CN113423430A - 含支链连接子的鹅膏毒素偶联物 - Google Patents

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CN113423430A
CN113423430A CN201980088973.6A CN201980088973A CN113423430A CN 113423430 A CN113423430 A CN 113423430A CN 201980088973 A CN201980088973 A CN 201980088973A CN 113423430 A CN113423430 A CN 113423430A
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Abstract

本发明涉及鹅膏毒素同系物和细胞结合分子以支链(侧链)连接子的偶联，产生的偶联物具有更好地靶向杀死异常细胞。本发明还涉及鹅膏毒素同系物与细胞结合剂的偶联方法，及使用该偶联物靶向治疗癌症、感染和免疫性疾病的方法。

Description

含支链连接子的鹅膏毒素偶联物
技术领域
本发明涉及鹅膏毒素同系物和细胞结合分子以支链(侧链)连接子的偶联，产生的偶联物具有更好的药代动力学性质、从而能更精确地靶向杀死异常细胞。本发明还涉及鹅膏毒素同系物与细胞结合剂的偶联方法，以及使用该偶联物靶向治疗癌症、感染和免疫性疾病的方法。
技术背景
抗体偶联药物(ADC)是小分子化疗药物与单克隆抗体通过稳定的连接子偶联的协同组合，在过去的20年中，已成为一种极具前景的新型生物药物，其临床管线正在大规模且快速地增长。ADC三种组分的组合产生强大的抗肿瘤剂，其能够将通常无法耐受的细胞毒素直接输送到癌细胞，然后内化并释放破坏细胞的药物(L.Ducry and B Stump，Bioconjugate Chem.，2010，21，5–13；G.S.Hamilton/Biologicals 2015，43，318-32)。
与标准化疗药物相比，早期ADC疗法的治疗窗口较小。但是，连接子技术的发展以及使用无法直接给药的高活性细胞毒性剂大大提高了ADC的有效性(Bander，N.H.等人，Adv.Hematol.Oncol.，2012，10，1-16；Behrens，C.R.和Liu，B.，mAbs，2014.6，46-53)。然而，脱靶毒性目前却是ADC药物开发中面临的主要挑战之一(Roberts，S.A.等，Regul.Toxicol.Pharmacol.2013，67，382-91)。例如在临床上，Ado-trastuzumabemtansine(T-DM1，
Figure BDA0003161812140000011
)使用了稳定的(不可断裂的)MCC连接子，它对HER2阳性的患有转移性乳腺癌(mBC)，或已经接受了mBC治疗，或在辅助治疗的六个月内肿瘤复发的患者有很大益处(Peddi，P.和Hurvitz，S.，Ther.Adv.Med.Oncol.2014，6(5)，202–209；Piwko C.等，Clin Drug Investig.2015，35(8)，487-93；Lambert，J.和Chari，R.，J.Med.Chem.2014，57，6949-64)。但是，将T-DM1作为HER2阳性的无法切除的局部晚期或转移性乳腺癌患者的一线治疗药物，或者作为HER2阳性晚期胃癌的二线治疗药物，临床试验已经失败，与产生的毒副作用相比，它对这些患者的益处不大(Ellis，PA，等，J.Clin.Oncol.2015，33(2015ASCO会议摘要507)；Shen，K.等，Sci Rep.2016，6，23262；de Goeij，B.E.和Lambert，J.M.CurrOpin Immunol 2016，40，14-23；Barrios，C.H.等，J Clin Oncol 2016，34，(2016ASCO会议摘要593))。
为了解决脱靶毒性问题，在ADC的设计上，从化学方面正在将连接子-有效载荷和偶联化学的范围扩大，包括扩展有效载荷的种类，以提高连接子-有效载荷对靶标/靶向疾病的活性(Lambert，J.M.Ther Deliv 2016，7，279-82；Zhao，R.Y.等，2011，J.Med.Chem.54，3606-23)。也有许多药物开发者和学术机构都在高度专注于开发适用于ADC定点偶联的新颖的，可靠的特异性偶联连接子，这些偶联物似乎具有更长的循环半衰期，更好的功效，潜在的更小的脱靶毒性以及更好的ADC的体内药代动力学(PK)特性以及生产时良好的批间一致性(Hamblett，K.J.等，Clin.Cancer Res.2004，10，7063-70；Adem，Y.T.等，BioconjugateChem.2014，25，656-664；Boylan，N.J.Bioconjugate Chem.2013，24，1008–1016；Strop，P.，et al 2013Chem.Biol.20，161-67；Wakankar，A.mAbs，2011，3，161–172)。迄今为止，报道的具体的偶联方法包括引入工程改造的半胱氨酸(Junutula，J.R.等，Nat.Biotechnol.2008，26，925–32；Junutula，J.R.等，2010Clin.Cancer Res.16，4769；美国专利8，309，300；7，855，275；7，521，541；7，723，485，WO2008/141044)，硒代半胱氨酸(Hofer，T.，等，Biochemistry 2009，48，12047–57；Li，X.等，Methods 2014，65，133–8；美国专利8916159USNational Cancer Institute)，含芳香氟标签的半胱氨酸(Zhang，C.等Nat.Chem.2015，8，1–9)，硫代岩藻糖(Okeley，N.M.等，2013Bioconjugate Chem.24，1650)，非天然氨基酸(Axup，J.Y.等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA.2012，109，16101-6；Zimmerman，E.S.等，2014，Bioconjug.Chem.25，351–361；Wu，P.等，2009Proc.Natl.Acad.Sci.106，3000-5；Rabuka，D.等，Nat.Protoc.2012，7，1052-67；美国专利8778631和专利申请20100184135，WO2010/081110Sutro Biopharma；WO2006/069246，2007/059312，美国专利7，332，571，7，696，312，和7，638，299Ambrx；WO2007/130453，美国专利7，632，492和7，829，659Allozyne)，通过下列官能团再桥联被还原的分子内二硫键：二溴马来酰亚胺(Jones，M.W.等，J.Am.Chem.Soc.2012，134，1847–52)，双磺酰基试剂(Badescu，G.等，Bioconjug.Chem.2014，25，1124–36；WO2013/190272，WO2014/064424PolyTherics Ltd)，二溴吡啶并哒嗪二酮(Maruani，A.等，Nat.Commun.2015，6，6645)，通过半乳糖基和唾液酸转移酶(Zhou，Q.等，Bioconjug.Chem.2014，25，510–520；美国专利申请20140294867Sanofi-Genzyme)，甲酰基甘氨酸生成酶(FGE)(Drake，P.M.et al.Bioconj.Chem.2014，25，1331–41；Carrico，I.S.等美国专利7，985，783；8，097，701；8，349，910，专利申请20140141025，20100210543Redwood Bioscience)，磷酸泛肽基转移酶(PPTases)(Grünewald，J.etal.Bioconjug.Chem.2015，26，2554–62)，分选酶A(Beerli，R.R.，et al.PLoS One 2015，10，e0131177)，用Streptoverticillium mobaraense转谷氨酰胺酶(mTG)引入谷氨酰胺标签(Strop，P.，Bioconj.Chem.，2014，25，855–62；Strop，P.，et al.，Chem.Biol.2013，20，161–7；美国专利8，871，908Rinat-Pfizer)或微生物转谷氨酰胺酶(MTGase)引入谷氨酰胺标签(Dennler，P.等，2014，Bioconjug.Chem.25，569–78；Siegmund，V.等，Angew.Chemie-Int.Ed.2015，54，13420–4；美国专利申请20130189287Innate Pharma；美国专利7，893，019Bio-Ker S.r.l.(IT))，通过一种在蛋白质主链外部形成异肽键-肽键的酶/细菌(Kang，H.J.等，Science 2007，318，1625–8；Zakeri，B.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 2012，109，E690–7；Zakeri，B.&Howarth，M.J.Am.Chem.Soc.2010，132，4526–7)。
我们已经公开了几种偶联方法，能够重新桥接天然抗体链间二硫化物被还原产生的一对硫醇，例如使用溴马来酰亚胺和二溴马来酰亚胺连接子(WO2014/009774)，2，3-二取代琥珀酸/2-单取代/2，3-二取代富马酸或马来酸连接子(WO2015/155753，WO20160596228)，乙炔二羧基连接子(WO2015/151080，WO20160596228)或肼连接子(WO2015/151081)。与抗体上的半胱氨酸或赖氨酸残基偶联的传统非选择性方法相比，用这些连接子和偶联方法制备的ADC的治疗窗口更大。在此我们公开一种含有长支链连接子的鹅膏毒素偶联物。长支链连接子可以防止抗体药物偶联物被水解酶如蛋白酶或酯酶等水解，使偶联物在循环系统中更加稳定，产生更少毒副作用。
鹅膏菌毒素，主要包括鹅膏毒素、鬼笔毒素和毒伞素(Wieland，T.，Faulstich，H.，CRC Crit.Rev.Biochem.1978，5(3):185-260；Vetter，J.，Toxicon 1998，36(1):13–24；Weiland，T.，和Faulstich，H.1983，来自鹅膏菌的肽毒素，585-635；《天然毒素手册》，卷I《植物和真菌毒素》，R.F.Keeler和A.T.Tu编辑，Marcel Dekker，Inc.New York，NY；Wieland，T.，Int J.Pept.Protein Res.，1983，22，257-76)是抗体偶联物的有效细胞毒剂(Zhao，R.等，WO2017046658)。本发明的鹅膏毒素偶联物含有长支链连接子，可延长偶联物在靶向递送过程中的半衰期，最大程度地减小对非靶细胞、组织和器官的暴露，药物具有更低的脱靶毒性，更大的治疗窗口。
发明概述
本发明描述了通过支链连接子连接的鹅膏毒素同系物与抗体的偶联物，还描述了使用该连接子将鹅膏毒素同系物与抗体偶联的方法。
此项发明的一个方面，含有支链连接子的偶联物以结构式(I)表示：
Figure BDA0003161812140000041
其中
“_”代表单键；n为1到30；
T是细胞结合剂或分子，选自抗体、单链抗体、与靶细胞结合的抗体片段、单克隆抗体、单链单克隆抗体、结合靶细胞的单克隆抗体片段、嵌合抗体、结合靶细胞的嵌合抗体片段、结构域抗体、结合靶细胞的结构域抗体片段、adnectin类抗体、DARPin蛋白、淋巴因子、激素、维生素、生长因子、集落刺激因子、营养转运分子(转铁蛋白)和连接在白蛋白、聚合物、树状大分子、脂质体、纳米粒子、囊泡或(病毒)衣壳上的细胞结合肽、蛋白质或小分子；
L1和L2是由C、N、O、S、Si和P等原子构成的链状结构，优选具有0-500个原子的，共价连接W和V1，V1和V2。构成L1和L2的原子可以以任何化学方式相组合，例如形成亚烷基、亚烯基和亚炔基、醚、聚氧化烯、酯、胺、亚胺、多胺、肼、腙、酰胺、脲、氨基脲、二氨基脲、烷氧基胺、氨基甲酸酯、氨基酸、肽、酰氧基胺、异羟肟酸或上述的组合。优选的L1和L2，相同或不同，独立地选自于O、NH、N、S、P、NNH、NHNH、N(R3)、N(R3)N(R3')、CH、CO、C(O)NH、C(O)O、NHC(O)NH、NHC(O)O；如下列结构式的聚乙烯氧基：(OCH2CH2)pOR3、或(OCH2CH(CH3))pOR3、或NH(CH2CH2O)pR3、或NH(CH2CH(CH3)O)pR3、或N[(CH2CH2O)pR3]-[(CH2CH2O)p'R3']或(OCH2CH2)pCOOR3、或CH2CH2(OCH2CH2)pCOOR3，其中p和p'是独立选自0到约1000的整数，或它们的组合；C1-C8烷基；C2-C8杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8芳基、芳烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基；或(Aa)r，r＝1-12(1至12个氨基酸单位)，包括天然或非天然氨基酸，相同或不同序列的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽单元；
W是一个延展体单元，通常是自毁灭的间隔体、一个多肽单元、腙、二硫化物、硫醚、酯或酰胺键；w是1或2或3；
V1和V2是独立的间隔体单元，选自O、NH、S、C1-C8烷基；C2-C8杂烷基、烯基或炔基；C3-C8芳基、杂环、碳环、环烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂芳烷基、杂烷基环烷基、或烷羰基；或(Aa)r、r＝1-12(1-12个氨基酸单元)，包括天然或非天然氨基酸，相同或不同序列的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽单元；或(CH2CH2O)p，p为0-1000；v1和v2独立为0、1或2，但v1和v2不同时为0，当v1或v2为0时，意味着侧链Q1或Q2片段缺省。
Q1和Q2独立地由式(I-q1)表示：
Figure BDA0003161812140000061
其中
Figure BDA0003161812140000062
是连接至L1或L2的位置，G1和G2独立地为OC(O)、NHC(O)、C(O)、CH2、NH、OC(O)NH、NHC(O)NH、O、S、B、P(O)(OH)、NHP(O)(OH)、NHP(O)(OH)NH、CH2P(O)(OH)NH、OP(O)(OH)O、CH2P(O)(OH)O、NHS(O)2、NHS(O)2NH、CH2S(O)2NH、OS(O)2O、CH2S(O)2O、Ar、ArCH2、ArO、ArNH、ArS、ArNR1、(Aa)r、(r＝1-12)；X1和X2独立地为O、CH2、S、NH、N(R12)、+NH(R12)、+N(R12)(R13)、C(O)、OC(O)、OC(O)O、OC(O)NH、NHC(O)NH；Y2为O、NH、NR1、CH2、S；G3为OH、SH、OR1、SR1、OC(O)R1、NHC(O)R12、C(O)R12、CH3、NH2、NR12、+NH(R12)、+N(R12)(R13)、C(O)OH、C(O)NH2、NHC(O)NH2、BH2、BR12R13、P(O)(OH)2、NHP(O)(OH)2、NHP(O)(NH2)2、S(O)2(OH)、(CH2)q1C(O)OH、(CH2)q1P(O)(OH)2、C(O)(CH2)q1C(O)OH、OC(O)(CH2)q1C(O)OH、NHC(O)(CH2)q1C(O)OH、CO(CH2)q1P(O)(OH)2、NHC(O)O(CH2)q1C(O)OH、OC(O)NH(CH2)q1C(O)OH、NHCO(CH2)q1P(O)(OH)2、NHC(O)(NH)(CH2)q1C(O)OH、CONH(CH2)q1P(O)(OH)2、NHS(O)2(CH2)q1C(O)OH、CO(CH2)q1S(O)2(OH)、NHS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH、OS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH、NHCO(CH2)q1S(O)2(OH)、NHP(O)(OH)(NH)(CH2)q1C(O)OH、CONH(CH2)q1S(O)(OH)、OP(O)(OH)2、(CH2)q1P(O)(NH)2、NHS(O)2(OH)、NHS(O)2NH2、CH2S(O)2NH2、OS(O)2OH、OS(O)2OR1、CH2S(O)2OR1、Ar、ArR12、ArOH、ArNH2、ArSH、ArNHR12或(Aa)q1、p1、p2和p3独立地是0-100，但是不同时为0，q1和q2独立地是0-24；
优选的Q1和Q2独立地是C2-C90聚羧酸或C-2-C90聚烷基胺、C6-C90寡糖或多糖、C6-C90含季铵阳离子和羧酸阴离子的两性离子或含季铵阳离子和磺酸阴离子的两性离子(PSB)、可生物降解的聚合物、如聚乳酸/乙醇酸(PLGA)、聚(丙烯酸酯)、脱乙酰壳多糖、N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺的共聚物、聚[2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酸胆碱](PMPC)、聚-L-谷氨酸、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚(乙二醇)(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、聚(乙二醇)改性肽、聚(乙二醇)改性脂质体、聚(乙二醇)改性烷基羧酸、聚(乙二醇)改性烷基胺、透明质酸(HA)(糖胺聚糖)、肝素或硫酸乙酰肝素(HSGAG)、硫酸软骨素或硫酸皮素(CSGAG)、聚(乙二醇)改性的烷基硫酸盐、聚(乙二醇)改性的烷基磷酸盐或聚(乙二醇)改性的烷基季铵盐；
D是具有以下结构式(II)的鹅膏毒素同系物：
Figure BDA0003161812140000071
或元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中-----独立地是与W连接的位点；
芳香(吲哚)环上的单键是指它连接芳香环上的任意一个碳；
Figure BDA0003161812140000072
表示可选的单键或可缺省的键；
R1和R2独立地选自H、OH、CH2OH、CH(OH)CH2OH、CH(CH3)CH2OH、CH(OH)CH3、C1-C8烷基、–OR12(酯)、C2-C8烯基、炔基、杂烷基、–OCOR12(酯)、–OC(＝O)OR12-(碳酸脂)、–OC(＝O)NHR12(氨基甲酸酯)；C3-C8芳基、杂环、碳环、环烷基、杂环烷基、杂芳烷基、烷基羰基；
R3和R4独立地选自H、OH、–OR12(酯)、–OCOR12(酯)、–OCOCH3(乙酸酯)、–OCOOR12(碳酸酯)、–OC(＝O)NHR12(氨基甲酸酯)、-OP(O)(OR12)(OR12’)(磷酸酯)、OP(O)(NHR12)(NHR12’)(磷酰胺)、O-SO3 -、或O-糖苷；
R5选自H、OH、NH2、NHOH、NHNH2、–OR12、–NHR12、NHNHR12、–NR12R12’、N(H)(R12)R13CO(Aa)r、(氨基酸或肽，其中Aa是氨基酸或多肽、r是0-100)；
R6选自H、OH、CH2OH、CH(OH)CH2OH、CH(CH2OH)2、CH(CH3)OH、CH2CH2OH、PrOH、BuOH、C1～C8 alkyl、–OR12(酯)、C2～C8烯基、炔基、杂烷基、–OCOR12(酯)；C3～C8芳基、杂环或碳环；
R7、R8和R9独立地选自H、OH、CH3、CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2OH、CH(OH)CH2OH、CH2CH(OH)CH2OH、CH(CH2OH)2、CH2C(OH)(CH2OH)2、CH2C(OH)(CH3)(CH2OH)、CH2C(OH)(CH(CH3)2)(CH2OH)、CH2CH2OH、PrOH、BuOH、CH2COOH、CH2CH2COOH、CH(OH)COOH、CH2CONH2、CH2CH2CONH2、CH2CH2CH2CH2NH2、CH2CH2CH2NHC(＝NH)NH2、C1～C8 alkyl、CH2Ar、CH2SH、CH2SR12、CH2SSR12、CH2SSAr、CH2CH2SCH3、–OR12(酯)、C2～C8烯基、炔基、杂烷基、–OCOR12(酯)；C3～C8芳基、杂环或碳环；
R10和R11独立地选自H、NH2、OH、SH、NO2、卤素、-NHOH、–N3(叠氮基)；-CN(氰基)；C1～C8烷基、C2～C8烯基、炔基、杂烷基；C3～C8芳基、杂环或碳环；–OR12(酯)、–OCOR12(酯)、–OCOCH3(乙酸酯)、–OC(O)OR12(碳酸酯)、-OC(O)CH(R12)NHAa(Aa是氨基酸基团)、-NR12R12’(胺)、-NR12COR12’(酰胺)、-R12NHCOR12’(烷基酰胺)、-R12NHR12’(胺)、-NHR12NHR12’NHR12”(胺)；–R12NCONR12’(尿素)；–R12NCOOR12’(氨基甲酸酯)；–OCONR12R12’(氨基甲酸酯)；–NR12(C＝NH)NR12’R12”(胍)；–R12NHCO(Aa)p、–R12NH R12’CO(Aa)p、–NR12CO(Aa)p、(氨基酸或肽，其中Aa是氨基酸或多肽，p为0-6)；–N(R12)CONR12’R12”(尿素)；–OCSNHR12(硫代氨基甲酸酯)；-R12SH(硫基)；–R12SR12’(硫化物)；–R12SSR12’(二硫化物)；–S(O)R12(亚砜)；–S(O2)R12(砜)；–SO3、HSO3、HSO2、或HSO3 -、SO3 2-或-HSO2 -的盐(亚硫酸盐)；–OSO3 -；-N(R12)SOOR12’(磺酰胺)；H2S2O5或S2O5 2-的盐(焦亚硫酸氢盐)；PO3SH3、PO2S2H2、POS3H2、PS4H2或PO3S3-、PO2S2 3-、POS3 3-、PS4 3-的盐(单-、二-、三-、和四-硫代磷酸盐)；(R12O)2POSR12’(硫代磷酸酯)；HS2O3或S2O3 2-盐(硫代硫酸盐)；HS2O4或S2O4 2-的盐(连二亚硫酸盐)；(P(＝S)(OR12)(S)(OH)或与阳离子形成的盐(二硫代磷酸盐)；-N(R12)OR12’(羟胺衍生物)；R12C(＝O)NOH或与阳离子形成的盐(异羟肟酸盐)；HOCH2SO2 -或其盐(甲醛次硫酸盐)；–N(R12)COR12’(酰胺)；R12R12’R12”NPO3H(三烷基氨基磷酸酯或氨基磷酸)；或ArAr’Ar”NPO3H(三芳基磷酸)；OP(O)(OM1)(OM2)、OCH2OP(O)(OM1)(OM2)、OSO3M1；O-糖苷(葡萄糖苷、半乳糖苷、甘露糖苷、葡萄糖醛酸苷、阿洛糖苷、果糖苷等)、NH-糖苷、S-糖苷或CH2-糖苷；M1和M2独立地为H、Na、K、Ca、Mg、NH4、NR1’R2’R3’；R1’、R2’和R3’独立地为H、C1～C8烷基；Ar、Ar’、和Ar”为C3-C8芳基或杂芳基；
R12、R12’、和R12”独立地选自H、C1～C8烷基；C2～C8烯基、炔基、杂烷基；C3～C8芳基、杂芳基、杂环或碳环；或缺省；
X为S、O、NH、SO、SO2、或CH2；
m′是0或1；n是1-30。
本发明的另一方面，含有支链连接子的偶联物的结构式表示如(III)：
Figure BDA0003161812140000101
其中，D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2、n和T的定义同结构式(I)；
本发明的另一个方面，支链连接子化合物的结构如(IV)所示、它可以便利地与细胞结合分子T反应，形成式(I)中的偶联物：
Figure BDA0003161812140000102
其中，D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2及n的定义同结构式(I)；Lv1是下文所述的官能团。
本发明的另一个方面，支链连接子化合物的结构如(V)所示、它可以便利地与细胞结合分子T反应，形成式(III)中的偶联物：
Figure BDA0003161812140000103
其中，D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2及n的定义同结构式(I)。
Lv1和Lv2为相同或不同的反应官能团，这些官能团可以与细胞结合分子上的硫醇、胺、羧酸、硒醇、酚或羟基发生反应。Lv1和Lv2独立地选自羟基(OH)；氟(F)；氯(Cl)；溴(Br)；碘(I)；硝基酚基；N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)基；苯酚基；二硝基苯酚基；五氟苯酚基；四氟苯酚基；三氟苯酚基；二氟苯酚基；一氟苯酚基；五氯苯酚基；三氟甲磺酰基；咪唑基；二氯苯酚基；三氯苯酚基；四氯苯酚基；1-羟基苯并三唑基；甲苯磺酰基；甲磺酰基；2-乙基-5-苯基异恶唑-3’-磺酰基、酸酐或与其它酸酐作用形成的酸酐，例如乙酸酐、甲酸酐；或与多肽缩合试剂、Mitsunobu反应试剂作用生成的中间体。缩合剂的例子如下：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-环己基-N'-(2-吗啉代-乙基)碳二亚胺甲基对甲苯磺酸盐(CMC或CME-CDI)、1，1'-羰基二咪唑(CDI)、氧-(苯并三唑-1-)基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(1H-苯并三唑-1-基)-六氟磷酸铵(HBTU)、(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)-六氟磷酸盐(BOP)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基六氟磷酸盐(PyBOP)、氰基膦酸二乙酯(DEPC)、氯-N，N，N'，N'-四甲基甲脒六氟磷酸盐、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶3-氧六氟磷酸盐(HATU)、1-[(二甲氨基)(吗啉代)亚甲基]-1H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-1-鎓3-氧六氟磷酸盐(HDMA)、2-氯-1，3-二甲基-咪唑六氟磷酸盐(CIP)、六氟磷酸氯代吡咯烷酮鎓(PyCloP)、氟-N，N，N'，N'-双(四亚甲基)甲脒六氟磷酸盐(BTFFH)、N，N，N'，N'-四甲基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲六氟磷酸盐、氧-(2-氧代-1(2H)吡啶基)-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TPTU)、S-(1-氧代-2-吡啶基)N，N，N'，N'-四甲基硫脲四氟硼酸盐、氧-[(乙氧基羰基)-氰基甲基氨基]-N，N，N'，N'-六氟磷酸四甲基脲(HOTU)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基氨基氧基)二甲氨基-吗啉代-六氟磷酸盐(COMU)、氧-(苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-双(四亚甲基)六氟磷酸盐(HBPyU)、N-芐基-N'-环己基-碳二亚胺(有或没有聚合物结合)、二吡咯烷基(N-琥珀酰亚胺基氧基)碳鎓六氟磷酸盐(HSPyU)、氯二吡咯烷基六氟磷酸盐(PyClU)、2-氯-1，3-二甲基咪唑四氟硼酸盐(CIB)、(苯并三唑-1-基氧基)二呱啶碳六氟磷酸盐(HBPipU)、氧-(6-氯苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TCTU)、溴代(二甲基氨基)-六氟磷酸盐(BroP)、丙基膦酸酐(PPACA、
Figure BDA0003161812140000121
)、2-吗啉代乙基异氰化物(MEI)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(N-琥珀酰亚胺基)六氟磷酸盐(HSTU)、2-溴-1-乙基-吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP)、氧-[(乙氧基羰基)氰基-亚甲基氨基]-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TOTU)、4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉氯化物(MMTM、DMTMM)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(N-琥珀酰亚胺基)脲四氟硼酸(TSTU)、O-(3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TDBTU)、1，1'-(偶氮二羰基)-二呱啶(ADD)、二-(4-氯芐基)偶氮二羧酸酯(DCAD)、偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD)、偶氮二羧酸二异丙酯(DIAD)、偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)。另外，Lv1和Lv2可以是酸酐，或与其它C1-C8酸酐作用形成的酸酐。
本发明进一步涉及(I)和(III)中的细胞结合分子-药物偶联物的制备方法，以及(I)和(III)中的偶联物的应用。
附图说明
图1显示了鹅膏毒素类似物片段的合成总路线。
图2显示了鹅膏毒素类似物片段的合成。
图3显示了鹅膏毒素类似物的合成。
图4显示了鹅膏毒素类似物的合成。
图5显示了含支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成。
图6显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图7显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图8显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图9显示了含支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成
图10显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图11显示了含支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成。
图12显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图13显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图14显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图15显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图16显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图17显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图18显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图19显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图20显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图21显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图22显示了含支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成。
图23显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图24显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图25显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成及其与抗体的偶联。
图26显示了含有支链连接子的鹅膏毒素类似物的合成。
图27显示了在人胃癌N87细胞模型上，在6mg/kg剂量下静脉一次注射，偶联化合物78a、146、154、167、197、198、216、240、S-2与T-DM1的抗肿瘤作用的比较。
图28显示了通过观察小鼠体重(BW)12天的变化，对ADC偶联物154、146、216、S-2和T-DM1进行急性毒性研究。
发明内容
定义
“烷基”是指在烷烃上除去一个或两个氢原子而产生的脂肪烃基团或单价基团。它可以是直链或是支链的，在链中具有C1-C8(1-8个碳原子)。“支链”是指直链烷基上连接有一个或多个低碳数的烷基，如甲基、乙基或丙基。示例性的烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、3-戊基、辛基、壬基、癸基、环戊基、环己基、2，2-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、2，2-二甲基戊基、2，3-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2，3，4-三甲基戊基、3-甲基-己基、2，2-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、3，5-二甲基己基、2，4-二甲基戊基、2-甲基庚基、3-甲基庚基、正庚基、异庚基、正辛基和异辛基。C1-C8烷基可以是未被取代的或被一个或多个基团取代，包括但不限于-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2，-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-SR'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2和-CN；其中每个R'独立地选自于-C1-C8烷基和芳基。
“卤素”指氟、氯、溴或碘原子；优选氟和氯原子。
“杂烷基”指其中1至4个碳原子独立地被选自O、S和N的杂原子所取代的C2-C8烷基。
“碳环”指含有3到8个碳原子的饱和或不饱和单环，或含有7到13个碳原子的饱和或不饱和双环。单环碳环有3到6个环原子，典型的有5或6个环原子。双环碳环有7到12个环原子，构成[4，5]、[5，5]、[5，6]或[6，6]的双环系统，或有9个或10个环原子，构成[5、6]或[6，6]的双环系统。具有代表性的C3-C8的碳环包括但不限于：-环丙基、-环丁基、-环戊基、-环戊二烯基、-环己基、-环己烯基、-1，3-环己二烯基、-1，4-环己二烯基、-环庚基、-1，3-环庚二烯基、-1，3，5-环庚三烯基、-环辛基和-环辛二烯基。
C3-C8碳环可以是未被取代的或被一个或多个基团取代，包括但不限于-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2、-NHC(O)R'、-SR'、-S(O)R'、-S(O)2R'、-OH、-卤素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN；其中每个R'独立地选自-C1-C8烷基和芳基。
“烯基”指含有碳-碳双键的直链或支链脂肪烃基团，链内含有2-8个碳原子。示例性的烯基包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、异丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基。
“炔基”指含有碳-碳三键的直链或支链脂肪烃基团，链内含有2-8个碳原子。示例性的炔基包括乙炔基、丙炔基、正丁炔基、2-丁炔基、3-甲基丁炔基、5-戊炔基、正戊炔基、己炔基、庚炔基和辛炔基。
“亚烷基”是指含1-18个碳原子的饱和的支炼或直链或环状烃基，并带有两个通过从母体烷烃的相同或两个不同碳原子上除去两个氢原子而产生的一价自由基。典型的亚烷基包括但不限于：亚甲基(-CH2-)、1，2-乙基(-CH2CH2-)、1，3-丙基(-CH2CH2CH2-)、1，4-丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。
“亚烯基”指含2-18个碳原子的不饱和的支炼或直链或环状烃基，并带有两个通过从母体烯烃的相同或两个不同碳原子上除去两个氢原子而产生的一价自由基。典型的亚烯基包括但不限于：1，2-亚乙基(-CH＝CH-)。
“亚炔基”指含2-18个碳原子的不饱和的支炼或直链或环状烃基，并带有两个通过从母体炔的相同或两个不同碳原子上除去两个氢原子而产生的一价自由基。典型的亚炔基包括但不限于：乙炔、炔丙基和4-戊炔基。
“芳基”或“芳香基”指由一个或多个环组成的芳香或杂芳香基团，包含三至十四个碳原子，优选六至十个碳原子。术语“杂芳香基团”是指芳香基团上的一个或几个碳，最优是一个、两个、三个或四个碳原子，被氧(O)、氮(N)、硅(Si)、硒(Se)、磷(P)或(S)所取代，优选被氧、硫和氮所取代而产生的基团。术语“芳基”或“芳香基”也指其中一个或几个氢原子独立地被-R’、卤素、-OR’、-SR’、-NR’R”、-N＝NR’、-N＝R’、-NR’R”、-NO2、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2OR’、-OS(O)2OR’、-PR’R”、-P(O)R’R”、-P(OR’)(OR”)、-P(O)(OR’)(OR”)或-OP(O)(OR’)(OR”)所取代而产生的芳香基团。其中R’和R”独立地为氢、烷基、烯基、炔基、杂烷基、芳基、芳烷基、羰基或其药用盐。
“杂环”指其中一到四个环碳原子独立地被O、N、S、Se、B、Si或P等杂原子所取代而产生的的环结构。优选的杂原子是O、N和S。在《化学与物理手册》第78版的225-226页(TheHandbook of Chemistry and Physics，78th Edition，CRC Press，Inc.，1997-1998，p.225to 226)上也有杂环化合物的相关描述，在此引作参考。优选的非芳基杂环包括环氧基、氮丙啶基、硫杂丙基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、环氧乙烷基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢吡喃基、二恶烷基、二氧戊环基、呱啶基、呱嗪基、吗啉基、吡喃基、咪唑啉基、吡咯啉基、吡唑啉基、噻唑烷基、四氢噻喃基、二噻烷基、硫代吗啉基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢吡啶基、二氢吡啶基、四氢嘧啶基、二氢噻喃基、氮杂环庚烷基，以及上述基团与苯基缩合得到的稠环体系。
术语“杂芳基”或“芳基杂环”是指含3到14，优选5至10个原子的芳香性杂环、包含单环、双环或多环。示例包括吡咯基、吡啶基、吡唑基、噻吩基、嘧啶基、吡嗪基、四唑基、吲哚基、喹啉基、嘌呤基、咪唑基、噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、1，2，4-噻二唑基、异噻唑基、三唑基、四唑基、异喹啉基、苯并噻吩基、异苯并呋喃基、吡唑基、咔唑基、苯并咪唑基、异恶唑基、吡啶基-N-氧化物，以及上述基团与苯基缩合得到的稠环体系。
“烷基”、“环烷基”、“烯基”、“炔基”、“芳基”、“杂芳基”、“杂环”等，也包含各自对应的“亚烷基”、“亚环烷基”、“亚烯基”、“亚炔基”、“亚芳基”、“亚杂芳基”、“亚杂环”等，为论述方便，本专利申请对它们未做完全区分。
“芳烷基”指一类非环烷基，其中一个与碳原子(通常为末端或sp3碳原子)键合的氢原子被芳基取代。典型的芳烷基包括芐基、2-苯基乙-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘基甲基、2-萘基乙-1-基、2-萘基乙-1-基、萘并芐基、2-萘基苯基-1-基等。
“杂芳烷基”指一类非环烷基，其中一个与碳原子(通常为末端或sp3碳原子)键合的氢原子被杂芳基取代。杂芳烷基的实例有2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基。
“羟基保护基”的实例包括甲氧基甲基醚、2-甲氧基乙氧基甲基醚、四氢吡喃基醚、芐基醚、对甲氧基芐基醚、三甲基甲硅醚、三乙基硅醚、三异丙基硅醚、叔丁基二甲基硅醚、三苯基甲基硅醚、乙酸酯、取代乙酸酯、特戊酸酯、苯甲酸酯、甲磺酸酯和对甲苯磺酸酯。
“离去基团”指可以被另一个官能团取代的官能团。这些离去基团是本领域公知的、实例包括卤化物(如氯化物、溴化物和碘化物)、甲磺酰基、对甲苯磺酰基和三氟甲磺酰基。优选的离去基团选自硝基苯酚基；N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)；苯酚基；二硝基苯酚基；五氟苯酚基；四氟苯酚基；二氟苯酚基；一氟苯酚基；五氯苯酚基；三氟甲磺酰基；咪唑基；氯酚基；四氯苯酚基；1-羟基苯并三唑基；甲苯磺酰基；甲磺酰基；2-乙基-5-苯基异恶唑-3'-磺酰基，酸酐或与其它酸酐作用形成的酸酐，例如乙酸酐、甲酸酐；或与多肽缩合试剂、Mitsunobu反应试剂作用生成的中间体。
以下缩写为本发明所采用，其定义为：Boc，叔丁氧基羰基；BroP，溴代十四烷基鏻六氟磷酸盐；CDI，1，1'-羰基二咪唑；DCC，二环己基碳二亚胺；DCE，二氯乙烷；DCM，二氯甲烷；DEAD，偶氮二甲酸二乙酯；DIAD，偶氮二甲酸二异丙基酯；DIBAL-H，二异丁基氢化铝；DIPEA或DEA，二异丙基乙胺；DEPC，二乙基氰基磷酸酯；DMA，N，N-二甲基乙酰胺；DMAP，4-(N，N-二甲基氨基)吡啶；DMF，N，N-二甲基甲酰胺；DMSO，二甲基亚砜；DTPA，二亚乙基三胺五乙酸；DTT，二硫苏糖醇；EDC，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；ESI-MS，电喷雾质谱；EtOAc，乙酸乙酯；Fmoc，N-(9-芴基甲氧基羰基)；HATU，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐；HOBt，1-羟基苯并三唑；HPLC，高效液相色谱；NHS，N-羟基琥珀酰亚胺；MeCN，乙腈；MeOH，甲醇；MMP，4-甲基吗啉；PAB，对氨基苯甲酸；PBS，磷酸盐缓冲液(pH 7.0-7.5)；Ph，苯基；Phe，L-苯丙氨酸；PyBrop，溴-三-吡咯烷-鏻六氟磷酸盐；PEG，聚乙二醇；SEC，尺寸排阻色谱；TCEP，三(2-羧乙基)膦；TFA，三氟乙酸；THF，四氢呋喃；Val，缬氨酸；TLC，薄层色谱；UV是紫外线。
“氨基酸”可以是天然或非天然的，优选α-氨基酸。天然氨基酸可以由遗传密码所编码，它们是丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、色氨酸和缬氨酸。非天然氨基酸是蛋白质氨基酸的衍生物，包括羟脯氨酸、羊毛硫氨酸、2-氨基异丁酸、脱氢丙氨酸、γ-氨基丁酸(神经递质)、鸟氨酸、瓜氨酸、β-丙氨酸(3-氨基丙酸)、γ-羧基谷氨酸、硒代半胱氨酸(存在于许多非真核以及大多数真核细胞中、但不是由DNA直接进行编码)、吡咯赖氨酸(仅在一些古细菌和一种细菌中发现)、N-甲酰基甲硫氨酸(通常是细菌、线粒体和叶绿体中蛋白质中最初的氨基酸)、5-羟色氨酸、L-二羟基苯丙氨酸、三碘甲腺原氨酸、L-3，4-二羟基苯丙氨酸(DOPA)和O-磷酸丝氨酸。术语“氨基酸”还包括氨基酸同系物和模拟物。同系物是具有与天然氨基酸相同结构通式H2N(R)CHCO2H的化合物，其中R在天然氨基酸里。同系物的实例包括高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸-亚砜和甲硫氨酸甲基锍。更优的是氨基酸模拟物，它是具有与α-氨基酸的化学结构不同、但是作用方式类似的化合物。天然氨基酸多为“L”立体化学构型，“非天然氨基酸”也用于代表“D”构型的氨基酸。在本专利申请中使用1至8个氨基酸时、其序列优选为蛋白水解酶可识别的序列。许多水解酶识别序列是本领域已知的，可以参见：Matayoshi等.Science 247：954(1990)；Dunn等.Meth.Enzymol.241：254(1994)；Seidah等.Meth.Enzymol.244：175(1994)；Thornberry，Meth.Enzymol.244：615(1994)；Weber等.Meth.Enzymol.244：595(1994)；Smith等.Meth.Enzymol.244：412(1994)；及Bouvier等.Meth.Enzymol.248：614(1995)；此处引作参考。特别是选自以下序列：Val-Cit、Ala-Val、Ala-Ala、Val-Val、Val-Ala-Val、Lys-Lys、Ala-Asn-Val、Val-Leu-Lys、Cit-Cit、Val-Lys、Ala-Ala-Asn、Asp-Lys、Asp-Glu、Glu-Lys、Lys、Cit、Ser及Glu。
“糖苷”是糖通过糖苷键在其异头碳上与另一基团键合得到的分子。糖苷可以通过O-(产生O-糖苷)、N-(产生糖基胺)、S-(产生硫代糖苷)或C-(产生C-糖苷)糖苷键连接，其实验式为Cm(H2O)n(其中m可以不同于n、m、n<36)，本发明中的糖苷包括葡萄糖(右旋糖)、果糖(左旋糖)、阿洛糖、阿卓糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔罗糖、半乳糖胺、氨基葡萄糖、唾液酸、N-乙酰氨基葡萄糖、磺酰基奎诺糖(6-脱氧-6-磺酰基-D-吡喃葡萄糖)、核糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖、山梨糖醇、甘露醇、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、麦芽糖糊精、棉子糖、葡萄糖醛酸(葡糖苷酸)和水苏糖。它可以是D或L的构型、5原子环状呋喃糖的形式、6原子环状吡喃糖的形式，或是非环形式、α-异构体(异头碳的-OH在Haworth投影碳原子平面之下)、或β-异构体(异头碳的-OH在Haworth投影碳原子平面之上)。本发明中亦称为单糖、二糖、多元醇或含3-6个糖单元的低聚糖。
本发明中的“抗体”指全长免疫球蛋白分子或全长免疫球蛋白分子的免疫活性部分，如含有抗原结合位点的分子，该结合位点免疫特异性地与靶标抗原或部分靶标抗原结合，靶标包括但不限于，癌细胞或产生与自身免疫疾病相关的自免疫抗体的细胞。本发明中的免疫球蛋白可以是免疫球蛋白的任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或子类。免疫球蛋白可以来自任何物种，但优选的免疫球蛋白来源于人、鼠或兔。本发明的抗体优选是单克隆抗体，包括但不限于多克隆、单克隆、双特异性、人、人源化或嵌合抗体，单链抗体，Fv、Fab片段、F(ab')片段、F(ab')2片段、由Fab表达库产生的片段，抗独特型(抗Id)抗体，CDR和任何能免疫特异性地结合癌细胞抗原、病毒抗原或微生物抗原的上述结构的表位结合片段。
“对映异构体”，也称为“光学异构体”，是两个立体异构体中的一个，它们是彼此的镜像，不可重迭(不等同)，就像人的左右手，除非沿着某一平面被翻转，它们是不可重迭的(仅通过改变方向不能让双手重迭)。化合物中的单个手性原子或类似的结构特征使得该化合物具有两种可能的结构，它们不可重迭，是彼此的镜像。在某一化合物中存在的多个手性特征增加了可能存在的构型的数目，其中可能会有一些互为镜像。对映体纯的化合物是指在检测方法的能力范围内，仅具有同一种手性的样品。在对称的环境中，两个对映体可以使平面偏振光(+/-)在相反的方向上等量旋转(偏振光可以被认为是不对称的介质)，除此之外，它们具有相同的化学性质和物理性质。由于这个原因，它们有时也被称为光学异构体。光学活性异构体及其等量的对映体的混合物被称为外消旋体，它对平面偏振光无净旋转，因为每个正旋转(+)都被负旋转(-)完全抵消。通常两个对映异构体与其他的对映异构体物质发生不同的化学反应。由于许多生物分子是对映体，因此有时两种对映体对生物有机体的影响存在显著差异。例如，在药物中，通常只有一种对映体可以发生想要的生理作用、而另一种对映体或是活性较低、或无活性，有时甚至产生不良反应。基于这样的发现，可以开发仅由一种对映体(“对映体纯”)组成的药物以增强药理学效力，有时还可以消除一些副作用。
同位素是特定化学元素的质子数相同，中子数不同的不同核素。同一元素的所有同位素具有相同数量的质子。一个原子序数指定一个特定的元素，但非同位素；特定元素原子可以有不同的中子数。核子(质子和中子)的数量是原子的质量数，特定元素的每个同位素具有不同的质量数。例如、碳-12、碳-13和碳-14是碳元素的三种同位素，质量数分别为12，13和14。碳的原子序数为6，意味着每个碳原子都有6个质子，因此这些同位素的中子数分别为6、7和8。氢原子有三种同位素：氕(1H)、氘(2H)和氚(3H)，氘的质量是氕的两倍，氚的质量是氕的三倍。通过动力学同位素效应，同位素替代实验可用于确定化学反应的机理。同位素替代实验还可用于研究外源化合物通过吸收和分布机制进入体内后，身体如何对它产生作用，体内物质的代谢变化(例如通过细胞色素P450或葡萄糖醛酸转移酶等代谢酶的作用)，以及药物代谢产物的排泄途径，是为药代动力学(PK)研究。同位素替代实验可用于研究药物的生化和生理作用，包括在动物(包括人类)、微生物或生物组合(例如感染)上所显现出来的作用，是为药效学(PD)研究。两者(PK和PD)一起决定药物的剂量、益处及副作用。同位素可以采用一种稳定的(非放射性的)或非稳定的元素。药物的同位素取代物还可能具有与原始药物不同的治疗功效。
“药学上”或“药学上可接受的”是指当分子实体和组合物酌情施用于动物或人时，不会产生不利、过敏或其他不良反应。
“药学上可接受的溶剂化物”或“溶剂化物”是指一种或多种溶剂分子与本发明公开的化合物的结合物。形成药学上可接受的溶剂合物，溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。
“药学上可接受的辅料”包括任何载体、稀释剂、佐剂或其它，例如防腐剂或抗氧化剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。这些介质和药剂用于药物活性物质在本领域内是熟知的。任何传统介质或药剂，除非与活性成分不兼容，也可以考虑将其用于治疗组合物中。补充活性成分也可以加入组合物中，成为合适的治疗组合。
如本文所用，“药用盐”是指所公开化合物的衍生物，通过制备母体化合物的酸盐或碱盐来获得。药学上可接受的盐包括由无毒无机酸或有机酸与母体化合物形成的常规无毒盐或季铵盐。例如，所述常规无毒盐包括衍生自无机酸(例如盐酸、氢溴酸盐、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等)的盐；以及由有机酸(例如乙酸、丙酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、苯磺酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、甲苯磺酸、草酸、富马酸、马来酸及乳酸等制备的盐。另外的加成盐包括铵盐，如三甲胺、葡甲胺、丙三醇等的盐、金属盐、如钠、钾、钙、锌或镁盐。
本发明的药用盐可由含有碱性或酸性部分的母体化合物，通过常规化学方法合成。通常而言，这些盐可以通过在水或有机溶剂中或两者的混合物中，向母体化合物里，加入等当量的适当碱或酸来制备。一般来说，乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是非水介质的首选。适用盐的列表见于1985年由麦克出版公司出版的《雷明顿药物科学》(Remington'sPharmaceutical Sciences)，其公开内容纳入本文作参考。
“施用”或“给药”是指以任何方式向受试者转移、递送、引入或运输药物或其他药剂。这些方式包括口服用药、局部接触、静脉内、腹膜内、肌肉内、病灶内、鼻内、皮下或鞘内给药。本发明还考虑使用装置或器械来施用药剂。这种装置可以使用主动或被动型传输，而且可以是缓释或快速释放递送装置。
就癌症而言，术语“治疗”包括以下任何一项或全部：阻止肿瘤细胞或癌细胞生长、复制，减轻整体肿瘤量，以及改善与该疾病相关的一个或多个症状。
就自身免疫性疾病而言，术语“治疗”包括以下任一项或全部：阻止与自身免疫性疾病相关的细胞的复制，包括但不限于能够产生自身免疫性抗体的细胞，减轻自身免疫性抗体量和改善自身免疫性疾病的一个或多个症状。
就传染病而言、术语“治疗”包括以下任何一项或全部：阻止引起传染病的病原体的生长、增殖或复制、以及改善传染病的一个或多个症状。
“哺乳动物”或“动物”的实例包括但不限于人、鼠、家鼠、豚鼠、猴、猪、山羊、牛、马、狗、猫、鸟和家禽。
本发明所公开的新型偶联物使用了支链连接子。实施例1至26展示了一些适当的连接子及其合成。
一种支链连接子连接的细胞结合剂-细胞毒素分子的偶联物
本发明的一个方面，含有支链连接子偶联物的结构由式(I)表示：
Figure BDA0003161812140000231
“_”代表单键；n为1到30；
T是细胞结合剂或分子，选自抗体、单链抗体、结合靶细胞的抗体片段、单克隆抗体、单链单克隆抗体、结合靶细胞的单克隆抗体片段、嵌合抗体、结合靶细胞的嵌合抗体片段、结构域抗体、结合靶细胞的结构域抗体片段、adnectin类抗体、DARPin蛋白、淋巴因子、激素、维生素、生长因子、集落刺激因子、营养转运分子(转铁蛋白)和/或连接在白蛋白、聚合物、树状大分子、脂质体、纳米粒子、囊泡或(病毒)衣壳上的细胞结合肽、蛋白质或小分子；
L1和L2是由C、N、O、S、Si和P等原子构成的链状结构，优选具有0-500个原子的，共价连接W和V1，V1和V2。构成L1和L2的原子可以以任何化学方式相组合，例如形成亚烷基、亚烯基和亚炔基、醚、聚氧化烯、酯、胺、亚胺、多胺、肼、腙、酰胺、脲、氨基脲、二氨基脲、烷氧基胺、氨基甲酸酯、氨基酸、肽、酰氧基胺、异羟肟酸或上述的组合。优选的L1和L2，相同或不同，独立地选自于O、NH、N、S、P、NNH、NHNH、N(R3)、N(R3)N(R3')、CH、CO、C(O)NH、C(O)O、NHC(O)NH、NHC(O)O；如下列结构式的聚乙烯氧基：(OCH2CH2)pOR3、或(OCH2CH(CH3))pOR3、或NH(CH2CH2O)pR3、或NH(CH2CH(CH3)O)pR3、或N[(CH2CH2O)pR3]-[(CH2CH2O)p'R3']或(OCH2CH2)pCOOR3、或CH2CH2(OCH2CH2)pCOOR3，其中p和p'是独立选自0到约1000的整数，或它们的组合；C1-C8烷基；C2-C8杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8芳基、芳烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基；或(Aa)r，r＝1-12(1至12个氨基酸单位)，(Aa)r为天然或非天然氨基酸，相同或不同序列的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽单元；
W是一个延展体单元，通常是自毁灭的间隔体、一个多肽单元、腙、二硫化物、硫醚、酯或酰胺键；w是1或2或3；
V1和V2是独立的间隔体单元，选自O，NH，S，C1-C8烷基；C2-C8杂烷基、烯基或炔基；C3-C8芳基、杂环、碳环、环烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂芳烷基、杂烷基环烷基，或烷羰基；或(Aa)r、r＝1-12(1-12个氨基酸单元)，(Aa)r为天然或非天然氨基酸，相同或不同序列的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽单元；或(CH2CH2O)p、p为0-1000；v1和v2独立为0、1或2，但v1和v2不同时为0，当v1或v2为0时，意味着侧链Q1或Q2片段缺省。
Q1和Q2独立地由式(I-q1)表示：
Figure BDA0003161812140000241
其中
Figure BDA0003161812140000242
是连接至L1或L2的位置，G1和G2独立地为OC(O)、NHC(O)、C(O)、CH2、NH、OC(O)NH、NHC(O)NH、O、S、B、P(O)(OH)、NHP(O)(OH)、NHP(O)(OH)NH、CH2P(O)(OH)NH、OP(O)(OH)O、CH2P(O)(OH)O、NHS(O)2、NHS(O)2NH、CH2S(O)2NH、OS(O)2O、CH2S(O)2O、Ar、ArCH2、ArO、ArNH、ArS、ArNR1、或(Aa)q1；G3是OH、SH、OR12、SR12、OC(O)R12、NHC(O)R12、C(O)R12、CH3、NH2、NR12、+NH(R12)、+N(R12)(R12’)、C(O)OH、C(O)NH2、NHC(O)NH2、BH2、BR12R12’、P(O)(OH)2、NHP(O)(OH)2、NHP(O)(NH2)2、S(O)2(OH)、(CH2)q1C(O)OH、(CH2)q1P(O)(OH)2、C(O)(CH2)q1C(O)OH、OC(O)(CH2)q1C(O)OH、NHC(O)(CH2)q1C(O)OH、CO(CH2)q1P(O)(OH)2、NHC(O)O(CH2)q1C(O)OH、OC(O)NH(CH2)q1C(O)OH、NHCO(CH2)q1P(O)(OH)2、NHC(O)(NH)(CH2)q1C(O)OH、CONH(CH2)q1P(O)(OH)2、NHS(O)2(CH2)q1C(O)OH、CO(CH2)q1S(O)2(OH)、NHS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH、OS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH、NHCO(CH2)q1S(O)2(OH)、NHP(O)(OH)(NH)(CH2)q1C(O)OH、CONH(CH2)q1S(O)(OH)、OP(O)(OH)2、(CH2)q1P(O)(NH)2、NHS(O)2(OH)、NHS(O)2NH2、CH2S(O)2NH2、OS(O)2OH、OS(O)2OR1、CH2S(O)2OR12、Ar、ArR12、ArOH、ArNH2、ArSH、ArNHR12、或(Aa)q1；(Aa)q1是含有相同或不同序列的天然或非天然氨基酸的肽；X1和X2独立地是O、CH2、S、S(O)、NHNH、NH、N(R12)、+NH(R12)、+N(R12)(R12’)、C(O)、OC(O)、OC(O)O、OC(O)NH、NHC(O)NH；Y2是O、NH、NR12、CH2、S、NHNH、Ar；p1、p2和p3独立地是0-100但不同时为0；q1和q2独立地为0-24；R12、R12’、R13和R13’独立地为H、C1～C8烷基；C2～C8杂烷基、或杂环；C3～C8芳基、芳烷基、环烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂烷基环烷基、碳环或烷基羰基；
优选的Q1和Q2独立地是C2-C100聚羧酸或C-2-C90聚烷基胺、C6-C90寡糖或多糖、C6-C100含季铵阳离子和磺酸根阴离子的两性离子甜菜碱或两性离子聚(磺酰基甜菜碱)(PSB)、C6-C100含可生物降解的聚合物、如聚乳酸/乙醇酸(PLGA)、聚(丙烯酸酯)、脱乙酰壳多糖、N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺的共聚物、聚[2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酸胆碱](PMPC)、聚-L-谷氨酸、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚(乙二醇)(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、聚(乙二醇)改性肽、聚(乙二醇)改性脂质体、聚(乙二醇)改性烷基羧酸、聚(乙二醇)改性烷基胺、透明质酸(HA)(糖胺聚糖)、肝素或硫酸乙酰肝素(HSGAG)、硫酸软骨素或硫酸皮素(CSGAG)、聚(乙二醇)改性的烷基硫酸盐、聚(乙二醇)改性的烷基磷酸盐或聚(乙二醇)改性的烷基季铵盐；
Q1和Q2的结构示例如下：
Figure BDA0003161812140000261
Figure BDA0003161812140000271
Figure BDA0003161812140000281
其中，R25和R25’独立地选自H、HC(O)、CH3C(O)、CH3C(NH)、C1-C18烷基、C1-C18烷基-Y1-SO3H、C1-C18烷基-Y1-PO3H2、C1-C18烷基-Y1-CO2H、C1-C18烷基-Y1-N+R1’R2’R3’R4’、C1-C18烷基-Y1-CONH2、C2-C18烷基、C2-C18酯、C2-C18醚、C2-C18胺、C2-C18烷基羧酰胺、C3-C18芳基、C3-C18环烷基、C3-C18杂环、1-24个氨基酸、C2-C18脂质、C2-C18脂肪酸或C2-C18脂肪铵脂质；X1和X2独立地选自NH、N(R1’)、O、CH2、S、C(O)、S(O)、S(O2)、P(O)(OH)、NHNH、CH＝CH、Ar或(Aa)q1，q1＝0-24(0-24个氨基酸、q1＝0表示缺省)；X1、X2、X3、X4、Y1、Y2和Y3独立地选自NH、N(R1’)、O、C(O)、CH2、S、S(O)、NHNH、C(O)、OC(O)、OC(O)O、OC(O)NH、NHC(O)NH、Ar或(Aa)q1，X1、X2、X3、X4、Y1、Y2和Y3独立地可以缺省；p1、p2和p3独立地为0-100，但不能同时为0；q1、q2和q3独立地为0-24；R1’、R2’、R3’和R4’独立地选自H和C1-C6烷基；Aa是天然或非天然氨基酸；Ar或(Aa)q1是同或不同的肽序列；q1＝0表示(Aa)q1缺省；
D是具有下式(II)结构的鹅膏毒素同系物：
Figure BDA0003161812140000282
或元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中-----是与W连接的位点；
芳香(吲哚)环上的单键是指它连接芳香环的任意一个碳；
Figure BDA0003161812140000291
表示可选地单键或可缺省；
R1和R2独立地选自H、OH、CH2OH、CH(OH)CH2OH、CH(CH3)CH2OH、CH(OH)CH3、C1-C8烷基、–OR12(酯)、C2-C8烯基、炔基、杂烷基、–OCOR12(酯)、–OC(＝O)OR12-(碳酸脂)、–OC(＝O)NHR12(氨基甲酸酯)；C3-C8芳基、杂环、碳环、环烷基、杂环烷基、杂芳烷基、烷基羰基。
R3和R4独立地选自H、OH、–OR12(酯)、–OCOR12(酯)、–OCOCH3(醋酸酯)、–OCOOR12(碳酸酯)、–OC(＝O)NHR12(氨基甲酸酯)、-OP(O)(OR12)(OR12’)(磷酸酯)、OP(O)(NHR12)(NHR12’)(磷酸胺)、O-SO3 -、或O-糖苷；
R5选自H、OH、NH2、NHOH、NHNH2、–OR12、–NHR12、NHNHR12、–NR12R12’、N(H)(R12)R13CO(Aa)r、(氨基酸或肽，其中Aa是氨基酸或多肽、r＝0-6)；
R6选自H、OH、CH2OH、CH(OH)CH2OH、CH(CH2OH)2、CH(CH3)OH、CH2CH2OH、PrOH、BuOH、C1～C8 alkyl、–OR12(酯)、C2～C8烯基、炔基、杂烷基、–OCOR12(酯)；C3～C8芳基、杂环或碳环；
R7、R8和R9独立地选自H、OH、CH3、CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2OH、CH(OH)CH2OH、CH2CH(OH)CH2OH、CH(CH2OH)2、CH2C(OH)(CH2OH)2、CH2C(OH)(CH3)(CH2OH)、CH2C(OH)(CH(CH3)2)(CH2OH)、CH2CH2OH、PrOH、BuOH、CH2COOH、CH2CH2COOH、CH(OH)COOH、CH2CONH2、CH2CH2CONH2、CH2CH2CH2CH2NH2、CH2CH2CH2NHC(＝NH)NH2、C1～C8 alkyl、CH2Ar、CH2SH、CH2SR12、CH2SSR12、CH2SSAr、CH2CH2SCH3、–OR12(酯)、C2～C8烯基、炔基、杂烷基、–OCOR12(酯)；C3～C8芳基、杂环或碳环；
R10和R11独立地选自H、NH2、OH、SH、NO2、卤素、-NHOH、–N3(叠氮基)；-CN(氰基)；C1～C8烷基、C2～C8烯基、炔基、杂烷基；C3～C8芳基、杂环或碳环；–OR12(酯)、–OCOR12(酯)、–OCOCH3(乙酸酯)、–OC(O)OR12(碳酸酯)、-OC(O)CH(R12)NHAa(Aa是氨基酸基团)、-NR12R12’(胺)、-NR12COR12’(酰胺)、-R12NHCOR12’(烷基酰胺)、-R12NHR12’(胺)、NHR12NHR12’NHR12”(胺)；–R12NCONR12’(尿素)；–R12NCOOR12’(氨基甲酸酯)；–OCONR12R12’(氨基甲酸酯)；–NR12(C＝NH)NR12’R12”(胍)；–NR12CO(Aa)p、(氨基酸或肽、其中Aa是氨基酸或多肽,p为0-6)；–N(R12)CONR12’R12”(尿素)；–OCSNHR12(硫代氨基甲酸酯)；-R12SH(硫基)；–R12SR12’(硫化物)；–R12SSR12’(二硫化物)；–S(O)R12(亚砜)；–S(O2)R12(砜)；–SO3、HSO3、HSO2、或HSO3 -、SO3 2-或-HSO2 -的盐(亚硫酸盐)；–OSO3 -；-N(R12)SOOR12’(磺酰胺)；H2S2O5或S2O5 2-的盐(焦亚硫酸氢盐)；PO3SH3、PO2S2H2、POS3H2、PS4H2或PO3S3-、PO2S2 3-、POS3 3-、PS4 3-的盐(单-、二-、三-、和四-硫代磷酸盐)；(R12O)2POSR12’(硫代磷酸酯)；HS2O3或S2O3 2-(硫代硫酸盐)；HS2O4或S2O4 2-的盐(连二亚硫酸盐)；(P(＝S)(OR12)(S)(OH)或与阳离子形成的盐(二硫代磷酸盐)；-N(R12)OR12’(羟胺衍生物)；R12C(＝O)NOH或与阳离子形成的盐(异羟肟酸盐)；HOCH2SO2 -、或其盐(甲醛次硫酸盐)；–N(R12)COR12’(酰胺)；R12R12’R12”NPO3H(三烷基氨基磷酸或氨基磷酸)；或ArAr’Ar”NPO3H(三芳基磷酸)；OP(O)(OM1)(OM2)、OCH2OP(O)(OM1)(OM2)、OSO3M1；O-糖苷(葡萄糖苷、半乳糖苷、甘露糖苷、葡萄糖醛酸苷、阿洛糖苷、果糖苷等)、NH-糖苷、S-糖苷或CH2-糖苷；M1和M2独立地为H、Na、K、Ca、Mg、NH4、NR1’R2’R3’；R1’、R2’和R3 ’独立地为H、C1～C8烷基；Ar、Ar’、和Ar”为C3-C8芳基或杂芳基；
其中R12，R12’，和R12”独立地选自H，C1～C8烷基；C2-C8杂烷基，烷基环烷基，杂环烷基；C3-C8芳基，芳烷基，杂环，碳环，环烷基，杂烷基环烷基，烷基羰基，杂芳基；或1-8碳原子酯、醚或酰胺；或如(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p的聚氧乙烯单元，其中p是0至1000的整数，或其组合，或缺省。
X是S、O、NH、SO、SO2或CH2。
m’是0或1；n是1-20。
优选鹅膏毒素结构的示例如下：
Figure BDA0003161812140000311
更优选鹅膏毒素结构的选自：
Figure BDA0003161812140000321
Figure BDA0003161812140000331
Figure BDA0003161812140000341
Figure BDA0003161812140000351
Figure BDA0003161812140000361
Figure BDA0003161812140000371
或元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中Z2是氧或孤对电子；R15是H、NHR12、OR12、C1-C8的直链或支链烷基或杂烷基；C2-C8的直链或支链烯基、炔基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8的直链或支链芳基、芳烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基，碳酸酯(-R1C(O)OR12)，氨基甲酸酯(-R12C(O)NR12’R13)；或1-8个碳原子的羧酸酯、酯、醚或酰胺；或1～8氨基酸；或如(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p的聚氧乙烯单元，其中p是0至约1000的整数；Z1是H、O、S、NH、NHNH、R12、或缺省；R21是COR12、NHCOR12、COOR12、CONHR12、R12、R12NH；R22是R12、SR12、SCH(CH3)R12、SC(CH3)2R12，X是O、S、NH、NHNH、或CH2。R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R12’、R13、和X1的定义与前文相同；
另外，W、L1、L2、V1和V2可独立地由一个或多个下列连接子组分构成：6-马来酰亚胺基己酰基(“MC”)、马来酰亚胺丙酰基(“MP”)、缬氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)、丙氨酸-苯丙氨酸(“ala-phe”or“af”)、对氨基芐氧基-羰基(“PAB”)、4-硫代戊酰基(“SPP”)、4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1酰基(“MCC”)、(4-乙酰基)氨基苯酰基(“SIAB”)、4-硫丁酰基(SPDB)、4-硫-2-羟基磺酰基-丁酰基(2-Sulfo-SPDB)，结构如下所示，或含有1-12个天然或非天然氨基酸单元的天然或非天然肽。天然氨基酸最好选自天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、脯氨酸、色氨酸、丙氨酸；
Figure BDA0003161812140000381
6-马来酰亚胺己酰基(MC),
Figure BDA0003161812140000382
马来酰亚胺丙酰基(MP),
Figure BDA0003161812140000383
缬氨酸-瓜氨酸(val-cit),
Figure BDA0003161812140000384
丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe),
Figure BDA0003161812140000385
赖氨酸-苯丙氨酸(lys-phe),
Figure BDA0003161812140000386
对氨基芐氧基-羰基(PAB),
Figure BDA0003161812140000387
4-硫戊酰基(SPP),
Figure BDA0003161812140000388
4-硫丁酰基(SPDB),
Figure BDA0003161812140000389
4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-酰基(MCC),
Figure BDA00031618121400003810
马来酰亚胺乙氨基(ME),
Figure BDA00031618121400003811
4-硫-2-羟基磺酰基-丁酰基(2-Sulfo-SPDB),
Figure BDA0003161812140000391
芳基硫醚基(PySS),
Figure BDA0003161812140000392
(4-乙酰基)氨基苯酰基(SIAB),
Figure BDA0003161812140000393
氧芐基硫醚基,
Figure BDA0003161812140000394
氨基苄基硫醚基,
Figure BDA0003161812140000395
二氧基苄基硫醚基、
Figure BDA0003161812140000396
二氨基苄基硫醚基、
Figure BDA0003161812140000397
氨基氧基苄基硫醚基,
Figure BDA0003161812140000398
烷氧基氨基(AOA),
Figure BDA0003161812140000399
亚乙基氧基(EO),
Figure BDA00031618121400003910
4-甲基-4-硫代-戊酰基(MPDP),
Figure BDA00031618121400003911
三唑,
Figure BDA00031618121400003912
二硫、
Figure BDA00031618121400003913
烷基磺酰基,
Figure BDA00031618121400003914
烷基磺胺,
Figure BDA00031618121400003915
二磺胺,
Figure BDA00031618121400003916
磷二酰胺,
Figure BDA00031618121400003917
烷基膦酰胺,
Figure BDA00031618121400003918
膦酸,
Figure BDA00031618121400003919
N-甲基烷基膦酰胺,
Figure BDA00031618121400003920
N,N’-二甲基磷二酰胺、
Figure BDA00031618121400003921
烷基膦二酰胺,
Figure BDA00031618121400003922
肼,
Figure BDA00031618121400003923
乙脒；
Figure BDA00031618121400003924
肟,
Figure BDA00031618121400003925
二乙酰肼,
Figure BDA00031618121400003926
氨基乙基胺,
Figure BDA00031618121400003927
氨基乙基-氨基乙基胺
Figure BDA00031618121400003928
Figure BDA00031618121400003929
Figure BDA0003161812140000401
Figure BDA0003161812140000402
以及含有1-20个氨基酸的L-或D-，天然或非天然肽；其中
Figure BDA0003161812140000403
是连接位点；优选地，X2、X3、X4、X5或X6独立地选自NH；NHNH；N(R12)；N(R12)N(R12’)；O；S；C1-C6烷基；C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8芳基、芳烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基；CH2OR12、CH2SR12、CH2NHR12或1～8个氨基酸；其中R12和R12’独立地为H；C1-C8烷基；C2-C8杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8芳基、芳烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基；1-8个碳原子的酯、醚或酰胺；或如式(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p的聚氧乙烯基单元，其中p是0至约1000的整数，或以上的组合。
W、L1、L2、V1和V2独立地可以含有自我毁灭或非自我毁灭的组分、肽单元、腙键、二硫化物、酯、肟、酰胺或硫醚键。自我毁灭单元包括但不限于，与对氨基芐基氨甲酰基(PAB)的电子结构相似的芳香化合物，例如2-氨基咪唑-5-甲醇的衍生物、杂环PAB同系物、β-葡糖苷酸、以及邻或对氨基芐基缩醛；
优选的自我毁灭型连接子组分具有以下结构之一：
Figure BDA0003161812140000411
其中，*标记的是额外的间隔体或可释放的连接子、或细胞毒性剂、和/或结合分子(CBA)的连接点；X1、Y1、Z2和Z3独立地为NH、O或S；Z1为H、NHR1、OR1、SR1、COX1R1，其中X1和R1如前文所定义；v为0或1；U1为H、OH、C1-C6烷基、(OCH2CH2)n、F、Cl、Br、I、OR5、SR5、NR5R5’、N＝NR5、N＝R5、NO2、SOR5R5’、SO2R5、SO3R5、OSO3R5、PR5R5’、POR5R5’、PO2R5R5’、OPO(OR5)(OR5’)或OCH2PO(OR5(OR5’)，其中R5和R5'独立地选自H、C1-C8烷基；C2-C8烯基、炔基、杂烷基或氨基酸；C3-C8芳基、杂环、碳环、环烷基、杂环烷基、杂芳烷基、烷基羰基或糖苷；或药学上的阳离子盐；
W、L1、L2、V1和V2独立地可以为包含以下结构之一的非自我毁灭的连接子组分：
Figure BDA0003161812140000412
Figure BDA0003161812140000421
Figure BDA0003161812140000431
其中，*标记的是额外的间隔体或可释放的连接子、或细胞毒性剂、和/或结合分子(CBA)的连接点；X1、Y1、U1、R5、R5’如前文所定义；r为0-100；m和n独立地为0-20；
更为优选的是，W、L1、L2、V1和V2独立地是可释放的连接子组分。术语“可释放的”是指连接子上包含至少一个可在生理条件下被破坏的键，例如pH、酸、碱、氧化作用、代谢、生化或酶不稳定的键。应当理解，导致键断裂不一定是生物或代谢过程、而可能是一个化学反应、例如水解或取代反应，这种生理条件的例子有：pH值比细胞浆内pH低的内涵体，恶性细胞内存在的毫摩尔浓度的大量谷胱甘肽，它能够与细胞内硫醇发生二硫键交换反应；
W、L1、L2、V1和V2中可释放组件的实例，包括但不限于：
-(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n(OCH2CH2)t-，-(CR15R16)m(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-，-(Aa)r-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)t-，-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-，-(CR15R16)m(CR17＝CR18)(CR19R20)n(Aa)t(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(Aa)t(NR21CO)(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(OCO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m-(CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(NR21CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m-(OCO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m(CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-，-(CR15R16)m-苯基-CO(Aa)t-(CR17R18)n-，-(CR15R16)m-呋喃-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-(CR15R6)m-恶唑-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-(CR15R16)m-噻唑基-CO(Aa)t(CCR17R18)n-，-(CR15R16)t-噻吩-CO(CR17R18)n-，-(CR15R16)t-咪唑-CO-(CR17R18)n-，-(CR15R16)t-吗啉-CO(Aa)t-(CR17R18)n-，-(CR15R16)t-呱嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-(CR15R16)t-N-甲基呱嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-(CR15R16)m-(Aa)t苯基-，-(CR15R16)m-(Aa)t呋喃-，-(CR15R16)m-恶唑(Aa)t-，-(CR15R16)m-噻唑基(Aa)t-，-(CR15R16)m-噻吩基-(Aa)t-，-(CR15R16)m-咪唑(Aa)t-，-(CR15R16)m-吗啉-(Aa)t-，-(CR15R16)m-呱嗪-(Aa)t-，-(CR15R16)m-N-甲基呱嗪-(Aa)t-，-K(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n(OCH2CH2)t-，-K(CR15R16)m(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-，-K(Aa)r-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)t-，-K(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-，-K(CR15R16)m(CR17＝CR18)(CR19R20)n(Aa)t(OCH2CH2)r，-K(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR5R6)m(Aa)t(NR21CO)(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m(O-CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m(CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m(NR21CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m-(OCO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K-(CR15R16)m(CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-，-K(CR15R16)m-苯基-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-K-(CR15R16)m-呋喃-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-K(CR15R16)m-恶唑-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-K(CR15R16)m-噻唑基-CO(Aa)t-(CR17R18)n-，-K(CR15R16)t-噻吩-CO(CR17R18)n-，-K(CR15R16)t咪唑-CO-(CR17R18)n-，-K(CR5R6)t吗啉-CO(Aa)t-(CR17R18)n-，-K(CR15R16)t-呱嗪-CO(Aa)t-(CR17R18)n-，-K(CR15R16)t-N-甲基呱嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-，-K(CR15R16)m-(Aa)t苯基，-K-(CR15R16)m-(Aa)t呋喃-，-K(CR15R16)m-恶唑-(Aa)t-，-K(CR15R16)m-噻唑基(Aa)t-，-K(CR15R16)m-噻吩基-(Aa)t-，-K(CR15R16)m-咪唑(Aa)t-，-K(CR15R16)m-吗啉(Aa)t-，-K(CR15R16)m呱嗪(Aa)tG，-K(CR5R6)m-N-甲基呱嗪(Aa)t-；其中m，Aa，m，n，R13，R14和R15定义如前文所述；t和r独立地为0-100；R16，R17，R18，R19和R20独立地选自H，卤素，C1～C8烷基或者杂烷基，C2～C8芳基、烯基、炔基、醚、酯、胺或酰胺，C3～C8芳基，可选地被一个或多个卤化物，CN，NR12R12’，CF3，OR12，芳基，杂环，S(O)R12，SO2R12，-CO2H，-SO3H，-OR12，-CO2R12，-CONR12，-PO2R12R13，-PO3Hor P(O)R12R12’R13所取代；K是NR12，-SS-，-C(＝O)-，-C(＝O)NH-，-C(＝O)O-，-C＝NH-O-，-C＝N-NH-，-C(＝O)NH-NH-，O，S，Se，B，Het(具有C3-C12的杂环或杂芳环)；或含有相同或不同1-20个氨基酸的肽。
更为优选地，W、L1、L2、V1和V2独立地为具有1-6个碳原子的直链烷基，或结构如式(OCH2CH2)p的聚氧乙烯基单元，p＝1-5000，或是含有1-4个氨基酸单元的肽(L或D形式)，或以上的组合。
或者W、Q1、Q2、L1、L2、V1或V2中的任何一个或多个独立地可以缺省、但Q1和Q2不能同时缺省。
在另一方面，一般而言，当V1和/或V2与细胞结合分子T连接时，或与L1和/或L2与细胞结合分子直接连接时(V1和V2缺省)，产生以下一个或多个结构：
Figure BDA0003161812140000461
Figure BDA0003161812140000471
Figure BDA0003161812140000481
其中R20和R21独立地是C1-C8烷基，C2-C8杂烷基或杂环，C3-C8芳基、芳烷基、环烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂烷基环烷基、碳环或烷基羰基，或C2-C100具有式(CH2CH2O)p的聚亚烷基二醇，p如前文所定义。
在另一方面，Q1和Q2优选自含有C2-C18脂质、或C2-C18脂肪酸或C2-C18脂肪铵脂质的聚亚烷基二醇。聚亚烷基二醇不仅使偶联物更具有亲水，而且能防止偶联物连接子被水解酶，如蛋白水解酶或酯酶水解。偶联体上的脂质可以结合哺乳动物血液中的白蛋白，让偶联物在血液循环中从该复合物中缓慢释放。因此，本专利申请的支链连接子可以让偶联物在血液循环中更加稳定。这里的聚亚烷基二醇包括但不限于聚乙二醇(PEG)、聚(丙二醇)及环氧乙烷与环氧丙烷的共聚物，优选的是PEG，更优选的是单官能团活化的羟基PEG(例如一个末端被活化的羟基PEG，包括羟基PEG-羧酸的反应活性酯、羟基PEG-单醛、羟基PEG-单胺、羟基PEG-单酰肼、羟基PEG-单肼基甲酸酯、羟基PEG-单碘乙酰胺、羟基PEG-单马来酰亚胺、羟基PEG-单原甲酰基二硫化物、羟基PEG-单肟、羟基PEG-单苯基碳酸酯、羟基PEG-单苯基乙二醛、羟基PEG-单噻唑烷-2-硫酮、羟基PEG-单硫代酯、羟基PEG-单硫醇、羟基PEG-单三嗪和羟基PEG-单乙烯基砜)。聚亚烷基二醇的分子量约为10Da至约200kDa，优选范围在约88Da至约40kDa之间，两个支链，每个的分子量为约88Da至约40kDa；更优选为两个支链，每个分子量为约88Da至约20kDa。在一个具体实例中，聚亚烷基二醇是聚乙二醇且具有约10kDa、20或40kDa的分子量。在其它具体的实例中，PEG是直链或支链10kDa的PEG、直链或支链20kDaPEG、直链或支链40kDa PEG。许多美国专利已经公开了直链或支链“非抗原性”PEG聚合物及其衍生物或偶联物的制备，如美国专利5,428,128；5,621,039；5,622,986；5,643,575；5,728,560；5,730,990；5,738,846；5,811,076；5,824,701；5,840,900；5,880,131；5,900,402；5,902,588；5,919,455；5,951,974；5,965,119；5,965,566；5,969,040；5,981,709；6,011,042；6,042,822；6,113,906；6,127,355；6,132,713；6,177,087及6,180,095。
结构式(I)的示例如下：
Figure BDA0003161812140000491
Figure BDA0003161812140000501
Figure BDA0003161812140000511
Figure BDA0003161812140000521
Figure BDA0003161812140000531
Figure BDA0003161812140000541
Figure BDA0003161812140000551
Figure BDA0003161812140000561
Figure BDA0003161812140000571
Figure BDA0003161812140000581
Figure BDA0003161812140000591
Figure BDA0003161812140000601
或元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；其中X8是O、S、NH、NHNH、NHR12、SR12、SSR12、SSCH(CH3)R12、SSC(CH3)2R12、或R12；X1、X2、X3、X4、X5、p1、p2、q1、q2、m、n、R25和mAb的定义如前文所述；Aa是天然或者非天然氨基酸；r是0-100；(Aa)r是含有相同或不同氨基酸序列的肽、当r>2；r＝0时，(Aa)r缺省。
本发明的另一方面，含有支链连接子的偶联物的结构式表示如(III)：
Figure BDA0003161812140000611
其中，D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2、n和T与式(I)中定义相同。
结构式(III)的示例如下：
Figure BDA0003161812140000612
Figure BDA0003161812140000621
Figure BDA0003161812140000631
Figure BDA0003161812140000641
Figure BDA0003161812140000651
Figure BDA0003161812140000661
Figure BDA0003161812140000671
Figure BDA0003161812140000681
或元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中X8是O、S、NH、NHNH、NHR12、SR12、SSR12、SSCH(CH3)R12、SSC(CH3)2R12、或R12；X1、X2、X3、X4、X5、p1、p2、q1、q2、m、n、R25、和mAb的定义如前文所述；Aa是天然或者非天然氨基酸；r是0-100；(Aa)r是含有相同或不同氨基酸序列的肽，当r>2；r＝0时，(Aa)r缺省。
本发明的另一个方面，支链连接子化合物的结构如(IV)所示、它可以便利地与细胞结合分子T反应，形成式(I)中的偶联物：
Figure BDA0003161812140000691
其中，D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2及n的定义同结构式(I)；
Lv1为一反应官能团，可以与细胞结合分子上的硫醇、胺、羧酸、硒醇、酚或羟基发生反应。它包括，但不限于卤素(如氟、氯、溴、碘)；甲磺酰基；甲苯磺酰基；三氟甲磺酰基；硝基酚基；N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)；苯酚基；二硝基苯酚基；五氟苯酚基；四氟苯酚基；三氟苯酚基；二氟苯酚基；一氟苯酚基；五氯苯酚基；咪唑基；一氯酚基；二氯酚基；三氯酚基；四氯苯酚基；N-(苯并三唑基)氧基；2-乙基-5-苯基异恶唑基-3′-磺酰基；苯氧二唑基磺酰基；2-乙基-5-苯基异恶唑基；苯氧二唑基；恶二唑基；不饱和碳(碳-碳、碳-氮、碳-硫、碳-磷、硫-氮、磷-氮、氧-氮或碳-氧之间的双键或三键)；或与Mitsunobu反应试剂作用生成的中间体。缩合剂的例子如下：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-环己基-N'-(2-吗啉代-乙基)碳二亚胺甲基对甲苯磺酸盐(CMC或CME-CDI)、1，1'-羰基二咪唑(CDI)、(O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(1H-苯并三唑-1-基)-六氟磷酸铵(HBTU)、(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)-六氟磷酸盐(BOP)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基六氟磷酸盐(PyBOP)、氰基膦酸二乙酯(DEPC)、氯-N，N，N'，N'-四甲基甲脒六氟磷酸盐、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶3-氧六氟磷酸盐(HATU)、1-[(二甲氨基)(吗啉代)亚甲基]-1H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-1-鎓3-氧六氟磷酸盐(HDMA)、2-氯-1，3-二甲基-咪唑六氟磷酸盐(CIP)、六氟磷酸氯代吡咯烷酮鎓(PyCloP)、氟-N，N，N'，N'-双(四亚甲基)甲脒六氟磷酸盐(BTFFH)、N，N，N'，N'-四甲基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲六氟磷酸盐、O-(2-氧代-1(2H)吡啶基)-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TPTU)、S-(1-氧代-2-吡啶基)N，N，N'，N'-四甲基硫脲四氟硼酸盐、O-[(乙氧基羰基)-氰基甲基氨基]-N，N，N'，N'-六氟磷酸四甲基脲(HOTU)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基氨基氧基)二甲氨基-吗啉代-六氟磷酸盐(COMU)、O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-双(四亚甲基)六氟磷酸盐(HBPyU)、N-芐基-N'-环己基-碳二亚胺(有或没有聚合物结合)、二吡咯烷基(N-琥珀酰亚胺基氧基)碳鎓六氟磷酸盐(HSPyU)、氯二吡咯烷基六氟磷酸盐(PyClU)、2-氯-1，3-二甲基咪唑四氟硼酸盐(CIB)、(苯并三唑-1-基氧基)二呱啶碳六氟磷酸盐(HBPipU)、O-(6-氯苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TCTU)、溴代(二甲基氨基)-六氟磷酸盐(BroP)、丙基膦酸酐(PPACA、
Figure BDA0003161812140000701
)、2-吗啉代乙基异氰化物(MEI)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(N-琥珀酰亚胺基)六氟磷酸盐(HSTU)、2-溴-1-乙基-吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP)、O-[(乙氧基羰基)氰基-亚甲基氨基]-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TOTU)、4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉氯化物(MMTM、DMTMM)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(N-琥珀酰亚胺基)脲四氟硼酸(TSTU)、O-(3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TDBTU)、1，1'-(偶氮二羰基)-二呱啶(ADD)、二-(4-氯芐基)偶氮二羧酸酯(DCAD)、偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD)、偶氮二羧酸二异丙酯(DIAD)、偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)。另外，Lv1可以是酸酐，或与其它C1-C8酸酐作用形成的酸酐；
优选的Lv1包括：卤化物(如氟化物、氯化物、溴化物和碘化物)、甲磺酰基(mesyl)、甲苯磺酰基(tosyl)、三氟甲基磺酰基(triflate)、三氟甲基磺酸酯、硝基苯酚基、N-琥珀酰亚胺基(NHS)、苯酚基；二硝基苯酚基；五氟苯酚基、四氟苯酚基、三氟苯酚基、二氟苯酚基、一氟苯酚基、五氯苯酚基、1H-咪唑-1-基、一氯苯酚基、二氯苯酚基、三氯苯酚基、四氯苯酚基、N-(苯并三唑基)氧基、2-乙基-5-苯基异恶唑-3′-磺酰基、苯基恶二唑-磺酰基、2-乙基-5-苯基异恶唑基、苯基恶二唑基、恶二唑基、不饱和碳(碳-碳、碳-氮、碳-硫、碳-磷、硫-氮、磷-氮、氧-氮或碳-氧之间的双键或三键)，或以下结构之一：
Figure BDA0003161812140000711
二硫化物；
Figure BDA0003161812140000712
卤代乙酰基；
Figure BDA0003161812140000713
酰卤；
Figure BDA0003161812140000714
N-羟基琥珀酰亚胺酯；
Figure BDA0003161812140000715
马来酰亚胺；
Figure BDA0003161812140000716
单取代马来酰亚胺；
Figure BDA0003161812140000717
二取代马来酰亚胺；
Figure BDA0003161812140000718
单取代的琥珀酰亚胺；
Figure BDA0003161812140000719
二取代马来酰亚胺；
Figure BDA00031618121400007110
取代马来酸；-CHO醛；
Figure BDA00031618121400007111
乙烯磺酰基；
Figure BDA00031618121400007112
丙烯酰基；
Figure BDA00031618121400007113
(甲苯磺酰氧基)乙酰基；
Figure BDA00031618121400007114
2-(甲磺酰氧基)乙酰基；
Figure BDA00031618121400007115
2-(硝基苯酚基)乙酰基；
Figure BDA00031618121400007116
2-(二硝基苯基)乙酰基；
Figure BDA00031618121400007117
2-(氟代苯酚基)-乙酰基；
Figure BDA00031618121400007118
2-(二氟苯酚基)-乙酰基；
Figure BDA00031618121400007119
2-((三氟甲基磺酰基)氧基)乙酰基；
Figure BDA00031618121400007120
酮或醛，
Figure BDA00031618121400007121
2-(五氟苯酚基)乙酰基；
Figure BDA00031618121400007122
甲基砜苯基恶二唑(ODA)；
Figure BDA00031618121400007123
酸酐，
Figure BDA00031618121400007124
烷氧基氨；
Figure BDA00031618121400007125
叠氮基，
Figure BDA00031618121400007126
炔基，或
Figure BDA00031618121400007127
酰肼；
其中，X1’是F、Cl、Br、I或Lv3；X2’是O、NH、N(R1)或CH2；R3是H、芳基或杂芳基，其中一个或多个H原子可独立地被-R1、-卤素、-OR1、-SR1、-NR1R2、-NO2、-S(O)R1、-S(O)2R1或-COOR1取代；Lv3是离去基团，选自F、Cl、Br、I；硝基苯基；N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)；苯酚基；二硝基苯酚基；五氟苯酚基；四氟苯酚基；二氟苯酚基；单氟苯酚基；五氯苯酚基；三氟甲磺酰基；咪唑基；二氯酚基；四氯苯酚基；1-羟基苯并三唑基；甲苯甲磺酰基；甲磺酰基；2-乙基-5-苯基异恶唑-3′-磺酰基，酸酐或与其它酸酐作用形成的酸酐，例如乙酸酐、甲酸酐；或与多肽缩合试剂、Mitsunobu反应试剂作用生成的中间体。
结构式(IV)的示例如下：
Figure BDA0003161812140000721
Figure BDA0003161812140000731
Figure BDA0003161812140000741
Figure BDA0003161812140000751
Figure BDA0003161812140000761
Figure BDA0003161812140000771
Figure BDA0003161812140000781
Figure BDA0003161812140000791
Figure BDA0003161812140000801
Figure BDA0003161812140000811
Figure BDA0003161812140000821
或元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中X8是O、S、NH、NHNH、NHR12、SR12、SSR12、SSCH(CH3)R12、SSC(CH3)2R12、或R12；X1、X2、X3、X4、X5、p1、p2、q1、q2、m、n、R25、和mAb的定义如前文所述；Aa是天然或者非天然氨基酸；r是0-100；(Aa)r是含有相同或不同氨基酸序列的肽，当r>2；r＝0时，(Aa)r缺省。
本发明的另一个方面，支链连接子化合物的结构如(V)所示、它可以便利地与细胞结合分子T反应，形成式(III)中的偶联物：
Figure BDA0003161812140000831
其中，D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2及n的定义同结构式(I)；其中Lv1和Lv2独立地，与式(IV)中Lv1的定义相同，Lv1和Lv2可以相同或者不同。
结构式(V)的示例如下：
Figure BDA0003161812140000832
Figure BDA0003161812140000841
Figure BDA0003161812140000851
Figure BDA0003161812140000861
Figure BDA0003161812140000871
Figure BDA0003161812140000881
Figure BDA0003161812140000891
Figure BDA0003161812140000901
Figure BDA0003161812140000911
或元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中X1、X2、X3、X4、X5、X8、Z2、Z3、p、p1、p2、p3、q1、q2、Lv1、Lv2、Lv3、Lv3’、m、n、R12、R12’、R15、R25、(Aa)r和mAb的定义如前文所述；
本发明进一步涉及结构式(I)和(III)中鹅膏毒素类似物与细胞结合分子的偶联物的制备方法，以及这些偶联物的应用。
细胞结合剂或细胞结合分子T，可以是目前已知的或即将公开的，具有治疗意义或者可以被生物学方式修饰的，能够与细胞的部分相结合、复合或反应的任何种类的分子。优选的细胞结合剂或细胞结合分子是免疫治疗蛋白、抗体及单链抗体；结合靶细胞的抗体片段；单克隆抗体；单链单克隆抗体；或结合靶细胞的单克隆抗体片段；嵌合抗体；结合靶细胞的嵌合抗体片段；域抗体；结合靶细胞的域抗体片段；adnectin类抗体、DARPin蛋白、淋巴因子、激素、维生素、生长因子、集落刺激因子、营养转运分子(转铁蛋白)和/或连接在白蛋白、聚合物、树状大分子、脂质体、纳米粒子、囊泡或(病毒)衣壳上的含有四个以上氨基酸片段的细胞结合肽、蛋白质或小分子；
优选的Lv1，Lv2，Lv3或Lv3’可以与细胞结合剂或细胞结合分子上的巯基对反应。巯基最优是由细胞结合剂的链间二硫键被还原产生，还原剂选自二硫苏糖醇(DTT)、二硫赤藓糖醇(DTE)、L-谷胱甘肽(GSH)、二(2-碳氧乙基)膦(TCEP)、2-巯基乙胺(β-MEA)和/或β-巯基乙醇(β-ME，2-ME)。细胞结合剂/分子上的巯基也可以通过Traut试剂或硫代内酯生成，其中Traut试剂或硫代内酯与细胞结合剂/分子上的氨基反应形成巯基，随后可同时或依次进行与Lv1，Lv2，Lv3或Lv3’反应：
Figure BDA0003161812140000921
Figure BDA0003161812140000931
以支链连接子连接的鹅膏毒素类似物与细胞结合分子偶联物的制备
图1-26说明了鹅膏毒素同系物与本发明中细胞结合分子偶联物的制备和以支链连接子进行偶联的合成线路。
式(I)和(III)中的偶联物可分别由式(IV)和(V)的中间体化合物制备。通常，(IV)和(V)中的鹅膏毒素同系物具有Lv1和Lv2的官能团，可以很便利地与细胞结合分子或修饰的细胞结合分子发生反应。图1-26中说明了(IV)和(V)中鹅膏毒素同系物的制备和部分(I)和(III)中偶联物的制备。
通常情况下，为了合成式(I)中的偶联物，式(IV)中的官能团Lv1与细胞结合分子上的一个、两个或多个基团反应，反应在0-60℃，pH 5-9的水性介质中进行，可添加或不添加0-30％与水能混溶的有机溶剂，如DMA、DMF、乙醇、甲醇、丙酮、乙腈、THF、异丙醇、二恶烷、丙二醇或乙二醇，然后进行透析或色谱纯化以得到式(I)中的偶联物。细胞结合分子上的氨基酸残机(用于偶联的反应官能团)可以通过蛋白质工程的方法获得。
式(III)中的偶联物也可以通过式(V)中的官能团Lv1和Lv2，与细胞结合分子上的两个或多个基团的反应获得，优选为细胞结合分子上通过还原双硫键产生的一对游离巯基，反应在0-60℃、pH5-9的水性介质中发生，可添加或不添加0-30％的水溶性(混溶)有机溶剂，形成偶联物分子。成对的巯基，优选是通过还原细胞结合剂上的链间二硫键而生成，还原剂可选自二硫苏糖醇(DTT)、二硫赤藓糖醇(DTE)、L-谷胱甘肽(GSH)、三(2-羧乙基)膦(TCEP)、2-巯基乙胺(β-MEA)、或/和β巯基乙醇(β-ME，2-ME)，还原反应在pH4-9的水介质中进行，可加入或不加入0-30％的水溶性(混溶)有机溶剂。
式(IV)和(V)中的Lv1和Lv2的反应基团独立地可以为以下基团：二硫化物、硫醇、硫酯、马来酰亚胺、卤素取代的马来酰亚胺、卤代乙酰基、迭氮化物、1-炔、酮、醛、烷氧基氨基、三氟甲磺酰基、羰基咪唑、甲苯磺酰基、甲磺酰基、2-乙基-5-苯基异恶唑-3′-磺酰基、硝基苯酚基、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、苯酚基；二硝基苯酚基、五氟苯酚基、四氟苯酚基、二氟苯酚基、单氟苯酚基、五氯苯酚基、二氯苯酚基、四氯苯酚基、1-羟基苯并三唑、酸酐或酰肼基团、酯或其他酸衍生物。可与细胞结合分子或细胞结合试剂上的一个、两个或多个基团同时或依次反应，在0-60℃、pH为4-9.5的水性介质中进行，可添加或不添加0-30％水溶性(混溶)有机溶剂、经柱层析或透析后得到式(I)和(III)的偶联物。式(IV)和(V)的Lv1和Lv2的反应性基团，与改性的细胞结合分子以不同的方式反应。例如，制备式(I)中含双硫键连接子的细胞结合剂-鹅膏毒素类似物的偶联物，可以通过修饰的细胞结合剂中的二硫键与含游离巯基的Lv1和Lv2之间进行二硫键交换，或通过修饰的细胞结合剂中的游离巯基，与Lv1和/或Lv2上的二硫键进行交换。为了加速二硫化物交换反应，二硫化物基团通常选自二硫吡啶、二硫硝基吡啶、二硫硝基苯、二硫硝基苯甲酸或二硫基二硝基苯等基团。
式(I)和(III)的偶联物中，含有硫醚键的连接通常是通过以下方式实现的：在(IV)和(V)中的修饰的细胞结合剂或鹅膏毒素同系物上的马来酰亚胺基或卤代乙酰基或乙基磺酰基，分别与鹅膏毒素同系物上的自由巯基或是修饰的细胞结合剂上的巯基反应；含有易被酸降解的腙键的连接可以通过(IV)和(V)中药物或细胞结合分子上的羰基，与细胞结合分子上的或(IV)和(V)中药物上的酰肼基反应而实现，这些方法是本领域熟知的(参见如P.Hamann等.，Cancer Res.53，3336-34，1993；B.Laguzza等.，J.Med.Chem.，32，548-55，1959；P.Trail等.，Cancer Res.，57，100-5，1997)；含有三唑键的连接可以通过(IV)和(V)中药物或细胞结合分子上的炔基，与相应的叠氮，进行点击化学(Huisgen环加成)反应(Lutz，JF.等，2008，Adv.Drug Del.Rev.60，958–70；Sletten，EM等2011，AccChem.Research44，666–76)而实现。含有肟键的连接可以通过(IV)和(V)中药物或细胞结合分子上的酮或醛，与相应的羟胺反应而实现。含巯基的细胞结合分子可以与式(IV)和(V)中的，含有马来酰亚胺、卤代乙酰基或乙基磺酰基取代基的药物-连接子分子，在pH为5.5-9.0的缓冲液中反应，得到式(I)和(III)中以硫醚连接的偶联物。含巯基的细胞结合分子，也可以与式(IV)和(V)中带有吡啶基二硫基的药物-连接子发生二硫键交换，得到以二硫键连接的偶联物。带有羟基或巯基的细胞结合分子可以与式(IV)和(V)中，带有卤素，特别是羧酸酯的α位卤素的药物-连接子，在温和的碱存在的情况下，比如pH为8.0-9.5，反应会得到带有醚或硫醚键的偶联药物。细胞结合分子上的羟基或氨基，可与(IV)和(V)中带有羧基的药物-连接子，在缩合剂如EDC或DCC存在的情况下缩合，生成酯的连接。含有氨基的细胞结合分子可以与药物-连接子分子上的下列基团的羧酸酯缩合，得到含酰胺键连接子的偶联物：NHS、咪唑、硝基苯酚基、苯酚基、二硝基苯酚基、五氟苯酚基、四氟苯酚基、二氟苯酚基、单氟苯酚基、五氯苯酚基、三氟甲磺酰基、二氯苯酚基、四氯苯酚基、1-羟基苯基三唑、甲苯磺酰基、甲磺酰基、2-乙基-5-苯基异恶唑基-3′-磺酰基。
合成的偶联物可以通过标准生物化学方法纯化，例如在Sephadex G25或Sephacryl S300柱上进行凝胶过滤，吸附色谱，离子交换，或透析。在一些情况下，细胞结合剂为小分子化合物(例如叶酸、黑素细胞刺激激素、EGF等)，与小分子药物偶联后，可以通过色谱法纯化，例如HPLC、中压柱层析法或离子交换色谱法。
为了使与细胞结合分子，优选为抗体，上的一对游离巯基的偶联反应有更高产率，可能需要在反应混合物中加入少量水溶性有机溶剂或相转移剂。可将式(IV)或(V)上的交联剂(连接子)，以高浓度如1-500mM溶解于可与水混溶的极性有机溶剂中，例如不同的醇(如甲醇、乙醇和丙醇)、丙酮、乙腈、四氢呋喃(THF)、1，4-二恶烷、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)或二甲基亚砜(DMSO)。同时，将细胞结合分子，如抗体以1～50mg/ml浓度溶解在pH4～9.5，最优pH6～8.5的缓冲液中，再用0.5～20当量的TCEP或DTT处理20分钟至48小时。还原后，DTT可通过SEC色谱纯化去除。TCEP也可以通过SEC色谱法去除，或者留在反应混合物中，无需进一步纯化，但最好用迭氮化物(如4-叠氮苯甲酸、4-(叠氮甲基)苯甲酸、叠氮聚乙二醇(如2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙醇)中和TCEP。此外，以TCEP还原抗体或其他细胞结合剂，可以在式(IV)或(V)的药物共存时进行，此时药物与细胞结合分子的偶联，可以与TCEP还原同时实现。
进行修饰细胞结合剂反应的水溶液为pH4至9之间缓冲液，优选在6.0至7.5之间，并且可以含有适合用于这个pH范围的任何非亲核性缓冲盐。典型的缓冲液包括磷酸盐、乙酸盐、三乙醇胺盐酸盐、HEPES和MOPS缓冲液，也可含有其它组分，例如环糊精、羟丙基-β-环糊精、聚乙二醇、蔗糖和其它盐，如NaCl和KCl。在将式(IV)或(V)中的药物-连接子加入到含有还原的细胞结合分子的溶液中后，反应混合物在4℃至45℃，优选15℃的温度下保温。对反应进程的监测，可以测量在某一特定紫外线波长(例如252nm)吸亮度的减少，或某一特定紫外线波长(例如280nm)吸亮度的增加，或选择其它适当波长。反应完成后，被修饰的细胞结合剂可以以常规方式被分离，例如使用凝胶过滤色谱、离子交换色谱、吸附色谱，硅胶或氧化铝柱层析色谱，结晶、制备薄层色谱或HPLC方法。
可以通过测量反应生成的硝基吡啶硫酮、二硝基吡啶二硫酮、吡啶硫酮、羧基酰胺基吡啶二硫酮和二羧基酰氨基吡啶二硫酮基团的紫外吸亮度，对修饰程度进行评估。对于没有发色基团分子的偶联反应、修饰或偶联反应可以通过LC-MS监测、优选HPLC-MS/MS、UPLC-QTOF质谱或毛细管电泳质谱法(CE-MS)监测。本发明所述的支链连接子含有多种官能团，可与细胞结合分子，尤其是具有合适取代基的修饰的细胞结合分子反应。例如，带有氨基或羟基的修饰的细胞结合分子，可以与带有N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯的药物反应，带有巯基的修饰的细胞结合分子，可以与带有马来酰亚胺基或卤代乙酰基的药物反应。另外，通过蛋白质工程、酶促反应或化学修饰得到的带有羰基(酮或醛)的修饰的细胞结合分子，可以与带有酰肼或烷氧基胺的药物反应。基于修饰的细胞结合分子上官能团的反应活性，本领域技术人员可以很容易地确定使用哪种药物-连接子分子。
细胞结合剂
本发明中的细胞结合剂，包括偶联物内和被修饰的细胞结合剂，可以是目前已知的或即将公开的，能够与细胞片段结合，复合或反应的，具有治疗意义或者被生物学修饰的任何种类分子。
细胞结合剂包括，但不仅限于大分子量蛋白质，例如完整抗体(多克隆抗体，单克隆抗体，二聚体，多聚体，多特异性抗体，例如双特异性抗体)；单链抗体；抗体片段如Fab，Fab'，F(ab')2，Fv(Parham，J.Immunol.1983，131，2895-2902)；由Fab表达库产生的片段，抗独特型(抗-Id)抗体；CDR；双价抗体；三价抗体；四价抗体；微型抗体；小免疫蛋白；上述任何抗体的表位结合片段，能免疫特异性结合癌细胞抗原，病毒抗原，微生物抗原；由免疫系统产生的蛋白质，能够识别、结合特定抗原或具有期望的生物学活性(Miller等J.ofImmunology 2003，170，4854-4861)；干扰素(如I，II，III型)；多肽；淋巴因子如IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-10，IL-11，IL-16，IL-17，GM-CSF，干扰素-γ(IFN-γ)；激素例如胰岛素，TRH(促甲状腺激素释放激素)，MSH(促黑素细胞激素)，类固醇激素如雄激素和雌激素；生长因子和集落刺激因子，如表皮生长因子(EGF)，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，转化生长因子(TGF)如TGFα，TGFβ，胰岛素和胰岛素样生长因子(IGF-I，IGF-II)，G-CSF，M-CSF和GM-CSF(Burgess，Immunology Today 1984，5，155-158)；牛痘生长因子(VGF)；成纤维细胞生长因子(FGF)；小分子量的蛋白质；多肽；肽和肽激素，如铃蟾肽，胃泌素，胃泌素释放肽；血小板衍生的生长因子；白细胞介素和细胞因子，例如，白细胞介素-2(IL-2)，白细胞介素-6(IL-6)，白血病抑制因子，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)；维生素，如叶酸；脱辅基蛋白和糖蛋白，如转铁蛋白(O'Keefe et al，J.Biol.Chem.1985 260 932-937)；糖结合蛋白或脂蛋白，如凝集素；细胞营养传递分子；小分子抑制剂，如前列腺特异性膜抗原(PSMA)抑制剂和小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，非肽或任何其它细胞结合分子或物质，如生物活性聚合物(Dhar，et al，Proc.Natl.Acad.Sci.2008，105，17356-61)，融合蛋白，激酶抑制剂，基因靶向剂，生物活性树枝状大分子(Lee，et al，Nat.Biotechnol.2005，23，1517-26；Almutairi，et al；Proc.Natl.Acad.Sci.2009，106，685-90)，纳米粒子(Liong，et al，ACS Nano，2008，19，1309-12；Medarova，et al，Nat.Med.2007，13，372-7；Javier，et al，Bioconjugate Chem.2008，19，1309-12)，脂质体(Medinai，et al，Curr.Phar.Des.2004，10，2981-9)和病毒外壳(Flenniken，et al，VirusesNanotechnol.2009，327，71-93)。
一般而言，如果适当的单克隆抗体是可用的，则优选单克隆抗体作为细胞表面结合剂。抗体可以是鼠源，人源，人源化，嵌合或源于其他物种。
用于本发明中的抗体的生产包括体内或体外方法或其组合。生产多克隆抗受体肽抗体的方法在本领域是公知的，例如美国专利4，493，795中所述。通常是通过将骨髓瘤细胞，与已经用所需抗原免疫的小鼠的脾细胞融合，来制备单克隆抗体(
Figure BDA0003161812140000981
G.；Milstein，C.Nature 1975，256：495-497)。详细的过程在“Antibodies--ALaboratory Manual，Harlowand Lane，eds.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York(1988)”中有描述，此处引作参考。具体地，可以用目标抗原，如从靶细胞、完整的病毒、灭活的全病毒和病毒蛋白质分离的抗原，来免疫小鼠，大鼠，仓鼠或任何其它哺乳动物而制备。通常使用聚乙二醇(PEG)6000将脾细胞与骨髓瘤细胞融合。通过对HAT(次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶)的敏感性来筛选融合细胞。通过它们免疫反应特异性受体的能力或抑制靶细胞上的受体活性的能力，可以确定实施本发明的单克隆抗体的杂交瘤。
用于本发明中的单克隆抗体的生产在单克隆杂交瘤培养物里进行，其中包含营养培养基和能分泌具有合适抗原特异性的抗体分子的杂交瘤。培养物在合适的条件下保持足够长的一段时间，以使杂交瘤将抗体分子分泌到培养基。然后收集含有抗体的培养基。使用通过公知的技术进一步分离抗体分子，如蛋白质A亲和层析，阴离子、阳离子、疏水或体积排阻色谱法(特别是通过蛋白质A亲和层析和体积排阻色谱法)，离心，差异溶解度或任何其他纯化蛋白质的标准技术。
可用于制备这些组合物的培养基在本领域中是公知的，并且可商业获得，也包括合成培养基。一个合成的培养基的例子是Dulbecco最少必需培养基(DMEM；Dulbecco etal.，Virol.1959，8，396)补充有4.5g/ml葡萄糖，0-20mM谷氨酰胺，0-20％胎牛血清，几个ppm的Cu，Mn，Fe或Zn等重金属或/和重金属盐，以及消泡剂如聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。
另外，生产抗体的细胞系也可以通过融合以外的技术来获得，例如将成瘤DNA移植至B淋巴细胞，或成瘤病毒转染，如爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV，也称为人类疱疹病毒4(HHV-4))或卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)，见于美国专利4，341，761；4，399，121；4，427，783；4，444，887；4，451，570；4，466，917；4，472，500；4，491，632；4，493，890。单克隆抗体也可以通过含末端羧基的抗受体肽或肽制备，这些都为如本领域所公知，可参考文献Niman etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1983，80：4949-4953；Geysen et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1985，82：178-182；Lei et al.Biochemistry 1995，34(20)：6675-6688。通常，作为产生抗受体肽单克隆抗体免疫原，抗受体肽或肽同系物可以单独使用或连接至免疫原性载体。
用作本发明中结合分子的单克隆抗体也可以通过其他本领域已知的技术获得。特别有用的是制造完整人源抗体的方法。一种方法是噬菌体显示技术，它使用亲和富集的方式，可用于选择能与抗原特异性结合的人源抗体。噬菌体展示技术在文献中也有详细描述，噬菌体展示库的构建和筛选在本领域也是众所周知的，可参考文献Dente et al，Gene.1994，148(1):7-13；Little et al，Biotechnol Adv.1994，12(3):539-55；Clacksonet al.，Nature 1991，352:264-628；Huse et al.，Science 1989，246:1275-1281。
通过与非人如小鼠细胞融合的杂交瘤产生的单克隆抗体，可以被人源化以避免产生人类抗小鼠抗体。常见的抗体人源化方法是互补决定区移植技术，这些方法也已被详细地描述，如美国专利5，859，205和6，797，492；Liu et al，Immunol Rev.2008，222:9-27；Almagro et al，Front Biosci.2008，13：1619-33；Lazar et al，MolImmunol.2007，44(8):1986-98；Li et al，Proc.Natl.Acad.Sci.U S A.2006，103(10):3557-62，此处引为参考。完整人抗体也可以通过用免疫原免疫携带大部分的人类球蛋白重轻链的转基因小鼠、兔子、猴子或其他哺乳动物来制备。这些老鼠的例子有：Xenomouse(Abgenix/Amgen)，HuMAb-Mouse(Medarex/BMS)和VelociMouse(Regeneron)，参考美国专利6，596，541，6，207，418，6，150，584，6，111，166，6，075，181，5，922，545，5，661，016，5，545，806，5，436，149和5，569，825。用于人类治疗时，小鼠的可变区域和人的恒定区域也可以被融合，成为“嵌合抗体”，它在人类身上的免疫原性显著低于小鼠单抗(Kipriyanov et al，MolBiotechnol.2004，26:39-60；Houdebine，CurrOpinBiotechnol.2002，13:625-9)。另外，在抗体可变区域的定点诱变能导致抗体具有较高的亲和性和特异性(Brannigan et al，Nat Rev Mol CellBiol.2002，3:964-70；Adams et al，J Immunol Methods.1999，231:249-60)，抗体恒定区域的改变可以提高其介导结合和细胞毒性的效应功能。
恶性肿瘤细胞抗原的免疫特异性抗体也可以从商业途径获得或通过任何已知方法生产，例如化学合成或重组表达技术。对恶性肿瘤细胞抗原具有免疫特异性的抗体的核苷酸序列编码可以商业获得，例如从GenBank数据库或类似数据库，文献出版物获得，或从常规克隆和测序得到。
除了抗体之外，与目标细胞上的表位或相应的受体相互作用(结合、阻断、靶向或其他类型作用)的一种肽或蛋白质也可以作为结合分子。这些肽或蛋白质可能是任何随机的肽或蛋白质，它们对表位或相应的受体有亲和力，不一定非得是免疫球蛋白家族成员。这些肽可以通过类似噬菌体显示抗体的技术分离出来(Szardenings，JRecept SignalTransduct Res.2003；23(4):307-49)。从随机肽库中获得的肽可以同抗体和抗体片段类似地被使用。肽或蛋白质结合分子可以偶联或连接至大分子或其他物质，包括但不限于白蛋白、聚合物、脂质体、纳米粒子、树形分子，只要这样的连接能保留肽或蛋白质的抗原结合特异性。
在治疗癌症、自身免疫性疾病和/或传染性疾病的偶联物上，和药物分子通过本发明的连接子连接的抗体的例子包括，但不限于3F8(抗GD2)，阿巴单抗(抗CA-125)，阿昔单抗(抗CD41(整联蛋白α-IIb)，阿达木单抗(抗TNF-α)，Adecatumumab(抗EpCAM，CD326)，阿非莫单抗(抗TNF-α)，Afutuzumab(抗CD20)，Alacizumab单抗(抗VEGFR2)，ALD518(抗IL-6)，Alemtuzumab(Campath，MabCampath，抗CD52)，Altumomab(抗CEA)，Anatumomab(抗TAG-72)，Anrukinzumab(IMA-638，抗-IL-13)，Apolizumab(抗-HLA-DR)，阿奇单抗(抗-CEA)，阿塞珠单抗(抗-L-选择蛋白CD62L)，Atlizumab(tocilizumab，Actemra，RoActemra，抗-IL-6受体)，Atorolimumab(抗-Rhesus因子)，Bapineuzumab(抗-β淀粉样蛋白)，Basiliximab(Simulect，抗CD25(IL-2受体的α链))，Bavituximab(抗磷脂酰丝氨酸)，Bectumomab(LymphoScan，抗-CD22)，贝利单抗(Benlysta，LymphoStat-B，抗BAFF)，Benralizumab(抗CD125)，Bertilimumab(抗CCL11(eotaxin-1))，Besilesomab(Scintimun，抗CEA相关抗原)，贝伐单抗(Avastin，抗VEGF-A)，Biciromab(FibriScint，抗纤维蛋白IIβ链)，Bivatuzumab(抗-CD44v6)，Blinatumomab(BiTE，抗CD19)，Brentuximab(cAC10，抗-CD30 TNRSF8)，Briakinumab(抗IL-12，IL-23)，Canakinumab(Ilaris，抗IL-1)，Cantuzumab(C242，抗CanAg)，Capromab，Catumaxomab(Removab，抗EpCAM，抗CD3)，CC49(抗TAG-72)，Cedelizumab(抗CD4)，Certolizumab单抗(Cimzia抗TNF-α)，西妥昔单抗(爱必妥，IMC-C225，抗EGFR)，Citatuzumab bogatox(抗EpCAM)，Cixutumumab(抗IGF-1)，Clenoliximab(抗CD4)，Clivatuzu-mab(抗MUC1)，Conatumumab(抗TRAIL-R2)，CR6261(抗流感A血凝素)，Dacetuzumab(抗CD40)，Daclizumab(Zenapax，抗CD25(IL-2受体α链))，Daratumumab(抗CD38(环ADP核糖水解酶)，Denosumab(Prolia，抗RANKL)，Detumomab(抗B淋巴瘤细胞)，Dorlimomab，Dorlixizumab，Ecromeximab(抗GD3神经节苷脂)，Eculizumab(Soliris，抗-C5)，Edobacomab(抗内毒素)，Edrecolomab(Panorex，MAb17-1A，抗-EpCAM)，Efalizumab(Raptiva，抗LFA-1(CD11a))，Efungumab(Mycograb，抗Hsp90)，Elotuzumab(抗SLAMF7)，Elsilimomab(抗IL-6)，Enlimomab单抗(抗ICAM-1(CD54))，Epitumomab(抗episialin)，依他珠单抗(抗-CD22)，Erlizumab(抗-ITGB2(CD18))，Ertumaxomab(Rexomun，抗HER2/neu，CD3)，依他拉单抗(Abegrin，抗整联蛋白αvβ3)，Exbivirumab(抗乙肝表面抗原)，Fanolesomab(NeutroSpec，抗CD15)，Faralimomab(抗干扰素受体)，Farletuzumab(抗叶酸受体1)，Felvizumab(抗呼吸道合胞病毒)，Fezakinumab(抗-IL-22)，Figitumumab(抗-IGF-1受体)，Fontolizumab(抗-IFN-γ)，Foravirumab(抗狂犬病病毒糖蛋白)，Fresolimumab(抗TGF-β)，Galiximab(抗CD80)，Gantenerumab(抗β淀粉样蛋白)，Gavilimomab(抗CD147(basigin))，Gemtuzumab(抗CD33)，Girentuximab(抗碳酸酐酶9)，Glembatumumab(CR011，抗GPNMB)，Golimumab(Simponi，抗-TNF-α)，Gomiliximab(抗-CD23(IgE受体))，Ibalizumab(抗-CD4)，Ibritumomab(抗CD20)，Igovomab(Indimacis-125，抗CA-125)，Imciromab(Myoscint，抗心肌肌凝蛋白)，Infliximab(Remicade，抗TNF-α)，Intetumumab(抗CD51)，Inolimomab(抗CD25(IL-2受体α链)，伊珠单抗(抗-CD22)，Ipilimumab(抗CD152)，Iratumumab(抗CD30(TNFRSF8))，Keliximab(抗-CD4)，Labetuzumab(CEA-Cide，抗CEA)，Lebrikizumab(抗IL-13)，Lemalesomab(抗NCA-90(粒细胞抗原))，Lerdelimumab(抗TGFβ2)，Lexatumumab(抗TRAIL-R2)，Libivirumab(抗乙肝表面抗原)，Lintuzumab(抗CD33)，鲁米木单抗(抗CD40)，鲁米单抗(抗CD23(IgE受体)，Mapatumumab(抗TRAIL-R1)，马西莫单抗(抗T-细胞受体)，马妥珠单抗(抗EGFR)，Mepolizumab(Bosatria，抗IL-5)，Metelimumab(抗TGFβ1)，Milatuzumab(抗CD74)，Minretumomab(抗TAG-72)，Mitumomab(BEC-2，抗GD3神经节苷脂)，Morolimumab(抗恒河猴因子)，Motavizumab(Numax，抗呼吸道合胞病毒)，Muromonab-CD3(Orthoclone OKT3，抗CD3)，Nacolomab(抗C242)，Naptumomab(抗5T4)，那他珠单抗(Tysabri，抗整联蛋白α4)，奈巴单抗(抗内毒素)，Necitumumab(抗EGFR)，Nerelimomab(抗-TNF-α)，Nimotuzumab(Theracim，Theraloc，抗-EGFR)，Nofetumomab，Ocrelizumab(抗CD20)，奥利木单抗(Afolimomab，抗LFA-1(CD11a))，Ofatumumab(Arzerra，抗CD20)，Olaratumab(抗PDGF-Rα)，Omalizumab(Xolair，抗IgE Fc区)Oportuzumab(抗EpCAM)，Oregovomab(OvaRex，抗CA-125)，Otelixizumab(抗CD3)，Pagibaximab(抗脂磷壁酸)，Palivizumab(Synagis，Abbosynagis，抗呼吸道合胞病毒)，帕尼单抗(Vectibix，ABX-EGF，抗EGFR)，Panobacumab(抗铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))，帕考珠单抗(抗IL-4)，Pemtumomab(Theragyn，抗MUC1)，Pertuzumab(Omnitarg，2C4，抗HER2/neu)，Pexelizumab(抗C5)，Pintumomab(抗腺癌抗原)，Priliximab(抗-D4)，Pritumumab(抗波形蛋白)，PRO140(抗-CCR5)Racotumomab(1E10，抗-N-羟乙酰神经氨酸(NeuGc，NGNA)-神经节苷脂GM3))，Rafivirumab(抗狂犬病病毒糖蛋白)，Ramucirumab(抗VEGFR2)，Ranibizumab(Lucentis，抗VEGF-A)，Raxibacumab(抗炭疽毒素，保护性抗原)，Regavirumab(抗巨细胞病毒糖蛋白B)，Reslizumab(抗-IL-5)，Rilotumumab(抗-HGF)，Rituximab(MabThera，Rituxanmab，抗-CD20)，Robatumumab(抗-IGF-1受体)，Rontalizumab(抗IFN-α)，Rovelizumab(LeukAr-rest，抗CD11，CD18)，Ruplizumab(Antova，抗CD154(CD40L))，Satumomab(抗TAG-72)，Sevirumab(抗巨细胞病毒)，Sibrotuzumab(抗FAP)，西法木单抗(抗IFN-α)，Siltuximab(抗IL-6)，Siplizumab(抗CD2)，Smart MI95(抗CD33)，Solanezumab(抗β淀粉状蛋白)，Sonepcizumab(抗鞘氨醇-1-磷酸)，Sontuzumab(抗-episialin)，Stamulumab(抗-myostatin)，Sulesomab(LeukoScan，抗NCA-90(粒细胞抗原))，Tacatuzumab(抗α甲胎蛋白)，Tadocizumab(抗整联蛋白αIIbβ3)，Talizumab(抗IgE)，Tanezumab(anti-NGF)，Taplitumomab(抗CD19)，Tefibazumab(Aurexis，(抗凝聚因子A))，Telimomab，Tenatumomab(抗腱生蛋白C)，Teneliximab(抗CD40)，Teplizumab(抗CD3)，TGN1412(抗CD28)，Ticilimumab(Tremelimumab，抗-CTLA-4)，Tigatuzumab(抗TRAIL-R2)，TNX-650(抗IL-13)，Tocilizumab(Atlizumab，Actemra，RoActemra，IL-6受体)，Toralizumab(抗CD154(CD40L))，Tositumomab(抗CD20)，曲妥珠单抗(赫赛汀，抗HER2/neu)，Tremelimumab(抗CTLA-4)，Tucotuzumab celmoleukin(抗EpCAM)，Tuvirumab(抗乙型肝炎病毒)，Urtoxazumab(抗大肠杆菌)，Ustekinumab(Stelara，抗-IL-12，IL-23)，Vapaliximab(抗-AOC3(VAP-1))，维多珠单抗(抗整联蛋白α4β7)，维妥珠单抗(抗CD20)，Vepalimomab(抗AOC3(VAP-1))，Visilizumab(Nuvion，抗CD3)，Vitaxin(抗血管整合素avb3)，Volociximab(抗整联蛋白α5β1)，Votumumab(HumaSPECT，抗肿瘤抗原CTAA16.88)，Zalutumumab(HuMax-EGFR，Zanolimumab(HuMax-CD4，抗-CD4)，Ziralimumab(抗-CD147(basigin))，Zolimomab(抗-CD5)，依那西普
Figure BDA0003161812140001041
Alefacept
Figure BDA0003161812140001042
Abatacept
Figure BDA0003161812140001043
Rilonacept(Arcalyst)，14F7(抗IRP-2(铁调节蛋白2))，14G2a(抗GD2神经节苷脂，源于Nat.Cancer Inst.，治疗黑素瘤和实体瘤)，J591(抗-PSMA，源于WeillCornell医学院，治疗前列腺癌)，225.28S(抗HMW-MAA(高分子量黑素瘤相关抗原)，SorinRadiofarmaci SRL(源于意大利米兰，治疗黑色素瘤)，COL-1(抗CEACAM3，CGM1，源于NatCancer Inst.治疗结肠直肠癌和胃癌)，CYT-356(
Figure BDA0003161812140001044
治疗前列腺癌)，HNK20(OraVaxInc.治疗呼吸道合胞病毒感染)，ImmuRAIT(源于Immunomedics，治疗NHL)，Lym-1(抗HLA-DR10，Peregrine Pharm)，MAK-195F(抗TNF(肿瘤坏死因子，TNFA，TNF-α，TNFSF2，源于Abbott/Knoll，治疗脓毒症中毒性休克)，MEDI-500(T10B9，抗CD3，TRαβ(T细胞受体α/β)，源于MedImmune Inc，用于移植物抗宿主疾病病)，RING SCAN(抗TAG 72(肿瘤相关糖蛋白72)，源于Neoprobe Corp.，用于乳腺癌，结肠癌和直肠癌)，Avicidin(抗EPCAM(上皮细胞粘附分子))，抗-TACSTD1(肿瘤相关钙信号转导1)，抗GA733-2(胃肠肿瘤相关蛋白2)，抗EGP-2(上皮糖蛋白2)，抗KSA，KS1/4抗原，M4S，肿瘤抗原17-1A，CD326(源于NeoRx公司，治疗结肠癌，卵巢癌，前列腺癌和NHL)，LymphoCide(源于Immunomedics)，Smart ID10(源于ProteinDesign Labs)，Oncolym(源于Techniclone Inc)，Allomune(源于BioTransplant)，抗VEGF(源于Genentech)，CEAcide(源于Immunomedics)，IMC-1C11(源于ImClone Systems)和Cetuximab(源于ImClone)。
其他可作为细胞结合分子/配体的抗体，包括但不限于，以下抗原的抗体：氨肽酶N(CD13)，膜联蛋白A1，B7-H3(CD276，各种癌症)，CA125(卵巢癌)，CA15-3(各种癌症)，CA19-9(各种癌症)，L6(各种癌症)，路易斯Y(各种癌症)，路易斯X(各种癌症)，甲胎蛋白(各种癌症)，CA242(结直肠癌)，胎盘碱性磷酸酶(各种癌症)，前列腺特异抗原(前列腺癌)，前列腺酸磷酸酶(前列腺癌)，表皮生长因子(各种癌症)，CD2(霍奇金症，NHL淋巴瘤，多发性骨髓瘤)，CD3ε(T细胞淋巴瘤，肺癌，乳腺癌，胃癌，卵巢癌，自身免疫性疾病，恶性腹水)，CD19(B细胞恶性肿瘤)，CD20(非霍奇金淋巴瘤)，CD22(白血病，淋巴瘤，多发性骨髓瘤，SLE)，CD30(霍奇金淋巴瘤)，CD33(白血病，自身免疫性疾病)，CD38(多发性骨髓瘤)，CD40(淋巴瘤，多发性骨髓瘤，白血病(CLL))，CD51(转移性黑色素瘤，肉瘤)，CD52(白血病)，CD56(小细胞肺癌，卵巢癌，梅克细胞癌，以及液体肿瘤，多发性骨髓瘤)，CD66e(各种癌症)，CD70(转移性肾细胞癌和非霍奇金淋巴瘤)，CD74(多发性骨髓瘤)，CD80(淋巴瘤)，CD98(各种癌症)，粘液素(各种癌症)，CD221(实体肿瘤)、CD227(乳腺癌、卵巢癌)、CD262(非小细胞肺癌及其他癌症)、CD309(卵巢癌)、CD326(实体肿瘤)、CEACAM3(结肠直肠癌、胃癌)、CEACAM5(癌胚抗原，CEA，CD66e)(乳腺，结直肠癌和肺癌)，DLL4，EGFR(表皮生长因子受体，各种癌症)，CTLA4(黑色素瘤)，CXCR4(CD184，血液肿瘤，实体肿瘤)，Endoglin(CD105，实体瘤)，EPCAM(上皮细胞粘附分子，膀胱癌，头颈癌，结肠癌，NHL前列腺癌，卵巢癌)，ERBB2(表皮生长因子受体2，肺癌，乳腺癌，前列腺癌)，FCGR1(自身免疫性疾病)，FOLR(叶酸受体，卵巢癌)，GD2神经节苷(各种癌症)，G-28(细胞表面抗原糖脂质，黑色素瘤)，GD3独特型(各自癌症)，热休克蛋白(各种癌症)，HER1(肺癌，胃癌)，HER2(乳腺癌，肺癌和卵巢癌)，HLA-DR10(NHL)，HLA-DRB(NHL，B细胞白血病)，人绒毛膜促性腺激素(各种癌症)，IGF1R(类胰岛素生长因子1受体，实体瘤，血癌)，IL-2受体(白介素2受体，T细胞白血病和淋巴瘤)，IL-6R(白介素6受体，多发性骨髓瘤，风湿性关节炎，Castleman病，白细胞介素6依赖肿瘤)，整合蛋白(αvβ3、α5β1、α6β4、αllβ3、α5β5、αvβ5，各种癌症)，MAGE-1(各种癌症)，MAGE-2(各种癌症)，MAGE-3(各种癌症)，MAGE 4(各种癌症)，抗转铁蛋白受体(各种癌症)，p97(黑色素瘤)，MS4A1(跨膜4结构域亚家族A成员1，非霍奇金B细胞淋巴瘤，白血病)，MUC1或MUC1-KLH(乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、支气管癌和α胃肠道癌)，MUC16(CA125)(卵巢癌)，CEA(结直肠癌)，gp100(黑色素瘤)，MART1(黑色素瘤)，MPG(黑素瘤)，MS4A1(跨膜4结构域亚家族A成员1，小细胞肺癌，NHL)，Nucleolin，Neu癌基因产物(各自癌症)，P21(各种癌)，抗(N-羟乙酰神经氨酸)抗体结合部位(乳腺癌，黑色素瘤)，类PLAP睾丸碱性磷酸酶(卵巢癌、睾丸癌)，PSMA(前列腺瘤)，PSA(前列腺癌)，ROBO4，TAG 72(肿瘤相关糖蛋白72，AML，胃癌、结肠直肠癌、卵巢癌)，T细胞跨膜蛋白(各种癌症)，Tie(CD202b)，TNFRSF10B(肿瘤坏死因子受体超家族成员10B，各种癌症)，TNFRSF13B(肿瘤坏死因子受体超家族成员13B，多发性骨髓瘤，NHL，其他癌症，RA和SLE)，TPBG(滋养细胞糖蛋白，肾细胞癌)，TRAIL-R1(TNF相关坏死诱导配体受体1，淋巴瘤，NHL，结直肠癌，肺癌)，VCAM-1(CD106，黑色素瘤)，VEGF，VEGF-a，VEGF-2(CD309)(各种癌症)。其它可被抗体识别的，肿瘤相关抗原已被总结和评述(Gerber，et al，mAbs 2009，1:3，247-253；Novellino et al，Cancer ImmunolImmunother.2005，54(3)，187-207；Franke，et al，Cancer BiotherRadiopharm.2000，15，459-76)。
细胞结合剂，优选为抗体，能够抗以下细胞：肿瘤细胞，病毒感染细胞，微生物感染细胞，寄生虫感染细胞，自身免疫细胞，活化的细胞，骨髓细胞，活化的T细胞，B细胞，或黑色素细胞。更具体地，细胞结合剂可以是任何能够抗下列抗原或受体之一的试剂/分子：CD1、CD1a、CD1b、CD1c、CD1d、CD1e、CD2、CD3、CD3d、CD3e、CD3g、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD9、CD10、CD11a、CD11b、CD11c、CD12w、CD14、CD15、CD16、CDw17、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD25、CD26、CD27、CD28、CD29、CD30、CD31、CD32、CD33、CD34、CD35、CD36、CD37、CD38、CD39、CD40、CD41、CD42、CD43、CD44、CD45、CD46、CD47、CD48、CD49b、CD49c、CD51、CD52、CD53、CD54、CD55、CD56、CD58、CD59、CD61、CD62E、CD62L、CD62P、CD63、CD66、CD68、CD69、CD70、CD72、CD74、CD79、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CD86、CD87、CD88、CD89、CD90、CD91、CD95、CD96、CD98、CD100、CD103、CD105、CD106、CD109、CD117、CD120、CD125、CD126、CD127、CD133、CD134、CD135、CD138、CD141、CD142、CD143、CD144、CD147、CD151、CD147、CD152、CD154、CD156、CD158、CD163、CD166、.CD168、CD174、CD180、CD184、CDw186、CD194、CD195、CD200、CD200a、CD200b、CD209、CD221、CD227、CD235a、CD240、CD262、CD271、CD274、CD276(B7-H3)、CD303、CD304、CD309、CD326、4-1BB、5AC、5T4(Trophoblast糖蛋白、TPBG、WNT-活化抑制因子1或WAIF1)、腺癌抗原、AGS-5、AGS-22M6、启动素受体激酶1、AFP、AKAP-4、ALK、α整合素、αvβ6、氨基肽酶N、淀粉样蛋白β、雄激素受体、促血管新生蛋白因子2、促血管新生蛋白因子3、膜联蛋白A1、炭疽毒素保护性抗原、抗转移蛋白受体、AOC3(VAP-1)、B7-H3、炭疽杆菌、BAFF(B细胞启动因子)、B淋巴瘤细胞、bcr-abl、蛙皮素、BORIS、C5、C242抗原、CA125(糖抗原125、MUC16)、CA-IX(或CAIX、碳酸酐酶9)、CALLA、CanAg、犬红斑狼疮IL31、碳酸酐酶IX、心肌肌凝蛋白、CCL11(C-C片段趋化因子11)、CCR4(C-C趋化因子受体4、CD194)、CCR5、CD3E(ε)、CEA(癌胚抗原)、CEACAM3、CEACAM5(癌胚抗原)、CFD(因子D)、Ch4D5、胆囊收缩素2(CCK2R)、CLDN18(Claudin-18)、丛生因子A、CRIPTO、FCSF1R(集落刺激因子1受体、CD115)、CSF2(集落刺激因子2、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF))、CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)、CTAA16.88肿瘤抗原、CXCR4(CD184)、C-X-C趋化因子受体4、环状ADP核糖核酸酶、细胞周期蛋白B1、CYP1B1、巨细胞病毒、巨细胞病毒糖蛋白B、Dabigatran、DLL3(类Δ配体3)、DLL4(类Δ配体4)、DPP4(双肽-肽酶4)、DR5(死亡受体5)、大肠杆菌shiga毒素类型-1、大肠杆菌shiga毒素类型-2、ED-B、EGFL7(类EGF结构域蛋白7)、EGFR、EGFRII、EGFRvIII、内皮因子(CD105)、内皮素B受体、内毒素、EpCAM(上皮细胞粘附分子)、EphA2、Episialin、ERBB2(表皮生长因子受体2)、ERBB3、ERG(TMPRSS2 ETS融合基因)、大肠杆菌、ETV6-AML、FAP(成纤维细胞活化蛋白α)、FCGR1、甲胎蛋白、纤维蛋白IIβ链、纤连蛋白额外结构域-B、FOLR(叶酸受体)、叶酸受体α、叶酸水解酶、Fos相关抗原1、呼吸道合胞病毒的F蛋白、卷曲的受体、岩藻糖GM1、GD2神经节苷脂、G-28(细胞表面抗原糖脂)、GD3独特型、GloboH、Glypican3、N-羟乙酰神经氨酸、GM3、GMCSF受体α链、生长分化因子8、GP100、GPNMB(跨膜糖蛋白NMB)、GUCY2C(鸟苷酸环化酶2C)、鸟苷酸环化酶C(GC-C)、肠鸟苷酸环化酶、鸟苷酸环化酶C受体、热稳定肠毒素受体(hSTAR)、热休克蛋白、血凝素、乙肝表面抗原、乙型肝炎病毒、HER1(人类表皮生长因子受体1)、HER2、HER2/neu、HER3(ERBB-3)、IgG4、HGF/SF(肝细胞生长因子/分散因子)、HHGFR、HIV-1、组蛋白复合物、HLA-DR(人类白细胞抗原)、HLA-DR10、HLA-DRB、HMWMAA、人类绒毛膜促性腺激素、HNGF、人类分散因子受体激酶、HPV E6/E7、Hsp90、hTERT、ICAM-1(细胞间粘附分子1)、独特型、IGF1R(IGF–1、类胰岛素生长因子1受体)、IGHE、IFN-γ、流感血凝素、IgE、IgE Fc区、IGHE、IL–1、IL-2R(白介素2受体)、IL–4、IL-5、IL–6、IL-6R(白介素6受体)、IL-9、IL–10、IL–12、IL-13、IL-16、IL-17、IL-17A、IL-20、IL-22、IL-23、IL31RA、ILGF2(类胰岛素生长因子2)、整合蛋白(α4、αIIbβ3、αvβ3、α4β7、α5β1、α6β4、α7β7、αllβ3、α5β5、αvβ5)、干扰素γ诱导蛋白质、ITGA2、ITGB2、KIR2D、LCK、Le、Legumain、Lewis-Y抗原、LFA-1(淋巴细胞功能相关抗原1、CD11a)、LHRH、LINGO-1、脂磷壁酸、LIV1A、LMP2、LTA、MAD-CT-1、MAD-CT-2、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、MAGE A1、MAGE A3、MAGE 4、MART1、MCP-1、MIF(巨噬细胞迁移抑制因子、或糖基抑制因子(GIF))、MS4A1(跨膜4结构域亚家族A成员1)、MSLN(间皮素)、MUC1(粘蛋白1、细胞表面相关(MUC1)或多态性上皮粘蛋白(PEM))、MUC1-KLH、MUC16(CA125)、MCP1(单核细胞趋化蛋白1)、MelanA/MART1、ML-IAP、MPG、MS4A1、MYCN、髓磷脂相关糖蛋白、Myostatin、NA17、NARP-1、NCA-90(粒细胞抗原)、Nectin-4(ASG-22ME)、NGF、神经细胞凋亡调控蛋白酶1、NOGO-A、Notch受体、核仁素、Neu致癌基因产物、NY-BR-1、NY-ESO-1、OX-40、OxLDL(氧化低密度脂蛋白)、OY-TES1、P21、p53非突变体、P97、PAP、抗(N-羟乙酰神经氨酸)抗体结合部位、PAX3、PAX5、PCSK9、PDCD1(PD-1、程序性细胞死亡蛋白1、CD279)、PDGF-Rα(α血小板源生长因子受体)、PDGFR-β、PDL-1、PLAC1、类PLAP睾丸碱性磷酸酶、血小板衍生生长因子受体β、磷酸钠联合转运体、PMEL 17、聚唾液酸、蛋白酶3(PR1)、前列腺癌、PS(磷脂酰丝氨酸)、前列腺癌细胞、铜绿假单胞菌、PSMA、PSA、PSCA、狂犬病病毒糖蛋白、RHD(Rh多肽1(RhPI)、CD240)、Rhesus因子、RANKL、RhoC、Ras突变、RGS5、ROBO4、呼吸道合胞病毒、RON、肉瘤易位断点、SART3、Sclerostin、SLAMF7(SLAM成员7)、Selectin P、SDC1(多配体蛋白聚糖1)、系统性红斑狼疮(a)、生长调节素C、SIP(1-磷酸鞘氨醇)、生长激素抑制素、精子蛋白17、SSX2、STEAP1(6-跨膜上皮前列腺抗原1)、STEAP2、STn、TAG-72(肿瘤相关糖蛋白)、存活素、T细胞受体、T细胞跨膜蛋白、TEM1(肿瘤血管内皮标记1)、TENB2、TenascinC(TN-C)、TGF-α、TGF-β(转化生长因子β)、TGF-β1、TGF-β2(转化生长因子2)、Tie(CD202b)、Tie2、TIM-1(CDX-014)、Tn、TNF、TNF-α、TNFRSF8、TNFRSF10B(肿瘤坏死因子受体超家族成员10B)、TNFRSF13B(肿瘤坏死因子受体超家族成员13B)、TPBG(滋养细胞糖蛋白)、TRAIL-R1(TNF相关坏死诱导配体受体1)、TRAILR2(死亡受体5(DR5))、肿瘤相关的钙信号传感子2、肿瘤特异糖基化的MUC1、TWEAK受体、TYRP1(糖蛋白75)、TRP-2、酪氨酸酶、VCAM-1(CD106)、VEGF、VEGF-A、VEGF-2(CD309)、VEGFR-1、VEGFR-2、vimentin、WT1、XAGE 1、表达胰岛素生长因子受体的细胞、或表达表皮生长因子受体的细胞。
在另一个具体实施例中、细胞结合分子可以是选自以下的配体或受体激动剂：叶酸衍生物(与叶酸受体结合、在卵巢癌和其他恶性肿瘤中超表达的蛋白质)(Low，PS等2008，Acc.Chem.Res.41，120-9)；谷氨酸脲衍生物(与前列腺特异性膜抗原结合、前列腺癌细胞的表面标志物)(Hillier，SM等，2009，Cancer Res.69，6932-40)；生长抑制素(也称为生长激素抑制激素(GHIH)或生长激素释放抑制因子(SRIF)或生长激素释放抑制激素)及其同系物，如奥曲肽(Sandostatin)和兰瑞肽(Somatuline)(特别是用于神经内分泌肿瘤，产生GH的垂体腺瘤、副神经节瘤、非功能性垂体腺瘤、嗜铬细胞瘤(Ginj，M.，等，2006，Proc.Natl.Acad.Sci.USA103，16436-41)，以下瘤中生长激素抑制素受体亚型(sst1、sst2、sst3、sst4和sst5)：分泌GH的垂体腺瘤(Reubi JC，L和olt，AM 1984J.Clin.EndocrinolMetab59：1148–51；Re ubi JC，L和olt AM 1987J Clin Endocrinol Metab 65：65–73；Moyse E，等，J Clin Endocrinol Metab 61：98–103)，胃肠胰腺肿瘤(Reubi JC，等，1987JClin Endocrinol Metab 65：1127–34；Reubi，J.C，等，1990Cancer Res 50：5969–77)，嗜铬细胞瘤(Epel-baum J，等1995J Clin Endocrinol Metab 80:1837–44；Reubi J C等，1992JClin Endocrinol Metab 74：1082–9)，神经母细胞瘤(Prevost G，1996Neuroendocrinology 63:188–197；Moertel，C.L，等1994Am J Clin Path102:752–756)，甲状腺髓样癌(Reubi，J.C，等1991Lab Invest 64:567–573)，小细胞肺癌(Sagman U，等，1990Cancer 66:2129–2133)，脑膜瘤、成神经管细胞瘤或胶质瘤(Reubi JC，等1986JClin Endocrinol Metab 63：433–8；Reubi JC，等1987Cancer Res 47：5758–64；Fruhwald，M.C，等1999Pediatr Res 45：697–708)，乳腺癌(Reubi JC，等1990Int J Cancer 46：416–20；Srkalovic G，等1990J Clin Endocrinol Metab 70：661–669)，淋巴瘤(Reubi JC，等1992，Int J Cancer50：895–900)，肾细胞癌(Reubi JC，等1992，Cancer Res 52：6074–6078)，间充质肿瘤(Reubi JC，等1996Cancer Res 56：1922–31)，前列腺癌(Reubi J C，等1995，J.Clin.Endocrinol Metab 80：2806–14；等1989，Prostate 14:191–208；Halmos G，等J.Clin.Endo-crinol Metab 85：2564–71)，卵巢癌(Halmos，G，等，2000J ClinEndocrinol Metab 85：3509–12；Reubi JC，等1991Am J Pathol 138:1267–72)，胃癌(Reubi JC，等1999，Int J Cancer 81：376–86；Miller，G.V，1992Br J Cancer 66：391–95)，肝癌(Kouroumalis E，等1998Gut 42：442–7；Reubi J C，等1999Gut45：66–774)及鼻咽癌(Loh K.S，等，2002Virchows Arch 441：444–8)；芳香磺酰胺(碳酸酐酶IX特异性)(缺氧和肾细胞癌的标志物)(Neri，D.，等，Nat.Rev.Drug Discov.2011，10，767-7)；垂体腺苷酸环化酶启动肽(PACAP)(PAC1)(用于嗜铬细胞瘤和副神经节瘤)；血管活肠肽(VIP)及其受体亚型(VPAC1，VPAC2)；α-黑素细胞刺激素(α-MSH)受体；胆囊收缩素(CCK)或胃泌素受体及其受体亚型(CCK1(以前称为CCK-A)和CCK2；血管活性肠肽(VIP)及其受体子类(VPAC1、VPAC2)；α-黑素细胞刺激素(α-MSH)受体；胆囊收缩素(CCK)或胃泌素受体及其受体亚型(CCK)；铃蟾肽(Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2)或胃泌素释放肽(GRP)及其受体子类(BB1，GRP受体子类(BB2)、BB3和BB4)(Ohlsson，B.，等，1999，Sc和.J.Gastroenterology 34(12)：1224–9；Weber，HC，2009，Cur.Opin.Endocri.Diab.Obesity 16(1)：66–71，Gonzalez N，等，2008，Cur.Opin.Endocri.Diab.Obesity15(1)，58-64)；神经降压素受体及其受体亚型(NTR1，NTR2，NTR3)；物质P受体及其受体亚型(例如神经胶质肿瘤的NK1受体，Hennig I M，等1995Int.J.Cancer 61，786–792)；神经肽Y(NPY)受体及其受体亚型(Y1–Y6)；归巢肽包括RGD(Arg-Gly-Asp)、NGR(Asn-Gly-Arg)、二聚和多聚环状RGD肽(如cRGDfV)(Laakkonen P，Vuorinen K.2010，Integr Biol(Camb).2(7–8)：326–337；Chen K，Chen X.2011，Theranostics.1:189–200；Garanger E，等，Anti-Cancer Agents Med Chem.7(5)：552–558；Kerr，JS等，Anticancer Research，19(2A)，959-968；Thumshirn，G，等，2003Chem.Eur.J.9，2717-2725)，及TAASGVRSMH或LTLRWVGLMS(硫酸软骨素蛋白多糖NG2受体)和F3肽(与细胞表面表达的核仁素受体结合的31个氨基酸肽)(Zitzmann，S.，2002Cancer Res.，62，18，5139–5143；Temminga，K.，2005，Drug Resistance Updates，8，381–402；P.Laakkonen和K.Vuorinen，2010Integrative Biol，2(7-8)，326–337；M.A.Burg，1999Cancer Res.，59(12)，2869–2874；K.Porkka等2002，Proc.Nat.Acad.Sci.USA 99(11)，7444-9)；细胞穿透肽(CPPs)(Nakase I，等，2012，J.Control Release.159(2)，181–188)；肽激素，例如促黄体激素释放激素(LHRH)的激动剂和拮抗剂，促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂，通过靶向卵泡刺激素(FSH)和促黄体激素(LH)以及睾酮产生而作用，如布舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt)、戈那瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、戈舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2)、组氨瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-Bn)-Leu-Arg-Pro-NHEt)、亮丙瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt)、那法瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、曲普瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、纳法瑞林、地洛林、阿贝瑞林(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-isopropylLys-Pro-DAla-NH2)、西曲瑞克(Ac-D-2Nal-D-4-chloro-Phe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2)、地加瑞克(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-4-aminoPhe(L-hydroorotyl)-D-4-aminoPhe(carba-moyl)-Leu-isopropylLys-Pro-D-Ala-NH2)和甘乃利(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-(N9，N10-diethyl)-homoArg-Leu-(N9，N10-diethyl)-homoArg-Pro-D-Ala-NH2)(Thundimadathil，J.，J.AminoAcids，2012，967347；Boccon-Gibod，L.；等，2011，Therapeutic Advances in Urology 3(3)：127–140；Debruyne，F.，2006，Future Oncology，2(6)，677–696；Schally A.V；Nagy，A.1999Eur J Endocrinol 141:1–14；Koppan M，等1999Prostate 38:151–158)；模式识别受体(PRRs)，如Toll样受体(TLRs)、C型凝集素和结节状的受体(NLRs)(Fukata，M.等，2009，Semin.Immunol.21，242–253；Maisonneuve，C.等，2014，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 111，1–6；Botos，I.等，2011，Structure 19，447–459；Means，T K等，2000，Life Sci.68，241–258)，其分子量范围从小分子(咪喹莫特、鸟嘌和腺苷同系物)到大型和复杂的生物大分子，如脂多糖(LPS)、核酸(CpG DNA，polyI:C)和脂肽(Pam3CSK4)(Kasturi，S P等，2011，Nature470，543–547；Lane，T.，2001，JR Soc.Med.94，316；Hotz，C.，和Bourquin，C.，2012，Oncoimmunology 1，227-228；Dudek，A Z等，2007，Clin.Cancer Res.13，7119–25)；降钙素受体，它是一种32-氨基酸神经肽，主要通过其对破骨细胞和肾脏的作用参与钙水平的调节(Zaidi M，等，1990Crit Rev Clin Lab Sci 28，109–174；Gorn，A H，等1995J ClinInvest95:2680–91)；整合素受体及其受体子类(如αVβ1，αVβ3，αVβ5，αVβ6，α6β4，α7β1，αLβ2，αIIbβ3等)，通常在血管生成中起重要作用，在多种细胞，特别是破骨细胞、内皮细胞和肿瘤细胞的表面表达(Ruoslahti，E.等，1994Cell 77，477-8；Albelda，SM等，1990CancerRes.，50，6757-64)。短肽，GRGDSPK和环状RGD五肽，如环(RGDfV)(L1)及其衍生物(环(-N(Me)R-GDfV)、环(R-Sar-DfV)、环-(RG-N(Me)D-fV)、环(RGD-N(Me)fV)、环(RGDf-N(Me)V-)(西仑吉肽))具有对整合素受体高亲和力(Dechantsreiter，MA等，1999J.Med.Chem.42，3033-40，Goodman，SL，等，2002J.Med.Chem.45，1045-51)。
细胞结合分子或配体或细胞受体激动剂可以是基于Ig和非基于Ig的蛋白质支架分子。基于Ig的支架可以选自但不限于，纳米抗体(VHH的衍生物(骆驼科动物Ig))(Muyldermans S.，2013Annu Rev Biochem.82，775–97)；结构域抗体(dAb，VH或VL结构域的衍生物)(Holt，L.J，等，2003，Trends Biotechnol.21，484–90)；双特异性T细胞接头(BiTE、双特异性双抗体)(Baeuerle，P.A等，2009，Curr.Opin.Mol.Ther.11，22–30)；双重亲和力复位向剂(DART，双特异性双抗体)(Moore PA P等.2011，Blood 117(17)，4542–51)；四价串联抗体(T和Ab，、二聚双特异性双抗体)(Cochlovius，B等.2000，Cancer Res.60(16):4336–4341)。非Ig支架可以选自但不限于，Anticalin(Lipocalins的衍生物)(Skerra A.2008，FEBS J.，275(11)：2677–83；Beste G等，1999Proc.Nat.Acad.USA.96(5):1898–903；Skerra，A.2000Biochim Biophys Acta，1482(1-2)：337–50；Skerra，A.2007，Curr OpinBiotechnol.18(4)：295–304；Skerra，A.2008，FEBS J.275(11):2677–83)；Adnectin(第10个FN3(纤连蛋白))(Koide，A等，1998J.Mol.Biol.，284(4):1141–51；Batori V，2002，Protein Eng.15(12)：1015–20；Tolcher，A.W，2011，Clin.Cancer Res.17(2)：363–71；Hackel，B.J，2010，Protein Eng.Des.Sel.23(4)：211–19)；设计的锚蛋白重复蛋白(DARPins)(锚蛋白重复(AR)蛋白的衍生物)(Boersma，Y L等，2011Curr OpinBiotechnol.22(6)：849–57)，例如DARPin C9、DARPin Ec4及DARPinE69_LZ3_E01(WinklerJ等，2009Mol Cancer Ther.8(9)，2674–83；Patricia MK.M.等，Clin Cancer Res.2011；17(1):100–10；Boersma Y.L等，2011J.Biol.Chem.286(48)，41273–85)；高亲和性多聚体(域A/低密度脂蛋白(LDL)受体)(Boersma Y.L，2011J.Biol.Chem.286(48)：41273–41285；Silverman J等，2005Nat.Biotechnol.，23(12):1556–61)。
本专利申请的小分子细胞结合分子/配体或细胞受体激动剂的结构示例如下：LB01(叶酸)、LB02(PMSA配体)、LB03(PMSA配体)、LB04(PMSA配体)、LB05(生长抑制素)、LB06(生长抑制素)、LB07(奥曲肽、生长抑制素同系物)、LB08(兰瑞肽、生长抑制素同系物)、LB09(伐普肽(Sanvar)、生长抑制素同系物)、LB10(CAIX配体)、LB11(CAIX配体)、LB12(胃泌素释放肽受体(GRPr)、MBA)、LB13(促黄体激素释放激素(LH-RH)和GnRH配体)、LB14(促黄体激素释放激素(LH-RH)和GnRH配体)、LB15(GnRH拮抗剂、Abarelix)、LB16(钴胺素、维生素B12同系物)、LB17(钴胺素、维生素B12同系物)、LB18(用于αvβ3整联蛋白受体、环状RGD五肽)、LB19(VEGF受体的异二价肽配体)、LB20(神经髓质素B)、LB21(蛙皮素，作用于G蛋白偶联受体)、LB22(TLR2，作用于类Toll受体)、LB23(作用于雄性激素受体)、LB24(西仑吉肽或环(-RGDfV-)结合物，作用于αv整合素受体)LB25(利福布汀同系物)、LB26(利福布汀同系物)、LB27(利福布汀同系物)、LB28(氟氢可的松)、LB29(地塞米松)、LB30(丙酸氟替卡松)、LB31(丙酸倍氯米松)、LB32(醋酸曲安奈德)、LB33(泼尼松龙)、LB35(甲基强的松龙)、LB36(倍他米松)、LB37(伊立替康同系物)、LB38(克唑替尼同系物)、LB39(硼替佐米同系物)、LB40(卡菲佐米同系物)、LB41(卡非佐米同系物)、LB42(亮丙瑞林同系物)、LB43(曲普瑞林同系物)、LB44(克林霉素)、LB45(利拉鲁肽同系物)、LB46(半长春新碱同系物)、LB47(瑞他帕林同系物)、LB48(丁布尔同系物)、LB49(长春碱同系物)、LB50(利西森肽同系物)、LB51(奥西丁尼同系物)、LB52(核苷同系物)、LB53(厄洛替尼同系物)和LB5 4(拉帕替尼同系物)，其结构如下所示：
Figure BDA0003161812140001141
LB01(叶酸偶联物)，
Figure BDA0003161812140001142
LB02(PMSA配体偶联物)，
Figure BDA0003161812140001143
LB03(PMSA配体偶联物)，
Figure BDA0003161812140001151
LB04(PMSA配体)，
Figure BDA0003161812140001152
LB05(生长激素抑制素)，
Figure BDA0003161812140001153
LB06(生长激素抑制素)，
Figure BDA0003161812140001154
LB07(奥曲肽、生长抑制素同系物)，
Figure BDA0003161812140001155
LB08(兰肽、生长抑制素同系物)，
Figure BDA0003161812140001161
LB09(氨肽(Sanvar)、生长抑制素同系物)，
Figure BDA0003161812140001162
LB10(CAIX配体)，
Figure BDA0003161812140001163
LB11(CAIX配体)，
Figure BDA0003161812140001164
LB12(胃泌素释放肽受体(GRPr)，MBA)，
Figure BDA0003161812140001165
LB13(促黄体激素释放激素(LH-RH)和促性腺激素释放激素GnRH配体)，
Figure BDA0003161812140001171
LB14(促黄体激素释放激素(LH-RH)和促性腺激素释放激素GnRH配体)，
Figure BDA0003161812140001172
LB15(GnRH拮抗物、阿巴瑞克)，
Figure BDA0003161812140001173
LB16(钴胺素，维生素B12同系物)，
Figure BDA0003161812140001181
LB17(钴胺素，维生素B12同系物)，
Figure BDA0003161812140001182
LB18(环RGD五肽，作用于αvβ3整联蛋白受体)，
Figure BDA0003161812140001183
LB19(异源二价肽配体偶联物，作用于血管内皮生长因子VEGF受体)，
Figure BDA0003161812140001184
LB20(神经髓质素B)，
Figure BDA0003161812140001185
LB21(蛙皮素偶联物，作用于G蛋白偶联受体)，
Figure BDA0003161812140001191
LB22(TLR2偶联物，作用于类Toll受体)，
Figure BDA0003161812140001192
LB23(雄激素受体)，
Figure BDA0003161812140001193
LB24(西伦吉肽/环(-RGDfV-)偶联物，作用于αv整合素受体)
Figure BDA0003161812140001194
LB25(利福布汀同系物)，
Figure BDA0003161812140001195
LB26(利福布汀同系物)，
Figure BDA0003161812140001201
LB27(利福布汀同系物)，
Figure BDA0003161812140001202
LB28(氟氢可的松)，
Figure BDA0003161812140001203
LB29(地塞米松)，
Figure BDA0003161812140001204
LB30(丙酸氟替卡松)，
Figure BDA0003161812140001205
LB31(倍氯米松丙酸酯)，
Figure BDA0003161812140001211
LB32(曲安奈德)，
Figure BDA0003161812140001212
LB33(泼尼松)，
Figure BDA0003161812140001213
LB34(泼尼松龙)，
Figure BDA0003161812140001214
LB35(甲基强的松龙)，
Figure BDA0003161812140001215
LB36(倍氟美松)，
Figure BDA0003161812140001216
LB37(伊立替康同系物)，
Figure BDA0003161812140001221
LB38(克唑替尼同系物)，
Figure BDA0003161812140001222
LB39(硼替佐米同系物)，其中Y5是N、CH、C(Cl)、C(CH3)或C(COOR1)；R1是H、C1-C6烷基、C3-C8芳基；
Figure BDA0003161812140001223
LB40(卡菲佐米同系物)，
Figure BDA0003161812140001224
LB41(卡菲佐米同系物)，
Figure BDA0003161812140001225
LB42(亮丙瑞利同系物)，
Figure BDA0003161812140001231
LB43(曲普瑞林同系物)，
Figure BDA0003161812140001232
LB44(克林霉素)，
Figure BDA0003161812140001233
LB45(利拉鲁肽同系物)，
Figure BDA0003161812140001234
LB46(索马鲁肽同系物)，
Figure BDA0003161812140001235
LB47(瑞他帕林同系物)，
Figure BDA0003161812140001236
LB48(丁布尔同系物)，
Figure BDA0003161812140001241
LB49(长春碱同系物)，
Figure BDA0003161812140001242
LB50(利西森肽同系物)，
Figure BDA0003161812140001243
LB51(奥西丁尼同系物)，
Figure BDA0003161812140001244
LB52(核苷同系物)，
Figure BDA0003161812140001245
LB53(埃罗替尼同系物)，
Figure BDA0003161812140001251
LB54(拉帕替尼同系物)，
其中
Figure BDA0003161812140001252
是支链连接子的连接位置；X4和Y1独立地是O、NH、NHNH、NR1、S、C(O)O、C(O)NH、OC(O)NH、OC(O)O、NHC(O)NH、NHC(O)S、OC(O)N(R1)、N(R1)C(O)N(R1)、CH2、C(O)NHNHC(O)和C(O)NR1；X1是H、CH2、OH、O、C(O)、C(O)NH、C(O)N(R1)、R1、NHR1、NR1、C(O)R1或C(O)O；X5是H、CH3、F、或Cl；M1和M2独立的是H、Na、K、Ca、Mg、NH4、N(R12R12’R13 R13’)；R12、R12’、R13和R13’定义同式(I)。
偶联物的应用
在一个具体实施例中，通过本专利的支链连接子连接的细胞结合剂-药物偶联物，可用作癌症靶向治疗。目标癌症包括但不限于，肾上腺皮质癌、肛门癌、膀胱癌、大脑肿瘤(脑干神经胶质瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、幕上原始神经外胚层和松果体肿瘤、视觉通路和下丘脑胶质瘤)、乳腺癌、类癌肿瘤、胃肠道癌症、未知小细胞癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、肝外胆管癌、尤因家族肿瘤(PNET)、颅内生殖细胞肿瘤、眼癌、眼内黑色素瘤、胆囊癌、胃癌(胃癌)、性腺外生殖细胞瘤、孕周滋养细胞瘤、头颈癌、下咽癌、胰岛细胞癌、肾癌(肾细胞癌)、喉癌、白血病(急性淋巴细胞，急性髓系，慢性淋巴细胞，慢性粒细胞，毛细胞)、嘴唇和口腔癌症、肝癌、肺癌(非小细胞，小细胞)、淋巴瘤(艾滋病相关，中枢神经系统，皮肤T细胞，霍奇金病，非霍奇金病)、恶性间皮瘤、黑色素瘤、梅克尔细胞癌、转移性鳞状颈癌与隐匿性原发性癌、多发性骨髓瘤和其他浆细胞肿瘤、蕈样肉芽肿、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌(上皮、生殖细胞瘤、低恶性肿瘤)、胰腺癌(外分泌，胰岛细胞癌)、副鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、浆细胞肿瘤、前列腺癌横纹肌肉瘤、直肠癌、肾细胞癌(肾癌)、肾盂和输尿管(移行细胞)、唾腺癌、赛塞里综合症、皮肤癌(皮肤T细胞淋巴瘤，卡波西氏肉瘤，黑色素瘤)、小肠肿瘤、软组织肉瘤、胃癌、睾丸癌、胸腺瘤(恶性)、甲状腺癌、尿道癌症、子宫癌、不寻常的少年癌症、阴道肿瘤、外阴肿瘤和维尔姆斯瘤。
在另一个具体的实施例中，通过本专利的支链连接子连接的细胞结合剂-药物偶联物，可用作治疗或预防自身免疫疾病的成分和方法。自身免疫性疾病包括但不限于，Achlorhydra自身免疫性活动性慢性肝炎、急性播散性脑脊髓炎、急性出血性脑白质炎、艾迪生病、无精症、斑秃、肌萎缩侧索硬化症、强直性脊柱炎、抗GBM/TBM肾炎、抗磷脂综合征、抗异常酶综合征、关节炎、特应性过敏、特应性皮炎、自身免疫性再生障碍性贫血、自身免疫性心肌病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病、自身免疫性淋巴组织增生综合征、自身免疫性周围神经病、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性多内分泌综合征I、II和III型、自身免疫性黄体酮皮炎、自身免疫性血小板减少性紫癜、自身免疫性葡萄膜炎、Balo病/Balo同心硬化症、Bechets综合征、Berger氏病、Bickerstaff脑炎、Blau综合征、大疱性类天疱疮、Castleman病、Chagas病、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、慢性复发性多灶性骨髓炎、慢性莱姆病、慢性阻塞性肺病、Churg-Strauss综合征、瘢痕性类天疱疮、乳糜泄、Cogan综合征、冷凝集素病、补体成分2缺乏症、颅骨动脉炎、CREST综合征、Crohns病(特发性炎症性肠病)、库欣综合征、皮肤白细胞增多性血管炎、德戈氏病、Dercum氏病、疱疹样皮炎、皮肌炎、1型糖尿病、弥漫性皮肤系统性硬化症、Dressler综合征、盘状红斑狼疮、湿疹、子宫内膜异位症、附着点炎相关的关节炎、Eosinophilic筋膜炎、大疱性表皮松解症、结节性红斑、特发性混合性冷球蛋白血症、伊文氏综合征、纤维发育不良性骨化症、纤维肌痛、纤维化性肌炎、纤维性肺泡炎、胃炎、胃肠类天疱疮、巨细胞动脉炎、肾小球肾炎、古德帕斯丘尔综合征、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、溶血性贫血、过敏性紫癜、妊娠性肝炎、化脓性汗腺炎、休斯综合征(抗磷脂综合征)、低丙球蛋白血症、特发性炎性脱髓鞘疾病、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(自身免疫性血小板减少性紫癜)、IgA肾病(伯杰氏病)、包涵体肌炎、炎性脱髓鞘性多神经炎、间质性膀胱炎、过敏性肠综合征、少年特发性关节炎、青少年类风湿性关节炎、川崎氏病、朗伯-伊顿重症肌无力综合征、白细胞碎屑性血管炎、扁平苔癣、硬化性硬化症、线状IgA疾病(LAD)、Lou Gehrig病(也称肌萎缩侧索硬化症)、狼疮性肝炎、红斑狼疮、Majeed综合征、美尼尔氏病、显微镜下多动脉炎、米勒-费希尔综合征、混合性结缔组织病、硬斑病、穆罕默德-哈贝曼病、麦考利综合征、多发性骨髓瘤、多发性硬化症、重症肌无力、肌炎、嗜睡症、视神经脊髓炎(Devic病)、神经性肌强直、眼睑瘢痕性类天疱疮、Opsoclonus myoclonus综合征、Ord甲状腺炎、回文风湿病、PANDAS(与链球菌相关的小儿自身免疫性神经精神病)、Paraneoplastic小脑变性、阵发性睡眠性血红蛋白尿症、ParryRomberg综合征、Parsonnage-Turner综合征、睫状体平部炎、天疱疮、寻常型天疱疮、贫血、周围脑脊髓炎、POEMS综合征、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、进行性炎症性神经病变、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、坏疽性皮肤炎、纯红细胞再生障碍、Rasmussen脑炎、雷诺现象、复发性多软骨炎、赖特综合征、不宁腿综合症、后神经纤维化、类风湿性关节炎、类风湿热、结节病、精神分裂症、施密特综合征、Schnitzler综合征、施尼茨勒综合征、巩膜炎、硬皮病、干燥综合征、脊椎关节病、粘稠血症、Still病、僵人综合征、亚急性细菌性心内膜炎、苏萨克综合征、Sweet综合征、小舞蹈病、交感神经性贫血、Takayasu动脉炎、颞动脉炎(巨细胞动脉炎)、Tolosa-Hunt综合征、横贯性脊髓炎、溃疡性结肠炎(特发性炎性肠病)、未分化结缔组织病、未分化脊柱关节病、血管炎、白癜风、韦格纳肉芽肿病、威尔逊氏综合征、威斯科特-奥尔德里奇综合征。
在另一个具体的实施例中，在用于治疗或预防自身免疫性疾病的偶联物上，和药物分子通过本专利的支链连接子连接的结合分子，包括但不限于，抗弹性蛋白抗体、Abys抗上皮细胞抗体、抗地下室膜IV型胶原蛋白抗体、抗核抗体、抗ds DNA、抗ss DNA、抗心磷脂抗体IgM、IgG、抗乳糜泻抗体、抗磷脂抗体IgK、IgG、抗SM抗体、抗线粒体抗体、甲状腺抗体、微粒体抗体、T细胞抗体、甲状腺球蛋白抗体、抗SCL-70、抗Jo、抗U.sub.1RNP、抗La/SSB、抗SSA、抗SSB、抗壁细胞抗体、抗组蛋白、抗RNP、C-ANCA、P-ANCA、抗着丝粒、抗纤维蛋白原、抗GBM抗体、抗神经节苷脂抗体、抗Desmogein 3抗体、抗p62抗体、抗sp100抗体、抗线粒体(M2)抗体、类风湿因子抗体、抗MCV抗体、抗拓扑异构酶抗体、抗中性粒细胞胞质(cANCA)抗体。
在某些优选的实施例中，本专利中偶联物上的结合分子，可以与自身免疫性疾病相关的活化淋巴细胞上表达的受体或受体复合物相结合。受体或受体复合物包含，免疫球蛋白基因超家族成员(例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD22、CD28、CD30、CD33、CD37、CD38、CD56、CD70、CD79、CD79b、CD90、CD125、CD147、CD152/CTLA-4、PD-1或ICOS)、TNF受体超家族成员(例如CD27、CD40、CD95/Fas、CD134/OX40、CD137/4-1BB、INF-R1、TNFR-2、RANK、TACI、BCMA、骨保护素、Apo2/TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRAIL-R3、TRAIL-R4和APO-3)、整合蛋白、细胞因子受体、趋化因子受体、主要组织兼容性蛋白、凝集素(C型、S型或I型)或补体控制蛋白。
在另一个具体实施例中，可用的对病毒或微生物抗原具有免疫特异性的细胞结合配体是人源化或人单克隆抗体。“病毒抗原”包括但不限于，任何能够引发免疫应答的病毒肽，多肽蛋白(例如HIV gp120，HIV nef，RSV F糖蛋白，流感病毒神经氨酸苷酶，流感病毒血凝素，HTLV Tax，疱疹单纯疱疹病毒糖蛋白(例如gB，gC，gD和gE)和乙型肝炎表面抗原)。“微生物抗原”包括但不限于，任何能够引发免疫应答的微生物肽，多肽，蛋白质，糖，多糖或脂质分子(例如细菌，真菌，致病原生动物或酵母多肽，包括如LPS和荚膜多糖)。可用于治疗病毒或微生物感染的抗体的实例，包括但不限于：帕利珠单抗，它是用于治疗RSV感染的，人源化抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体；PRO542，是一种CD4融合抗体，用于治疗HIV感染；奥斯他韦，是一种用于治疗乙型肝炎病毒的人抗体；PROTVIR，是一种人源化IgG1抗体，用于治疗巨细胞病毒，和抗LPS抗体。
通过本专利的支链连接子制得的细胞结合分子-药物偶联物可用于治疗感染性疾病。这些感染性疾病包括但不限于，不动杆菌属感染、放线菌病、非洲昏睡病(非洲锥虫病)、艾滋病(获得性免疫缺陷综合症)、阿米巴病、无形体病、炭疽、溶血性耶尔森菌感染、阿根廷出血热、蛔虫病、曲霉病、星状病毒感染、巴贝斯虫病、蜡状芽孢杆菌感染、细菌性肺炎、细菌性阴道炎、类杆菌感染、小袋虫病、蛔虫感染、BK病毒感染、黑色发结节病、人芽囊原虫感染、芽生菌病、玻利维亚出血热、疏螺旋体感染、肉毒中毒(和婴儿肉毒中毒)、巴西出血热、布鲁氏杆菌病、伯克霍尔德氏菌感染、布鲁里溃疡、杯状病毒感染(诺如病毒和沙波病毒)、弯曲杆菌病、念珠菌病(念珠菌病、鹅口疮)、猫抓病、蜂窝组织炎、Chagas病(美洲锥虫病)、子囊、水痘、衣原体、肺炎衣原体感染、霍乱、色素母细胞瘤、华支睾吸虫、艰难梭状芽孢杆菌感染、球孢子菌病、科罗拉多蜱热病、普通感冒(急性病毒性鼻咽炎、急性鼻炎)、克雅氏病、克里米亚-刚果出血热、隐球菌病、隐孢子虫病、皮肤幼虫迁徙、环孢子虫病、肠杆菌感染、肠道病毒感染、流行性斑疹伤寒、传染性红斑(第五种疾病)、急疹、姜片虫病、肝片吸虫病、致命性家族性失眠、丝虫病、产气荚膜梭菌食物中毒、自由活体阿米巴感染、梭杆菌感染、气性坏疽(梭菌性肌坏死)、地丝菌病、格斯特曼-斯特拉斯勒-谢克尔病综合征、贾第鞭毛虫病、马鼻疽、淋病、肉芽肿性腹泻(第五性病)、A群链球菌感染、B群链球菌感染、流感嗜血杆菌感染、手足口病(HFMD)、汉坦病毒肺综合征、幽门螺杆菌感染、溶血性尿毒综合征、肾综合征出血热、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、单纯性疱疹、组织胞浆菌病、钩虫感染、人类博卡病毒感染、人类ewingii埃里希体病、人类粒细胞无形体病、人类偏肺病毒感染、人类单核细胞埃里希体病、人乳头瘤病毒感染、人副流感病毒感染、膜壳绦虫病、艾巴氏病毒传染性单核细胞增多症(单)、流行性感冒、等孢子虫病、川崎病、角膜炎、金格杆菌感染、库鲁病、拉沙热、军团病(退伍军人症)、军团病(庞蒂亚克热)、利什曼病、莱姆病、淋巴丝虫病(象皮病)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎、疟疾、马尔堡出血热、麻疹、类鼻疽病(惠氏病)、脑膜炎、脑膜炎球菌病、后殖吸虫病、微孢子虫病、传染性软疣、腮腺炎、小鼠斑疹伤寒(地方性斑疹伤寒)、支原体肺炎、足菌肿、蝇蛆病、新生儿结膜炎(新生儿眼病)、变异型克雅氏病(vCJD、nvCJD)、诺卡氏菌病、盘尾丝虫病(河盲症)、副球孢子菌病(南美芽生菌病)、肺吸虫病、巴斯德氏菌病、头虱、体虱、阴虱、盆腔炎、百日咳、鼠疫、肺炎球菌感染、肺孢子虫肺炎、肺炎、脊髓灰质炎、普氏菌感染、原发性阿米巴脑膜脑炎、进行性多灶性白质脑病、鹦鹉热、Q热、狂犬病、鼠咬热、呼吸道合胞病毒感染、鼻孢子虫病、鼻病毒感染、立克次体感染、立克次体痘、裂谷热、落基山斑疹热、轮状病毒感染、风疹、沙门氏菌病、SARS(严重急性呼吸综合征)、疥疮、血吸虫病、败血症、志贺氏菌病(Bacillary痢疾)、带状疱疹(带状疱疹)、天花(天花)、孢子丝菌、葡萄球菌食物中毒、感染金黄色葡萄球菌、粪类圆线虫病、梅毒、绦虫病、破伤风、须癣(Barber痒)、头皮癣、体癣、股癣、手癣、掌黑癣、足癣(香港脚)、甲癣(灰指甲)、花斑癣、弓蛔虫病(眼幼虫移行症)、弓蛔虫病(内脏幼虫移行症)、弓形体病、旋毛虫病、滴虫病、鞭虫病(鞭虫感染)、肺结核、兔热病、解脲脲原体感染、委内瑞拉马脑炎、委内瑞拉出血热、病毒性肺炎、西尼罗河热、白毛结节病(白癣)、假结核耶尔森氏菌、耶尔森氏鼠疫杆菌肠道病、黄热病、接合菌病。
本发明的偶联物优选的能对抗的病原菌株包括但不限于，鲍氏不动杆菌、以色列放线菌、放线菌和丙酸杆菌、布氏锥虫、HIV(人免疫缺陷病毒病毒)、溶组织内阿米巴、无形体属、炭疽芽孢杆菌、溶血弧菌、胡宁病毒、蛔虫属、曲霉属、星状病毒科、巴贝虫属、蜡状芽孢杆菌、多种细菌、拟杆菌属、大肠杆菌、蛔虫属、BK病毒、结节菌、人芽囊原虫、皮炎芽生菌、马丘波病毒、疏螺旋体属、肉毒梭菌、清风藤属、布鲁氏菌属、通常为洋葱伯克霍尔德菌和其他伯克霍尔德氏菌种、溃疡分枝杆菌、杯状病毒科、弯曲杆菌属、通常为白色假丝酵母和其他假丝酵母属、汉赛巴尔通体、A群链球菌和葡萄球菌、克氏锥虫、杜克雷嗜血杆菌、VZV、沙眼衣原体、科罗拉多蜱热病毒、鼻病毒、冠状病毒、CJD朊病毒、克里米亚-刚果出血热病毒、新型隐球菌、隐孢子虫属、巴西钩虫、多种寄生虫、环孢子虫、带状绦虫、巨细胞病毒、登革热病毒(DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4)-黄病毒、脆弱双歧杆菌、白喉棒状杆菌、裂头绦虫、麦地那龙线虫、埃博拉病毒、棘球绦虫属、埃立克体肠球菌属、肠道病毒属、普氏立克次体、细小病毒B19、人疱疹病毒6和人疱疹病毒7、布氏姜片虫、肝片吸虫和巨大片吸虫、FFI朊病毒、丝虫目超家族、产气荚膜梭菌、梭杆菌属、其他梭状芽孢杆菌、白地霉、GSS朊病毒、肠道贾第虫、伯克霍尔德氏菌、刺孢小芽孢杆菌和革兰氏假丝酵母、淋球菌、肉芽肿克雷伯氏菌、化脓性链球菌、无乳链球菌、流感嗜血杆菌、肠道病毒、主要是柯萨奇A病毒和肠道病毒71、无名病毒、幽门螺旋杆菌、大肠杆菌O157：H7、布尼亚病毒科、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒1、单纯疱疹病毒2、荚膜组织胞浆菌、十二指肠腺瘤和壶腹癌流感嗜血杆菌、人博卡病毒、埃里希体、嗜吞噬细胞无嗜血杆菌、人偏肺病毒、查菲埃里希体、人乳头瘤病毒、人副流感病毒、微小膜壳绦虫和缩小膜壳绦虫、艾巴氏病毒、正粘病毒科家族、贝氏等孢球虫、金格杆菌、肺炎克雷伯菌、克雷伯氏菌、嗜肺军团菌、嗜肺军团菌、嗜肺军团菌、利什曼原虫属、麻风分枝杆菌和结核分枝杆菌、钩端螺旋体属、单核细胞增多性李斯特氏菌、伯氏疏螺旋体和其他疏螺旋体属物种、班氏旋毛虫和马来丝虫、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)疟原虫属、马尔堡病毒、麻疹病毒、类鼻疽伯克霍尔德氏菌、脑膜炎奈瑟氏球菌、横川后殖吸虫、小孢子虫目门、传染性软疣病毒(MCV)、腮腺炎病毒、伤寒立克次氏体、肺炎支原体、多种细菌和真菌寄生双翅蝇幼虫、沙眼衣原体和淋病奈瑟菌、vCJD朊病毒、诺卡氏菌和其他诺卡氏菌属、盘尾丝虫属、盘鲍拟亚科、副龙属西马尼和其他副属、巴斯德氏菌属、头虱、人体虱、百日咳博德特氏菌鼠疫耶尔森氏菌、肺炎链球菌、肺炎球菌、脊髓灰质炎病毒、普雷沃氏菌属、奈氏格氏杆菌、JC病毒、鹦鹉热衣原体、伯氏考克斯体、狂犬病病毒、单链球菌和螺旋菌、呼吸道合胞病毒、鼻孢子菌、鼻病毒、立克次体属、由小株立克次体、裂谷热病毒、立克次体立克次体、轮状病毒、风疹、沙门氏菌属、SARS冠状病毒、人疥螨、血吸虫属、体细胞属、志贺菌属、水痘带状疱疹病毒、天花少校或天花小、申克孢子丝菌、金黄色葡萄球菌属、金黄色葡萄球菌、链球菌化脓、圆线虫、梅毒螺旋体、绦虫属、破伤风、癣属癣音铀、癣属、絮状表皮癣菌、红色毛癣菌、须毛癣菌、红色毛癣菌、威尼克外瓶霉、毛癣菌属属、细胞死亡属、弓箭毒或弓箭毒、刚地弓形虫、旋毛虫、阴道毛滴虫、三丘里三种、结核分枝杆菌、弗朗西拉图拉菌、尿素和马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、霍乱弧菌、瓜纳里托病毒、西尼罗河病毒、beigelii丝孢、假结核耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、黄热病病毒、毛霉菌目阶(毛霉菌病)和虫霉目阶(虫霉属真菌病)、毛霉菌目绿脓杆菌、弯曲杆菌(弧菌)、气单胞菌、艾氏菌、耶尔森氏菌、志贺痢疾杆菌、志贺氏杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、雅司螺旋体、奋森氏螺旋体、伯氏疏螺旋体、细螺旋体、卡氏肺孢子虫、流产布鲁氏菌、布鲁杆菌、布鲁氏菌、支原体属、普氏立克次体、恙虫病立克次氏体、衣原体属、致病性真菌(烟曲霉、白色念珠菌、荚膜组织胞浆菌)、原生动物(溶组织内阿米巴、Tenas毛滴虫、Hominis毛滴虫、冈比亚锥虫、罗得西亚锥虫、罗氏利什曼原虫、热带利什曼原虫、巴西利什曼原虫、肺孢子虫肺炎、间日疟原虫、恶性疟原虫、疟原虫疟疾)或Helminiths(日本血吸虫、曼氏血吸虫、埃及血吸虫和钩虫)。
其他用作治疗病毒性疾病的偶联物、包括但不限于，抗下列致病性病毒抗原的抗体：痘病毒、疱疹病毒、腺病毒、小黄病毒、肠病毒、小核糖核酸病毒、细小病毒、呼肠病毒、逆转录病毒、流感病毒、副流感病毒、腮腺炎、麻疹、呼吸道合胞病毒、风疹、虫媒病毒、弹状病毒、沙门氏菌、非a/非b型肝炎病毒、鼻病毒、冠状病毒、罗托病毒、致癌病毒，如HBV(肝细胞癌)、人乳头状瘤病毒(宫颈癌、肛门癌)、卡波济氏肉瘤相关的疱疹病毒(卡波济氏肉瘤肉瘤)、人类疱疹病毒第四型(鼻咽癌、伯基特淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤)、瘤病毒(默克尔细胞癌)、SV40(猿猴病毒40)、HCV(肝细胞癌)、HTLV-1(成人T细胞白血病/淋巴瘤)、免疫紊乱导致病毒，如人类免疫缺陷病毒(艾滋病)、中枢神经系统病毒，如JCV(进行性多灶性脑白质病)、丙型肝炎病毒(亚急性硬化性全脑炎)、LCV(淋巴细胞性脉络丛脑膜炎)、亚博病毒脑炎、正粘病毒(脑炎性脑炎)、RV(狂犬病)、长鼻病毒、疱疹病毒脑膜炎、拉姆齐亨特综合征II型、脊髓灰质炎病毒(脊髓灰质炎病毒、后脊髓灰质炎综合征)、HTLV-1(热带麻痹性麻痹))、巨细胞病毒(巨细胞病毒视网膜炎、HSV(疱疹性角膜炎)、心血管病毒、如CBV(心包炎、心肌炎)、呼吸系统/急性病毒性鼻内炎/病毒性肺炎、如爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV感染/传染性单核病)、巨细胞病毒、非典冠状病毒(严重急性呼吸综合征)或正黏液病毒、流感病毒a/b/c(流感/禽流感)、副粘病毒、人类副流感病毒、RSV(人类呼吸道合胞病毒)、hMPV、消化系统病毒(腮腺炎病毒、巨细胞病毒(巨细胞病毒食管炎)、腺病毒(腺病毒感染)、轮状病毒、诺瓦克病毒、星状病毒、冠状病毒、乙型肝炎病毒、CBV、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、HGV)、泌尿生殖病毒，如BK病毒、MuV(腮腺炎)。
更进一步，本发明也包括本发明中偶联物和可接受的载体，稀释剂或辅料构成的组合物，以治疗癌症、感染或自身免疫性疾病。治疗癌症、感染和自身免疫性疾病的方法可以在体外，体内或离体实施。体外用途的实例包括用它处理细胞培养物，以杀死除了不表达靶抗原的变体以外的所有细胞；或者杀死表达不需要的抗原的变体。离体使用的例子包括在进行移植(HSCT)之前对造血干细胞(HSC)进行处理，以杀死患病或恶性肿瘤细胞。例如，在癌症治疗中的自体移植之前或在自身免疫性疾病的治疗中从骨髓中去除肿瘤细胞或淋巴细胞，或在移植之前为了防止移植物抗宿主疾病从同种异体骨髓或组织中除去T细胞和其他淋巴细胞。这样的临床离体治疗可以按如下步骤进行：从患者或其他个体收获骨髓，然后在含有血清的培养基中约37℃下孵育约15分钟至约48小时，在该培养基中加入本发明的偶联物，浓度范围从约1pM至0.1mM。具体的药物浓度和孵育时间应当由专业临床医师决定。孵育后，用含血清的培养基洗涤骨髓细胞，并按照已知的方法通过静脉注射给患者。若患者在骨髓采集和再输注治疗细胞之间，还接受其它治疗(例如消融化疗或全身辐射疗程)的情况下，应使用标准医疗设备将处理后的骨髓细胞在液氮中冷冻储存。
用于协同作用的化学治疗药物或细胞毒性药物
可以与本发明一起协同作用的化学治疗药物是包括细胞毒性剂在内的小分子药物。本发明中的“小分子药物”泛指分子量为100至2500，更优200至2000的有机、无机或金属有机化合物。这些小分子药物在本领域文献中已被充分描述，如WO05058367A2和美国专利4，956，303，以及Chessum，N.，等，Prog Med Chem.2015，54：1-63；Eder，J.，等，Nat RevDrug Discov.2014，13(8)：577-87；Zhang，M.-Q.，等，Curr Opin Biotechnol.2007，18(6)：478-88；此处引作参考。小分子药物包括已知的药物和即将被公开的药物。
已知的药物包括但不限于：
1)化疗药物：a)烷基化剂、如氮芥：氯苯那普、氯普那嗪、环磷酰胺、达喀尔巴嗪、雌二醇氮芥、异环磷酰胺、氮芥、盐酸二甲氧胺、氧化二氮芥、盐酸氨氯地平、麦考酚酸、卫矛醇、呱泊溴烷、新氮芥、苯芥胆甾醇、松龙苯芥、噻替呱、曲磷胺对、尿嘧啶；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新、比折来新及其合成同系物)；多卡霉素(包括KW-2189和CBI-TMI、及其合成同系物)；苯并二氮卓二聚体(例如吡咯苯并二氮卓(PBD)或托美霉素、吲哚苯并二氮卓、咪唑苯并噻二氮卓或恶唑烷苯并二氮卓的二聚体)；亚硝基脲(卡莫司汀、洛莫司汀、氯化梭菌素、福莫司汀、尼莫司汀、拉莫司汀)；烷基磺酸盐(白苏芬、树苏芬、磺胺异丙磺胺和皮苏芬)；三氮烯(达喀尔巴嗪)；含铂化合物(卡铂、顺铂、奥沙利铂)；吖丙啶类、如苯并二氢吡喃酮、卡洛酮、美妥替派和乌雷多巴；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺、包括六甲蜜胺、三亚乙基三胺、三乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基甲基胺；b)植物生物碱：如长春花生物碱(长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨、去甲长春碱)；紫杉醇类(紫杉醇、多西紫杉醇及其同系物)；美登素类(DM1、DM2、DM3、DM4、美登素、安沙霉素及其同系物)；cryptophycin(特别是cryptophycin 1和cryptophycin 8)；埃博霉素、软珊瑚醇、迪莫利德、草苔虫内酯、海兔毒素、奥瑞他汀、cephalostatin；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑制素；c)DNA拓扑异构酶抑制剂、例如依托泊苷替尼(9-氨基喜树碱、喜树碱、克立那托、多拉霉素、依托泊苷、磷酸依托泊苷、伊立替康、米托蒽醌、诺消灵、视黄酸(视黄醇)、替尼泊苷、拓扑替康、9-硝基喜树碱(RFS 2000))；丝裂霉素(丝裂霉素C)；d)抗代谢物、例如抗叶酸剂、DHFR抑制剂(甲氨蝶呤、曲麦克特、二甲叶酸、蝶罗呤、氨喋呤(4-氨基苯甲酸)或其他叶酸同系物)；IMP脱氢酶抑制剂(麦考酚酸、噻唑呋林、利巴韦林、EICAR)；核糖核苷酸还原酶抑制剂(羟基脲、去铁胺)；嘧啶同系物、尿嘧啶同系物(安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿嘧啶、卡培他滨(希罗达)、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、ratitrexed(Tomudex)；胞嘧啶同系物(阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷、氟达拉滨)；嘌呤同系物(硫唑嘌呤、氟达拉滨、巯嘌呤、硫胺素、硫鸟嘌呤)；叶酸补充剂、如弗洛林酸；e)激素疗法剂、如受体拮抗剂、抗雌激素(甲地孕酮、雷洛昔芬、他莫昔芬)、LHRH兴奋剂(戈斯他林、醋酸亮丙瑞林)；抗雄激素药(比卡鲁胺、氟他胺、卡鲁司酮、丙酸倍他雄酮、表雄甾醇、戈舍瑞林、亮丙瑞林、美替利定、尼鲁米特、睾内酯、曲洛司坦及其他雄激素抑制剂)；维甲类化合物、维生素D3同系物(CB1093、EB1089、KH1060、胆钙化醇、麦角钙化甾醇)；光动力疗法剂(维替泊芬、酞菁、光敏剂Pc4、去甲氧基-竹红菌素A)；细胞因子(干扰素-α、干扰素-γ、肿瘤坏死因子(TNF)、含TNF的人蛋白)；f)激酶抑制剂、如BIBW 2992(抗-EGFR/Erb2)、伊马替尼、吉非替尼、呱加他尼、索拉非尼、达沙替尼、舒尼替尼、厄洛替尼、尼洛替尼、拉帕替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、凡德他尼、E7080(抗VEGFR2)、mubritinib、普纳替尼(AP24534)、bafetinib(INNO-406)、bosutinib(SKI-606)、卡博替尼、维莫德吉、iniparib、鲁索利替尼、CYT387、阿西替尼、tivozanib、索拉非尼、贝伐单抗、西妥昔单抗、曲妥珠单抗、雷珠单抗、帕尼单抗、伊斯平斯；g)聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂、如奥拉帕里、尼拉帕里、依尼帕里、塔拉佐帕里、维利帕里、维利帕里、CEP 9722(Cephalon)、E7016(Eisai)、BGB-290(Beigene)、3-氨基苯甲酰酰胺；h)抗生素、如烯二炔类抗生素(加利车霉素、特别是加利车霉素γ1、δ1、α1和β1(参考J.Med.Chem.1996，39(11)，2103-2117；Angew Chem Intl.Ed.Engl.1994，33:183-186)，达因霉素，包括达因霉素A和脱氧米霉素、埃斯培拉霉素、卡塔尔霉素、C-1027、maduropeptin、新卡嗪奥斯汀和相关色蛋白烯二炔抗生素)、aclacinomysins、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、卡诺霉素、卡拉霉素、洋红霉素、嗜癌素、色霉素、达金霉素、柔红霉素、去柔红霉素、6-重氮-5-氧代-L-去甲亮氨酸、阿霉素、吗啉-阿霉素、氰基吗啉-阿霉素、2-吡咯啉阿霉素和脱氧柔红霉素、表柔比星、阿柔比星、伊达比星、马可霉素、nitomycin、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、Peplomycin、potfiromycin、嘌呤霉素、奎拉霉素、罗道霉素、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；i)其他、如聚酮化合物(番荔素)、特别是bullatacin和bullatacinone；吉西他滨、环氧酶素(如卡菲偌米布)、硼替佐米、沙利度胺、来那度胺、pomalidomide、tosedostat、zybrestat、PLX4032、STA-9090、Stimuvax、allovectin-7、Xegeva、Provenge、Yervoy、异戊二烯化抑制剂(如洛伐他汀)、多巴胺能神经毒素(如星形孢菌素)、放线菌素(如放线菌素D、更生霉素)、博莱霉素(如博来霉素A2、博莱霉素B2、培洛霉素)、蒽环类抗生素(如柔红霉素)、鹅膏毒素、阿霉素(亚德里亚霉素)、伊达比星、表柔比星、吡柔比星、佐柔比星、米托蒽醌、MDR抑制剂(如维拉帕米)、Ca2+ATP酶抑制剂(如毒胡萝卜素)、组蛋白去乙酰酶抑制剂(伏立诺他、罗米地辛、帕比司他、丙戊酸、Mocetinostat(MGCD0103)、Belinostat、PCI-24781、恩替诺特、SB939、Resminostat、Givinostat、AR-42、CUDC-101、萝卜硫素、曲古抑菌素A)；塞来昔布、格列酮类、表没食子儿茶素没食子酸酯、双硫仑、Salinosporamide A；抗肾上腺药物、如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦、醋葡醛内酯、醛磷酰胺、氨基乙酰丙酸、安吖啶、阿拉伯糖苷、bestrabucil、比生群、edatraxate、defofamine、美可辛、地吖醌、依氟鸟氨酸(DFMO)、elfomithine、依利醋铵、依托格鲁、硝酸镓、胞嘧啶、羟基脲、伊班膦酸盐、香菇多糖、氯尼达明、米托胍腙、米托蒽醌、莫呱达醇、二胺硝吖啶、喷司他丁、蛋氨氮芥、吡柔比星、鬼臼酸、2-乙肼、甲基苄肼；
Figure BDA0003161812140001361
呱嗪二酮丙烷；根霉素；西佐；螺环锗；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；三氯三乙胺；单端孢霉烯(特别是T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和anguidine)、聚氨酯、siRNA、反义药物和核酸分解酶。
2)自身免疫疾病药物，包括但不限于，环孢菌素、环孢菌素A、氨基己酸、硫唑嘌呤、溴隐亭、苯丁酸氮芥、氯喹、环磷酰胺、皮质类固醇(例如安西奈德、倍他米松、布地奈德、氢化可的松、氟尼缩松、丙酸氟替卡松、氟可龙达那唑、地塞米松、曲安奈德、二丙酸倍氯米松)、DHEA、依那西普、羟基氯喹、英夫利昔单抗、美洛昔康、甲氨蝶呤、麦考酚酸酯、泼尼松、西罗莫司、他克莫司。
3)抗感染性疾病药物，包括但不限于a)氨基糖苷类：阿米卡星、阿司米星、庆大霉素(奈替米星、西索米星、异帕米星)、潮霉素B、卡那霉素(阿米卡星、阿贝卡星、氨基脱氧卡那霉素、地贝卡星、妥布霉素)、新霉素(framycetin、巴龙霉素、核糖霉素)、奈替米星、壮观霉素、链霉素、妥布霉素、甲基姿苏霉素；b)酰胺醇类：迭氮氯霉素、氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素；c)安沙霉素：格尔德霉素、除莠霉素；d)碳青霉烯类：比阿培南、多利培南、厄他培南、亚胺培南/西司他丁、美罗培南、帕尼培南；e)头孢烯：碳头孢烯(洛拉卡比)、头孢乙腈、氯氨苄青霉素、头孢拉定、头孢羟氨、头孢洛宁、头孢噻啶、头孢噻吩或头孢金素、头孢氨苄、头孢来星、头孢孟多、头孢匹林、羟胺唑头孢菌素、氟唑头孢菌素、孢西酮、唑啉头孢菌素、头孢拉宗、头孢卡品、头孢达肟、头孢吡、头孢克肟、头孢西丁、头孢罗齐、头孢甲氧环烯胺、头孢替唑、头孢呋辛、头孢克肟、头孢地尼、头孢托仑、头孢吡、头孢他美、头孢甲肟、头孢地嗪、头孢尼西、头孢呱酮、头孢雷特、头孢噻肟、噻乙胺唑头孢菌素、头孢唑兰、头孢氨苄、头孢咪唑、头孢匹胺、头孢匹罗、头孢泊肟、头孢罗齐、头孢喹诺、头孢磺啶、头孢他啶、头孢特仑、头孢布腾、头孢噻林、头孢唑肟、头孢吡普、头孢曲松、头孢呋辛、头孢唑南、头霉素(头孢西丁、头孢替坦、头孢氰唑)、氧(碳)头孢烯(氟氧头孢、拉氧头孢)；f)糖肽：博来霉素、万古霉素(奥利万星、特拉万星)、替考拉宁(达巴万星)、雷莫拉宁；g)甘氨酰环素：如替加环素；h)β-内酰胺酶抑制剂：青霉烷(舒巴坦、他唑巴坦)、氧青霉烷(克拉维酸)；i)林可酰胺：克林霉素、林可霉素；j)脂肽：达托霉素、A54145、钙依赖性抗生素(CDA)；k)大环内酯类：阿奇霉素、克霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、氟雷霉素、交沙霉素、酮内酯(泰利霉素、塞红霉素)、麦迪霉素、米卡霉素、竹桃霉素、利福霉素(异烟肼、利福平、利福布丁、利福喷汀)、罗匹霉素、罗红霉素、大观霉素、螺旋霉素、他克莫司(FK506)、醋竹桃霉素、泰利霉素；l)单环胺：氨曲南、替吉莫南；m)恶唑烷酮类：利奈唑胺；n)青霉素类：阿莫西林、氨苄青霉素(匹氨西林、海洛西林、巴氨西林、氨苄青霉素、阿霉素)、阿替代西林、阿洛西林、苄青霉素、苄星青霉素苄青霉素、苄星青霉素苯氧甲基青霉素、克洛西林、普鲁卡因青霉素(美替西林)、美洛西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、醋甲西林、青霉素、非奈西林、苯氧基甲基青霉素、呱拉西林、氨苄西林、磺苯西林、替莫西林、替卡西林；o)多肽：杆菌肽、粘菌素、多粘菌素B；p)喹诺酮类：阿拉曲沙星、巴洛沙星、环丙沙星、克林沙、达氟沙星、二氟沙星、依诺沙星、恩诺沙星、加雷沙星、加替沙星、吉米沙星、格帕沙星、卡诺曲伐沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、麻保沙星、莫西沙星、那氟沙星、诺氟沙星、奥比沙星、氧氟沙星、培氟沙星、曲伐沙星、格帕沙星、西他沙星、司帕沙星、替马沙星、托沙星、曲伐沙星；q)链阳性菌素：普那霉素、奎奴普丁/达福普汀；r)磺胺类：氨芐磺胺、偶氮磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲异唑、磺胺酰亚胺、磺胺吡啶、磺胺异恶唑、甲氧苄啶、磺胺甲恶唑(复方磺胺甲恶唑)；s)类固醇抗菌药物：如夫西地酸；t)四环素类：强力霉素、金霉素、氯米西环素、地美环素、雷莫昔林、美西环素、美他环素、米诺环素、土霉素、潘美环素、吡咯烷甲基四环素、四环素、甘氨酰环素(如替加环素)；u)其他类型的抗生素：番荔枝素、胂凡纳明、细菌萜醇抑制剂(杆菌肽)、DANAL/AR抑制剂(环丝氨酸)、dictyostatin、圆皮海绵内酯、软珊瑚醇、埃博霉素、乙胺丁醇、依托泊苷、法罗培南、夫西地酸、呋喃唑酮、异烟肼、laulimalide、甲硝唑、莫匹罗星、NAM合成抑制剂(例如磷霉素)、呋喃妥因、紫杉醇、普兰西霉素、吡嗪酰胺、奎奴普丁/达福普汀、利福平、他唑巴坦替硝唑、乌菊花素。
4)抗病毒药物：a)侵入/融合抑制剂：阿帕韦洛、马拉韦罗、vicriviroc、gp41(恩夫韦肽)、PRO 140、CD4(艾巴利珠单抗)；b)整合酶抑制剂：雷特格韦、elvite-gravir、globoidnan A；c)成熟抑制剂：bevirimat、vivecon；d)神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦；e)核苷和核苷酸：阿巴卡韦、阿昔单韦、阿德福韦、阿莫西韦、阿昔单抗、溴夫定、西多福韦、克拉夫定、地塞米松、去羟肌苷(ddI)、elvucitabine、恩曲他滨(FTC)、恩替卡韦、泛昔洛韦、氟拉西林(5-FU)、3’-氟取代的2’，3’-脱氧核苷同系物、如3’-氟-2’，3’-双脱氧胸苷(FLT)和3’-氟-2’，3’-双脱氧鸟苷(FLG)、福米韦生、9-鸟嘌呤、碘苷、拉米夫定(3TC)、1-核苷(例如β-1-胸苷和β-1-2'-脱氧胞苷)、喷昔洛韦、racivir、利巴韦林、迪替丁、司他夫定(d4T)、塔利巴韦林(viramidine)、替比夫定、替诺福韦、三氟尿苷伐昔洛韦、缬更昔洛韦、扎西他滨(ddC)、齐多夫定(AZT)；f)非核苷类：金刚烷胺、阿替吡啶、卡普韦林、二芳基嘧啶(依曲韦林、rilpivirine)、地拉夫定、二十二烷醇、乙米韦林、依法韦仑、膦甲酸(磷酰基甲酸)、咪喹莫特、聚乙二醇干扰素、洛韦胺、洛德腺苷、甲吲噻腙、奈韦拉平、NOV-205、长效干扰素α、鬼臼毒素、利福平、金刚乙胺、瑞喹莫德(R-848)、醋胺金刚烷；g)蛋白酶抑制剂：安普那韦、阿扎那韦、boceprevir、darunavir、福萨那韦、印地那韦、洛匹那韦、奈非那韦、普来可那立、利托那韦、沙奎那韦、telaprevir(VX-950)、替拉那韦；h)其它类型的抗病毒药物：抗体酶、阿比朵尔、calanolide a、ceragenin、氰维林-n、二芳基嘧啶、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、膦甲酸、格里菲辛、taribavirin(viramidine)、羟基脲、KP-1461、米替福新、普来可那立、混成抑制剂、利巴韦林、seliciclib。
5)放射治疗使用的放射性同位素。放射性同位素(放射性核素)的实例有3H、11C、14C、18F、32P、35S、64Cu、68Ga、86Y、99Tc、111In、123I、124I、125I、131I、133Xe、177Lu、211At或213Bi。放射性同位素标记的抗体可用于受体靶向成像实验，或者可用于如本发明的抗体-药物偶联物的靶向治疗(Wu等Nature Biotechnology 2005，23(9)：1137-1146)。细胞结合分子，例如抗体可以通过本专利的连接子连结配体试剂，进行标记。配体可以用文献(CurrentProtocols in Immunology，Volumes 1and 2，Coligen et al，Ed.Wiley-Interscience，New York，N.Y.，Pubs.(1991))所述的方法与放射性金属结合、螯合或生成复合物。可以络合金属离子的螯合配体包括DOTA，DOTP，DOTMA，DTPA和TETA(Macrocyclics，Dallas，TX)等。
6)另一种细胞结合分子-药物偶联物作为协同剂。优选的协同偶联物上的细胞毒性分子为：鹅膏毒素类似物、美登木素生物碱同系物、紫杉醇(紫杉烷)同系物、CC-1065同系物、柔红霉素和多柔比星化合物、鹅膏毒素同系物、苯并二氮杂二聚体(如吡咯苯并二氮杂的二聚体(PBD、托马霉素、安曲霉素、吲哚苯并噻二氮卓类、咪唑苯并噻二氮卓类或恶唑烷苯并二氮卓类)、加利西霉素和烯二炔类抗生素化合物、放线菌素、重氮丝氨酸、博莱霉素、表柔比星、他莫昔芬、伊达比星、海兔毒素、奥瑞他汀(如MMAE、MMAF、奥瑞他汀PYE、奥瑞他汀TP、奥瑞他汀2-AQ、6-AQ、EB(AEB)和EFP(AEFP))、多卡米星、格尔德霉素、氨甲喋呤、噻替派、长春碱、长春新碱、hemiasterlin、纳沙酰胺、小金霉素、radiosumin、互花米草素、microsclerodermin、噻吩甲酰胺、埃斯呱霉素、PNU-159682，以及它们的其同系物及以上所述物质的衍生物。
7)上述任何药物的在药学上可接受的盐、酸或衍生物。
在另一个实施例中，免疫毒素可以作为协同药物与细胞结合分子偶联。本发明的免疫毒素是大分子药物，通常是源自细菌或植物蛋白的细胞毒性蛋白，例如白喉毒素(DT)、霍乱毒素(CT)、天花粉蛋白(TCS)、香石竹毒蛋白、假单胞菌外毒素A(ETA)、红细胞毒素、白喉毒素、AB毒素、III型外毒素等。它也可以是一种带有剧毒的细菌成孔原毒素，经过蛋白酶水解启动。原毒素的一个例子是前溶血素及其基因改造的形式topsalysin。Topsalysin是一种经过改性的重组蛋白，经过改造后被前列腺中的酶选择性地启动，致使局部细胞死亡和组织破坏，却不会损伤邻近的组织和神经。
在另一种协同免疫疗法中，下列分子的抗体：检查点抑制剂、TCR(T细胞受体)T细胞、CAR(嵌合抗原受体)T细胞、B细胞受体(BCR)、自然杀伤(NK)细胞，或CD3、CD4、CD8、CD16(FcγRIII)、CD19、CD20、CD22、CD25、CD27、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD45RA、CD45RO、CD56、CD57、CD57bright、CD70、CD79、CD123、CD138、TNFβ、脂肪酸合成酶配体、MHCⅠ类分子(HLA-A、B、C)、VEGF、或NKR-P1的抗体，优选与本发明的偶联物用于协同治疗。
制剂与应用
本专利申请的偶联物被配制成液体，或者适于冻干的形态，冻干后被重新制成液体制剂。液体配方或配制的冻干粉末中的偶联物，为配方的主要成分，占0.01％-99％的重量。一般而言，可在病人上施用，无高水平抗体聚集的液体制剂除了包含0.1克/升-300克/升的偶联物活性成分，还包括一种或多种多元醇(例如糖)、pH值为4.5至7.5的缓冲液、表面活性剂(如聚山梨酸20或80)、抗氧化剂(例如抗坏血酸和/或蛋氨酸)、强化剂(如甘露醇、山梨醇或氯化钠)、螯合剂(如EDTA)、金属络合物(如锌-蛋白络合物)、可生物降解聚合物(如聚酯)、防腐剂(如苯甲醇)和/或游离氨基酸。
用于制剂的合适缓冲液包括但不限于，有机酸盐，例如柠檬酸、抗坏血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或邻苯二甲酸的钠、钾、铵或三羟乙基氨基盐，氨基丁三醇盐酸、硫酸或磷酸缓冲液。此外，氨基酸阳离子也可用作缓冲液。这些氨基酸包括但不限于，精氨酸、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸和组氨酸。精氨酸缓冲液包括精氨酸乙酸盐、精氨酸氯化物、精氨酸磷酸盐、精氨酸硫酸盐，精氨酸琥珀酸盐等。在一个实施例中，精氨酸缓冲液是精氨酸乙酸盐。组氨酸缓冲液的实例包括组氨酸氯化物-精氨酸氯化物、组氨酸乙酸盐-精氨酸乙酸盐、组氨酸磷酸盐-精氨酸磷酸盐、组氨酸硫酸盐-精氨酸硫酸盐、组氨酸琥珀酸盐-精氨酸琥珀酸盐等。缓冲液的pH是4.5至pH7.5，优选约4.5至约6.5，更优选约5.0至约6.2。在一些实施例中，缓冲液中有机酸盐的浓度为约10mM至约500mM。
在制剂中可选地含有的“多元醇”是具有多个羟基的物质。多元醇可用作液体和冻干制剂中的稳定辅料和/或等渗剂。多元醇可以保护生物药物免受物理和化学降解。最好能被排除的共溶剂增加了蛋白质接口处溶剂的有效表面张力，能量最有利的结构构像是表面积最小的那些溶剂。多元醇包括糖(还原和非还原糖)、糖醇和糖酸。“还原糖”是指含有半缩醛基团的糖，它能够还原金属离子，或与蛋白质中的赖氨酸和其他氨基发生反应，“非还原糖”是指不具有还原糖性质的糖。还原糖的例子有果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖和葡萄糖。非还原糖包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、松解糖和棉子糖。糖醇选自甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、苏糖醇、山梨醇和甘油。糖酸包括L-葡萄糖酸盐及其金属盐。液体配方或冻干制剂中的多元醇含量，按重量计，为0.0％-20％。在配方中优选浓度约为0.1％到15％的非还原糖，蔗糖或海藻糖，其中由于海藻糖的溶液稳定性，海藻糖更优。
在制剂中可选的表面活性剂可选自聚山梨醇酯(聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81、聚山梨醇酯85等)；泊洛沙姆(如泊洛沙姆188、聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)、泊洛沙姆407或聚丙二醇-丙二醇等)；Triton；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠；十二烷基、肉荳蔻酰基、亚油基或硬脂基磺酰基甜菜碱；十二烷基、肉荳蔻酰基、亚油基或硬脂基肌氨酸；亚油酸、肉荳蔻基或十六烷基甜菜碱；月桂酰氨基丙基、椰油酰胺丙基、亚油酰胺基丙基、肉荳蔻酰基丙基、棕榈酰基丙基或异硬脂酰氨基丙基-甜菜碱(例如月桂酰胺丙基)；肉荳蔻酰胺丙基、棕榈酰丙基或异硬脂酰氨基丙基-二甲胺；甲基椰油酰基钠或甲基油基牛磺酸二钠；十二烷基甜菜碱、十二烷基二甲基氧化胺、椰油酰胺丙基甜菜碱和可可两性甘氨酸酯；MONAQUATTM系列(如异硬脂基乙基亚胺鎓乙基硫酸盐)；聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物(如Pluronic、PF68等)。优选的表面活性剂是聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯，如聚山梨醇酯20、40、60或80(Tween20、40、60或80)。制剂中表面活性剂的浓度范围，按照重量计，为0.0％至约2.0％。在某些特定实施例中，表面活性剂浓度为约0.01％至约0.2％。在一个实施例中，表面活性剂浓度为约0.02％。
在制剂中可选的“防腐剂”是从根本上可以减小其中细菌的化合物。防腐剂的实例包括十八烷基二甲基芐基氯化铵、六甲基氯化铵、苯扎氯铵(烷基芐基二甲基氯化铵的混合物，其中烷基为长链烷基)和芐索氯铵。其他类型的防腐剂包括芳香醇如苯酚，丁基和芐基醇，对羟基苯甲酸烷基酯，如甲酯或丙酯、儿茶酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇和间甲酚。液体配方或冻干粉末中的防腐剂含量，按照重量计，为0.0％-5.0％。在一个实施例中，所用防腐剂是苯甲醇。
在制剂中作为填充物质或张力剂或渗透压调节剂的，合适的游离氨基酸，选自但不限于精氨酸、胱氨酸、甘氨酸、赖氨酸、组氨酸、鸟氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸谷氨酸或天冬氨酸中的一种或多种。优选碱性氨基酸为精氨酸、赖氨酸和/或组氨酸。如果组成中包含组氨酸，它可以充当缓冲剂和游离氨基酸，但是当使用组氨酸缓冲液时，通常还要包含一个非组氨酸的游离氨基酸，如赖氨酸。氨基酸可以以D-和/或L-型存在，但L-型比较常见。氨基酸可以任何合适的盐的形式存在，如精氨酸盐酸盐。液体配方或冻干粉末中的氨基酸含量，以重量计，为0.0％-30％。
可选地，制剂还包含甲硫氨酸，谷胱甘肽、半胱氨酸、胱氨酸或抗坏血酸作为抗氧化剂，在液体配方中浓度最多为约5毫克/毫升，在冻干粉末中的含量，以重量计，为0.0％-5.0％；可选地，制剂包含金属螯合剂，例如EDTA，EGTA等，在液体配方中浓度为约2mM，在冻干粉末中的含量，以重量计，为0.0％-0.3％。
最终的制剂可以用缓冲调节剂(如一种酸，包括HCl、H2SO4、乙酸，H3PO4、柠檬酸等，或是碱，如NaOH、KOH、NH4OH、乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺、磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸三钠、氨基丁三醇等)调节至优选的pH值。制剂还应当被调节至“等渗”，即目标制剂具有与人血基本相同的渗透压。等渗制剂渗透压通常为250至350mOsm。可以使用蒸气压或冰冻型渗透压计测量等渗性。等渗剂选自甘露醇、山梨糖醇、乙酸钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸三钠或NaCl。通常，缓冲盐和等渗剂在制剂中含量最多为30％(重量)。
可用在本专利液体或冻干制剂中其他辅料还包括：如岩藻糖、纤维二糖、麦芽三糖、蜜二糖、辛酮糖、核糖、木糖醇、精氨酸、组氨酸、甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、赖氨酸、咪唑、甘氨酰甘氨酸、甘露糖基甘油酸酯、Triton X-100、Pluoronic F-127、纤维素、环糊精、(2-羟丙基)-β-环糊精、葡聚糖(10，40和/或70kD)、聚葡萄糖、麦芽糖糊精、聚蔗糖、明胶、羟丙基甲基纤维素、磷酸钠、磷酸钾、ZnCl2、锌、氧化锌、柠檬酸钠、柠檬酸三钠、氨基丁三醇、铜、纤连蛋白、肝素、人血清白蛋白、鱼精蛋白、甘油、EDTA、甲酚、苯甲醇、苯酚、多元醇、羰基被氢化还原成伯或仲羟基的糖。
其它可以在本专利申请的液体制剂中使用的辅料还包括：如调味剂、抗微生物剂、甜味剂、抗氧化剂、抗静电剂、脂质如磷脂或脂肪酸脂、类固醇如胆固醇、蛋白质辅料如血清白蛋白(人血清白蛋白)、重组人白蛋白、明胶、酪蛋白、成盐反离子如钠等。这些和另外的适用于本发明制剂的，已知的药物辅料和/或添加剂为本领域公知，如在由美国医药协会罗威(Rowe)等人编着的第四版《药用辅料手册》(The Handbook of PharmaceuticalExcipients)中所列；以及由威尔金斯出版公司出版(2005)，热纳罗(Gennaro)等人编着的第21版《雷明顿：药学科学与实践》(Remington：the Science and Practice of Pharmacy)中所列。
容纳本专利申请中的偶联物制剂的药物容器或器具有：小瓶、瓶、预填充注射器、预填充或自动注射器。液体配方可以在硼硅酸盐或钠钙玻璃小瓶中冷冻干燥，或滚筒干燥，成饼或粉末形式。固体粉末也可以通过有效的喷雾干燥制备，然后用小瓶或药物容器包装，用于储存和配送。
在更进一步的实施例中，本发明提供了制剂的制备方法，包括以下步骤：(a)冻干包含偶联物，辅料和缓冲体系的液体；(b)在介质中复溶步骤(a)中的冻干混合物，以使得复溶的制剂稳定。步骤(a)重的液体可进一步包含稳定剂和一种或多种辅料，选自前述填充剂、盐、表面活性剂和防腐剂。复溶介质可选用水，如无菌水，抑菌性注射用水(BWFI)、乙酸、丙酸、琥珀酸、氯化钠、氯化镁、氯化钠的酸性溶液、氯化镁的酸性溶液或精氨酸的酸性溶液，其含量为约10至约250mM。
本专利申请的偶联物的液体制剂应具有各种设定的特征。需要考虑的主要问题之一是其稳定性，因为蛋白质/抗体在制造和储存期间，常会形成可溶及不溶的聚集体。此外，溶液中会发生各种化学反应(脱酰胺、氧化、剪切、异构化等)，导致降解产物水平增加和/或生物活性丧失。液体或冻干制剂中的偶联物最好应在25℃下，具有超过6个月的货架期。更优的液体或冻干制剂中的偶联物应在25℃下具有超过12个月的货架期。最为优选的液体制剂应该在2-8℃下具有约24至36个月的货架期，冻干粉末在2-8℃下，应该具有长达约60个月的货架期。液体制剂和冻干制剂应该具有在-20℃或-70℃下至少两年货架期。
在某些实施例中，制剂在冷冻(例如-20℃或-70℃)和解冻后，如在冷冻和解冻1、2或3个循环后，还是稳定的。稳定性可以通过各种不同的方式进行定性和/或定量评估，包括评估药物/抗体(蛋白质)比率和多聚体的生成(如使用紫外吸收光谱、尺寸排除色谱法、测量混浊度和/或通过目视检查)；评估电荷异质性(使用阳离子交换色谱法、图像毛细管等电聚焦(ICIEF)或毛细管电泳)；氨基末端或羧基末端序列分析；质谱分析或MALDI/TOF MS或HPLC-MS/MS分析；SDS-PAGE分析，以比较还原及完整的抗体；肽图(如胰蛋白酶或LYS--C)分析；评估抗体的生物活性或抗原结合能力等。制剂不稳定性可能涉及下列一种或多种内容：聚集、去酰胺(例如Asn脱酰胺)、氧化(例如Met氧化)、异构化(例如Asp异构化)、剪切或水解或裂解(例如铰链区裂解)、琥珀酰亚胺生成、半胱氨酸不成对、N端延伸、C端加工及糖基化差异等。
如果在给定时间(例如12个月)内，所述偶联物的生物活性变动能够保持在制备时活性的约20％，优选约10％(测定的误差范围内)，那么该稳定的偶联物在药物制剂中应当可以“保持其生物活性”。生物活性可以通过如抗原结合和/或者体外细胞毒性分析测定。
用于临床，本发明的支链连接子偶联物将以溶液或冻干固体的形式提供，所述冻干固体可被重新溶解于无菌注射用水中。示例的施用偶联物的方案如下：每天、每周、每两周、每三周或每月一次，静脉推注8-54周。在50至1000毫升的生理盐水中加入药物，可选地，加入人血清白蛋白(例如0.5至1毫升浓缩的人血清白蛋白溶液，100毫克/毫升)。每周给药量为约50μg至20mg/kg体重，静脉注射(每次注射10μg至200mg/kg体重)。治疗结束后4-54周内，患者可接受第二疗程治疗。有关给药途径、辅料、稀释剂、剂量、时间等的具体临床方案可由熟练的临床医师确定。
用体内或者离体杀死特定细胞的方法，可以治疗的疾病的实例包括任何类型癌症的恶性肿瘤、自身免疫疾病、移植物排斥和感染(病毒、细菌或寄生虫)。
达到所需治疗效果需要的偶联物的量取决于许多因素，包括偶联物的化学特性、效力和生物利用度、疾病类型、患者所属物种、患者患病状态、给药途径，这些决定了所需药物剂量、给药方式和给药方案。
一般而言，可将本发明的偶联物配制成含有0.1至10％w/v偶联物的生理缓冲溶液中，供注射使用。典型的剂量范围是从1μg/kg至0.1g/kg(体重)，每天、每周、每两周、每三周或每月一次。优选的剂量范围是每天0.01mg/kg至25mg/kg体重/每天，每周，每两周、每三周或每月，或幼儿等效剂量。待施用的药物的优选剂量可能取决于诸如疾病或病症的进展的类型和程度，特定患者的总体健康状况，所选化合物的相对生物功效，药物的配方，给药途径(静脉内，肌肉内或其他)，药物指定运送途径的药代动力学性质，以及给药速度(推注或连续输注)和给药方案(给定时间内的重复次数)。
本发明的偶联物还能够以单位剂量形式给药，其中术语“单位剂量”是指能够给予患者的单次剂量，并且可以很容易地处置和包装，同时活性偶联物本身或如下文所述的药学上可接受的组合物，保持物理和化学上稳定的单位剂量。典型的每天/每周/每两周/每月总剂量范围是从0.01至100mg/kg体重。作为一般指导原则，人类的单位剂量范围为1mg到3000mg每天/每周/每两周/每三周/每月。单位剂量优选1至900mg，一月一次至四次，更优选为1mg至500mg，每周/每两周/每三周一次。本文提供的偶联物可以通过与一种或多种药学上可接受的辅料混合而配制成药物组合物。这样的单位剂量组合物可以通过口服给药，如片剂，简单胶囊或软凝胶胶囊的形式的药物；或鼻内给药，如粉剂，滴鼻剂或气雾剂的药物；或皮肤给药，如使用局部用软膏，乳膏，乳液，凝胶或喷雾剂或通过透皮贴剂给药。
在另一个实施方案中，包含治疗有效剂量的结构式为(I)或(III)的偶联物，或本发明中描述的其它任何偶联物的药物组合物，可以与其他治疗剂，如化学治疗剂、放射治疗剂、免疫治疗剂、自身免疫病症治疗剂、抗感染剂或其他偶联物协同给药、以有效治疗或预防癌症或自身免疫疾病或感染性疾病。协同剂优选自以下药物中的一种或几种：阿巴西普、对乙酰氨基酚/氢可酮、阿达木单抗、阿法替尼马来酸盐、阿仑单抗、阿利维A酸、曲妥珠单抗、苯丙胺混合盐(苯丙胺/右苯丙胺)阿那曲唑、阿立呱唑、阿扎那韦、Atezolizumab、阿托伐他汀、阿昔替尼、贝林、贝伐单抗、卡巴他赛、卡博替、贝沙罗汀、blinatumomab、硼替佐米、波舒替尼、brentuximab vedotin、布地奈德、布地奈德/福莫特罗、丁丙诺啡、卡培他滨、卡非佐米、塞来考昔、ceritinib、西妥昔单抗、环孢素、西那卡塞、克里唑替尼、达比加群、达拉菲尼、阿法达贝汀、地瑞那韦、甲磺酸伊马替尼、达沙替尼、地尼白介素、狄诺塞麦、双丙戊酸钠、右兰索拉唑、右呱甲酯、Dinutuximab、多西环素、度洛西汀、恩曲他滨/利匹韦林/替诺福韦地索普西富马酸盐、恩曲他滨/替诺福韦/依法韦仑、依诺肝素、恩杂鲁胺、阿法依泊汀、厄洛替尼、埃索美拉唑、依折麦布、依折麦布/辛伐他汀、非诺贝特、非格司亭、芬戈莫德、丙酸氟替卡松、氟替卡松/沙美特罗、氟维司群、吉非替尼、格拉替雷、醋酸戈舍瑞林、伊马替尼、替伊莫单抗、依鲁替尼、胰岛素门冬胰岛素、地特胰岛素、甘精胰岛素、赖脯胰岛素、干扰素β1a、干扰素β1b、拉帕替尼、Ipilimumab、异丙托溴铵/沙丁胺醇、醋酸兰乐肽、来那度胺、联合二甲苯磺酸盐、来曲唑、左甲状腺素、左旋甲状腺素、利多卡因、利奈唑胺、利拉鲁肽、MEDI4736、美金刚、呱醋甲酯、美托洛尔、莫达非尼、莫米松、尼罗替尼、Nivolumab、奥法木单抗、奥立他珠单抗、帕唑帕尼、派姆单抗、培美曲塞、帕妥珠单抗、肺炎球菌结合疫苗、泊马度胺、普瑞巴林、喹硫平、雷贝拉唑氯化镭223、雷洛昔芬、拉替拉韦、雷莫瑞单抗、雷珠单抗、利妥昔单抗、利伐沙班、罗米地辛、罗苏伐他汀、鲁索替尼磷酸盐、沙丁胺醇、司维拉明、西地那非、siltuximab、西他列汀、西他列汀/二甲双胍、索非那新、索拉非尼、舒尼替尼、他达拉非、他莫昔芬、替拉普韦、替西罗莫司、替诺福韦/恩曲他滨、睾酮凝胶、沙利度胺(Talidex)、噻托溴铵、托瑞米芬、曲美替尼、曲妥珠单抗、Tretinoin、尤特克单抗、缬沙坦、凡德他尼、维罗非尼、伏立诺他、阿柏西普、Zostavax及其同系物、衍生物、药学上可接受的盐、载体、稀释剂或辅料、或其组合。
通过本发明中的支链连接子偶联的药物/细胞毒性剂，可以是本发明中描述的鹅膏毒素的任何同系物和/或衍生物。药物/细胞毒剂领域的专业技术人员可以理解，本发明所述的鹅膏毒素均可以被修饰，只要获得的化合物仍保留起始化合物的特异性和/或活性。本领域技术人员应理解，可以使用这些化合物来代替本发明所述的鹅膏毒素同系物。因此，本发明的鹅膏毒素同系物还包括这些衍生和被修饰的化合物。
本说明书和下文实施例中引用的所有文献参考数据均全文引用作为参考。
实施例
本发明用下面的实施例进一步地说明，这些实施例的内容并不旨在限制本发明的范围。在实施例中细胞系，除了特殊说明之外，均是依据美国标准培养物保藏中心(ATCC)、德国菌种保藏中心(DSMZ)或中国科学院上海细胞培养中心规范的条件保存。除了特殊说明外，细胞培养试剂来自于Invitrogen公司。所有的无水试剂均由商业途径获得，并储存于Sure-Seal密封瓶中。其他的试剂和溶剂均按照最高规格购买，使用时未经进一步的处理。用Varain PreStar HPLC进行制备HPLC分离。NMR谱在Bruker 500MHz仪器上获得，化学位移以ppm为单位，四甲基硅烷为参考(0ppm)，耦合常数(J)的单位是Hz。质谱数据在WatersXevo G2 QTof质谱仪(连接Waters Acquity UPLC高效液相色谱仪和TUV检测器)上获得。通常，UPLC分离在C8柱上运行，流动相A相为1％甲酸，B相为100％CH3CN。
实施例1.Fmoc-Hyp(OtBu)-Ile-OtBu(1-1)的合成。
Figure BDA0003161812140001481
在0℃下，向H-Ile-OtBu·HCl(25.0g，0.11mol)的DMF(300mL)溶液中，依次加入Fmoc-Hyp(OtBu)-OH(45.9g，1.0eq)，HOBt(16.7g，1.1eq)，EDC(23.7g，1.1eq)和DIPEA(48.7mL，2.5eq)。将反应混合物在10-25℃下搅拌4小时，用水(500mL)稀释，并用乙酸乙酯(300mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱纯化(10∶1至1∶1的石油醚/乙酸乙酯)，得到44.5g(收率68.8％)化合物1-1，为白色固体。ESI m/z C34H47N2O6[M+H]+：计算值578.33；实测值578.35。
实施例2.H-Hyp(OtBu)-Ile-OtBu(2)的合成。
Figure BDA0003161812140001491
向化合物1-1(44.5g，76.9mmol)的DMF(200mL)溶液中，加入哌啶(40mL)，并将混合物在10-25℃下搅拌1小时，在高真空下除去DMF得到固体粗产物，将其通过硅胶柱纯化(1：1石油醚/乙酸乙酯至10：1二氯甲烷/甲醇)，得到标题化合物27.2g(收率93.7％)，为无色油状物。ESI m/z C19H37N2O4[M+H]+：计算值357.2753；实测值357.2768。
实施例3.Fmoc-Asn(Trt)-Hyp(OtBu)-Ile-OtBu(2-1)的合成。
Figure BDA0003161812140001492
在0℃下，向Fmoc-Asn(Trt)-OH(50g，1.1eq)和NMM(27.2mL，3.0eq)的THF(500mL)溶液中滴加iBuO2CCl(10.9mL，1.1eq)，将混合物在0℃下搅拌30分钟，在室温下持续搅拌3小时，然后在0℃下滴加到搅拌的化合物2(27.2g，1.0eq)的THF(200mL)溶液中。在室温持续搅拌16小时，加入水(500mL)，并将混合物用乙酸乙酯(300mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶柱纯化(10∶1至1∶1石油醚/乙酸乙酯)，得到52.3g化合物2-1，(收率70.2％)，为白色固体。ESI m/zC57H67N4O8[M+H]+：计算值935.4882；实测值935.4895。
实施例4.H-Asn(Trt)-Hyp(OtBu)-Ile-OtBu(3)的合成。
Figure BDA0003161812140001493
向化合物2-1(20g，21.4mmol)的DMF(100mL)溶液中加入哌啶(20mL)。将混合物在10-25℃下搅拌1小时，并在高真空下浓缩除去DMF，得到固体粗产物，将其通过硅胶柱纯化(1：1石油醚/乙酸乙酯至10：1二氯甲烷/甲醇)得到标题化合物14.0g(收率92.3％)，为无色油状物。ESI m/z C42H57N4O6[M+H]+：计算值713.4279；实测值713.4285。
实施例5.Fmoc-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Hyp(OtBu)-Ile-OtBu(3-1)的合成。
Figure BDA0003161812140001501
在室温下将化合物3(7.3g，10.2mmol)，Fmoc-Cys(Trt)-OH(6.0g，1eq)和EDC(9.7g，5.0eq)在二氯甲烷(80mL)中的混合物持续搅拌16小时。加入水(500mL)，并用乙酸乙酯(300mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶柱纯化(10∶1至1∶1石油醚/乙酸乙酯)，得到3-1(9.8g，收率75.2％)，为白色泡状固体。ESI m/zC78H84N5O9S[M+H]+：计算值1266.5990；实测值1266.5980。
实施例6.H-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Hyp(OtBu)-Ile-OtBu(4)的合成。
Figure BDA0003161812140001502
向化合物3-1(9.0g，7.03mmol)的DMF(50mL)溶液中加入哌啶(10mL)，并将混合物在10-25℃下搅拌1小时。在高真空下除去DMF后，将粗产物通过硅胶柱纯化(1：1石油醚/乙酸乙酯至10：1二氯甲烷/甲醇)，得到7g(收率95.2％)标题化合物，为无色油状物。ESI m/zC64H76N5O7S[M+H]+：计算值1058.5466；实测值1058.5460。
实施例7.Cbz-Ile-Gly-OtBu(5-1)的合成。
Figure BDA0003161812140001511
在0℃下，向Cbz-L-Ile-OH(15g，57.1mmol，1.0eq)的DMF(120mL)溶液中加入H-Gly-OtBu·HCl(10.5g，1.0eq)，HOBt(9.3g，1.2eq)，EDC(13.2g，1.2eq)和DIPEA(25mL，2.5eq)。将反应在10-25℃下搅拌16小时。然后加入水(300mL)，反应混合物用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。合并有机相并用盐水(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶柱纯化(10∶1至1∶1石油醚/乙酸乙酯)，得到5-1，19.5g(90.1％收率)，为白色固体。ESI m/z C20H31N2O5[M+H]+：计算值379.2234；实测值379.2248。
实施例8.H-Ile-Gly-OtBu(6)的合成。
Figure BDA0003161812140001512
向化合物5-1(19.5g)的甲醇混合物中，加入Pd/C(10wt％，2.0g，含有64.2％水)。将混合物在氢气气球(1个大气压)下搅拌16小时，然后过滤并将滤液浓缩，得到化合物6(11.5g，收率93.2％)，为无色油状物。ESI m/z C12H25N2O3[M+H]+：计算值245.1866；实测值245.1860。
实施例9.Fmoc-Gly-Ile-Gly-OtBu(6-1)的合成。
Figure BDA0003161812140001513
在0℃下，向化合物6(3.0g，12.3mmol，1.0eq)的DMF(30mL)溶液中加入Fmoc-Gly-OH(3.6g，1.0eq)，HOBt(1.99g，1.2eq)，EDC(2.82g，加入1.2eq)和DIPEA(3.2mL，1.5eq)。将反应混合物在10-25℃下搅拌2.5小时。加入水(50mL)，混合物用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶柱纯化(10∶1至1∶1石油醚/乙酸乙酯)，得到6-1(6.6g，收率100％)，为蜡状固体。ESI m/zC29H38N3O6[M+H]+：计算值524.2761；实测值524.2778。
实施例10.Fmoc-Gly-Ile-Gly-OH(7a)的合成。
Figure BDA0003161812140001521
向化合物6(6.6g)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入TFA(25mL)。将反应混合物在室温搅拌16小时，然后浓缩，再与甲苯共浓缩3次，得到蜡状固体化合物7a(8.2g，粗产物)。ESIm/z C25H30N3O6[M+H]+：计算值468.2135；实测值468.2147。
实施例11.Fmoc-Gly-Ile-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Hyp(OtBu)-Ile-OtBu(7a-1)的合成。
Figure BDA0003161812140001522
在0℃下，向化合物7a(8.2g，粗产物，1.1eq)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入化合物4(9.0g，1.0eq)，EDC(7.2g，5.0eq)和DIPEA(6.8mL，3.5eq)(pH7.5)。将反应混合物在10-25℃下搅拌2.5小时。加入水(500mL)，并将混合物用乙酸乙酯(300mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，其通过硅胶柱纯化(1：1石油醚/乙酸乙酯至10：1二氯甲烷/甲醇)，得到6.8g(收率53.1％)的7a-1，为浅黄色油状物。ESIm/zC89H103N8O12S[M+H]+：计算值1507.7417；实测值1507.7442。
实施例12.H-Gly-Ile-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Hyp(OtBu)-Ile-OtBu(9)的合成。
Figure BDA0003161812140001531
向化合物7a-1(6.8g)的DMF(30mL)溶液中，加入哌啶(6mL)，并将混合物在10-25℃下搅拌1小时。然后在高真空下除去DMF，得到固体粗产物，将其通过硅胶柱纯化(1：1石油醚/乙酸乙酯至10：1二氯甲烷/甲醇)，得到5.2g(收率91.2％)标题化合物，为无色油状物。ESI m/z C74H193N8O10S[M+H]+：计算值1285.6736；实测值1285.6750。
实施例13. 6-硝基-D-色氨酸(10a)的合成。
Figure BDA0003161812140001532
在剧烈搅拌下，向D-色氨酸(40.8g，0.20mol)和尿素(0.50g)的冰醋酸(500mL)悬浮液中加入发烟硝酸(7.5mL)的冰酸(30mL)溶液。固体溶解并变成黄色溶液，继续搅拌，溶液变成悬浮液。在10℃下，向悬浮液中缓慢加入发烟硝酸(17.5mL)的冰醋酸(70mL)溶液。固体溶解，溶液从黄色变成棕色。待加完后，将溶液在室温下持续搅拌22小时。将反应混合物浓缩至约100mL，然后加入水(200mL)，形成黄色沉淀并过滤收集，用少量水和乙酸乙酯洗涤。将该固体在空气中干燥，重16.8g。将滤液进一步浓缩至干，并在5％硝酸中重结晶，得到另一批产物(10g)。ESI MS m/z 11H12N3O4[M+H]+：计算值250.0829；实测值250.0835。
实施例14. 6-硝基-N，N′-双(叔丁氧基羰基)-D-色氨酸的合成(11)。
Figure BDA0003161812140001541
在0℃下，向化合物10a(6.0g，24.1mmol)的二氯甲烷(50mL)混合物中，加入氢氧化钠(9.7g，10eq)，Bu4NHSO4(1.6g，0.2eq)，然后加入Boc2O(20.2g，3.5eq)的二氯甲烷(30mL)溶液。将反应混合物在10-25℃下搅拌16小时，然后加入水(60mL)，用二氯甲烷(300mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物7.5g(收率69.4％)，为浅黄色油状物。ESI MS m/z 21H28N3O8[M+H]+：计算值450.0908；实测值450.0930。
实施例15. 6-硝基-N，N′-双(叔丁氧基羰基)-D-色氨酸苄酯(12)的合成。
Figure BDA0003161812140001542
将化合物11(7.1g，15.8g，1.0eq)，碳酸钾(4.3g，2.0eq)，BnBr(3.5mL，1.1eq)和丙酮(80mL)混合物回流2.5h，然后冷却至室温，加入水(30mL)，并用二氯甲烷(30mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱纯化(10：1至3：1石油醚/乙酸乙酯)，得到8.1g呈浅红色油状物12(收率95.2％)。ESI MS m/z28H34N3O8[M+H]+：计算值540.2347；实测值540.2360。
实施例16. 2-苄基8-二叔丁基3a-羟基-6-硝基-3，3a-二氢代吡咯并[2，3-b]吲哚-1，2，8(2H，8aH)-三羧酸酯(13)的合成。
Figure BDA0003161812140001551
DMDO的制备方法：将蒸馏水(20mL)，丙酮(30mL)和碳酸氢钠(24g，0.285mol)在1升圆底烧瓶中混合，在冰/水浴中冷却并磁力搅拌。20分钟后，停止搅拌，一次性加入Oxone(25g，0.0406mol)。将烧瓶宽松地盖上，剧烈搅拌15分钟，同时保持冰浴状态。然后将含有反应物的烧瓶连接至带有室温水浴锅的旋转浓缩仪。将缓冲球(250mL)在干冰/丙酮浴中冷却，并通过台式隔膜泵抽真空(165毫托)。15分钟后，水浴温度在10分钟内升至40℃。当水浴温度达到40℃时，释放真空并将烧瓶从加热的热水浴中升起，立即停止蒸馏。将DMDO的浅黄色丙酮溶液从缓冲球中直接倒入有刻度的量筒中，以测量溶液的总体积(约25mL)，然后将溶液用硫酸钠干燥。
通过过滤除去硫酸钠，并用5mL的丙酮洗涤滤饼。可以根据Adam等人(Adam，W.；Chan，Y.Y.；Cremer，D.；Gauss，J.；Scheutzow，D.；Scheutzow，D.；Schindler，M.J.Org.Chem.1987，52，2800-2803)的方法滴定所制备的DMDO溶液。结果一致显示溶液中有2.1–2.3mmol的DMDO。滴定后立即使用DMDO溶液。
在0℃下，向搅拌的化合物12(0.60g，1.11mmol)的丙酮混合物中滴加上述冷却的DMDO溶液。将混合物在0℃下搅拌2小时，然后在室温下持续搅拌16小时，浓缩，得到粗产物，加入水(20mL)，并将所得溶液用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，通过硅胶柱纯化(10：1至3：1石油醚/乙酸乙酯)，得到0.41g的灰色固体13。ESI MS m/z28H34N3O9[M+H]+：计算值556.2296，实测值556.2320。
实施例17. 1，8-双(叔丁氧羰基)-3a-羟基-6-硝基-1，2，3，3a，8，8a-六氢代吡咯并[2，3-b]吲哚-2-羧酸的合成(14)。
Figure BDA0003161812140001561
向化合物13(0.31g，0.56mmol)的THF(15mL)混合物中加入氢氧化钠(0.089g，4.0eq)的水溶液(8mL)。将混合物在40℃下搅拌16小时。然后浓缩除去THF，将残余物用水(15mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL×2)洗涤。用1N HCL将得到的水相调节pH至3，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到油状物14(83.8％收率)。ESI MS m/z 21H28N3O9[M+H]+：计算值466.1826；实测值466.1840。
实施例18.N-苯基硒代邻苯二甲酰亚胺的合成(15)。
Figure BDA0003161812140001562
在氮气下，向邻苯二甲酰亚胺钾(4.03g，21.8mmol)和苯基硒基氯(5.00g，26.1mmol)的混合物中加入无水正己烷(20mL)。在室温下，持续搅拌3小时，加入无水二氯甲烷(100mL)，并将浅红色溶液过滤以除去固体物质。将滤液浓缩至约20mL，并用干燥的正己烷(80mL)稀释。通过过滤收集得到的沉淀物，并用干燥的正己烷洗涤，在真空下干燥，得到浅黄色固体(4.55g，69％产率)。ESI MS m/zC14H10NO2Se[M+H]+：计算值303.9878；实测值303.9890。
实施例19. 6-硝基-D-色氨酸甲酯(16)的合成。
Figure BDA0003161812140001563
向10a(2.00g，0.803mmol)的甲醇溶液中滴加二氯亚砜(0.58mL，8.03mmol)。然后将混合物加热至回流并搅拌2小时。冷却至室温后，将反应混合物用水(60mL)稀释，并使用10％氢氧化钠调节pH至8.0，然后用乙酸乙酯(60mL×3)萃取。合并有机相并用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到浅红色固体(1.50g，71.4％)。ESI MS m/z 12H14N3O4[M+H]+：计算值264.0985；实测值264.0942。
实施例20. 6-硝基-N，N′-双(叔丁氧基羰基)-D-色氨酸甲酯(17)的合成。
Figure BDA0003161812140001571
在0℃下，向化合物16(720mg，2.74mmol)的二氯甲烷(20mL)混合物中，加入氢氧化钠(1.09g，10eq)，Bu4NHSO4(183mg，0.2eq)，然后加入Boc2O(2.3g，3.5eq)的二氯甲烷(5mL)溶液。将反应混合物在10-25℃下搅拌8小时，然后加入水(30mL)，用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并有机相，用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱纯化(10：1至3：1石油醚/乙酸乙酯)，得到8.1g呈浅黄色油状的标题化合物(收率64.2％)。ESIMS m/z22H30N3O8[M+H]+：计算值464.2034；实测值464.2058。
实施例21.(2S)-1，8-二叔丁基2-甲基6-硝基-3a-(苯基硒基)-3，3a-二氢代吡咯并[2，3-b]吲哚-1，2，8(2H，8aH)-三羧酸酯(18)的合成。
Figure BDA0003161812140001572
向化合物17(700mg，1.51mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入硫酸钠(1.8g)和4-甲苯磺酸吡啶盐(68mg，0.2eq)和N-苯基硒代邻苯二甲酰亚胺(715mg，1.5eq)。将反应物在室温搅拌过夜，然后用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，通过硅胶柱纯化(10：1至3：1石油醚/乙酸乙酯)，得到标题化合物400mg(收率43.0％)，为浅黄色油状物，同时回收部分起始物料。ESI MS m/zC28H34N3O8Se[M+H]+：计算值620.1512；实测值620.1545。
实施例22.(2S)-1，8-二叔丁基2-甲基3a-羟基-6-硝基-3，3a-二氢代吡咯并[2，3-b]吲哚-1，2，8(2H，8aH)-三羧酸酯(19)的合成。
Figure BDA0003161812140001581
在0℃下，向化合物18(1.80g，2.90mmol)的二氯甲烷(30mmol)溶液中加入碳酸钾(2.00g，5.0eq)和m-CPBA(85％，1.48g，2.5eq)。将反应物加热至室温并搅拌过夜，然后用二氯甲烷(100mL)稀释并过滤。滤液用饱和亚硫酸氢钠(30mL×3)和盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，用硅胶柱纯化(20：1至4：1石油醚/乙酸乙酯)，得到呈白色泡沫状标题化合物0.94g(产率67.7％)。ESI MS m/z 22H30N3O9[M+H]+：计算值479.1983；实测值479.1995。
实施例23. 1，8-双(叔丁氧羰基)-3a-羟基-6-硝基-1，2，3，3a，8，8a-六氢代吡咯并[2，3-b]吲哚-2-羧酸的合成(14)。
Figure BDA0003161812140001582
向化合物19(0.90g，1.88mmol)的THF/甲醇/水(2∶2∶1)溶液中加入LiOH(0.23g，5.0eq)。将该溶液在室温搅拌过夜，然后浓缩，并通过硅胶柱纯化(1:20至1：3甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物(0.85g，97.3％产率)。ESI MS m/z21H28N3O9[M+H]+：计算值466.1826；实测值466.1845。
实施例24.(S)-3-(1H-吲哚-2-基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸的合成(32)。
Figure BDA0003161812140001591
在室温下，将氯代三甲基硅烷(3.4mL，26.9mmol)缓慢加入至L-色氨酸(5.00g，24.5mL)的二氯甲烷(40mL)悬浮液中。将混合物连续搅拌4.5小时，并加入三乙胺(6.8mL，49.0mmol)，然后加入三苯甲基氯(7.17g，25.7mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液。将混合物在室温下搅拌20小时，然后用甲醇(25mL)淬灭。将反应浓缩至干并将其重新溶解在二氯甲烷中，用5％柠檬酸溶液(3×)和盐水洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物进一步溶解在二氯甲烷中，并通过硅藻土垫过滤，并将滤液浓缩，得到浅白色泡沫状物(11.8g)，将其直接用于下一步。ESI MS m/z 446.30([M+H]+)。
实施例25.(S)-甲基2-(3-(1H-吲哚-2-基)-2-(三苯甲基氨基)丙烷酰胺基)乙酸酯(33)的合成。
Figure BDA0003161812140001592
向32(9.27g，30.7mmol)的THF(30mL)溶液中加入甘氨酸甲酯盐酸盐(2.85g，22.8mmol)和HOBt(3.08g，22.8mmol)。将混合物冷却至0℃，并加入三乙胺(7.4mL，51.9mmol)，然后分批加入EDC·HCl(4.38g，22.8mmol)。将混合物升温至室温并搅拌20小时，然后浓缩并重新溶解在二氯甲烷中，用5％柠檬酸溶液(3×)和盐水洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物用乙酸乙酯打浆，过滤收集白色固体(6.46g，两步收率65％)。ESI MS m/z 518.20([M+H]+)。
实施例26. 2-(3a-羟基-1-三苯甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氢代吡咯并[2，3-b]吲哚-2-羧酰胺基)乙酸甲酯的合成(34)。
Figure BDA0003161812140001601
在-78℃下，向Trt-Trp-Gly-OMe(0.80g，1.54mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入DMDO的丙酮(2.25mmol)溶液。1小时后，将混合物在室温下减压浓缩至干。通过柱色谱法(正己烷/乙酸乙酯/三乙胺70：30：1至30：70：1)纯化，得到浅黄色泡沫状混合物，为两种非对映异构体混合物(0.58g，70％收率)。ESI MS m/z 534.22([M+H]+)。
实施例27. 2-(3a-羟基-1-三苯甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氢吡咯并[2，3-b]吲哚-2-甲酰胺基)乙酸(35)的合成。
Figure BDA0003161812140001602
向Tr-Hpi-Gly-OMe(非对映异构体混合物)(0.80g，1.50mmol)的二恶烷/水(30mL，v/v 2：1)溶液中加入LiOH(0.63g，15.0mmol)，并在室温下搅拌30分钟(TLC显示起始原料消失(二氯甲烷/甲醇，9∶1))。将反应混合物蒸发至干并将残余物通过短硅胶柱纯化，用二氯甲烷/甲醇/三乙胺(90∶10∶1)洗脱。合并各组分，浓缩得到浅黄色固体，为两种非对映异构体的三乙胺盐(0.89g，95％收率)。
实施例28.(2S)-二叔丁基2-((5S，8R，14S)-5-((2S，4R)-4-(叔丁氧基)-2-((2S，3S)-1-(叔丁氧基)-3-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羰基)-14-((S)-仲丁基)-3，7，10，13，16-五氧代-1，1，1-三苯基-8-((三苯甲基硫)甲基)-2，6，9，12，15-五氮杂十七烷-17-基)氨基甲酰基)-3a-羟基-6-硝基-3，3a-二氢代吡咯并[2，3-b]吲哚-1，8(2H，8aH)-二羧酸酯(36)的合成。
Figure BDA0003161812140001611
在0℃下，向化合物14(0.27g，0.58mmol)的DMF(5mL)溶液中加入化合物9(0.75g，1.0eq)，EDC(0.17g，1.5eq)，HOBt(0.12g，1.5eq)和DIPEA(0.25mL，2.5eq)。将反应混合物在10-25℃下搅拌16小时。加入水(20mL)，混合物用乙酸乙酯(15mL×3)萃取。合并有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，其通过硅胶柱纯化(1：1石油醚/乙酸乙酯至10：1二氯甲烷/甲醇)，得到0.5g(收率52.3％)的36，为浅黄色油状物。ESI MS m/z95H118N11O18S[M+H]+：计算值1732.8378；实测值1732.8405。
实施例29.(2S，3S)-2-((2S，4R)-1-((S)-4-氨基-2-((3R，9S，15S)-15-氨基-9-((S)-仲丁基)-19-硝基-5，8，11，14-四氧代-2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，21-十六烷氢-[1，4，7，10，13]硫杂四氮杂环十八碳[18，17-b]吲哚-3-甲酰胺基)-4-氧代丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)-3-甲基戊酸(37)的合成。
Figure BDA0003161812140001612
向化合物36(200mg)的二氯甲烷(1.0mL)溶液中加入TFA(2.0mL)，并将反应混合物在室温持续搅拌16小时。然后浓缩，并与甲苯共浓缩三次。粗产物通过制备型HPLC纯化(乙腈/水)，得到化合物37(50mg，收率47.1％)，为浅黄色油状物。ESI MS m/z 918.40([M+H]+)。
实施例30.化合物38的合成。
Figure BDA0003161812140001621
在0℃下，向化合物37(150mg，0.16mmol)的DMF(20mL)溶液中加入EDC(124.0mg，4.0eq)，HOBt(88.0mg，4.0eq)和DIPEA(128μL，4eq)。将反应混合物在10-25℃下搅拌16小时，加入水(50mL)，将混合物用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并有机相，用盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到呈黄色油状的粗产物38(92.0mg，收率64.6％)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。ESI MS m/z 900.36([M+H]+)。
实施例31.化合物39的合成。
Figure BDA0003161812140001622
向化合物38(50.0mg，55.5μmol)的甲醇(50mL)溶液中加入Pd/C(10wt％，200mg，含有64.2％的水)。将混合物在氢气球(1个大气压)下搅拌2小时，然后过滤并将滤液浓缩。得到化合物39(45.0mg，产率93.3％)，为无色油状物。ESI MS m/z 870.39([M+H]+)。
实施例32.化合物40的合成。
Figure BDA0003161812140001631
在0℃下，向化合物38(90.0mg，100.0μmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入m-CPBA(85％，24mg，1.2eq)，然后将反应温热至室温，搅拌2小时。将反应物用二氯甲烷(50mL)稀释，用饱和的硫酸氢钠(30mL)淬灭，并用饱和的碳酸氢钠(30mL)，盐水(30mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化(乙腈/水)，得到标题化合物(57.1mg，62％收率)，为白色泡沫。ESI MS m/z 916.30([M+H]+)。
实施例33.化合物42的合成。
Figure BDA0003161812140001632
向化合物40(57.0mg，62.3μmol)的甲醇(50mL)溶液中加入Pd/C(10wt％，200mg，含有64.2％的水)。将混合物在氢气球(1个大气压)下搅拌2小时，然后过滤并将滤液浓缩。得到化合物42(50.0mg，产率90.7％)，为白色泡沫状物。ESI MS m/z 886.56([M+H]+)。
实施例34.单环八肽63的固相合成。
根据以下方案，将Fmoc-Ile-OH连接到2-氯三苯甲基氯树脂上：
将Fmoc-Ile-OH(0.35g，1.0mmol)和DIPEA(0.70mL，4.0mmol)溶解在无水二氯甲烷(10mL)中。将得到的溶液加入到2-氯三苯甲基树脂(1.0g，0.911mmol/g，GL Biochem)中，并将混合物在氮气保护下振摇1.5小时。随后加入甲醇(2mL)，并继续摇动30分钟。在真空下将液体排干，并用二氯甲烷(15mL)，DMF(10mL)和甲醇(10mL)洗涤树脂，在真空下干燥。
根据以下方案进行偶联：
将树脂置于柱中，并在DMF(10mL)中溶胀30分钟。在真空下将溶剂排干，并通过与20％哌啶/DMF反应30分钟来切割N-末端Fmoc保护基。脱保护后，将树脂依次用DMF(3×10mL)，二氯甲烷(3×10mL)，DMF(3×10mL)洗涤。将下一个Fmoc保护的氨基酸(Fmoc-Xaa-OH，5eq)在偶联剂HBTU(5eq)和DIPEA(10eq)的DMF(10ml)溶液的作用下与树脂偶联，反应进行2小时。然后将树脂依次用DMF(3×10mL)，二氯甲烷(3×10mL)和DMF(3×10mL)充分洗涤。取少量样品，与六氟异丙醇(HFIP)和二氯甲烷反应5分钟，以从树脂上裂解肽，然后通过质谱检测。在与非市售氨基酸(例如Trt-Hpi-Gly-OH)偶联时，使用较少的当量(3eq.)的氨基酸和较长的反应时间(3小时)。
当所有偶联完成时，将结合在树脂上的肽转移至圆底烧瓶中，加入TFA(10mL)并在室温持续搅拌5小时。TFA处理可同时切断酸不稳定的保护基。过滤树脂，并用二氯甲烷(10mL)和甲醇(10mL)洗涤。将滤液浓缩并在水和乙酸乙酯之间分配。水相通过制备型HPLC(水/乙腈)纯化，得到为白色固体的单环八肽63(40.3mg，5％收率)。ESI MS m/z 888.38([M+H]+)。
实施例35.Ile3-S-脱氧鹅膏毒素(64)的合成。
Figure BDA0003161812140001651
向单环八肽(257mg，0.289mmol)的无水DMF(50mL)溶液中加入EDC·HCl(277mg，1.45mmol)，HOBt(390mg，2.89mmol)和DIPEA(0.25mL，1.45mmol)。将反应物在室温持续搅拌20小时，然后浓缩，并通过制备型HPLC纯化(水/乙腈)，得到白色固体化合物64(90.1mg，36％收率)。ESI MS m/z 870.40([M+H]+)。
实施例36.化合物65的合成。
Figure BDA0003161812140001652
在0℃下，向化合物64(50.0mg，0.0575mmol，1.0eq)的THF(10mL)溶液中加入t-BuONO(70μL，0.575mmol)。将反应物搅拌1小时，然后在室温下搅拌20小时，加入水(50mL)后，将反应混合物浓缩并通过制备型HPLC(水/乙腈)纯化，得到白色固体(26.2mg，50％收率)。ESI MS m/z 915.38([M+H]+)。
实施例37.化合物68的合成。
Figure BDA0003161812140001661
将硝基化合物(26mg，0.0284mmol)和Pd/C(10wt％，100mg)的甲醇(20mL)混合物在室温下催化加氢反应(1大气压氢气)1小时。然后通过硅藻土过滤(助滤剂)。浓缩滤液，得到白色固体(25mg，99％收率)。ESI MS m/z 885.38([M+H]+)。
实施例38.化合物69的合成。
Figure BDA0003161812140001662
在冰水浴中，向化合物68(25mg，0.0282mmol)的THF/甲醇/水(2∶2∶1，50.0mL)溶液中加入LiOH(3.40mg，5eq)。将反应在0℃下搅拌30分钟。然后浓缩并通过短硅胶柱(0-10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到白色泡沫(15.2mg，61％收率)。ESI MS m/z 871.38([M+H]+)。
实施例39.化合物71的合成。
Figure BDA0003161812140001671
向化合物3-N，N-(2”-马来酰亚胺乙基)(2'，5'，8'，11'，14'，17'，20'，23'，26'-九氧杂二十八烷-28'-亚砜)氨基丙酸(70)(14.1mg，0.0206mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中，加入NHS(2.8mg，0.0248mmol)和EDC·HCl(4.9mg，0.0258mmol)，并将反应混合物在40℃下搅拌2小时，然后用二氯甲烷(100mL)稀释，并用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤。浓缩有机相，得到粗产物，无需进一步纯化即可直接使用。
将上述粗产物和化合物69(15mg，0.0172mmol)溶解在DMF(10mL)中，向其中加入DIPEA(15μL，5eq)。将反应物在室温搅拌过夜，然后浓缩，通过制备型HPLC(乙腈/水)纯化，得到白色泡沫(12.0mg，36％收率)。ESI MS m/z 1523.68([M+H]+)。
实施例40. 2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-叔丁基酯的(136)合成。
Figure BDA0003161812140001672
将NaH(60％，8.0g，200mmol)加入到2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷25-醇(38.4g，100mmol)的THF(1.0L)溶液中。在室温搅拌30分钟后，加入2-溴乙酸叔丁酯(48.8g，250mmol)，并在室温下搅拌1小时。然后将混合物倒入冰水，用二氯甲烷萃取，有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。通过柱色谱法纯化(0％至5％甲醇/二氯甲烷)，得到呈黄色油状的化合物136(27.6g，59％收率)。ESI MS m/z 499.40([M+H]+)。
实施例41. 2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-酸(137)的合成。
Figure BDA0003161812140001681
将化合物136(35.6g，73.8mmol)溶解在二氯甲烷(400mL)中，然后加入甲酸(600mL)。将所得溶液在25℃下搅拌过夜。真空除去所有挥发物，得到标题产物，为黄色油状物(31.0g，理论收率)。ESI MS m/z 443.45([M+H]+)。
实施例42. 2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-酰氯(138)的合成。
Figure BDA0003161812140001682
向化合物137(31.0g，73.8mmol)的二氯甲烷(600mL)溶液中加入(COCl)2(100mL)和DMF(52g，0.74mmol)。将得到的溶液在室温持续搅拌4小时。真空除去所有挥发物，得到标题产物(32.8g)，为黄色油状物。ESI MS m/z 461.38([M+H]+)。
实施例43.(S)-34-((苄氧基)羰基)氨基)-28-氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29-氮杂三十五烷-35-酸(139)的合成。
Figure BDA0003161812140001683
将Z-L-Lys-OH(41.4g，147.6mmol)，碳酸钠(23.4g，221.4mmol)和氢氧化钠(5.9g，147.6mmol)溶于水(720mL)中。将混合物冷却至0℃，向其中加入化合物138(32.8g，73.8mmol)的THF(20mL)溶液。将得到的混合物在室温搅拌1小时。在真空下除去THF，并在冰冷却下将浓HCl添加到水溶液中，直到pH值达到3。用二氯甲烷萃取后，有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩，得到标题产物，为黄色油状物(50.0g，99％收率)。ESI MS m/z 705.30([M+H]+)。
实施例44.(S)-叔丁基34-((苄氧基)羰基)氨基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂-40-酯(140)的合成。
Figure BDA0003161812140001691
将4-氨基丁酸叔丁酯(1.03g，6.12mmol)和化合物139(3.91g，5.56mmol)的DMF(18mL)混合物冷却至0℃，并依次加入HATU(2.32g，6.12mmol)和TEA(1.2mL，8.34mmol)。将反应搅拌1小时，然后用水(300mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。用盐水洗涤有机溶液，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶柱色谱法(32：1二氯甲烷/甲醇)纯化，得化合物140(5.10g，99％收率)。ESI MS m/z 846.50([M+H]+)。
实施例45.(S)-叔丁基34-氨基-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酯(141)的合成。
Figure BDA0003161812140001692
在氢化瓶中，向化合物140(1.0g，1.18mmol)的甲醇(50mL)溶液中加入Pd/C(10wt％，0.10g)。将混合物振荡2小时，通过硅藻土(助滤剂)过滤，并将滤液浓缩，得到化合物141(0.93g，收率＞100％)。ESI MS m/z 712.50([M+H]+)。
实施例46.(S)-叔丁基34-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酯(142)的合成。
Figure BDA0003161812140001701
在室温下，向化合物141(0.93g，1.18mmol)和N-琥珀酰亚胺基4-马来酰亚胺基丁酸酯(0.50g，1.77mmol，1.eq)的95％乙醇(50mL)溶液中加入硫酸氢钠溶液(0.1M，pH 5.0，10mL)。将混合物搅拌过夜，然后浓缩并用水(50mL)稀释，并用二氯甲烷(80mL×3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化(25∶1的二氯甲烷/甲醇)，得到标题化合物(0.82g，80％)，为浅黄色油状物。ESI MS m/z 877.52([M+H]+)。
实施例47.(S)-34-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酸(143)的合成。
Figure BDA0003161812140001702
将化合物144(0.82g，0.94mmol)溶解于甲酸(10mL)中，并在室温下搅拌1小时。浓缩反应混合物，并与甲苯共浓缩两次，并将残余物置于真空泵上，得到化合物143(0.80g，粗产物)。ESI MS m/z 820.45([M+H]+)。
实施例48.(S)-2，5-二氧吡咯烷-1-基34-(4-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酯(144)的合成。
Figure BDA0003161812140001711
向化合物143(0.80g，粗产物，0.94mmol)的DMA(5.0mL)溶液中加入NHS(0.12g，1.03mmol)和EDC·HCl(0.27g，1.41mmol)。在室温下持续搅拌2小时，然后用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化(10-50％乙酸乙酯/石油醚)，得到无色油状物(0.67g，78％收率)。ESI MS m/z 918.55([M+H]+)。
实施例49.化合物145的合成。
Figure BDA0003161812140001712
向化合物42(50mg，0.0565mmol)和化合物144(77mg，1.5eq)的乙醇(10mL)溶液中，加入0.1M磷酸二氢钠(10mL)并搅拌30分钟。将反应物浓缩并通过制备型HPLC纯化(乙腈/水)，得到白色泡沫(44mg，46％收率)。ESI MS m/z 1689.10([M+H]+)。
实施例50.(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁基酯(147)的合成。
Figure BDA0003161812140001713
将N-Boc-乙二胺(5.6mL，35.4mmol，1.1eq)和饱和碳酸氢钠(60mL)的混合物冷却至0℃，分批加入N-甲氧基羰基马来酰亚胺(5.00g，32.2mmol，1.0eq)。在0℃下，搅拌30分钟后，将反应升温至室温搅拌1小时。过滤收集沉淀物，并用冷水洗涤，然后溶解在乙酸乙酯中，并用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到白色固体(6.69g，87％收率)。ESI MS m/z241.12([M+H]+)。
实施例51.(2-(1，3-二氧代-3a，4，7，7a-四氢代-1H-4，7-环氧异吲哚-2(3H)-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(148)的合成。
Figure BDA0003161812140001721
在高压管中，将化合物147(6.00g，25.0mmol)，呋喃(18.0mL)的甲苯(120mL)溶液加热至回流，搅拌16小时，反应期间无色溶液变为黄色。然后将混合物冷却至室温，浓缩。将所得白色固体经乙醚打浆，得到化合物148(6.5g，84％收率)。ESI MS m/z 309.13([M+H]+)。
实施例52. 2-(2-氨基乙基)-3a，4，7，7a-四氢-1H-4，7-环氧吲哚-1，3(2H)-二酮盐酸盐(149)的合成。
Figure BDA0003161812140001722
在室温下将化合物148(9.93g，32.2mmol)的二恶烷(15mL)溶液与浓盐酸(15mL)反应3小时。浓缩反应物，过滤收集固体，用乙酸乙酯洗涤滤饼。将固体在烘箱(50℃)中干燥过夜，得到化合物149(6.94g，88％收率)。ESI MS m/z206.05([M+H]+)。
实施例53.化合物151的合成。
Figure BDA0003161812140001731
在-10℃下，向化合物149(1.22g，5mmol)的THF(10mL)溶液中加入POCl3(0.47mL，5mmol)。搅拌10分钟后，加入2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂二十八烷-28-胺(2.14g，5mmol)，然后加入DIPEA(0.87mL，5mmol)。将反应升温至0℃并搅拌3小时，然后浓缩。将残余物用二氯甲烷(10mL)稀释，并通过硅藻土过滤，滤液直接用于下一步。ESI MS m/z 716.29([M+H]+)。
实施例54.化合物111的合成。
Figure BDA0003161812140001732
在室温下，向化合物42(1.50g，1.69mmol)，4-(((苄氧基)羰基)氨基)丁酸N-琥珀酰亚胺酯(0.67g，1.2eq)，DIPEA(0.44mL，1.5eq)和DMF(10.0ml)的混合物搅拌过夜，然后浓缩，并通过短硅胶柱(10-85％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到无色油状物(1.58g，85％收率)。ESI MS m/z 1105.47([M+H]+)。将该油溶于THF(5.0mL)中，并在氢气球下与Pd/C(10wt％，包含62％的水，50mg)搅拌1小时，然后在硅藻土上过滤，浓缩，得到无色油(1.40g，收率100％)，无需进一步纯化即可使用。ESI MS m/z 971.43([M+H]+)。
实施例55.化合物152的合成。
Figure BDA0003161812140001741
取上述151溶液(1.0mmol)的五分之一，在0℃下，向其中加入DIPEA(0.17mL，1.0mmol)，然后加入111(0.97g，1.0mmol)的二氯甲烷(1.0mL)溶液。将反应在0℃下搅拌2.5小时，然后在30℃下搅拌过夜。浓缩后，残余物通过硅胶柱纯化(1-50％乙酸乙酯/石油醚和0-10％甲醇/二氯甲烷)，得到标题产物152(0.99g，60％)，为无色油状物。ESI MS m/z1650.74([M+H]+)。
实施例56.化合物153的合成。
Figure BDA0003161812140001742
将化合物152(0.99g，0.0006mmol)的甲苯/DMA(1：1，2.0mL)溶液在100℃下加热2小时，然后浓缩，并通过硅胶柱纯化(0-10％甲醇/二氯甲烷)得到标题化合物(0.48g，52％收率)，为白色泡状物。ESI MS m/z 1582.90([M+H]+)。
实施例57. 4-(双(2-羟乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(156)的合成。
Figure BDA0003161812140001743
将琥珀酸二甲酯(20.0g，136.9mmol)和二羟乙胺(7.20g，68.7mmol)的无水甲苯(500ml)和吡啶(50ml)混合物在150℃下加热28小时。将混合物浓缩并在硅胶柱上纯化，用5-25％乙酸乙酯/二氯甲烷洗脱，得到标题化合物(12.5g，83％收率)。ESI MS m/z 242.42[M+Na]+。
实施例58. 4-(双(2-((甲磺酰基)氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(157)的合成。
Figure BDA0003161812140001751
向4-(双(2-羟乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(12.0g，49.56mmol)的无水吡啶(350ml)溶液中加入甲磺酰氯(20.0g，175.4mmol)。搅拌过夜后，将混合物浓缩，用乙酸乙酯(350mL)稀释，用冷的1M磷酸二氢钠(2×300mL)洗涤，有机相用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到粗产物(
Figure BDA0003161812140001753
18.8g，＞100％收率)。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步。ESI MS m/z376.06([M+H]+)。
实施例59. 3，6-环内氧代-Δ-四氢邻苯二甲酰亚胺(159)的合成。
Figure BDA0003161812140001752
向马来酰亚胺(10.0g，103.0mmol)的甲苯(200mL)溶液中加入呋喃(10.0mL，137.4mmol)。在100℃下，将混合物在1L压力反应釜中加热8小时，冷却至室温后将固体用甲醇洗涤，滤液浓缩并在乙酸乙酯/正己烷中结晶，得到16.7g(99％)的标题化合物。1H NMR(CDCl3)：11.12(s，1H)，6.68～6.64(m，2H)，5.18～5.13(m，2H)，2.97～2.92(m，2H)。ESI MSm/z[M+Na]+188.04。
实施例60. 4-((2-((3aR，4R，7S，7aS)-1，3-二氧代-3a，4，7，7a-四氢代-1H-4，7-环氧异吲哚-2(3H)-基)乙基)(2-(((4R，7S，7aS)-1，3-二氧代-3a，4，7，7a-四氢代-1H-4，7-环氧异吲哚-2(3H)-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(160)的合成。
Figure BDA0003161812140001761
向4-(双(2-(((甲基磺酰基)氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(157，新制备，90％纯度，8.5g，20mmol)的DMA(350mL)溶液中，加入3，6-内氧代-Δ-四氢邻苯二甲酰亚胺(10.2g，61.8mmol)，碳酸钠(8.0g，75.5mmol)和碘化钠(0.3g，2.0mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，浓缩，用乙酸乙酯(350mL)稀释，用饱和的碳酸氢钠溶液(300mL)，饱和NaCl(300mL)和1M NaH2PO4(300mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，上样到硅胶柱上，并用10-30％乙酸乙酯/正己烷洗脱，得到标题化合物(7.9g，77％收率)。ESI MS m/z[M+Na]+536.4。
实施例61. 4-(双(2-(2-，2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(161)的合成。
Figure BDA0003161812140001762
将化合物160(3.0g，5.8mmol)和三甲基锡烷醇(4.8g，26.4mmol)的1，2-二氯乙烷(150mL)溶液在80℃下，回流8小时，然后冷却至室温，将残余物通过短硅胶柱纯化，用二氯甲烷/甲醇洗脱以除去过量的氢氧化三甲基锡。然后合并各组分，浓缩并用DMA和甲苯稀释，加热至120℃并搅拌过夜。将反应混合物上样到硅胶柱上，并用5-10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到标题化合物(1.62g，76％收率)。ESI MS m/z[M+Na]+386.2。
实施例62.(S)-34-(4-(双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-29，36-二氮杂四十烷-40-叔丁基酯(163)的合成。
Figure BDA0003161812140001771
向化合物161(1.62g，4.20mmol)和化合物141(2.71g，3.82mmol)的DMA(20mL)溶液中，加入EDC·HCl(0.81g，4.20mmol)。将反应物在室温搅拌过夜，然后倒入水(50mL)中，并用乙酸乙酯(3×40mL)萃取。合并有机相，用盐水(40mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(10-50％乙酸乙酯/石油醚)，得到无色油状物(3.20g，80％收率)。ESI MS m/z 1057.85([M+H]+)。
实施例63.(S)-34-(4-(双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧杂-29，36-二氮杂四十烷-40-酸(164)的合成。
Figure BDA0003161812140001772
将化合物163(3.20g，3.03mmol)的甲酸(10mL)溶液在室温搅拌过夜。然后将溶液浓缩并与甲苯共蒸三次，得到无色油状物(3.00g，粗产物)，无需进一步纯化即可使用。ESIMS m/z 1001.50([M+H]+)。
实施例64.(S)-2，5-二氧吡咯烷-1-基34-(4-(双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-28，35-二氧代-2，5，8，11，14，17，20，23，26-九氧代-29，36-二氮杂四十烷-40-酯(165)的合成。
Figure BDA0003161812140001781
向化合物164(3.00g，粗产物，3.03mmol)的DMA(15.0mL)溶液中，加入NHS(0.38g，3.33mmol)和EDC·HCl(0.87g，4.55mmol)。在室温下持续搅拌2小时，然后用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。合并有机相并用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化(10-50％乙酸乙酯/石油醚)，得到无色油状物(2.90g，90％收率)。ESI MS m/z 1098.50([M+H]+)。
实施例65.化合物166的合成。
Figure BDA0003161812140001782
向化合物42(50mg，0.0565mmol)和化合物165(93mg，1.5eq)的乙醇(10mL)溶液中，加入0.1M NaH2PO4(10mL)并搅拌30分钟。将反应物浓缩并通过制备型HPLC纯化(乙腈/水)，得到白色泡沫(63mg，60％收率)。ESI MS m/z1868.80([M+H]+)。
实施例66. 14-(苄氧基)-14-氧代十四烷酸(183)的合成。
Figure BDA0003161812140001791
向十四烷二酸(2.06g，8mmol)的DMF(30mL)溶液中加入K2CO3(1.1g，8mmol)和BnBr(1.36g，8mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩，并通过柱色谱法(乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到标题化合物183(1.2g，45％收率)。ESI MS m/z 349.23([M+H]+)。
实施例67. 3-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁基酯(185)的合成。
Figure BDA0003161812140001792
向2，2'-(乙烷-1，2-二基双(氧基))二乙醇(55.0mL，410.75mmol，3.0eq)的无水THF(200mL)溶液中加入钠(0.1g)。搅拌混合物直至钠消失，然后滴加丙烯酸叔丁酯(20.0mL，137.79mmol，1.0eq)。将混合物搅拌过夜，然后在0℃下用盐酸溶液(20.0mL，1N)淬灭。通过旋转蒸发除去THF，加入盐水(300mL)，并将所得混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。有机层用盐水(3×300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到无色油状物(30.20g，79.0％收率)，无需进一步纯化即可使用。MS ESI m/z 278.17([M+H]+)。
实施例68. 3-(2-(2-(2-(2-(甲苯磺酰氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(186)的合成。
Figure BDA0003161812140001793
在0℃下，向3-(2-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(30.20g，108.5mmol，1.0eq)和TsCl(41.37g，217.0mmol，2.0eq)的无水DCM(220mL)中，加入TEA(30.0mL，217.0mmol，2.0eq)。将该混合物在室温搅拌过夜，然后用水(3×300mL)和盐水(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶柱纯化(3∶1己烷/乙酸乙酯)，得到无色油状物(39.4g，84.0％收率)。MS ESI m/z 433.28([M+H]+)。
实施例69.叔丁基3-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸酯(187)的合成。
Figure BDA0003161812140001801
向3-(2-(2-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁基酯(39.4g，91.1mmol，1.0eq)的无水DMF(100mL)溶液中加入NaN3(20.67g，316.6mmol，3.5eq)。将混合物在室温下搅拌过夜。加入水(500mL)，并用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。用水(3×900mL)和盐水(900mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并通过硅胶柱(5：1己烷/乙酸乙酯)纯化，得到黄色油状物(23.8g，85.53％收率)。MS ESI m/z 326.2([M+Na]+)。
实施例70. 3-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(188)的合成。
Figure BDA0003161812140001802
将Raney-Ni(7.5g，悬浮于水中)用水(三次)和异丙醇(三次)洗涤，并与化合物187(5.0g，16.5mmol)的异丙醇混合。将混合物在H2气球下于室温搅拌16小时，过滤，然后在硅藻土垫上过滤，用异丙醇洗涤滤垫。浓缩滤液，并通过柱色谱法纯化(5-25％甲醇/二氯甲烷)，得到浅黄色油状物(2.60g，57％收率)。MS ESI m/z279.19([M+H]+)。
实施例71. 27-苄基-1-叔丁基-14-氧代-4，7，10-三氧杂-13-氮杂二十七烷-1，27-二酸酯(189)的合成。
Figure BDA0003161812140001811
向化合物188(2.60g，9.35mmol)和化合物183的二氯甲烷(50mL)溶液中加入EDC·HCl(2.15g，11.2mmol)和DIPEA(3.6mL，20.6mmol)。将反应混合物在室温持续搅拌1小时，然后用50mL二氯甲烷稀释，倒入装有50mL水的分液漏斗中。分离有机相，用盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(0-10％甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物189(4.94g，87％收率)。MS ESI m/z 608.40([M+H]+)。
实施例72. 3，16-二氧代-1-苯基-2，20，23，26-四氧杂-17-氮杂二十九烷-29-酸(190)的合成。
Figure BDA0003161812140001812
向化合物189(4.94g，8.14mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入TFA(20mL)。将反应在室温搅拌1小时，然后浓缩至干，并与二氯甲烷浓缩两次，并将残余物置于泵上，得到化合物190(4.50g，粗产物)。ESI MS m/z 552.35([M+H]+)。
实施例73. 40-苄基1-叔丁基-14，27-二氧代-4，7，10，17，20，23-六氧杂-13，26-二氮杂四十烷-1，40-二酸酯(191)的合成。
Figure BDA0003161812140001813
向化合物190(4.50g，粗产物，8.14mmol)和化合物188(1.95g，7.00mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入EDC·HCl(1.56g，8.14mmol)和DIPEA(2.7mL，15.4mmol)。将反应混合物在室温持续搅拌1小时，然后用50mL二氯甲烷稀释，倒入装有50mL水的分液漏斗中。分离有机相，用盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(0-10％甲醇/二氯甲烷)，得到标题化合物191(5.22g，92％收率)。MS ESI m/z 811.52([M+H]+)。
实施例74. 3，16，29-三氧代-1-苯基-2，20，23，26，33，36，39-七氧杂-17，30-二氮杂四十二烷-42-酸(192)的合成。
Figure BDA0003161812140001821
向化合物191(5.22g，6.44mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中加入TFA(15mL)。将反应在室温搅拌1小时，然后浓缩至干，并与二氯甲烷共浓缩两次，并将残余物置于泵上，得到化合物192(4.90g，粗产物)。ESI MS m/z 755.46([M+H]+)。
实施例75. 40-苄基1-(2，5-二氧吡咯烷-1-基)14，27-二氧代-4，7，10，17，20，23-六氧杂-13，26-二氮杂四十烷-1，40-二酸酯(193)的合成。
Figure BDA0003161812140001822
向化合物192(4.90g，粗产物，6.44mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中加入NHS(0.81g，7.08mmol)，EDC·HCl(1.85g，9.66mmol)，随后加入DIPEA(2.8mL，16.1mmol)。将反应搅拌2小时，然后用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化(10-50％乙酸乙酯/石油醚)，得到无色油状物(4.90g，90％收率)。ESI MS m/z 852.48([M+H]+)。
实施例76. 1-((2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基)-1，14，27-三氧代-4，7，10，17，20，23-六氧杂-13，26-二氮杂四十烷-40-酸(194)的合成。
Figure BDA0003161812140001831
在氢化瓶中，向化合物193(4.90g，5.75mmol)的甲醇(20mL)溶液中加入Pd/C(10wt％，0.20g)，催化加氢(1atm H2)搅拌过夜，通过硅藻土(助滤剂)过滤，并将滤液浓缩，得到化合物194(4.50g，收率＞100％)。ESI MS m/z 762.44([M+H]+)。
实施例77.化合物195的合成。
Figure BDA0003161812140001832
向化合物56(40mg，1.5eq)和化合物144(50mg，1.5eq)的乙醇(10mL)溶液中，加入0.1M NaH2PO4(10mL)并搅拌30分钟。将反应物浓缩并通过制备型HPLC纯化(乙腈/水)，得到白色泡沫(31mg，40％收率)。ESI MS m/z 1704.80([M+H]+)。
实施例78.化合物196的合成。
Figure BDA0003161812140001841
向化合物195(31mg，0.0182mmol)和化合物194(17mg，0.0218mmol)的DMA(10mL)混合物中加入DIPEA(5μL，0.0273mmol)。将反应物在室温搅拌过夜，然后浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/水)纯化，得到白色泡沫(26mg，61％收率)。ESI MS m/z 2351.60([M+H]+)。
实施例79.(6S，13S)-二叔丁基9，10-双(((苄氧基)羰基)氨基)-5，8，11，14-四氧代-6，13-双(4-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)丁基)-4，7，12，15-四氮杂十八烷-1，18-二酸酯(209)的合成。
Figure BDA0003161812140001842
向(S)-叔丁基12-氨基-2，2-二甲基-6，13-二氧代-5-氧杂-7，14-二氮杂-2-硅十七烷-17-酯(6.02g，14.4mmol)和2，3-双((((苄氧基)羰基)氨基)琥珀酸(5.00g，12.0mmol)的DMA(60mL)溶液中加入EDC·HCl(2.76g，14.4mmol)和DIPEA(4.7mL，26.4mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后用150mL二氯甲烷稀释，倒入装有100mL水的分液漏斗中。分离有机相，用盐水(2×50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(10-80％乙酸乙酯/石油醚)，得到标题化合物209(12.4g，85％收率)。ESI MS m/z 1215.63([M+H]+)。
实施例80.(6S，13S)-二叔丁基9，10-二氨基-5，8，11，14-四氧代-6，13-双(4-((((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)丁基)-4，7，12，15-四氮杂十八烷-1，18-二酸酯(210)的合成。
Figure BDA0003161812140001851
在氢化瓶中，将化合物209(12.4g，10.2mmol)的甲醇(50mL)溶液和Pd/C(10wt％，0.10g)的混合物振荡2小时，通过硅藻土(助滤剂)过滤，并将滤液浓缩，得到为无色油状物的化合物210(9.47g，98％收率)。ESI MS m/z 947.56([M+H]+)。
实施例81.(6S，13S)-二叔丁基9，10-双(3-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)-5，8，11，14-四氧代-6，13-双(4-((((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)丁基)-4，7，12，15-四氮杂十八烷-1，18-二酸酯(211)的合成。
Figure BDA0003161812140001852
向化合物210(9.47g，10.0mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入NHS(1.39g，12.0mmol)，EDC·HCl(2.30g，12.0mmol)，DIPEA(3.8mL，22.0mmol)。将反应搅拌2小时，然后用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。合并有机相并用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化(10-80％乙酸乙酯/石油醚)，得到无色油状物(9.49g，76％收率)。ESI MS m/z 1249.72([M+H]+)。
实施例82.(6S，13S)-9，10-双(3-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)丙酰胺基)-5，8，11，14-四氧代-6，13-双(4-((((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)丁基)-4，7，12，15-四氮杂十八烷-1，18-二酸酯(212)的合成。
Figure BDA0003161812140001861
在0℃下，将化合物211(9.49g，7.60mmol)的THF(15mL)溶液和4N盐酸(2mL)反应30分钟，然后浓缩，上样到短硅胶柱上，用0-15％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到无色油状物(8.50g，90％收率)。ESI MS m/z 1249.72([M+H]+)。
实施例83.化合物213的合成。
Figure BDA0003161812140001862
向化合物212(139.0mg，0.111mmol)和化合物52(50.0mg，0.0555mmol)的DMF(10mL)溶液中加入TBTU(35.6mg，0.111mmol)，DIPEA(20.0μL，0.111mmol)，并将混合物在室温搅拌2小时。在高真空下除去DMF后，将残余物通过制备型HPLC纯化(乙腈/水)，得到无色油状物(140.1mg，63％收率)。ESI MS m/z2002.84([M+H]+)。
实施例84.化合物214的合成。
Figure BDA0003161812140001871
在0℃下，将化合物213(140mg，0.0699mmol)的THF(10mL)溶液与TBAF(1.0M的THF，350μL)反应30分钟，然后浓缩，并通过短硅胶柱纯化(0-10％甲醇/二氯甲烷)得到无色油状物(100.3mg，88％收率)。ESI MS m/z 1714.72([M+H]+)。
实施例85.化合物215的合成。
Figure BDA0003161812140001872
将化合物214(99.8mg，0.0583mmol)和化合物194(110.2mg，0.146mmol)在THF(10mL)和磷酸盐缓冲溶液(10mL，0.5M，pH 7.7)的混合物搅拌过夜，然后浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/水)纯化，得到白色泡沫(79.2mg，45％收率)。ESI MS m/z 3007.56([M+H]+)。
实施例86. 2-(1，3-二氧代异吲哚-2-基)乙酰氯(223)的合成。
Figure BDA0003161812140001881
在室温下向N-邻苯二甲酰基甘氨酸(10.0g，48.7mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入草酰氯(6.3mL，73.1mmol)，之后滴加DMF。将反应物搅拌2小时，然后浓缩，得到黄色固体的化合物223(10.8g)。
实施例87. 2-(2-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酰基)肼基羧酸叔丁酯(224)的合成。
Figure BDA0003161812140001882
向叔丁氧羰基肼(7.08.g，53.5mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中加入Et3N(13.5mL，97.4mmol)，然后在0℃下加入化合物223(10.8g，48.7mmol)。将反应在室温搅拌30分钟，倒入冰水(100mL)中，并用二氯甲烷(3×100mL)萃取。用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤合并的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到白色固体(15.5g，100％收率)。ESIMS m/z 320.12([M+H]+)。
实施例88. 2-(1，3-二氧异吲哚-2-基)乙酰肼(225)的合成。
Figure BDA0003161812140001883
将化合物224(15.5g，48.7mmol)溶解于二氯甲烷(150mL)中，并在室温下和TFA(50mL)反应1小时，然后浓缩，得到白色固体(10.6g，100％收率)。ESI MS m/z 220.06([M+H]+)。
实施例89. 2-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N'-(2-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酰基)乙酰肼(226)的合成。
Figure BDA0003161812140001891
在0℃下，向化合物225(10.6g，48.7mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中加入Et3N(13.5mL，97.4mmol)和化合物223(10.8g，48.7mmol)。将反应物升温至室温搅拌过夜。通过过滤收集沉淀物并将其悬浮在水(100mL)中，搅拌20分钟。再次过滤得到化合物218(15.7g，80％收率)。ESI MS m/z 407.09([M+H]+)。
实施例90. 2，2'-(1，2-双(2-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酰基)肼-1，2-二基)二乙酸二叔丁基酯(227)的合成。
Figure BDA0003161812140001892
在0℃下，将NaH(0.5g，12.3mmol)分批加入到化合物226(2.0g，4.92mmol)的DMF(40mL)溶液中。将该混合物加热至室温并搅拌3小时。之后，加入溴乙酸叔丁酯(2.0g，10.3mmol)，将反应搅拌过夜，然后倒入冰水(100mL)中，并用二氯甲烷(3×50mL)萃取。用水(50mL)，盐水(50mL)洗涤合并的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，通过硅胶柱纯化，得到白色固体(1.5g，50％收率)。ESI MS m/z 635.23([M+H]+)。
实施例91. 2，2'-(1，2-双(2-氨基乙酰基)肼-1，2-二基)二乙酸二叔丁基酯(228)的合成。
Figure BDA0003161812140001901
将化合物227(1.5g，2.36mmol)和肼(442mg，7.08mmol)在乙醇(30mL)中的混合物回流1小时，然后冷却至室温并过滤。将滤液浓缩，用乙酸乙酯(20mL)稀释，再次过滤。浓缩滤液，得到白色固体(750mg，85％收率)。ESI MS m/z375.22([M+H]+)。
实施例92. 2，2'-(1，2-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)乙酰基)肼-1，2-二基)二乙酸二叔丁基酯(229)的合成。
Figure BDA0003161812140001902
将化合物228(750mg，2mmol)的THF(2mL)溶液加入NaHCO3水溶液(30mL)，冷却至0℃，然后加入N-甲氧基羰基马来酰亚胺(622mg，4mmol)将反应在0℃下搅拌1小时。过滤收集白色固体(854mg，80％收率)。ESI MS m/z 535.20([M+H]+)。
实施例93. 2，2'-(1，2-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)乙酰基)肼-1，2-二基)二乙酸(230)的合成。
Figure BDA0003161812140001903
将化合物229(854mg，1.6mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)中，并在室温下和TFA(3mL)反应2小时。然后将反应浓缩，得到化合物230(675mg，100％收率)。ESI MS m/z 423.07([M+H]+)。
实施例94. 4，4'-((2，2'-(1，2-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)乙酰基)肼-1，2-二基)双(乙酰基))双(氮杂二基))二丁酸二叔丁基酯(231)的合成。
Figure BDA0003161812140001911
在0℃下，向化合物230(200mg，0.47mmol)的DMF(5mL)溶液中加入4-氨基丁酸叔丁酯(158mg，0.99mmol)和EDC(189.7mg，0.99mmol)。将反应物升温至室温，搅拌过夜，倒入冰水中，用二氯甲烷(3×10mL)萃取。合并有机相，用1N盐酸(5mL)，水(5mL)，盐水(5mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到白色固体(330mg，100％收率)。
实施例95.双(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)4，4'-((2，2'-(1，2-双(2-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)乙酰基)肼-1，2-二基))双(氮杂二基))二丁酸酯(233)的合成。
Figure BDA0003161812140001912
将化合物231(330mg，0.47mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)中，并在室温下与TFA(3mL)反应2小时。将反应物浓缩并重新溶解在DMF(5mL)中，并冷却至0℃，依次加入NHS(113mg，0.98mmol)和EDC(189mg，0.98mmol)。将反应物升温至室温，搅拌过夜，倒入冰水中，用二氯甲烷(3×20mL)萃取。用水(5mL)，盐水(5mL)洗涤合并的有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到白色固体(369mg，100％收率)。ESI MS m/z 787.21([M+H]+)。
实施例96.(S)-48-((((苄氧基)羰基)氨基)-3，16，29，42-四氧代-1-苯基-2，20，23，26，33，36，39-七氧杂-17，30，43-三氮杂四十九烷-49-酸(235)的合成。
Figure BDA0003161812140001921
在0℃下，向化合物192(1.00g，1.32mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中，加入HATU(0.50g，1.32mmol)和TEA(0.06mL，1.32mmol)。将反应在0℃下搅拌30分钟，然后加入Z-Lys-OH(0.40g，1.43mmol)。将反应搅拌1小时，然后用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。合并有机相并用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化(0-10％甲醇/二氯甲烷)，得到无色油状物(1.28g，95％收率)。ESI MS m/z 1017.60([M+H]+)。
实施例97.(S)-47-苄基1-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)2-((苄氧基)羰基)氨基)-8，21，34-三氧代-11，14，17，24，27，30-六氧杂-7，20，33-三氮杂四十七烷-1，47-二酸酯(236)的合成。
Figure BDA0003161812140001922
向化合物235(1.28g，1.26mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入NHS(0.17g，1.51mmol)，EDC HCl(0.29g，1.51mmol)，随后加入TEA(0.38mL，2.77mmol)。将反应搅拌2小时，然后用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残余物通过硅胶柱纯化(0-10％甲醇/二氯甲烷)，得到无色油状物(1.28g，91％收率)。ESI MS m/z 1114.62([M+H]+)。
实施例98.化合物237的合成。
Figure BDA0003161812140001931
向化合物56(50.2mg，0.0555mmol)和化合物236(136.1mg，0.122mmol)的DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(20μL，0.122mmol)，并将混合物在室温搅拌2小时。在高真空下除去DMF后，将残余物通过制备型HPLC纯化(乙腈/水)，得到无色油状物(70.3mg，44％收率)。ESI MS m/z 2899.80([M+H]+)。
实施例99.化合物238的合成。
Figure BDA0003161812140001932
在氢化瓶中，将化合物237(70.0mg，0.0241mmol)的甲醇(50mL)溶液与Pd/C(10wt％，145mg)催化加氢(1atm H2)反应2小时，通过硅藻土(助滤剂)过滤，并将滤液浓缩，得到化合物238(65mg，收率＞100％)。ESI MS m/z 2631.63([M+H]+)。
实施例100.化合物239的合成。
Figure BDA0003161812140001941
将化合物238(65mg，0.0247mmol)和化合物233(29mg，0.0371mmol)在EtOH(10mL)和磷酸盐缓冲溶液(10mL，0.5M，pH 7.2)中的混合物搅拌过夜，然后浓缩，并通过制备型HPLC(乙腈/水)纯化，得到白色泡沫(28.3mg，36％收率)。ESI MS m/z 3187.60([M+H]+)。
实施例101. 1，2-双(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)肼-1，2-二羧酸二叔丁基酯的合成。
Figure BDA0003161812140001942
向肼-1，2-二羧酸二叔丁基酯(8.01g，34.4mmol)的DMF(150ml)溶液中，加入NaH(60％，2.76g，68.8mmol)。在室温搅拌30分钟后，加入2-溴乙酸二叔丁基酯(14.01g，72.1mmol)。将混合物搅拌过夜，加入甲醇(3ml)淬灭，浓缩，用乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)稀释，分离，并将水层用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。合并有机层，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并通过硅胶柱色谱法纯化(乙酸乙酯/己烷1∶5至1∶3)，得到标题化合物(12.98g，82％收率)，为无色油状物。MS ESI m/z C22H41N2O8[M+H]+计算值461.28，实测值461.40。
实施例102. 2，2'-(肼-1，2-二基)二乙酸的合成。
Figure BDA0003161812140001951
向1，2-二(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)肼-1，2-二羧酸二叔丁基酯(6.51g，14.14mmol)的1，4-二恶烷(40ml)溶液中，加入盐酸(12M，10ml)。将混合物搅拌30分钟，用二恶烷(20ml)和甲苯(40ml)稀释，浓缩并与二恶烷(20ml)和甲苯(40ml)浓缩至干，得到粗制的标题产物，用于下一步，无需进一步生产(2.15g，103％收率，
Figure BDA0003161812140001955
93％纯度)。MS ESI m/zC4H9N2O4[M+H]+计算值149.05，实测值149.40。
实施例103. 2，2'-(1，2-双((E)-3-溴丙烯酰基)肼-1，2-二基)二乙酸的合成。
Figure BDA0003161812140001952
向2，2'-(肼-1，2-二基)二乙酸(1.10g，7.43mmol)的THF(50ml)和NaH2PO4(0.1M，80ml，pH 6.0)的混合溶液中，加入(E)-3-溴丙烯酰基溴(5.01g，23.60mmol)。将混合物搅拌6小时，浓缩并在硅胶柱上纯化，用含有3％甲酸的水/乙腈(1∶9)洗脱，得到标题化合物(2.35g，77％收率，
Figure BDA0003161812140001954
93％纯度)。MS ESI m/zC10H11Br2N2O6[M+H]+计算值412.89，实测值413.50。
实施例104. 2，2'-(1，2-双((E)-3-溴丙烯酰基)肼-1，2-二基)二乙酰氯的合成。
Figure BDA0003161812140001953
向2，2'-(1，2-双((E)-3-溴丙烯酰基)肼-1，2-二基)二乙酸(210mg，0.509mmol)的二氯乙烷(15ml)溶液中加入(COCl)2(505mg，4.01mmol)，然后加入0.040ml DMF。在室温搅拌2小时后，将混合物浓缩并与二氯乙烷(2×20ml)和甲苯(2×15ml)共同浓缩至干，得到标题粗产物(不稳定)，用于下一步，无需进一步纯化(245mg，107％收率)。MS ESI m/zC10H9Br2Cl2N2O4[M+H]+计算值448.82，450.82，452.82，454.82，实测值448.60，450.60，452.60，454.60。
实施例105. 2，8-二氧代-1，5-恶唑烷-5-羧酸叔丁基酯的合成。
Figure BDA0003161812140001961
在4℃下，在1小时内，向3，3'-氮杂二基二丙酸(10.00g，62.08mmol)的1.0MNaOH(300ml)溶液中加入二叔丁基二碳酸酯(22.10g，101.3mmol)的THF(200ml)溶液，加入完成后，将混合物在4℃下搅拌2小时。将混合物用0.2M H3PO4小心酸化至pH4，真空浓缩，用二氯甲烷萃取，经Na2SO4干燥，浓缩，并用快速硅胶色谱法纯化，用醋酸/甲醇/二氯甲烷(0.01：1：5)洗脱，得到3，3′-((叔丁氧羰基)氮杂二基)二丙酸(13.62g，84％收率)。ESI MS m/zC11H19NO6[M+H]+计算值262.27；实测值262.40。
在0℃下，向3，3'-((叔丁氧基羰基)氮杂二基)二丙酸(8.0g，30.6mmol)的二氯甲烷(500ml)溶液中加入五氧化二磷(8.70g，61.30mmol)。将混合物在0℃下搅拌2小时，然后在室温下持续搅拌1小时，通过短硅胶柱过滤，并用乙酸乙酯/二氯甲烷(1∶6)冲洗该柱。浓缩滤液，并用乙酸乙酯/正己烷打浆，得到标题化合物(5.64g，74％收率)。ESI MS m/zC11H17NO5[M+H]+，计算值244.11；实测值244.30。
实施例106. 2，5-二氧杂吡咯烷-1-基丙烯酸酯的合成。
Figure BDA0003161812140001962
将丙烯酸(5.00g，71.4mmol)，NHS(9.01g，78.3mmol)和EDC(20.0g，104.1mmol)的二氯甲烷(150ml)溶液和DIPEA(5ml，28.7mmol)搅拌过夜，浓缩并纯化通过硅胶柱色谱法纯化(乙酸乙酯/己烷1∶4)，得到标题化合物(9.30g，79％收率)，为无色油状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ2.68(s，1H)，2.61(s，4H)。MS ESI m/z C7H5NaNO4[M+Na]+计算值190.02，实测值190.20。
实施例107. 2-丙烯酰肼羧酸叔丁基酯的合成。
Figure BDA0003161812140001971
将丙烯酸(5.00g，71.4mmol)，叔丁基肼羧酸酯(9.45g，71.5mmol)和EDC(20.0g，104.1mmol)的二氯甲烷(150ml)溶液和DIPEA(5ml，28.7mmol)搅拌过夜，浓缩并纯化通过硅胶柱色谱法纯化(乙酸乙酯/己烷1∶5)，得到标题化合物(7.92g，84％收率)，为无色油状物。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ8.76(m，2H)，2.68(s，1H)，1.39(s，9H)。MS ESI m/z C5H12NaN2O2[M+Na]+计算值155.09，实测值155.26。
实施例108.丙烯酰肼盐酸盐的合成。
Figure BDA0003161812140001972
在4℃下，将2-丙烯酰肼羧酸叔丁基酯(4.01g，30.35mmol)溶解在1，4-二恶烷(12mL)并与4ml盐酸(浓)反应。将混合物搅拌30分钟，用二恶烷(30ml)和甲苯(30ml)稀释并在真空下浓缩。将粗混合物在硅胶上纯化，使用甲醇(5％至10％)的二氯甲烷溶液(含1％甲酸)洗脱，得到标题化合物(2.11g，收率83％)，ESI MS m/z C3H5N2O[M+H]+，计算值85.03；实测值85.30。
实施例109. 4-(2，5-二氧代-2，5-二氢代1H-吡咯-1-基)丁酸的合成。
Figure BDA0003161812140001973
向马来酸酐(268g，2.73mol)的乙酸(1L)溶液中，加入4-氨基丁酸(285g，2.76mol)。在室温搅拌30分钟，将反应物回流1.5小时，冷却至室温。真空浓缩得到残余物，溶于乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将粗产物从乙酸乙酯和石油醚中结晶，得到白色固体(400g，80％收率)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.71(s，2H)，3.60(t，J＝6.7Hz，2H)，2.38(t，J＝7.3Hz，2H)，2.00–1.84(m，2H)。
实施例110. 2，5-二氧吡咯烷-1-基-4-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)丁酸酯的合成。
Figure BDA0003161812140001981
在室温下，将4-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)丁酸(400g，2.18mol，1.0eq)溶解在二氯甲烷(1.5L)中，向其中加入N-羟基琥珀酰亚胺(276g，2.40mmol，1.1eq)和DIC(303g，2.40mol，1.1eq)，搅拌过夜。将反应浓缩并通过柱色谱法(1：2石油醚/乙酸乙酯)纯化，得到白色固体的NHS酯(382g，63％收率)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.74(s，2H)，3.67(t，J＝6.8Hz，2H)，2.85(s，4H)，2.68(t，J＝7.5Hz，2H)，2.13–2.03(m，2H)。
实施例111.化合物S-1的合成(作为对照的可偶联的鹅膏毒素化合物)。
Figure BDA0003161812140001982
向2,5-二氧吡咯烷-1-基4-(2,5-二氧-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸酯125(20.2mg，0.07mmol)和化合物69(15.1mg，0.0172mmol)的DMF(10mL)溶液中加入DIPEA(15μL，5eq)。将反应物在室温下搅拌过夜，然后浓缩，通过制备型HPLC纯化(乙腈/水)，得到呈白色泡沫的化合物S-1(15.0mg，82％收率)。ESI MS m/z 1052.60([M+H]+)。
实施例112. 3-((2-氨基乙基)氨基)丙酸叔丁基酯的合成。
Figure BDA0003161812140001991
在45℃下，将丙烯酸叔丁酯(12.81g，0.10mmol)和乙基-1，2-二胺(24.3g，0.40mol)的THF(150mL)溶液搅拌24小时。浓缩混合物，并在Al2O3柱上纯化，用三乙胺/甲醇/二氯甲烷(5∶15％∶80％)洗脱，得到标题化合物(17.50g，92％收率)。ESI MS m/z 189.20([M+H]+)。
实施例113. 3-(2-氨基乙基)氨基)丙酸盐酸盐的合成。
Figure BDA0003161812140001992
将3-(((2-氨基乙基)氨基)丙酸叔丁基酯(17.00g，90.33mmol)的1，4-二恶烷(50mL)溶液与浓盐酸(15mL)反应。将混合物在室温搅拌30分钟，浓缩并用纯化水(150mL)和乙酸乙酯/正己烷(40mL，1∶5)稀释。分离混合物，并用水(2×10mL)萃取有机层。将水层浓缩并在真空泵上干燥，得到标题化合物(18.70g，100％收率，并通过LC-MS分析纯度为96％)。ESI MS m/z 133.20([M+H]+)。
实施例114. 3-((2-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-丙酸的合成。
Figure BDA0003161812140001993
在0℃下，向3-((2-氨基乙基)氨基)丙酸(18.70g，90.33mmol)的THF(150mL)溶液中加入马来酸酐(8.85g，90.33mmol)。将混合物在0-4℃下搅拌4小时，浓缩，得到(Z)-4-((2-(((2-羧乙基)氨基)乙基)氨基)-4-氧代丁基-2-烯酸，产物通过LC-MS确认。然后向其中加入甲苯(150ml)和DMA(50ml)，并在90℃下用Dean-Stark回流。在收集器中收集30ml溶剂后，加入HMDS(六甲基二硅氮烷，9.0mL，43.15mmol)和氯化锌(16mL，1.0M乙醚溶液)。将混合物加热至115-125℃，并通过Dean-Stark收集甲苯。将反应混合物在120℃下回流6小时。在此期间，加入2×40mL无水甲苯，以保持混合物体积在50mL左右。然后冷却混合物，并加入1mL 1:10盐酸(浓)/甲醇。浓缩混合物，并在硅胶柱上纯化，用水/甲醇(1:15)洗脱，并在真空泵上干燥，得到14.75g的标题化合物(77.0％收率)。ESI MS m/z 213.10([M+H]+)。
实施例115. 2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷-25-基4-甲基苯磺酸酯的合成。
Figure BDA0003161812140002001
向2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷-25-醇(50.0g，0.130mol)的DCM(200ml)溶液和吡啶(100ml)中加入TsCl(30.2g，0.159mol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用丙酮/二氯甲烷(1∶1至4∶1)洗脱，并在真空泵上干燥，得到标题化合物57.34g(82.0％收率)。ESI MS m/z 539.40([M+H]+)。
实施例116.S-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷-25-基硫代乙酸酯的合成。
Figure BDA0003161812140002002
向2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷-25-基4-甲基苯磺酸酯(57.30g，0.106mol)的THF(300ml)和DIPEA(50ml)混合物中，加入HSAc(10.0g，0.131mol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1∶1至4∶1)洗脱，并在真空泵上干燥，得到标题化合物40.51g(86％收率)。ESI MS m/z 443.35([M+H]+)。
实施例117. 2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代二十五烷-25-磺酸的合成
Figure BDA0003161812140002011
在35℃下，向乙酸(200mL)和30％过氧化氢(100mL)的混合物中加入S-2，5，8，11，14，17，20，23-八氧代二十五烷-25-基硫代乙酸酯(40.40g，0.091mol)，搅拌过夜。浓缩混合物，用纯水(200mL)和甲苯(150mL)稀释，分离，并将有机层用水(2×25mL)萃取。合并水溶液，蒸发并在真空泵上干燥，得到标题化合物40.50g(99％收率，通过LC-MS分析纯度为95％)。ESI MS m/z 449.30([M+H]+)。
实施例118. 3，3-N，N-(2”-马来酰亚胺乙基)(2'，5'，8'，11'，14'，17'，20'，23'，26'-九氧杂二十八烷-28'-亚砜)氨基丙酸(70)的合成。
Figure BDA0003161812140002012
向2，5，8，11，14，17，20，23-八氧杂二十五烷-25-磺酸(20.0g，44.62mmol)的THF(100ml)和DCM(100ml)的混合物中加入(COCl)2(25.21g，200.19mmol)和DMF(0.015ml)。将混合物在室温搅拌2小时，浓缩，与二氯甲烷/甲苯(1：1，2×50ml)浓缩，然后再溶解在THF(50ml)中。向3-((2-(2，5-二氧代-2，5-二氢代-1H-吡咯-1-基)乙基)氨基)-丙酸(7.50g，35.36mmol)的THF(100mL)溶液中，加入磺酰氯。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用甲醇/二氯甲烷(1∶6至1∶5)洗脱，并在真空泵上干燥，得到标题化合物14.76g(65％收率)。ESI MS m/z 643.35([M+H]+)。
实施例119.N-N-琥珀酰亚胺3，3-N，N-(2”-马来酰亚胺乙基)(2'，5'，8'，11'，14'，17'，20'，23'，26'-九氧杂二十八烷-28'-亚砜)氨基丙酸酯(70a)的合成。
Figure BDA0003161812140002021
向3，3-N，N-(2”-马来酰亚胺基乙基)(2'，5'，8'，11'，14'，17'，20'，23'，26'-九氧杂二十八烷-28'-亚砜)氨基丙酸(70)(7.50g，11.67mmol)的THF(100ml)溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺(1.50g，13.04mmol)和EDC(10.10g，52.60mmol)。将混合物搅拌过夜，浓缩并在硅胶柱上纯化，用甲醇/二氯甲烷(1∶4至1∶1)洗脱，并在真空泵上干燥，得到标题化合物6.30g(73％收率)。ESI MS m/z 740.40([M+H]+)。
实施例120.制备偶联物78a、146、154、167、197、198、216、240和S-2的一般方法。
向2.0mL，pH 6.0-8.0的10mg/ml Herceptin中加入0.70-2.0mL的100mM NaH2PO4的PBS缓冲液，pH 6.5-8.5的缓冲液，TCEP(14-35μL，20mM水溶液)以及化合物71、145、153、166、195、196、215、239和S-1(14-28μL，20mM的DMA溶液)，之后加入4-(叠氮甲基)苯甲酸(14-50μL，20mM，pH 7.5的PBS缓冲液)。将混合物在室温下孵育4～18小时，然后加入DHAA(135L，50mM)。在室温下连续孵育过夜后，将混合物在G-25柱上纯化，用100mM NaH2PO4、50mMNaCl pH 6.0～7.5缓冲液洗脱，得到12.2～18.6mg的偶联物78a、146、154、167、197、198、216、240和S-2(85％～94％产率)(在13.4～15.8ml的NaH2PO4缓冲液中)。偶联物的药物/抗体比(DAR)通过UPLC-QTOF质谱确定为3.5-4.2。通过SEC HPLC分析表明单体含量为96-99％单体(Tosoh Bioscience，Tskgel G3000SW，7.8mm ID×30cm，0.5ml/min，100min)。
Figure BDA0003161812140002031
实施例121.与T-DM1相比，偶联物78a、146、154、167、197、198、216、240和S-2的体外细胞毒性评价：
用于细胞毒性测定的细胞系是人胃癌细胞系NCI-N87，细胞在含有10％FBS的RPMI-1640中生长。测定时，将细胞(180μL，6000个细胞)加入到96孔板中的每个孔中，并在37℃，5％CO2下温育24小时。然后，在适当的细胞培养基里，用不同浓度的测试化合物(20μL)处理细胞(总体积，0.2mL)。对照孔含有细胞和培养基但无测试化合物。将孔板在37℃和5％CO2下温育120小时，然后向孔中加入MTT(5mg/mL)(20μL)，并将孔板在37℃下孵育1.5小时。小心去除培养基，然后加入DMSO(180μL)，振荡15分钟，在490nm和570nm处测量吸光度，以620nm为参考。依照以下公式计算抑制率：抑制率％＝[1-(分析值-空白对照值)/(控制值-空白对照值)]×100。结果列于表1。
表1.本专利申请的Her2-鹅膏毒素同系物偶联物及其细胞毒性(IC50)：
Figure BDA0003161812140002032
Figure BDA0003161812140002041
实施例122.BALB/c裸鼠人胃癌NCI-N87异种移植瘤模型上的体内抗肿瘤活性。
在人胃癌NCI-N87异种移植瘤模型上评估了偶联物78a、146、154、167、197、198、216、240和S-2的体内疗效。五周龄的雌性BALB/c小鼠(66只动物)在右肩下区域用0.1mL无血清培养基里的N-87癌细胞(5×106个细胞/小鼠)进行皮下接种。肿瘤生长8天后长至平均大小140mm3。然后将动物随机分为11组(每组6只动物)。第一组小鼠作为对照组，注射磷酸盐缓冲液(PBS)。另10组分别静脉注射6mg/kg剂量的偶联物78a、146、154、167、197、198、216、240，S-2和T-DM1。每3或4天(每周两次)测量肿瘤的三个维度，并使用公式：肿瘤体积＝1/2(长×宽×高)来计算肿瘤体积。同时测量了动物的体重。满足以下任一条件时杀死小鼠：(1)体重减少超过注射前体重的20％；(2)肿瘤体积大于1500mm3；病态严重至无法进食和进水或(4)皮肤坏死。如果肿瘤是未可感知的，则认为小鼠是无肿瘤的。
结果如图27所示：在剂量为6.0mg/kg时，所有11种偶联物均未引起动物体重减轻。与PBS缓冲液相比，所有偶联物均显示出抗肿瘤活性。偶联物197、167和78a在体内的抗肿瘤活性与T-DM1相当或稍差，而偶联物154、167、198、216、240和S-2在体内的抗肿瘤活性比T-DM1更好。
在测试的偶联物组中的所有6/6只动物在第18天至第32-48天几乎都没有可测量的肿瘤。当剂量为6mg/kg时对肿瘤生长的抑制作用为：
Figure BDA0003161812140002042
Figure BDA0003161812140002051
实施例123.具有侧链连接子的偶联物与T-DM1和具有单键连接的常规结合物(化合物S-2)在小鼠血清中的毒性研究。
体重变化(通常是体重减轻)是动物对药物毒性的一般反应。将6-7周大的88只ICR雌性小鼠分为11组。每组包括8只小鼠，每只小鼠分别给药偶联物216、146、154S-2和T-DM1，剂量为75mg/kg或150mg/kg，静脉推注。对照组(n＝8)为磷酸盐缓冲液(PBS)。在12天的实验中，对照组、偶联物216和146的75mg/kg和150mg/kg两种剂量组的小鼠体重均未降低。在为期12天的实验中，偶联物154(S-2)和T-DM1的75mg/kg和150mg/kg剂量组的体重均降低，并且在第5天观察到最大程度的体重下降。施用偶联物154，S-2和T-DM1的所有动物显示出剂量依赖性的体重降低。偶联物154和S-2的体重降低远小于T-DM1。T-DM1的低剂量组的体重减轻了约10％，随后恢复非常缓慢，研究终止时仍略低于对照小鼠的体重。S-2的高剂量组体重减轻了约10％，体重恢复较T-DM1的低剂量组快。T-DM1高剂量组的体重持续降低，最大时降低了24％，并且在研究结束时未见恢复趋势。体重变化实验证明了这些鹅膏毒素偶联物与T-DM1相比，在这些小鼠中具有更高的耐受性，并且具有本发明的支链连接子的偶联物比常规的单接头的偶联物(S-2)更具耐受性。

Claims (23)

1.一种支链连接体连接偶联物，其结构由式(I)表示：
Figure FDA0003205665370000011
其中
“-”代表单键；n为1到30；
T是细胞结合剂或分子，选自抗体、单链抗体、结合靶细胞的抗体片段、单克隆抗体、单链单克隆抗体、结合靶细胞的单克隆抗体片段、嵌合抗体、结合靶细胞的嵌合抗体片段、结构域抗体、结合靶细胞的结构域抗体片段、adnectin类抗体、DARPin蛋白、淋巴因子、激素、维生素、生长因子、集落刺激因子、营养转运分子(转铁蛋白)和/或连接在白蛋白、聚合物、树状大分子、脂质体、纳米粒子、囊泡或(病毒)衣壳上的细胞结合肽、蛋白质或小分子；
L1和L2是，相同或者不同，独立地的选自O、NH、N、S、P、NNH、NHNH、N(R3)、N(R12)、N(R12)N(R12’)、CH、CO、C(O)NH、C(O)O、NHC(O)NH、NHC(O)O、下列结构式的聚乙烯氧基：(OCH2CH2)pOR12、或(OCH2CH-(CH3))pOR12、或NH(CH2CH2O)pR12、或NH(CH2CH(CH3)O)pR12、或N[(CH2CH2O)pR12]-[(CH2CH2O)p’R12’]、或(OCH2CH2)pCOOR12、或CH2CH2(OCH2CH2)pCOOR12、其中p和p'是独立选自0到约1000的整数，或它们的组合；C1-C8烷基；C2-C8杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8芳基、芳烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基；或(Aa)r，r＝1-12(1至12个氨基酸单位)，包括天然或非天然氨基酸，相同或不同序列的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽单元；
W是一个延展体单元，通常是自毁灭的间隔体、一个多肽单元、腙、二硫化物、硫醚、酯或酰胺键；w是1或2或3；
V1和V2是独立的间隔体单元，选自O、NH、S、C1-C8烷基；C2-C8杂烷基、烯基或炔基；C3-C8芳基、杂环、碳环、环烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂芳烷基、杂烷基环烷基、或烷羰基；或(Aa)r、r＝1-12(1-12个氨基酸单元)，包括天然或非天然氨基酸，相同或不同序列的二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽单元；或(CH2CH2O)p，p为0-1000；v1和v2独立为0、1或2，但v1和v2同时为0，当v1或v2为0时，意味着侧链Q1或Q2片段缺省。
Q1和Q2独立地由式(I-q1)表示：
Figure FDA0003205665370000021
其中
Figure FDA0003205665370000022
是连接至L1或L2的位置，G1和G2独立地为OC(O)、NHC(O)、C(O)、CH2、NH、OC(O)NH、NHC(O)NH、O、S、B、P(O)(OH)、NHP(O)(OH)、NHP(O)(OH)NH、CH2P(O)(OH)NH、OP(O)(OH)O、CH2P(O)(OH)O、NHS(O)2、NHS(O)2NH、CH2S(O)2NH、OS(O)2O、CH2S(O)2O、Ar、ArCH2、ArO、ArNH、ArS、ArNR1、or(Aa)q1；G3是OH、SH、OR12、SR12、OC(O)R12、NHC(O)R12、C(O)R12、CH3、NH2、NR12、+NH(R12)、+N(R12)(R12’)、C(O)OH、C(O)N2、NHC(O)NH2、BH2、BR12R12’、P(O)(OH)2、NHP(O)(OH)2、NHP(O)(NH2)2、S(O)2(OH)、(CH2)q1C(O)OH、(CH2)q1P(O)(OH)2、C(O)(CH2)q1C(O)OH、OC(O)(CH2)q1C(O)OH、NHC(O)(CH2)q1C(O)OH、CO(CH2)q1P(O)(OH)2、NHC(O)O(CH2)q1C(O)OH、OC(O)NH(CH2)q1C(O)OH、NHCO(CH2)q1P(O)(OH)2、NHC(O)(NH)(CH2)q1C(O)OH、CONH(CH2)q1P(O)(OH)2、NHS(O)2(CH2)q1C(O)OH、CO(CH2)q1S(O)2(OH)、NHS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH、OS(O)2NH(CH2)q1C(O)OH、NHCO(CH2)q1S(O)2(OH)、NHP(O)(OH)(NH)(CH2)q1C(O)OH、CONH(CH2)q1S(O)(OH)、OP(O)(OH)2、(CH2)q1P(O)(NH)2、NHS(O)2(OH)、NHS(O)2NH2、CH2S(O)2NH2、OS(O)2OH、OS(O)2OR1、CH2S(O)2OR12、Ar、ArR12、ArOH、ArNH2、ArSH、ArNHR12、或(Aa)q1；(Aa)q1是含有相同或不同序列的天然或非天然氨基酸的肽；X1和X2独立地是O、CH2、S、S(O)、NHNH、NH、N(R12)、+NH(R12)、+N(R12)(R12’)、C(O)、OC(O)、OC(O)O、OC(O)NH、NHC(O)NH；Y2是O.NH、NR12、CH2.S、NHNH、Ar；R12、R12’、R13和R13’独立地是H、C1～C8烷基；C2～C8杂烷基、或杂环；C3～C8芳基、芳烷基、环烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂烷基环烷基、碳环、或烷基羟基；
Y2是O、NH、NR1、CH2、S、NHNH、Ar；
p1、p2和p3独立地是0-100但不同时为0；
q1和q2独立地是0-24；
优选的Q1和Q2独立地是C2-C100聚羧酸或C-2-C90聚烷基胺、C6-C90寡糖或多糖、C6-C100含季铵阳离子和磺酸根阴离子的两性离子甜菜碱或两性离子聚(磺酰基甜菜碱)(PSB)、C6-C100含可生物降解的聚合物、如聚乳酸/乙醇酸(PLGA)、聚(丙烯酸酯)、脱乙酰壳多糖、N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺的共聚物、聚[2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酸胆碱](PMPC)、聚-L-谷氨酸、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚(乙二醇)(PEG)、聚(丙二醇)(PPG)、聚(乙二醇)改性肽、聚(乙二醇)改性脂质体、聚(乙二醇)改性烷基羧酸、聚(乙二醇)改性烷基胺、透明质酸(HA)(糖胺聚糖)、肝素或硫酸乙酰肝素(HSGAG)、硫酸软骨素或硫酸皮素(CSGAG)、聚(乙二醇)改性的烷基硫酸盐、聚(乙二醇)改性的烷基磷酸盐或聚(乙二醇)改性的烷基季铵盐；
或者W、Q1、Q2、L1、L2、V1或V2中的任何一个或多个独立地可以缺省、但Q1和Q2不能同时缺省。
D是具有下式(II)结构的鹅膏毒素同系物：
Figure FDA0003205665370000041
或一种或多种元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中_____是与W连接的位点；
芳香(吲哚)环上的单键是指它连接芳香环的任意一个碳；
Figure FDA0003205665370000042
表示可选地单键或可缺省；
R1和R2独立地选自H、OH、CH2OH、CH(OH)CH2OH、CH(CH3)CH2OH、CH(OH)CH3、C1-C8烷基、–OR12(酯)、C2-C8烯基、炔基、杂烷基、–OCOR12(酯)、–OC(＝O)OR12-(碳酸脂)、–OC(＝O)NHR12(氨基甲酸酯)；C3-C8芳基、杂环、碳环、环烷基、杂环烷基、杂芳烷基、烷基羰基；
R3和R4独立地选自H、OH、–OR12(酯)、–OCOR12(酯)、–OCOCH3(醋酸酯)、–OCOOR12(碳酸酯)、–OC(＝O)NHR12(氨基甲酸酯)、-OP(O)(OR12)(OR12’)(磷酸酯)、OP(O)(NHR12)(NHR12’)(磷酸胺)、O-SO3 -、或O-糖苷；
R5选自H、OH、NH2、NHOH、NHNH2、–OR12、–NHR12、NHNHR12、–NR12R12’、N(H)(R12)R13CO(Aa)r、(氨基酸或肽，其中Aa是氨基酸或多肽、r＝0-6)；
R6选自H、OH、CH2OH、CH(OH)CH2OH、CH(CH2OH)2、CH(CH3)OH、CH2CH2OH、PrOH、BuOH、C1～C8alkyl、–OR12(酯)、C2～C8烯基、炔基、杂烷基、–OCOR12(酯)；C3～C8芳基、杂环或碳环；
R7、R8和R9独立地选自H、OH、CH3、CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2OH、CH(OH)CH2OH、CH2CH(OH)CH2OH、CH(CH2OH)2、CH2C(OH)(CH2OH)2、CH2C(OH)(CH3)(CH2OH)、CH2C(OH)(CH(CH3)2)(CH2OH)、CH2CH2OH、PrOH、BuOH、CH2COOH、CH2CH2COOH、CH(OH)COOH、CH2CONH2、CH2CH2CONH2、CH2CH2CH2CH2NH2、CH2CH2CH2NHC(＝NH)NH2、C1～C8 alkyl、CH2Ar、CH2SH、CH2SR12、CH2SSR12、CH2SSAr、CH2CH2SCH3、–OR12(酯)、C2～C8烯基、炔基、杂烷基、–OCOR12(酯)；C3～C8芳基、杂环或碳环；
R10和R11独立地选自H、NH2、OH、SH、NO2、卤素、-NHOH、–N3(叠氮基)；-CN(氰基)；C1～C8烷基、C2～C8烯基、炔基、杂烷基；C3～C8芳基、杂环或碳环；–OR12(酯)、–OCOR12(酯)、–OCOCH3(乙酸酯)、–OC(O)OR12(碳酸酯)、-OC(O)CH(R12)NHAa(Aa是氨基酸基团)、-NR12R12’(胺)、-NR12COR12’(酰胺)、-R12NHCOR12’(烷基酰胺)、-R12NHR12’(胺)、NHR12NHR12’NHR12”(胺)；–R12NCONR12’(尿素)；–R12NCOOR12’(氨基甲酸酯)；–OCONR12R12’(氨基甲酸酯)；–NR12(C＝NH)NR12’R12”(胍)；–NR12CO(Aa)p、(氨基酸或肽、其中Aa是氨基酸或多肽，p为0-6)；–N(R12)CONR12’R12”(尿素)；–OCSNHR12(硫代氨基甲酸酯)；-R12SH(硫基)；–R12SR12’(硫化物)；–R12SSR12’(二硫化物)；–S(O)R12(亚砜)；–S(O2)R12(砜)；–SO3、HSO3、HSO2、或HSO3 -、SO3 2-或-HSO2 -的盐(亚硫酸盐)；–OSO3 -；-N(R12)SOOR12’(磺酰胺)；H2S2O5或S2O5 2-的盐(焦亚硫酸氢盐)；PO3SH3、PO2S2H2、POS3H2、PS4H2或PO3S3-、PO2S2 3-、POS3 3-、PS4 3-的盐(单-、二-、三-、和四-硫代磷酸盐)；(R12O)2POSR12’(硫代磷酸酯)；HS2O3或S2O3 2-(硫代硫酸盐)；HS2O4或S2O4 2-的盐(连二亚硫酸盐)；(P(＝S)(OR12)(S)(OH)或与阳离子形成的盐(二硫代磷酸盐)；-N(R12)OR12’(羟胺衍生物)；R12C(＝O)NOH或与阳离子形成的盐(异羟肟酸盐)；HOCH2SO2 -、或其盐(甲醛次硫酸盐)；–N(R12)COR12’(酰胺)；R12R12’R12”NPO3H(三烷基氨基磷酸或氨基磷酸)；或ArAr’Ar”NPO3H(三芳基磷酸)；OP(O)(OM1)(OM2)、OCH2OP(O)(OM1)(OM2)、OSO3M1；O-糖苷(葡萄糖苷、半乳糖苷、甘露糖苷、葡萄糖醛酸苷、阿洛糖苷、果糖苷等)、NH-糖苷、S-糖苷或CH2-糖苷；M1和M2独立地为H、Na、K、Ca、Mg、NH4、NR1’R2’R3’；R1’、R2’和R3’独立地为H、C1～C8烷基；Ar、Ar’、和Ar”为C3-C8芳基或杂芳基；
其中R12，R12’，和R12”独立地选自H、C1～C8烷基；C2-C8杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8芳基、芳烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基；或1-8碳原子酯、醚或酰胺；或如(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p的聚氧乙烯单元、其中p是0至1000的整数、或其组合，或缺省。
X是S、O、NH、SO、SO2、或CH2；
m’是0或1。
2.含有支链连接子的偶联物的结构式表示如(III)：
Figure FDA0003205665370000061
其中，D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2、n和T的定义如权利要求1中所述。
3.支链连接子化合物的结构如(IV)所示、它可以便利地与细胞结合分子T反应，形成式(I)中的偶联物：
Figure FDA0003205665370000062
其中，D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2及n的定义如权利要求1中所述；
Lv1可以与细胞结合分子上的硫醇、胺、羧酸、硒醇、酚或羟基发生反应。Lv1独立地选自羟基(OH)、氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)、碘(I)、硝基酚基、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)基、苯酚基、二硝基苯酚基、五氟苯酚基、四氟苯酚基、三氟苯酚基、二氟苯酚基、一氟苯酚基、五氯苯酚基、三氟甲磺酰基、咪唑基、二氯苯酚基、三氯苯酚基、四氯苯酚基、1-羟基苯并三唑基、甲苯磺酰基、甲磺酰基、2-乙基-5-苯基异恶唑-3’-磺酰基、酸酐或与其它酸酐作用形成的酸酐，例如乙酸酐、甲酸酐、或与多肽缩合试剂、Mitsunobu反应试剂作用生成的中间体。缩合剂的例子如下：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-环己基-N'-(2-吗啉代-乙基)碳二亚胺甲基对甲苯磺酸盐(CMC或CME-CDI)、1，1'-羰基二咪唑(CDI)、氧-(苯并三唑-1-)基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(1H-苯并三唑-1-基)-六氟磷酸铵(HBTU)、(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)-六氟磷酸盐(BOP)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基六氟磷酸盐(PyBOP)、氰基膦酸二乙酯(DEPC)、氯-N，N，N'，N'-四甲基甲脒六氟磷酸盐、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶3-氧六氟磷酸盐(HATU)、1-[(二甲氨基)(吗啉代)亚甲基]-1H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-1-鎓3-氧六氟磷酸盐(HDMA)、2-氯-1，3-二甲基-咪唑六氟磷酸盐(CIP)、六氟磷酸氯代吡咯烷酮鎓(PyCloP)、氟-N，N，N'，N'-双(四亚甲基)甲脒六氟磷酸盐(BTFFH)、N，N，N'，N'-四甲基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲六氟磷酸盐、氧-(2-氧代-1(2H)吡啶基)-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TPTU)、S-(1-氧代-2-吡啶基)N，N，N'，N'-四甲基硫脲四氟硼酸盐、氧-[(乙氧基羰基)-氰基甲基氨基]-N，N，N'，N'-六氟磷酸四甲基脲(HOTU)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基氨基氧基)二甲氨基-吗啉代-六氟磷酸盐(COMU)、氧-(苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-双(四亚甲基)六氟磷酸盐(HBPyU)、N-芐基-N'-环己基-碳二亚胺(有或没有聚合物结合)、二吡咯烷基(N-琥珀酰亚胺基氧基)碳鎓六氟磷酸盐(HSPyU)、氯二吡咯烷基六氟磷酸盐(PyClU)、2-氯-1，3-二甲基咪唑四氟硼酸盐(CIB)、(苯并三唑-1-基氧基)二呱啶碳六氟磷酸盐(HBPipU)、氧-(6-氯苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TCTU)、溴代(二甲基氨基)-六氟磷酸盐(BroP)、丙基膦酸酐
Figure FDA0003205665370000081
2-吗啉代乙基异氰化物(MEI)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(N-琥珀酰亚胺基)六氟磷酸盐(HSTU)、2-溴-1-乙基-吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP)、氧-[(乙氧基羰基)氰基-亚甲基氨基]-N，N，N'，N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TOTU)、4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉氯化物(MMTM、DMTMM)、N，N，N'，N'-四甲基-氧-(N-琥珀酰亚胺基)脲四氟硼酸(TSTU)、O-(3，4-二氢-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TDBTU)、1，1'-(偶氮二羰基)-二呱啶(ADD)、二-(4-氯芐基)偶氮二羧酸酯(DCAD)、偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD)、偶氮二羧酸二异丙酯(DIAD)、偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)。Lv1可以是酸酐，或与其它C1-C8酸酐作用形成的酸酐；Lv1优选地选自：
Figure FDA0003205665370000082
二硫化物；
Figure FDA0003205665370000083
卤代乙酰基；
Figure FDA0003205665370000084
酰卤；
Figure FDA0003205665370000085
N-羟基琥珀酰亚胺酯；
Figure FDA0003205665370000086
马来酰亚胺；
Figure FDA0003205665370000087
单取代马来酰亚胺；
Figure FDA0003205665370000088
二取代马来酰亚胺；
Figure FDA0003205665370000089
单取代的琥珀酰亚胺；
Figure FDA00032056653700000810
二取代马来酰亚胺；
Figure FDA00032056653700000811
取代马来酸；-CHO醛；
Figure FDA00032056653700000812
乙烯磺酰基；
Figure FDA0003205665370000091
丙烯酰基；
Figure FDA0003205665370000092
2-(甲苯磺酰氧基)乙酰基；
Figure FDA0003205665370000093
2-(甲磺酰氧基)乙酰基；
Figure FDA0003205665370000094
2-(硝基苯酚基)乙酰基；
Figure FDA0003205665370000095
2-(二硝基苯基)乙酰基；
Figure FDA0003205665370000096
2-(氟代苯酚基)-乙酰基；
Figure FDA0003205665370000097
2-(二氟苯酚基)-乙酰基；
Figure FDA0003205665370000098
2-((三氟甲基磺酰基)氧基)乙酰基；
Figure FDA0003205665370000099
酮或醛，
Figure FDA00032056653700000910
2-(五氟苯酚基)乙酰基；
Figure FDA00032056653700000911
甲基砜苯基恶二唑(ODA)；
Figure FDA00032056653700000912
酸酐，
Figure FDA00032056653700000913
烷氧基氨；
Figure FDA00032056653700000914
叠氮基，
Figure FDA00032056653700000915
炔基，或
Figure FDA00032056653700000916
酰肼；
其中，X1’是F、Cl、Br、I或Lv3；X2’是O、NH、N(R1)或CH2；R3是H、芳基或杂芳基，其中一个或多个H原子可独立地被-R1、-卤素、-OR1、-SR1、-NR1R2、-NO2、-S(O)R1、-S(O)2R1或-COOR1取代；Lv3是离去基团，选自F、Cl、Br、I、硝基苯基、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、苯酚基、二硝基苯酚基、五氟苯酚基、四氟苯酚基、二氟苯酚基、单氟苯酚基、五氯苯酚基、三氟甲磺酰基、咪唑基、二氯酚基、四氯苯酚基、1-羟基苯并三唑基、甲苯甲磺酰基、甲磺酰基、2-乙基-5-苯基异恶唑-3′-磺酰基，酸酐或与其它酸酐作用形成的酸酐，乙酸酐、甲酸酐、或与多肽缩合试剂、Mitsunobu反应试剂作用生成的中间体。
4.支链连接子化合物的结构如(V)所示，它可以便利地与细胞结合分子T反应，形成式(III)中的偶联物：：
Figure FDA0003205665370000101
其中，D、W、w、L1、L2、Q1、Q2、V1、V2、v1、v2及n的定义如权利要求1中式(I)所述；其中Lv1和Lv2独立地，与权利要求3中式(IV)中Lv1的定义相同，Lv1和Lv2可以与式(V)相同或者不同。
5.根据权利要求1、2、3或4所述的侧链Q1和Q2独立地选自Iq-01至Iq-35：
Figure FDA0003205665370000102
Figure FDA0003205665370000111
Figure FDA0003205665370000121
Figure FDA0003205665370000131
其中，R25和R25’独立地选自H、HC(O)、CH3C(O)、CH3C(NH)、C1-C18烷基、C1-C18烷基-Y1-SO3H、C1-C18烷基-Y1-PO3H2、C1-C18烷基-Y1-CO2H、C1-C18烷基-Y1-N+R12’R13’R13’R14’、C1-C18烷基-Y1-CONH2、C2-C18烷基、C2-C18酯、C2-C18醚、C2-C18胺、C2-C18烷基羧酰胺、C3-C18芳基、C3-C18环烷基、C3-C18杂环、1-24个氨基酸、C2-C18脂质、C2-C18脂肪酸或C2-C18脂肪铵脂质；X1和X2独立地选自NH、N(R1’)、O、CH2、S、C(O)、S(O)、S(O2)、P(O)(OH)、NHNH、CH＝CH、Ar或(Aa)q1，q1＝0-24(0-24个氨基酸、q1＝0表示缺省)；X1、X2、X3、X4、Y1、Y2和Y3独立地选自NH、N(R1’)、O、C(O)、CH2、S、S(O)、NHNH、C(O)、OC(O)、OC(O)O、OC(O)NH、NHC(O)NH、Ar或(Aa)q1，X1、X2、X3、X4、Y1、Y2和Y3独立地可以缺省；p1、p2和p3独立地为0-100，但不能同时为0；q1、q2和q3独立地为0-24；R1’、R2’、R3’和R4’独立地选自H和C1-C6烷基；Aa是天然或非天然氨基酸；Ar或(Aa)q1是同或不同的肽序列；q1＝0表示(Aa)q1缺省。
6.根据权利要求1、2、3和4所述的D(鹅膏毒素)可以选自IIa、IIb、IIc、II-01、II-02、II-03、II-04、II-05、II-06、II-07、II-08、II-09、II-10、II-11、II-12、II-13、II-14、II-15、II-16、II-17、II-18、II-19、II-20、II-21、II-22、II-23、II-24、II-25、II-26：
Figure FDA0003205665370000141
Figure FDA0003205665370000151
Figure FDA0003205665370000161
Figure FDA0003205665370000171
Figure FDA0003205665370000181
Figure FDA0003205665370000191
Figure FDA0003205665370000201
或元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中Z2是氧或孤对电子；R15是H、NHR12、OR12、C1-C8的直链或支链烷基或杂烷基；C2-C8的直链或支链烯基、炔基、烷基环烷基、杂环烷基；C3-C8的直链或支链芳基、芳烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基，碳酸酯(-R1C(O)OR12)，氨基甲酸酯(-R12C(O)NR12’R13)；或1-8个碳原子的羧酸酯、酯、醚或酰胺；或1～8氨基酸；或如(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p的聚氧乙烯单元，其中p是0至约1000的整数；Z1是H、O、S、NH、NHNH、R12、或缺省；R21是COR12、NHCOR12、COOR12、CONHR12、R12、R12NH；R22是R12、SR12、SCH(CH3)R12、SC(CH3)2R12，X是O、S、NH、NHNH、或CH2。R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R12’、R13、和X1的定义与前文相同；
7.根据权利要求1、2、3、或4所述的W、L1、L2、V1、和V2可以独立地选自含有一个或多个下列连接子组分构成：
Figure FDA0003205665370000211
6-马来酰亚胺己酰基(MC)，
Figure FDA0003205665370000212
马来酰亚胺丙酰基(MP)，
Figure FDA0003205665370000213
缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)，
Figure FDA0003205665370000214
丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)，
Figure FDA0003205665370000215
赖氨酸-苯丙氨酸(lys-phe)，
Figure FDA0003205665370000216
对氨基芐氧基-羰基(PAB)，
Figure FDA0003205665370000217
4-硫戊酰基(SPP)，
Figure FDA0003205665370000218
4-硫丁酰基(SPDB)，
Figure FDA0003205665370000219
4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-酰基(MCC)，
Figure FDA00032056653700002110
马来酰亚胺乙氨基(ME)，
Figure FDA00032056653700002111
4-硫-2-羟基磺酰基-丁酰基(2-Sulfo-SPDB)，
Figure FDA0003205665370000221
芳基硫醚基(PySS)，
Figure FDA0003205665370000222
(4-乙酰基)氨基苯酰基(SIAB)，
Figure FDA0003205665370000223
氧芐基硫醚基，
Figure FDA0003205665370000224
氨基苄基硫醚基，
Figure FDA0003205665370000225
二氧基苄基硫醚基、
Figure FDA0003205665370000226
二氨基苄基硫醚基、
Figure FDA0003205665370000227
氨基氧基苄基硫醚基，
Figure FDA0003205665370000228
烷氧基氨基(AOA)，
Figure FDA0003205665370000229
亚乙基氧基(EO)，
Figure FDA00032056653700002210
4-甲基-4-硫代-戊酰基(MPDP)，
Figure FDA00032056653700002211
三唑，
Figure FDA00032056653700002212
二硫、
Figure FDA00032056653700002213
烷基磺酰基，
Figure FDA00032056653700002214
烷基磺胺，
Figure FDA00032056653700002215
二磺胺，
Figure FDA00032056653700002216
磷二酰胺，
Figure FDA00032056653700002217
烷基膦酰胺，
Figure FDA00032056653700002218
膦酸，
Figure FDA00032056653700002219
N-甲基烷基膦酰胺，
Figure FDA00032056653700002220
N，N’-二甲基磷二酰胺、
Figure FDA00032056653700002221
烷基膦二酰胺，
Figure FDA00032056653700002222
肼，
Figure FDA00032056653700002223
乙脒；
Figure FDA00032056653700002224
肟，
Figure FDA00032056653700002225
二乙酰肼，
Figure FDA0003205665370000231
氨基乙基胺，
Figure FDA0003205665370000232
氨基乙基-氨基乙基胺
Figure FDA0003205665370000233
以及含有1-20个氨基酸的L-或D-，天然或非天然肽；其中
Figure FDA0003205665370000234
是连接位点；优选地，X2、X3、X4、X5或X6独立地选自NH、NHNH、N(R12)、N(R12)N(R12’)、O、S、C1-C6烷基、C2-C6杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、C3-C8芳基、芳烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基、CH2OR12、CH2SR12、CH2NHR12或1～8个氨基酸；其中R12和R12’独立地为H、C1-C8烷基、C2-C8杂烷基、烷基环烷基、杂环烷基、C3-C8芳基、芳烷基、杂环、碳环、环烷基、杂烷基环烷基、烷基羰基、杂芳基；1-8个碳原子的酯、醚或酰胺；或如式(OCH2CH2)p或(OCH2CH(CH3))p的聚氧乙烯基单元，其中p是0至约1000的整数，或以上的组合。
8.根据权利要求1、2、3、或4所述的W、L1、L2、V1、和V2可以独立包括：
(A)自我毁灭或非自我毁灭的组分、肽单元、腙键、二硫化物、酯、肟、酰胺或硫醚键。自我毁灭单元包括，与对氨基芐基氨甲酰基(PAB)的电子结构相似的芳香化合物，2-氨基咪唑-5-甲醇的衍生物、杂环PAB同系物、β-葡糖苷酸、以及邻或对氨基芐基缩醛
Figure FDA0003205665370000241
Figure FDA0003205665370000242
or
Figure FDA0003205665370000243
其中，*标记的是额外的间隔体或可释放的连接子、或细胞毒性剂、和/或结合分子(CBA)的连接点；X1、Y1、Z2和Z3独立地为NH、O或S；Z1为H、NHR1、OR1、SR1、COX1R1，其中X1和R1如前文所定义；v为0或1；U1为H、OH、C1-C6烷基、(OCH2CH2)n、F、Cl、Br、I、OR5、SR5、NR5R5’、N＝NR5、N＝R5、NO2、SOR5R5’、SO2R5、SO3R5、OSO3R5、PR5R5’、POR5R5’、PO2R5R5’、OPO(OR5)(OR5’)或OCH2PO(OR5(OR5’)，其中R5和R5'独立地选自H、C1-C8烷基；C2-C8烯基、炔基、杂烷基或氨基酸；C3-C8芳基、杂环、碳环、环烷基、杂环烷基、杂芳烷基、烷基羰基或糖苷；或药学上的阳离子盐；
(B)：非自我毁灭的连接子组分包含以下结构之一：
*(CH2CH2O)r *；
Figure FDA0003205665370000251
Figure FDA0003205665370000252
Figure FDA0003205665370000261
Figure FDA0003205665370000271
其中，*标记的是额外的间隔体或可释放的连接子、或细胞毒性剂、和/或结合分子的连接点；X1、Y1、U1、R5、R5’如前文所定义；r为0-100；m和n独立地为0-20；
(C)：可释放的是指连接子上包含至少一个可在生理条件下被破坏的键，pH、酸、碱、氧化作用、代谢、生化或酶不稳定的键，包括以下结构之一：
-(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n(OCH2CH2)t-、-(CR15R16)m(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-、-(Aa)r-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)t-、-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-、-(CR15R16)m(CR17＝CR18)(CR19R20)n(Aa)t(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(Aa)t(NR21CO)(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(OCO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m-(CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(NR21CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m-(OCO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m(CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-(CR15R16)m-苯基-CO(Aa)t-(CR17R18)n-、-(CR15R16)m-呋喃-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-(CR15R6)m-恶唑-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-(CR15R16)m-噻唑基-CO(Aa)t(CCR17R18)n-、-(CR15R16)t-噻吩-CO(CR17R18)n-、-(CR15R16)t-咪唑-CO-(CR17R18)n-、-(CR15R16)t-吗啉-CO(Aa)t-(CR17R18)n-、-(CR15R16)t-呱嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-(CR15R16)t-N-甲基呱嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-(CR15R16)m-(Aa)t苯基-、-(CR15R16)m-(Aa)t呋喃-、-(CR15R16)m-恶唑(Aa)t-、-(CR15R16)m-噻唑基(Aa)t-、-(CR15R16)m-噻吩基-(Aa)t-、-(CR15R16)m-咪唑(Aa)t-、-(CR15R16)m-吗啉-(Aa)t-、-(CR15R16)m-呱嗪-(Aa)t-、-(CR15R16)m-N-甲基呱嗪-(Aa)t-、-K(CR15R16)m(Aa)r(CR17R18)n(OCH2CH2)t-、-K(CR15R16)m(CR17R18)n(Aa)r(OCH2CH2)t-、-K(Aa)r-(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)t-、-K(CR15R16)m(CR17R18)n(OCH2CH2)r(Aa)t-、-K(CR15R16)m(CR17＝CR18)(CR19R20)n(Aa)t(OCH2CH2)r、-K(CR15R16)m(NR11CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-K(CR5R6)m(Aa)t(NR21CO)(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m(O-CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m(CO)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m(NR21CO)(Aa)t(CR19R20)n-(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m-(OCO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m(OCNR17)(Aa)t-(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-K-(CR15R16)m(CO)(Aa)t(CR19R20)n(OCH2CH2)r-、-K(CR15R16)m-苯基-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-K-(CR15R16)m-呋喃-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-K(CR15R16)m-恶唑-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-K(CR15R16)m-噻唑基-CO(Aa)t-(CR17R18)n-、-K(CR15R16)t-噻吩-CO(CR17R18)n-、-K(CR15R16)t咪唑-CO-(CR17R18)n-、-K(CR5R6)t吗啉-CO(Aa)t-(CR17R18)n-、-K(CR15R16)t-呱嗪-CO(Aa)t-(CR17R18)n-、-K(CR15R16)t-N-甲基呱嗪-CO(Aa)t(CR17R18)n-、-K(CR15R16)m-(Aa)t苯基、-K-(CR15R16)m-(Aa)t呋喃-、-K(CR15R16)m-恶唑-(Aa)t-、-K(CR15R16)m-噻唑基(Aa)t-、-K(CR15R16)m-噻吩基-(Aa)t-、-K(CR15R16)m-咪唑(Aa)t-、-K(CR15R16)m-吗啉(Aa)t-、-K(CR15R16)m呱嗪(Aa)tG、-K(CR5R6)m-N-甲基呱嗪(Aa)t-；其中m、Aa、m、n、R13、R14和R15定义如前文所述；t和r独立地为0-100；R16、R17、R18、R19和R20独立地选自H、卤素、C1～C8烷基或者杂烷基、C2～C8芳基、烯基、炔基、醚、酯、胺或酰胺、C3～C8芳基、可选地被一个或多个卤化物、CN、NR12R12’、CF3、OR12、芳基、杂环、S(O)R12、SO2R12、-CO2H、-SO3H、-OR12、-CO2R12、-CONR12、-PO2R12R13、-PO3Hor P(O)R12R12’R13所取代；K是NR12、-SS-、-C(＝O)-、-C(＝O)NH-、-C(＝O)O-、-C＝NH-O-、-C＝N-NH-、-C(＝O)NH-NH-、O、S、Se、B、Het(具有C3-C12的杂环或杂芳环)；或含有相同或不同1-20个氨基酸的肽。
9.根据权利要求1所述的式(I)的偶联物，其具有a-01 to a-40、78a-c、91、95、97、114、117、126、132、146、154、167、179、181、197、198、206、247、250、258、260、262的结构：
Figure FDA0003205665370000291
Figure FDA0003205665370000301
Figure FDA0003205665370000311
Figure FDA0003205665370000321
Figure FDA0003205665370000331
Figure FDA0003205665370000341
Figure FDA0003205665370000351
Figure FDA0003205665370000361
Figure FDA0003205665370000371
Figure FDA0003205665370000381
Figure FDA0003205665370000391
Figure FDA0003205665370000401
Figure FDA0003205665370000411
Figure FDA0003205665370000421
或元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；其中X8是O、S、NH、NHNH、NHR12、SR12、SSR12、SSCH(CH3)R12、SSC(CH3)2R12、或R12；X1、X2、X3、X4、X5、p1、p2、q1、q2、m、n、R25和mAb的定义如前文所述；Aa是天然或者非天然氨基酸；r是0-100；(Aa)r是含有相同或不同氨基酸序列的肽、当r>2；r＝0时，(Aa)r缺省。
10.根据权利要求2所述的式(III)的偶联物，其具有b-01至b-22、216、221、240的结构：
Figure FDA0003205665370000431
Figure FDA0003205665370000441
Figure FDA0003205665370000451
Figure FDA0003205665370000461
Figure FDA0003205665370000471
Figure FDA0003205665370000481
Figure FDA0003205665370000491
或一种或多种元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；
其中X8是O、S、NH、NHNH、NHR12、SR12、SSR12、SSCH(CH3)R12、SSC(CH3)2R12、或R12；X1、X2、X3、X4、X5、p1、p2、q1、q2、m、n、R25、和mAb的定义如前文所述；Aa是天然或者非天然氨基酸；r是0-12；(Aa)r是含有相同或不同氨基酸序列的肽，当r>2；r＝0时，(Aa)r缺省。
11.根据权利要求3所述的式(IV)的偶联物，其具有c-01 to c-40、71、76、77、90、94、96、113、116、126、131、145、153、166、178、180、195、196、205、246、249、257、259、261的结构：
Figure FDA0003205665370000492
Figure FDA0003205665370000501
Figure FDA0003205665370000511
Figure FDA0003205665370000521
Figure FDA0003205665370000531
Figure FDA0003205665370000541
Figure FDA0003205665370000551
Figure FDA0003205665370000561
Figure FDA0003205665370000571
Figure FDA0003205665370000581
Figure FDA0003205665370000591
Figure FDA0003205665370000601
Figure FDA0003205665370000611
Figure FDA0003205665370000621
Figure FDA0003205665370000631
Figure FDA0003205665370000641
或一种或多种元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；其中X1、X2、X3、X4、X5、X8、Z2、Z3、p.p1、p2、p3、q1、q2、Lv3、m、n、R12、R12’、R25、R25’、(Aa)r和mA如前文所述。
12.根据权利要求4所述的式(V)的偶联物，其具有d-01至d-25、215、220、239的结构：
Figure FDA0003205665370000642
Figure FDA0003205665370000651
Figure FDA0003205665370000661
Figure FDA0003205665370000671
Figure FDA0003205665370000681
Figure FDA0003205665370000691
Figure FDA0003205665370000701
Figure FDA0003205665370000711
Figure FDA0003205665370000721
一种或多种元素同位素取代物，或药学上可接受的盐，水合物或水合盐；或多晶结构；或其旋光异构体，外消旋体，非对映异构体或对映异构体；其中X1、X2、X3、X4、X5、X8、Z2、Z3、p.p1、p2、p3、q1、q2、Lv1、Lv2、Lv3、Lv3’、m、n、R12、R12’、R15、R25、R25’、(Aa)r和mAb如前文所述。
13.根据权利要求1、2、9或10中所述的细胞结合剂或细胞结合分子选自下列结构的：
(A)由抗体、蛋白质、probody、纳米抗体、维生素(包括叶酸)、肽、聚合物胶束、脂质体、脂蛋白药物载体、纳米颗粒药物载体、树枝状大分子、和包覆或连接了细胞结合配体的上述分子或粒子，或以上的组合；
(B)类抗体蛋白、完整抗体(多克隆抗体，单克隆抗体，二聚体，多聚体)、多特异性抗体(例如双特异性、三特异性或四特异性抗体)、单链抗体、与靶细胞结合的抗体片段、单克隆抗体、单链单克隆抗体、结合靶细胞的单克隆抗体片段、嵌合抗体、结合靶细胞的嵌合抗体片段、结构域抗体、结合靶细胞的结构域抗体片段、表面修饰的抗体、单链表面修饰的抗体、结合靶细胞的表面修饰的抗体、人源化抗体、单链人源化抗体、结合靶细胞的单链人源化抗体、抗独特型(抗-Id)抗体、CDR、双价抗体、三价抗体、四价抗体、微型抗体、probody、probody片段、小免疫蛋白(SIP)、淋巴因子、激素、维生素、生长因子、集落刺激因子、营养转运分子、大分子量蛋白、融合蛋白、激酶抑制剂、基因靶向剂、经抗体或大分子量蛋白修饰的纳米微粒或聚合物。
(C)选自以下的配体或受体激动剂：叶酸衍生物；谷氨酸脲衍生物；生长抑制素及其同系物，如奥曲肽(Sandostatin)和兰瑞肽(Somatuline)；芳香磺酰胺；垂体腺苷酸环化酶启动肽(PACAP)(PAC1)；血管活肠肽(VIP)(VPAC1，VPAC2)；α-黑素细胞刺激素(α-MSH)；胆囊收缩素(CCK)或胃泌素；铃蟾肽(Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2)或胃泌素释放肽(GRP)；神经降压素受体(NTR1、NTR2、NTR3)；物质P；神经肽Y(Y1–Y6)；归巢肽包括RGD(Arg-Gly-Asp)、NGR(Asn-Gly-Arg)、二聚和多聚环状RGD肽(如cRGDfV)、TAASGVRSMH或LTLRWVGLMS(硫酸软骨素蛋白多糖NG2受体配体)和F3肽；细胞穿透肽(CPPs)；肽激素，例如促黄体激素释放激素(LHRH)的激动剂和拮抗剂，促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂，通过靶向卵泡刺激素(FSH)和促黄体激素(LH)以及睾酮产生而作用，如布舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt)、戈那瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、戈舍瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2)、组氨瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-Bn)-Leu-Arg-Pro-NHEt)、亮丙瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt)、那法瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、曲普瑞林(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2)、纳法瑞林、地洛林、阿贝瑞林(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-isopropylLys-Pro-DAla-NH2)、西曲瑞克(Ac-D-2Nal-D-4-chloro-Phe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2)、地加瑞克(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-4-aminoPhe(L-hydroorotyl)-D-4-aminoPhe(carba-moyl)-Leu-isopropylLys-Pro-D-Ala-NH2)和甘乃利(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-(N9，N10-diethyl)-homoArg-Leu-(N9，N10-diethyl)-homoArg-Pro-D-Ala-NH2)；模式识别受体(PRRs)，如Toll样受体(TLRs)配体、C型凝集素和结节状的受体(NLRs)配体；降钙素受体；整合素受体及其受体子类(如αVβ1、αVβ3、αVβ5、αVβ6、α6β4、α7β1、αLβ2、αIIbβ3等)激动剂(选自GRGDSPK、环(RGDfV)(L1)及其衍生物(环(-N(Me)R-GDfV)、环(R-Sar-DfV)、环-(RG-N(Me)D-fV)、环(RGD-N(Me)fV)、环(RGDf-N(Me)V-)(西仑吉肽))；纳米抗体(VHH衍生物(骆驼科动物Ig))；结构域抗体(dAb，VH或VL结构域的衍生物)；双特异性T细胞接头(BiTE，双特异性双抗体)；双重亲和力复位向抗体(DART，双特异性二价抗体)；四价串联抗体(TandAb，二聚的双特异性二价抗体)；Anticalin(Lipocalins的衍生物)；Adnectin(第10个FN3(纤连蛋白))；设计的锚蛋白重复蛋白(DARPins)；Avimer；EGF受体或VEGF受体的激动剂。
(D)下列小分子细胞结合分子/配体或细胞受体激动剂：LB01(叶酸)、LB02(PMSA配体)、LB03(PMSA配体)、LB04(PMSA配体)、LB05(生长抑制素)、LB06(生长抑制素)、LB07(奥曲肽、生长抑制素同系物)、LB08(兰瑞肽、生长抑制素同系物)、LB09(伐普肽(Sanvar)、生长抑制素同系物)、LB10(CAIX配体)、LB11(CAIX配体)、LB12(胃泌素释放肽受体(GRPr)、MBA)、LB13(促黄体激素释放激素(LH-RH)和GnRH配体)、LB14(促黄体激素释放激素(LH-RH)和GnRH配体)、LB15(GnRH拮抗剂、Abarelix)、LB16(钴胺素、维生素B12同系物)、LB17(钴胺素、维生素B12同系物)、LB18(用于αvβ3整联蛋白受体、环状RGD五肽)、LB19(VEGF受体的异二价肽配体)、LB20(神经髓质素B)、LB21(蛙皮素，作用于G蛋白偶联受体)、LB22(TLR2，作用于类Toll受体)、LB23(作用于雄性激素受体)、LB24(西仑吉肽或环(-RGDfV-)结合物，作用于αv整合素受体)LB25(利福布汀同系物)、LB26(利福布汀同系物)、LB27(利福布汀同系物)、LB28(氟氢可的松)、LB29(地塞米松)、LB30(丙酸氟替卡松)、LB31(丙酸倍氯米松)、LB32(醋酸曲安奈德)、LB33(泼尼松龙)、LB35(甲基强的松龙)、LB36(倍他米松)、LB37(伊立替康同系物)、LB38(克唑替尼同系物)、LB39(硼替佐米同系物)、LB40(卡菲佐米同系物)、LB41(卡非佐米同系物)、LB42(亮丙瑞林同系物)、LB43(曲普瑞林同系物)、LB44(克林霉素)、LB45(利拉鲁肽同系物)、LB46(半长春新碱同系物)、LB47(瑞他帕林同系物)、LB48(丁布尔同系物)、LB49(长春碱同系物)、LB50(利西森肽同系物)、LB51(奥西丁尼同系物)、LB52(核苷同系物)、LB53(厄洛替尼同系物)和LB5 4(拉帕替尼同系物)，其结构如下所示：
Figure FDA0003205665370000751
LB01(叶酸偶联物)，
Figure FDA0003205665370000752
LB02(PMSA配体偶联物)，
Figure FDA0003205665370000761
LB03(PMSA配体偶联物)，
Figure FDA0003205665370000762
LB04(PMSA配体)，
Figure FDA0003205665370000763
LB05(生长激素抑制素)，
Figure FDA0003205665370000764
LB06(生长激素抑制素)，
Figure FDA0003205665370000765
LB07(奥曲肽、生长抑制素同系物)，
Figure FDA0003205665370000771
LB08(兰肽、生长抑制素同系物)，
Figure FDA0003205665370000772
LB09(氨肽(Sanvar)、生长抑制素同系物)，
Figure FDA0003205665370000773
LB10(CAIX配体)，
Figure FDA0003205665370000774
LB11(CAIX配体)，
Figure FDA0003205665370000775
LB12(胃泌素释放肽受体(GRPr)，MBA)，
Figure FDA0003205665370000781
LB13(促黄体激素释放激素(LH-RH)和促性腺激素释放激素GnRH配体)，
Figure FDA0003205665370000782
LB14(促黄体激素释放激素(LH-RH)和促性腺激素释放激素GnRH配体)，
Figure FDA0003205665370000783
LB15(GnRH拮抗物、阿巴瑞克)，
Figure FDA0003205665370000791
LB16(钴胺素，维生素B12同系物)，
Figure FDA0003205665370000792
LB17(钴胺素，维生素B12同系物)，
Figure FDA0003205665370000793
LB18(环RGD五肽，作用于αvβ3整联蛋白受体)，
Figure FDA0003205665370000794
LB19(异源二价肽配体偶联物，作用于血管内皮生长因子VEGF受体)，
Figure FDA0003205665370000795
LB20(神经髓质素B)，
Figure FDA0003205665370000801
LB21(蛙皮素偶联物，作用于G蛋白偶联受体)，
Figure FDA0003205665370000802
LB22(TLR2偶联物，作用于类Toll受体)，
Figure FDA0003205665370000803
LB23(雄激素受体)，
Figure FDA0003205665370000804
LB24(西伦吉肽/环(-RGDfV-)偶联物，作用于αv整合素受体)
Figure FDA0003205665370000805
LB25(利福布汀同系物)，
Figure FDA0003205665370000811
LB26(利福布汀同系物)，
Figure FDA0003205665370000812
LB27(利福布汀同系物)，
Figure FDA0003205665370000813
LB28(氟氢可的松)，
Figure FDA0003205665370000814
LB29(地塞米松)，
Figure FDA0003205665370000821
LB30(丙酸氟替卡松)，
Figure FDA0003205665370000822
LB31(倍氯米松丙酸酯)，
Figure FDA0003205665370000823
LB32(曲安奈德)，
Figure FDA0003205665370000824
LB33(泼尼松)，
Figure FDA0003205665370000825
LB34(泼尼松龙)，
Figure FDA0003205665370000831
LB35(甲基强的松龙)，
Figure FDA0003205665370000832
LB36(倍氟美松)，
Figure FDA0003205665370000833
LB37(伊立替康同系物)，
Figure FDA0003205665370000834
LB38(克唑替尼同系物)，
Figure FDA0003205665370000835
LB39(硼替佐米同系物)，其中Y5是N、CH、C(Cl)、C(CH3)或C(COOR1)；R1是H、C1-C6烷基、C3-C8芳基；
Figure FDA0003205665370000836
LB40(卡菲佐米同系物)，
Figure FDA0003205665370000841
LB41(卡菲佐米同系物)，
Figure FDA0003205665370000842
LB42(亮丙瑞利同系物)，
Figure FDA0003205665370000843
LB43(曲普瑞林同系物)，
Figure FDA0003205665370000844
LB44(克林霉素)，
Figure FDA0003205665370000845
LB45(利拉鲁肽同系物)，
Figure FDA0003205665370000851
LB46(索马鲁肽同系物)，
Figure FDA0003205665370000852
LB47(瑞他帕林同系物)，
Figure FDA0003205665370000853
LB48(丁布尔同系物)，
Figure FDA0003205665370000854
LB49(长春碱同系物)，
Figure FDA0003205665370000855
LB50(利西森肽同系物)，
Figure FDA0003205665370000861
LB51(奥西丁尼同系物)，
Figure FDA0003205665370000862
LB52(核苷同系物)，
Figure FDA0003205665370000863
LB53(埃罗替尼同系物)，
Figure FDA0003205665370000864
LB54(拉帕替尼同系物)，
其中
Figure FDA0003205665370000865
是支链连接体的连接位置；X4和Y1独立地是O、NH、NHNH、NR1、S、C(O)O、C(O)NH、OC(O)NH、OC(O)O、NHC(O)NH、NHC(O)S、OC(O)N(R1)、N(R1)C(O)N(R1)、CH2、C(O)NHNHC(O)和C(O)NR1；X1是H、CH2、OH、O、C(O)、C(O)NH、C(O)N(R1)、R1、NHR1、NR1、C(O)R1或C(O)O；X5是H、CH3、F或Cl；M1和M2分别是H、Na、K、Ca、Mg、NH4、N(R1R2R3R4)；R1、R2、R3和R4定义同权利要求1。
14.如权利要求1、2或13所述的细胞结合分子T，当与结构式(I)和(III)中V1和/或V2连接时、或与L1和/或L2直接连接时，其特征在于V1和/或V2缺省，并且具有以下一个或多个以下结构：
Figure FDA0003205665370000871
Figure FDA0003205665370000881
Figure FDA0003205665370000891
Figure FDA0003205665370000901
其中R20和R21独立地是C1-C8烷基、C2-C8杂烷基或杂环、C3-C8芳基、Ar-烷基、环烷基、烷基环烷基、杂环烷基、杂烷基环烷基、碳环或烷基羰基、或C2-C100具有式(CH2CH2O)p的聚亚烷基二醇。
15.如权利要求1、2、9或10中所述的细胞结合剂或细胞结合分子，其特征在于能够抗以下细胞：肿瘤细胞，病毒感染细胞，微生物感染细胞，寄生虫感染细胞，自身免疫细胞，活化的细胞，骨髓细胞，活化的T细胞，B细胞，黑色素细胞，或任何表达下列抗原或受体的细胞：CD1、CD1a、CD1b、CD1c、CD1d、CD1e、CD2、CD3、CD3d、CD3e、CD3g、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD8a、CD8b、CD9、CD10、CD11a、CD11b、CD11c、CD11d、CD12w、CD14、CD15、CD16、CD16a、CD16b、CDw17、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD25、CD26、CD27、CD28、CD29、CD30、CD31、CD32、CD32a、CD32b、CD33、CD34、CD35、CD36、CD37、CD38、CD39、CD40、CD41、CD42、CD42a、CD42b、CD42c、CD42d、CD43、CD44、CD45、CD46、CD47、CD48、CD49b、CD49c、CD49c、CD49d、CD49f、CD50、CD51、CD52、CD53、CD54、CD55、CD56、CD57、CD58、CD59、CD60、CD60a、CD60b、CD60c、CD61、CD62E、CD62L、CD62P、CD63、CD64、CD65、CD65s、CD66、CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e、CD66f、CD67、CD68、CD69、CD70、CD71、CD72、CD73、CD74、CD75、CD75s、CD76、CD77、CD78、CD79、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CD84、CD85、CD85a、CD85b、CD85c、CD85d、CD85e、CD85f、CD85g、CD85g、CD85i、CD85j、CD85k、CD85m、CD86、CD87、CD88、CD89、CD90、CD91、CD92、CD93、CD94、CD95、CD96、CD97、CD98、CD99、CD100、CD101、CD102、CD103、CD104、CD105、CD106、CD107、CD107a、CD107b、CD108、CD109、CD110、CD111、CD112、CD113、CD114、CD115、CD116、CD117、CD118、CD119、CD120、CD120a、CD120b、CD121、CD121a、CD121b、CD122、CD123、CD123a、CD124、CD125、CD126、CD127、CD128、CD129、CD130、CD131、CD132、CD133、CD134、CD135、CD136、CD137、CD138、CD139、CD140、CD140a、CD140b、CD141、CD142、CD143、CD144、CD145、CDw145、CD146、CD147、CD148、CD149、CD150、CD151、CD152、CD153、CD154、CD155、CD156、CD156a、CD156b、CD156c、CD156d、CD157、CD158、CD158a、CD158b1、CD158b2、CD158c、CD158d、CD158e1、CD158e2、CD158f2、CD158g、CD158h、CD158i、CD158j、CD158k、CD159、CD159a、CD159b、CD159c、CD160、CD161、CD162、CD163、CD164、CD165、CD166、CD167、CD167a、CD167b、CD168、CD169、CD170、CD171、CD172、CD172a、CD172b、CD172g、CD173、CD174、CD175、CD175s、CD176、CD177、CD178、CD179、CD179a、CD179b、CD180、CD181、CD182、CD183、CD184、CD185、CD186、CDw186、CD187、CD188、CD189、CD190、CD191、CD192、CD193、CD194、CD195、CD196、CD197、CD198、CD199、CDw198、CDw199、CD200、CD201、CD202、CD202(a、b)、CD203、CD203c、CD204、CD205、CD206、CD207、CD208、CD209、CD210、CDw210a、CDw210b、CD211、CD212、CD213、CD213a1、CD213a2、CD214、CD215、CD216、CD217、CD218、CD218a、CD218、CD21b9、CD220、CD221、CD222、CD223、CD224、CD225、CD226、CD227、CD228、CD229、CD230、CD231、CD232、CD233、CD234、CD235、CD235a、CD235b、CD236、CD237、CD238、CD239、CD240、CD240ce、CD240d、CD241、CD242、CD243、CD244、CD245、CD246、CD247、CD248、CD249、CD250、CD251、CD252、CD253、CD254、CD255、CD256、CD257、CD258、CD259、CD260、CD261、CD262、CD263、CD264、CD265、CD266、CD267、CD268、CD269、CD270、CD271、CD272、CD273、CD274、CD275、CD276、CD277、CD278、CD279、CD281、CD282、CD283、CD284、CD285、CD286、CD287、CD288、CD289、CD290、CD291、CD292、CD293、CD294、CD295、CD296、CD297、CD298、CD299、CD300、CD300a、CD300b、CD300c、CD301、CD302、CD303、CD304、CD305、CD306、CD307、CD307a、CD307b、CD307c、CD307d、CD307e、CD307f、CD308、CD309、CD310、CD311、CD312、CD313、CD314、CD315、CD316、CD317、CD318、CD319、CD320、CD321、CD322、CD323、CD324、CD325、CD326、CD327、CD328、CD329、CD330、CD331、CD332、CD333、CD334、CD335、CD336、CD337、CD338、CD339、CD340、CD341、CD342、CD343、CD344、CD345、CD346、CD347、CD348、CD349、CD350、CD351、CD352、CD353、CD354、CD355、CD356、CD357、CD358、CD359、CD360、CD361、CD362、CD363、CD364、CD365、CD366、CD367、CD368、CD369、CD370、CD371、CD372、CD373、CD374、CD375、CD376、CD377、CD378、CD379、CD381、CD382、CD383、CD384、CD385、CD386、CD387、CD388、CD389、CRIPTO、CRIPTO、CR、CR1、CRGF、CRIPTO、CXCR5、LY64、TDGF1、4-1BB、APO2、ASLG659、BMPR1B、4-1BB、5AC、5T4(Trophoblast糖蛋白、TPBG、WNT-活化抑制因子1或WAIF1)、腺癌抗原、AGS-5、AGS-22M6、启动素受体激酶1、AFP、AKAP-4、ALK、α整合素、αvβ6、氨基肽酶N、淀粉样蛋白β、雄激素受体、促血管新生蛋白因子2、促血管新生蛋白因子3、膜联蛋白A1、炭疽毒素保护性抗原、抗转移蛋白受体、AOC3(VAP-1)、B7-H3、炭疽杆菌、BAFF(B细胞启动因子)、B淋巴瘤细胞、bcr-abl、蛙皮素、BORIS、C5、C242抗原、CA125(糖抗原125、MUC16)、CA-IX(或CAIX、碳酸酐酶9)、CALLA、CanAg、犬红斑狼疮IL31、碳酸酐酶IX、心肌肌凝蛋白、CCL11(C-C片段趋化因子11)、CCR4(C-C趋化因子受体4、CD194)、CCR5、CD3E(ε)、CEA(癌胚抗原)、CEACAM3、CEACAM5(癌胚抗原)、CFD(因子D)、Ch4D5、胆囊收缩素2(CCK2R)、CLDN18(Claudin-18)、丛生因子A、CRIPTO、FCSF1R(集落刺激因子1受体、CD115)、CSF2(集落刺激因子2、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF))、CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)、CTAA16.88肿瘤抗原、CXCR4(CD184)、C-X-C趋化因子受体4、环状ADP核糖核酸酶、细胞周期蛋白B1、CYP1B1、巨细胞病毒、巨细胞病毒糖蛋白B、Dabigatran、DLL3(类Δ配体3)、DLL4(类Δ配体4)、DPP4(双肽-肽酶4)、DR5(死亡受体5)、大肠杆菌shiga毒素类型-1、大肠杆菌shiga毒素类型-2、ED-B、EGFL7(类EGF结构域蛋白7)、EGFR、EGFRII、EGFRvIII、内皮因子(CD105)、内皮素B受体、内毒素、EpCAM(上皮细胞粘附分子)、EphA2、Episialin、ERBB2(表皮生长因子受体2)、ERBB3、ERG(TMPRSS2 ETS融合基因)、大肠杆菌、ETV6-AML、FAP(成纤维细胞活化蛋白α)、FCGR1、甲胎蛋白、纤维蛋白IIβ链、纤连蛋白额外结构域-B、FOLR(叶酸受体)、叶酸受体α、叶酸水解酶、Fos相关抗原1、呼吸道合胞病毒的F蛋白、卷曲的受体、岩藻糖GM1、GD2神经节苷脂、G-28(细胞表面抗原糖脂)、GD3独特型、GloboH、Glypican 3、N-羟乙酰神经氨酸、GM3、GMCSF受体α链、生长分化因子8、GP100、GPNMB(跨膜糖蛋白NMB)、GUCY2C(鸟苷酸环化酶2C)、鸟苷酸环化酶C(GC-C)、肠鸟苷酸环化酶、鸟苷酸环化酶C受体、热稳定肠毒素受体(hSTAR)、热休克蛋白、血凝素、乙肝表面抗原、乙型肝炎病毒、HER1(人类表皮生长因子受体1)、HER2、HER2/neu、HER3(ERBB-3)、IgG4、HGF/SF(肝细胞生长因子/分散因子)、HHGFR、HIV-1、组蛋白复合物、HLA-DR(人类白细胞抗原)、HLA-DR10、HLA-DRB、HMWMAA、人类绒毛膜促性腺激素、HNGF、人类分散因子受体激酶、HPV E6/E7、Hsp90、hTERT、ICAM-1(细胞间粘附分子1)、独特型、IGF1R(IGF–1、类胰岛素生长因子1受体)、IGHE、IFN-γ、流感血凝素、IgE、IgE Fc区、IGHE、白细胞介素(IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-6R、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-17A、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27、IL-28)、IL31RA、ILGF2(类胰岛素生长因子2)、整合蛋白(α4、αIIbβ3、αvβ3、α4β7、α5β1、α6β4、α7β7、αllβ3、α5β5、αvβ5)、干扰素γ诱导蛋白质、ITGA2、ITGB2、KIR2D、Kappa Ig、LCK、Le、Legumain、Lewis-Y抗原、LFA-1(淋巴细胞功能相关抗原1、CD11a)、LHRH、LINGO-1、脂磷壁酸、LIV1A、LMP2、LTA、MAD-CT-1、MAD-CT-2、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、MAGE A1、MAGE A3、MAGE 4、MART1、MCP-1、MIF(巨噬细胞迁移抑制因子、或糖基抑制因子(GIF))、MS4A1(跨膜4结构域亚家族A成员1)、MSLN(间皮素)、MUC1(粘蛋白1、细胞表面相关(MUC1)或多态性上皮粘蛋白(PEM))、MUC1-KLH、MUC16(CA125)、MCP1(单核细胞趋化蛋白1)、MelanA/MART1、ML-IAP、MPG、MS4A1、MYCN、髓磷脂相关糖蛋白、Myostatin、NA17、NARP-1、NCA-90(粒细胞抗原)、Nectin-4(ASG-22ME)、NGF、神经细胞凋亡调控蛋白酶1、NOGO-A、Notch受体、核仁素、Neu致癌基因产物、NY-BR-1、NY-ESO-1、OX-40、OxLDL(氧化低密度脂蛋白)、OY-TES1、P21、p53非突变体、P97、PAP、抗(N-羟乙酰神经氨酸)抗体结合部位、PAX3、PAX5、PCSK9、PDCD1(PD-1、程序性细胞死亡蛋白1)、PDGF-Rα(α血小板源生长因子受体)、PDGFR-β、PDL-1、PLAC1、类PLAP睾丸碱性磷酸酶、血小板衍生生长因子受体β、磷酸钠联合转运体、PMEL 17、聚唾液酸、蛋白酶3(PR1)、前列腺癌、PS(磷脂酰丝氨酸)、前列腺癌细胞、铜绿假单胞菌、PSMA、PSA、PSCA、狂犬病病毒糖蛋白、RHD(Rh多肽1(RhPI)、CD240)、Rhesus因子、RANKL、RhoC、Ras突变、RGS5、ROBO4、呼吸道合胞病毒、RON、ROR1、肉瘤易位断点、SART3、Sclerostin、SLAMF7(SLAM成员7)、Selectin P、SDC1(多配体蛋白聚糖1)、系统性红斑狼疮(a)、生长调节素C、SIP(1-磷酸鞘氨醇)、生长激素抑制素、精子蛋白17、SSX2、STEAP1(6-跨膜上皮前列腺抗原1)、STEAP2、STn、TAG-72(肿瘤相关糖蛋白)、存活素、T细胞受体、T细胞跨膜蛋白、TEM1(肿瘤血管内皮标记1)、TENB2、TenascinC(TN-C)、TGF-α、TGF-β(转化生长因子β)、TGF-β1、TGF-β2(转化生长因子2)、Tie(CD202b)、Tie2、TIM-1(CDX-014)、Tn、TNF、TNF-α、TNFRSF8、TNFRSF10B(肿瘤坏死因子受体超家族成员10B)、TNFRSF13B(肿瘤坏死因子受体超家族成员13B)、TPBG(滋养细胞糖蛋白)、TRAIL-R1(TNF相关坏死诱导配体受体1)、TRAILR2(死亡受体5(DR5))、肿瘤相关的钙信号传感子2、肿瘤特异糖基化的MUC1、TWEAK受体、TYRP1(糖蛋白75)、TRP-2、酪氨酸酶、VCAM-1、VEGF、VEGF-A、VEGF-2、VEGFR-1、VEGFR-2、vimentin、WT1、XAGE 1、表达胰岛素生长因子受体的细胞，或表达表皮生长因子受体的细胞。
16.权利要求15所述的肿瘤细胞选自淋巴瘤细胞、骨髓瘤细胞、肾细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、卵巢癌细胞、结直肠癌细胞、胃癌细胞、鳞状细胞癌细胞、小细胞肺癌细胞、非小细胞肺癌细胞、睾丸癌细胞、恶性细胞或任何因不受控快速生长和分裂导致癌症的细胞。
17.药物组合物、其中包含治疗有效量的权利要求1、2、9或10中的偶联物及其药学上可接受的盐、载体、稀释剂或辅料，或其组合，用于治疗或预防癌症或自身免疫疾病或传染病。
18.权利要求17中的药物组合物为液体配方或冻干固体，当被重新制成制剂施用于病人时，其组成(重量)为：0.01％-99％的一种或多种权利要求1、2、9或10中任一偶联物；0.0％-20.0％的一种或多种多元醇；0.0％-2.0％的一种或多种表面活性剂；0.0％-5.0％的一种或多种防腐剂；0.0％-30％的一种或多种氨基酸；0.0％-5.0％的一种或多种抗氧化剂；0.0％-0.3％的一种或多种金属螯合剂；0.0％-30.0％的一种或多种缓冲盐，用于将制剂的pH调节至pH 4.5至7.5；0.0％-30.0％一种或多种等渗剂，用于调节渗透压至约250-350mOsm。
其中，多元醇选自果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、山梨糖、松三糖、棉子糖、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、苏糖醇、山梨糖醇、甘油或L-葡萄糖酸盐及其金属盐。
表面活性剂选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81或聚山梨醇酯85、泊洛沙姆、聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)、聚乙烯-聚丙烯、Triton、十二烷基硫酸钠(SDS)、月桂基硫酸钠、辛基糖苷钠、十二烷基、肉荳蔻酰基、亚油基或硬脂基磺基甜菜碱、十二烷基、肉荳蔻酰基、亚油基或硬脂基肌氨酸、亚油酸、肉荳蔻基或十六烷基甜菜碱、月桂酰氨基丙基、椰油酰胺丙基、亚油酰胺基丙基、肉荳蔻酰基丙基、棕榈酰基丙基或异硬脂酰氨-丙基-甜菜碱(例如月桂酰胺丙基)、肉荳蔻酰胺丙基、棕榈酰丙基或异硬脂酰氨基丙基-二甲胺、甲基椰油酰基钠或甲基油基牛磺酸二钠、十二烷基甜菜碱、十二烷基二甲基氧化胺、椰油酰胺丙基甜菜碱和可可两性甘氨酸酯、异硬脂基乙基亚胺鎓乙基硫酸盐、聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物。
防腐剂选自十八烷基二甲基芐基氯化铵、六甲基氯化铵、苯扎氯铵、芐索氯铵、苯酚、丁基和芐基醇、对羟基苯甲酸烷基酯、如甲酯或丙酯、儿茶酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇或间甲酚。
氨基酸选自精氨酸、胱氨酸、甘氨酸、赖氨酸、组氨酸、鸟氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸谷氨酸或天冬氨酸。
抗氧化剂选自抗坏血酸、谷胱甘肽、胱氨酸或蛋氨酸。
金属螯合剂选自EDTA或EGTA。
缓冲盐选自柠檬酸、抗坏血酸、葡萄糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或邻苯二甲酸的钠、钾、铵或三羟乙基氨基盐、Tris或氨丁三醇的盐酸、磷酸或硫酸盐、精氨酸、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸或组氨酸的乙酸盐、氯化物、磷酸盐、硫酸盐或琥珀酸盐。
等渗剂选自甘露醇、山梨糖醇、乙酸钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸三钠或氯化钠。
等渗剂选自甘露醇、山梨糖醇、乙酸钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸三钠或氯化钠。
19.如权利要求17或18中所述的药物组合物，其特征在于以液体或冻干固体的形式包装在小瓶、瓶子、预填充注射器或预填充自动注射器中。
20.权利要求1、2、9或10中的偶联物，或权利要求17或18的药物组合物中的偶联物、具有体外、体内或离体细胞杀伤活性。
21.如权利要求17或18所述的药物组合物，其特征在于与化学治疗药物，放射疗法，免疫治疗药物，自身免疫病药物，抗感染药物或其他偶联物同时施用，用于协同治疗或预防癌症、自身免疫性疾病或传染病。
22.如权利要求21中所述的化学治疗药物选自：
1)化疗药物：
a)烷基化剂：氮芥类、氯苯那普、氯普那嗪、环磷酰胺、达卡巴嗪、雌二醇氮芥、异环磷酰胺、氮芥、盐酸二甲氧胺、氧化二氮芥、盐酸氨氯地平、麦考酚酸、卫矛醇、呱泊溴烷、新氮芥、苯芥胆甾醇、松龙苯芥、噻替呱、曲磷胺对、尿嘧啶；CC-1065、其阿多来新、卡折来新、比折来新及其合成同系物；多卡霉素及其合成同系物、KW-2189、CBI-TMI或CBI二聚体；苯并二氮卓二聚体或吡咯并苯二氮卓(PBD)二聚体、托美霉素二聚体、吲哚并苯并二氮卓二聚体、咪唑并苯并噻二氮卓二聚体或恶唑烷并苯并二氮卓的二聚体；亚硝基脲、包括卡莫司汀、洛莫司汀、氯化梭菌素、福莫司汀、尼莫司汀、拉莫司汀；烷基磺酸盐、包括白苏芬、树苏芬、磺胺异丙磺胺和皮苏芬；三氮烯类、达卡巴嗪；含铂化合物、包括卡铂、顺铂、奥沙利铂；吖丙啶类、苯并二氢吡喃酮、卡洛酮、美妥替派和乌雷多巴；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺、包括六甲蜜胺、三亚乙基三胺、三乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基甲基胺；
b)植物生物碱：长春花生物碱、包括长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨、去甲长春碱；紫杉醇类、包括紫杉醇、多西紫杉醇及其同系物；美登素类包括DM1、DM2、DM3、DM4、DM5、DM6、DM7、美登素和安沙霉素及其同系物；Cryptophycin(Cryptophycin 1和Cryptophycin8)；埃博霉素、软珊瑚醇、迪莫利德、草苔虫内酯、海兔毒素、奥瑞他汀、Cephalostatin；Pancratistatin；Sarcodictyin；海绵抑制素；
c)DNA拓扑异构酶抑制剂：依托泊苷替尼、9-氨基喜树碱、喜树碱、克立那托、多拉霉素、依托泊苷、磷酸依托泊苷、伊立替康、米托蒽醌、诺消灵、视黄酸(视黄醇)、替尼泊苷、拓扑替康、9-硝基喜树碱(RFS 2000)；丝裂霉素及其同系物；
d)抗代谢物：抗叶酸剂、DHFR抑制剂(甲氨蝶呤、曲麦克特、二甲叶酸、蝶罗呤、氨喋呤(4-氨基苯甲酸)或其他叶酸同系物)；IMP脱氢酶抑制剂(麦考酚酸、噻唑呋林、利巴韦林、EICAR)；核糖核苷酸还原酶抑制剂(羟基脲、去铁胺)；嘧啶同系物、尿嘧啶同系物(安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿嘧啶、卡培他滨、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、依诺他滨、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、Ratitrexed(Tomudex)；胞嘧啶同系物(阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷、氟达拉滨)；嘌呤同系物(硫唑嘌呤、氟达拉滨、巯嘌呤、硫胺素、硫鸟嘌呤)；叶酸补充剂、弗洛林酸；
e)激素疗法剂：受体拮抗剂、抗雌激素(甲地孕酮、雷洛昔芬、他莫昔芬)、LHRH兴奋剂(戈斯他林、醋酸亮丙瑞林)；抗雄激素药(比卡鲁胺、氟他胺、卡鲁司酮、丙酸倍他雄酮、表雄甾醇、戈舍瑞林、亮丙瑞林、美替利定、尼鲁米特、睾内酯、曲洛司坦及其他雄激素抑制剂)；维甲类化合物、维生素D3同系物(CB1093、EB1089、KH1060、胆钙化醇、麦角钙化甾醇)；光动力疗法剂(维替泊芬、酞菁、光敏剂Pc4、去甲氧基-竹红菌素A)；细胞因子(干扰素-α、干扰素-γ、肿瘤坏死因子(TNF)、含TNF的人蛋白)；
f)激酶抑制剂：BIBW 2992(抗-EGFR/Erb2)、伊马替尼、吉非替尼、呱加他尼、索拉非尼、达沙替尼、舒尼替尼、厄洛替尼、尼洛替尼、拉帕替尼、阿西替尼、帕唑帕尼、凡德他尼、E7080(抗VEGFR2)、Mubritinib、普纳替尼、Bafetinib、Bosutinib、卡博替尼、维莫德吉、Iniparib、鲁索利替尼、CYT387、阿西替尼、Tivozanib、索拉非尼、贝伐单抗、西妥昔单抗、曲妥珠单抗、雷珠单抗、帕尼单抗、伊斯平斯；
g)聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂：奥拉帕里、尼拉帕里、依尼帕里、塔拉佐帕里、维利帕里、维利帕里、CEP 9722(Cephalon)、E7016(Eisai)、BGB-290(Beigene)、3-氨基苯甲酰酰胺；
h)抗生素：烯二炔类抗生素(加利车霉素、加利车霉素γ1、δ1、α1和β1、达因霉素、包括达因霉素A和脱氧米霉素、埃斯培拉霉素、卡达霉素、C-1027、Maduropeptin、新卡嗪奥斯汀和相关色蛋白烯二炔抗生素)、Aclacinomysins、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、卡诺霉素、卡拉霉素、洋红霉素、嗜癌素、色霉素类、达金霉素、柔红霉素、去柔红霉素、6-重氮-5-氧代-L-去甲亮氨酸、阿霉素、吗啉-阿霉素、氰基吗啉-阿霉素、2-吡咯啉阿霉素和脱氧柔红霉素、表柔比星、阿柔比星、伊达比星、马可霉素、Nitomycin、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、Peplomycin、Potfiromycin、嘌呤霉素、奎拉霉素、罗道霉素、链黑霉素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；
i)聚酮化合物(番荔素)、Bullatacin和Bullatacinone；吉西他滨、环氧酶素卡菲偌米布、硼替佐米、沙利度胺、来那度胺、Pomalidomide、Tosedostat、Zybrestat、PLX4032、STA-9090、Stimuvax、Allovectin-7、Xegeva、Provenge、Yervoy、异戊二烯化抑制剂、洛伐他汀、多巴胺能神经毒素、1-甲基-4-苯基吡啶离子、细胞周期抑制剂(包括葡萄球菌素)、放线菌素(如放线菌素D、更生霉素)、鹅膏毒素、博莱霉素(如博来霉素A2、博莱霉素B2、培洛霉素)、蒽环类抗生素(如柔红霉素)、阿霉素(亚德里亚霉素)、伊达比星、表柔比星、吡柔比星、佐柔比星、米托蒽醌、MDR抑制剂或维拉帕米、Ca2+ATP酶抑制剂或毒胡萝卜素、组蛋白去乙酰酶抑制剂(伏立诺他、罗米地辛、帕比司他、丙戊酸、Mocetinostat(MGCD0103)、Belinostat、PCI-24781、恩替诺特、SB939、Resminostat、Givinostat、AR-42、CUDC-101、萝卜硫素、曲古抑菌素A)；塞来昔布、格列酮类、表没食子儿茶素、没食子酸酯、双硫仑、Salinosporamide A；抗肾上腺药物、如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦、醋葡醛内酯、醛磷酰胺、氨基乙酰丙酸、安吖啶、阿拉伯糖苷、Bestrabucil、比生群、Edatraxate、Defofamine、美可辛、地吖醌、依氟鸟氨酸(DFMO)、Elfomithine、依利醋铵、依托格鲁、硝酸镓、胞嘧啶、羟基脲、伊班膦酸盐、香菇多糖、氯尼达明、米托胍腙、米托蒽醌、莫呱达醇、二胺硝吖啶、喷司他丁、蛋氨氮芥、吡柔比星、鬼臼酸、2-乙肼、甲基苄肼；
Figure FDA0003205665370000991
呱嗪二酮丙烷；根霉素；西佐；螺环锗；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；三氯三乙胺；单端孢霉烯(包括T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和Anguidine)、聚氨酯、siRNA、反义药物和核酸分解酶。
2)自身免疫疾病药物：环孢菌素、环孢菌素A、氨基己酸、硫唑嘌呤、溴隐亭、苯丁酸氮芥、氯喹、环磷酰胺、皮质类固醇(例如安西奈德、倍他米松、布地奈德、氢化可的松、氟尼缩松、丙酸氟替卡松、氟可龙达那唑、地塞米松、曲安奈德、二丙酸倍氯米松)、DHEA、依那西普、羟基氯喹、英夫利昔单抗、美洛昔康、甲氨蝶呤、麦考酚酸酯、泼尼松、西罗莫司、他克莫司。
3)抗感染性疾病药物：
a)氨基糖苷类：阿米卡星、阿司米星、庆大霉素(奈替米星、西索米星、异帕米星)、潮霉素B、卡那霉素(阿米卡星、阿贝卡星、氨基脱氧卡那霉素、地贝卡星、妥布霉素)、新霉素(Framycetin、巴龙霉素、核糖霉素)、奈替米星、壮观霉素、链霉素、妥布霉素、甲基姿苏霉素；
b)酰胺醇类：迭氮氯霉素、氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素；
c)安沙霉素：格尔德霉素、除莠霉素；
d)碳青霉烯类：比阿培南、多利培南、厄他培南、亚胺培南、西司他丁、美罗培南、帕尼培南；
e)头孢烯：碳头孢烯(洛拉卡比)、头孢乙腈、氯氨苄青霉素、头孢拉定、头孢羟氨、头孢洛宁、头孢噻啶、头孢噻吩或头孢金素、头孢氨苄、头孢来星、头孢孟多、头孢匹林、羟胺唑头孢菌素、氟唑头孢菌素、孢西酮、唑啉头孢菌素、头孢拉宗、头孢卡品、头孢达肟、头孢吡、头孢克肟、头孢西丁、头孢罗齐、头孢甲氧环烯胺、头孢替唑、头孢呋辛、头孢克肟、头孢地尼、头孢托仑、头孢吡、头孢他美、头孢甲肟、头孢地嗪、头孢尼西、头孢呱酮、头孢雷特、头孢噻肟、噻乙胺唑头孢菌素、头孢唑兰、头孢氨苄、头孢咪唑、头孢匹胺、头孢匹罗、头孢泊肟、头孢罗齐、头孢喹诺、头孢磺啶、头孢他啶、头孢特仑、头孢布腾、头孢噻林、头孢唑肟、头孢吡普、头孢曲松、头孢呋辛、头孢唑南、头霉素(头孢西丁、头孢替坦、头孢氰唑)、氧(碳)头孢烯(氟氧头孢、拉氧头孢)；
f)糖肽：博来霉素、万古霉素(奥利万星、特拉万星)、替考拉宁(达巴万星)、雷莫拉宁；
g)甘氨酰环素：替加环素；
h)β-内酰胺酶抑制剂：青霉烷(舒巴坦、他唑巴坦)、氧青霉烷(克拉维酸)；
i)林可酰胺：克林霉素、林可霉素；
j)脂肽：达托霉素、A54145、钙依赖性抗生素(CDA)；
k)大环内酯类：阿奇霉素、克霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、氟雷霉素、交沙霉素、酮内酯(泰利霉素、塞红霉素)、麦迪霉素、米卡霉素、竹桃霉素、利福霉素(异烟肼、利福平、利福布丁、利福喷汀)、罗匹霉素、罗红霉素、大观霉素、螺旋霉素、他克莫司(FK506)、醋竹桃霉素、泰利霉素；
l)单环胺：氨曲南、替吉莫南；
m)恶唑烷酮类：利奈唑胺；
n)青霉素类：阿莫西林、氨苄青霉素(匹氨西林、海洛西林、巴氨西林、氨苄青霉素、阿霉素)、阿替代西林、阿洛西林、苄青霉素、苄星青霉素苄青霉素、苄星青霉素苯氧甲基青霉素、克洛西林、普鲁卡因青霉素(美替西林)、美洛西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、醋甲西林、青霉素、非奈西林、苯氧基甲基青霉素、呱拉西林、氨苄西林、磺苯西林、替莫西林、替卡西林；
o)多肽：杆菌肽、粘菌素、多粘菌素B；
p)喹诺酮类：阿拉曲沙星、巴洛沙星、环丙沙星、克林沙、达氟沙星、二氟沙星、依诺沙星、恩诺沙星、加雷沙星、加替沙星、吉米沙星、格帕沙星、卡诺曲伐沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、麻保沙星、莫西沙星、那氟沙星、诺氟沙星、奥比沙星、氧氟沙星、培氟沙星、曲伐沙星、格帕沙星、西他沙星、司帕沙星、替马沙星、托沙星、曲伐沙星；
q)链阳性菌素：普那霉素、奎奴普丁/达福普汀；
r)磺胺类：氨芐磺胺、偶氮磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲异唑、磺胺酰亚胺、磺胺吡啶、磺胺异恶唑、甲氧苄啶、磺胺甲恶唑(复方磺胺甲恶唑)；
s)类固醇抗菌药物：如夫西地酸；
t)四环素类：强力霉素、金霉素、氯米西环素、地美环素、雷莫昔林、美西环素、美他环素、米诺环素、土霉素、潘美环素、吡咯烷甲基四环素、四环素、甘氨酰环素(如替加环素)；
u)其他类型的抗生素：番荔枝素、胂凡纳明、细菌萜醇抑制剂(杆菌肽)、DANAL/AR抑制剂(环丝氨酸)、Dictyostatin、圆皮海绵内酯、软珊瑚醇、埃博霉素、乙胺丁醇、依托泊苷、法罗培南、夫西地酸、呋喃唑酮、异烟肼、Laulimalide、甲硝唑、莫匹罗星、NAM合成抑制剂(磷霉素)、呋喃妥因、紫杉醇、普兰西霉素、吡嗪酰胺、奎奴普丁/达福普汀、利福平、他唑巴坦替硝唑、乌菊花素。
4)抗病毒药物：
a)侵入/融合抑制剂：阿帕韦洛、马拉韦罗、Vicriviroc、Gp41(恩夫韦肽)、PRO 140、CD4(艾巴利珠单抗)；
b)整合酶抑制剂：雷特格韦、Elvite-gravir、Globoidnan A；
c)成熟抑制剂：Bevirimat、Vivecon；
d)神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦；
e)核苷和核苷酸：阿巴卡韦、阿昔单韦、阿德福韦、阿莫西韦、阿昔单抗、溴夫定、西多福韦、克拉夫定、地塞米松、去羟肌苷(ddI)、Elvucitabine、恩曲他滨(FTC)、恩替卡韦、泛昔洛韦、氟拉西林(5-FU)、3’-氟取代的2’、3’-脱氧核苷同系物、如3’-氟-2’、3’-双脱氧胸苷(FLT)和3’-氟-2’、3’-双脱氧鸟苷(FLG)、福米韦生、9-鸟嘌呤、碘苷、拉米夫定(3TC)、1-核苷(例如β-1-胸苷和β-1-2'-脱氧胞苷)、喷昔洛韦、racivir、利巴韦林、迪替丁、司他夫定(d4T)、塔利巴韦林(Viramidine)、替比夫定、替诺福韦、三氟尿苷伐昔洛韦、缬更昔洛韦、扎西他滨(ddC)、齐多夫定(AZT)；
f)非核苷类：金刚烷胺、阿替吡啶、卡普韦林、二芳基嘧啶(依曲韦林、Rilpivirine)、地拉夫定、二十二烷醇、乙米韦林、依法韦仑、膦甲酸(磷酰基甲酸)、咪喹莫特、聚乙二醇干扰素、洛韦胺、洛德腺苷、甲吲噻腙、奈韦拉平、NOV-205、长效干扰素α、鬼臼毒素、利福平、金刚乙胺、瑞喹莫德(R-848)、醋胺金刚烷；
g)蛋白酶抑制剂：安普那韦、阿扎那韦、Boceprevir、Darunavir、福萨那韦、印地那韦、洛匹那韦、奈非那韦、普来可那立、利托那韦、沙奎那韦、Telaprevir(VX-950)、替拉那韦；
h)其它类型的抗病毒药物：抗体酶、阿比朵尔、Aalanolide A、Ceragenin、氰维林-n、二芳基嘧啶、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、膦甲酸、格里菲辛、Taribavirin(viramidine)、羟基脲、KP-1461、米替福新、普来可那立、混成抑制剂、利巴韦林、Seliciclib。
5)上述药物的药学上可接受的盐、酸、衍生物、水合物或水合盐；或多晶型结晶；或其光学异构体、外消旋物、非对映异构体或对映异构体。
23.如权利要求20所述的协同治疗药物选自以下药物中的一种或几种：阿巴西普、阿巴霉素、醋酸阿比嗪、阿巴拉辛、对乙酰氨基酚/氢可酮、Acalabrutinib、阿杜卡单抗、阿达木单抗、ADXS31-142、ADXS-HER2、阿法替尼马来酸、阿地白介素、Alectinib、阿仑单抗、阿利维A酸、ado-trastuzumab emtansine、安非他明/右旋安非他命、阿那曲唑、阿立呱唑、蒽环霉素、阿立呱唑、阿扎那韦、Atezolizumab、阿托伐他汀、阿维鲁单抗、Axicabtageneciloleucel、阿西替尼、贝利司他、BCG Live、贝伐单抗、贝沙罗汀、布列那图单抗、硼替佐米、博苏替尼、Brentuximab vedotin、布地奈德、布地奈德/福莫特罗、丁丙诺啡、卡巴他赛、卡博替尼、Capmatinib、卡培他滨、卡非佐米、嵌合抗原受体工程T细胞(CAR-T)、塞来昔布、色瑞替尼、西妥昔单抗、西达本胺、环孢霉素、西那卡塞、克唑替尼、Cobimetinib、Cosentyx、克唑替尼、CTL019、达比加群酯、达拉非尼、达卡巴嗪、达利珠单抗、达克罗替尼、达托霉素、达拉图单单抗、达比泊汀阿尔法、达鲁那韦、达沙替尼、地尼白介素-白喉毒素、狄诺苏单抗、丙戊酸钠、地塞兰索拉唑、右旋呱醋甲酯、地塞米松、地奈卡普、二努妥昔单抗、多西环素、度洛西汀、双维利西布、杜瓦卢单抗、埃洛妥珠单抗、恩曲他滨/利匹韦林/替诺福韦酯、恩曲他滨/替诺福韦/埃法韦伦茨、依诺肝素、Ensartinib、恩杂鲁胺、Epoetinα、厄洛替尼、埃索美拉唑、艾司佐匹克隆、依那西普、依维莫司、依西美坦、依维莫司、艾塞那肽、依泽替米贝、依泽替米贝/辛伐他汀、非诺贝特、非格司亭、芬戈莫德、丙酸氟替卡松、氟替卡松/沙美特罗、氟维司群、吉非替尼、格拉替雷、醋酸戈舍瑞林、Icotinib、伊马替尼、Ibritumomabtiuxetan、依鲁替尼、Idelalisib、异环磷酰胺、英夫利昔单抗、咪喹莫特、ImmuCyst、ImmunoBCG、Iniparib、门冬胰岛素、地特胰岛素、甘精胰岛素、胰岛素赖脯胰岛素、干扰素α、干扰素α-1b、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素β、干扰素β1a、干扰素β1b、干扰素γ-1a、拉帕替尼、Ipilimumab、异丙托溴铵/沙丁胺醇、Ixazomib、Kanuma、醋酸兰瑞肽、来那度胺、来那度胺、楽伐替尼甲磺酸盐、来曲唑、左旋甲状腺素、利多卡因、利奈唑胺、利拉鲁肽、Lisdexamfetamine、LN-144、劳拉替尼、美金刚、呱甲酯、美托洛尔、曲美替尼、Mericitabine/利匹韦林/替诺福韦、莫达非尼、莫米他松、Mycidac-C、耐昔妥珠单抗、来那替尼、尼洛替尼、Niraparib、Nivolumab、奥法木单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥拉帕尼、奥美沙坦酯、奥美沙坦/氢氯噻嗪、奥马珠单抗、Omega-3脂肪酸乙酯、安珂瑞、奥司他韦、奥西替尼、羟可酮、帕博西尼、帕丽珠单抗、帕尼单抗、Panobinostat、帕唑帕尼、Pembrolizumab、PD-1抗体、PD-L1抗体、培美曲塞、帕妥珠单抗、肺炎球菌结合疫苗、泊马度胺、普瑞巴林、ProscaVax、普萘洛尔、喹硫平、雷贝拉唑、镭223氯化物、雷洛昔芬、雷特格韦、雷莫芦单抗、雷珠单抗、瑞格列单、Ribociclib、利妥昔单抗、利伐沙班、罗米地辛、瑞舒伐他汀、鲁素替尼磷酸盐、沙丁胺醇、Savolitinib、素马鲁肽、司维拉姆、西地那非、司妥昔单抗、Sipuleucel-T、西他列汀、西他列汀/二甲双胍、索非那新、Solanezumab、索尼吉布、索拉非尼、舒尼替尼、他克莫司、Tacrimus、他达拉非、他莫昔芬、达拉非尼、Talimogene laherparepvec、Talazoparib、特拉匹韦、Talazoparib、替莫唑胺、替西罗莫司、替诺福韦/恩曲他滨、替诺福韦酯、睾酮凝胶、沙利度胺、TICE BCG、噻托溴铵、Tisagenlecleucel、托瑞米芬、曲妥珠单抗、曲贝替定(Ecteinascidin 743)、曲美替尼、Tremelimumab、三氟尿嘧啶/替吡嘧啶、维生素A酸、Uro-BCG、尤特克单抗、缬沙坦、维利帕尼、凡德他尼、维罗非尼、Venetoclax、伏立诺他、阿柏西普、Zostavax及其同系物、衍生物、药学上可接受的盐、载体、稀释剂或其辅料、或上述组合。
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