z：[M+]2+C106H124F2N18O22：计算值1019.46；实测值1019.50。
实施例72.3-氧代-1-苯基-2，7，10，13，16-五氧杂-4-氮杂十九烷-19-酸(179)的合成。
Figure GDA0003907478750001512
在500mL烧瓶中，将H2N-PEG4-CH2CH2CO2H(3.0g，11.3mmol，1.0eq)和碳酸钾(4.7g，33.93mmol，3.0eq)溶解于50mL水中，并在冰水浴上冷却。向50mL THF中逐滴加入苄氧基草酰氯(2.50g，14.7mmol，1.3eq)。反应升温至室温搅拌过夜。用1N硫酸钾将反应混合物的pH调节至4-5，并用二氯甲烷(200mL×1，100mL×3)萃取，用水(500mL)和盐水(500mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩。将残余物溶于少量二氯甲烷中，然后加到硅胶柱上，用2-4％甲醇/二氯甲烷洗脱，合并组分并浓缩，得到3.8g无色油状物(84％收率)。ESI-MS m/z[M+H]+：C19H29NO8计算值400.2，实测值400.2。
实施例73.2，5-二氧杂吡咯烷-1-基3-一氧代-1-苯基-2，7，10，13，16-五氧杂-4-氮杂十九烷-19-酸酯的合成。(180)
Figure GDA0003907478750001521
向CbzHN-PEG4-CH2CH2CO2H(3.8g，9.5mmol，1.0eq)的50mL无水二氯甲烷的溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺(1.3g，11.4mmol，1.2eq)和EDC·盐酸(9.1g，47.5mmol，5.0eq)。将反应物在室温搅拌过夜，然后用水(50mL×2)，盐水(100mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩。粗产物直接用于下一步。ESI-MS m/z[M+H]+：C23H32N2O10计算值497.2，实测值497.2。
实施例74.3，19-二氧代-1-苯基-2，7，10，13，16，23，26，29，32-九氧杂-4，20-二氮杂三十五烷-35-酸(181)的合成。
Figure GDA0003907478750001522
在300mL烧瓶中，将H2N-PEG4-CH2CH2CO2H(2.6g，9.5mmol，1.0eq)和硫酸钾(3.9g，28.5mmol，3.0eq)溶于40mL水中，在冰水浴上冷却，并逐滴加入上述N-羟基琥珀酰亚胺酯粗产物(3.8g，9.5mmol)的40mL THF溶液，将混合物升温至室温搅拌过夜。用1N硫酸钾将反应混合物的pH调节至4-5，并用二氯甲烷(150mL×1，100mL×2)萃取，用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩。将残余物溶于少量二氯甲烷中，并上样至硅胶柱，用4-6％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到无色油状物(4.91g，80％收率)。ESI-MS m/z[M+H]+：C30H50N2O13计算值646.3，实测值646.3。
实施例75.丁叔基3，19，35-三氧代-1-苯基-2，7，10，13，16，23，26，29，32，39，42，45，48-十三氧杂-4，20，36-三氮杂五十一烷-51-酯(182)的合成。
Figure GDA0003907478750001523
将H2N-PEG4-CH2CH2CO2 tBu(0.48g，1.5mmol，1.0eq)溶解在3mL DMF中，在冰/水浴上冷却，逐滴加入N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(0.78g，6.0mmol，4.0eq)，然后加入化合物181(0.97g，1.5mmol，1.0eq)的DMF(7mL)溶液和HATU(1.72g，4.5mmol，3.0eq)。将反应物在冰浴上搅拌2小时，并用100mL水稀释，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，用1N硫酸钾(200mL)，饱和碳酸氢钠(200mL)和盐水(200mL)洗，无水硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物溶解在少量二氯甲烷中，加载到硅胶柱上，并用0-5％甲醇/二氯甲烷洗脱。合并组分并浓缩，得到1.22g浅黄色油状物(86％收率)。ESI-MS m/z[M+H]+：C45H79N3O18计算值950.5，实测值950.5。
实施例76.叔丁基1-氨基-15，31-二氧代-3，6，9，12，19，22，25，28，35，38，41，44-十二氧杂-16，32-二氮杂四十七烷-47-酯(183)的合成。
Figure GDA0003907478750001531
将化合物182(1.22g，1.28mmol)的二氯甲烷(5mL)中的溶液与Pd/C(5％，500mg)在室温下催化加氢反应(1大气压氢气)2小时。然后将反应物通过硅藻土过滤，并将滤饼用甲醇洗涤。合并滤液和洗涤液，浓缩，得到浅黄色油状物(1.04g，100％收率)。ESI-MS m/z[M+H]+：C37H73N3O16计算值816.5，实测值816.5。
实施例77.(50R，51R)-二叔丁基50，51-双((苄氧基)羰基)氨基)-17，33，49，52，68，84-六氧代-4，7，10，13，20，23，26，29，36，39，42，45，56，59，62，65，72，75，78，81，88，91，94，97-二十四氧杂-16，32，48，53，69，85-六氮杂一百烷-1，100-二酸酯(184)
Figure GDA0003907478750001532
向化合物171(0.26g，0.64mmol)的DMA(10mL)溶液中，加入化合物183(1.04g，1.28mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液，然后加入DMAP(0.23g，1.92mmol)和EDC·盐酸(0.36g，1.92mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用甲醇/二氯甲烷(1：10)洗脱，得到化合物184(0.81g，63％收率)。ESI-MS m/z：[M+2H]2+C94H162N8O38计算值1006.55；实测值1006.70。
实施例78.(50R，51R)-二叔丁基-50，51-二氨基-17，33，49，52，68，84-六氧代-4，7，10，13，20，23，26，29，36，39，42，45，56，59，62，65，72，75，78，81，88，91，94，97-二十四氧杂-16，32，48，53，69，85-六氮杂一百烷-1，100-二酸酯(185)的合成。
Figure GDA0003907478750001533
向化合物184(0.81g，0.40mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入10％Pd/C(100mg，5％)，在室温下催化加氢反应18小时。然后通过硅藻土过滤除去Pd/C催化剂，并用甲醇洗涤滤饼。合并滤液和洗涤液并浓缩，得到化合物185(0.70g，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+2H]2+C78H150N8O34：计算值872.52；实测值872.55。
实施例79.(50R，51R)-二叔丁基50，51-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-17，33，49，52，68，84-六氧代-4，7，10，13，20，23，26，29，36，39，42，45，56，59，62，65，72，75，78，81，91，94，97-二十四氧杂-16，32，48，53，69，85-六氮杂一百烷-1，100-二酸酯(186)和(50S，51S)-50，51-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-17，33，49，52，68，84-六氧代-4，7，10，13，20，23，26，29，36，39，42，45，56，59，62，65，72，75，78，81，88，91，94，97-二十四氧杂-16，32，48，53，69，85-六氮杂一百烷-1，100-二酸(187)的合成。
Figure GDA0003907478750001541
向4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸(0.17g，1.00mmol)和化合物185(0.70g，0.40mmol)的DMF(5mL)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.88mL，5mmol)和HATU(1.90g，12.56mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用1-10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到化合物186(0.548g，66％收率)，为油状物。ESI-MS m/z[M+2H]2+：C94H166N10O40计算值2075.1264，实测值2075.1350。
将化合物186(0.54g，0.26mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，并与三氟乙酸(2.5mL)反应。将混合物在室温搅拌，用甲苯(20mL)稀释30分钟，浓缩，得到标题化合物187(0.488，96％收率)，无需进一步纯化即可用于下一步。ESI-MS m/z[M+H]+：C86H149N10O40计算值1961.9933，实测值1961.9987。
实施例80.(S)-N，N'-((((2S，53S，54S，105S)-53，54-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-2，105-二甲基-4，20，36，52，55，71，87，103-八氧代-7，10，13，16，23，26，29，32，39，42，45，48，59，62，65，68，75，78，81，84，91，94，97，100-二十四氧杂-3，19，35，51，56，72，88，104-八氮杂一百零六烷-1，106-二酰基)双(氮杂二酰基))双(4，1-亚苯基))双(亚甲基))双(1-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓)(188)
Figure GDA0003907478750001551
将化合物28(47mg，0.060mmol)和化合物187(59mg，0.030mmol)溶于DMA(5mL)中，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(21μL，0.12mmol)溶解。反应升温至室温搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物188(36mg，36％收率)。ESI-MS m/z：[M+]2+C164H238F2N22O50：计算值1675.8279；实测值1675.8392。
实施例81.2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-叔丁基酯(191)
Figure GDA0003907478750001552
将氢化钠(60％，24g，600mmol)加入八甘醇单甲醚(115g，300mmol)的THF(3.0L)溶液中。在室温下搅拌1小时，将2-溴乙酸叔丁酯(146g，750mmol)加入到混合物中，并在室温搅拌1小时，然后将混合物用二氯甲烷(4L)稀释，倒入冰水(2kg)中。分离有机相，水相用二氯甲烷(1L)萃取。合并的有机相，用水洗涤，用无水硫酸钠干燥。通过柱色谱法纯化(20％乙酸乙酯/石油醚，然后纯二氯甲烷至5％甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物(108g，72％收率)，为黄色油状物。
实施例82.2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-酸(192)的合成。
Figure GDA0003907478750001553
将2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-叔丁基酯(210g，422mmol)溶解在二氯甲烷(400mL)和无水甲酸(1L)中。将所得溶液在室温搅拌过夜。真空除去所有挥发物，得到标题化合物(200g，＞100％收率)，为黄色油状物。
实施例83.2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-酰氯(193)的合成。
Figure GDA0003907478750001561
在室温下向2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-酸(198g，422mmol)的二氯甲烷(2.6L)溶液中加入草酰氯(275mL)和DMF(0.5mL)。将所得溶液在室温持续搅拌3小时。真空除去所有挥发物，得到标题化合物(210g，＞100％收率)，为黄色油状物。
实施例84.(S)-34-((苄氧基)羰基)氨基)-28-氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29-氮杂三十五烷-35-酸(194)的合成。
Figure GDA0003907478750001562
将Z-L-Lys-OH(236g，844mmol)，碳酸钠(89.5g，844mmol)和氢氧化钠(33.8g，844mmol)溶于水(1.6L)中。用冰盐浴将混合物冷却至0℃，加入2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-酰氯(210g，422mmol)的THF(160mL)溶液。将得到的混合物在室温持续搅拌1小时，然后用乙酸乙酯(1L)稀释。分离水层，在冰冷却下加入浓盐酸直至达到pH 3。用二氯甲烷萃取，有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到标题化合物(290g，97％收率)，为黄色油状物。
实施例85.(S)-五氟苯基34-((((苄氧基)羰基)氨基)-28-氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-29-氮杂三十五烷-35-酯(195)的合成。
Figure GDA0003907478750001563
向化合物194(183g，260mmol)的二氯甲烷(2L)溶液中加入五氟苯酚(95.4g，520mmol)和DIC(131g，1.04mol)。将反应物在室温持续搅拌1小时，然后浓缩，得到标题产物粗品(430g)。
实施例86.(S)-叔丁基34-((苄氧基)羰基)氨基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酯(196)的合成。
Figure GDA0003907478750001571
在0℃下，向4-氨基丁酸叔丁酯(62.0g，390mmol)的DMF(1.5L)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(134g，1.04mol)，然后在10-20℃下，加入化合物195(430g，粗产物)，并将所得混合物在室温搅拌1小时，真空除去DMF，残余物用二氯甲烷稀释，用水洗涤。用二氯甲烷反萃取水相。合并的有机相用0.2N盐酸和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。柱色谱法(25％乙酸乙酯/PE至纯乙酸乙酯，然后0至5％甲醇/二氯甲烷)纯化得到标题化合物(180g，82％收率)，为黄色油状物。
实施例87.(S)-叔丁基34-氨基-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-29，36-二氮杂四十烷-40-酯(197)的合成。
Figure GDA0003907478750001572
将化合物196(78.0g，92.3mmol，1.0eq)的甲醇(500mL)溶液和Pd/C(13g，10％Pd/C，50％wet)在室温下催化加氢反应(1大气压氢气)过夜，然后过滤并浓缩。残留物通过柱色谱法纯化(0至20％甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物(70.2g，92％收率)，为淡黄色油状物。
实施例88.(7S，10R，11R，14S)-二叔丁基10，11-双((((苄氧基)羰基)氨基)-6，9，12，15-四氧代-7，14-双(28-氧代2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-29-氮杂三十三烷-33-基)-5，8，13，16-四氮杂二十烷-1，20-二酸酯(198)的合成。
Figure GDA0003907478750001573
向化合物171(0.85g，2.00mmol)的DMA(10mL)溶液中加入化合物197(3.20g，4.50mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液，DMAP(1.50g，12mmol)和EDC·盐酸(2.3g，12mmol)溶液。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：10)洗脱，得到化合物198(3.33g，88％收率)。ESI-MS m/z：[M+2H]2+C86H146N8O32计算值902.50；实测值902.55。
实施例89.(7S，10R，11R，14S)-二叔丁基10，11-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-6，9，12，15-四氧代-7，14-双(28-氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29-氮杂三十三烷-33-基)-5，8，13，16-四氮杂二十烷-1，20-二酸酯(199)的合成。
Figure GDA0003907478750001581
将化合物198(3.33g，1.76mmol)，Pd/C(5wt％，0.10g)和二氯甲烷(50mL)混合物催化加氢反应过夜(1大气压氢气)，然后在硅藻土上过滤。浓缩滤液，然后溶解在DMF(10mL)中，加入EDC(1.00g，5.28mmol)和化合物4(1.84g，5.28mmol)。将混合物在室温持续搅拌16小时，浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化(1：4甲醇/二氯甲烷)，得到油状物(2.56g，78％收率)。ESI-MS m/z：[M+2H]2+C86H148N10O34计算值933.51；实测值933.55。
实施例90.(S)-N，N'-(((((2S，10S，13R，14R，17S，25S)-13，14-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-2，25-二甲基-4，9，12，15，18，23-六氧代-10，17-双(28-氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-29-氮杂三十三烷-33-基)-3，8，11，16，19，24-六氮杂二十六烷-1，26-双(氮杂二基))双(1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氨基)甲酸盐(200)的合成。
Figure GDA0003907478750001582
将化合物199(1.00g，0.536mmol)的二氯甲烷(5mL)和甲酸(5mL)的混合物在室温持续搅拌24小时，然后浓缩。将残余物溶解于DMA(5mL)中，加入化合物28(0.64g，0.89mmol)，三乙胺(0.15mL，1.07mmol)和HATU(0.41g，1.07mmol)并在室温持续搅拌16小时。在高真空下除去溶剂后，将残余物通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物200(1.06g，63％收率)。ESI-MS m/z：M2+C156H220F2N22O44计算值1571.78；实测值1571.78。
实施例91.4-(双(2-羟乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(202)的合成。
Figure GDA0003907478750001591
将琥珀酸二甲酯(20.0g，136.9mmol)和二羟乙胺(7.20g，68.7mmol)在无水甲苯(500mL)和吡啶(50mL)的混合物，在150℃下，加热28小时，浓缩混合物，并在硅胶柱上纯化，用5-25％乙酸乙酯/二氯甲烷洗脱，得到标题化合物(12.5g，83％收率)。ESI-MS m/z242.42([M+Na]+)。
实施例92.4-(双(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(203)的合成。
Figure GDA0003907478750001592
向4-(双(2-羟乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(12.0g，49.56mmol)在无水吡啶(350mL)的溶液中，加入甲磺酰氯(20.0g，175.4mmol)。搅拌过夜后，将混合物浓缩，用乙酸乙酯(350mL)稀释，用冷的1M磷酸二氢钠(2×300mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物(18.8g，＞100％收率)。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步。ESI-MS m/z376.06([M+H]+)。
实施例93.3，6-内氧代-Δ-四氢邻苯二甲酰亚胺(204)的合成。
Figure GDA0003907478750001593
向马来酰亚胺(10.0g，103.0mmol)的甲苯(200mL)溶液中加入呋喃(10.0mL，137.4mmol)。在100℃下，将混合物在1L反应罐中加热8小时，冷却至室温后用甲醇洗，浓缩并在乙酸乙酯/正己烷中结晶，得到16.7g(99％)的标题化合物。1H NMR(CDCl3)：11.12(s，1H)，6.68～6.64(m，2H)，5.18～5.13(m，2H)，2.97～2.92(m，2H)；ESI-MS m/z 188.04([M+Na]+)。
实施例94.4-((2-((3aR，4R，7S，7aS)-1，3-二氧代-3a，4，7，7a-四氢-1H-4，7-环氧异吲哚-2(3H)-基)乙基)(2-(((4R，7S，7aS)-1，3-二氧代-3a，4，7，7a-四氢-1H-4，7-环氧异吲哚-2(3H)-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(205)的合成。
Figure GDA0003907478750001601
向4-(双(2-(((甲基磺酰基)氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(203，新鲜制备，90％纯度，8.5g，20mmol)的DMA(350mL)溶液中，加入3，6-内氧代-Δ-四氢邻苯二甲酰亚胺(204，10.2g，61.8mmol)，碳酸钠(8.0g，75.5mmol)和碘化钠(0.3g，2.0mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，浓缩，用乙酸乙酯(350mL)稀释，用饱和的碳酸氢钠溶液(300mL)，盐水(300mL)和1M磷酸二氢钾(300mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，加载到硅胶柱上，并用10-30％乙酸乙酯/正己烷洗脱，得到标题化合物(7.9g，77％收率)。ESI-MS m/z 536.4([M+Na]+)。
实施例95.4-(双(2-(2-，2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸的合成。(206)
Figure GDA0003907478750001602
将化合物205(3.0g，5.8mmol)和三甲基锡烷醇(4.8g，26.4mmol)的1，2-二氯乙烷(150mL)溶液在80℃下，回流8小时，然后冷却至室温，使残余物通过短硅胶柱，并用二氯甲烷/甲醇洗脱以除去过量的氢氧化三甲基锡。然后合并各组分，浓缩并用DMA和甲苯稀释，加热至120℃并搅拌过夜。将反应混合物加载到硅胶柱上，并用5-10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到标题化合物(1.62g，76％收率)。ESI-MS m/z 386.2([M+Na]+)。
实施例96.2，5-二氧杂吡咯烷-1-基4-(双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸酯(207)的合成。
Figure GDA0003907478750001603
向化合物206(1.62g，4.46mmol，1.0eq)的10mL DMA溶液中，加入N-羟基琥珀酰亚胺(0.61g，5.35mmol，1.2eq)和EDC·盐酸(1.71g，8.92mmol，2.0eq)。将反应物在室温搅拌过夜，然后用水(50mL×2)，盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到油状物(2.00g)。粗产物直接用于下一步。ESI-MS m/z[M+H]+：C20H20N4O9计算值461.12，实测值461.24。
实施例97.N-(4-((S)-2-(4-(双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)丙酰胺基)苄基)-1-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓(208)的合成。
Figure GDA0003907478750001611
在0℃下，将前一步骤的粗产物(0.20g)溶于DMA(5mL)，加入化合物28(0.71g，1.00mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.20mL，1.20mmol)，将反应物升温至室温，搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物208(0.85g，80％收率)。ESI-MS m/z：M+C55H61FN9O12：计算值1058.44；实测值1058.60。
实施例98.(S)-叔丁基34-(4-(双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酯(210)的合成。
Figure GDA0003907478750001612
向化合物197(2.98g，4.20mmol)和化合物206(1.39g，3.82mmol)的DMA(20mL)溶液中，加入EDC·盐酸(0.80g，4.20mmol)。将反应物在室温搅拌过夜，然后倒入水(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×40mL)萃取。合并的有机相用盐水(40mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(10-50％乙酸乙酯/石油醚)，得到无色油状物(3.23g，80％收率)。ESI-MS m/z 1057.85([M+H]+)。
实施例99.(S)-34-(4-(双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酸(211)的合成。
Figure GDA0003907478750001621
将化合物210(3.20g，3.03mmol)在甲酸(10mL)和二氯甲烷(5mL)中的溶液，在室温搅拌过夜。然后将溶液浓缩并与甲苯浓缩三次，得到无色油状物(3.00g，粗产物)，无需进一步纯化即可使用。ESI-MS m/z 1001.50([M+H]+)。
实施例100.(S)-2，5-二氧吡咯烷-1-基34-(4-(双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酯(212)的合成。
Figure GDA0003907478750001622
向化合物211(3.00g，粗产物，3.03mmol)的DMA(15.0mL)溶液中，加入N-羟基琥珀酰亚胺(0.38g，3.33mmol)和EDC·盐酸(0.87g，4.55mmol)。在室温下持续搅拌2小时，然后用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化(10-50％乙酸乙酯/石油醚)，得到无色油状物(2.90g，90％收率)。ESI-MS m/z 1098.50([M+H]+)。
实施例101.N-(4-((34S，42S)-34-(4-(双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-42-甲基-28，35，40-三氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36，41-三氮杂四十三烷酰胺基)苄基)-1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓(213)
Figure GDA0003907478750001631
在0℃下，将化合物212(0.10g，0.091mmol)溶解于DMA(5mL)中，加入化合物28(56.8mg，0.08mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.020mL，0.12mmol)。反应物升温至室温搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物213(84mg，62％收率)。ESI-MS m/z：M+C84H116FN12O24：计算值1695.82；实测值1695.82。
实施例102.2-(2-(1，3-二氧杂吲哚啉-2-基)乙酰基)肼基羧酸叔丁酯(216)的合成。
Figure GDA0003907478750001632
在0℃下，向Boc-肼(7.08.g，53.5mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中依次加入三乙胺(13.5mL，97.4mmol)和化合物215(10.8g，48.7mmol)。在室温搅拌30分钟，将混合物倒入冰水(100mL)中，并用二氯甲烷(3×100mL)萃取。用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤合并的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色固体(15.5g，100％收率)。ESI-MS m/z320.12([M+H]+)。
实施例103.2-(1，3-二氧异吲哚-2-基)乙酰肼的合成。(217)
Figure GDA0003907478750001633
将化合物216(15.5g，48.7mmol)溶于1，4-二恶烷(150mL)中，在室温下与25％盐酸(50mL)反应1小时。浓缩反应混合物，然后与甲苯共浓缩，得到白色固体(10.6g，100％收率)。ESI-MS m/z 220.06([M+H]+)。
实施例104.2-(1，3-二氧杂吲哚啉-2-基)-N'-(2-(1，3-二氧杂吲哚啉-2-基)乙酰基)乙酰酰肼(218)的合成。
Figure GDA0003907478750001641
在0℃下，向化合物217(10.6g，48.7mmol)的THF(200mL)溶液中加入三乙胺(13.5mL，97.4mmol)和化合物215(10.8g，48.7mmol)。反应升温至室温搅拌过夜。过滤收集沉淀物，然后将其悬浮在水(100mL)中，并搅拌20分钟。再次过滤得到化合物218(15.7g，80％收率)，为白色固体。ESI-MS m/z 407.09([M+H]+)。
实施例105.二叔丁基2，2'-(1，2-双(2-(1，3-二氧杂吲哚啉-2-基)乙酰基)肼-1，2-二基)二乙酸酯(219)的合成。
Figure GDA0003907478750001642
在0℃下，将氢化钠(0.5g，12.3mmol)分批加入化合物218(2.0g，4.92mmol)的DMF(40mL)溶液中。将该混合物升温至室温，搅拌3小时，加入溴乙酸叔丁酯(2.0g，10.3mmol)，将反应搅拌过夜，然后倒入冰水(100mL)中，并用二氯甲烷(3×50mL)萃取。用水(50mL)，盐水(50mL)洗涤合并的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，通过硅胶色谱法纯化，得到白色固体(1.5g，50％收率)。ESI-MS m/z 635.23([M+H]+)。
实施例106.二叔丁基2，2'-(1，2-双(2-氨基乙酰基)肼-1，2-二基)二乙酸酯(220)的合成。
Figure GDA0003907478750001643
将化合物219(1.5g，2.36mmol)和肼(442mg，7.08mmol)的乙醇(30mL)混合物回流1小时，然后冷却至室温并过滤。将滤液浓缩加入至乙酸乙酯(20mL)中，再次过滤。浓缩滤液，得到白色固体220(750mg，85％收率)。ESI-MS m/z 375.22([M+H]+)。
实施例107.二叔丁基2，2'-(1，2-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基)肼-1，2-二基)二乙酸酯(221)的合成。
Figure GDA0003907478750001651
在0℃下，向化合物220(750mg，2mmol)的THF(20mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)中，加入N-甲氧基羰基马来酰亚胺(622mg，4mmol)。将反应混合物在0℃下，搅拌1小时。过滤收集白色固体，得到化合物221(854mg，80％收率)。ESI-MS m/z 535.20([M+H]+)。
实施例108.2，2'-(1，2-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基)肼-1，2-二基)二乙酸(222)的合成。
Figure GDA0003907478750001652
将化合物221(854mg，1.6mmol)溶于二恶烷(3mL)中，在室温下和25％盐酸(3mL)反应2小时，然后浓缩反应物，得到化合物222(675mg，100％收率)。ESI-MS m/z 423.07([M+H]+)。
实施例109.二叔丁基4，4'-((2，2'-(1，2-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基)肼-1，2-二基)双(乙酰基))双(氮杂二基))二丁酸酯(223)的合成。
Figure GDA0003907478750001653
在0℃下，向化合物222(200mg，0.47mmol)的DMF(5mL)溶液中加入4-氨基丁酸叔丁酯(158mg，0.99mmol)和EDC·盐酸(189.7mg，0.99mmol)。将反应混合物升温至室温搅拌过夜，倒入冰水中，用二氯甲烷(3×10mL)萃取。合并的有机相用0.2N盐酸(5mL)，水(5mL)，盐水(5mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色固体(330mg，100％收率)。
实施例110.双(2，5-二氧吡咯烷-1-基)4，4'-((2，2'-(1，2-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基)肼-1，2-二(乙酰基))双(氮杂二酰基))二丁酸酯(225)的合成。
Figure GDA0003907478750001661
将化合物223(330mg，0.47mmol)溶于二恶烷(3mL)中，并在室温下和25％盐酸(3mL)反应2小时。将反应浓缩并再溶解于DMF(5mL)中，冷却至0℃，依次加入N-羟基琥珀酰亚胺(113mg，0.98mmol)和EDC·盐酸(189mg，0.98mmol)。将反应物升温至室温搅拌过夜，倒入冰水中，用二氯甲烷(3×20mL)萃取。用水(5mL)，盐水(5mL)洗涤合并的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到白色固体225(369mg，100％收率)。ESI-MS m/z 787.21([M+H]+)。
实施例111.(S)-N，N'-((((((2S，21S)-11，12-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰基)-2，21-二甲基-4，9，14，19-四氧代-3，8，11，12，15，20-六氮杂二十二烷-1，22-二酰基)双(氮杂二酰基))双(4，1-亚苯基))双(亚甲基))双(1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氨基)226的合成。
Figure GDA0003907478750001662
在0℃下将化合物225(31.5mg，0.04mmol)溶解于DMA(5mL)中，加入化合物28(56.8mg，0.08mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.020mL，0.12mmol)。反应物升温至室温搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物226(57mg，72％收率)。ESI-MS m/z：[M+]2+C102H116F2N18O2：计算值991.42；实测值991.86。
实施例112.叔丁基3-((2-氨基乙基)氨基)丙酸酯(228)的合成。
Figure GDA0003907478750001671
在45℃下将丙烯酸叔丁酯(12.81g，0.10mmol)和乙烷-1，2-二胺(24.3g，0.40mol)的THF(150mL)溶液搅拌24小时。浓缩混合物，并在氧化铝柱上纯化，用三乙胺/甲醇/二氯甲烷(5：15：80)洗脱，得到标题化合物(17.50g，92％收率)。ESI-MS m/z 189.20([M+H]+)。
实施例113.3-(2-氨基乙基)氨基)丙酸盐酸盐(229)的合成。
Figure GDA0003907478750001672
将3-(((2-氨基乙基)氨基)丙酸叔丁酯(17.00g，90.33mmol)的1，4-二恶烷(50mL)溶液与浓盐酸(15mL)反应。将混合物在室温搅拌30分钟，浓缩并用纯化水(150mL)和乙酸乙酯/石油醚(40mL，1：5)稀释。分离混合物，并用水(2×10mL)萃取有机层。将水层浓缩并在真空泵上干燥，得到标题化合物(18.70g，100％收率，LC-MS分析纯度为96％)。ESI-MS m/z133.20([M+H]+)。
实施例114.3-((2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-丙酸(230)的合成。
Figure GDA0003907478750001673
在0℃下，向3-((2-氨基乙基)氨基)丙酸(18.70g，90.33mmol)的THF(150mL)溶液中加入马来酸酐(8.85g，90.33mmol)。将混合物在0-4℃下搅拌4小时，浓缩，得到定量收率的(Z)-4-((2-(((2-羧乙基)氨基)乙基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸，通过LC-MS确认。在90℃下，向其中加入甲苯(150mL)和DMA(50mL)，用Dean-Stark分水器回流。收集30mL溶剂后，加入六甲基乙硅烷(9.0mL，43.15mmol)和氯化锌(16mL，1.0M的乙醚溶液)。将混合物加热至115-125℃，并通过Dean-Stark分水器收集甲苯。将反应混合物在120℃下回流6小时。在此期间，加入2×40mL无水甲苯，以保持混合物体积在50mL左右。然后冷却混合物，并加入1mL1：10盐酸(浓)/甲醇。浓缩混合物，并在硅胶柱上纯化，用水/甲醇(1：15)洗脱，并在真空泵上干燥，得到14.75g的标题化合物(77.0％收率)。ESI-MS m/z 213.10([M+H]+)。
实施例115.2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代二十五烷-25-基4-甲基苯磺酸酯(231)的合成。
Figure GDA0003907478750001681
向2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代二十五烷-25-醇(50.0g，0.130mol)的二氯甲烷(200mL)和吡啶(100mL)溶液中加入TsCl(30.2g，加入0.159mol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用丙酮/二氯甲烷(1：1至4：1)洗脱，浓缩，并在真空泵上干燥，得到标题化合物57.34g(82.0％收率)。ESI-MS m/z 539.40([M+H]+)。
实施例116.S-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代二十五烷-25-乙基乙硫酸酯(232)的合成。
Figure GDA0003907478750001682
向2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代二十五烷-25-基4-甲基苯磺酸酯(57.30g，0.106mol)的THF(300mL)和N，N-二异丙基乙胺的混合溶液(50mL)中，加入HSAc(10.0g，0.131mol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：2至4：1)洗脱，浓缩，并在真空泵上干燥，得到标题化合物40.51g(86％收率)。ESI-MS m/z 443.35([M+H]+)。
实施例117.2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代二十五烷-25-磺酸(233)的合成。
Figure GDA0003907478750001683
在35℃下，向乙酸(200mL)和30％过氧化氢(100mL)的混合物中加入S-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代二十五烷-25-乙基乙硫醇酯(40.40g，0.091mol)，搅拌过夜。浓缩混合物，用纯水(200mL)和甲苯(150mL)稀释，分离，并将有机层用水(2×25mL)萃取。合并水溶液，蒸发并在真空泵上干燥，得到标题化合物40.50g(99％收率，LC-MS分析纯度为95％)。ESI-MS m/z 449.30([M+H]+)。
实施例118.3，3-N，N-(2”-马来酰亚胺乙基)(2’，5’，8’，11’，14’，17’，20’，23’，26’-九氧杂二十八烷-28’-硫氨酸)氨基丙酸(234)的合成。
Figure GDA0003907478750001684
向2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代二十五烷-25-磺酸(20.0g，44.62mmol)的THF(100mL)和二氯甲烷(100mL)混合溶液中，依次加入草酰氯(25.21g，200.19mmol)和DMF(0.015mL)。将混合物在室温搅拌2小时，浓缩，与二氯甲烷/甲苯(1：1，2×50mL)浓缩，然后再溶解于THF(50mL)。向3-((2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-丙酸化合物(7.50g，35.36mmol)的THF(100mL)溶液中，加入上述磺酰氯。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用甲醇/二氯甲烷(1：6至1：5)洗脱，浓缩并在真空泵上干燥，得到标题化合物14.76g(65％收率)。ESI-MS m/z 643.35([M+H]+)。
实施例119.N-N-琥珀酰亚胺3，3-N，N-(2”-马来酰亚胺乙基)(2'，5'，8'，11'，14'，17'，20'，23'，26'-九氧杂二十八烷-28'-硫氨酸)氨基丙酸酯(235)的合成。
Figure GDA0003907478750001691
将3，3-N，N-(2”-马来酰亚胺乙基)(2’，5’，8’，11’，14’，17’，20’，23’，26’-九氧杂二十八烷-28’-硫氨酸)氨基丙酸(234)(7.50g，11.67mmol)，N-羟基琥珀酰亚胺(1.50g，13.04mmol)，EDC·盐酸(10.10g，52.60mmol)，THF(100mL)混合物搅拌过夜，真空浓缩，并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：4至2：1)洗脱，浓缩并在真空泵上干燥，得到标题化合物6.30g(73％收率)。ESI-MS m/z 740.40([M+H]+)。
实施例120.化合物236的合成。
Figure GDA0003907478750001692
在0℃下，向H-Gly-Gly-Gly-OH(0.50g，2.03mmol)和化合物235(1.65g，2.22mmol)的DMF(15mL)溶液中加入N，N-N-二异丙基乙胺(3mL)。将反应混合物在0℃在下搅拌0.5小时，随后在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物浓缩，并通过硅胶柱色谱纯化(乙腈/水，0.1％的甲酸的95：5)，得到标题化合物(1.04g，63％收率)。ESI-MS m/z[M+H]+：C32H56N5O17S计算值814.33；实测值814.46。
实施例121.化合物237的合成。
Figure GDA0003907478750001693
将化合物236(0.70g，0.86mmol)，N-羟基琥珀酰亚胺(0.20g，1.73mmol)和EDC·盐酸(1.21g，6.36mmol)在THF(20mL)中的混合物搅拌过夜，真空浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：4至2：1)洗脱，浓缩并在真空泵上干燥，得到标题化合物(0.540g，69％收率)。ESI-MS m/z[M+H]+：C36H59N6O19S，计算值911.34；实测值911.42。
实施例122.化合物238的合成。
Figure GDA0003907478750001701
在0℃下将化合物237(36mg，0.04mmol)溶解于DMF(5mL)中，加入化合物28(56.8mg，0.08mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.020mL，0.12mmol)。反应物升温至室温搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物238(48mg，80％收率)。ESI-MS m/z：M+C71H99FN11O22S计算值1508.67；实测值1508.86。
实施例123.甲基4-(双(2-(乙酰硫基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸酯(240)的合成。
Figure GDA0003907478750001702
在0℃下，向4-(双(2-(((甲基磺酰基)氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(新制备，90％纯度，8.5g，约20mmol)的DMA(350mL)溶液中加入硫代乙酸(10mL，134mmol)，随后加入三乙胺(30mL，215mmol)。然后将混合物在室温搅拌过夜，浓缩，用乙酸乙酯(350mL)稀释，用饱和碳酸氢钠(300mL)，盐水(300mL)和1M磷酸二氢钠(300mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/正己烷(10％～25％乙酸乙酯)洗脱，得到标题化合物(5.1g，76％收率)。ESI-MS m/z[M+Na]+：C13H21NO5S2计算值358.1；实测值358.2。
实施例124.4-(双(2-(吡啶-2-基二磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(241)的合成。
Figure GDA0003907478750001711
向4-(双(2-(乙酰硫基乙基)氨基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(5.0g，14.9mmol)的THF(150mL)溶液中加入氢氧化钠(5.0g，125mmol)的水(100mL)溶液。将混合物在室温持续搅拌35分钟，用磷酸中和至pH 7。然后加入PySSPy(26.0g，118mmol)的THF(100mL)溶液，搅拌4小时，浓缩并在硅胶柱上纯化，用甲醇/二氯甲烷/乙酸(1：20/0.2)洗脱，得到标题化合物(5.8g，85.6％收率)。ESI-MS m/z[M+Na]+：C18H21N3O3S4计算值478.0；实测值478.2。
实施例125.2，5-二氧杂吡咯烷-1-基4-(双(2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸酯(242)的合成。
Figure GDA0003907478750001712
向4-(双(2-(2-吡啶-2-基二硫醚基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(5.2g，11.5mmol)的DMA(100mL)溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺(1.6g，13.9)mmol)和EDC·盐酸(5.0g，26.1mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(5％至15％乙酸乙酯)洗脱，得到标题化合物(5.8g，85.6％收率)。ESI-MS m/z[M+Na]+：C22H24N4O5S4计算值575.1；实测值575.2。
实施例126.N-(4-((S)-2-(4-(双(2-(吡啶-2-基二磺酰基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)丙酰胺基)苄基)-1-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓(243)的合成。
Figure GDA0003907478750001713
在0℃下将化合物242(23mg，0.04mmol)溶解于DMA(5mL)中，加入化合物28(56.8mg，0.08mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.020mL，0.12mmol)。反应物升温至室温，搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物273(39mg，85％收率)。ESI-MS m/z：M+C57H65FN9O8S4：计算值1150.38；实测值1150.45。
实施例127.4-(2-吡啶基二硫)-4-甲基戊酸(245)的合成。
Figure GDA0003907478750001721
向4-巯基-4-甲基戊酸(Goff，D.等，BioConjugate Chem.1990，1，381-386)(4.67g，31.5mmol)的甲醇(15mL)溶液中加入2，2'-二硫代二吡啶(30.0g，136.2mmol)的甲醇(80mL)和100mM磷酸钠缓冲溶液(pH 7.5，70mL)混合物。搅拌6小时后，将混合物浓缩，用乙酸乙酯/正己烷(1：1)萃取。将水溶液调节至pH 3，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，蒸发，并在硅胶柱上纯化(甲醇/二氯甲烷/乙酸，1：15：0.01)，得到标题化合物(7.05g，87％)。ESI-MS m/z：[M+H]+C11H15NO2S2计算值258.05；实测值258.05。
实施例128.N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基二硫代)-4-甲基戊酸酯(246)的合成。
Figure GDA0003907478750001722
向4-(2-吡啶基二硫代)-4-甲基戊酸(2.0g，7.78mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中，加入N-羟基琥珀酰亚胺(1.10g，9.56mmol)和EDC·盐酸(4.0g，20.8mmol)，将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化(乙酸乙酯/二氯甲烷，1：10)，得到标题化合物(2.48g，90％)。ESI-MS m/z：[M+Na]+C15H18N2O4S2计算值377.07；实测值377.08。
实施例129.1-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基-N-(4-((S)-2-(4-甲基-4-(苯基二磺酰基)戊胺基)丙酰胺基)苄基)哌啶-4-氮鎓(247)的合成。
Figure GDA0003907478750001723
在0℃下将化合物246(15mg，0.04mmol)溶解于DMA(5mL)中，加入化合物28(56.8mg，0.08mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.020mL，0.12mmol)。反应物升温至室温，搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物247(32mg，86％收率)。ESI-MS m/z：M+C51H60FN6O7S2：计算值951.39；实测值951.39。
实施例130.(S)-4-乙基-8-氟-4，9-二羟基-11-甲基-10-硝基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(124)的合成。
Figure GDA0003907478750001731
在化合物103(451.1mg，1.139mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入乙酸(1ml)、无水醋酸(0.2ml)和浓硝酸(0.3ml，4.665mmol)。将混合物搅拌3小时，用水(10ml)稀释，分离，并用二氯甲烷(3×25ml)萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，并在短的硅胶柱上纯化，用甲醇/二氯甲烷(1：10)洗脱，得到标题化合物(361.6mg，72％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C21H17FN3O7：计算值442.3739；实测值442.3810。
实施例131.(S)-9-(溴甲氧基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-甲基-10-硝基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(301)的合成。
Figure GDA0003907478750001732
在70℃下，将化合物124(350.3mg，0.793mmol)，二溴甲烷(1ml，14.41mmol)和碳酸氢钠(0.25g，2.97mmol)的THF溶液搅拌8小时。将混合物浓缩，并用盐酸(0.1M，8ml)和水(40mL)稀释。过滤收集沉淀的固体，溶于少量(1：10)乙酸乙酯/二氯甲烷，然后通过柱色谱法纯化，使用甲醇/二氯甲烷(1：10-1：6)洗脱，得到标题化合物(0.366g，86％收率)。ESI-MSm/z：[M+H]+C22H18BrFN3O7：计算值534.0313；实测值534.0385。
实施例132.(S)-8-乙基-4-氟-8-羟基-15-甲基-11，14-二氢-1H-唑并[4，5-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-9，12(2H，8H)-二酮(302)的合成。
Figure GDA0003907478750001733
在0℃下，向搅拌的THF(10ml)和浓盐酸(5mL)混合溶液中加入(S)-9-(溴甲氧基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-甲基-10-硝基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(0.360g，0.675mmol)，15分钟后将得到的澄清溶液冷却至-10℃。分批向反应混合物中加入氯化亚锡(0.384g，2.022mmol)，并使反应混合物升温至室温，搅拌1.5小时，在冰上冷却，缓慢加入碳酸氢钠至pH 5.5 -6.0，然后在70℃回流6小时并真空浓缩。将沉淀物过滤并用乙醇和乙醚洗涤，并将含水滤液用10％甲醇/二氯甲烷萃取。将有机相与沉淀物合并溶解在30％甲醇/二氯甲烷中，然后通过短硅胶垫，用20％甲醇/二氯甲烷洗脱。除去有机溶剂，得到标题化合物(0.120g，两步收率42％)，无需进一步纯化即可用于下一步骤。ESI-MS m/z：[M+H]+C22H18FN3O5：计算值424.1309；实测值424.1375。
实施例133.(S)-叔丁基(2-((2-(8-乙基-4-氟-8-羟基-15-甲基-9，12-二氧代-2，8，9，11，12，14-六氢-1H-唑并[4，5-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-1-基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸酯(303)的合成。
Figure GDA0003907478750001741
将(S)-8-乙基-4-氟-8-羟基-15-甲基-11，14-二氢-1H-恶唑并[4，5-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-9，12(2H，8H)-二酮，盐酸盐(158.3mg，0.344mmol)，2-(2-(((叔丁氧羰基羰基)氨基)乙酰氨基)乙酸(Boc-Gly-Gly-OH)(103.9mg，0.447mmol)和EDC(153.5mg，0.799mmol)的DMA(10ml)溶液搅拌8小时。将混合物浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：10–1：3)洗脱，得到标题化合物(182.6mg，82％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C31H33FN5O9：计算值638.2263；实测值638.2295。
实施例134.(S)-2-氨基-N-(2-(8-乙基-4-氟-8-羟基-15-甲基-9，12-二氧代-2，8，9，11，12，14-六氢-1H-唑并[4，5-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-1-基)-2-氧代乙基)乙酰胺盐酸盐(304)的合成。
Figure GDA0003907478750001751
将(S)-叔丁基(2-((2-(8-乙基-4-氟-8-羟基-15-甲基-9，12-二氧代-2，8，9，11，12，14-六氢-1H-恶唑并[4，5-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[[1，2-b]喹啉-1-基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸酯(175.6mg，0.275mmol)的浓盐酸(1ml)和二恶烷(4ml)混合溶液搅拌30分钟。随后用甲苯(5ml)稀释，浓缩并与二氯甲烷/甲苯(5：5ml，2次)浓缩，得到标题化合物(154.6mg，98％收率)，无需进一步纯化即可用于下一步骤。ESI-MS m/z：[M+H]+C26H25FN5O7：计算值538.1739；实测值538.1780。
实施例135.化合物305的合成。
Figure GDA0003907478750001752
向化合物236(83.2mg，0.102mmol)和化合物274(55.1mg，0.0960mmol)的DMA(8ml)溶液中，加入EDC(95.5mg，0.497mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用甲醇/二氯甲烷(1：6–1：3)洗脱，得到化合物305(103.3mg，81％收率)。ESI-MS m/z：(M+H)+C58H78FN10O23S：计算值1333.4947；实测值1333.5015。
实施例136.(R)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-N1-(4-(2-((2-((S)-8-乙基-4-氟-8-羟基-15-甲基-9，12-二氧代-2，8，9，11，12，14-六氢-1H-噁唑[4，5-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代丁基)-N5-(2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷-25-基)五烷二酰胺(306)的合成。
Figure GDA0003907478750001753
向化合物304(47.3mg，0.088mmol)和(S)-30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-27，31-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代-26，32-二氮杂三十六烷-36-酸(化合物6)(70.1mg，0.092mmol)的DMF(5mL)中加入EDC(55mg，0.286mmol)。将反应物搅拌8小时。浓缩后，残留物通过在硅胶柱上纯化，用甲醇/二氯甲烷(1：6–1：3)洗脱，得到化合物306(89.3mg，79％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C60H81FN9O21：计算值1282.5532；实测值1282.5590。
实施例137.5-氨基-4-(2-氯乙酰基)-2-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(307)的合成。
Figure GDA0003907478750001761
将溶解在二氯甲烷(20mL)中的5-氨基-2-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(5.00g，27.76mmol)滴加到冰水冷却的三氯化硼(1M的二氯甲烷，38.9mL)溶液中。将反应搅拌10分钟，然后加入氯乙腈(3.2g，42.5mmol)和三氯化铝(5.2g，38.9mmol)。加入完成后，将反应升温至室温然后回流过夜。将反应混合物冷却至约0℃，用2M盐酸(80mL)淬灭并在室温持续搅拌2个小时。分离各层，水相用二氯甲烷(3×80mL)萃取。用水(100mL)洗涤合并的有机相，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，在C-18柱上纯化，用甲醇/水(1：6至1：1)洗脱，得到化合物307(3.05g，43％收率)，为黄色固体。ESI-MS m/z：[M+H]+C11H14ClN2O3：257.0693；found257.0725。
实施例138.(S)-11-(氯甲基)-4-乙基-4-羟基-9-甲氧基-N-甲基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-8-甲酰胺(308)的合成。
Figure GDA0003907478750001762
将化合物307(59g，2.30mmol)和化合物25(0.57g，2.19mmol)溶解在无水甲苯(40mL)中，加入对甲苯磺酸(42mg，0.219mmol)。将悬浮液加热回流2天，然后冷却至室温。除去约三分之二的甲苯后，将残余物过滤，将滤饼用二氯甲烷洗涤，风干以得到化合物308(74g，70％收率)，为灰色粉末状固体。ESI-MS m/z：[M+H]+C24H23ClN3O6：484.1276；found484.1220。
实施例139.N-(4-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰胺基)苄基)-1-((S)-4-乙基-4-羟基-9-甲氧基-8-(甲基氨基甲酰基)-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓甲酸盐(300)的合成。
Figure GDA0003907478750001771
在0℃下，将化合物308(238mg，0.49mmol)，化合物18(200mg，0.49mmol)在DMF(5mL)中的混合物搅拌30分钟，然后加入三乙胺(63μL，0.45mmol)，继续搅拌1小时。将反应浓缩并通过制备型HPLC纯化(乙腈/含有甲酸的水，Φ＝5cm，v＝30ml/min，在45分钟内100％水至50％水)，得到化合物309(242mg，55％收率)，为黄色固体。ESI-MS m/z：M+C46H58N7O9：计算值852.4291；实测值852.4355。
实施例140.N-(4-((S)-2-氨基丙氨基)苄基)-1-(((S)-4-乙基-4-羟基-9-甲氧基-8-(甲基氨基甲酰基)-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]-吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓三氟乙酸盐(310)的合成。
Figure GDA0003907478750001772
将化合物309(95mg，0.111mmol)溶解于二氯甲烷和三氟乙酸(2mL/6mL)的混合物中，并在室温搅拌30分钟。将混合物用甲苯(10ml)稀释，然后浓缩，并在真空泵上干燥，得到化合物310(108mg，100％收率)，为黄色固体。ESI-MS m/z：M+C41H50N7O7：计算值752.3766；实测值752.3710。
实施例141.N-(4-((30S，38S)-30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺)-38-甲基-27，31，36-三氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂-26，32，37-三氮杂-三十九烷酰胺基)苄基)-1-((((S)-4-乙基-4-羟基-9-甲氧基-8-(甲基氨基甲酰基)-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓甲酸盐(311)的合成。
Figure GDA0003907478750001781
将化合物310(60mg，0.061mmol)和化合物7(60mg，0.064mmol)溶于DMF(5mL)中，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(21μL，0.12mmol)。反应升温至室温，并搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/含甲酸的水，Φ＝3cm，v＝20ml/min，100％的水至50％的水，45分钟内)纯化，得到化合物281(38.5mg，41％收率)。ESI-MS m/z：M+C75H106N11O21：计算值1496.7559；实测值1496.7595。
实施例142.(2R，3S)-2，3-双((苄氧基)羰基)氨基)琥珀酸(312)的合成。
Figure GDA0003907478750001782
在2小时内，向(2R，3S)-2，3-二氨基琥珀酸(4.03g，27.30mmol)的THF(250ml)和磷酸二氢钠(0.1M，250ml，pH 8.0)的混合溶液，分四批加入碳酸氯苄酯(15.0g，88.23mmol)，将混合物再搅拌6小时，浓缩并在硅胶柱上纯化，用含有1％甲酸的水/乙腈(1：9)洗脱，得到化合物(8.63g，75％收率)。MS ESI m/zC20H21N2O8[M+H]+计算值417.12，实测值417.50。
实施例143.(2R，3S)-双(2，5-二氧杂吡咯烷-1-基)2，3-双(((苄氧基)-羰基)氨基)琥珀酸酯的合成。
Figure GDA0003907478750001783
向(2R，3S)-2，3-双(((苄氧基)羰基)氨基)琥珀酸(4.25g，10.21mmol)的DMA(70ml)溶液中加入NHS(3.60g，31.30mmol)和EDC(7.00g，36.65mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：6)洗脱，得到标题化合物(5.48g，88％收率)。MS ESI m/zC28H27N4O12[M+H]+计算值611.15，实测值611.45。
实施例144.二叔丁基4，4'-(((2R，3S)-2，3-双(((苄氧基)羰基)-氨基)琥珀酰)双(氮杂二酰))二丁酸酯的合成。
Figure GDA0003907478750001791
向(2R，3S)-2，3-双(((苄氧基)羰基)氨基)琥珀酸(4.25g，10.21mmol)的DMA(70ml)溶液中加入4-氨基丁酸叔丁酯(3.25g，20.42mmol)和EDC(7.00g，36.65mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：10)洗脱，得到标题化合物(6.50g，91％收率)。MS ESI m/zC36H51N4O10[M+H]+计算值699.35，实测值699.55。
实施例145.二叔丁基4，4’-(((2R，3S)-2，3-二氨基琥珀酰)-双(氮杂二酰))二丁酸酯的合成。
Figure GDA0003907478750001792
向二叔丁基4，4'-(((2R，3S)-2，3-双((苄氧基)羰基)氨基)-琥珀酰基)双(氮杂二烷基))二丁酸溶液(2.50g，3.58mmol)的甲醇(100mL)溶液中加入10％Pd/C(0.30g，50％wet)，在室温下催化加氢反应(1大气压氢气)18小时。然后通过硅藻土过滤除去Pd/C，并用甲醇(70ml)洗涤滤床。浓缩滤液，得到黄色泡沫状产物，其无需进一步纯化即可用于下一步骤(1.54g，100％收率)。ESI：m/z：C20H39N2O6[M+H]+：计算值431.28；实测值431.50。
实施例146.4，4’-((2R，3S)-2，3-双(3-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)琥珀酰)双(氮杂二酰))二丁酸叔丁酯的合成。
Figure GDA0003907478750001793
向3-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸(1.25g，7.39mmol)的DMA(60ml)溶液中加入二叔丁基4，4’-(((2R，3S)-2，3-二氨基琥珀酰)-双(氮杂二酰))二丁基酸酯(1.54g，约3.57mmol)和EDC(2.40g，12.56mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：10)洗脱，得到标题化合物(2.35g，90％收率)。MS ESI m/zC34H49N6O12[M+H]+计算值733.33，实测值733.60。
实施例147.4，4’-(((2R，3S)-2，3-双(3-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)琥珀酰)双(氮杂二基))二丁酸的合成。
Figure GDA0003907478750001801
向二叔丁基4，4′-((2R，3S)-2，3-双(3-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)琥珀酰)双(氮杂二基))二丁酸酯(2.30g，3.14mmol)的1，4-二二恶烷(20ml)溶液中加入盐酸(36％，7.0ml)。将混合物搅拌30分钟，用甲苯(20ml)稀释，浓缩并在硅胶柱上纯化，用甲醇/二氯甲烷(1：10至1：4)洗脱，得到标题化合物(1.69g，86％收率)。MS ESI m/zC26H33N6O12[M+H]+计算值621.21，实测值621.70。
实施例148.二叔丁基4，4’-(((2R，3S)-2，3-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基)琥珀酰)双(氮杂二基))二丁酸酯的合成。
Figure GDA0003907478750001802
向2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酸(1.12g，7.22mmol)的DMA(60ml)溶液中加入二叔丁基4，4’-(((2R，3S)-2，3-二氨基琥珀酰)-双(氮杂二酰))二丁酸酯(1.54g，约3.58mmol)和EDC(2.40g，12.56mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：10)洗脱，得到标题化合物(2.29g，91％收率)。MS ESI m/zC32H45N6O12[M+H]+计算值704.30，实测值704.60。
实施例149.4，4’-(((2R，3S)-2，3-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基)琥珀酰)双(氮杂二基))二丁酸的合成。
Figure GDA0003907478750001811
向二叔丁基4，4'-((2R，3S)-2，2-双(3-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺)琥珀酰)双(氮杂二基))二丁酸酯(2.20g，3.12mmol)的1，4-二二恶烷(20ml)中加入盐酸(36％，7.0ml)。将混合物搅拌30分钟，用甲苯(20ml)稀释，浓缩并在硅胶柱上纯化，用甲醇/二氯甲烷(1：10至1：4)洗脱，得到标题化合物(1.69g，86％收率)。MS ESI m/zC24H29N6O12[M+H]+计算值593.18，实测值593.40。
实施例150.双(2，5-二氧吡咯烷-1-基)4，4’-(((2R，3S)-2，3-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基)琥珀酰)双(氮杂二酰))二丁酸酯的合成。
Figure GDA0003907478750001812
向4，4′-((2R，3S)-2，3-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙酰胺基)琥珀酰)双(氮杂二基))二丁酸(1.10g，1.85mmol)的二甲基甲酰胺(30ml)溶液中加入NHS(1-羟基吡咯烷-2，5-二酮)(0.55g，4.78mmol)和EDC(1.25g，6.54mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：10)洗脱，得到标题化合物(1.30g，90％收率)。MS ESI m/zC32H35N8O16[M+H]+计算值787.21，实测值787.60。
实施例151.(2S，3S)-2，3-双(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)琥珀酸的合成。
Figure GDA0003907478750001813
在THF/H2O/DIPEA(125ml/125ml/2ml)的混合物中加入(2R，3R)-2，3-二氨基琥珀酸(5.00g，33.77mmol)，马来酸酐(6.68g，68.21mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩，得到(2S，3S)-2，3-双((Z)-3-羧基丙烯酰胺基)琥珀酸(11.05g，99％收率)，为白色固体。MS ESI m/zC12H13N2O10[M+H]+计算值345.05，实测值345.35。
向(2S，3S)-2，3-双((Z)-3-羧基丙烯酰胺基)琥珀酸(11.05g，33.43mmol)的乙酸(70ml)，DMF(10ml)和甲苯(50ml)的混合溶液中加入酸酐(30ml)。将混合物搅拌2小时，用Dean-Stark分水器，在100℃下回流6小时，浓缩，与乙醇(2×40ml)和甲苯(2×40ml)浓缩，并在硅胶柱上纯化，用水/乙腈(1：10)洗脱，得到标题化合物(8.10g，78％收率)。MS ESI m/zC12H9N2O8[M+H]+计算值309.03，实测值309.50。
实施例152.(2S，3S)-双(2，5-二氧吡咯-1-基)2,3-双(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)琥珀酸酯的合成。
Figure GDA0003907478750001821
向(2S，3S)-2，3-双(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)琥珀酸(4.00g，12.98mmol)的DMF溶液中加入70ml的NHS(3.60g，31.30mmol)和EDC(7.00g，36.65mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：6)洗脱，得到标题化合物(5.79g，89％收率，HPLC纯度约为96％)。MS ESI m/zC20H15N4O12[M+H]+计算值503.06，实测值503.60。
实施例153.4-(((苄氧基)羰基)氨基)丁酸的合成。
Figure GDA0003907478750001822
在-20℃下，向氢氧化钠(23.3g，0.58mol，2.0eq)的水溶液(140mL)中加入4-氨基丁酸(30.0g，0.29mol，1.0eq)和THF(60mL)，然后逐滴加入氯甲酸苄酯(54mL，0.38mol，1.3eq)的THF(57mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌4小时，然后浓缩并用乙酸乙酯(4×100mL)洗涤。将浓盐酸加入到水相中直至达到pH 3。用乙酸乙酯(4×150mL，2×100mL)萃取，合并的有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物(48.3g，70.3％)，为白色固体。ESI m/z：C12H16NO4[M+H]+计算值238.1，实测值238.1。
实施例154.叔丁基4-((((苄氧基)羰基)氨基)丁酸酯的合成。
Figure GDA0003907478750001831
在0℃下，向4-((((苄氧基)羰基)氨基)丁酸(48.0g，0.2mol，1.0eq)和t-BuOH(58.0mL，0.6mol，3.0eq)的无水二氯甲烷(480mL)溶液中加入DCC(50.0g，0.24mol，1.2eq)和DMAP(2.5g，0.02mol，0.1eq)，然后将混合物升温至室温并搅拌过夜。滤出固体并将滤液浓缩，然后用乙酸乙酯(400mL)稀释，并用5％碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。残余物通过硅柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5：1)，得到标题化合物(32.8g，55.1％)，为无色油状物。ESI m/z：C16H24NO4[M+H]+计算值294.2，实测值294.2。
实施例155.叔丁基4-氨基丁酸的合成。
Figure GDA0003907478750001832
在氢化瓶中，将叔丁基4-((((苄氧基)羰基)氨基)丁酸酯(29.0g，0.099mol，1.0eq)的甲醇(100mL)溶液和Pd/C(2.9g，10％Pd/C，50％wet)混合。在室温下催化加氢(1大气压氢气)振荡过夜。将反应混合物过滤，并将滤液浓缩，得到标题化合物，为无色油状物(13.8g，83.7％收率)。ESI m/z：C8H18NO2[M+H]+计算值160.1，实测值160.1。
实施例156.11-(苄氧基)-11-氧代十一酸的合成。
Figure GDA0003907478750001833
向十一碳二酸(1.73g，8mmol)的DMF(30mL)溶液中加入碳酸钾(1.1g，8mmol)和溴化苄(1.36g，8mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩，并通过柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物(1.1g，45％收率)。ESI m/z：C18H27O4[M+H]+：计算值307.18；实测值307.15。
实施例157.3-(2-(2-(2-(二苄基氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸的合成。
Figure GDA0003907478750001834
向叔丁基3-(2-(2-(2-(二(苄基氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸酯(2.00g，4.84mmol)的二氯甲烷(5mL)的溶液中加入甲酸(5mL)。将反应在室温下搅拌过夜，然后浓缩至干，并与二氯甲烷浓缩两次，并将残余物置于泵上，得到标题化合物(1.72g，～100％收率)。ESI m/zC21H27NO4[M+H]+：计算值358.19；实测值358.19。
实施例158.叔丁基2-苄基-11-氧代-1-苯基-5，8，15，18-四氧杂-2，12-二氮杂二十一烷-21-酯的合成。
Figure GDA0003907478750001841
在0℃下，向3-(2-(2-(2-(二苄基氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸(1.12g，4.83mmol)和叔丁基3-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙酸酯(1.72g，4.83)的二氯甲烷(30mL)溶液中加入HATU(1.83g，4.83mmol)和TEA(0.68mL，4.83mmol)。将反应升温至室温并搅拌1小时，然后用50mL二氯甲烷稀释，倒入装有50mL水的分液漏斗中。分离有机相，并用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(甲醇/二氯甲烷)纯化残余物，得到标题化合物(2.21g，80％收率)。ESI m/z C32H48N2O7[M+H]+：计算值573.35；实测值573.35。
实施例159.叔丁基1-氨基-9-氧代-3，6，13，16-四氧杂-10-氮杂十九烷-19-酯的合成。
Figure GDA0003907478750001842
在氢化瓶中，将2-苄基-11-氧代-1-苯基叔丁基-5，8，15，18-四氧杂-2，12-二氮杂二十一烷-21-酯(2.21g，3.86mmol)的甲醇(20mL)溶液和Pd/C(10wt％，0.2g)搅拌过夜，通过硅藻土(助滤剂)过滤，并将滤液浓缩，得到标题化合物(1.5g，～100％收率)。ESI m/zC18H36N2O7[M+H]+：计算值393.25；实测值393.25。
实施例160.31-苄基1-叔丁基11，21-二氧代-4，7，14，17-四氧杂-10，20-二氮杂三十一烷-1，31-二酯。
Figure GDA0003907478750001843
在0℃下，向叔丁基1-氨基-9-氧代-3，6，13，16-四氧杂-10-氮杂十二烷-19-酯(1.50g，3.86mmol)和11-(苄氧基)-11-氧代十一酸(1.10g，3.6mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入HATU(1.48g，3.9mmol)和TEA(0.55mL，3.9mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时，然后加入50mL二氯甲烷稀释，倒入装有50mL水的分液漏斗中。分离有机相，并用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(甲醇/二氯甲烷)纯化残余物，得到标题化合物(1.50g，61％收率)。ESI m/z C36H61N2O10[M+H]+：计算值681.42；实测值681.42。
实施例161.3，13，23-三氧代-1-苯基-2，17，20，27，30-五氧杂-14，24-二氮杂三十三烷-33-酸的合成。
Figure GDA0003907478750001851
向31-苄基-1-叔丁基-11，21-二氧代-4，7，14，17-四氧杂-10，20-二氮杂三十一烷-1，31-二酯(1.50g，2.2mmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中加入三氟乙酸(3mL)。将反应在室温下搅拌1小时，然后浓缩至干并与二氯甲烷浓缩两次，并将残余物置于泵上，得到标题化合物(0.09g，2.2mmol，粗产物)。ESI m/z C32H53N2O10[M+H]+：计算值625.36；实测值625.35。
实施例162.(S)-39-((苄氧基)羰基)氨基)-3，13，23，33-四氧代-1-苯基-2，17，20，27，30-五氧杂-14，24，34-三氮杂四十烷-40-酸的合成。
Figure GDA0003907478750001852
在0℃下，向3，13，23-三氧代-1-苯基-2，17，20，27，30-五氧杂-14，24-二氮杂三十三烷-33-酸(1.50g，2.20mmol)和Z-Lys-OH(0.62g，2.20mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入HATU(0.84g，2.20mmol)和TEA(0.31mL，2.20mmol)。将反应混合物在室温持续搅拌1小时，然后用50mL二氯甲烷稀释，倒入装有100mL水的分液漏斗中。分离有机相，并用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(甲醇/二氯甲烷)纯化残余物，得到标题化合物(1.00g，53％收率)。ESI m/z C46H71N4O13[M+H]+：计算值887.49；实测值887.50。
实施例163.二叔丁基3，3’-((氧基双(乙烷-2，1-二基))双(氧基))二丙酯的合成。
Figure GDA0003907478750001853
向二甘醇(20g，0.188mol)的THF(200mL)溶液中加入钠(0.43g，0.018mol)。在室温下搅拌1小时，加入丙烯酸叔丁酯(48g，0.376mol)，并将反应混合物在室温下搅拌2天。将反应真空浓缩并通过柱色谱法纯化，得到标题化合物(34g，50％收率)。ESI m/z C18H35O7[M+H]+：计算值363.23；实测值363.23。
实施例164.3，3’-((氧基双(乙烷-2，1-二基))双(氧基))二丙酸的合成。
Figure GDA0003907478750001861
在室温下，将二叔丁基3，3'-((双氧(乙烷-2，1-二基))双(氧))二酸酯(34g，0.093mol)溶于甲酸(100mL)中并搅拌过夜。反应在真空下浓缩，得到标题化合物。ESI m/zC10H19O7[M+H]+：计算值251.11；实测值251.11。
实施例165.2，2-二甲基-4，14，24-三氧杂-3，7，10，17，20，27，30，33-八氧杂-13，23-二氮杂三十六烷-36-酸的合成。
Figure GDA0003907478750001862
在0℃下，向叔丁基1-氨基-9-氧代-3，6，13，16-四氧杂-10-氮杂十九烷-19-酯(1.50g，3.82mmol)和3，3'-((双氧(乙烷)-2，1-二基)双(氧基))二丙酸(1.90g，7.64mmol)的DMF(10mL)溶液中加入HATU(1.45g，3.82mmol)和DIPEA(0.66mL，3.82mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌1小时，然后用二氯甲烷(80mL)稀释，用水(10mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化，得到标题化合物(1.75g，75％收率)，为无色液体。ESIm/z C28H53N2O13[M+H]+：计算值625.35；实测值625.35。
实施例166 1-叔丁基33-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)11，21-二氧代-4，7，14，17，24，27，30-六氧杂-10，20-二氮杂三十三烷-1，33-二酯的合成。
Figure GDA0003907478750001863
在0℃下，向2，2-二甲基-4，14，24-三氧代-3，7，10，17，20，27，30，33-八氧杂-13，23-二氮杂三十六烷-36-酸(1.75g，2.8mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入EDCI(1.07g，5.6mmol)和NHS(0.64g，5.6mmol)。将反应物升温至室温并搅拌过夜，然后用二氯甲烷(80mL)稀释，用水(10mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到标题化合物(2.00g，～100％收率)。ESI m/z C32H56N3O15[M+H]+：计算值722.36；实测值722.36。
实施例167.(S)-42-((苄氧基)羰基)氨基)-2，2-二甲基-4，14，24，36-四氧代-3，7，10，17，20，27，30，33-八氧杂-13，23，37-三氮杂四十三烷-43-酸的合成。
Figure GDA0003907478750001864
向N-α-Cbz-L-赖氨酸(1.17g，4.2mmol)的水(10mL)溶液中加入碳酸氢钠(0.47g，5.6mmol)，并将反应混合物冷却至5℃，并加入1-叔丁基33-(2，5-二氧杂吡咯烷-1-基)11，21-二氧杂-4，7，14，17，24，27，30-六氧杂-10，20-二氮杂三十三烷-1，33-二酯(2.00g，2.8mmol)溶解于1，4-二恶烷(10mL)中的溶液。将反应升温至室温，并搅拌1小时，然后通过加入1N盐酸酸化至pH 3，用二氯甲烷(50mL×3)萃取。有机萃取物用水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题产物(2.3g，92％收率)。ESI m/z C42H71N4O16[M+H]+：计算值887.48；实测值887.48。
实施例168.(S)-43-苄基1-叔丁基7-((苄氧基)羰基)氨基)-6，13，23，33-四氧代-16，19，26，29-四氧杂-5，12，22，32-四氮杂四十三烷-1，43-二酸酯的合成。
Figure GDA0003907478750001871
将(S)-39-((((苄氧基)羰基)氨基)-3，13，23，33-四氧代-1-苯基-2，17，20，27，30-五氧杂-14，24，34-三氮杂四十烷-40-酸(200mg，0.225mmol)溶于DMF(5mL)并冷却至0℃，依次加入叔丁基4-氨基丁酸酯(71.8mg，0.45mmol)和EDC(86.2mg，0.45mmol)。将反应物升温至室温搅拌过夜，倒入冰水中，用二氯甲烷(3×20mL)萃取。用水(5mL)，盐水(5mL)洗涤合并的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物(231mg，100％收率)。ESIm/z C54H86N5O14[M+H]+：计算值1028.61，实测值：1028.61。
实施例169.(7S，10R，11S，14S)-二叔丁基10，11-双((苄氧基)-羰基)氨基)-6，9，12，15-四氧代-7，14-双(31-氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26，29-十氧代-32-氮杂三十六烷-36-基)-5，8，13，16-四氮杂二十烷-1，20-二酯(342)的合成。
Figure GDA0003907478750001872
将(S)-叔丁基37-((苄氧基)羰基)氨基)-31，38-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26，29-十氧杂-32，39-二氮杂四十三烷-43-酯(5.98g，6.73mmol)和Pd/C(10wt％，0.6g)在甲醇(30mL)中的混合物在1大气压下氢化反应过夜，然后通过硅藻土(助滤剂)过滤。在0℃下，将滤液浓缩并重新溶解在THF(60mL)，加入(2R，3S)-2，3-双(((苄氧基)羰基)氨基)琥珀酸(1.01g，2.42mmol)和HOBt(817mg，6.05mmol)，依次加入DCC(1.25g，6.05mmol)和DIPEA(2.1mL，12.10mmol)。将反应物在室温搅拌过夜，然后用乙酸乙酯(400mL)稀释，并用0.1N盐酸，饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化(24：1二氯甲烷/甲醇)，得到标题化合物(5.65g，49％收率)。MS ESI m/z C90H154N8O34[M+H]+计算值1892.06，实测值1892.60。
实施例170.(7S，10R，11S，14S)-二叔丁基-10，11-二氨基-6，9，12，15-四氧代-7，14-双(31-氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26，29-十氧-32-氮杂三十六烷-36-基)-5，8，13，16-四氮杂二十烷-1，20-二酯的合成。
Figure GDA0003907478750001881
将(7S，10R，11S，14S)-二叔丁基10，11-双((((苄氧基)-羰基)氨基)-6，9，12，15-四氧代-7，14-双(31-氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26，29-十氧三十二烷-32-氮杂三十六烷-36-基)-5，8，13，16-四氮杂二十烷-1，20-二酯(3.71g，1.96mmol)和Pd/C(10wt％，0.40g)的甲醇(50mL)在1个大气压下氢化反应过夜，然后通过硅藻土(助滤剂)过滤。浓缩滤液，得到标题化合物(3.18g，100％收率)。MS ESI m/z C74H142N8O30[M+H]+计算值1623.98，实测值1624.50。
实施例171.(7S，10R，11S，14S)-10，11-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-6，9，12，15-四氧代-7，14-双(31-氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26，29-十氧杂-32-氮杂三十六烷-36-基)-5，8，13，16-四氮杂二十烷-1，20-二酸的合成。(344)。
Figure GDA0003907478750001891
向(7S，10R，11S，14S)-二叔丁基10，11-二氨基-6，9，12，15-四氧代-7，14-双(31-氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26，29-十氧杂-32-氮杂三十六烷-36-基)-5，8，13，16-四氮杂二十烷-1，20-二酯(315mg，0.194mmol)的DMA(10mL)溶液中加入EDC(150mg，0.785mmol)和4-马来酰-丁酸(72mg，0.57mmol)。将混合物在室温搅拌12小时，浓缩并通过硅胶柱色谱法(1：4甲醇/二氯甲烷)纯化，得到油状物(329mg，87％收率)，将其溶于二氯甲烷(25mL)，在室温下与三氟乙酸(5mL)反应1小时，然后浓缩，得到标题化合物(309mg，99％收率)。MS ESIm/z C82H140N10O36[M+H]+计算值1841.94，实测值1842.50。
实施例172.(S)-11-(5-(叔丁氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氧代五酰胺)十一烷酸(345)的合成。
Figure GDA0003907478750001892
向Boc-Glu(OtBu)-OH(0.50g，1.65mmol)的DMF(10mL)溶液中加入HATU(0.69g，1.82mmol)和TEA(0.26mL，1.82mmol)。搅拌30分钟后，加入11-酰胺基十一烷酸(0.33g，1.65mmol)的DMF(10mL)溶液，将该反应物在室温持续搅拌1小时，然后倒入含有200mL 1N盐酸的分液漏斗中，并用二氯甲烷(3×50mL)萃取。有机相用100mL盐水洗涤一次，然后经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱法(甲醇/二氯甲烷)纯化残余物，得到标题化合物(1.0g，100％收率)。ESI：m/z：C25H47N2O7[M+H]+：计算值487.33；实测值487.34。
实施例173.(S)-11-(2-氨基-4-羧基丁酰胺基)十一酸的合成。
Figure GDA0003907478750001893
向(S)-11-(5-(叔丁氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氧代五酰胺基)十一酸(1.0g，～2.05mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三氟乙酸(5mL)。将反应在室温搅拌30分钟，然后浓缩至干并与二氯甲烷浓缩两次。最后，置于真空泵上，得到标题化合物(0.68g，2.06mmol，100％收率)。ESI m/z C16H31N2O5[M+H]+：计算值331.22；实测值331.22。
实施例174.化合物347的合成。
Figure GDA0003907478750001901
在500mL烧瓶中，将H2N-PEG4-CH2CH2CO2H(3.0g，11.3mmol，1.0eq)和K2CO3(4.7g，33.93mmol，3.0eq)溶解于50mL水中，并在冰水浴上冷却。逐滴加入Boc2O(3.2g，14.7mmol，1.3)的THF(50mL)溶液。反应升温至室温搅拌过夜。用1N KHSO4将反应混合物的pH调节至4-5，并用二氯甲烷(200mL×1，100mL×3)萃取，用水(500mL×1)和盐水(500mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物溶于少量二氯甲烷中，然后上样到硅胶柱，用2-4％甲醇/二氯甲烷洗脱，合并组分并浓缩，得到3.8g化合物347，为无色油状物(93％收率)。ESI m/zC16H32O8[M+H]+：计算值366.2；实测值：366.2。
实施例175.化合物348的合成。
Figure GDA0003907478750001902
在50mL单颈烧瓶中，将BocHN-PEG4-CH2CH2CO2H(0.81g，2.22mmol，1.0eq)，K2CO3(0.92g，6.66mmol，3.0eq)和NaI(0.033g，0.222mmol，0.1eq)在10mL DMF中的混合物，在冰水浴上冷却，并逐滴加入溴化苄(0.57g，3.33mmol，1.5eq)，将混合物升温至室温搅拌过夜。反应混合物用100mL水稀释，二氯甲烷(100mL×2)萃取，水(200mL×1)和盐水(200mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物溶于少量的二氯甲烷中，上样到硅胶柱上，用70-90％的乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到0.69g的无色油化合物348(69％收率)。ESI m/z C23H38O8[M+H]+：计算值446.3；实测值：446.3。
实施例176.化合物349的合成。
Figure GDA0003907478750001903
在室温下，将BocHN-PEG4-CH2CH2CO2Bn(0.69g，1.5mmol，1.0eq)的6mL二氯甲烷溶液和3mL三氟乙酸搅拌30分钟，除去溶剂，并将残余物与二氯甲烷浓缩3次，置于高真空泵上。粗产物直接用于下一步反应。ESI m/z C18H30O6[M+H]+：计算值356.2；实测值：356.2。
实施例177.化合物350的合成。
Figure GDA0003907478750001911
向BocHN-PEG4-CH2CH2CO2H(3.8g，10.4mmol，1.0eq)的50mL无水二氯甲烷溶液中加入NHS(1.4g，12.5mmol，1.2eq)和EDC(10.0g，52.0mmol，5.0eq)。将反应物在室温搅拌过夜，然后用水(50mL×2)，盐水(100mL×1)洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩。粗产物直接用于下一步。ESI m/z C20H35N2O10[M+H]+：计算值463.2；实测值463.2。
实施例178.化合物351的合成。
Figure GDA0003907478750001912
在300mL烧瓶中，将H2N-PEG4-CH2CH2CO2H(2.8g，10.4mmol，1.0eq)和K2CO3(4.3g，31.2mmol，3.0eq)溶于40mL水中，在冰水浴上冷却，并逐滴加入上述NHS酯(3.8g，10.4mmol)的THF(40mL)溶液，将混合物升温至室温搅拌过夜。用1N KHSO4将反应混合物的pH调节至4-5，并用二氯甲烷(150mL×1，100mL×2)萃取，用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩。将残余物溶于少量二氯甲烷中，并上样至硅胶柱，用4-6％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到无色油状物(5.18g，81％收率)。ESI m/z C27H53N2O13[M+H]+：计算值613.3；实测值：613.3。
实施例179.化合物352的合成。
Figure GDA0003907478750001913
将H2N-PEG4-CH2CH2CO2Bn(来自上一步骤的粗产物)溶于3mL DMF，在冰水浴上冷却，逐滴加入DIPEA(0.78g，6.0mmol，4.0eq)，然后加入化合物22(0.93g，1.5mmol，1.0eq)的DMF(7mL)溶液和HATU(1.72g，4.5mmol，3.0eq)。将反应物在冰浴上搅拌2小时，并用100mL水稀释，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，用1N KHSO4(200mL×1)，饱和碳酸氢钠(200mL×1)和盐水(200mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物溶解在少量二氯甲烷中，上样到硅胶柱上，并用0-5％甲醇/二氯甲烷洗脱。合并组分并浓缩，得到1.0g浅黄色油状物(71％收率)。ESI m/z C45H80N3O18[M+H]+：计算值950.5；实测值：950.5。
实施例180.(S)-叔丁基34-((苄氧基)羰基)氨基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酯的合成(196)。
Figure GDA0003907478750001921
在0℃下，向叔丁基4-氨基丁酸酯(1.03g，6.12mmol)和(S)-34-((((苄氧基)羰基)氨基)氨基-28-氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29-氧杂三十五烷-35-酸(3.91g，5.56mmol)的DMF(18mL)中，依次加入HATU(2.32g，6.12mmol)和TEA(1.2mL，8.34mmol)。将反应搅拌1小时，然后用水(300mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。用盐水洗涤有机溶液，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶柱色谱(32：1二氯甲烷/甲醇)纯化，得到标题化合物(5.10g，99％收率)。ESI MS m/z 846.50([M+H]+)。
实施例181.(S)-叔丁基34-氨基-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酯(197)的合成。
Figure GDA0003907478750001922
将化合物210(1.0g，1.18mmol)和Pd/C(10wt％，0.10g)加入装有甲醇(50mL)的氢化瓶中。将混合物振荡2小时，通过硅藻土(助滤剂)过滤，并将滤液浓缩，得到化合物197(0.93g，收率＞100％)。ESI MS m/z 712.50([M+H]+)。
实施例182.(S)-叔丁基34-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酯(353)的合成。
Figure GDA0003907478750001923
向化合物197(0.93g，1.18mmol)的95％甲醇(50mL)和NaH2PO4(0.1M，pH5.0，10mL)溶液中，加入N-琥珀酰亚胺基4-马来酰亚胺基丁酸酯(0.50g，1.77mmol，1.5eq)。将混合物搅拌过夜，然后浓缩并用水(50mL)稀释，并用二氯甲烷(80mL×3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化(25：1的二氯甲烷/甲醇)，得到标题化合物(0.82g，80％)为浅黄色油状物。ESI MS m/z 877.52([M+H]+)。
实施例183.(S)-34-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酸(354)的合成。
Figure GDA0003907478750001931
将化合物353(0.82g，0.94mmol)溶解于甲酸(10mL)中，并在室温下搅拌1小时。浓缩反应混合物，并与甲苯浓缩两次，将残余物置于真空泵上，得到化合物354(0.80g，粗产物)。ESI MS m/z 820.45([M+H]+)。
实施例184.(S)-2，5-二氧吡咯烷-1-基34-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酯(355)的合成。
Figure GDA0003907478750001932
向化合物213(0.80g，粗产物，0.94mmol)的DMA(5.0mL)溶液中，加入NHS(0.12g，1.03mmol)和EDC·HCl(0.27g，1.41mmol)，在室温下持续搅拌2小时，然后用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化(10-50％乙酸乙酯/石油醚)，得到无色油状物(0.67g，78％收率)。ESI MS m/z 918.55([M+H]+)。
实施例185.叔丁基(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基甲酸酯(356)的合成。
Figure GDA0003907478750001933
将N-Boc-乙二胺(5.6mL，35.4mmol，1.1eq)和饱和碳酸氢钠(60mL)的混合物冷却至0℃，分批加入N-甲氧基羰基马来酰亚胺(5.00g，32.2mmol，1.0eq)。在0℃下，搅拌30分钟后，将反应升温至室温搅拌1小时。过滤收集沉淀物，并用冷水洗涤，然后溶解在乙酸乙酯中，并用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体(6.69g，87％收率)。ESI MS m/z 241.12([M+H]+)。
实施例186.(2-(1，3-二氧代-3a，4，7，7a-四氢-1H-4，7-环氧异吲哚-2(3H)-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成(357)。
Figure GDA0003907478750001941
在高压管中，将化合物356(6.00g，25.0mmol)，呋喃(18.0mL)的甲苯(120mL)溶液加热回流并搅拌16小时，反应期间无色溶液变为黄色。然后将混合物冷却至室温并浓缩。将所得白色固体用乙醚打浆，得到化合物357(6.5g，84％收率)。ESI MS m/z 309.13([M+H]+)。
实施例187.2-(2-氨基乙基)-3a，4，7，7a-四氢-1H-4，7-环氧吲哚-1，3(2H)-二酮盐酸盐的合成(358)。
Figure GDA0003907478750001942
将化合物357(9.93g，32.2mmol)的二恶烷(15mL)溶液在室温下与浓盐酸(15mL)持续反应3小时。浓缩反应物，并通过过滤收集固体，用乙酸乙酯洗涤滤饼。将固体在烘箱(50℃)中干燥过夜，得到化合物217(6.94g，88％收率)。ESI MS m/z206.05([M+H]+)。
实施例188.化合物359的合成。
Figure GDA0003907478750001943
在-10℃下，向化合物358(1.22g，5mmol)的THF(10mL)和乙腈(10ml)溶液中加入三氯氧磷(0.47mL，5mmol)。搅拌10分钟后，加入2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-胺(2.14g，5mmol)，然后加入DIPEA(0.87mL，5mmol)。将反应加热至0℃并搅拌3小时，然后浓缩。将残余物用二氯甲烷(10mL)稀释，并通过硅藻土过滤，将滤液真空浓缩，得到粗品(3.7g，50％纯度)，将其直接用于下一步。ESI MS m/z 716.29([M+H]+)。
实施例189.化合物360的合成。
Figure GDA0003907478750001951
向2-(2-(2-(2-氨基乙酰氨基)乙酰氨基)乙酸(Gly-Gly-Gly，0.501g，2.644mmol)的乙腈(20ml)溶液中加入DIPEA(0.87ml，5mmol)和化合物359(1.00g，50％纯度，0.699mmol)。将混合物在40℃下搅拌6小时，浓缩并通过制备型HPLC(乙腈/含1％甲酸的水，Φ＝5cm，v＝30ml/min，在45分钟内用70％水至25％水洗脱)纯化，得到化合物360(321.5mg，53％收率)。ESI-MS m/z：(M+H)+C35H62N6O17P：计算值869.3910；实测值869.3995。
实施例190.化合物361的合成。
Figure GDA0003907478750001952
将化合物360(160.1mg，0.184mmol)的DMA(10ml)和甲苯(10ml)中的溶液回流8小时，浓缩并通过制备型C-18HPLC纯化(乙腈/含1％甲酸的水，Φ＝3cm，v＝20ml/min，在45分钟内70％水至25％水)，冻干后得到化合物361(125.5mg，85％收率)。ESI-MS m/z：(M+H)+C35H62N6O17P：计算值801.3648；实测值801.3725。
实施例190.化合物362的合成。
Figure GDA0003907478750001953
向化合物40(50mg，0.064mmol)和化合物361(51.5mg，0.064mmol)的DMF(5mL)溶液中加入EDC(99.5mg，0.517mmol)和N，N-二异丙基乙胺(45μL，0.26mmol)。将反应在室温下搅拌6小时，浓缩，并通过制备型C-18HPLC(乙腈/含有0.5％甲酸，Φ＝3cm，v＝20ml/min，在45分钟内从70％水至25％水)纯化，得到化合物41(66.7mg，71％收率)。ESI-MS m/z：M+C45H49FN7O9：计算值1467.6607；实测值1467.6675。
实施例191.14-(苄氧基)-14-氧代十四烷酸的合成。(363)。
Figure GDA0003907478750001961
向十四碳二酸(2.06g，8mmol)的DMF(30mL)溶液中，加入碳酸钾(1.1g，8mmol)和溴化苄(1.36g，8mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩，并通过柱色谱(乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到标题化合物363(1.2g，45％收率)。ESI MS m/z 349.23([M+H]+)。
实施例192.3-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁基酯(364)的合成。
Figure GDA0003907478750001962
向2，2’-(乙烷-1，2-二基双(氧基))二乙醇(55.0mL，410.75mmol，3.0eq)的无水THF(200mL)溶液中，加入钠(0.1g)。搅拌混合物直至钠消失，然后滴加丙烯酸叔丁酯(20.0mL，137.79mmol，1.0eq)。将混合物搅拌过夜，然后在0℃下通过HCl溶液(20.0mL，1N)淬灭。通过旋转蒸发除去THF，加入盐水(300mL)，并将所得混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。有机层用盐水(3×300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为无色油状物(30.20g，79.0％收率)，无需进一步纯化即可使用。MS ESI m/z 278.17([M+H]+)。
实施例193.3-(2-(2-(2-(2-(甲苯磺酰氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯的合成(365)。
Figure GDA0003907478750001963
在0℃下，向3-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(30.20g，108.5mmol，1.0eq)和TsCl(41.37g，217.0mmol，2.0eq)的无水二氯甲烷(220mL)溶液中，加入TEA(30.0mL，217.0mmol，2.0eq)。将该混合物在室温搅拌过夜，然后用水(3×300mL)和盐水(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化(3：1己烷/乙酸乙酯)，得到无色油状物(39.4g，84.0％收率)。MS ESI m/z 433.28([M+H]+)。
实施例194.3-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(366)的合成。
Figure GDA0003907478750001964
向3-(2-(2-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁基酯(39.4g，91.1mmol，1.0eq)的无水DMF(100mL)溶液中加入叠氮化钠(20.67g，316.6mmol，3.5eq)。将混合物在室温下搅拌过夜。加入水(500mL)，并用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。用水(3×900mL)和盐水(900mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶柱色谱法(5：1己烷/乙酸乙酯)纯化，得到黄色油状物(23.8g，85.53％收率)。MS ESI m/z326.2([M+Na]+)。
实施例195.3-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(367)的合成。
Figure GDA0003907478750001971
将Raney-Ni(7.5g，悬浮于水中)用水(三次)和异丙醇(三次)洗涤，并与化合物366(5.0g，16.5mmol)在异丙醇中混合。将混合物在氢气球下于室温搅拌16小时，过滤，然后在硅藻土垫上过滤，用异丙醇洗涤滤垫。浓缩滤液，并通过柱色谱法纯化(5-25％甲醇/二氯甲烷)，得到浅黄色油状物(2.60g，57％收率)。MS ESI m/z 279.19([M+H]+)。
实施例196.27-苄基-1-叔丁基-14-氧代-4，7，10-三氧杂-13-氮杂二十七烷-1，27-二酯(368)的合成。
Figure GDA0003907478750001972
向化合物363(2.60g，9.35mmol)和化合物367的二氯甲烷(50mL)中加入，EDC·HCl(2.15g，11.2mmol)和DIPEA(3.6mL，20.6mmol)。将反应混合物在室温持续搅拌1小时，然后用50mL二氯甲烷稀释，倒入装有50mL水的分液漏斗中。分离有机相，用盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(0-10％甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物368(4.94g，87％收率)。MS ESI m/z 608.40([M+H]+)。
实施例197.3，16-二氧代-1-苯基-2，20，23，26-四氧杂-17-氮杂二十九烷-29-酸(369)的合成。
Figure GDA0003907478750001973
向化合物368(4.94g，8.14mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三氟乙酸(20mL)。将反应在室温搅拌1小时，然后浓缩至干，并与二氯甲烷浓缩两次，并将残余物置于泵上，得到化合物369(4.50g，粗产物)。ESI MS m/z 552.35([M+H]+)。
实施例198.40-苄基-1-叔丁基-14，27-二氧代-4，7，10，17，20，23-六氧杂-13，26-二氮杂四十烷-1，40-二酯(370)的合成。
Figure GDA0003907478750001981
向化合物369(4.50g，粗产物，8.14mmol)和化合物367(1.95g，7.00mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入EDC·HCl(1.56g，8.14mmol)和DIPEA(2.7mL，15.4mmol)。将反应混合物在室温持续搅拌1小时，然后用50mL二氯甲烷稀释，倒入装有50mL水的分液漏斗中。分离有机相，用盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(0-10％甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物370(5.22g，92％收率)。MS ESI m/z 811.52([M+H]+)。
实施例199.3，16，29-三氧代-1-苯基-2，20，23，26，33，36，39-七氧杂-17，30-二氮杂四十二烷-42-酸(371)的合成。
Figure GDA0003907478750001982
向化合物370(5.22g，6.44mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三氟乙酸(20mL)。将反应在室温搅拌1小时，然后浓缩至干，并与二氯甲烷浓缩两次，并将残余物置于泵上，得到化合物370(4.90g，粗产物)。ESI MS m/z 755.46([M+H]+)。
实施例200.40-苄基1-(2，5-二氧吡咯烷-1-基)14，27-二氧代-4，7，10，17，20，23-六氧杂-13，26-二氮杂四十烷-1，40-二酯(372)的合成。
Figure GDA0003907478750001983
向化合物371(4.90g，粗产物，6.44mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中加入NHS(0.81g，7.08mmol)，EDC·HCl(1.85g，9.66mmol)和DIPEA(2.8mL，16.1mmol)。将反应搅拌2小时，然后用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化(10-50％乙酸乙酯/石油醚)，得到化合物373(4.90g，90％收率)，为无色油状物。ESI MS m/z 852.48([M+H]+)。
实施例201.1-((2，5-二氧吡咯烷-1-基)氧基)-1，14，27-三氧代-4，7，10，17，20，23-六氧代-13，26-二氮杂四十烷-40-酸(373)的合成。
Figure GDA0003907478750001984
在氢化瓶中，向化合物372(4.90g，5.75mmol)的THF(20mL)溶液中加入Pd/C(10wt％，0.20g)。将混合物在H2(1atm)下搅拌过夜，通过硅藻土(助滤剂)过滤，并将滤液浓缩，得到化合物373(4.50g，收率＞100％)。ESI MS m/z 762.44([M+H]+)。
实施例202.(S)-五氟苯基2-((S)-2-(4-(双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)丙酰胺基)丙酸酯(374)的合成。
Figure GDA0003907478750001991
向(S)-2-((S)-2-(4-(双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧杂烟酰胺基)丙酰胺基)丙酸(47mg，0.084mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入EDC(210mg，1.10mmol)和五氟苯酚(50.0mg，0.27mmol)。将混合物在室温搅拌3小时，浓缩并在硅胶柱上纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝20：1至5：1)，得到标题化合物374(44.6mg，79％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C28H27F5N5O9，计算值672.17；实测值672.17。
实施例203.1，2-双(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)肼-1，2-二羧酸二叔丁酯(375)的合成。
Figure GDA0003907478750001992
向二叔丁基肼-1，2-二羧酸酯(8.01g，34.4mmol)的DMF(150ml)溶液中，加入氢化钠(60％，2.76g，68.8mmol)。在室温搅拌30分钟后，加入二叔丁基2-溴乙酸酯(14.01g，72.1mmol)。将混合物搅拌过夜，加入甲醇(3ml)淬灭，浓缩，用乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)稀释，分离，并将水层用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。合并有机层，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶柱色谱法纯化(乙酸乙酯/正己烷1：5至1：3)，得到标题化合物(12.98g，82％收率)，为无色油状物。MS ESI m/z C22H41N2O8[M+H]+计算值461.28，实测值461.40。
实施例204.2，2'-(肼-1，2-二基)二乙酸(376)的合成。
Figure GDA0003907478750001993
向二叔丁基1，2-二(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)肼-1，2-二羧酸酯(6.51g，14.14mmol)的1，4-二恶烷(40ml)溶液中，加入盐酸(12M，10ml)。将混合物搅拌30分钟，用二恶烷(20ml)和甲苯(40ml)稀释，浓缩，再并与二恶烷(20ml)和甲苯(40ml)浓缩至干，得到粗制的标题产物，用于下一步，无需进一步生产(2.15g，103％收率，～93％纯度)。MS ESI m/zC4H9N2O4[M+H]+计算值149.05，实测值149.40。
实施例205.2，2'-(1，2-双((E)-3-溴丙烯酰基)肼-1，2-二基)二乙酸(377)的合成。
Figure GDA0003907478750002001
向2，2'-(肼-1，2-二基)二乙酸(1.10g，7.43mmol)的THF(50ml)和NaH2PO4(0.1M，80ml，pH 6.0)的混合溶液中，加入(E)-3-溴丙烯酰基溴(5.01g，23.60mmol)。将混合物搅拌6小时，浓缩并在硅胶柱上纯化，用含有3％甲酸的水/乙腈(1：9)洗脱，得到标题化合物(2.35g，77％收率，93％纯度)。MS ESI m/zC10H11Br2N2O6[M+H]+计算值412.89，实测值413.50。
实施例206.2，2'-(1，2-双((E)-3-溴丙烯酰基)肼-1，2-二基)二乙酰氯(378)的合成。
Figure GDA0003907478750002002
向2，2'-(1，2-双((E)-3-溴丙烯酰基)肼-1，2-二基)二乙酸(210mg，0.509mmol)的二氯乙烷(15ml)溶液中加入草酰氯(505mg，4.01mmol)，然后加入0.040ml DMF。在室温搅拌2小时后，将混合物浓缩并与二氯乙烷(2×20ml)和甲苯(2×15ml)浓缩至干，得到标题粗产物(不稳定)，无需进一步纯化用于下一步(245mg，107％收率)。MS ESI m/z C10H9Br2Cl2N2O4[M+H]+计算值448.82，450.82，452.82，454.82，实测值448.60，450.60，452.60，454.60。
实施例207.2，8-二氧代-1，5-恶唑烷-5-羧酸叔丁酯(380)的合成。
Figure GDA0003907478750002003
在4℃下，在1小时内，向3，3'-氮杂二基二丙酸(10.00g，62.08mmol)的1.0M NaOH(300ml)溶液中加入碳酸氢二叔丁酯(22.10g，101.3mmol)的THF(200ml)溶液，加完后，将混合物在4℃下搅拌2小时。将混合物用0.2M H3PO4小心酸化至pH4，真空浓缩，用二氯甲烷萃取，经硫酸钠干燥，蒸发并用快速硅胶色谱法纯化，用醋酸/甲醇/二氯甲烷(0.01：1：5)洗脱，得到3，3'-((叔丁氧基羰基)氮杂二基)二丙酸379(13.62g，84％收率)。ESI MS m/zC11H19NO6[M+H]+，计算值262.27；实测值262.40。
在0℃下，向3，3'-((叔丁氧基羰基)氮杂二基)二丙酸(8.0g，30.6mmol)的二氯甲烷(500ml)溶液中加入五氧化二磷(8.70g，61.30mmol)。将混合物在0℃下搅拌2小时，然后在室温下持续搅拌1小时，通过短硅胶柱过滤，并用乙酸乙酯/二氯甲烷(1：6)冲洗该柱。浓缩滤液，并用乙酸乙酯/己烷打浆，得到标题化合物380(5.64g，74％收率)。ESI MS m/zC11H17NO5[M+H]+，计算值244.11；实测值244.30。
实施例208.4-(2，5-二氧代-2，5-二氢1H-吡咯-1-基)丁酸(381)的合成。
Figure GDA0003907478750002011
向马来酸酐(268g，2.73mol)的乙酸(1L)溶液中，加入4-氨基丁酸(285g，2.76mol)。在室温搅拌30分钟，将反应物回流1.5小时，冷却至室温，真空浓缩。得到的残余物溶于乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗产物用乙酸乙酯和石油醚结晶，得到白色固体(400g，80％收率)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.71(s，2H)，3.60(t，J＝6.7Hz，2H)，2.38(t，J＝7.3Hz，2H)，2.00–1.84(m，2H)。
实施例209.2，5-二氧吡咯烷-1-基-4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸酯(382)的合成。
Figure GDA0003907478750002012
在室温下，将4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸(400g，2.18mol，1.0eq)溶解在二氯甲烷(1.5L)中，向其中加入N-羟基琥珀酰亚胺(276g，2.40mmol，1.1eq)和DIC(303g，2.40mol，1.1eq)，搅拌过夜。将反应浓缩并通过柱色谱法(1：2石油醚/乙酸乙酯)纯化，得到为白色固体的NHS酯(382g，63％收率)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.74(s，2H)，3.67(t，J＝6.8Hz，2H)，2.85(s，4H)，2.68(t，J＝7.5Hz，2H)，2.13–2.03(m，2H)。
实施例210.(S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)丙酸(383)的合成。
Figure GDA0003907478750002021
在0℃下，向化合物382(7.10g，25.35mmol)和丙氨酸(3.01g，33.80mmol)的DMF(50mL)溶液中加入DIPEA(10mL)。将反应混合物在0℃下搅拌0.5小时，然后在室温下搅拌1小时。然后将反应混合物浓缩并在硅胶柱上纯化(二氯甲烷/甲醇＝10：1，含0.1％的甲酸)得到化合物383(5.21g，81％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C11H14N2O5计算值255.09；实测值255.15。
实施例211.(S)-2，5-二氧杂吡咯烷-1-基-2-(4-(2，5-二氧杂2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)丙酸酯(384)的合成。
Figure GDA0003907478750002022
将化合物383(5.15g，20.26mmol)，N-羟基琥珀酰亚胺(2.80g，24.34mmol)，EDC(10.28g，54.10mmol)和DIPEA(5.50ml，31.63mmol)的二氯甲烷(70ml)溶液搅拌6小时，真空浓缩，并在硅胶柱上纯化(流动相：二氯甲烷/乙酸乙酯＝10：1)，得到化合物384(5.83g，82％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C15H17N3O7计算值351.11；实测值351.20。
实施例212.(S)-1-苄基5-叔丁基2-(14-(苄氧基)-14-氧代十四烷酰胺基)戊二酸酯的合成。(385)。
Figure GDA0003907478750002023
在室温下，将(S)-1-苄基5-叔丁基2-氨基戊酸酯，盐酸盐(8.70g，26.39mmol)，14-(苄氧基)-14-氧代十四烷酸(9.19mmol)，DIPEA(8.0ml，46.0)和EDC(15.3g，80.50mmol)在二氯甲烷(200ml)中的混合物搅拌6小时。将混合物用水(100ml)稀释并分离。用二氯甲烷(100ml)萃取水相。合并有机相，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并在硅胶柱上纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝20：1至5：1)，得到标题化合物385(13.65g，83％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C37H54NO7，计算值624.38；实测值624.38。
实施例213.(S)-5-(苄氧基)-4-(14-(苄氧基)-14-氧代巯基氨基)-5-氧代戊酸(386)的合成。
Figure GDA0003907478750002031
在4℃下，将化合物385(12.50g，20.05mmol)溶解于二恶烷(30mL)中，并与浓盐酸(10mL)反应0.5小时。反应混合物用甲苯(20ml)和DMF(20ml)稀释，在15℃下浓缩，得到标题化合物386(11.26g，99％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C33H46NO7，计算值568.32；实测值568.34。
实施例214.(S)-35，49-二苄基1-叔丁基16，32，37-三氧代-3，6，9，12，19，22，25，28-八氧杂-15，31，36-三氮杂四十九烷-1，35，49-三羧酸酯(387)的合成。
Figure GDA0003907478750002032
将化合物386(10.70g，18.86mmol)，叔丁基1-氨基-15-氧代-3，6，9，12，19，22，25，28-八氧杂-16-氮杂三十一烷-31-酸酯盐酸盐(11.45g，18.93mmol)，EDC(9.51g，50.01mmol)和DIPEA(4.00ml，23.00mol)在二氯甲烷(200ml)中的混合物搅拌过夜，用盐水(100ml)稀释并分离。用二氯甲烷(100ml)萃取水相。合并有机相，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩并在硅胶柱上纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝10：1至4：1)，得到标题化合物387(18.15g，86％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C59H96N3O17计算值1118.67；实测值1118.80。
实施例215.(S)-18-(((苄氧基)羰基)-3，16，21，37-四氧代-1-苯基-2，25，28，31，34，41，44，47，50-九氧杂-17，22，38-三氮杂五十三烷-53-酸(388)的合成。
Figure GDA0003907478750002033
在4℃下，将化合物387(10.50g，9.39mmol)溶解在二恶烷(45mL)中，并与盐酸(15mL，36％浓)反应0.5小时。在15℃下，将反应混合物用甲苯(20ml)和DMF(20ml)稀释，浓缩，并在硅胶柱上纯化(二氯甲烷/甲醇＝10：1至6：1)，得到标题化合物388(8.67g，87％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C55H88N3O17计算值1062.60；实测值1062.68。
实施例216.(18S，59S)-18-((苄氧基)羰基)-59-((叔丁氧基羰基)氨基)-3，16，21，37，53-五氧代-1-苯基-2，25，28，31，34，41，44，47，50-九氧杂-17，22，38，54-四氮杂六十烷-60-酸(389)的合成。
Figure GDA0003907478750002041
将化合物388(8.50g，8.01mmol)，N-羟基琥珀酰亚胺(3.20g，27.82mmol)，EDC(10.28g，54.10mmol)和DIPEA(6.00ml，34.51mmol)的THF(150ml)溶液搅拌6小时，真空浓缩，得到(S)-18-(((苄氧基)羰基)-3，16，21，37-四氧代-1-苯基-2，25，28，31，34，41，44，47，50-九氧杂-17，22，38-三氮杂五十三烷-53-酸，无需纯化即可用于下一步。
向(S)-6-氨基-2-((叔丁氧羰基羰基)氨基)己酸盐酸盐(2.75g，9.73mmol)的DMF(100mL)和1.0M Na2PO4(pH 7.5，55mL)混合溶液中，在1小时内分四批加入N-琥珀酰亚胺酯，将反应混合物在室温下再搅拌3小时。浓缩后，将残余物在硅胶柱上纯化(二氯甲烷/甲醇＝10：1至4：1)，得到标题化合物389(8.16g，79％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C66H108N5O20计算值1289.75；实测值1289.90。
实施例217.(18S，59S)-59-氨基-18-((苄氧基)羰基)-3，16，21，37，53-五氧代-1-苯基-2，25，28，31，34，41，44，47，50-九氧杂-17，22，38，54-四氮杂六十烷-60-酸盐酸盐(390)的合成。
Figure GDA0003907478750002042
在4℃下，将化合物389(8.10g，6.28mmol)溶解在二恶烷(40mL)中，并与盐酸(15mL，36％浓)反应0.5小时。反应混合物用甲苯(20ml)和DMF(20ml)稀释，在15℃下浓缩，得到粗标题化合物390(7.71g，100％收率)，无需进一步纯化即可用于下一步。MS-ESI m/z：[M+H]+C61H88N3O17，计算值1190.70；实测值1190.78。
实施例218.(S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)丙酸(391)的合成。
Figure GDA0003907478750002051
在0℃下，向化合物301(7.10g，25.35mmol)和丙氨酸(3.01g，33.80mmol)的DMF(50mL)溶液中加入DIPEA(10mL)。将反应混合物在0℃下搅拌0.5小时，在室温下搅拌1小时。然后将反应混合物浓缩并在硅胶柱上纯化(二氯甲烷/甲醇＝10：1，含有0.1％的甲酸)，得到化合物391(5.21g，81％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C11H14N2O5，计算值255.09；实测值255.15。
实施例219.(S)-2，5-二氧杂吡咯烷-1-基-2-(4-(2，5-二氧杂2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)丙酸酯(392)的合成。
Figure GDA0003907478750002052
将化合物391(5.15g，20.26mmol)，N-羟基琥珀酰亚胺(2.80g，24.34mmol)，EDC(10.28g，54.10mmol)和DIPEA(5.50ml，31.63mmol)的二氯甲烷(70ml)溶液搅拌6小时，真空浓缩，并在硅胶柱上纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝10：1)，得到化合物392(5.83g，82％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C15H17N3O7，计算值351.11；实测值351.20。
实施例220.(18S，59S)-18-((苄氧基)羰基)-59-((S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)丙酰胺基)-3，16，21，37，53-五氧代-1-苯基-2，25，28，31，34，41，44，47，50-九氧杂-17，22，38，54-四氮杂六十烷-60-酸(393)的合成。
Figure GDA0003907478750002053
在0℃下，向化合物390(7.61g，6.39mmol)和化合物392(2.90g，8.280mmol)的DMF(40mL)溶液中加入DIPEA(7mL)。将反应混合物在0℃下搅拌0.5小时，然后在室温下搅拌1小时。然后将反应混合物浓缩并在硅胶柱上纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇＝10：1，含有0.1％的甲酸)，得到化合物393(7.10g，78％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C72H112N7O22，计算值1426.7782；实测值1426.7820。
实施例221.(18S，59S)-18-((苄氧基)羰基)-59-((S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)丙酰胺基)-3，16，21，37，53，60，63，66，69-九氧代-1-苯基-2，25，28，31，34，41，44，47，50-九氧杂-17，22，38，54，61，64，67，70-八氧杂七十二烷-72-酸(395)的合成。
Figure GDA0003907478750002061
将化合物393(7.05g，4.94mmol)，N-羟基琥珀酰亚胺(0.92g，8.00mmol)，EDC(3.01g，15.84mmol)和DIPEA(1.00ml，5.75mmol)的THF(50ml)溶液搅拌6小时并真空浓缩，得到化合物394粗品，为393的NHS酯，其无需纯化即可用于下一步骤。
向2-(2-(2-(2-氨基乙酰氨基)乙酰氨基)乙酸(Gly-Gly-Gly)盐酸盐(1.67g，7.40mmol)的DMF(40mL)和1.0M Na2PO4(pH 7.5，15mL)混合溶液中，在1小时内分四批加入上述化合物394。将反应混合物在室温下再搅拌3小时。浓缩后，将残余物在硅胶柱上纯化(二氯甲烷/甲醇＝10：1至7：1)，得到标题化合物395(8.16g，79％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C78H121N10O25，计算值1597.8426；实测值1597.8495。
实施例222.N-(4-((18S，61S，76S)-18-((苄氧基)羰基)-61-((S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰氨基)丙酰胺基)-76-甲基-3，16，21，38，55，62，65，68，71，74-十氧代-1-苯基-2，25，29，32，35，42，46，49，52-九氧杂-17，22，39，56，63，66，69，72，75-九氧杂七十七酰胺基)苄基)-1-((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓甲酸盐(396)的合成。
Figure GDA0003907478750002062
在室温下，将化合物395(251mg，0.157mmol)，化合物28的三氟乙酸盐(147.8mg，0.157mmol)，EDC(101mg，0.526mmol)和DIPEA(0.10ml，0.575mmol)在DMA(10ml)中的溶液搅拌6小时。真空浓缩混合物，并通过制备C-18HPLC纯化(乙腈/0.5％甲酸，Φ＝3cm，v＝20ml/min，在45min内90％水至30％水)，得到化合物396(235.8mg，62％收率)。ESI-MS m/z：M+C121H171FN17O31：计算值2377.2305；实测值2377.2415。
实施例223.N-(4-((2S，17S，60S)-60，74-二羧基-17-((S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)丙酰胺基)-2-甲基-4，7，10，13，16，23，40，57，62-九氧代-26，29，32，36，43，46，49，53-八氧杂-3，6，9，12，15，22，39，56，61-九氮杂七十四酰胺基)苄基)-1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓(397)的合成。
Figure GDA0003907478750002071
将化合物396(110mg，0.0454mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液与三氟乙酸(4mL)反应1小时。将反应混合物用甲苯(5ml)和DMF(5ml)稀释，浓缩，并通过制备型C-18HPLC(乙腈/水，含0.5％甲酸，Φ＝3cm，v＝20ml/min，95在45分钟内将水溶解到30％的水中)纯化，得到化合物397(70.2mg，69％收率)。ESI-MS m/z：M+C107H159FN17O31：计算值2197.1366；实测值2197.1410。
实施例224.(S)-叔丁基(2-((2-((2-((1-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)哌啶-4-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸酯(398)的合成。
Figure GDA0003907478750002072
向(S)-11-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮盐酸盐(49)(0.805g，1.478mmol)的DMF(25ml)和0.1M NaH2PO4(pH 7.5，50ml)的混合溶液中，加入2，5-二氧杂吡咯烷-1-基2，2-二甲基-4，7，10-三氧代-3-氧杂-5，8，11-三氮杂十三烷-13-酯(0.855g，2.214mmol)，3小时内分4批加入。加完后，将混合物再搅拌2小时，浓缩，用乙酸乙酯/正丁醇(1：1，15ml×3)萃取。合并有机层，浓缩并在硅胶柱上纯化(二氯甲烷/甲醇＝12：1至7：1)，得到标题化合物398(0.841g，73％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C38H47FN7O10，计算值780.3369；实测值780.3415。
实施例225.(S)-2-氨基-N-(2-((2-((1-(4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)哌啶-4-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙基)乙酰胺盐酸盐(399)的合成。
Figure GDA0003907478750002081
在4℃下，将化合物398(0.810g，1.039mmol)溶解于二恶烷(25mL)中，并与浓盐酸(10mL)反应0.5小时。反应混合物用甲苯(15ml)和DMF(15ml)稀释，在15℃下浓缩，得到标题化合物399粗品(0.744g，100％收率)，无需进一步纯化即可用于下一步。MS-ESI m/z：[M+H]+C33H39FN7O8，计算值680.2845；实测值680.2895。
实施例226.(2S，10S，11S，19S)-2，19-双((S)-18-((苄氧基)羰基)-3，16，21，37，53-五氧代-1-苯基-2，25，28，31，34，41，44，47，50-九氧杂-17，22，38，54-四氮杂五十八烷-58-基)-10，11-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-4，9，12，17-四氧代-3，8，13，18-四氮代二十烷-1，20-二酸(400)的合成。
Figure GDA0003907478750002082
在0℃下，向化合物390(2.78g，2.267mmol)和化合物176(0.951g，1.129mmol)的DMF(40mL)溶液中加入DIPEA(7mL)。将反应混合物在0℃下搅拌0.5小时，然后在室温下搅拌1小时。将反应混合物浓缩并在硅胶柱上纯化(流动相：二氯甲烷/甲醇＝10：1至3：1，含0.1％的甲酸)，得到化合物400(2.432g，72％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C150H231N16O46，计算值2992.6229；实测值2992.6295。
实施例227.(15S，56S，64S，65S，73S，114S)-四苄基64，65-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-56，73-双((2-((2-((2-((1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧杂-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-哌啶-4-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酰基)-13，18，34，50，58，63，66，71，79，95，111，116-十二烷氧代-22，25，28，31，38，41，44，47，82，85，88，91，98，101，104，107-十六烷氧杂-14，19，35，51，57，62，67，72，78，94，110，115-十二氮杂一百二十八烷-1，15，114，128-四羧酸酯(401)的合成。
Figure GDA0003907478750002091
将化合物399(0.150g，0.209mmol)，化合物400(0.312g，0.104mmol)，EDC(0.252g，1.311mmol)的DMF(8ml)的溶液搅拌8小时，真空浓缩并在硅胶柱上纯化(二氯甲烷/甲醇＝10：1至7：1)，得到标题化合物401(0.301g，67％收率)。MS-ESI m/z：[M+H]+C216H303F2N30O60，计算值4315.1550；实测值4315.1685。
实施例228.(15S，56S，64S，65S，73S，114S)-64，65-双(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-56，73-双((2-((2-((2-((1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧杂-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-哌啶-4-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酰基)-13，18，34，50，58，63，66，71，79，95，111，116-十二烷氧代-22，25，28，31，38，41，44，47，82，85，88，91，98，101，104,107-十六烷氧杂-14，19，35，51，57，62，67，72，78，94，110，115-十二烷氮杂一百二十八烷-1，15，114，128-四羧酸(402)的合成。
Figure GDA0003907478750002101
将化合物401(105mg，0.0243mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液与三氟乙酸(4mL)反应1小时。将反应混合物用甲苯(5ml)和DMF(5ml)稀释，浓缩，通过制备型C-18HPLC(乙腈/水，含0.5％甲酸，Φ＝3cm，v＝20ml/min，在45分钟内95％至30％的水)纯化，得到化合物402(65.3mg，68％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C188H279F2N30O60：计算值3954.9672；实测值3954.9785。
实施例229.(S)-1，1'-(((((2S，20S)-11-(叔丁氧羰基)-2，20-二甲基-4，7，15，18-四氧代-3，8，11，14，19-五杂氮杂二十一烷-1，21-二基)双(氮杂二基)双(4，1-亚苯基))双(亚甲基))双(4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-(甲基)-1-甲基哌嗪-1-氮鎓)甲酸盐(405)
Figure GDA0003907478750002102
将化合物40(96mg，0.132mmol)和化合物53(26mg，0.066mmol)的DMF(3mL)溶液冷却至0℃，然后加入HATU(50mg，0.132mmol)和N，N-二异丙基乙胺(46μL，0.264mmol)。将混合物在0℃下搅拌30分钟，并通过制备C-18HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物405(80mg，67％)。ESI-MS m/z：[M]2+C91H109F2N15O18：计算值868.90；实测值868.92。
实施例230.(S)-1，1'-(((((2S，20S)-2，20-二甲基-4，7，15，18-四氧代-3，8，11，14，19-五氮杂二十二烷-1，21-二基)双(氮杂二基)双(4，1-亚苯基))双(亚甲基))双(4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-(甲基)-1-甲基哌嗪-1-氮鎓)甲酸盐(406)
Figure GDA0003907478750002111
将化合物405(80.1mg，0.043mmol)溶解于三氟乙酸/二氯甲烷(1mL/3mL)中，并在室温搅拌30分钟，将反应混合物浓缩至干，得到化合物406(74.55mg，101％收率)。ESI-MSm/z：[M]2+C86H101F2N15O16：计算值818.8754；实测值818.8810。
实施例231.(S)-1，1'-((((2S，20S)-11-((S)-30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-27，31-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂-26，32-二氮杂三十六烷-36-酰基)-2，20-二甲基-4，7，15，18-四氧代-3，8，11，14，19-五氮杂二十一烷-1，21-二酰基)双(氮杂二基))双(4，1-亚苯基))双(亚甲基))双(4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌嗪-1-氮鎓)甲酸盐(407)的合成。
Figure GDA0003907478750002112
将化合物406(74.0mg，0.043mmol)和化合物7(39mg，0.0516mmol)溶于DMF(3mL)中，冷却至约0℃，然后加入N，N-二异丙基乙胺(42L，0.24mmol)。将反应升温至室温并搅拌2小时，浓缩，并通过制备型C-18HPLC(乙腈/含有2％甲酸的水)纯化，得到化合物407(42mg，45％收率)。ESI-MS m/z：[M+]2+C120H157F2N19O30：计算值1191.06；实测值1191.07。
实施例232.2，2'-((叔丁氧羰基)氮杂二基)二乙酸(408)的合成。
Figure GDA0003907478750002121
将亚氨基二乙酸(5.0g，37.6mmol)溶于THF(50mL)和水(50mL)中，之后与NaHCO3(12.6g，150mmol)混合。在约5℃下，缓慢加入Boc2O(9.8g，45.1mmol)，然后将反应升温至室温，搅拌2天。将反应混合物用水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×30mL)洗涤，然后使用浓盐酸调节至pH 1.0。溶液用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，合并有机相用水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，用乙酸乙酯/石油醚打浆，得到白色固体(5.5g，63％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C9H15NO6：计算值234.09；实测值234.09。
实施例233.(S)-1，1'-(((((2S，2'S)-2，2'-((2，2'-((叔丁氧羰基)氮杂二基)双(乙酰基)))双(氮杂二基))双(丙酰基)双(氮杂二烷基)双(4，1-亚苯基))双(亚甲基)双(4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲酸甲基哌嗪-1-氮鎓)甲酸盐(409)的合成。
Figure GDA0003907478750002122
将化合物40(109mg，0.12mmol)和化合物408(14mg，0.06mmol)的DMF(3mL)溶液冷却至0℃，再加入HATU(50mg，0.132mmol)和N，N-二异丙基乙胺(84μL，0.48mmol)。将反应在0℃下搅拌30分钟，然后通过制备型C-18HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物409(61mg，62％收率)。ESI-MS m/z：[M]2+C83H95F2N13O16：计算值783.85；实测值783.85。
实施例234.(S)-1，1'-((((2S，2'S)-2，2'-((2，2'-氮杂二苯基(乙酰基))双(氮杂二苯基)(双(丙酰基))双(氮杂二苯基)(双(4，1-亚苯基))双(4-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌嗪-1-氮鎓)甲酸盐(410)的合成。
Figure GDA0003907478750002131
将化合物409(61mg，0.036mmol)溶于三氟乙酸/二氯甲烷(1mL/3mL)中，在室温下搅拌30分钟。用甲苯(4ml)稀释反应混合物并浓缩至干，得到化合物410(59.3mg，>100％收率)。ESI-MS m/z：[M]2+C78H87F2N13O14：计算值733.82；实测值733.82。
实施例235.1-(4-((30S，41S)-30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-37-(2-((S)-1-((4-((4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1-2，b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌嗪-1-基-1-基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)-41-甲基-27，31，36，39-四氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂-26，32，37，40-四氮杂四十二烷酰胺基)-苄基)-4-((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-甲基哌嗪-1-氮鎓甲酸盐(411)的合成
Figure GDA0003907478750002132
将化合物410(65mg，0.036mmol)和化合物6(27mg，0.036mmol)的DMF(3mL)溶液冷却至0℃，再加入HATU(17.5mg，0.046mmol)和N，N-二异丙基乙胺(26μL，0.144mmol)。将反应在0℃下搅拌30分钟，然后通过制备型C-18HPLC(乙腈/水，含2％甲酸)纯化，得到化合物411(39mg，62％收率)。ESI-MS m/z：[M]2+C112H143F2N17O28：计算值1106.01；实测值1106.01。
实施例236.(S)-N，N'-(((((2S，2'S)-2，2'-((2，2'-((叔丁氧羰基)氮杂二基)双(乙酰基))双(氮杂二基))双(丙酰基)双(氮杂二烷基)双(4，1-亚苯基))双(亚甲基)双(1-((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓)甲酸盐(412)的合成。
Figure GDA0003907478750002141
将化合物28(106mg，0.113mmol)和化合物408(13mg，0.056mmol)的DMF(3mL)溶液冷却至0℃，加入HATU(43mg，0.113mmol)和N，N-二异丙基乙胺(39μL，0.226mmol)。将反应搅拌4小时，然后通过制备型C-18HPLC(乙腈/水，含有甲酸)纯化，得到化合物412(71mg，74％收率)。ESI-MS m/z：[M]2+C87H103F2N13O16：计算值811.8801；实测值811.8875。
实施例237.(S)-1，1'-((((2S，2'S)-2，2'-((2，2'-氮杂二苯基(乙酰基))双-(氮杂二苯基))双(丙酰基)(双(氮杂二苯基))双(4，1-亚苯基)双(亚甲基)双(1-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并-[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓)甲酸盐(413)的合成。
Figure GDA0003907478750002142
将化合物412(71mg，0.041mmol)溶于三氟乙酸/二氯甲烷(1mL/3mL)中，并在室温下搅拌30分钟。用甲苯(5ml)稀释反应混合物并浓缩至干燥，得到化合物413(70mg，>100收率)。ESI-MS m/z：[M]2+C82H95F2N13O14：计算值761.8539；实测值761.8595。
实施例238.N-(4-((30S，41S)-30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-37-(2-((S)-((4-((4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1-2，b]喹啉-11-基哌啶-4-基)二甲基铵)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)-41-甲基-27，31，36，39-四氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂-26，32，37，40-四氮杂四十二烷酰胺基)-苄基)-1-((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)-N，N-二甲基哌啶-4-氮鎓甲酸盐(414)的合成。
Figure GDA0003907478750002151
将化合物413(70mg，0.041mmol)和化合物6(32mg，0.041mmol)的DMF(4mL)溶液冷却至0℃，再加入HATU(19mg，0.049mmol)和N，N-二异丙基乙胺(28μL，0.164mmol)。将反应搅拌4小时，然后通过制备型C-18HPLC(乙腈/水，含甲酸)纯化，得到化合物414(43mg，45％收率)。ESI-MS m/z：[M]2+C116H151F2N17O28：计算值1134.04；实测值1134.04。
实施例239.4-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酰胺基)苄基(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸酯(415)的合成。
Figure GDA0003907478750002152
向化合物15(83mg，0.282mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入三光气(30mg，0.094mmol)和三乙胺(37μL，0.282mmol)。然后将反应升温至室温，搅拌1小时，浓缩至干。将化合物30(100mg，0.235mmol)溶解于DMF(2mL)中并冷却至0℃，向其中加入三乙胺(37μL，0.282mmol)和上述氯甲酸酯。加入完成后，将所得混合物在0℃下搅拌1小时，然后通过制备型C-18HPLC(乙腈/水，含甲酸)纯化，得到化合物415(122mg，70％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C38H40FN5O10：计算值746.2838；实测值746.2898。
实施例240.4-((S)-2-氨基丙酰胺基)苄基(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸酯(416)的合成。
Figure GDA0003907478750002161
将化合物415(122.5mg，0.164mmol)溶于三氟乙酸/二氯甲烷(1mL/3mL)中，并在室温下搅拌30分钟。用甲苯(4ml)稀释反应混合物并浓缩至干，得到化合物416(120.2mg，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C33H32FN5O8：计算值646.22；实测值646.22。
实施例241.叔丁基双(2-(((S)-1-((4-((((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)氨甲酰基(氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)甲氨酸盐(417)的合成。
Figure GDA0003907478750002162
将化合物416(120mg，0.164mmol)和化合物408(19mg，0.082mmol)的DMF(3mL)溶液冷却至0℃，加入HATU(62mg，0.164mmol)和N，N-二异丙基乙胺(57μL，0.328mmol)。将反应搅拌8小时，浓缩，然后通过制备型C-18HPLC(乙腈/水，含甲酸)纯化，得到化合物417(171mg，70％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C75H76F2N11O20：计算值1488.5237；实测值1488.5295。
实施例242.((((2S，2'S)-2，2'-((2，2'-氮杂二基双(乙酰基))双(氮杂二基))-双(丙酰基))双(氮杂二基))双(4，1-亚苯基))双(亚甲基)双((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃基[3'，4'：6，7]吲哚并[[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸酯)(418)的合成
Figure GDA0003907478750002171
将化合物417(171mg，0.115mmol)溶解于三氟乙酸/二氯甲烷(1mL/3mL)中，并在室温搅拌30分钟，将反应混合物浓缩至干，得到化合物418(172mg，>100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C70H68F2N11O18：计算值1388.46；实测值1388.46。
实施例243.(((((2S，2'S)-2，2'-(((S)-30-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-27，31，36-三氧代-37-(2-氧代乙基)-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂-26，32，37-三氮杂三十九烷-39-酰基)双(氮杂二基))双(丙酰基)双(氮杂二基))双(4，1-亚苯基))双(亚甲基)双(((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸酯)(2017)的合成
Figure GDA0003907478750002172
将化合物418(172mg，0.115mmol)和化合物6(87mg，0.115mmol)的DMF(3mL)溶液冷却至0℃，加入HATU(52mg，0.138mmol)和N，N-二异丙基乙胺(40μL，0.23mmol)。将反应搅拌4小时，然后通过制备型C-18HPLC(乙腈/水，含甲酸)纯化，得到化合物419(122mg，50％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C104H123F2N15O32：计算值2132.84；实测值2132.84。
实施例244.2-氨基-4-氟-5-羟基苯甲醛的合成(420)
Figure GDA0003907478750002181
在0℃下，向4-氟-3-甲氧基苯甲醛(770mg，5.0mmol)的浓硫酸(10mL)溶液中滴加发烟硝酸(95％，315mg，4.8mmol)。将混合物在室温搅拌1小时，然后倒入冰水中，并过滤。滤饼用水洗涤，然后晾干，将其溶于DMF(20mL)中，加入氯化锂(1.6g，25mmol)，将混合物回流4小时，然后倒入水中，逐滴加入浓盐酸以达到pH 4。溶液用乙酸乙酯萃取，有机层用盐水洗涤，干燥并真空浓缩。向所得残余物中加入乙醇/水(25mL，4：1)，铁粉(1.21g，22mmol)和氯化铵(433mg，8.1mmol)。将混合物在80℃下搅拌2小时，然后滤出固体。将水加入滤液中，并将所得混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，干燥，浓缩，通过柱色谱法纯化，得到标题化合物(125mg，16收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C7H6FNO2计算值156.04；实测值156.04。
实施例245.(S)-4-乙基-8-氟-4，9-二羟基-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-3，14(4H，12H)-二酮(421)的合成。
Figure GDA0003907478750002182
将化合物420(0.125g，0.805mmol)和化合物25(0.202g，0.76mmol)溶解在无水甲苯(40mL)中，并加入对甲苯磺酸(13mg，0.076mmol)。将悬浮液加热回流2天，然后冷却至室温。除去约三分之二的甲苯后，将残余物过滤并将滤饼用二氯甲烷洗涤，风干以得到化合物421(0.26g，90％收率)，为灰色粉末状固体。ESI-MS m/z：[M+H]+C20H16FN2O5：计算值383.10；实测值383.10。
实施例246.(S)-(2-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10，13-二氧代-9，10-二氢-[1，3]恶嗪[5，6-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-2(1H，3H，12H，13H，15H)-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(422)的合成
Figure GDA0003907478750002183
将N-Boc-乙二胺(50mg，0.31mmol)和多聚甲醛(70mg，0.78mmol)的1，4-二恶烷(5mL)溶液加热到约100℃，搅拌2小时，然后冷却至室温，加入化合物421(100mg，0.26mmol)。将反应再次加热至100℃并搅拌2天，冷却至室温并通过制备型C-18HPLC(乙腈/水，含甲酸)纯化，得到化合物422(117mg，80％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C29H31FN4O7：计算值567.22；实测值567.22。
实施例247.(S)-2-(2-氨基乙基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-2，3，12，15-四氢-[1，3]恶嗪并[5，6-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-10，13(1H，9H)-二酮(423)的合成。
Figure GDA0003907478750002191
将化合物422(117mg，0.208mmol)溶解于三氟乙酸/二氯甲烷(2mL/6mL)中，在室温下搅拌1小时，将反应混合物浓缩至干，得到黄色固体423(117g，>100收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C24H23FN4O5：计算值467.17；实测值467.17。
实施例248.(S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-N1-(4-((2-((S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-10，13-二氧代-9，10-二氢-[1，3]恶嗪基[5，6-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-2(1H，3H，12H，13H，15H)-基)乙基)氨基)-4-氧代丁基)-N5-(2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷-25-基)戊二酰胺(424)的合成。
Figure GDA0003907478750002192
将化合物423(120mg，0.208mmol)和化合物7(193mg，0.208mmol)的DMF(5mL)溶液冷却至0℃，加入N，N-二异丙基乙胺(72μL，0.416mmol)。反应升温至室温，搅拌2小时，浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/水，含甲酸)纯化，得到化合物424(100mg，40％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C58H79FN8O19：计算值1211.54；实测值1211.54。
实施例249.(S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-2-(2-羟乙基)-2，3，12，15-四氢-[1，3]噁嗪并[5，6-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-10，13(1H，9H)-二酮(425)的合成。
Figure GDA0003907478750002201
将乙醇胺(19mg，0.31mmol)和多聚甲醛(70mg，0.78mmol)的1，4-二恶烷(5mL)溶液加热至约100℃，搅拌2小时，然后冷却至室温，加入化合物421(100mg，0.26mmol)。将反应再次加热至100℃并搅拌2天，冷却至室温并通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物425(91mg，75％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C24H22FN3O6：计算值468.15；实测值468.15。
实施例250.(S)-N1-(4-((2-氨基乙基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-N5-(2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷-25-基)戊二酰胺的合成(426)
Figure GDA0003907478750002202
用0.1M H3PO4将1，2-二乙基二胺(300mg，4.99mmol)的THF(15mL)和1.0M NaH2PO4(15ml)混合溶液调节至pH 7.5。将混合物冷却至4～10℃，并在1小时内分四批加入化合物7(700mg，0.75mmol)。搅拌2小时后，将混合物浓缩并通过制备型HPLC(乙腈/含有1％甲酸的水)纯化，得到化合物426(528mg，82％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C36H65N6O14：计算值805.4560；实测值805.4595。
实施例251.2-((S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-10，13-二氧代-9，10-二氢-[1，3]恶嗪[5，6-f]吡喃[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-2(1H，3H，12H，13H，15H)-基)乙基((S)-30-(4-(2，5-二氧代)-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-27，31，36-三氧代-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂-26，32，37-三氮杂三十九烷-39-基)氨基甲酸酯(428)的合成。
Figure GDA0003907478750002203
在0℃下，向化合物425(30mg，0.0642mmol)的无水THF(5mL)和DIPEA(15μl，0.091mmol)溶液中加入4-硝基苯基草酰氯(13mg，0.0646mmol)。将混合物在0℃下搅拌4小时，得到(S)-2-(9-乙基-5-氟-9-羟基-10，13-二氧代-9，10-二氢-[1，3]恶嗪[5，5-f]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-2(1H，3H，12H，13H，15H)-基)碳酸(4-硝基苯基)碳酸酯(427)，无需分离即可直接用于下一步。然后向其中加入化合物426(55mg，0.0643mmol)和DIPEA(10μl，61.2mmol)。将混合物搅拌4小时，浓缩并通过制备型C-18HPLC(乙腈/水，含1％甲酸)纯化，得到化合物428(39mg，47％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C61H85FN9O21：计算值1298.5845；实测值1298.5935。
实施例252.双(2，5-二氧杂吡咯烷-1-基)4，4'-(((((叔丁氧基羰基)氮杂二基)双(乙烷-2，1-二基))双(氮杂二基))双(4-氧代丁酸酯)(431)的合成。
Figure GDA0003907478750002211
向化合物53(201mg，0.5mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入EDC·HCl(287mg，1.5mmol)和NHS(173mg，1.5mmol)。将反应物在室温搅拌反应1小时，然后用二氯甲烷(50mL)稀释，用水(2×10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物431(297mg，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C25H35N5O12：计算值598.22；实测值598.22。
实施例253.11-(叔丁氧羰基)-4，7，15，18-四氧代-3，8，11，14，19-五氮杂二十一烷-1，21-二酸(432)的合成。
Figure GDA0003907478750002212
将H-Gly-OH(94mg，1.25mmol)溶解于水(10mL)中，并加入NaHCO3(168mg，2.00mmol)，然后加入化合物431(297mg，0.5mmol)。然后将反应物在室温搅拌1小时并浓缩，通过制备型HPLC(乙腈/水，含甲酸)纯化，得到化合物432(155mg，60％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C21H35N5O10：计算值518.23；实测值518.23。
实施例254.双(五氟苯基)11-(叔丁氧羰基)-4，7，15，18-四氧代-3，8，11，14，19-五氮杂二十一烷-1，21-二酸酯的合成(433)
Figure GDA0003907478750002213
向化合物432(110mg，0.12mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入五氟苯酚(48mg，0.26mmol)和EDC·HCl(50mg，0.26mmol)。将反应物在室温搅拌反应2小时，然后用二氯甲烷(50mL)稀释，用水(2×10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物433(180mg，100％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C33H33F10N5O10：计算值850.20；实测值850.20。
实施例255.(2-(4-((2-((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧代戊酰胺基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(434)的合成。
Figure GDA0003907478750002221
在冰水浴上向化合物30(55mg，0.13mmol)的DMF(1mL)溶液中加入DIPEA(27mg，0.21mmol)和化合物433(50mg，0.06mmol)。将反应升温至室温，搅拌1小时，然后浓缩，通过制备型HPLC(乙腈/含有甲酸的水)纯化，得到化合物434(20mg，25％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C65H72F2N11O18：计算值1332.49；实测值1332.49。
实施例256.N1，N1'-(氮杂二基双(乙烷-2，1-二基))双(N4-(2-((((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃[3'，4'：6，7]吲哚并[[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基)-2-氧代乙基)琥珀酰胺)(435)
Figure GDA0003907478750002222
将化合物434(20mg，0.015mmol)溶解于三氟乙酸/二氯甲烷(0.5mL/1mL)中，并在室温搅拌2小时，将反应混合物浓缩至干，得到黄色固体(18.5mg，100收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C60H63F2N11O16：计算值1232.44；实测值1232.44。
实施例257.(S)-2-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-N1-(1-(((S)-4-乙基-8)-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧代-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[1，2-b]喹啉-11-基)-13-(2-(4-((2-(((((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3，14-二氧杂-3，4，12，14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚并[[1，2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-4-氧杂戊酰胺基)乙基)-3，6，9，14-四氧代-2，5，10，13-四氮杂十七烷-17-基)-N5-(2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷-25-基)戊二酰胺(436)
Figure GDA0003907478750002231
冰水冷却下，向化合物6(11mg，0.015mmol)的DMF(1mL)溶液中加入HATU(11.4mg，0.03mmol)和N，N-二异丙基乙胺(10μL，0.06mmol)，然后加入化合物435(18.5mg，0.015mmol)。将反应在0℃下搅拌1小时，然后通过制备型HPLC(乙腈/水，含甲酸)纯化，得到化合物436(10mg，34％收率)。ESI-MS m/z：[M+H]+C94H119F2N15O30：计算值1976.82；实测值1976.82。
实施例258.化合物C1-005、C1-008、C1-021、C1-022、C1-029、C1-031、C1-035、C1-041、C1-042、C1-043、C1-047、C1-050、C1-056、C1-061、C1-064、C1-110、C1-177、C1-188、C1-200、C1-208、C1-213、C1-226、C1-238、C1-243、C1-247、C1-305、C1-306、C1-311、C1-362、C1-397、C1-402、C1-407、C1-411、C1-414、C1-419、C1-424和C1-428的一般制备方法。
向振荡的含2.0mL的10mg/ml Her2抗体(Herceptin)或Trop-2抗体或EGFR抗体的pH 6.0～8.0PBS缓冲液中，加入0.70～2.0mL的100mM NaH2PO4,pH 6.5～8.5缓冲液和TCEP(35-70μL,20mM)溶液,各自独立地加入化合物5,8,21,22,29,31,35,41,42,43,47,50,56,61,64,110,177,188,200,213,226,238,243,247,305,306,311,362,397,402,407,411,414,419,424和428(35-90μL,20mM的DMA溶液),之后加入4-(叠氮甲基)苯甲酸(30-100μL,20mM的pH 7.5,PBS缓冲液)。将混合物在室温下孵育4～18小时,之后加入DHAA(100～150μL,50mM)。在室温下孵育过夜后，将混合物在G-25柱上纯化，用100mM NaH2PO4，50mM NaCl pH6.0～7.5缓冲液洗脱，制得11.2～18.5mg的偶联物C1-005,C1-008,C1-021,C1-022,C1-029,C1-031,C1-035,C1-041,C1-042,C1-043,C1-047,C1-050,C1-056,C1-061,C1-064,C1-110,C1-177,C1-188,C1-200,C1-208,C1-213,C1-226,C1-238,C1-243,C1-247,C1-305,C1-306,C1-311,C1-362,C1-397,C1-402,C1-407,C1-411,C1-414,C1-419,C1-424和C1-428(82％～95％产率)(在8.3～15.2ml的NaH2PO4缓冲液中)。偶联物的药物/抗体比(DAR)为4.1～8.0,DAR为通过UPLC-QTOF质谱和UV测定(CPT化合物的消光系数:E280nm＝4992M-1cm-1；E377nm＝16730M-1cm-1)。通过SEC HPLC(Tosoh Bioscience，Tskgel G3000SW，7.8mm ID×30cm，0.5ml/min，100min)测得单体含量为95～99％。这些偶联物的结构如图32所示。
实施例259.化合物C2-005,C3-005,C2-008,C3-008,C2-021,C3-021,C2-022,C3-022,C2-029,C3-029,C2-031,C3-031,C2-035,C3-035,C2-041,C3-041,C2-042,C3-042,C2-043,C3-043,C2-047,C3-047,C2-050,C3-050,C2-056,C3-056,C2-061,C3-061,C2-064,C3-064,C2-110,C3-110,C2-177,C3-177,C2-188,C3-188,C2-200,C3-200,C2-208,C3-208,C2-213,C3-213,C2-226,C3-226,C2-238,C3-238,C2-243,C3-243,C2-247,C3-247,C2-305,C3-305,C2-306,C3-306,C2-311,C3-311,C2-362,C3-362,C2-397,C3-397,C2-402,C3-402,C2-407,C3-407,C2-411,C3-411,C2-414,C3-414,C2-419,C3-419,C2-424,C3-424,C2-428和C3-428一般制备方法。
向含2.0mL的10mg/ml Her2抗体(Herceptin)或Trop-2抗体或EGFR抗体的pH 6.0～8.0PBS缓冲液中,加入0.70～2.0mL的100mM NaH2PO4,pH 6.5～8.5缓冲液和Traut’s试剂(2-亚氨基硫戊环盐酸盐)(35-70μL，20mM的水溶液)或γ-硫代丁内酯(35-70μL，20mM的DMA溶液)，各自独立地加入化合物5,8,21,22,29,31,35,41,42,43,47,50,56,61,64,110,177,188,200,213,226,238,243,247,305,306,311,362,397,402,407,411,414,419,424和428(14-60μL,20mM的DMA溶液),将混合物在室温下孵育4～18小时，然后在G-25柱上纯化，用100mM NaH2PO4，50mM NaCl pH 6.0～7.5缓冲液洗脱，得到11.2～18.5mg偶联物C2-005，C2-008,C2-021,C2-022,C2-029,C2-031,C2-035,C2-041,C2-042,C2-043,C2-047,C2-050,C2-056,C2-061,C2-064,C2-110,C2-177,C2-188,C2-200,C2-208,C2-213,C2-226,C2-238,C2-243,C2-247,C2-305,C2-306,C2-311,C2-362,C2-397,C2-402,C2-407,C2-411,C2-414,C2-419,C2-424,和C2-428(85％～98％产率，使用Traut’s)(在9.6～15.1ml的NaH2PO4,缓冲液中),或C3-005,C3-008,C3-021,C3-022,C3-029,C3-031,C3-035,C3-041,C3-042,C3-043,C3-047,C3-050,C3-056,C3-061,C3-064,C3-110,C3-177,C3-188,C3-200,C3-208,C3-213,C3-226,C3-238,C3-243,C3-247,C3-305,C3-306,C3-311,C3-362,C3-397,C3-402,C3-407,C3-411,C3-414,C3-419,C3-424和C3-428(77％～94％产率，使用γ-硫代丁内酯)(在9.8～14.2ml的NaH2PO4,缓冲液中)。偶联物的药物/抗体比(DAR)为4.5～8.9,DAR通过UPLC-QTOF质谱和UV测定(CPT化合物的消光系数:E280nm＝4992M-1cm-1；E377nm＝16730M-1cm-1)。通过SECHPLC(Tosoh Bioscience，Tskgel G3000SW，7.8mm ID×30cm，0.5ml/min，100min)检测单体含量为95～99％。这些偶联物的结构如图33所示。
实施例260.C1-005、C1-008、C1-021、C1-022、C1-029、C1-031、C1-035、C1-041、C1-042、C1-043、C1-047、C1-050、C1-056、C1-061、C1-064、C1-110、C1-177、C1-188、C1-200、C1-208、C1-213、C1-226、C1-238、C1-243、C1-247、C1-305、C1-306、C1-311、C1-362、C1-397、C1-402、C1-407、C1-411、C1-414、C1-419、C1-424、C1-428、C2-005、C2-008、C2-021、C2-022、C2-029、C2-031、C2-035、C2-041、C2-042、C2-043、C2-047、C2-050、C2-056、C2-061、C2-064、C2-110、C2-177、C2-188、C2-200、C2-208、C2-213、C2-226、C2-238、C2-243、C2-247、C2-305、C2-306、C2-311、C2-362、C2-397、C2-402、C2-407、C2-411、C2-414、C2-419、C2-424、C2-428、C3-005、C3-008、C3-021、C3-022、C3-029、C3-031、C3-035、C3-041、C3-042、C3-043、C3-047、C3-050、C3-056、C3-061、C3-064、C3-110、C3-177、C3-188、C3-200、C3-208、C3-213、C3-226、C3-238、C3-243、C3-247、C3-305、C3-306、C3-311、C3-362、C3-397、C3-402、C3-407、C3-411、C3-414、C3-419、C3-424和C3-428体外细胞毒性评估(与使用Her2抗体偶联的T-DM1相对比)：
细胞毒性试验中使用的细胞系是人胃癌细胞系NCI-N87和非小细胞肺癌细胞HCC827。细胞在含10％FBS的RPMI-1640中生长。测定时，将细胞(180μl，6000个细胞)加入96孔板的各孔中，并在37℃和5％CO2下孵育24小时。接着，在适当的细胞培养基(总体积0.2mL)中，以各种浓度的试验化合物(20μl)对细胞进行处理。对照孔含有细胞和培养基，但无测试化合物。将孔板在37℃和5％CO2下温育120小时。然后将MTT(5mg/ml，20μl)加入孔中，并将孔板在37℃下温育1.5小时。小心除去培养基，然后加入DMSO(180μl)。振摇15分钟后，用620nm的参考滤光片在490nm和570nm处测量吸光度。根据以下等式计算抑制率：抑制％＝[1-(测定空白)/(对照空白)]×100。结果如表1所示。
表1.专利申请中的Her2抗体-CPT衍生物偶联物及其对NCI-N87细胞的细胞毒性结果IC50：
Figure GDA0003907478750002251
Figure GDA0003907478750002261
Figure GDA0003907478750002271
Figure GDA0003907478750002281
Figure GDA0003907478750002291
表2.专利申请中的EGFR抗体-CPT类似偶联物及其对HCC827细胞的细胞毒性结果IC50：
Figure GDA0003907478750002292
Figure GDA0003907478750002301
实施例261.Her2抗体-CPT衍生物偶联物的体内抗肿瘤活性(带有NCI-N87异种移植肿瘤的BALB/c裸鼠)。
在胃癌N-87细胞系肿瘤异种移植模型上评估了Her2抗体偶联物C1-031，C1-238，C1-397，C1-407，C1-411，C1-414，C1-424，C1-428和T-DM1的体内功效。在五周大的雌性BALB/c裸鼠(60只动物)的右肩下方区域皮下接种了在0.1mL无血清培养基中的N-87癌细胞(5×106细胞/小鼠)。肿瘤生长8天，平均大小为130mm3。然后将动物随机分为11组(每组6只动物)。第一组小鼠作为对照组，注射磷酸盐缓冲盐水(PBS)。9组分别以6mg/mg的剂量分别用偶联物C1-031，C1-238，C1-397，C1-407，C1-411，C1-414，C1-424，C1-428和T-DM1，静脉注射。每3或4天(一周两次)测量肿瘤体积的三个维度，并使用公式：体积＝1/2(长×宽×高)来计算肿瘤体积。还同时测量了动物的体重。满足以下任一条件时杀死小鼠：(1)体重比治疗前减轻了20％以上；(2)肿瘤体积大于1500mm3；(3)因病重至无法进食和饮水；(4)皮肤坏死。如果没有可触知的肿瘤，则认为小鼠无肿瘤。
抗肿瘤活性结果显示如图34中。在剂量为6.0mg/Kg时，所有9种偶联物均未引起动物体重减轻。与PBS缓冲液相比，所有偶联物均显示出抗肿瘤活性。
表3. 6mg/Kg剂量对肿瘤生长的抑制作用：
Figure GDA0003907478750002302
Figure GDA0003907478750002311
体内抗肿瘤能力的顺序为C1-424＜C1-428＜C1-397＜T-DM1＜C1-411＜C1-407＜C1-031＜C1-238＜C1-414。
实施例262.与T-DM1相比，Her2抗体-CPT衍生物偶联物的毒性研究。
体重(BW)的变化(通常是体重减轻)是动物对药物毒性的一般反应。将6-7周大的66只ICR雌性小鼠分为11组。每组包括6只小鼠，每只小鼠给予偶联物C1-031，C1-226，C1-238，C1-397，C1-407，C1-411，C1-414，C1-424，C1-428和T-DM1，剂量分别为每只小鼠150mg/Kg，静脉推注。设对照组(n＝8)，注射磷酸盐缓冲液(PBS)。毒性结果绘制在图35中。在12天的实验中，剂量为150mg/Kg时，对照组和偶联物C1-031，C1-397，C1-407，C1-411，C1-424和C1-428组的体重均未降低。其余偶联物C1-226，C1-238，C1-414和T-DM1组的体重降低，第5天时，C1-226，C1-238和C1-414组的体重降低，最高达2％。在所有测试的CPT偶联物组中，体重的降低远小于T-DM1组。相反，T-DM1组的体重持续降低，与给药前相比最大降低了25％，并且在研究结束时未见恢复趋势。体重变化实验证明了小鼠对CPT偶联物比T-DM1具有更高的耐受性。
实施例263.EGFR抗体-CPT衍生物偶联物的体内抗肿瘤活性(BALB/c裸鼠，带有HCC827细胞异种移植肿瘤)。
在非小细胞肺癌HCC827细胞系肿瘤异种移植模型中评估了EGFR抗体偶联物C1-031，C1-200，C1-214，C1-226，C1-305，C1-306，C1-311，C1-362，C1-402，C-407和C1-419的体内效果。在五周大的雌性BALB/c裸鼠(72只动物)的右肩下方区域皮下接种在0.1mL无血清培养基中的N-87癌细胞(5×106细胞/小鼠)。肿瘤生长8天，至平均大小为130mm3。然后将动物随机分为12组(每组6只动物)。第一组小鼠作为对照组，并注射磷酸盐缓冲盐水(PBS)。11组分别用偶联物C1-031、C1-200、C1-226、C1-214、C1-305、C1-311、C1-362、C1-397、C1-402、C1-407和C1-419(浓度为3.2～8.0mg/ml)，剂量为6mg/Kg，静脉注射。每3或4天(一周两次)测量肿瘤体积的三个维度，并使用公式：体积＝1/2(长×宽×高)来计算肿瘤体积。还同时测量了动物的体重。满足以下任一条件时杀死小鼠：(1)体重比治疗前减轻了20％以上；(2)肿瘤体积大于1500mm3；(3)病重得无法进食和饮水，或(4)皮肤坏死。如果没有可触知的肿瘤，则认为小鼠无肿瘤。
抗肿瘤活性结果显示如图36。在6.0mg/Kg的剂量下，所有11种偶联物均未引起动物体重减轻。与PBS缓冲液相比，所有偶联物均显示出抗肿瘤活性。
表4. 6mg/Kg剂量对肿瘤生长的抑制作用为：
Figure GDA0003907478750002321
体内抗肿瘤能力的顺序为C1-200<C1-226<C1-362<C1-305<C1-419<C1-407<C1-214<C1-311<C1-031<C1-402<C1-397。

Claims (20)

1.一种细胞表面结合分子-喜树碱类似物偶联物，具有如下式(I)所示的结构：
Figure FDA0003850648520000011
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶型晶体结构；或其同位素，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中T是靶向或结合配体；L是可释放连接子；-----是独立地连接L到括号内的R1，R2，R3或R5的原子的连接键；n为1-30，m为1-10；
括号内是一种具有活性的喜树碱类似物，其中：
R1和R2独立地是H；直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)，氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基、烷基羧酸；C2-C6杂烷基，烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟；NH2或OH；
R3独立地是H、C(O)NH、C(O)O、SO2R6、SO3R6、PR6R6’、POR6R6’、CH2OP(O)(OR6)2、C(O)OP(O)(OR6)2、PO(OR6)(OR6’)、P(O)(OR6)OP(O)(OR6’)2、C(O)R6、C(O)NHR6；C1-C6直链或支链烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；C5～C12糖苷、NH2或OH；
R4是卤素(F、Cl、Br、或I)、CN、NO2、SO3H、OR6、SR6、S(O2)R6、NHR6、N(R6)(R6’)、C(O)XR6、N+(R6)(R6’)(R6”)；
X是NH或O；
R5是H、C(O)O、C(O)NH、R6C(O)、直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、烷基羧酸；C2-C6碳酸酯、脲、杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；R6、R6’、和R6”独立地是C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐；
此外，R1、R2、R3和R6独立地可缺省，和R2、R3、X、C-10和C-9可以共同形成5-、6-或7-元杂环。
细胞表面结合剂/分子T选自抗体；单链抗体；与靶细胞结合的抗体片段；单克隆抗体；单链单克隆抗体；结合靶细胞的单克隆抗体片段；嵌合抗体；结合靶细胞的嵌合抗体片段；结构域抗体；结合靶细胞的结构域抗体片段；adnectin类抗体；DARPins；淋巴因子；激素；维生素；生长因子；集落刺激因子；营养转运分子(转铁蛋白)，和/或结合在白蛋白、聚合物、树状大分子、脂质体、纳米颗粒、囊泡或(病毒)衣壳上的肽、蛋白质、抗体或小分子。
L具有下式结构：-Ww-(Aa)r-Vv-，其中：-W-是延展体单元；w是0或1；each-Aa-独立地是一个氨基酸单元；r独立地是0至12的整数；--V--是一个间隔体单元；v为0、1或2。
当延展体(-W-)存在时，它起着连接着细胞结合分子(T)和氨基酸单元(-Aa-)或者间隔体V当Aa不存在时。连接在T上的W的例子如下所示：
Figure FDA0003850648520000021
Figure FDA0003850648520000031
Figure FDA0003850648520000041
Figure FDA0003850648520000042
其中R20和R21选自–C1-C9烷基-、-C1-C7碳环-、-O-(C1-C8烷基)-、-亚芳基-、-C1-C8亚烷基-亚芳基-、-亚芳基、-C1-C8亚烷基-、-C1-C9亚烷基-(C1-C8碳环)-、-(C3-C7碳环)-C1-C9亚烷基-、-C3-C8杂环基、-C1-C8亚烷基-(C3-C8杂环)-、-(C3-C8杂环)-C1-C9亚烷基-、-(CH2CH2O)k-、-(CH(CH3)CH2O)k-和-(CH2CH2O)k-CH2-；k是1-20的整数；R’和R’'独立地为H或CH3。
-(Aa)r可以是天然或非天然氨基酸，可以是具有相同或不同的氨基酸序列的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或者十二肽单元，r为0-12之间的整数。
隔离体(-V-)是自毁灭型或非自毁灭型。自毁灭型包括对氨基苄基氨基甲酰基(PAB)的芳香族化合物，2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物，杂环PAB衍生物，β-葡糖醛酸，邻或对氨基苄基缩醛，或以下结构之一：
Figure FDA0003850648520000043
Figure FDA0003850648520000044
(*)标记的原子是隔离体或可释放的连接子单元，氨基酸(Aa)r，喜树碱类似物，和/或细胞结合分子T的连接点；X、Y和Z3独立地为NH，O或S；Z2独立地为H、NH、O或S；v为0或1；Q独立地为H，OH，C1～C6烷基、(OCH2CH2)n、F、Cl、Br、I、OR17、或SR17、NR17R18、N＝NR17、N＝R17、NR17R18、NO2、SOR17R18、SO2R17、SO3R17、OSO3R17、PR17R18、POR17R18、PO2R17R18、OPO(OR17)(OR18)或OCH2PO(OR17)(OR18)、其中R17和R18独立地为H、C1-C8烷基、C2-C8烯烃基、炔烃基、杂烷基、C3-C8芳基、杂环基、碳环基、环烷基、杂环烷基、杂芳烷基、烷羰基或药用的正离子盐；v是1-20的整数。
非自我毁灭间隔体(-V-)的例子：
*(CH2CH2O)n*；
Figure FDA0003850648520000051
Figure FDA0003850648520000052
Figure FDA0003850648520000061
Figure FDA0003850648520000062
6-马来酰亚胺己酰基(MC)，
Figure FDA0003850648520000063
马来酰亚胺丙酰基(MP)，
Figure FDA0003850648520000064
缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)，
Figure FDA0003850648520000065
丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)，
Figure FDA0003850648520000066
赖氨酸-苯丙氨酸(lys-phe)，
Figure FDA0003850648520000067
对氨基芐氧基-羰基(PAB)，
Figure FDA0003850648520000068
4-硫代戊酸基(SPP)，
Figure FDA0003850648520000069
4-硫丁酰基(SPDB)，
Figure FDA0003850648520000071
4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1酰基(MCC)，
Figure FDA0003850648520000072
马来酰亚胺乙基(ME)，
Figure FDA0003850648520000073
4-硫-2-羟基磺酰基-丁酰基(2-Sulfo-SPDB)，
Figure FDA0003850648520000074
芳基硫醇(PySS)，(4-乙酰基)氨基苯酰基(SIAB)，
Figure FDA0003850648520000075
氧基苄硫基，
Figure FDA0003850648520000076
氨基苄硫基，
Figure FDA0003850648520000077
二氧基苄硫基，
Figure FDA0003850648520000078
二氨基苄硫基，
Figure FDA0003850648520000079
氨基氧基苄基硫醚基，
Figure FDA00038506485200000710
烷氧基氨基(AOA)，
Figure FDA00038506485200000711
亚乙基氧基(EO)，
Figure FDA00038506485200000712
4-甲基-4-二硫代戊酸(MPDP)，
Figure FDA00038506485200000713
三唑，
Figure FDA00038506485200000714
二硫基，
Figure FDA00038506485200000715
烷基磺酰基
Figure FDA00038506485200000716
烷基磺酰胺，
Figure FDA00038506485200000717
磺基双酰胺，
Figure FDA00038506485200000718
膦二酰胺，
Figure FDA00038506485200000719
烷基膦酰胺，
Figure FDA00038506485200000720
次膦酸，
Figure FDA00038506485200000721
N-甲基膦酰胺酸，
Figure FDA00038506485200000722
N，N'-二甲基膦酰胺酸，
Figure FDA00038506485200000723
N，N'-二甲基膦二酰胺，
Figure FDA00038506485200000724
肼，
Figure FDA00038506485200000725
乙脒；
Figure FDA00038506485200000726
肟，
Figure FDA00038506485200000727
二乙酰肼，
Figure FDA00038506485200000728
氨基乙基胺，
Figure FDA00038506485200000729
氨基乙基-氨基乙基胺，
Figure FDA00038506485200000730
Figure FDA00038506485200000731
Figure FDA0003850648520000081
Figure FDA0003850648520000082
或L-或D-，或含有1-20个氨基酸的天然或非天然肽；其中“*”和
Figure FDA0003850648520000083
是间隔体或可释放的连接子，喜树碱类似物，和/或结合分子的连接点；m为1～10；n为1～20；X2、X3、X4、X5或X6独立地选自NH、NHNH、N(R12)、N(R12)N(R12’)、O、S、C1-C6烷基，C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8芳基、Ar-烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基；CH2OR12、CH2SR12、CH2NHR12或1～8个氨基酸；其中R12和R12’独立地为H、C1-C8烷基；C2-C8杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8芳基、Ar-烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基、1-8个碳原子的酯、醚或酰胺；或如式(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p的聚环氧乙烷单元，其中p为0至约1000的整数；
L具有以下结构之一：：
-(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n(OCH2CH2)t-、-(CR15R16)m(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-、-(Aa)r-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)t-、-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-、-(CR15R16)m-(CR17＝CR18)(CR19R20)n(Aa)t(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(Aa)t(NR21CO)(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(OCO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2-CH2)r-、-(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m-(CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(NR21CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(OCO)(Aa)t-(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m-(CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m-苯基-CO(Aa)t-(CR17R18)n-、-(CR15R16)m-呋喃-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-(CR15R6)m-恶唑-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-(CR15R16)m噻唑-CO-(Aa)t(CCR17R18)n-、-(CR15R16)t-噻吩-CO(CR17R18)n-、-(CR15R16)t-咪唑-CO-(CR17R18)n-、-(CR15R16)t-吗啉-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-(CR15R16)t-哌嗪-CO(Aa)t-(CR17R18)n-、-(CR15R16)tN-甲基哌嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-(CR15R16)m-(Aa)t苯基-、-(CR15R16)m-(Aa)t呋喃-、-(CR15R16)m-恶唑(Aa)t-、-(CR15R16)m-噻唑(Aa)t-、-(CR15R16)m-噻吩-(Aa)t-、-(CR15R16)m-咪唑(Aa)t-、-(CR15R16)m-吗啉-(Aa)t-、-(CR15R16)m-哌嗪-(Aa)t-、-(CR15R16)m-N-甲基哌嗪-(Aa)t-、-K(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n-(OCH2CH2)t-、-K(CR15R16)m-(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-、-K(Aa)r(CR15R16)m(CR17R18)n-(OCH2CH2)t-、-K(CR15R16)m-(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-、-K(CR15R16)m(CR17＝CR18)(CR19R20)n(Aa)t(OCH2CH2)r、
-K(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-K(CR5R6)m(Aa)t-(NR21CO)(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m(OCO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t-(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m(CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2-CH2)r-、-K(CR15R16)m(NR21-CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m(OCO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-K-
(CR15R16)m-(OCNR17)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m-(CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m-苯基-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-K-(CR15R16)m-呋喃-CO(Aa)t(CR17R18)n、
-K(CR15R16)m-恶唑-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-K(CR15R16)m-噻唑-CO(Aa)t(CR17R18)n、
-K(CR15R16)t-噻吩-CO(CR17R18)n-、-K(CR15R16)t咪唑-CO-(CR17R18)n、-K(CR5R6)t吗啉-CO(Aa)t-(CR17R18)n-、-K(CR15R16)t-哌嗪-CO(Aa)t-(CR17R18)n-、-K(CR15R16)tN-甲基-哌嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-K(CR15R16)m(Aa)t-苯基、-K-(CR15R16)m(Aa)t呋喃-、-K(CR15R16)m-恶唑-(Aa)t-、-K(CR15R16)m噻唑(Aa)t、-K(CR15R16)m-噻吩-(Aa)t-、-K(CR15R16)m-咪唑(Aa)t-、-K(CR15R16)m-吗啉(Aa)t、-K(CR15R16)m哌嗪(Aa)tG、-K(CR5R6)m-N-甲基-哌嗪(Aa)t-；其中Aa、m、n、在前文已有定义；t和r独立地为0–100；R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、和R21独立地选自H；卤素；C1～C8烷基或杂烷基、C2～C8芳基、烯基、炔基、醚、酯、胺或酰胺、C3～C8芳基、这些基团均可以被以下成分所取代：一个或多个卤素、CN、NR12R12’、CF3、OR12、Aryl、杂环、S(O)R12、SO2R12、-CO2H、-SO3H、-OR12、-CO2R12、-CONR12、-PO2R12R13、-PO3H或P(O)R12R12’R13；K是NH、NR12、-SS-、-C(＝O)-、-C(＝O)NH-、-C(＝O)O-、-C＝NH-O-、-C＝N-NH-、-C(＝O)NH-NH-、O、S、Se、B、Het(具有C3-C12的杂环或杂芳环)；或含有相同或不同的1-20个氨基酸的肽。
2.根据权利要求1所述的喜树碱类似物偶联物，具有如式(II)所示的结构：
Figure FDA0003850648520000101
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中T是靶向或结合配体；L是可释放的连接子；n是1-30，m是1-10；
括号内是一种有效喜树碱类似物，其中：
R1是直链或支链C1-C6烷基、烷氧基、烷基氨基(包括伯、仲、叔氨基或季铵)、氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基或烷基羧酸的；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氧基环烷基、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、氨基烷基羰基、氧基烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟；NH，或O；
R2是H，直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、氨基烷基醇、氨基烷基胺、氧基烷基醇、氧基烷基胺、氨基烷基、氧基烷基或烷基羧酸的；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；NH2或OH；
R3独立地是H，R6NHC(O)，R6OC(O)、SO2R6、SO3R6、PR6R6’、POR6R6’、CH2OP(O)(OR6)2、C(O)OP(O)(OR6)2、PO(OR6)(OR6’)、P(O)(OR6)OP(O)(OR6’)2、R6C(O)、C(O)NR6R6’；直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸的；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基的、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；C5～C12糖苷；
R4是卤素(F、Cl、Br、or I)、CN、NO2、SO3H、OR6、SR6、S(O2)R6、NHR6、N(R6)(R6’)、C(O)XR6、N+(R6)(R6’)(R6”)；
X是NH或O；
R5是H、C(O)OR6、C(O)NHR6、R6C(O)、直连或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、烷基羧酸；C2-C6碳酸酯、脲、杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；
R6、R6’、和R6”独立地是H、C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐；
此外，R1可以缺省且C-7直接与L连接、且R2、R3、X、C-10和C-9可以共同形成5-、6-或7-元杂环。
3.根据权利要求1所述的喜树碱类似物偶联物，具有如式(III)所示的结构：
Figure FDA0003850648520000121
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中T是靶向或结合配体；L是可释放的连接子；n是1-30，m是1-10；
括号内是一种具有活性的喜树碱类似物，其中：
R1是直链或支链C1-C6烷基、烷氧基、烷基氨基(包括伯、仲、叔氨基或季铵)、氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氧基环烷基、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、氨基烷基羰基、氧基烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基醚、氨基烷基醚、氧基烷基酯、氨基烷基酯、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟；NH或O；
R2是NH、NR6、-N+R6R6’-、O、S、直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、氨基烷基醇、氨基烷基胺、氧基烷基醇、氧基烷基胺、氨基烷基、氧基烷基或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；氧基烷基醚、氨基烷基醚、氧基烷基酯、氨基烷基酯、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺；
R3是H、R6NHC(O)、R6OC(O)、SO2R6、SO3R6、PR6R6’、POR6R6’、CH2OP(O)(OR6)2、C(O)OP(O)(OR6)2、PO(OR6)(OR6’)、P(O)(OR6)OP(O)(OR6’)2、R6C(O)、C(O)NR6R6’；直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；C5～C12糖苷；
R4是卤素(F、Cl、Br、或I)、CN、NO2、SO3H、OR6、SR6、S(O2)R6、NHR6、N(R6)(R6’)、C(O)XR6、N+(R6)(R6’)(R6”)；
X是NH或O；
R5是H、C(O)OR6、C(O)NHR6、R6C(O)、直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、烷基羧酸；C2-C6碳酸酯、尿素、杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；
R6、R6’、和R6”独立地是H、C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐；
此外，R2独立地缺省且C-9直接与L连接，且R2、R3、X、C-10和C-9可以共同形成5-、6-或7-元杂环。
4.根据权利要求1所述的喜树碱类似物偶联物，具有如式(IV))所示的结构：
Figure FDA0003850648520000131
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中T是靶向或结合配体；L是可释放的连接子；n为1-30且m为1-10；
括号内是一种有效喜树碱类似物，其中：
R1和R2独立地是H、NR6R6’、-N+R6R6’R6”、OH、SH、C1-C6直链或支链烷基、烷氧基、烷基氨基(包括伯、仲、叔氨基或季铵)、氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氧基环烷基、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、氨基烷基羰基、氧基烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基醚、氨基烷基醚、氧基烷基酯、氨基烷基酯、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟；NH2或OH；
R3独立地是-NHC(O)-、-C(O)-、SO2-、-SO2NH-、-NR6SO2-、R6NHC(O)、R6OC(O)、SO2R6、SO3R6、PR6R6’、POR6R6’、CH2OP(O)(OR6)2、C(O)OP(O)(OR6)2、PO(OR6)(OR6’)、P(O)(OR6)OP(O)(OR6’)2、R6C(O)、C(O)NR6R6’；直连或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯胺、仲胺、叔胺)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；
R4是卤素(F、Cl、Br、或I)、CN、NO2、SO3H、OR6、SR6、S(O2)R6、NH(R6)S(O2)R6’、N(R6)(R6’)、C(O)XR6、N+(R6)(R6’)(R6”)；
X是NH或O；
R5是H、C(O)OR6、C(O)NHR6、R6C(O)、直连或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、烷基羧酸；C2-C6碳酸酯、尿素、杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；
R6、R6’、和R6”独立地是H、C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐；
另外，R3独立地缺省且C-10的X直接与L连接，且R2、R3、X、C-10和C-9可以共同形成5-、6-或7-元杂环。
5.根据权利要求1所述的喜树碱类似物偶联物，具有如式(V)所示的结构：
Figure FDA0003850648520000141
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中T是靶向或结合配体；L是可释放的连接子；n为1-30，m为1-10；
括号内是一种具有活性的喜树碱类似物，其中：
R1和R2独立地是H、NR6R6’、-N+R6R6’R6”、OH、SH、直链或支链C1-C6烷基、烷氧基、烷基氨基(包括伯、仲、叔氨基或季铵)、氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基、氧基烷基、氨基烷基氨基、氧基烷基氨基、氨基烷氧基、氧基烷氧基或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、氧基环烷基、氨基环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、氨基烷基羰基、氧基烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、氧基烷基醚、氨基烷基醚、氧基烷基酯、氨基烷基酯、氧基烷基酰胺、氨基烷基酰胺、肟；NH2或OH；
R3独立地是R6NHC(O)-、R6C(O)-、R6SO2、-SO2NHR6、R6OC(O)、R6’SO2R6-、SO3R6、PR6R6’、POR6R6’、CH2OP(O)(OR6)2、C(O)OP(O)(OR6)2、PO(OR6)(OR6’)、P(O)(OR6)OP(O)(OR6’)2、R6C(O)、C(O)NR6R6’；直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯胺、仲胺、叔胺)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺、肟；
R4是卤素(F、Cl、Br、or I)、CN、NO2、SO3H、OR6、SR6、S(O2)R6、NH(R6)S(O2)R6’、N(R6)(R6’)、C(O)XR6、N+(R6)(R6’)(R6”)；
X是NH或O；
R5是C(O)O、C(O)NH、R6C(O)、直链或支链C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)、烷基羧酸；C2-C6碳酸酯、尿素、杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；
R6、R6’、和R6”独立地是H、C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐；
此外、R5独立地缺省且C-20的O直接与L连接，且R2、R3、X、C-10和C-9可以共同形成5-、6-或7-元杂环。
6.根据权利要求2，3，4和5所述的喜树碱类似物偶联物，其中喜树碱类似物与连接子L连接，具有如II-1～II-61、III-1～III-52、IV-1～IV-47和V-1～V-61所示的结构：
Figure FDA0003850648520000151
Figure FDA0003850648520000161
Figure FDA0003850648520000171
Figure FDA0003850648520000181
Figure FDA0003850648520000191
Figure FDA0003850648520000201
Figure FDA0003850648520000211
Figure FDA0003850648520000221
Figure FDA0003850648520000231
Figure FDA0003850648520000241
Figure FDA0003850648520000251
Figure FDA0003850648520000261
Figure FDA0003850648520000271
Figure FDA0003850648520000281
Figure FDA0003850648520000291
Figure FDA0003850648520000301
Figure FDA0003850648520000311
Figure FDA0003850648520000321
Figure FDA0003850648520000331
Figure FDA0003850648520000341
Figure FDA0003850648520000351
Figure FDA0003850648520000361
Figure FDA0003850648520000371
Figure FDA0003850648520000381
Figure FDA0003850648520000391
Figure FDA0003850648520000401
Figure FDA0003850648520000411
Figure FDA0003850648520000421
Figure FDA0003850648520000431
或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中
Figure FDA0003850648520000441
是与连接子L连接的位点；
其中R6、R6’、和R6”独立地是H、C1-C6烷基、烷基醇、烷基胺(包括伯、仲、叔胺或季铵)或烷基羧酸；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、烷基醚、烷基酯、烷基酰胺或氨基酸；或药用盐。
7.根据权利要求1、2、3、4或5所述的喜树碱类似物的偶联物，其中连接子L优选含有氨基、磺酰胺、磷酰胺或氨基酸基团，其中式(I-q)可以作为支链连接至连接子L。连接子L中的氨基酸优选自天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、鸟氨酸或酪氨酸，其中的官能团如氨基、羧基或苯氧基中的一个或两个可以连接如式(I-q)的长支链：
Figure FDA0003850648520000442
其中
Figure FDA0003850648520000443
是与连接子中的磺酰基、磷酸酯、氨基或羰基相连的位点；G1是NH、NHNH、C(＝O)、NHNHC(O)、C(＝O)NH、C(＝NH)NH、CH2、CH2C(O)、C(O)O、NHC(O)NH、或(Aa)r、(r＝1-12)；G2是NH、NHNH、C(＝O)、NHNHC(O)、C(＝O)NH、C(＝NH)NH、CH2、C(O)O、NHC(O)NH、O、S、B、P(O)(OH)、NHP(O)(OH)、NHP(O)(OH)NH、CH2P(O)(OH)NH、OP(O)(OH)O、CH2P(O)(OH)O、NHS(O)2、NHS(O)2NH、CH2S(O)2NH、OS(O)2O、CH2S(O)2O、Ar、ArCH2、ArO、ArNH、ArS、ArNR1、(Aa)r、(r＝1-12)；X1和X2独立地为O、CH2、S、NH、N(R12)、+NH(R12)、+N(R12)(R13)、C(O)、OC(O)、OC(O)O、NHSO2NH、NHP(O)(NH)2、SO2NH、P(O)(NH)2、NHS(O)NH、NHP(O)(OH)(NH)、OC(O)NH、NHC(O)NH；Y2是O、NH、NR1、CH2、S、Ar；G3是OH、SH、OR1、SR1、OC(O)R1、NHC(O)R12、C(O)R12、CH3、NH2、NR12、+NH(R12)、+N(R12)(R13)、C(O)OH、C(O)NH2、NHC(O)NH2、BH2、BR12R13、P(O)(OH)2、NHP(O)(OH)2、NHP(O)(NH2)2、S(O)2(OH)、(CH2)q1C(O)OH、(CH2)q1P(O)(OH)2、C(O)(CH2)q1C(O)OH、OC(O)(CH2)q1C(O)OH、NHC(O)(CH2)q1C(O)OH、CO(CH2)q1P(O)(OH)2、NHC(O)O(CH2)q1-C(O)OH、OC(O)NH-(CH2)q1C(O)OH、NHCO(CH2)q1P(O)(OH)2、NHC(O)(NH)(CH2)q1C(O)OH、CONH(CH2)q1-P(O)(OH)2、NHS(O)2(CH2)q1C(O)OH、CO(CH2)q1S(O)2(OH)、NHS(O)2NH-(CH2)q1C(O)OH、OS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH、NHCO(CH2)q1S(O)2(OH)、NHP(O)(OH)(NH)-(CH2)q1C(O)OH、CONH(CH2)q1S(O)(OH)、OP(O)(OH)2、(CH2)q1P(O)(NH)2、NHS(O)2(OH)、NHS(O)2NH2、CH2S(O)2NH2、OS(O)2OH、OS(O)2OR1、CH2S(O)2OR1、Ar、ArR12、ArOH、ArNH2、ArSH、ArNHR12、或(Aa)q1；p1、p2和p3独立地为0-30但不同时为0；q1和q2独立地为0-24；优选地G3是直链或支链的C2-C50聚羧酸或C-2-C50聚烷基胺、C6-C50寡糖或多糖、C6-C50含季铵阳离子和磺酸根阴离子的甜菜碱两性离子或聚(磺基甜菜碱)两性离子(PSB)s、可生物降解的聚合物(如聚乳酸/乙醇酸(PLGA)、聚(丙烯酸酯)、脱乙酰壳多糖、N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺的共聚物、聚[2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酸胆碱](PMPC)、聚-L-谷氨酸、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚(乙二醇)(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、聚(乙二醇)改性肽、聚(乙二醇)改性脂质体、聚(乙二醇)改性烷基羧酸、聚(乙二醇)改性烷基胺、透明质酸(HA)(糖胺聚糖)、肝素/硫酸乙酰肝素(HSGAG)、硫酸软骨素/硫酸皮素(CSGAG)、聚(乙二醇)改性的烷基硫酸盐、聚(乙二醇)改性的烷基磷酸盐或聚(乙二醇)改性的烷基季铵盐。根据权利要求7的式(I-q)的支链连接子，选自：
Figure FDA0003850648520000451
Figure FDA0003850648520000461
其中G1、p1、p2、p3、Aa、r、X2、q1、m1与权利要求7中的定义相同。
8.根据权利要求1、2、3、4或5所述的式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的喜树碱类似物偶联物，可以容易地由细胞结合分子T与如式(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)和(X)所示的化合物偶联：
Figure FDA0003850648520000462
Figure FDA0003850648520000471
其中R1，R2，R3，R4，R5，L，X和m与式(I)中的定义相同；
Lv为一反应官能团，可以与细胞结合分子上的硫醇、胺、羧酸、硒醇、苯酚或羟基发生反应。它选自卤素(氟、氯、溴、碘)；马来酰亚胺基；甲磺酰基；甲苯磺酰基；三氟甲磺酰基；硝基苯氧基；N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)；苯氧基；二硝基苯氧基；五氟苯氧基；四氟苯氧基；三氟苯氧基；二氟苯氧基；一氟苯氧基；五氯苯氧基；咪唑基；一氯苯氧基；二氯苯氧基；三氯苯氧基；四氯苯氧基；N-(苯并三唑基)氧基；2-乙基-5-苯基异恶唑基-3′-磺酰基；苯氧二唑基磺酰基；2-乙基-5-苯基异恶唑基；苯氧二唑基；恶二唑基；不饱和碳(碳-碳、碳-氮、碳-硫、碳-磷、硫-氮、磷-氮、氧-氮或碳-氧之间的双键或三键)；或与Mitsunobu反应试剂作用生成的中间体。缩合剂的例子如下：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-环己基-N'-(2-吗啉代-乙基)碳二亚胺甲基对甲苯磺酸盐(CMC或CME-CDI)、1，1'-羰基二咪唑(CDI)、(O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(1H-苯并三唑-1-基)-六氟磷酸铵(HBTU)、(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)-六氟磷酸盐(BOP)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基六氟磷酸盐(PyBOP)、氰基膦酸二乙酯(DEPC)、氯-N，N，N'，N'-四甲基甲脒六氟磷酸盐、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶3-氧六氟磷酸盐(HATU)、1-[(二甲氨基)(吗啉代)亚甲基]-1H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-1-鎓3-氧六氟磷酸盐(HDMA)、2-氯-1，3-二甲基-咪唑六氟磷酸盐(CIP)、六氟磷酸氯代吡咯烷酮鎓(PyCloP)、氟-N，N，N'，N'-双(四亚甲基)甲脒六氟磷酸盐(BTFFH)、N，N，N'，N'-四甲基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲六氟磷酸盐、O-(2-氧代-1(2H)吡啶基)-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TPTU)、S-(1-氧代-2-吡啶基)N，N，N'，N'-四甲基硫脲四氟硼酸盐、O-[(乙氧基羰基)-氰基甲基氨基]-N，N，N'，N'-六氟磷酸四甲基脲(HOTU)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基氨基氧基)二甲氨基-吗啉代-六氟磷酸盐(COMU)、O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-双(四亚甲基)六氟磷酸盐(HBPyU)、N-芐基-N'-环己基-碳二亚胺(有或没有聚合物结合)、二吡咯烷基(N-琥珀酰亚胺基氧基)碳鎓六氟磷酸盐(HSPyU)、氯二吡咯烷基六氟磷酸盐(PyClU)、2-氯-1，3-二甲基咪唑四氟硼酸盐(CIB)、(苯并三唑-1-基氧基)二呱啶碳六氟磷酸盐(HBPipU)、O-(6-氯苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TCTU)、溴代(二甲基氨基)-六氟磷酸盐(BroP)、丙基膦酸酐(PPACA、
Figure FDA0003850648520000481
)、2-吗啉代乙基异氰化物(MEI)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(N-琥珀酰亚胺基)六氟磷酸盐(HSTU)、2-溴-1-乙基-吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP)、O-[(乙氧基羰基)氰基-亚甲基氨基]-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TOTU)、4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉氯化物(MMTM、DMTMM)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(N-琥珀酰亚胺基)脲四氟硼酸(TSTU)、O-(3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TDBTU)、1，1'-(偶氮二羰基)-二呱啶(ADD)、二-(4-氯芐基)偶氮二羧酸酯(DCAD)、偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD)、偶氮二羧酸二异丙酯(DIAD)、偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)。另外，Lv1和Lv2可以是酸酐，酸自身缩合或与其它C1-C8酸酐作用形成的酸酐；
优选的Lv包含以下物质：卤化物(如氟化物、氯化物、溴化物和碘化物)、甲磺酰基(mesyl)、甲苯磺酰基(tosyl)、三氟甲基磺酰基(triflate)、三氟甲基磺酸酯、硝基苯氧基、N-琥珀酰亚胺基(NHS)、苯氧基；二硝基苯氧基；五氟苯氧基、四氟苯氧基、三氟苯氧基、二氟苯氧基、一氟苯氧基、五氯苯氧基、1H-咪唑-1-基、一氯苯氧基、二氯苯氧基、三氯苯氧基、四氯苯氧基、N-(苯并三唑基)氧基、2-乙基-5-苯基异恶唑-3′-磺酰基、苯基恶二唑-磺酰基、2-乙基-5-苯基异恶唑基、苯基恶二唑基、恶二唑基、不饱和碳(碳-碳、碳-氮、碳-硫、碳-磷、硫-氮、磷-氮、氧-氮或碳-氧之间的双键或三键)，或以下结构之一：
Figure FDA0003850648520000491
二硫化物；
Figure FDA0003850648520000492
卤代乙酰基；
Figure FDA0003850648520000493
酰卤；
Figure FDA0003850648520000494
N-羟基琥珀酰亚胺酯；
Figure FDA0003850648520000495
马来酰亚胺；
Figure FDA0003850648520000496
单取代马来酰亚胺；
Figure FDA0003850648520000497
二取代马来酰亚胺；
Figure FDA0003850648520000498
单取代的琥珀酰亚胺；
Figure FDA0003850648520000499
二取代马来酰亚胺；
Figure FDA00038506485200004910
取代马来酸；-CHO醛；
Figure FDA00038506485200004911
乙烯磺酰基；
Figure FDA00038506485200004912
丙烯酰基；
Figure FDA00038506485200004913
2-(甲苯磺酰氧基)乙酰基；
Figure FDA00038506485200004914
2-(甲磺酰氧基)乙酰基；
Figure FDA00038506485200004915
2-(硝基苯氧基)乙酰基；
Figure FDA00038506485200004916
2-(二硝基苯基)乙酰基；
Figure FDA00038506485200004917
2-(氟代苯氧基)-乙酰基；
Figure FDA00038506485200004918
2-(二氟苯氧基)-乙酰基；
Figure FDA00038506485200004919
2-((三氟甲基磺酰基)氧基)乙酰基；
Figure FDA00038506485200004920
酮或醛，
Figure FDA00038506485200004921
2-(五氟苯氧基)乙酰基；
Figure FDA00038506485200004922
甲基砜苯基恶二唑(ODA)；
Figure FDA00038506485200004923
Figure FDA00038506485200004924
酸酐，
Figure FDA00038506485200004925
烷氧基氨；
Figure FDA00038506485200004926
叠氮基，
Figure FDA00038506485200004927
炔基，
Figure FDA00038506485200004928
酰肼；
其中，X1’是F、Cl、Br、I或Lv3；X2’是O、NH、N(R1)或CH2；R3是H、芳基或杂芳基，其中一个或多个H原子可独立地被-R1、-卤素、-OR1、-SR1、-NR1R2、-NO2、-S(O)R1、-S(O)2R1或-COOR1取代；Lv3是离去基团，选自F、Cl、Br、I；硝基苯氧基；N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)；苯氧基；二硝基苯氧基；五氟苯氧基；四氟苯氧基；二氟苯氧基；单氟苯氧基；五氯苯氧基；三氟甲磺酰基；咪唑基；二氯苯氧基；四氯苯氧基；1-羟基苯并三唑基；甲苯甲磺酰基；甲磺酰基；2-乙基-5-苯基异恶唑-3′-磺酰基，酸酐或与其它酸酐作用形成的酸酐。
9.根据权利要求1、2、3、4或5所述的喜树碱类似物偶联物，具有如式(IIq-1)、(IIq-2)、(IIq-3)、(IIq-4)、(IIq)-5)，(IIq-6)，(IIq-7)，(IIq-8)所示的结构：
Figure FDA0003850648520000501
Figure FDA0003850648520000511
其中R'和R”独立地为H、Me、Et、iPr、iBu、Bz(CH2C6H5)、CH2COOH、CH2CH2COOH、CH2CONH2、CH2CH2CONH2、CH2CH2CH2CH2NH2、CH2CH2SCH3、CH2OH、CH2CH2CH2NHC(＝NH)NH2、CH(OH)CH3、CH2C6H4OH、CH2C3N2H3；p1和p2独立地是0～24；q1是1～18；q3是0～6；q4是0～4；m’和m”独立地为0～6；m”’是0或1；mAb是细胞结合分子，优选为抗体；NH-Drug是上面列出的化合物II-1～II-61、III-1～III-52、IV-1～IV-47和V-1～V-61；
Figure FDA0003850648520000521
是与NH-Drug连接的位点。
10.根据权利要求9所述的可偶联的化合物物，具有如式((IIq-9)、(IIq-10)、(IIq-11)、(IIq-12)、(IIq-13)、(IIq-14)、(IIq-15)、(IIq-16)所示的结构：
Figure FDA0003850648520000522
Figure FDA0003850648520000531
其中R'和R”独立地为H、Me、Et、iPr、iBu、Bz(CH2C6H5)、CH2COOH、CH2CH2COOH、CH2CONH2、CH2CH2CONH2、CH2CH2CH2CH2NH2、CH2CH2SCH3、CH2OH、CH2CH2CH2NHC(＝NH)NH2、CH(OH)CH3、CH2C6H4OH、CH2C3N2H3；p1和p2独立地是0～24；q1是1～18；q3是0～6；q4是0～4；m’和m”独立地为0～6；m”’是0或1；NH-Drug是上面列出的化合物II-1～II-61、III-1～III-51、IV-1～IV-47和V-1～V-61；
Figure FDA0003850648520000541
是与NH-Drug连接的位点。
11.根据权利要求1、2、3、4或5所述的喜树碱类似物偶联物，具有如C1-005、C1-008、C1-021、C1-022、C1-029、C1-031、C1-035、C1-041、C1-042、C1-043、C1-047、C1-050、C1-056、C1-061、C1-064、C1-070、C1-075、C1-081、C1-086、C1-088、C1-090、C1-094、C1-099、C1-102、C1-110、C1-102、C1-110、C1-113、C1-114、C1-119a、C1-119b、C1-123、C1-127、C1-131、C1-137a、C1-137b、C1-140、C1-147a、C1-147b、C1-151、C1-152、C1-156、C1-157、C1-158、C1-159a、C1-159b、C1-165、C1-166、C1-168、C1-170a、C1-170b、C1-177、C1-188、C1-200、C1-208、C1-213、C1-226、C1-238、C1-243、C1-247、C1-262a、C1-262b、C1-262c、C1-262d、C1-266、C1-285a～C1-285z、C1-285a1～C1-285i1、C1-291a～C1-291z、C1-291a1～C1-291i1、C1-297a～C1-297z、C1-297a1～C1-297i1、C1-305、C1-306、C1-311、C1-362、C1-397、C1-402、C1-407、C1-411、C1-414、C1-419、C1-424、C1-428、C1-436、C2-005、C3-005、C2-008、C3-008、C2-021、C3-021、C2-022、C3-022、C2-029、C3-029、C2-031、C3-031、C2-035、C3-035、C2-041、C3-041、C2-042、C3-042、C2-043、C3-043、C2-047、C3-047、C2-050、C3-050、C2-056、C3-056、C2-061、C3-061、C2-064、C3-064、C2-070、C3-070、C2-075、C3-075、C2-081、C3-081、C2-086、C3-086、C2-088、C3-088、C2-090、C3-090、C2-094、C3-094、C2-099、C3-099、C2-102、C3-102、C2-110、C3-110、C2-113、C3-113、C2-114、C3-114、C2-119a、C3-119a、C2-119b、C3-119b、C2-123、C3-123、C2-127、C3-127、C2-131、C3-131、C2-137a、C3-137a、C2-137b、C3-137b、C2-140、C3-140、C2-147a、C3-147a、C2-147b、C3-147b、C2-151、C3-151、C2-152、C3-152、C2-156、C3-156、C2-157、C3-157、C2-158、C3-158、C2-159a、C3-159a、C2-159b、C3-159b、C2-165、C3-165、C2-166、C3-166、C2-168、C3-168、C2-170a、C3-170a、C2-170b、C3-170b、C2-177、C3-177、C2-188、C3-188、C2-200、C3-200、C2-208、C3-208、C2-213、C3-213、C2-226、C3-226、C2-238、C3-238、C2-243、C3-243、C2-247、C3-247、C2-262a、C3-262a、C2-262b、C3-262b、C2-262c、C3-262c、C2-262d、C3-262d、C2-266、C3-266、C2-285a～C2-285z、C3-285a～C3-285z、C2-285a1～C2-285i1、C3-285a1～C3-285i1、C2-291a～C2-291z、C2-291a1～C2-291i1、C3-291a～C3-291z、C3-291a1～C3-291i1、C2-297a～C2-297z、C2-297a1～C2-297i1、C3-297a～C3-297z、C3-297a1～C3-297i1、C2-305、C3-305、C2-306、C3-306、C2-311、C3-311、C2-362、C3-362、C2-397、C3-397、C2-402、C3-402、C2-407、C3-407、C2-411、C3-411、C2-414、C3-414、C2-419、C3-419、C2-424、C3-424、C2-428、C3-428所示的结构：
Figure FDA0003850648520000551
Figure FDA0003850648520000561
Figure FDA0003850648520000571
Figure FDA0003850648520000581
Figure FDA0003850648520000591
Figure FDA0003850648520000601
Figure FDA0003850648520000611
Figure FDA0003850648520000621
Figure FDA0003850648520000631
Figure FDA0003850648520000641
Figure FDA0003850648520000651
Figure FDA0003850648520000661
Figure FDA0003850648520000671
C1-262a(R1＝H)；C1-262b(R1＝OH)；C1-262c(R1＝OCH3)；C1-262d(R1＝CH3)；
Figure FDA0003850648520000672
C1-285a～C1285z，C1-285a1-C1285i1，其中
Figure FDA0003850648520000681
是285a～285z，285a1～285i1如下图所示：
Figure FDA0003850648520000682
Figure FDA0003850648520000691
Figure FDA0003850648520000701
C1-291a～C1-291z，C1-291a1～C1-291i1；
Figure FDA0003850648520000702
p1，p2＝0～24；q1＝1～18
C1-297a～C1-297z，C1-297a1～C1-297i1；
Figure FDA0003850648520000711
Figure FDA0003850648520000721
Figure FDA0003850648520000731
Figure FDA0003850648520000741
Figure FDA0003850648520000742
C2-005(X＝NH)，C3-005(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000743
C2-008(X＝NH)，C3-008(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000744
C2-021(X＝NH)，C3-021(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000751
C2-022(X＝NH)，C3-022(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000752
C2-029(X＝NH)，C3-029(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000753
C2-031(X＝NH)，C3-031(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000754
C2-035(X＝NH)，C3-035(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000755
C2-041(X＝NH)，C3-041(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000761
C2-042(X＝NH)，C3-042(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000762
C2-043(X＝NH)，C3-043(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000763
C2-047(X＝NH)，C3-047(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000764
C2-050(X＝NH)，C3-050(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000765
C2-056(X＝NH)，C3-056(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000771
C2-061(X＝NH)，C3-061(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000772
C2-064(X＝NH)，C3-064(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000773
C2-070(X＝NH)，C3-070(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000781
C2-075(X＝NH)，C3-075(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000782
C2-081(X＝NH)，C3-081(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000783
C2-086(X＝NH)，C3-086(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000784
C2-088(X＝NH)，C3-088(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000791
C2-090(X＝NH)，C3-090(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000792
C2-094(X＝NH)，C3-094(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000793
C2-099(X＝NH)，C3-099(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000794
C2-102(X＝NH)，C3-102(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000801
C2-110(X＝NH)，C3-110(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000802
C2-113(X＝NH)，C3-113(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000803
C2-114(X＝NH)，C3-114(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000804
C2-119(X＝NH)，C3-119(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000805
C2-119b(X＝NH)，C3-119b(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000811
C2-123(X＝NH)，C3-123(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000812
C2-127(X＝NH)，C3-127(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000813
C2-131(X＝NH)，C3-131(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000814
C2-137a(X＝NH)，C3-137a(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000815
C2-137b(X＝NH)，C3-137b(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000821
C2-140(X＝NH)，C3-140(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000822
C2-147a(X＝NH)，C3-147a(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000823
C2-147b(X＝NH)，C3-147b(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000824
C2-151(X＝NH)，C3-151(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000825
C2-152(X＝NH)，C3-152(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000831
C2-156(X＝NH)，C3-156(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000832
C2-157(X＝NH)，C3-157(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000833
C2-158(X＝NH)，C3-158(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000834
C2-159a(X＝NH)，C3-159a(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000835
C2-159b(X＝NH)，C3-159b(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000841
C2-165(X＝NH)，C3-165(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000842
C2-166(X＝NH)，C3-166(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000843
C2-168(X＝NH)，C3-168(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000844
C2-170a(X＝NH)，C3-170a(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000845
C2-170b(X＝NH)，C3-170b(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000851
C2-177(X＝NH)，C3-177(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000852
C2-188(X＝NH)，C3-188(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000853
C2-200(X＝NH)，C3-200(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000861
C2-208(X＝NH)，C3-208(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000862
C2-213(X＝NH)，C3-213(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000863
C2-226(X＝NH)，C3-226(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000864
C2-238(X＝NH)，C3-238(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000865
C2-243(X＝NH)，C3-243(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000871
C2-247(X＝NH)，C3-247(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000872
C2-253(X＝NH)，C3-253(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000873
C2-262a(R1＝H，X＝NH)；C2-262b(R1＝OH，X＝NH)；C2-262c(R1＝OCH3，X＝NH)；C2-262d(R1＝CH3，X＝NH)，C3-262a(R1＝H，X＝O)；C3-262b(R1＝OH，X＝O)；C3-262c(R1＝OCH3，X＝O)；C3-262d(R1＝CH3，X＝O)；
Figure FDA0003850648520000874
C2-266(X＝NH)，C3-266(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000881
C2-285a～C2-285z，X＝NH；C2-285a1-C2-285i1，X＝NH；C3-285a～C3-285z，X＝O；C3-285a1-C3-285i1，X＝O；
Figure FDA0003850648520000882
285a1-285i1如下图所示：
Figure FDA0003850648520000883
C2-291a～C2-291z，X＝NH；C2-291a1-C2-291i1，X＝NH；C3-291a～C3-291z，X＝O；C3-291a1-C3-291i1，X＝O；
Figure FDA0003850648520000884
C2-297a～C2-297z，X＝NH；C2-297a1-C2-297i1，X＝NH；C3-297a～C3-297z，X＝O；C3-297a1-C3-297i1，X＝O；p1，或p2＝0～24；q1＝1～18；
Figure FDA0003850648520000891
C2-305(X＝NH)，C3-305(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000892
C2-306(X＝NH)，C3-306(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000893
C2-311(X＝NH)，C3-311(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000894
C2-362(X＝NH)，C3-362(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000895
C2-397(X＝NH)，C3-397(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000901
C2-402(X＝NH)，C3-402(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000902
C2-407(X＝NH)，C3-407(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000903
C2-411(X＝NH)，C3-411(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000911
C2-414(X＝NH)，C3-414(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000912
C2-419(X＝NH)，C3-419(X＝O)，
Figure FDA0003850648520000913
C2-424(X＝NH)，C3-424(X＝O)；
Figure FDA0003850648520000914
C2-428(X＝NH)，C3-428(X＝O)；
其中mAb是抗体。
12.根据权利要求9所述的，可用于制备CPT偶联物，结构如式(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)和(X)所示的化合物29、31、35、41、42、43、47、50、56、61、64、70、75、81、86、88、90、94、99、102、110、113、114、119a、119b、123、127、131、137a、137b、140、147a、147b、151、152、157、158、159a、159b、165、166、168、170a、170b、177、188、200、208、213、226、238、243、247、262a、262b、262c、262d、266、285(285a～285z、285a1～285i1)、291、297、305、306、311、362、397、402和436：
Figure FDA0003850648520000921
Figure FDA0003850648520000931
Figure FDA0003850648520000941
Figure FDA0003850648520000951
Figure FDA0003850648520000961
Figure FDA0003850648520000971
Figure FDA0003850648520000981
Figure FDA0003850648520000991
Figure FDA0003850648520001001
Figure FDA0003850648520001011
Figure FDA0003850648520001021
Figure FDA0003850648520001031
Figure FDA0003850648520001041
Figure FDA0003850648520001051
Figure FDA0003850648520001061
Figure FDA0003850648520001071
Figure FDA0003850648520001081
13.根据权利要求1、2、3、4、5、10、或12所述的偶联物，其中细胞连接分子(T或mAb)选自：
(A)：抗体、蛋白质、前抗体、纳米抗体、维生素(包括叶酸)、肽、高分子胶束、脂质体、基于脂蛋白的药物载体、纳米颗粒药物载体、树枝状聚合物、以及包覆在或连接至细胞结合配体上的上述分子或颗粒，或上述的组合；
(B)：类抗体蛋白、全长抗体(多克隆抗体、单克隆抗体、抗体二聚体、抗体多聚体)、多特异性抗体(双特异性抗体、三特异性抗体或四特异性抗体)、单链抗体、与靶细胞结合的抗体片段、单克隆抗体、单链单克隆抗体、与靶细胞结合的单克隆抗体片段、嵌合抗体、与靶结合的嵌合抗体片段、结构域抗体、与靶细胞结合的结构域抗体片段、表面重组抗体、表面重组单链抗体、与靶细胞结合的表面重组抗体片段、人源化抗体或表面重组抗体、人源化单链抗体、与靶细胞结合的人源化抗体片段、抗独特型(anti-Id)抗体、CDR、双抗体、三抗体、四抗体、小型抗体、前抗体、前抗体片段、小免疫蛋白(SIP)、淋巴因子、激素、维生素、生长因子、集落刺激因子、营养转运分子、大分子量蛋白、融合蛋白、激酶抑制剂、基因靶向剂、用抗体或大分子量蛋白修饰的纳米颗粒或聚合物；
(C)：细胞结合配体或受体激动剂选自：叶酸衍生物；谷氨酸脲衍生物；生长抑制素及其类似物(选自奥曲肽(Sandostatin)和兰瑞肽(Somatuline))；芳香族磺酰胺；垂体腺苷酸环化酶启动肽(PACAP)(PAC1)；血管活肠肽(VIP/PACAP)(VPAC1，VPAC2)；黑素细胞刺激素(α-MSH)；胆囊收缩素(CCK)/胃泌素受体及其受体亚型；铃蟾肽(选自Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2)/胃泌素释放肽(GRP)；神经降压素受体及其受体亚型(NTR1，NTR2，NTR3)；物质P(NK1受体)配体；神经肽Y(Y1–Y6)；归巢肽包括RGD(Arg-Gly-Asp)，NGR(Asn-Gly-Arg)，二聚和多聚环状RGD肽(选自cRGDfV)，TAASGVRSMH和LTLRWVGLMS(硫酸软骨素蛋白多糖NG2受体)和F3肽；细胞穿透肽(CPPs)；肽激素，选自促黄体生成素释放激素(LHRH)的激动剂和拮抗剂，促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂，通过靶向卵泡刺激素(FSH)和促黄体激素(LH)以及睾酮产生而作用，选自布舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt)，戈那瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)，戈舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2)，组氨瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-benzyl)-Leu-Arg-Pro-NHEt)，亮丙瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt)，那法瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)，曲普瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)，纳法瑞林，阿贝瑞林(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-isopropylLys-Pro-DAla-NH2)，(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2)，亮丙瑞林(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-4-aminoPhe(L-hydroorotyl)-D-4-aminoPhe(carba-moyl)-Leu-isopropylLys-Pro-D-Ala-NH2)，和地加瑞克(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-(N9，N10-diethyl)-homoArg-Leu-(N9，N10-diethyl)-homoArg-Pro-D-Ala-NH2)；模式识别受体(PRRs)，选自Toll样受体(TLRs)，C型凝集素和结节状的受体(NLRs)；降钙素受体激动剂；整合素受体及其受体子类(选自αVβ1，αVβ3，αVβ5，αVβ6，α6β4，α7β1，αLβ2，αIIbβ3)激动剂(选自GRGDSPK，cyclo(RGDfV)(L1)及其衍生物[cyclo(-N(Me)R-GDfV)，cyclo(R-Sar-DfV)，cyclo(RG-N(Me)D-fV)，cyclo(RGD-N(Me)f-V)，cyclo(RGDf-N(Me)V-)(Cilengitide)]；纳米抗体(VHH的衍生物(骆驼科动物Ig))；结构域抗体(dAb，VH或VL域的衍生物)；双特异性T细胞接头(BiTE，双特异性双抗体)；双重亲和重定向剂(DART，双特异性双抗体)；四价串联抗体(TandAb，二聚双特异性双抗体)；anticalin(Lipocalins的衍生物)；adnectins(第10位FN3(纤连蛋白))；设计的锚蛋白重复蛋白(DARPins)；avimers；EGF受体，或VEGF受体激动剂；
(D)：细胞结合分子/配体或细胞受体激动剂的小分子选自：LB01(叶酸)、LB02(PMSA配体)、LB03(PMSA配体)、LB04(PMSA配体)、LB05(生长抑制素)、LB06(生长抑制素)、LB07(奥曲肽、生长抑制素类似物)、LB08(兰瑞肽、生长抑制素类似物)、LB09(伐普肽(Sanvar)、生长抑制素类似物)、LB10(CAIX配体)、LB11(CAIX配体)、LB12(胃泌素释放肽受体(GRPr)、MBA)、LB13(促黄体激素释放激素(LH-RH)和GnRH配体)、LB14(促黄体激素释放激素(LH-RH)和GnRH配体)、LB15(GnRH拮抗剂、Abarelix)、LB16(钴胺素、维生素B12类似物)、LB17(钴胺素、维生素B12类似物)、LB18(用于αvβ3整联蛋白受体、环状RGD五肽)、LB19(VEGF受体的异二价肽配体)、LB20(神经髓质素B)、LB21(蛙皮素，作用于G蛋白偶联受体)、LB22(TLR2，作用于类Toll受体)、LB23(作用于雄性激素受体)、LB24(西仑吉肽或环(-RGDfV-)结合物，作用于αv整合素受体)LB25(利福布汀类似物)、LB26(利福布汀类似物)、LB27(利福布汀类似物)、LB28(氟氢可的松)、LB29(地塞米松)、LB30(丙酸氟替卡松)、LB31(丙酸倍氯米松)、LB32(醋酸曲安奈德)、LB33(泼尼松龙)、LB35(甲基强的松龙)、LB36(倍他米松)、LB37(伊立替康类似物)、LB38(克唑替尼类似物)、LB39(硼替佐米类似物)、LB40(卡菲佐米类似物)、LB41(卡非佐米类似物)、LB42(亮丙瑞林类似物)、LB43(曲普瑞林类似物)、LB44(克林霉素)、LB45(利拉鲁肽类似物)、LB46(半长春新碱类似物)、LB47(瑞他帕林类似物)、LB48(丁布尔类似物)、LB49(长春碱类似物)、LB50(利西森肽类似物)、LB51(奥西丁尼类似物)、LB52(核苷类似物)、LB53(厄洛替尼类似物)和LB54(拉帕替尼类似物)，其结构如下所示：
Figure FDA0003850648520001111
LB01(叶酸)，
Figure FDA0003850648520001112
LB02(PMSA配体)，
Figure FDA0003850648520001113
LB03(PMSA配体)，
Figure FDA0003850648520001114
LB04(PMSA配体)，
Figure FDA0003850648520001115
LB05(生长激素抑制素)，
Figure FDA0003850648520001116
LB06(生长激素抑制素)，
Figure FDA0003850648520001121
LB07(奥曲肽、生长抑制素类似物)，
Figure FDA0003850648520001122
LB08(兰肽、生长抑制素类似物)，
Figure FDA0003850648520001123
LB09(氨肽(Sanvar)、生长抑制素类似物)，
Figure FDA0003850648520001124
LB10(CAIX配体)，
Figure FDA0003850648520001125
LB11(CAIX配体)，
Figure FDA0003850648520001126
LB12(胃泌素释放肽受体(GRPr)，MBA)，
Figure FDA0003850648520001131
LB13(促黄体激素释放激素(LH-RH)和促性腺激素释放激素GnRH配体)，
Figure FDA0003850648520001132
LB14(促黄体激素释放激素(LH-RH)和促性腺激素释放激素GnRH配体)，
Figure FDA0003850648520001133
LB15(GnRH拮抗物、阿巴瑞克)，
Figure FDA0003850648520001134
R19是5’-脱氧腺苷，Me，OH，CN；LB16(钴胺素，维生素B12类似物)，
Figure FDA0003850648520001141
R19是5’-脱氧腺苷，Me，OH，CN；LB17(钴胺素，维生素B12类似物)，
Figure FDA0003850648520001142
LB18(环RGD五肽，作用于αvβ3整联蛋白受体)，
Figure FDA0003850648520001143
LB19(异源二价肽配体偶联物，作用于血管内皮生长因子VEGF受体)，
Figure FDA0003850648520001144
LB20(神经髓质素B)，
Figure FDA0003850648520001145
LB21蛙皮素偶联物，作用于G蛋白偶联受体)，
Figure FDA0003850648520001146
LB22(TLR2偶联物，作用于类Toll受体)，
Figure FDA0003850648520001147
LB23(雄激素受体)，
Figure FDA0003850648520001151
LB24(西伦吉肽/环(-RGDfV-)偶联物，作用于αv整合素受体)
Figure FDA0003850648520001152
LB25(利福布汀类似物)，
Figure FDA0003850648520001153
LB26(利福布汀类似物)，
Figure FDA0003850648520001154
LB27(利福布汀类似物)，
Figure FDA0003850648520001155
LB28(氟氢可的松)，
Figure FDA0003850648520001161
LB29(地塞米松)，
Figure FDA0003850648520001162
LB30(丙酸氟替卡松)，
Figure FDA0003850648520001163
LB31(倍氯米松丙酸酯)，
Figure FDA0003850648520001164
LB32(曲安奈德)，
Figure FDA0003850648520001165
LB33(泼尼松)，
Figure FDA0003850648520001166
LB34(泼尼松龙)，
Figure FDA0003850648520001171
LB35(甲基强的松龙)，
Figure FDA0003850648520001172
LB36(倍氟美松)，
Figure FDA0003850648520001173
LB37(伊立替康类似物)，
Figure FDA0003850648520001174
LB38(克唑替尼类似物)，
Figure FDA0003850648520001175
LB39(硼替佐米类似物)，其中Y5是N、CH、C(Cl)、C(CH3)或C(COOR1)；R1是H、C1-C6烷基、C3-C8芳基；
Figure FDA0003850648520001176
LB40(卡菲佐米类似物)，
Figure FDA0003850648520001177
LB41(卡菲佐米类似物)，
Figure FDA0003850648520001181
LB42(亮丙瑞利类似物)，
Figure FDA0003850648520001182
LB43(曲普瑞林类似物)，
Figure FDA0003850648520001183
LB44(克林霉素)，
Figure FDA0003850648520001184
LB45(利拉鲁肽类似物)，
Figure FDA0003850648520001185
LB46(索马鲁肽类似物)，
Figure FDA0003850648520001186
LB47(瑞他帕林类似物)，
Figure FDA0003850648520001187
LB48(丁布尔类似物)，
Figure FDA0003850648520001191
LB49(长春碱类似物)，
Figure FDA0003850648520001192
LB50(利西森肽类似物)，
Figure FDA0003850648520001193
LB51(奥西丁尼类似物)，
Figure FDA0003850648520001194
LB52(核苷类似物)，
Figure FDA0003850648520001195
LB53(埃罗替尼类似物)，
Figure FDA0003850648520001196
LB54(拉帕替尼类似物)。
14.根据权利要求1、2、3、4、5、10或12的所述的偶联物，其中细胞结合剂/分子T能够抗以下细胞：肿瘤细胞、病毒感染细胞、微生物感染细胞、寄生虫感染细胞、自身免疫细胞、活化的肿瘤细胞、骨髓细胞、活化的T细胞、B细胞、或黑色素细胞或任何表达下列抗原或受体的某种疾病的细胞：CD1、CD1a、CD1b、CD1c、CD1d、CD1e、CD2、CD3、CD3d、CD3e、CD3g、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD8a、CD8b、CD9、CD10、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CD12w、CD13、CD14、CD15、CD16、CD16a、CD16b、CDw17、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD25、CD26、CD27、CD28、CD29、CD30、CD31、CD32、CD32a、CD32b、CD33、CD34、CD35、CD36、CD37、CD38、CD39、CD40、CD41、CD42、CD42a、CD42b、CD42c、CD42d、CD43、CD44、CD45、CD46、CD47、CD48、CD49b、CD49c、CD49c、CD49d、CD49f、CD50、CD51、CD52、CD53、CD54、CD55、CD56、CD57、CD58、CD59、CD60、CD60a、CD60b、CD60c、CD61、CD62E、CD62L、CD62P、CD63、CD64、CD65、CD65s、CD66、CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e、CD66f、CD67、CD68、CD69、CD70、CD71、CD72、CD73、CD74、CD75、CD75s、CD76、CD77、CD78、CD79、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CD84、CD85、CD85a、CD85b、CD85c、CD85d、CD85e、CD85f、CD85g、CD85g、CD85i、CD85j、CD85k、CD85m、CD86、CD87、CD88、CD89、CD90、CD91、CD92、CD93、CD94、CD95、CD96、CD97、CD98、CD99、CD100、CD101、CD102、CD103、CD104、CD105、CD106、CD107、CD107a、CD107b、CD108、CD109、CD110、CD111、CD112、CD113、CD114、CD115、CD116、CD117、CD118、CD119、CD120、CD120a、CD120b、CD121、CD121a、CD121b、CD122、CD123、CD123a、CD124、CD125、CD126、CD127、CD128、CD129、CD130、CD131、CD132、CD133、CD134、CD135、CD136、CD137、CD138、CD139、CD140、CD140a、CD140b、CD141、CD142、CD143、CD144、CD145、CDw145、CD146、CD147、CD148、CD149、CD150、CD151、CD152、CD153、CD154、CD155、CD156、CD156a、CD156b、CD156c、CD156d、CD157、CD158、CD158a、CD158b1、CD158b2、CD158c、CD158d、CD158e1、CD158e2、CD158f2、CD158g、CD158h、CD158i、CD158j、CD158k、CD159、CD159a、CD159b、CD159c、CD160、CD161、CD162、CD163、CD164、CD165、CD166、CD167、CD167a、CD167b、CD168、CD169、CD170、CD171、CD172、CD172a、CD172b、CD172g、CD173、CD174、CD175、CD175s、CD176、CD177、CD178、CD179、CD179a、CD179b、CD180、CD181、CD182、CD183、CD184、CD185、CD186、CDw186、CD187、CD188、CD189、CD190、CD191、CD192、CD193、CD194、CD195、CD196、CD197、CD198、CD199、CDw198、CDw199、CD200、CD201、CD202、CD202(a、b)、CD203、CD203c、CD204、CD205、CD206、CD207、CD208、CD209、CD210、CDw210a、CDw210b、CD211、CD212、CD213、CD213a1、CD213a2、CD214、CD215、CD216、CD217、CD218、CD218a、CD218、CD21b9、CD220、CD221、CD222、CD223、CD224、CD225、CD226、CD227、CD228、CD229、CD230、CD231、CD232、CD233、CD234、CD235、CD235a、CD235b、CD236、CD237、CD238、CD239、CD240、CD240ce、CD240d、CD241、CD242、CD243、CD244、CD245、CD246、CD247、CD248、CD249、CD250、CD251、CD252、CD253、CD254、CD255、CD256、CD257、CD258、CD259、CD260、CD261、CD262、CD263、CD264、CD265、CD266、CD267、CD268、CD269、CD270、CD271、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD277、CD278、CD279、CD281、CD282、CD283、CD284、CD285、CD286、CD287、CD288、CD289、CD290、CD291、CD292、CD293、CD294、CD295、CD296、CD297、CD298、CD299、CD300、CD300a、CD300b、CD300c、CD301、CD302、CD303、CD304、CD305、CD306、CD307、CD307a、CD307b、CD307c、CD307d、CD307e、CD307f、CD308、CD309、CD310、CD311、CD312、CD313、CD314、CD315、CD316、CD317、CD318、CD319、CD320、CD321、CD322、CD323、CD324、CD325、CD326、CD327、CD328、CD329、CD330、CD331、CD332、CD333、CD334、CD335、CD336、CD337、CD338、CD339、CD340、CD341、CD342、CD343、CD344、CD345、CD346、CD347、CD348、CD349、CD350、CD351、CD352、CD353、CD354、CD355、CD356、CD357、CD358、CD359、CD360、CD361、CD362、CD363、CD364、CD365、CD366、CD367、CD368、CD369、CD370、CD371、CD372、CD373、CD374、CD375、CD376、CD377、CD378、CD379、CD381、CD382、CD383、CD384、CD385、CD386、CD387、CD388、CD389、CRIPTO、CRIPTO、CR、CR1、CRGF、CRIPTO、CXCR5、LY64、TDGF1、4-1BB、APO2、ASLG659、BMPR1B、4-1BB、5AC、5T4(Trophoblast糖蛋白、TPBG、WNT-活化抑制因子1或WAIF1)、腺癌抗原、AGS-5、AGS-22M6、启动素受体激酶1、AFP、AKAP-4、ALK、α整合素、αvβ6、氨基肽酶N、淀粉样蛋白β、雄激素受体、促血管新生蛋白因子2、促血管新生蛋白因子3、膜联蛋白A1、炭疽毒素保护性抗原、抗转移蛋白受体、AOC3(VAP-1)、B7-H3、炭疽杆菌、BAFF(B细胞启动因子)、BCMA、B淋巴瘤细胞、bcr-abl、蛙皮素、BORIS、C5、C242抗原、CA125(糖抗原125、MUC16)、CA-IX(或CAIX、碳酸酐酶9)、CALLA、CanAg、犬红斑狼疮IL31、碳酸酐酶IX、心肌肌凝蛋白、CCL11(C-C片段趋化因子11)、CCR4(C-C趋化因子受体4、CD194)、CCR5、CD3E(ε)、CEA(癌胚抗原)、CEACAM3、CEACAM5(癌胚抗原)、CFD(因子D)、Ch4D5、胆囊收缩素2(CCK2R)、CLDN18(Claudin-18)、CLDN18.1(Claudin-18.1)、CLDN18.2(Claudin-18.2)、丛生因子A、cMet、CRIPTO、FCSF1R(集落刺激因子1受体、CD115)、CSF2(集落刺激因子2、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF))、CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)、CTAA16.88肿瘤抗原、CXCR4(CD184)、C-X-C趋化因子受体4、环状ADP核糖核酸酶、细胞周期蛋白B1、CYP1B1、巨细胞病毒、巨细胞病毒糖蛋白B、Dabigatran、DLL3(类Δ配体3)、DLL4(类Δ配体4)、DPP4(双肽-肽酶4)、DR5(死亡受体5)、大肠杆菌shiga毒素类型-1、大肠杆菌shiga毒素类型-2、ED-B、EGFL7(类EGF结构域蛋白7)、EGFR、EGFRII、EGFRvIII、内皮因子、内皮素B受体、内毒素、EpCAM(上皮细胞粘附分子)、EphA2、Episialin、ERBB2(表皮生长因子受体2)、ERBB3、ERG(TMPRSS2 ETS融合基因)、大肠杆菌、ETV6-AML、FAP(成纤维细胞活化蛋白α)、FCGR1、甲胎蛋白、纤维蛋白IIβ链、纤连蛋白额外结构域-B、FOLR(叶酸受体)、叶酸受体α、叶酸水解酶、Fos相关抗原1、呼吸道合胞病毒的F蛋白、卷曲受体、岩藻糖GM1、GD2神经节苷脂、G-28(细胞表面抗原糖脂)、GD3独特型、GloboH、Glypican 3、N-羟乙酰神经氨酸、GM3、GMCSF受体α链、生长分化因子、GP100、GPNMB(跨膜糖蛋白NMB)、GUCY2C(鸟苷酸环化酶2C)、鸟苷酸环化酶C(GC-C)、肠鸟苷酸环化酶、鸟苷酸环化酶C受体、热稳定肠毒素受体(hSTAR)、热休克蛋白、血凝素、乙肝表面抗原、乙型肝炎病毒、HER1(人类表皮生长因子受体1)、HER2、HER2/neu、HER3(ERBB-3)、IgG4、HGF/SF(肝细胞生长因子/分散因子)、HHGFR、HIV-1、组蛋白复合物、HLA-DR(人类白细胞抗原)、HLA-DR10、HLA-DRB、HMWMAA、人类绒毛膜促性腺激素、HNGF、人类分散因子受体激酶、HPV E6/E7、Hsp90、hTERT、ICAM-1(细胞间粘附分子1)、独特型、IGF1R(IGF–1、类胰岛素生长因子1受体)、IGHE、IFN-γ、流感血凝素、IgE、IgE Fc区、IGHE、白介素(包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-6R、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-17A、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27、IL-28)、IL31RA、ILGF2(类胰岛素生长因子2)、整合蛋白(α4、αIIbβ3、αvβ3、α4β7、α5β1、α6β4、α7β7、αllβ3、α5β5、αvβ5)、干扰素γ诱导蛋白质、ITGA2、ITGB2、KIR2D、Kapa Ig、LCK、Le、Legumain、Lewis-Y抗原、LFA-1(淋巴细胞功能相关抗原1、CD11a)、LHRH、LINGO-1、脂磷壁酸、LIV1A、LMP2、LTA、MAD-CT-1、MAD-CT-2、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、MAGE A1、MAGE A3、MAGE4、MART1、MCP-1、MIF(巨噬细胞迁移抑制因子、或糖基抑制因子(GIF))、MS4A1(跨膜4结构域亚家族A成员1)、MSLN(间皮素)、MUC1(粘蛋白1、细胞表面相关(MUC1)或多态性上皮粘蛋白(PEM))、MUC1-KLH、MUC16(CA125)、MCP1(单核细胞趋化蛋白1)、MelanA/MART1、ML-IAP、MPG、MS4A1(跨膜4域亚家族A)、MYCN、髓磷脂相关糖蛋白、Myostatin、NA17、NARP-1、NCA-90(粒细胞抗原)、Nectin-4(ASG-22ME)、NGF、神经细胞凋亡调控蛋白酶1、NOGO-A、Notch受体、核仁素、Neu致癌基因产物、NY-BR-1、NY-ESO-1、OX-40、OxLDL(氧化低密度脂蛋白)、OY-TES1、P21、p53非突变体、P97、PAP、抗(N-羟乙酰神经氨酸)抗体结合部位、PAX3、PAX5、PCSK9、PDCD1(PD-1、程序性细胞死亡蛋白1)、PDGF-Rα(α血小板源生长因子受体)、PDGFR-β、PDL-1、PLAC1、类PLAP睾丸碱性磷酸酶、血小板衍生生长因子受体β、磷酸钠联合转运体、PMEL 17、聚唾液酸、蛋白酶3(PR1)、前列腺癌、PS(磷脂酰丝氨酸)、前列腺癌细胞、铜绿假单胞菌、PSMA、PSA、PSCA、狂犬病病毒糖蛋白、RHD(Rh多肽1(RhPI))、Rhesus因子、RANKL、RhoC、Ras突变、RGS5、ROBO4、呼吸道合胞病毒、RON、ROR1、肉瘤易位断点、SART3、Sclerostin、SLAMF7(SLAM成员7)、Selectin P、SDC1(多配体蛋白聚糖1)、系统性红斑狼疮(a)、生长调节素C、SIP(1-磷酸鞘氨醇)、生长激素抑制素、精子蛋白17、SSX2、STEAP1(6-跨膜上皮前列腺抗原1)、STEAP2、STn、TAG-72(肿瘤相关糖蛋白72)、存活素、T细胞受体、T细胞跨膜蛋白、TEM1(肿瘤血管内皮标记1)、TENB2、Tenascin C(TN-C)、TGF-α、TGF-β(转化生长因子β)、TGF-β1、TGF-β2(转化生长因子2)、Tie(CD202b)、Tie2、TIM-1(CDX-014)、Tn、TNF、TNF-α、TNFRSF8、TNFRSF10B(肿瘤坏死因子受体超家族成员10B)、TNFRSF13B(肿瘤坏死因子受体超家族成员13B)、TPBG(滋养细胞糖蛋白)、TRAIL-R1(TNF相关坏死诱导配体受体1)、TRAILR2(死亡受体5(DR5))、肿瘤相关的钙信号传感子2、肿瘤特异的糖基化MUC1、TWEAK受体、TYRP1(糖蛋白75)、TRP-1(Trop1)、TRP-2(Trop2)、酪氨酸酶、VCAM-1、VEGF、VEGF-A、VEGF-2、VEGFR-1、VEGFR-2、vimentin、WT1、XAGE 1、表达胰岛素生长因子受体的细胞，或表达表皮生长因子受体的细胞。
15.如权利要求15所述的肿瘤细胞，其特征在于选自以下细胞：淋巴瘤细胞、骨髓瘤细胞、肾细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、卵巢癌细胞、结直肠癌细胞、胃癌细胞、鳞状癌细胞、小细胞肺癌细胞、非小细胞肺癌细胞、睾丸癌细胞、恶性细胞或任何不受控制地加速生长和分裂而引起癌症的细胞。
16.一种药物组合物，其特征在于包含治疗有效量的权利要求1、2、3、4、5、10，或12中任一的偶联物，以及药学上可接受的盐、载体、稀释剂或辅料，或其偶联物的组合，用于治疗或预防癌症，自身免疫性疾病或传染性疾病。
17.如权利要求1、2、3、4、5、10、或12所述的偶联物，其特征在于具有体外、体内或离体细胞杀伤活性。
18.如权利要求17所述的药物组合物，其特征在于其与化学治疗剂、放射疗法、免疫治疗剂、自身免疫失调剂、抗感染剂或其他偶联物同时给药，以协同治疗或预防癌症、自身免疫性疾病或传染性疾病。
19.如权利要求19所述的化学治疗剂，其特征在于选自以下任何一种或多种：
1)a)烷基化剂：选自氮芥：氯苯那普、氯普那嗪、环磷酰胺、达喀尔巴嗪、雌二醇氮芥、异环磷酰胺、氮芥、盐酸二甲氧胺、氧化二氮芥、盐酸氨氯地平、麦考酚酸、卫矛醇、呱泊溴烷、新氮芥、苯芥胆甾醇、松龙苯芥、噻替呱、曲磷胺对、尿嘧啶；CC-1065和阿多来新、卡折来新、比折来新及其合成类似物)；多卡霉素及其合成类似物、KW-2189、CBI-TMI或CBI二聚体；苯并二氮卓二聚体或吡咯苯并二氮卓二聚体(PBD)、托美霉素二聚体、吲哚苯并二氮卓二聚体、咪唑苯并噻二氮卓二聚体或恶唑烷苯并二氮卓的二聚体；亚硝基脲：包括卡莫司汀、洛莫司汀、氯化梭菌素、福莫司汀、尼莫司汀、拉莫司汀；烷基磺酸盐：包括白苏芬、树苏芬、磺胺异丙磺胺和皮苏芬；三氮烯或达喀尔巴嗪；含铂化合物包括卡铂、顺铂、奥沙利铂；吖丙啶类、如苯并二氢吡喃酮、卡洛酮、美妥替派和乌雷多巴；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺、包括六甲蜜胺、三亚乙基三胺、三乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基甲基胺；
b)植物生物碱选自长春花生物碱：包括长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨、去甲长春碱；紫杉醇类：紫杉醇、多西紫杉醇及其类似物；美登素类包括DM1、DM2、DM3、DM4、DM5、DM6、DM7、美登素、安沙霉素及其类似物；cryptophycin(包括cryptophycin 1和cryptophycin 8)；埃博霉素、软珊瑚醇、迪莫利德、草苔虫内酯、海兔毒素、澳瑞他汀、cephalostatin；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑制素；
c)DNA拓扑异构酶抑制剂：选自依托泊苷替尼：包括9-氨基喜树碱、喜树碱、克立那托、多拉霉素、依托泊苷、磷酸依托泊苷、伊立替康、米托蒽醌、诺消灵、视黄酸(视黄醇)、替尼泊苷、拓扑替康、9-硝基喜树碱或RFS 2000；丝裂霉素及其衍生物；
d)抗代谢物、选自[抗叶酸剂：(DHFR抑制剂(甲氨蝶呤、曲麦克特、二甲叶酸、蝶罗呤、氨喋呤(4-氨基苯甲酸)或其他叶酸类似物)；IMP脱氢酶抑制剂：(包括麦考酚酸、噻唑呋林、利巴韦林、EICAR)；核糖核苷酸还原酶抑制剂(包括羟基脲、去铁胺)]；[嘧啶类似物：尿嘧啶类似物(包括安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿嘧啶、卡培他滨(希罗达)、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、ratitrexed(Tomudex)；胞嘧啶类似物(包括阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷、氟达拉滨)；嘌呤类似物(包括硫唑嘌呤、氟达拉滨、巯嘌呤、硫胺素、硫鸟嘌呤)]；叶酸补充剂、弗洛林酸；
e)激素疗法剂：选自受体拮抗剂[抗雌激素(甲地孕酮、雷洛昔芬、他莫昔芬)；LHRH兴奋剂(包括戈斯他林、醋酸亮丙瑞林)；抗雄激素药(包括比卡鲁胺、氟他胺、卡鲁司酮、丙酸倍他雄酮、表雄甾醇、戈舍瑞林、亮丙瑞林、美替利定、尼鲁米特、睾内酯、曲洛司坦及其他雄激素抑制剂)]；维甲类化合物[维生素D3类似物(包括CB1093、EB1089、KH1060、胆钙化醇、麦角钙化甾醇)；光动力疗法剂(包括维替泊芬、酞菁、光敏剂Pc4、去甲氧基-竹红菌素A)；细胞因子(包括干扰素-α、干扰素-γ、肿瘤坏死因子(TNF)、含TNF的人蛋白)]；
f)激酶抑制剂包括BIBW 2992(抗-EGFR/Erb2)、伊马替尼、吉非替尼、呱加他尼、索拉非尼、达沙替尼、舒尼替尼、厄洛替尼、尼洛替尼、拉帕替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、凡德他尼、E7080(抗VEGFR2)、mubritinib、普纳替尼、bafetini、bosutinib、卡博替尼、维莫德吉、iniparib、鲁索利替尼、CYT387、阿西替尼、tivozanib、索拉非尼、贝伐单抗、西妥昔单抗、曲妥珠单抗、雷珠单抗、帕尼单抗、伊斯平斯；
g)聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂、如奥拉帕里、尼拉帕里、依尼帕里、塔拉佐帕里、维利帕里、维利帕里、CEP 9722(Cephalon)、E7016(Eisai)、BGB-290(Beigene)、或3-氨基苯甲酰酰胺；
h)抗生素、选自烯二炔类抗生素(选自卡奇霉素、特别是卡奇霉素γ1、δ1、α1和β1、达因霉素、包括达因霉素A和脱氧米霉素、埃斯培拉霉素、卡塔尔霉素、C-1027、maduropeptin、或新卡嗪奥斯汀和相关色蛋白烯二炔抗生素)、aclacinomysins、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、卡诺霉素、卡拉霉素、洋红霉素、嗜癌素、色霉素、达金霉素、柔红霉素、去柔红霉素、6-重氮-5-氧代-L-去甲亮氨酸、阿霉素、吗啉-阿霉素、氰基吗啉-阿霉素、2-吡咯啉阿霉素和脱氧柔红霉素、表柔比星、阿柔比星、伊达比星、马可霉素、nitomycin、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、peplomycin、potfiromycin、嘌呤霉素、奎拉霉素、罗道霉素、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；
i)聚酮化合物(番荔素)、bullatacin和bullatacinone；吉西他滨、环氧酶素、卡菲偌米布、硼替佐米、沙利度胺、来那度胺、pomalidomide、tosedostat、zybrestat、PLX4032、STA-9090、Stimuvax、allovectin-7、Xegeva、Provenge、Yervoy、异戊二烯化抑制剂和洛伐他汀、多巴胺能神经毒素和1-甲基-4-苯基吡啶鎓离子、细胞周期抑制剂(包括星形孢菌素)、放线菌素(包括放线菌素D、更生霉素)、鹅膏毒素、博莱霉素(包括博来霉素A2、博莱霉素B2、培洛霉素)、蒽环类抗生素(包括柔红霉素、多柔比星(阿霉素)、伊达比星、表柔比星、吡柔比星、佐柔比星、米托蒽醌、MDR抑制剂(如维拉帕米)、Ca2+ATP酶抑制剂或毒胡萝卜素、组蛋白去乙酰酶抑制剂(包括伏立诺他、罗米地辛、帕比司他、丙戊酸、Mocetinostat(MGCD0103)、Belinostat、PCI-24781、恩替诺特、SB939、Resminostat、Givinostat、AR-42、CUDC-101、萝卜硫素、曲古抑菌素A)；塞来昔布、格列酮类、表没食子儿茶素没食子酸酯、双硫仑、Salinosporamide A；抗肾上腺药物、如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦、醋葡醛内酯、醛磷酰胺、氨基乙酰丙酸、安吖啶、阿拉伯糖苷、bestrabucil、比生群、edatraxate、defofamine、美可辛、地吖醌、依氟鸟氨酸(DFMO)、elfomithine、依利醋铵、依托格鲁、硝酸镓、胞嘧啶、羟基脲、伊班膦酸盐、香菇多糖、氯尼达明、米托胍腙、米托蒽醌、莫呱达醇、二胺硝吖啶、喷司他丁、蛋氨氮芥、吡柔比星、鬼臼酸、2-乙肼、甲基苄肼；
Figure FDA0003850648520001271
呱嗪二酮丙烷；根霉素；西佐；螺环锗；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；三氯三乙胺；单端孢霉烯(包括T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和anguidine)、聚氨酯、siRNA、反义药物；
2)自身免疫疾病药物：环孢菌素、环孢菌素A、氨基己酸、硫唑嘌呤、溴隐亭、苯丁酸氮芥、氯喹、环磷酰胺、皮质类固醇(包括安西奈德、倍他米松、布地奈德、氢化可的松、氟尼缩松、丙酸氟替卡松、氟可龙达那唑、地塞米松、曲安奈德、二丙酸倍氯米松)、DHEA、依那西普、羟基氯喹、英夫利昔单抗、美洛昔康、甲氨蝶呤、麦考酚酸酯、泼尼松、西罗莫司、他克莫司；
3)抗传染病剂包括：
a)氨基糖苷类：丁胺卡那霉素、武夷霉素庆大霉素(奈替米星、西索米星、异帕米星)、潮霉素、卡那霉素(丁胺卡那霉素、阿贝卡星、氨基去氧卡那霉素、地贝卡星、妥布霉素)、新霉素(新霉素B、巴龙霉素、核糖霉素)、奈替米星、大观霉素、链霉素、妥布霉素、甲基姿苏霉素；
b)酰胺醇类：叠氮氯霉素、氯霉素、氟甲砜霉素、甲砜霉素；
c)安沙霉素类：格尔德霉素、除莠霉素；
d)碳青霉烯类：比阿培南、多尼培南、厄他培南、亚胺培南/西司他丁、美罗培南、帕尼培南；
e)头孢类：碳头孢烯(氯碳头孢)、头孢乙腈、头孢克洛、头孢拉定、头孢羟氨苄、头孢罗宁、头孢噻啶、头孢噻吩或头孢菌素、头孢氨苄、头孢来星、头孢孟多、头孢匹林、头孢三嗪、头孢氮氟、头孢西酮、头孢唑啉、头孢拉宗、头孢卡品、头孢达肟、头孢吡肟、头孢米诺、头孢西丁、头孢丙烯、头孢沙定、头孢替唑、头孢呋辛、头孢克肟、头孢地尼头孢妥仑、头孢吡肟、头孢他美、头孢甲肟、头孢地嗪、头孢尼西、头孢哌酮、头孢雷特、头孢噻肟、头孢替安、头孢唑兰、头孢氨苄、头孢咪唑、头孢匹胺、头孢匹罗、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢喹肟、头孢磺啶、头孢他啶、头孢特仑、头孢布烯、头孢噻林、头孢唑肟、头孢、头孢曲松、头孢呋辛、头孢唑喃、头霉素(包括头孢西丁、头孢替坦、头孢美唑)氧头孢烯(氟氧头孢、拉氧头孢)；
f)糖肽：博来霉素、万古霉素(包括奥利万星、特拉万星)、替考拉宁(达巴万星)雷莫拉宁；
g)甘氨酰：替加环素；
h)β-内酰胺酶抑制剂：青霉烷(舒巴坦、他唑巴坦)、克拉维烷(克拉维酸)；
i)林可酰胺类：克林霉素、林可霉素；
j)脂肽：达托霉素、A54145、钙依赖性抗生素(CDA)；
k)大环内酯类：阿奇霉素、喹红霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、氟红霉素、交沙霉素、酮内酯类(泰利霉素、喹红霉素)麦迪霉素、美奥卡霉素、竹桃霉素、利福霉素(利福平、利福平、利福布汀、利福喷丁)、罗他霉素、罗红霉素、壮观霉素、螺旋霉素、他克莫司(FK506)、醋竹桃霉素、泰利霉素；
l)单环β-内酰胺抗生素：氨曲南、替吉莫南；
m)唑烷酮类：利奈唑胺；
n)青霉素类：阿莫西林、氨苄西林(匹氨西林、海他西林、巴氨西林、美坦西林、酞氨西林)叠氮西林、阿洛西林、青霉素、苄星青霉素、苯氧基苄星青霉素、氯甲西林、普鲁卡因青霉素、羧苄青霉素(卡茚西林)、邻氯青霉素、双氯青霉素、先锋霉素、氟氯西林、美西林(氮卓脒青霉素双酯)、美洛西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、醋甲西林、青霉素、奈西林、青霉素、哌拉西林、苯丙西林、磺苄西林、替莫西林、替卡西林；
o)多肽：杆菌肽、多粘菌素E、多粘菌素B；
p)喹诺酮类药物：阿拉沙星、巴洛沙星、环丙沙星、克林沙星、达氟沙星、二氟沙星、依诺沙星、恩诺沙星、Floxin、加雷沙星、加替沙星、吉米沙星、格帕沙星、曲伐沙星卡诺、左氧氟沙星、洛美沙星、麻保沙星、莫西沙星、那氟沙星、诺氟沙星、奥比沙星、氧氟沙星、培氟沙星、曲伐沙星、格帕沙星、西他沙星、司帕沙星、替马沙星、妥舒沙星、曲伐沙星；
q)菌素：普那霉素、奎奴普丁/达福普汀)；
r)磺胺类药物：磺胺米隆、百浪多息、磺胺醋酰、磺胺甲、磺胺、柳氮磺胺吡啶、磺胺异恶唑、甲氧苄氨嘧啶、甲氧苄啶-磺胺甲基异恶唑(复方新诺明)；
s)类固醇抗菌药物：选自夫西地酸；
t)四环素类：强力霉素、金霉素、氯羟四环素、地美环素、赖甲环素、氯甲烯土霉素、美他环素、米诺环素、土霉素、青哌四环素、罗利环素、四环素、甘氨酰(包括替加环素)；
u)其他类型的抗生素选自番荔枝科、胂凡纳明、细菌萜醇抑制剂(杆菌肽)、DADAL/AR抑制剂(环丝氨酸)、dictyostatin、海绵内酯、艾榴塞洛素、埃博霉素、乙胺丁醇、依托泊苷、法罗培南、夫西地酸、痢特灵、异烟肼、laulimalide、甲硝唑、莫匹罗星、mycolactones、NAM合成抑制剂(如磷霉素)、呋喃妥因、紫杉醇、平板霉素、吡嗪酰胺、奎奴普丁/达福普汀、利福平、他唑巴坦替硝唑、番荔枝内酯；
4)抗病毒的药物：
a)进入/融合抑制剂：aplaviroc、马拉韦罗、维立韦罗、gp41的(恩夫韦)、PRO140、CD4(Ibalizumab)；
b)整合酶抑制剂：拉替拉韦、埃替拉韦、globoidnan A；
c)成熟抑制剂：贝韦立马、vivecon；
d)神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦；
e)核苷和核苷酸：阿巴卡韦、阿昔洛韦、阿德福韦、氨多索韦、apricitabine、溴夫定、西多福韦克拉夫定、右艾夫他滨、去羟肌苷(DDI)、艾夫他滨、恩曲他滨(FTC)、恩替卡韦、泛昔洛韦、氟脲嘧啶(5-FU)、3'-氟取代的2'，3'-二脱氧核苷衍生物(例如，3'-氟-2'，3'-二脱氧胸苷(FLT)和3'-氟-2'，3'-双脱氧(FLG)福米韦生、更昔洛韦、碘苷、拉米夫定(3TC)、L-核苷(包括β-L-胸苷、β-L-2'-脱氧胞苷)、喷昔洛韦、Racivir、利巴韦林、stampidine、司他夫定(d4T的)、他利韦林(伟拉咪定)、替比夫定、替诺福韦、伐昔洛韦三氟胸苷、缬更昔洛韦、扎西他滨(DDC)、齐多夫定(AZT)；
f)非核苷类：金刚烷胺、ateviridine、卡普韦林、二芳基嘧啶(依曲韦林、利匹韦林)、地拉韦啶、二十二烷醇、乙米韦林、依法韦仑、膦甲酸(磷酰基甲酸)、咪喹莫特、干扰素α、洛韦胺、洛德腺苷、他巴唑、奈韦拉平、NOV-205、聚乙二醇干扰素α、鬼臼毒素、利福平、金刚乙胺、瑞喹莫德(R-848)、醋胺金刚烷；
g)蛋白酶抑制剂：安普那韦、阿扎那韦、博赛泼维、达芦那韦、福沙那韦、茚地那韦、洛匹那韦、奈非那韦、pleconaril、利托那韦、沙奎那韦、特拉匹韦(VX-950)替拉那韦；
h)其他类型的抗病毒的药物：抗体酶、阿比朵尔、calanolides A、浅蓝菌素、蓝藻-N、二芳基嘧啶、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、膦甲酸钠、格瑞弗森、他利韦林(伟拉咪定)、羟基脲、KP-1461、米替福新、普来可那立、合成抑制剂、利巴韦林、seliciclib；
(5)或其药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或这些化合物的多晶结构；或它们的异构体，旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体。
20.根据权利要求19所述的拮抗剂选自下列药物中的一种或几种：阿巴西普、醋酸阿比特龙、对乙酰氨基酚/氢可酮、阿达木单抗、ADXS31-142、ADXS-HER2、阿法替尼马来酸盐、阿仑单抗、曲妥珠单抗、苯丙胺/右苯丙胺、阿那曲唑、阿扎那韦、Atezolizumab、阿托伐他汀、阿昔替尼、贝林、BCG Live、贝伐单抗、卡巴他赛、卡博替、贝沙罗汀、blinatumomab、硼替佐米、波舒替尼、brentuximab vedotin、布地奈德、布地奈德/福莫特罗、丁丙诺啡、卡培他滨、卡非佐米、塞来考昔、ceritinib、西妥昔单抗、环孢素、西那卡塞、克里唑替尼、达比加群、达拉菲尼、阿法达贝汀、地瑞那韦、甲磺酸伊马替尼、达沙替尼、地尼白介素、狄诺塞麦、双丙戊酸钠、右兰索拉唑、右呱甲酯、Dinutuximab、多西环素、度洛西汀、恩曲他滨/利匹韦林/替诺福韦地索普西富马酸盐、恩曲他滨/替诺福韦/依法韦仑、依诺肝素、恩杂鲁胺、阿法依泊汀、厄洛替尼、埃索美拉唑、依折麦布、依折麦布/辛伐他汀、非诺贝特、非格司亭、芬戈莫德、丙酸氟替卡松、氟替卡松/沙美特罗、氟维司群、吉非替尼、格拉替雷、醋酸戈舍瑞林、伊马替尼、替伊莫单抗、依鲁替尼、胰岛素门冬胰岛素、地特胰岛素、甘精胰岛素、赖脯胰岛素、干扰素β1a、干扰素β1b、拉帕替尼、Ipilimumab、异丙托溴铵/沙丁胺醇、醋酸兰乐肽、来那度胺、联合二甲苯磺酸盐、来曲唑、左甲状腺素、左旋甲状腺素、利多卡因、利奈唑胺、利拉鲁肽、MEDI4736、美金刚、呱醋甲酯、美托洛尔、莫达非尼、莫米松、尼罗替尼、Nivolumab、奥法木单抗、奥立他珠单抗、帕唑帕尼、派姆单抗、培美曲塞、帕妥珠单抗、肺炎球菌结合疫苗、泊马度胺、普瑞巴林、喹硫平、雷贝拉唑氯化镭223、雷洛昔芬、拉替拉韦、雷莫瑞单抗、雷珠单抗、瑞格菲尼、利妥昔单抗、利伐沙班、罗米地辛、罗苏伐他汀、鲁索替尼磷酸盐、沙丁胺醇、司维拉明、西地那非、siltuximab、西他列汀、西他列汀/二甲双胍、索非那新、索拉非尼、舒尼替尼、他达拉非、他莫昔芬、替拉普韦、替西罗莫司、替诺福韦/恩曲他滨、睾酮凝胶、沙利度胺(Talidex)、噻托溴铵、托瑞米芬、曲美替尼、曲妥珠单抗、Tretinoin、尤特克单抗、缬沙坦、凡德他尼、维罗非尼、伏立诺他、阿柏西普、Zostavax及其类似物、衍生物、药学上可接受的盐、载体、稀释剂或辅料或上述的组合。
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