CN115404185A - 一种拮抗白色念珠菌的卷曲乳杆菌lcp051及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提出了一种拮抗白色念珠菌的卷曲乳杆菌LCP051及其应用，属于益生菌技术领域。所述卷曲乳杆菌LCP051分类命名为卷曲乳杆菌Lactobacillus crispatus，保藏编号为CGMCC NO.25132，保藏日期为2022年6月20日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。本发明筛选得到了一株高效产乳酸以及小分子酸的卷曲乳杆菌LCP051，此卷曲乳杆菌LCP051和/或此卷曲乳杆菌LCP051的代谢产物能够预防和/或治疗白色念珠菌引发的阴道炎。

Description

一种拮抗白色念珠菌的卷曲乳杆菌LCP051及其应用

技术领域

本发明涉及益生菌技术领域，具体涉及一种拮抗白色念珠菌的卷曲乳杆菌LCP051及其应用。

背景技术

念珠菌阴道炎(candida vaginitis)是一种育龄期妇女常见的阴道粘膜的真菌感染性疾病，习称霉菌阴道炎，发病率仅次于滴虫阴道炎。据统计，全球范围内约75％的女性一生中至少有1次念珠菌阴道炎的急性发作，其中，40％-50％的女性会复发1次或以上，5％-8％的女性则会发展为复发性外阴阴道念珠菌病(recurrentvulvovaginalcandidiasis,RVVC)，1年内发作4次或以上。

念珠菌阴道炎患者最常见的症状是白带多，外阴及阴道灼热瘙痒，外阴性排尿困难，外阴地图样红斑。典型的白带呈凝乳状或为豆渣状，阴道黏膜高度红肿，可见白色鹅口疮样斑块附着，易剥离，其下为受损黏膜的糜烂基底，或形成浅溃疡，严重者可遗留淤斑。妊娠期念珠菌阴道炎患者的瘙痒症状尤为严重，甚至坐卧不宁，痛苦异常，也可有尿频、尿痛及性交痛等症状。可见，念珠菌阴道炎严重影响女性的工作和生活质量，带给女性生理和心理上的痛苦。

白色念珠菌是念珠菌阴道炎的主要致病菌，大约有80-90％的念珠菌阴道炎患者是由白色念珠菌感染引起的。目前，临床上治疗念珠菌阴道炎的方法主要是抗生素疗法，通过口服氟康唑等抗生素药物或阴道内给药抑制念珠菌阴道炎患者体内的白色念珠菌等念珠菌阴道炎致病菌。但是，抗生素疗法会导致抗生素抗性菌株的出现，这使得抗生素治疗念珠菌阴道炎的疗效越来越差。

健康女性阴道内寄生着以乳酸杆菌占优势的微生物群，中国女性最常见的优势乳杆菌有卷曲乳杆菌、格氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、约氏乳杆菌等。通常认为，乳酸杆菌能主动或被动的利用糖原产生乳酸维持阴道内的低pH环境，防止其他不耐酸的致病菌的繁殖，并且能产生过氧化氢、细菌素等物质抑制病原菌生长。同时，乳酸杆菌还通过竞争排斥机制阻止其他微生物对上皮细胞的吸附成膜。

通过在阴道内投放乳酸杆菌，用于恢复阴道微生态平衡已有尝试。目前国内上市的阴道内投放乳酸杆菌的制剂仅有1种，为内蒙古双奇药业股份有限公司生产的商品名为“定君生”的市售药品，包含1种乳杆菌——德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)，但该菌种不属于我国妇女阴道优势菌种。专利(CN201410674502.2)报道了一株卷曲乳酸杆菌IMC-79具有较强产生H₂O₂的能力，对金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用，但对白色念珠菌真菌感染的阴道炎防治没有报道。并且现有报道的乳酸杆菌主要通过产生乳酸发挥抗菌作用，其乳酸产量较低。

因此，急需一种能够拮抗白色念珠菌的益生菌可以用于预防和治疗念珠菌阴道炎，恢复女性的健康。

发明内容

本发明的目的在于提出一种拮抗白色念珠菌的卷曲乳杆菌LCP051及其应用，该卷曲乳杆菌LCP051和/或此卷曲乳杆菌LCP051的代谢产物能够预防和/或治疗白色念珠菌引发的阴道炎，与壳聚糖联合制得的产品是一种合生元，包括益生菌和益生元，发挥益生菌的生理活性，又可选择性地增加这种细菌的数量，同时具有很好的生物相容性，可降解性，另外，壳聚糖还可以抑制白色念珠菌的活性功能，具有保护创面，促进伤口愈合的作用，可以辅助阴道炎症的治疗，两者的结合能快速明显的改善阴道炎患者的症状，效果显著。

本发明的技术方案是这样实现的：

本发明提供一种拮抗白色念珠菌的卷曲乳杆菌LCP051，所述卷曲乳杆菌LCP051分类命名为卷曲乳杆菌Lactobacillus crispatus，保藏编号为CGMCC NO.25132，保藏日期为2022年6月20日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。

本发明进一步保护如上述卷曲乳杆菌LCP051在制备抑制白色念珠菌生长的产品中的应用。

本发明进一步保护如上述卷曲乳杆菌LCP051在制备防治阴道炎的抗真菌剂中的应用。

作为本发明的进一步改进，所述真菌为白色念珠菌。

本发明进一步保护一种用于预防和/或治疗念珠菌阴道炎的产品，所述产品含有上述卷曲乳杆菌LCP051和/或上述卷曲乳杆菌LCP051的代谢产物。

作为本发明的进一步改进，所述产品为药品或卫生用品。

作为本发明的进一步改进，所述卫生用品包括消毒纸巾、消毒湿巾、卫生巾或卫生棉条。

作为本发明的进一步改进，所述产品包含：

上述卷曲乳杆菌LCP051以及药学上可接受的载体；

或者，上述卷曲乳杆菌LCP051的代谢产品以及药学上可接受的载体；

或者，上述卷曲乳杆菌LCP051和上述卷曲乳杆菌LCP051的代谢产品以及药学上可接受的载体。

优选地，所述载体为药学上可接受的填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂或润滑剂中的一种或多种。

优选地，所述填充剂为微晶纤维素、乳糖、甘露醇、淀粉、糖粉、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙、蔗糖或糊精中的一种或多种；所述润湿剂为乙醇或甘油中的一种或多种；所述崩解剂为羧甲基淀粉钠、交联羧甲基淀粉钠、交联聚维酮、交联聚乙烯吡咯烷酮或低取代羟丙基纤维素中的一种或多种；所述粘合剂为卡拉胶、黄原胶、瓜尔豆胶、琼脂、明胶、海藻酸钠、刺槐豆胶、魔芋胶、淀粉糊、糖浆、饴糖、炼蜜或液状葡萄糖中的一种或多种；所述润滑剂为硬脂酸镁、硬脂酸富马酸钠、滑石粉或二氧化硅中的一种或多种。

优选地，所述药品的剂型包括软胶囊、硬胶囊、颗粒剂、粉剂、片剂、栓剂、凝胶剂、外用溶液剂、洗剂或搽剂。

优选地，所述产品中，上述卷曲乳杆菌LCP051的活菌数不低于10⁸cfu/mL或10⁸cfu/g。

本发明进一步保护一种制备用于预防和/或治疗念珠菌阴道炎的产品的方法，其特征在于，使用上述卷曲乳杆菌LCP051和/或上述卷曲乳杆菌LCP051的代谢产物。

本发明进一步保护如上述卷曲乳杆菌LCP051与壳聚糖联合用于制备治疗阴道炎的药物中的应用。

本发明具有如下有益效果：

1、本发明筛选得到了一株高效产乳酸以及小分子酸的卷曲乳杆菌LCP051，此卷曲乳杆菌LCP051和/或此卷曲乳杆菌LCP051的代谢产物能够预防和/或治疗白色念珠菌引发的阴道炎。

(1)此卷曲乳杆菌LCP051通过自身的通过竞争的方法来抑制白色念珠菌的增殖，抑制念珠菌对人阴道上皮细胞的粘附，降低念珠菌毒力，从而起到抑制白色念珠菌的效果，恢复阴道微环境菌群稳态；

(2)此卷曲乳杆菌LCP051的代谢产物包括大量的乳酸和小分子酸，其中，小分子酸包括丁酸、丙酸、丁二酸、乙酸等，产生较强的H₂O₂能力，调节患者阴道pH值，使阴道pH维持在4-4.5，改变利于念珠菌生长繁殖的pH环境，实现代谢产物与菌株协同抗菌，增强抗菌效果；

(3)白色念珠菌参与了粘附，侵袭和诱导阴道黏膜细胞损伤等过程，念珠菌生长过程中形成菌丝，念珠菌菌丝分泌的念珠菌肽具诱导患者阴道上皮细胞膜溶解的作用，是引发炎症和外阴念珠菌病的主要机理。另一方面，本发明卷曲乳杆菌LCP051可抑制菌丝相关基因ECE1等的表达，抑制念珠菌酵母菌丝到菌丝的形态转变，降低念珠菌对阴道上皮细胞的侵入性损伤；降低菌丝形成和粘附到上皮细胞所需的细胞壁甘露糖蛋白的表达，降低对阴道上皮细胞的损伤，从而降低由念珠菌诱导的阴道上皮细胞损伤和炎症反应。

2、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)是益生菌的一种，益生菌疗法不会使得白色念珠菌等念珠菌阴道炎致病菌产生抗性同时不会带来任何的副作用，为生殖系统正常定植益生菌，不增加阴道腔负担，因此，本发明筛选得到的卷曲乳杆菌LCP051可长期地、安全地用于预防和/或治疗念珠菌阴道炎的产品(如药品或卫生用品等)中。

3、卷曲乳杆菌LCP051与壳聚糖联合制得的产品是一种合生元，包括益生菌和益生元，发挥益生菌的生理活性，又可选择性地增加这种细菌的数量，同时具有很好的生物相容性，可降解性，另外，壳聚糖还可以抑制白色念珠菌的活性功能，具有保护创面，促进伤口愈合的作用，可以辅助阴道炎症的治疗，两者的结合能快速明显的改善阴道炎患者的症状，效果显著。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为卷曲乳杆菌LCP051的菌落形态图；

图2为卷曲乳杆菌LCP051的菌体形态图；

图3为对白色念珠菌细胞膜的去极化作用对比图。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

MRS液体培养基，成分如下：蛋白胨10g/L、牛肉浸粉5g/L、酵母浸粉4g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸三铵2g/L、乙酸钠5g/L、吐温80 1mL/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.05g/L，购于北京索莱宝科技有限公司。

MRS固体培养基，成分如下：蛋白胨10g/L、牛肉浸粉8g/L、酵母浸粉4g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、乙酸钠5g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.04g/L、琼脂14g/L、吐温80 1mL/L，购于青岛海博生物技术有限公司。

壳聚糖，含量大于90％，购于扬州鸿信生物制品有限公司。

本发明一种卷曲乳杆菌LCP051，所述卷曲乳杆菌LCP051分类命名为卷曲乳杆菌Lactobacillus crispatus，保藏编号为CGMCC NO.25132，保藏日期为2022年6月20日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。

实施例1卷曲乳杆菌LCP051的筛选及鉴定

1、卷曲乳杆菌LCP051的筛选

1.1样品来源

本发明所使用的菌株均收集自四川地区母猕猴的粪便样品。

1.2筛选

将粪便样品经过预处理后，将0.5g样品加入5mL MRS液体培养基中，混匀后于37℃培养，然后在超净台中吸取富集液1mL，用0.9％生理盐水进行十倍梯度稀释，选取合适的稀释梯度的菌液100μL涂于含有无菌的MRS固体培养基的培养皿上，37℃温度下培养48h，挑取卷曲乳杆菌的典型菌落至MRS固体培养基上多次划线纯化，直至整个平板上的菌落形态一致，挑取单菌落转接至MRS液体培养基增菌，30％甘油中于-80℃下冷冻保藏，得到菌株做物种鉴定。

2、卷曲乳杆菌LCP051的鉴定

2.1菌落特征

卷曲乳杆菌LCP051在MRS固体培养基中培养24h后，菌落呈白色，圆形，菌落中间饱满，周围弥散，见图1。

2.2显微镜下形态

卷曲乳杆菌LCP051菌落涂片：革兰氏染色呈阳性，菌体呈杆状，单个、成对排列，见图2。

2.3生长习性

挑取卷曲乳杆菌LCP051单菌菌落接入无菌的，pH＝6.5，MRS液体培养基中，分别在有氧和无氧条件下，37℃，50r/min，培养24h，检测培养液的OD₆₀₀值，发现其在有氧和无氧条件下均能生长，判断为兼性厌氧菌，符合卷曲乳杆菌的典型特征。

挑取卷曲乳杆菌LCP051单菌菌落接入无菌的，pH＝6.5，MRS液体培养基中，分别在10-50℃条件下，厌氧培养24h，检测培养液的OD₆₀₀值，发现其最适生长温度为17-39℃。

挑取卷曲乳杆菌LCP051单菌菌落接入无菌的，pH值为3-10的MRS液体培养基中，于37℃，厌氧培养24h，检测培养液的OD₆₀₀值，发现其最适pH值为6.2。

2.4 16S rDNA鉴定

鉴定单位：上海美吉生物医药科技有限公司。

鉴定序列：

GTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCGTGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCGTGCAGTCGAGTTGCAGACTGCAGTCCGAACTGAGAACAGCTTTCAGAGATTCGCTTGCCTTCGCAGGCTCGCTTCTCGTTGTACTGCCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCATTAGAGTGCCCAACTTAATGCTGGCAACTAATAACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGTCTTAGCGTCCCCGAAGGGAACTTTGTATCTCTACAAATGGCACTAGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTGAGAGGCGGAAACCTCCCAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTGCAGACCAGAGAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTCCACCGCTACACATGGAGTTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGAAAAACAGTTTCCGATGCAGTTCCTCGGTTAAGCCGAGGGCTTTCACATCAGACTTATTCTTCCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGACTTTCTGGTTGATTACCGTCAAATAAAGGCCAGTTACTACCTCTATCCTTCTTCACCAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCTTCACTCACGCGGCGTTGCTCCATCAGACTTGCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGATCAGTCTCTCAACTCGGCTATGCATCATCGCCTTGGTAAGCCTTTACCTTACCAACTAGCTAATGCACCGCGGGGCCATCCCATAGCGACAGCTTACGCCGCCTTTTAAAAGCTGATCATGCGATCTGCTTTCTTATCCGGTATTAGCACCTGTTTCCAAGTGGTATCCCAGACTATGGGGCAGGTTCCCCACGTGTTACTCACCCATCCGCCGC。

鉴定结果：根据菌株的序列比对结果和生理生化结果相结合，确定筛选的菌株为Lactobacillus crispatus(卷曲乳杆菌)。

实施例2卷曲乳杆菌LCP051粉的制备

将实施例1中装有卷曲乳杆菌LCP051的甘油管从-80℃取出，活化培养，得到含菌量为10⁸cfu/mL的菌种种子液，稀释100倍后，接种到pH＝6.2的MRS液体培养基中，接种量为2wt％，在37℃条件下，厌氧培养24h，菌液经过离心，0.9％生理盐水洗涤，离心，真空冷冻干燥，获得卷曲乳杆菌LCP051粉，测得卷曲乳杆菌LCP051菌株的活菌数为10⁸cfu/g。

实施例3

本实施例提供一种用于预防和/或治疗念珠菌阴道炎的产品，包括实施例2制得的卷曲乳杆菌LCP051粉。

实施例4

本实施例提供一种用于预防和/或治疗念珠菌阴道炎的产品，将实施例2制得的卷曲乳杆菌LCP051粉与壳聚糖按照质量比为5:7混合均匀，得到用于预防和/或治疗念珠菌阴道炎的产品。

实施例5对白色念珠菌的抑制试验

实验菌株：本发明卷曲乳杆菌LCP051、专利CN111518714B的卷曲乳杆菌CCFM1110、专利CN111893057B的卷曲乳杆菌Lcr-MH17和专利CN114480198A的卷曲乳杆菌ZH17。

试验分为6组，分别为卷曲乳杆菌LCP051组、卷曲乳杆菌CCFM1110组、卷曲乳杆菌Lcr-MH17组、卷曲乳杆菌ZH17组、阳性对照组和空白对照组。

将各试验用菌分别培养于MRS液体培养基中，活化培养至含菌量为10⁸cfu/mL。阳性对照组为20mg/mL的抗真菌药物克霉唑溶液，空白对照组为MRS液体培养基液。

白色念珠菌(Candida albicans)ATCC 10231：购于美国典型菌种保藏中心，接种于沙堡氏(4％)葡萄糖琼脂培养基(购于上海研生实业有限公司)，28℃培养36h后，含菌量为10⁸cfu/mL，用于实验。

1、含菌液对白色念珠菌活菌的抑制试验

试验方法：各取1μL试验菌液、抗真菌药物克霉唑溶液或MRS液体培养基液依次点在含有白色念珠菌的培养基上，28℃培养24h。培养后取出培养基，用钢尺测量每个培养基上的抑菌圈直径。实验重复3次，取平均值。

结果见表1。

表1

组别	抑菌圈直径(mm)
		卷曲乳杆菌LCP051组	26.7±2.7*#
卷曲乳杆菌CCFM1110组	21.2±1.9*
		卷曲乳杆菌Lcr-MH17组	17.5±1.5
卷曲乳杆菌ZH17组	19.3±1.8
		阳性对照组	24.4±2.2
空白对照组	0±0

注释：#为与空白对照组相比，P<0.05；*为与阳性对照组相比，P<0.05。

由上表可知，本发明卷曲乳杆菌LCP051对白色念珠菌的抑菌圈直径最大，对白色念珠菌的抑制效果最好。

2、无细胞上清液对白色念珠菌活菌的抑制试验

试验方法：将试验菌液离心，得到上清液，各取1μL，以及1μL抗真菌药物克霉唑溶液或MRS液体培养基液依次点在含有白色念珠菌的培养基上，28℃培养24h。培养后取出培养基，用钢尺测量每个培养基上的抑菌圈直径。实验重复3次，取平均值。

结果见表2。

表2

组别	抑菌圈直径(mm)
		卷曲乳杆菌LCP051组	17.5±1.8*#
卷曲乳杆菌CCFM1110组	13.2±1.4*
		卷曲乳杆菌Lcr-MH17组	10.4±1.5
卷曲乳杆菌ZH17组	11.7±1.2
		阳性对照组	24±2.2
空白对照组	0±0

注释：#为与空白对照组相比，P<0.05；*为与阳性对照组相比，P<0.05。

由上表可知，本发明卷曲乳杆菌LCP051的无细胞上清液对白色念珠菌的抑菌圈直径最大，对白色念珠菌的抑制效果最好。

实施例6

1、对白色念珠菌细胞膜去极化作用测定

取对数生长期白色念珠菌菌液(10⁵cfu/mL)200μL，离心，收集菌体，磷酸盐缓冲液洗涤后，重悬菌液至吸光度(A)值为0.05。分别加入实施例5中各组试验菌液100μL(10⁸cfu/mL)，以MRS液体培养基液作为空白对照组，抗真菌药物克霉唑溶液(10μg/mL)作为阳性对照组，28℃处理60min后向每组中加入终浓度为0.4μmol/L的DiSC3(5)(购自美国AATBioquest Inc公司)，室温振荡避光孵育20min，取2mL细菌悬浮液于石英比色皿中，利用荧光分光光度计，在激发波长为622nm、发射波长为670nm条件下测定荧光强度。实验重复3次。

结果见图3。注释：#为与空白对照组相比，P<0.05；*为与阳性对照组相比，P<0.05。由图可知，与空白对照组比较，阳性对照抗真菌药物克霉唑对细胞膜去极化作用显著增强，本发明卷曲乳杆菌LCP051和专利菌卷曲乳杆菌CCFM1110对细胞膜的去极化明显增强，且本发明卷曲乳杆菌LCP051的效果更佳。

本发明卷曲乳杆菌LCP051及其代谢产物的抗菌机制可能诱导白色念珠菌胞内活性氧(ROS)积聚、线粒体膜电位去极化，进而引起白色念珠菌线粒体氧化损伤，而线粒体氧化损伤可能与白色念珠菌细胞的凋亡与坏死相关，导致白色念珠菌细胞膜的去极化，从而起到抗真菌作用。

2、对感染白色念珠菌的WTRL1细胞中IL-1β、IL-6及TNF-α水平的影响

取对数生长期白色念珠菌菌液(10⁵cfu/mL)200μL，离心，收集菌体，磷酸盐缓冲液洗涤后，重悬菌液至吸光度(A)值为0.05。在WTRL1细胞(购于美国菌种保藏中心(ATCC)细胞库)中加入含10％胎牛血清的RPMI1640培养基(购于武汉普诺赛生命科技有限公司)，置于含5％CO₂的37℃培养箱中培养。取对数生长期WTRL1细胞，在96孔板内加入密度为10⁵个/mL的WTRL1细胞，每孔100μL，细胞贴壁后，空白对照组加入100μL 0.9％的生理盐水，其他组均加入100μL白色念珠菌菌液。然后，每孔加入实施例5中各组试验菌液100μL(10⁸cfu/mL)溶液100μL。以MRS液体培养基液作为模型组，抗真菌药物克霉唑溶液(10μg/mL)作为阳性对照组。5％CO₂细胞培养箱36℃培养180min后，裂解液裂解细胞，按酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒步骤，于酶标仪420nm处测定A值，计算白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(IL-1β、IL-6、TNF-α的ELISA试剂盒均购自武汉华美生物工程有限公司)。实验重复3次，结果见表3。

表3

注释：#为与空白对照组相比，P<0.05；*为与模型组相比，P<0.05。

由上表可知，本发明卷曲乳杆菌LCP051和专利菌卷曲乳杆菌CCFM1110均能明显降低WTRL1细胞IL-1β、IL-6、TNF-α的水平，且本发明卷曲乳杆菌LCP051的效果更佳。

白色念珠菌感染可导致机体炎性反应，IL-1β、IL-6及TNF-α水平能够反映机体的炎性程度。克霉唑可降低患者真菌性外耳道炎的血清中IL-1β、IL-6及TNF-α水平。本发明中，卷曲乳杆菌LCP051能降低感染了白色念珠菌的SD大鼠WTRL1细胞中IL-1β、IL-6及TNF-α水平。

实施例7对小鼠白色念珠菌感染的治疗作用

试验分组昆明种雌性小鼠60只，7周龄，体质量(24±2)g，每组6只，按体重、性别随机分为8组。即空白组、模型组、阳性对照药氟康唑组(80mg·kg^-1·d^-1)、卷曲乳杆菌LCP051组(80mg·kg^-1·d^-1)、卷曲乳杆菌CCFM1110组(80mg·kg-1·d-1，10⁸cfu/g)、卷曲乳杆菌Lcr-MH17组(80mg·kg^-1·d^-1，10⁸cfu/g)、卷曲乳杆菌ZH17组(80mg·kg^-1·d^-1，10⁸cfu/g)、实施例4组(80mg·kg^-1·d^-1，卷曲乳杆菌LCP051粉与壳聚糖按照质量比为5:7混合均匀，卷曲乳杆菌LCP051粉的含菌量为10⁸cfu/g)。

动物模型的建立：小鼠腹腔内注射雌激素，建立动情期。将各组试验用菌接种至小鼠阴道内，空白组、模型组用等量生理盐水替代，阳性对照药组用加入氟康唑。接种后第3天，除了空白组外其他组小鼠均接种5×10⁵孢子/mL的白色念珠菌菌悬液50μL，连续接种2天。引颈脱臼处死小鼠，无菌解剖出完整阴道内壁，用0.1mL无菌生理盐水冲洗，混匀后定量取冲洗液接种于沙堡氏(4％)葡萄糖琼脂培养基，37℃培养72h，计算白色念珠菌的菌落数。

结果见表4。

表4

组别	白色念珠菌的菌落数(log cfu/mL)
		卷曲乳杆菌LCP051组	0.62±0.24*
卷曲乳杆菌CCFM1110组	0.97±0.58
		卷曲乳杆菌Lcr-MH17组	1.23±0.52
卷曲乳杆菌ZH17组	1.14±0.49
		实施例4组	0.59±0.27*
阳性对照药氟康唑组	0.73±0.48*
		空白组	0.25±0.13
模型组	2.76±0.82#

注释：#为与空白对照组相比，P<0.05；*为与模型组相比，P<0.05。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.拮抗白色念珠菌的卷曲乳杆菌LCP051，其特征在于，所述卷曲乳杆菌LCP051分类命名为卷曲乳杆菌Lactobacillus crispatus，保藏编号为CGMCC NO.25132，保藏日期为2022年6月20日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。

2.如权利要求1所述卷曲乳杆菌LCP051在制备抑制白色念珠菌生长的产品中的应用。

3.如权利要求1所述卷曲乳杆菌LCP051在制备防治阴道炎的抗真菌剂中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述真菌为白色念珠菌。

5.一种用于预防和/或治疗念珠菌阴道炎的产品，其特征在于，所述产品含有权利要求1所述卷曲乳杆菌LCP051和/或权利要求1所述卷曲乳杆菌LCP051的代谢产物。

6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述产品为药品或卫生用品。

7.根据权利要求6所述的产品，其特征在于，所述卫生用品包括消毒纸巾、消毒湿巾、卫生巾或卫生棉条。

8.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述产品包含：

权利要求1所述卷曲乳杆菌LCP051以及药学上可接受的载体；

或者，权利要求1所述卷曲乳杆菌LCP051的代谢产品以及药学上可接受的载体；

或者，权利要求1所述卷曲乳杆菌LCP051和权利要求1所述卷曲乳杆菌LCP051的代谢产品以及药学上可接受的载体。

9.一种制备用于预防和/或治疗念珠菌阴道炎的产品的方法，其特征在于，使用权利要求1所述卷曲乳杆菌LCP051和/或权利要求1所述卷曲乳杆菌LCP051的代谢产物。

10.如权利要求1所述卷曲乳杆菌LCP051与壳聚糖联合用于制备治疗阴道炎的药物中的应用。

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