CN115399338A - 贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis Bv-6在防虫中的应用 - Google Patents

贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis Bv-6在防虫中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物防治技术领域，具体涉及贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis Bv‑6在防虫中的应用。本发明的技术方案是贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis Bv‑6在防虫中的应用，Bv‑6的保藏号为CCTCCNO:M 20191106。本发明验证了贝莱斯芽孢杆菌Bv‑6对诸多的害虫均有防治效果，为蚜虫、柑橘木虱、烟粉虱或/和螨虫的防治提供了新选择。

Description

贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis Bv-6在防虫中的应用
技术领域
本发明属于生物防治技术领域，具体涉及贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensisBv-6在防虫中的应用。
背景技术
贝莱斯芽孢杆菌可以通过直接和间接两种不同的方式对植物的生长和发育产生影响。一方面，通过直接促进植物生长通常需要为植物提供一种由细菌合成的化合物或促进从环境中吸收营养，例如它们可以固定大气中的氮和提供磷等矿物质为植物提供营养物质；合成调控植物生长发育的酶；合成可以为植物生长提供铁的铁载体；合成多种植物激素—包括生长素和细胞分裂素；释放挥发性化合物等(Brown,1974；Davison,1988；Lambertand Joos,1989；Patten and Glick,1996)。另一方面，贝莱斯芽孢杆菌可以通过一种或多种机制减少或防止植物病原微生物的某些有害影响时，就会间接促进植物生长(Glick,1999)。
农作物正在遭受多种病害，虫害，螨害的威胁，每年造成巨大的损失，这其中包括灰霉病，菌核病，蚜虫，烟粉虱，螨虫等等。目前，针对农作物的这些病虫螨害主要以化学防治为主，但由于病原菌及蚜虫对传统的农药产生了不同程度的抗药性，其对农药抗性发展的高风险，造成防治效果降低、增加了防治的难度，同时长期使用农药会导致病虫害出现抗药性、农药残留、破坏土壤生态平衡、环境污染等问题(Biurrun et al.,2010；刘等，2014)。随着农业和环境的可持续发展，食品安全、环境保护以及农产品质量越来越受到人们的重视，研发生物农药是社会发展必然的需求(Wu et al.,2009；Zhang et al.,2008)。有益微生物作为生物农药在农业中的应用随着时间的推移越来越得到重视。
各种研究分析了芽孢杆菌对农业病虫螨害的功效，例如苏云金芽孢杆菌对鳞翅目和鞘翅目等咀嚼害虫均具有一定的控制作用(Bravo et al.,2007；Sanahuja et al.,2011)。贝莱斯芽孢杆菌能诱导植物对病原菌和真菌产生系统抗性，使植物体内过氧化氢大量积累、细胞死亡和叶片中胼胝质沉淀，有效的控制各类病原菌及蚜虫在植物上的生长(Rashid et al.,2019)。然而，很少有已发表的研究检测了芽孢杆菌属对蚜虫、柑橘木虱、烟粉虱、螨虫等吸食性害虫的杀虫活性。因此，研究这些微生物作为蚜虫、柑橘木虱、烟粉虱、螨虫等吸食性害虫生物防治剂的潜力是有价值的，并有助于发展农业中的环境友好方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题是为生物防虫提供一种新选择。
本发明的技术方案是贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis Bv-6在防虫中的应用，Bv-6的保藏号为CCTCC NO:M 20191106。
进一步的，所述防虫为防治吸食性害虫。
具体的，所述吸食性害虫为蚜虫、柑橘木虱(Diaphorina citri)、烟粉虱(Bemisiatabaci)或/和螨虫。
其中，所述蚜虫为绿桃蚜(Myzus persicae)、禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padi)、麦长管蚜(Sitobion avenae)、瓜蚜(Aphis gossypii)、豌豆修尾蚜(Megoura japonica)、桃粉蚜(Hyalopterus arundimis)或月季长管蚜(Macrosiphum rosirvorum)。
其中，所述螨虫为柑橘全爪螨(Panonychus citri)或二斑叶螨(Tetranychusurticae)。
本发明还提供一种防虫制剂，其主要成分为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6的发酵液或可湿性粉剂，所述贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis Bv-6的保藏号为CCTCC NO:M20191106。
进一步的，所述可湿性粉剂的浓度为1×1011cfu/g。
本发明所使用的贝莱斯芽孢杆菌具体为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Bv-6菌株，该菌株已于2019年12月25日保存于中国典型培养物保藏中心(地址为：中国武汉武汉大学)，保藏编号为：CCTCC No:M20191106。
本发明的有益效果：本发明公开贝莱斯芽孢杆菌Bv-6对诸多的害虫均有防治效果。具体的，贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂500倍液对禾谷缢管蚜(Rhopalosiphumpadi)，麦长管蚜Sitobion avenae)、绿桃蚜(Myzus persicae)、豌豆修尾蚜(Megourajaponica)、黄瓜瓜蚜(Aphis gossypii)、西瓜瓜蚜(Aphis gossypii)、桃粉蚜(Hyalopterus arundimis)、月季长管蚜(Macrosiphum rosirvorum)分别具有100％，100％，98.67％，100％，98.17％，96.42％，97.3％，96.02％的防治效果；贝莱斯芽孢杆菌Bv-6发酵液对螨类柑橘红蜘蛛(柑橘全爪螨Panonychus citri)具有92.9％的防治效果，Bv-6可湿性粉剂500倍液对螨类柚子红蜘蛛(柑橘全爪螨Panonychus citri)和草莓红蜘蛛(二斑叶螨Tetranychus urticae)的24h防治效果分别为85.2％，90.71％。Bv-6可湿性粉剂500倍液和100倍液对柑橘木虱(Diaphorina citri)的24h防治效果分别为93.27％，96.77％。Bv-6可湿性粉剂500倍液对烟粉虱(Bemisia tabaci)的24h防治效果为85.86％。本发明为害虫的生物防治提供了一种新选择。
附图说明
图1为不同芽孢杆菌对绿桃蚜的防治效果。从左至右依次为贝莱斯芽孢杆菌菌株(Bacillus velezensis)Bv-6，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bs-1，贝莱斯芽孢杆菌菌株(Bacillus velezensis)Bv-12，贝莱斯芽孢杆菌菌株(Bacillus velezensis)Bv-10，副炭疽芽胞杆菌(Bacillus paranthracis)Bp1，拟蕈状芽胞杆菌(Bacillusparamycoides)Bp3，拟蕈状芽胞杆菌(Bacillus paramycoides)Bp9，拟蕈状芽胞杆菌(Bacillus paramycoides)Bp2，LB培养基，红色箭头所标为死亡蚜虫(经过Bv-6发酵液处理的绿桃蚜大多数都变黑皱缩死亡)。
图2为不同芽孢杆菌对禾谷缢管蚜的防治效果。从左至右依次为LB培养基，贝莱斯芽孢杆菌菌株(Bacillus velezensis)Bv-6，贝莱斯芽孢杆菌菌株(Bacillus velezensis)Bv-10，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bs-1，贝莱斯芽孢杆菌菌株(Bacillusvelezensis)Bv-12，副炭疽芽胞杆菌(Bacillus paranthracis)Bp1，红色箭头所标为死亡蚜虫(经过Bv-6发酵液处理的禾谷缢管蚜全部都变黑皱缩死亡)。
图3为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂不同浓度稀释液对禾谷缢管蚜的防治效果。其中CK为喷施清水后蚜虫形态(体色为酒红色，均未发生死亡现象)，经过Bv-6可湿性粉剂喷施过后的禾谷缢管蚜变黑皱缩死亡。
图4为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂500倍液对田间小麦蚜虫(禾谷缢管蚜和麦长管蚜)的防治效果(2d和7d)。其中CK为喷施清水后的蚜虫形态(蚜虫数量多，只有极少数发生死亡现象)，经过Bv-6粉剂500倍液喷施处理的活体小麦蚜虫很少，大多数蚜虫死亡变黑皱缩后脱落。
图5为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂500倍液对豌豆修尾蚜的防治效果(48h)。其中CK为喷施清水后豌豆修尾蚜形态(体色为深绿色，均未发生死亡现象)，经过Bv-6粉剂500倍液喷施过后的豌豆修尾蚜全部变黑皱缩死亡，并从植株脱落。
图6为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂500倍液对油菜油菜的防治效果(24h)。其中CK为喷施清水后蚜虫形态(体色为深绿色，均未发生死亡现象)，经过Bv-6粉剂500倍液喷施过后的油菜蚜虫皱缩死亡，并从叶片上脱落。
图7为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂500倍液对黄瓜瓜蚜的防治效果(48h)。喷施清水对照的黄瓜叶片正面及背面蚜虫数量均未减少且黄瓜叶片经蚜虫危害出现萎蔫现象，经过Bv-6粉剂500倍液喷施后的黄瓜叶片正背面蚜虫数量显著减少，蚜虫虫体变黑死亡，大多数从叶片脱落，叶片未发生萎蔫现象。
图8为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂500倍液对西瓜瓜蚜的防治效果。其中CK为喷施清水后蚜虫形态(体色为深绿色或黄绿色，均未发生死亡现象)，经过Bv-6粉剂500倍液喷施过后的西瓜瓜蚜大部分都变黑皱缩死亡。
图9为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂500倍液对桃树桃粉蚜的防治效果。其中CK为喷施清水后蚜虫形态(体色为绿色，均未发生死亡现象)，经过Bv-6粉剂500倍液喷施过后的桃粉蚜大部分都变成黑褐色皱缩死亡。
图10为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂500倍液对月季长管蚜的防治效果。其中CK为喷施清水后蚜虫形态(体色为绿色，均未发生死亡现象)，经过Bv-6粉剂500倍液喷施过后的月季长管蚜大部分都变成黑褐色皱缩死亡。
图11为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6发酵液对柑橘全爪螨防治效果。经过Bv-6发酵液处理后的柑橘全爪螨虫体死亡并皱缩，经过LB培养基处理的柑橘全爪螨并未出现死亡现象。
图12为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6对草莓二斑叶螨防治效果。经过Bv-6可湿性粉剂喷施过的二斑叶螨虫体皱缩死亡，对照(清水)处理的二斑叶螨虫体正常并未出现死亡现象。
图13为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6对柑橘木虱的防治效果。经过Bv-6可湿性粉剂喷施过的柑橘木虱虫体干瘪死亡，大多数从叶片脱落，对照(清水)处理图中的白色物质是柑橘木虱的排泄物。
图14为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6对棉花烟粉虱的防治效果。经过Bv-6可湿性粉剂喷施过的烟粉虱死亡，对照(清水)处理的烟粉虱正常并未出现死亡现象。
具体实施方式
本发明所述的贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)Bv-6，保藏编号为CCTCC NO:M20191106，已在CN 111254086A中公开，本发明使用的贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂制备方法同该申请，制备得到的贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂浓度为1×1011cfu/g。
发酵液制备：
将-80℃甘油中保存的贝莱斯芽抱杆菌Bv-6划线接种于固体NA培养基上，在温度为30℃恒温箱中培养24h，然后挑取单菌落接种于100mL的液体NB培养基中，在30℃、180rpm条件下振荡培养24h，作为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6的10L发酵罐种子液。
发酵培养基配方为牛肉浸膏3g/L、大豆蛋白胨5g/L、葡萄糖20g/L、pH＝7。
将上述发酵培养基6升在10L发酵罐中121℃下高压蒸汽灭菌0.5h，灭菌后降温至40℃立即接种1×107cfu/mL浓度的贝莱斯芽孢杆菌种子液300mL(5％接种量)，培养温度30℃、转速300r/min、气压0.05MPa、通气量0.4(V/V·min)，培养72h，得到贝莱斯芽孢杆菌Bv-6菌株发酵液，该发酵液的有效菌浓度是1×1010cfu/mL。
可湿性粉剂的制备：
上述得到的贝莱斯芽孢杆菌Bv-6的发酵液中，以1L发酵液加入100g可湿性淀粉，搅拌均匀，经过喷雾干燥机喷雾干燥得到母粉。
喷雾干燥指标：进风温度180℃，出风温度65℃，进泵速度3000mL/h左右(实时调节)。
将收集得到的母粉按照以下配方比例进行配制：母粉10g，丁基萘磺酸钠5g，木质素磺酸钙5g，高岭土80g，混匀即得可湿性粉剂。
将上述可湿性粉剂样品，用无菌水稀释配至106-1010倍，取其0.1mL均匀涂布在NA平板上，于28℃培养。48h后，观察并记录单菌落数量，重复3次。经检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂浓度为1×1011cfu/g，本发明或简称该可湿性粉剂为粉剂。
下述实施例中贝莱斯芽孢杆菌Bv-6发酵液的制备方法为：在-80度冰箱中取出实验室保存的Bv-6菌株，将Bv-6划线于LB固体平板上活化(28度，24小时)，挑取活化好的Bv-6单菌落挑取到装有100mL pH为7的LB液体培养基的250mL锥形瓶中，28℃，180rpm摇培48h获得BV-6种子液，按5％接种量将种子液转接到盛有250mL pH为7的LB液体培养基的500mL锥形瓶中，在温度28℃，180rpm发酵48h得到Bv-6摇培发酵液。
实施例1不同芽孢杆菌菌株发酵液对绿桃蚜和禾谷缢管蚜的防效试验
绿桃蚜(Myzus persicae)：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bs-1、副炭疽芽胞杆菌(Bacillus paranthracis)Bp-1、拟蕈状芽孢杆菌(Bacillus paramycoides)菌株Bp-2、菌株Bp-3、菌株Bp-9、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株Bv-10和Bv-12，与贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株Bv-6做绿桃蚜防效对比试验。分别将这八种芽孢杆菌用LB培养基摇配得到发酵液后，分别将各种菌株的发酵液稀释至OD值为0.6，检测不同菌株发酵液对绿桃蚜的触杀活性，对照采用LB培养基处理。每种芽孢杆菌发酵液喷施10mL到含有绿桃蚜(30只)的油菜叶片上，每种芽孢杆菌三个重复，48小时后统计绿桃蚜的死亡率，计算防治效果。
防治效果(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)×100％
防治效果如下：贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv-6(97.44％)>贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv-12(41.2％)>枯草芽孢杆菌Bs-1(27.41％)>贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv-10(7.41％)>副炭疽芽胞杆菌Bp1(4.67％)>拟蕈状芽胞杆菌Bp2(4.32％)>拟蕈状芽胞杆菌Bp3(1.32％)>拟蕈状芽胞杆菌Bp9(1.23％)(图1)。
禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padi)：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bs-1、副炭疽芽胞杆菌(Bacillus paranthracis)Bp-1、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株Bv-10和Bv-12，与贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)菌株Bv-6做绿桃蚜防效对比试验。分别将这五种芽孢杆菌用LB培养基摇配得到发酵液后，分别将各种菌株的发酵液稀释至OD值为0.6，检测不同菌株发酵液对禾谷缢管蚜的触杀活性，对照采用LB培养基处理。每种芽孢杆菌发酵液喷施10mL到含有禾谷缢管蚜(30只)的小麦叶片上，每种芽孢杆菌三个重复，24小时后统计禾谷缢管蚜的死亡率，计算防治效果。
防治效果(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)×100％
防治效果如下：贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv-6(100％)>枯草芽孢杆菌Bs-1(69.9％)>贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv-10(46.87％)>贝莱斯芽孢杆菌菌株Bv-12(34.5％)>副炭疽芽胞杆菌Bp1(0％)(图2)。
实施例2贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂对小麦蚜虫、蚕豆蚜虫、油菜蚜虫、黄瓜蚜虫、西瓜瓜蚜、桃树桃粉蚜和月季长管蚜的防效试验
室内不同浓度Bv-6可湿性粉剂对禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padi)的防效：采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)的不同浓度稀释液对禾谷缢管蚜的防效，称取1g Bv-6可湿性粉剂，用1000mL清水稀释，配置成粉剂1000倍液。然后再用清水分别稀释成粉剂2000倍液、4000倍液、6000倍液、8000倍液和10000倍液。取两周龄的小麦幼苗，每盆小麦幼苗接种500只三龄禾谷缢管蚜(每盆50株小麦幼苗)，将不同浓度的贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂稀释液和清水分别喷施含有禾谷缢管蚜的小麦幼苗(5mL/盆)，每个处理重复三盆小麦。24小时后统计禾谷缢管蚜的死亡率，计算防治效果。
防治效果(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)×100％
防治效果如下：Bv-6粉剂1000倍液(100％)>Bv-6粉剂2000倍液(100％)>Bv-6粉剂4000倍液(96.07％)>Bv-6粉剂6000倍液(91.4％)>Bv-6粉剂8000倍液(52.27％)>Bv-6粉剂10000倍液(12.27％)(图3)。
田间防治小麦蚜虫(禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padi)和麦长管蚜(Sitobionavenae))：采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)500倍液对小麦蚜虫(禾谷缢管蚜和麦长管蚜)的防效，称取10g Bv-6可湿性粉剂，用5L清水稀释，配置成粉剂500倍液。于2022年4月在华中农业大学校内试验基地选取两块小麦蚜虫(禾谷缢管蚜和麦长管蚜)发生严重程度一致的小麦地(长×宽，7.6m×0.75m)，其中对照组总计1652株麦穗，处理组总计1756株麦穗。试验分为两个处理，处理一：Bv-6粉剂500倍液(5L)均匀喷施处理组小麦麦穗，麦叶及茎秆；处理二：清水(5L)均匀喷施对照组的小麦麦穗，麦叶及茎秆。分别于2d和7d后统计禾谷缢管蚜的死亡率，计算防治效果。
防治效果(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)×100％
Bv-6粉剂500倍液对小麦蚜虫的2d和7d的防治效果分别为97％和99％(图4)。
豌豆修尾蚜(Megoura japonica)：采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)500倍液对蚕豆蚜虫(豌豆修尾蚜Megoura japonica)的防效，称取1g Bv-6可湿性粉剂，用500mL清水稀释，配置成粉剂500倍液。于2022年4月在武汉市农业科学院蔬菜研究所基地选取豌豆修尾蚜发生严重的蚕豆植株进行防治试验，处理组对每株蚕豆喷施Bv-6粉剂500倍液20mL，对照组每株蚕豆喷施清水20mL，每个处理各三个重复。喷施前调查每株蚕豆上豌豆修尾蚜的虫口基数，喷药48小时后统计各处理每株蚕豆上蚜虫的死亡率，计算防治效果。
防治效果(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)×100％
48小时后经过Bv-6粉剂500倍液喷施后的豌豆修尾蚜全部变黑死亡，防治效果达到100％(图5)。
油菜蚜虫绿桃蚜(Myzus persicae)：采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)的500倍液对油菜蚜虫的防效，称取1g Bv-6可湿性粉剂，用500mL清水稀释，配置成粉剂500倍液。于2022年7月在新疆石河子大学农学院校内基地油菜田进行，选取蚜虫危害严重的油菜植株。试验设Bv-6粉剂500倍液和清水对照，共2个处理。每个处理挑选3株蚜虫危害严重的油菜植株，施药前记录蚜虫数量，并做标记。采用手动喷雾器对油菜叶片正反面均匀喷施，至叶片有少量药液下滴为止。喷药24h后调查各个叶片上蚜虫的活虫数，计算虫口减退率和防治效果。
虫口减退率＝(施药前虫数-施药后虫数)/施药前虫数*100％
防治效果(％)＝(处理组虫口减退率-对照组虫口减退率)/(1-对照组虫口减退率)×100％
Bv-6可湿性粉剂500倍液对油菜蚜虫的24h防治效果为98.67％(图6)。
黄瓜瓜蚜(Aphis gossypii)：采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)的500倍液对黄瓜瓜蚜(Aphis gossypii)的防效，称取10g Bv-6可湿性粉剂，用5L清水稀释，配置成粉剂500倍液。于2022年5月在武汉市农业科学院蔬菜研究所基地进行，选取大棚内瓜蚜发生严重的黄瓜植株，试验设Bv-6可湿性粉剂500倍液、70％吡虫啉水分散剂5000倍液和清水对照，共3个处理。每个处理3次重复。施药前记录黄瓜叶片蚜虫数量，采用手动喷雾器对黄瓜叶片正反面均匀喷施，至叶片有少量药液下滴为止。喷药48h后调查各个叶片上蚜虫的活虫数，计算虫口减退率和防治效果。
防治效果(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)×100％
Bv-6可湿性粉剂500倍液对黄瓜蚜虫的48h防治效果为98.17％，70％吡虫啉水分散剂5000倍液对黄瓜蚜虫的48h防治效果为99.37％(图7)。
西瓜瓜蚜(Aphis gossypii)：采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)的500倍液对西瓜瓜蚜(Aphis gossypii)的防效，称取10g Bv-6可湿性粉剂，用5L清水稀释，配置成粉剂500倍液。于2022年5月在华中农业大学校内园艺基进行，选取蚜虫危害的西瓜植株。试验设Bv-6可湿性粉剂500倍液、10％啶虫脒乳油5000倍液和清水对照，共3个处理，每个处理3次重复。每个处理挑选3株蚜虫危害严重的西瓜植株，施药前记录蚜虫数量，并做标记。采用手动喷雾器对西瓜叶片正反面均匀喷施，至叶片有少量药液下滴为止。喷药24h和48h后调查各个叶片上蚜虫的活虫数，计算虫口减退率和防治效果。
虫口减退率＝(施药前虫数-施药后虫数)/施药前虫数×100％
防治效果(％)＝(处理组虫口减退率-对照组虫口减退率)/(1-对照组虫口减退率)×100％
Bv-6可湿性粉剂500倍液对西瓜瓜蚜的24h、48h的防治效果分别为95.01％和96.42％；10％啶虫脒乳油5000倍液对西瓜瓜蚜的24h、48h的防治效果分别为68.61％和79.11％(图8)。
桃树桃粉蚜(Hyalopterus arundimis)：采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)的500倍液对桃树桃粉蚜的防效，称取5g Bv-6可湿性粉剂，用2500mL清水稀释，配置成粉剂500倍液。于2022年5月在华中农业大学校内桃园基地进行，选取蚜虫危害的桃树植株。试验设Bv-6可湿性粉剂500倍液、10％啶虫脒乳油5000倍液和清水对照，共3个处理，每个处理3次重复。在桃树的东、南、西、北、中5个方位选定桃粉蚜危害枝条，施药前记录桃粉蚜数量，并做标记。采用背负式电动喷雾器对整棵桃树叶片正反面均匀喷雾，使枝条树叶充分接触药液，至叶片有少量药液下滴为止。喷药24h后调查各个处理嫩梢上桃粉蚜的活虫数，统计各处理桃粉蚜存活虫总数，并计算虫口减退率和防治效果。
虫口减退率＝(施药前虫数-施药后虫数)/施药前虫数×100％
防治效果(％)＝(处理组虫口减退率-对照组虫口减退率)/(1-对照组虫口减退率)×100％
Bv-6可湿性粉剂500倍液对桃粉蚜的24h防治效果为97.3％，10％啶虫脒乳油5000倍液对桃粉蚜的24h防治效果为97.4％(图9)。
月季长管蚜(Macrosiphum rosirvorum)：采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)的500倍液对月季长管蚜(Macrosiphum rosirvorum)的防效，称取1g Bv-6可湿性粉剂，用500mL清水稀释，配置成粉剂500倍液。于2022年5月在华中农业大学校内桃园基地进行，选取蚜虫危害的月季植株。试验设Bv-6可湿性粉剂500倍液、10％啶虫脒乳油5000倍液和清水对照，共3个处理，每个处理选取3个月季枝条。施药前每个枝条统计5片叶片的蚜虫数量，并做标记。采用手动喷雾器对月季枝条喷雾，叶片正反面均匀喷施，使枝条树叶充分接触药液，至叶片有少量药液下滴为止。喷药24h后调查各个处理叶片上月季长管蚜的活虫数，统计各处理月季长管蚜存活虫总数，并计算虫口减退率和防治效果。
虫口减退率＝(施药前虫数-施药后虫数)/施药前虫数×100％
防治效果(％)＝(处理组虫口减退率-对照组虫口减退率)/(1-对照组虫口减退率)×100％
Bv-6可湿性粉剂500倍液对月季长管蚜的24h防治效果为96.02％，10％啶虫脒乳油5000倍液对桃粉蚜的24h防治效果为98.04％(图10)。
实施例4贝莱斯芽孢杆菌Bv-6对作物螨害的防效试验
贝莱斯芽孢杆菌Bv-6发酵液对柑橘全爪螨(Panonychus citri)的防效：检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6的LB摇培发酵液对柑橘全爪螨的触杀活性，对照采用LB液体培养基处理。Bv-6发酵液喷施10mL到含有柑橘全爪螨的柑橘叶片上，叶片正反面都喷，每个试验每个处理三个重复，48小时后用放大镜检查结果。用毛笔轻轻触碰螨虫，以螨足不动者为死亡。统计柑橘全爪螨的死亡率，计算防治效果。
防治效果(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)×100％
48小时后BV-6发酵液对柑橘全爪螨防治效果为92.9％(图11)。
贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂对柑橘全爪螨(Panonychus citri)的防效：采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)的500倍液对柑橘全爪螨的防效，称取20g Bv-6可湿性粉剂，用10L清水稀释，配置成粉剂500倍液。于2022年5月在华中农业大学校内基地柑橘园进行，选取柑橘全爪螨危害的柚子树。试验设Bv-6粉剂500倍液和清水对照两个处理。每个处理3次重复，随机区组排列，每个小区施药2株柚子树。在柚子树的东、南、西、北、中5个方位选定柑橘全爪螨危害嫩梢，施药前记录柑橘全爪螨数量，并做标记。采用手动喷雾器对树冠嫩梢喷雾，叶片正反面均匀喷施，使嫩叶嫩梢充分接触药液，至叶片有少量药液下滴为止。喷药后1d、2d和5d用放大镜检查各个处理叶片上柑橘全爪螨的活螨数，用毛笔轻轻触碰螨虫，以螨足不动者为死亡。第一次喷药5d后，再进行第二次喷药，第二次喷药后1d、2d、5d和7d后调查统计活螨数，计算活螨减退率和防治效果。
活螨减退率＝(施药前活螨数-施药后活螨数)/施药前活螨数×100％
防治效果(％)＝(处理组活螨减退率-对照组活螨减退率)/(1-对照组活螨减退率)×100％
Bv-6可湿性粉剂500倍液对柑橘全爪螨第一次喷施后1d、2d和5d的防治效果分别为87.20％，90.80％和88.87％，第二次喷施后1d、2d、5d和7d的防治效果分别为94.59％，96.41％，95.56％和97.01％，(表1)。
表1 Bv-6可湿性粉剂500倍液对柑橘全爪螨的防效
时间 活螨减退率％ 防效％
第一次药后1d 87.20±6.26 85.09±6.02
第一次药后2d 90.80±5.86 84.37±16.32
第一次药后5d 88.87±7.54 86.55±11.77
第二次药后1d 96.28±1.83 94.59±3.71
第二次药后2d 97.25±0.88 96.41±1.60
第二次药后5d 96.22±0.94 95.56±0.98
第二次药后7d 97.37±2.21 97.01±2.38
贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂对二斑叶螨(Tetranychus urticae)的防效：采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)的500倍液对草莓叶螨(二斑叶螨)的防效，称取1g Bv-6可湿性粉剂，用500mL清水稀释，配置成粉剂500倍液。试验设Bv-6粉剂500倍液、10.5％阿维·哒螨灵乳油1000倍液、以及清水对照，共3个处理，每个处理3次重复。施药前每个草莓枝条统计3片叶片的二斑螨虫数量，并做标记。采用手动喷雾器对草莓叶片喷雾，叶片正反面均匀喷施，使叶片充分接触药液，至叶片有少量药液下滴为止。喷药24h和48h后用放大镜检查各个处理叶片上二斑叶螨的活螨数，用毛笔轻轻触碰螨虫，以螨足不动者为死亡。计算活螨减退率和防治效果。
活螨减退率＝(施药前活螨数-施药后活螨数)/施药前活螨数×100％
防治效果(％)＝(处理组活螨减退率-对照组活螨减退率)/(1-对照组活螨减退率)×100％
Bv-6可湿性粉剂500倍液对二斑叶螨的24h和48h防治效果分别为90.71％，93.4％(图12、表2)。
表2 Bv-6可湿性粉剂对二斑叶螨的防效
处理 药后24h防效(％) 药后48h防效(％)
Bv-6可湿性粉剂500倍液 90.71±4.63 93.4±5.6
10.5％阿维·哒螨灵乳油1000倍液 87.37±7.66 89.09±8.75
实施例5贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂对柑橘木虱(Diaphorina citri)的防效试验
采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)的500倍液和100倍液对柑橘木虱的防效，分别称取1g和5g Bv-6可湿性粉剂，用500mL清水稀释，配置成粉剂500倍液和100倍液。于2022年8月在广东省农业科学院白云基地柑橘园进行，选取柑橘木虱危害的柑橘植株。试验设Bv-6粉剂500倍液、Bv-6粉剂100倍液、甲维·虫螨腈1000倍液、以及清水对照，共4个处理。每个处理3次重复，随机区组排列，每个小区施药2株柑橘树。在柑橘树的东、南、西、北、中5个方位选定柑橘木虱危害嫩梢，施药前记录柑橘木虱成虫和若虫数量，并做标记。采用手动喷雾器对树冠嫩梢喷雾，叶片正反面均匀喷施，使嫩叶嫩梢充分接触药液，至叶片有少量药液下滴为止。喷药24h后调查各个处理嫩梢上柑橘木虱的活虫数，统计各处理柑橘木虱存活虫总数，并计算虫口减退率和防治效果。
虫口减退率＝(施药前虫数-施药后虫数)/施药前虫数×100％
防治效果(％)＝(处理组虫口减退率-对照组虫口减退率)/(1-对照组虫口减退率)×100％
Bv-6可湿性粉剂500倍液和100倍液对柑橘木虱的24h防治效果分别为93.27％，96.77％(图13、表3)。
表3 Bv-6可湿性粉剂对柑橘木虱若虫的田间防效
处理 药后24h防效(％)
Bv-6可湿性粉剂500倍液 93.27±2.85
Bv-6可湿性粉剂100倍液 96.77±2.45
甲维·虫螨腈1000倍液 61.47±20.59
实施例6贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂对烟粉虱(Bemisia tabaci)的防效试验
采用喷雾法检测贝莱斯芽孢杆菌Bv-6可湿性粉剂(1×1011cfu/g)的500倍液对烟粉虱的防效，称取1g Bv-6可湿性粉剂，用500mL清水稀释，配置成粉剂500倍液。于2022年9月在华中农业大学校内棉花实验田进行，选取烟粉虱危害严重的棉花植株。试验设Bv-6粉剂500倍液、22％氟啶虫胺腈1000倍液、以及清水对照，共3个处理。每个处理随机选取三株棉花植株，施药前记录棉花植株烟粉虱数量，并做标记。采用喷雾器对整株棉花叶片喷雾，叶片正反面均匀喷施，使棉叶正反两面充分接触药液，至叶片有少量药液下滴为止。喷药24h后调查各个处理棉花叶片活虫数，计算烟粉虱虫口减退率和防治效果。
虫口减退率＝(施药前虫数-施药后虫数)/施药前虫数×100％
防治效果(％)＝(处理组虫口减退率-对照组虫口减退率)/(1-对照组虫口减退率)×100％
Bv-6可湿性粉剂500倍液对棉花烟粉虱24h的防治效果为85.86％。(图14，表4)
表4 Bv-6可湿性粉剂对棉花烟粉虱的田间防效
处理 药后24h防效(％)
Bv-6可湿性粉剂500倍液 85.86±7.08
22％氟啶虫胺腈1000倍液 50.73±19.77

Claims (7)

1.贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis Bv-6在防虫中的应用，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis Bv-6的保藏号为CCTCC NO:M 20191106。
2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述防虫为防治吸食性害虫。
3.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述吸食性害虫为蚜虫、柑橘木虱(Diaphorinacitri)、烟粉虱(Bemisia tabaci)或/和螨虫。
4.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述蚜虫为绿桃蚜(Myzus persicae)、禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padi)、麦长管蚜(Sitobion avenae)、瓜蚜(Aphis gossypii)、豌豆修尾蚜(Megoura japonica)、桃粉蚜(Hyalopterus arundimis)或月季长管蚜(Macrosiphum rosirvorum)。
5.如权利要求3所述应用，其特征在于，其中，所述螨虫为柑橘全爪螨(Panonychuscitri)或二斑叶螨(Tetranychus urticae)。
6.一种防虫制剂，其特征在于，其主要成分为贝莱斯芽孢杆菌Bv-6的发酵液或可湿性粉剂，所述贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis Bv-6的保藏号为CCTCC NO:M 20191106。
7.如权利要求6所述防虫制剂，其特征在于，所述可湿性粉剂的浓度为1×1011cfu/g。
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