CN115420840A

CN115420840A - 一种水合氯醛有关物质检测方法

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Publication number: CN115420840A
Application number: CN202211205430.8A
Authority: CN
Inventors: 何政泽; 陆瑶; 张海
Original assignee: Chengdu Shibeikang Biological Medicine Technology Co ltd
Current assignee: Chengdu Shibeikang Biological Medicine Technology Co ltd
Priority date: 2022-09-30
Filing date: 2022-09-30
Publication date: 2022-12-02
Anticipated expiration: 2042-09-30
Also published as: CN115420840B

Abstract

本发明涉及药物检测分析领域，具体涉及一种水合氯醛的氯代烷烃类降解杂质的检测方法。本发明的检测方法采用气相色谱法，以极性固定液的毛细管柱为色谱柱，氢火焰离子化检测器（FID），采用升温程序检测。本发明提供的检测方法稳定、专属性好、灵敏度和准确度高，适合用于水合氯醛及其制剂的药品注册质量研究。

Description

一种水合氯醛有关物质检测方法

技术领域

本发明涉及药物检测分析领域，具体涉及一种水合氯醛的有关物质检测方法。

背景技术

水合氯醛，一款催眠和抗惊厥药，其化学名为：2,2,2-三氯-1,1-乙二醇，结构如下：

。

水合氯醛易于在热、氧化、光照等条件下降解，性质不稳定，尤其是在水溶液中稳定性很差。目前国内外临床上水合氯醛多为其糖浆剂或者口服溶液，在我国常在儿科检查时被用作镇静催眠剂，因此本品的质量研究慎之又慎。根据水合氯醛的结构特征和降解特性，将其杂质谱大致分为三类：一是氯代烷烃类杂质，如三氯甲烷、二氯甲烷；二是醛类杂质，如氯乙醛、水合二氯乙醛、5-羟甲基糠醛；三是羧酸类杂质，如甲酸、乙酸、三氯乙酸等。

水合氯醛的氯代烷烃类杂质中，三氯甲烷具有肝肾毒性和潜在的致癌性，其在药品中的含量需要严格控制，而专属性强又科学的检测方法是本品质量研究的关键。

现有技术CN112014487B公开了一种测定水合氯醛或其制剂中氯代烷烃含量的方法，但该方法需要对样品进行萃取处理后对萃取有机相进行检测，该萃取的前处理过程需要静置分层等操作，检测工序复杂且对实验操作人员要求高，存在萃取不充分或者萃取时间过长容易造成水合氯醛降解等风险，降低了检测的准确度和可操作性。现有技术CN112656758A的说明书第0067至0071段公开了一种检测三氯甲烷的高效液相色谱法，但该方法整体出峰时间晚，耗时长且峰值较不稳定，方法应用上具有局限性。

因此，开发更科学精准且易操作的水合氯醛检测方法，是目前该药品质量研究亟待解决的技术问题。

发明内容

为解决现有技术存在的技术问题，本发明提供一种水合氯醛有关物质的检测方法。该方法采用气相色谱法，能够方便又科学地检测水合氯醛的氯代烷烃类降解杂质，且方法灵敏度高、专属性好、准确度和精密度高。

本发明提供一种水合氯醛有关物质的检测方法，所述检测方法采用气相色谱法，包括如下步骤：

（1）精密称取水合氯醛或其制剂适量，用溶剂稀释制成供试品溶液；

（2）将供试品溶液注入气相色谱仪中，按照色谱条件检测。

进一步地，上述色谱条件包括：以极性固定液的毛细管柱为色谱柱，采用氢火焰离子化检测器（FID），检测器温度200～300℃，进样口温度150～250℃，按升温程序检测。

进一步地，上述溶剂包含带酸性pH值的酸溶液。

进一步地，上述酸性pH值为1.0～4.0；或所述酸溶液包含柠檬酸、盐酸、磷酸、酒石酸或冰醋酸。

进一步地，上述酸的用量为1～100mmol/L；优选1～20mmol/L；更优选10mmol/L。

进一步地，上述pH值的调节剂包括但不限于磷酸、盐酸或冰醋酸。

进一步地优选地，上述溶剂为柠檬酸溶液（磷酸调节pH至1.0～4.0）；优选1～20mmol/L柠檬酸溶液（磷酸调节pH至1.5）。

进一步地，上述极性固定液包含聚乙二醇。

进一步地，上述进样口温度为160～240℃，优选200℃；或/和检测器的温度为250℃。

进一步地，上述升温程序包括：起始温度45～70℃，维持0～15分钟，以每分钟5～30℃的速率升温至180～220℃，维持0～30分钟；优选地，所述升温程序为：起始温度为50℃，维持7分钟，以每分钟20℃的速率升温至200℃，维持5分钟。

进一步地，上述色谱条件的顶空平衡时间为10～60分钟，优选30分钟。

进一步地，上述色谱条件的柱流量为3.0～8.0ml/min；优选4.0～7.0ml/min；更优选5.0ml/min。

进一步地，上述色谱条件的分流比为3:1～10:1；优选5:1。

进一步地，上述水合氯醛的制剂包括水合氯醛或其盐与药学上可接受的辅料组成的药物组合物；优选地，所述制剂包含糖浆剂、口服溶液、灌肠液、栓剂或待灌液。

进一步地，上述有关物质包含三氯甲烷、二氯甲烷中的一种或两种。

进一步地，上述供试品溶液中，如有有关物质，杂质三氯甲烷的含量不超0.06%，优选不超过0.03%；或/和杂质二氯甲烷的含量不超过0.06%，优选不超过0.03%。

进一步地，上述供试品的每1ml中含有水合氯醛1～100mg；优选10～30mg；更优选20mg。

有益效果：本发明的水合氯醛有关物质检测方法采用带酸性pH值的稀酸溶液溶解，操作简单且意料之外地增强了水合氯醛的稳定性，避免了水合氯醛因降解造成的检测误差风险；且方法灵敏度高、专属性好，峰型好，杂质峰与主峰以及杂质峰与杂质峰之间的分离度均符合药典要求；方法准确度、重现性和精密度高，符合质量分析检测要求，适合用于本品的含氯烷烃类降解杂质的有关物质质量研究。

附图说明

图1：系统适用性溶液（供试品+对照品）色谱图。

具体实施方式

下面将结合试验例和实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的各例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。各例中未注明的具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为通过市购获得的本领域常规产品。

以下试验例和实施例所用的水合氯醛对照品：购自LGC，纯度99.4%；供试品：又称“本品”，为水合氯醛糖浆，自制，批号：5201101。

供试品（批号：5201101）处方及制备方法：参见专利CN 112656758 A实施例5的水合氯醛糖浆处方和制备方法（配液温度为25℃）。

试验例1：水合氯醛有关物质检测方法的方法学考察

⒈溶液配制和测定法

供试品溶液制备：取本品适量（约相当于含水合氯醛200mg），精密称定，用10mmol/L柠檬酸溶液（磷酸调节pH至1.5）稀释制成1ml中约含20mg水合氯醛的溶液，精密量取2ml，置顶空瓶中，密封。

对照品溶液制备：取二氯甲烷、三氯甲烷适量，加N,N-二甲基乙酰胺稀释并制成每1ml中约含二氯甲烷、三氯甲烷各1.2mg的混合储备液；精密量取混合储备液适量，用10mmol/L柠檬酸溶液（磷酸调节pH至1.5）稀释制成每1ml中约含二氯甲烷、三氯甲烷各12μg的溶液，精密量取2ml，置顶空瓶中，密封。

空白辅料溶液制备：按供试品溶液配制方法同法配制空白辅料溶液。

测定法：取各溶液分别顶空进样，记录色谱图。按外标法以峰面积计算二氯甲烷、三氯甲烷含量。

⒉色谱条件

（1）方法筛选

二氯甲烷与三氯甲烷的性质相近，本发明申请人在三氯甲烷的现有技术基础上进行优化。

条件1：CN112656758A 的说明书第0067至0071段记载的一种检测三氯甲烷的高效液相色谱法。

结果说明：该条件下出峰时间太晚，耗时长，且二氯甲烷略受干扰。

条件2：采用条件1的毛细管色谱柱（（6% )氰丙基苯基-(94% )二甲基聚硅氧烷为填料），柱流量2.0ml/min；氢离子火焰离子化检测器（FID），检测器温度：250℃；进样口温度：200℃；分流比5:1；顶空平衡时间：30min，气相循环时间：30min；升温程序：起始温度为50℃，维持7分钟，以每分钟20℃的速率升温至200℃，维持5分钟。

结果说明：条件2的二氯甲烷峰前面有一个小峰干扰。

条件3：采用DB-WAX（聚乙二醇为填料的毛细管柱），柱流量5.0ml/min；其他色谱条件同条件2。

结果说明：各峰无干扰，二氯甲烷、三氯甲烷峰型好，灵敏度好。

综合以上色谱条件筛选试验结果，暂定色谱条件2作为本品二氯甲烷、三氯甲烷检测条件进行方法验证。

（2）溶剂筛选

本申请发明人在试验筛选过程中，发现采用烯酸溶液并调节pH值至1.0～4.0时可以显著提升水合氯醛溶液的稳定性，尤其控制稀释溶剂的pH值至1.5时，稳定性好且各峰的拖尾因子最小（均小于1.2），且不受酸和pH调节剂种类的影响。

试验例2：方法验证

本试验下所用溶液及其配制同试验例1，色谱条件同试验例1的条件3。

⒈专属性

取空白溶剂、空白辅料溶液、对照品、供试品适量，按拟定的色谱条件进样测定。结果见表1，系统适用性溶液的图谱见附图1。

试验结果表明：在拟定的色谱条件下，空白溶剂、空白辅料溶液均不干扰供试品中二氯甲烷、三氯甲烷的检测，专属性良好。

⒉检测线、定量线

取二氯甲烷对照品溶液适量，用稀释剂逐级稀释至峰高约为基线噪音10倍的溶液，作为定量限；物质峰高约为基线噪音3倍的溶液，作为检测限。吸取三氯甲烷对照品溶液适量，用稀释剂逐级稀释至信噪比约等于10:1时，作为定量限；信噪比约等于3:1时，作为检测限。结果见表2。

试验结果表明：二氯甲烷的检测限为0.0356µg/ml；三氯甲烷的检测限为0.0767µg/ml，本品检查拟定的水合氯醛进样浓度为20mg/ml，二氯甲烷检测限相当于供试品中水合氯醛浓度的0.0002%，三氯甲烷检测限相当于供试品中水合氯醛浓度的0.0004%，即供试品进样浓度均大于二氯甲烷、三氯甲烷检测限的10000倍，表明拟定的供试品进样浓度能够保证二氯甲烷、三氯甲烷有效检出。

⒊线性及范围

取二氯甲烷对照品适量，精密称定，加N,N-二甲基乙酰胺溶解并稀释至每1ml含二氯甲烷约1200μg的溶液，作为二氯甲烷对照品储备液；取三氯甲烷对照品适量，精密称定，加N,N-二甲基乙酰胺溶解并稀释至每1ml含三氯甲烷约1200μg的溶液，作为三氯甲烷对照品储备液。再分别取二氯甲烷对照品储备液、三氯甲烷对照品储备液适量，加稀释剂溶解并定量稀释成每1ml中约含二氯甲烷48µg、三氯甲烷48µg的溶液，作为线性储备液。

精密吸取线性储备液，用稀释剂稀释制成定量限浓度、20%、50%、80%、100%、150%、200%的对照品溶液，精密量取上述各溶液2ml至顶空瓶，注入气相色谱仪，记录各浓度的峰面积，以浓度为横坐标、相应的峰面积为纵坐标作线性回归，结果见表3。

试验证明，当二氯甲烷的浓度在0.1185μg/ml～23.6960μg/ml之间时，浓度与峰面积呈良好的线性关系，Y轴截距在100%浓度的响应值的为0.2%；当三氯甲烷的浓度在0.2557μg/ml～25.5680μg/ml之间时，浓度与峰面积呈良好的线性关系，Y轴截距在100%浓度的响应值的为0.1%。

⒋进样精密度

将本品对照品溶液连续进样6次，记录色谱图，计算峰面积的RSD。试验结果见表4。

由上表可知，对照品溶液连续进样6针，二氯甲烷峰面积的RSD为0.8%，保留时间RSD小于0.1%，三氯甲烷峰面积的RSD为0.8%，保留时间RSD小于0.1%，满足气相色谱测定的精密度要求。

⒌重复性和重现性

为了考察本品二氯甲烷、三氯甲烷测定方法的精密度，取同一批供试品在不同实验室由两名分析人员，分别制备6份供试品溶液，按拟定方法进行检测。试验结果见表5。

由上表可知，试验者一的六份供试品二氯甲烷含量RSD为3.24%，实验者二的六份供试品二氯甲烷含量RSD为1.39%，十二份供试品的二氯甲烷含量RSD为4.63%，证明同一批供试品在不同实验室由两名分析人员测定结果无明显差异。表明拟定的二氯甲烷、三氯甲烷方法重复性和重现性良好。

⒍准确度

为了验证该二氯甲烷、三氯甲烷含量测定方法的准确性，采用了向样品中加二氯甲烷、三氯甲烷对照品的方式进行考察。取已知含量的二氯甲烷、三氯甲烷对照品适量，按拟定方法制备供试品溶液，在供试品溶液中分别加入二氯甲烷、三氯甲烷含量测定浓度50%、100%、150%的对照品进样测定，计算回收率。试验结果见表6-1和表6-2。

由上表可知，二氯甲烷收率在87.24%~92.35%之间，平均回收率为89.9%，RSD为1.9%；三氯甲烷收率在89.39%~96.75%之间，平均回收率为93.0%，RSD为2.7%。表明拟定的二氯甲烷、三氯甲烷测定方法回收率良好。

⒎耐用性

为了验证在拟定的色谱条件发生微小变动时，测定结果的准确性不受影响的程度，对拟定色谱条件的耐用性进行了考察。取空白溶液、对照溶液、供试品溶液、对照+供试品溶液，按拟定条件进行测定。试验条件包括改变升温程序起始温度±5℃、改变进样口温度±40℃，改变流量±1ml/min，或改变检测器温度±50℃，改变任一条件时其他条件不变。

试验结果表明，改变升温程序起始温度、进样口温度、流量或检测器温度等条件，小儿水合氯醛糖浆中的二氯甲烷、三氯甲烷检测结果无明显差异，且在各条件下，空白溶液均不干扰供试品中二氯甲烷、三氯甲烷的检测，符合药典可接受标准。

实施例1：

色谱条件：升温程序为：起始温度45℃，维持15分钟，以每分钟30℃的速率升温至220℃；其它色谱条件同试验例2。

测定：将各溶液注入各色谱系统，采集色谱图。

实施例2：

色谱条件：升温程序为：起始温度45℃，以每分钟5℃的速率升温至180℃，维持10分钟；其它色谱条件同试验例2。

测定：将各溶液注入各色谱系统，采集色谱图。

实施例3：

色谱条件：升温程序为：起始温度70℃，维持15分钟，以每分钟30℃的速率升温至220℃；其它色谱条件同试验例2。

测定：将各溶液注入各色谱系统，采集色谱图。

实施例4：

色谱条件：升温程序为：起始温度70℃，以每分钟5℃的速率升温至180℃，维持30分钟；其它色谱条件同试验例2。

测定：将各溶液注入各色谱系统，采集色谱图。

实施例5：

色谱条件：升温程序为：起始温度70℃，维持5分钟，以每分钟20℃的速率升温至200℃，维持10分钟；其他色批条件同试验例2。

测定：将各溶液注入各色谱系统，采集色谱图。

数据统计和总结：汇总试验例2“专属性项下”和上述实施例1～5的色谱图，统计峰面积、保留时间和分离度，结果显示：（1）各对照品溶液色谱图中：各峰的峰型好，各水合氯醛峰、二氯甲烷峰、三氯甲烷峰、其它杂质峰等之间的分离度均在2.0以上，均大于1.5，各峰之间分离度较好，各方法专属性好，符合质量分析要求。（2）各供试品溶液色谱图中：二氯甲烷均未检出；按外标法以峰面积计算，三氯甲烷的含量与试验例2的差值均在0.001%以内，表明各实施例的测定方法准确度高、重现性良好。

此外，在水合氯醛的三氯甲烷和二氯甲烷的检测方法摸索过程中，本发明人还发现，当所述GC的升温程序的起始温度低于45℃或者高于70℃时，杂质的精密度波动较大，如重复性和重现性的十二份二氯甲烷含量RSD约为15%，超出药典规定的精密度可接受范围；而当升温程序的起始温度介于于45℃至70℃时，所述检测杂质的精密度高，远低于药典规定的可接受范围。而这一发现是意料之外的。

Claims

1.一种水合氯醛有关物质检测方法，采用气相色谱法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（2）将供试品溶液注入气相色谱仪中，按照色谱条件检测。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件包括：以极性固定液的毛细管柱为色谱柱，采用氢火焰离子化检测器（FID），检测器温度200～300℃，进样口温度150～250℃，按升温程序检测。

3.根据权利要求1～2任一所述的检测方法，其特征在于，所述溶剂包含带酸性pH值的酸溶液。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述酸性pH值为1.0～4.0；或所述酸溶液包含柠檬酸、盐酸、磷酸、酒石酸或冰醋酸；或所述酸溶液的浓度为1～100mmol/L；优选地，上述溶剂选自柠檬酸溶液（磷酸调节pH至1.0～4.0）。

5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述极性固定液包含聚乙二醇。

6.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述进样口温度为160～240℃，优选200℃；或/和检测器的温度为250℃。

7.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述升温程序包括：起始温度45～70℃，维持0～15分钟，以每分钟5～30℃的速率升温至180～220℃，维持0～30分钟；优选地，所述升温程序为：起始温度为50℃，维持7分钟，以每分钟20℃的速率升温至200℃，维持5分钟。

8.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述水合氯醛的制剂包括水合氯醛或其盐与药学上可接受的辅料组成的药物组合物；优选地，所述制剂包含糖浆剂、口服溶液、灌肠液、栓剂或待灌液。

9.根据权利要求1～8任一所述的检测方法，其特征在于，所述有关物质包含三氯甲烷、二氯甲烷中的一种或两种。

10.根据权利要求1～8任一所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液中，如有有关物质，杂质三氯甲烷的含量不超0.06%，优选不超过0.03%；或/和杂质二氯甲烷的含量不超过0.06%，优选不超过0.03%。