CN113088476B - 一种绿针假单胞菌橙黄亚种突变株及其应用 - Google Patents

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CN113088476B CN202110587548.0A CN202110587548A CN113088476B CN 113088476 B CN113088476 B CN 113088476B CN 202110587548 A CN202110587548 A CN 202110587548A CN 113088476 B CN113088476 B CN 113088476B
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    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Abstract

本发明涉及一种绿针假单胞菌橙黄亚种突变株及其应用，具体涉及一种绿针假单胞菌橙黄亚种2502，于2021年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.22022；绿针假单胞菌橙黄亚种2502在防治尖刀镰孢菌、疫霉菌、核盘菌、青枯假单胞菌、疮痂链霉菌、苹果小卷叶蛾、红蜘蛛引起病害中都有一定的防治效果。

Description

一种绿针假单胞菌橙黄亚种突变株及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种绿针假单胞菌橙黄亚种突变株及其应用。
背景技术
细菌性病害是细菌侵染植物引起的病害，由于长期连作、传播方式多样、防治药剂匮乏、容易反复发作，很难根治，是仅次于真菌的第二大病害。而细菌性土传病害是病害中危害最严重的的一类病害，传染性极强，连作、农业操作以及浇水等都会造成其传播，在我国多种作物上均有危害，条件适宜时，很容易造成病害大规模的蔓延，严重影响农作物的品质，造成大幅减产甚至是绝收，给农业生产带来巨大的经济损失。青枯病、马铃薯疮痂病则是最近几年发生非常普遍的细菌性土传病害，且呈现增长趋势，防治难度日益加大，已经成为生产中的突出问题，严重制约农业经济的发展。常用的化学杀菌剂种类不多，通常具有保护和治疗的作用，长期使用会破坏生态环境、危害人体健康、易产生抗药性。而目前用于防治细菌性病害的微生物菌剂种类很少，能够同时防治多种真菌、细菌病害和虫害的微生物菌剂种类更少，市场上的通用复合微生物菌剂则提高了经济成本。因此，研究及防控细菌性病害迫在眉睫，是微生物菌剂发展的主要方向，农业生产中迫切需要此类产品。
为获得杀菌谱更广、性能更突出的微生物菌株，需要对菌株进行不断的驯化、筛选，目前比较常用的方法有基因改造、诱变育种等方法。因此本实验室通过诱变育种的方式，以钴60为放射源，利用其产生的γ射线照射于绿针假单胞菌橙黄亚种，诱变后的菌株通过进一步筛选，结合多次传代培养,获得一株编号为2502的突变株，对细菌性病害青枯病、马铃薯疮痂病以及红蜘蛛均有较好的防治效果，进一步扩大了绿针假单胞菌橙黄亚种的生防谱。
中国专利文献CN109258695A(申请号：201811214677.X)公开了绿针假单胞菌在防治线虫中应用，该发明公开了绿针假单胞菌保藏编号为GDMCC No.60273在制备防治线虫的生物菌剂中的应用，但是并未涉及用于防治植物病害和其它多种虫害的作用。中国专利文献CN107099474A(申请号：201710333734.5)公开了一种具有广谱抗菌活性的绿针假单胞菌及其应用，该发明公开的绿针假单胞菌CCTCC NO：M 2016099，公开了该菌对苹果轮纹病、樱桃疫病、葡萄炭疽病、葡萄霜霉病、小麦纹枯病有生物防治的作用，也并未涉及用于防治植物细菌病害和虫害的应用。中国专利文献CN111705020A(申请号：2020106270974)我们公开了一种具有广谱杀虫、防治真菌病害的绿针假单胞菌橙黄亚种2501，该发明公开的绿针假单胞菌，对苹果小卷夜蛾、小麦管蓟马、蛴螬、草莓红中柱根腐病、草莓根腐病、向日葵菌核病、黄瓜根腐病、番茄灰霉病有防治效果，但未涉及对细菌性病害及红蜘蛛的应用。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种绿针假单胞菌橙黄亚种突变株及其应用。
本发明涉及的绿针假单胞菌橙黄亚种突变株对菌种绿针假单胞菌橙黄亚种2501(CN111705020A，申请号：2020106270974)进行突变获得的，本发明涉及的绿针假单胞菌橙黄亚种突变株既能有效防治棉花红蜘蛛，又能有效防治土传细菌性植物病害；还可以添加到肥料中制成具有防病和防虫害功能的肥料产品，本发明涉及的菌株对较难防除的细菌性病害以及红蜘蛛效果较好，减少了化学农药的使用，提高了农产品品质，同时保护了环境，有利于农业的持续健康发展。
本发明涉及的技术方案
一种绿针假单胞菌橙黄亚种(Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca)2502，于2021年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.22022。
绿针假单胞菌橙黄亚种(Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca)2502以下简称：绿针假单胞菌橙黄亚种2502。
绿针假单胞菌橙黄亚种2502的形态特征：在KMB培养基上菌落较小，呈圆形、扁平，菌落湿润，革兰氏染色呈阴性，培养初期产生绿色色素，培养后期产生橙黄色色素。
所述绿针假单胞菌橙黄亚种2502，是由山东五福生生态工程有限公司通过对菌种绿针假单胞菌橙黄亚种2501(CN111705020A，申请号：2020106270974)进行突变筛选获得。
上述绿针假单胞菌橙黄亚种2502的制备方法，包括如下步骤：
(1)将绿针假单胞菌橙黄亚种2502在KMB固体培养基上活化，培养温度为30±0.5℃，培养时间为36-48h，制得活化的菌种；
(2)将步骤(1)活化的菌种接种于KMB液体培养基，培养温度30±0.5℃，转速180-200rpm，培养时间20-24h，制得种子液；
(3)将步骤(2)制备的种子液接种至液体发酵培养基，培养温度30±0.5℃，转速150-180rpm，培养时间24-30h，得到绿针假单胞菌橙黄亚种2502。
根据本发明优选的，步骤(1)中的KMB固体培养基的组分如下：蛋白胨20g/L，甘油10ml/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁1.5g/L，琼脂20g/L，余量水，pH值7.2。
根据本发明优选的，步骤(2)中KMB液体培养基的组分如下：蛋白胨20g/L，甘油10ml/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁1.5g/L，余量水，pH值7.2。
根据本发明优选的，步骤(3)中液体发酵培养基的组分如下：玉米粉30g/L，豆饼粉30g/L,麸皮粉20g/L，磷酸氢二钾2g/L，磷酸二氢钾0.8g/L，硫酸镁0.75g/L，余量水，pH值7.2-7.4。
根据本发明优选的，步骤(3)中种子液接种量按体积分数计为5-10％。
上述绿针假单胞菌橙黄亚种2502在农作物种植中的应用。
根据本发明优选的，绿针假单胞菌橙黄亚种2502在番茄、马铃薯和/或棉花种植中的应用。
上述绿针假单胞菌橙黄亚种2502在防治农作物病虫害中的应用。
根据本发明优选的，绿针假单胞菌橙黄亚种2502在防治农作物病原真菌、病原细菌和/或虫害方面的应用。
进一步优选的，绿针假单胞菌橙黄亚种2502对尖刀镰孢菌、疫霉菌、核盘菌、青枯假单胞菌、疮痂链霉菌、苹果小卷叶蛾和/或红蜘蛛的防治应用。
进一步优选的，绿针假单胞菌橙黄亚种2502对青枯假单胞菌、疮痂链霉菌和/或红蜘蛛方面的防治应用。
更优选的，绿针假单胞菌橙黄亚种2502对番茄青枯病、马铃薯疮痂病和/或棉花红蜘蛛的防治应用。
本发明技术方案的有益效果
1、广谱性强
本发明涉及的绿针假单胞菌橙黄亚种2502，对尖刀镰孢菌、疫霉菌、核盘菌、青枯假单胞菌、疮痂链霉菌、苹果小卷叶蛾、红蜘蛛都有一定的防治效果，比如对棉花红蜘蛛有较好的防治效果，对青枯假单胞菌引起的番茄青枯病和疮痂链霉菌引起的马铃薯疮痂病有显著的防治效果。
2、细菌性病害效果好
本发明涉及的绿针假单胞菌橙黄亚种2502发酵液100倍以下稀释液对番茄青枯病和马铃薯疮痂病的防治效果均达80％以上。
3、安全环保
本发明涉及的绿针假单胞菌橙黄亚种2502是对菌种绿针假单胞菌橙黄亚种2501经60Co辐照诱变、筛选得到的，其分泌的杀菌、杀虫物质是小分子环肽类、脂肽类化合物，可在土壤中自然快速分解，对水体、土壤、大气都不会产生污染，也不会在作物中残留，与常规杀菌、杀虫剂相比安全、无污染、无残留、不易产生抗药性，符合绿色农业的发展要求。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围不局限于此。
生物材料的来源
绿针假单胞菌橙黄亚种(Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca)2502，于2021年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.22022。
下面将绿针假单胞菌橙黄亚种(Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca)2502简称为2502。
下面将绿针假单胞菌橙黄亚种(Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca)2501(CN111705020A，申请号：2020106270974)简称为2501。
尖刀镰孢菌：由山东省科学院提供，也可以在现有的菌种保藏中心购买同种菌替代。
疫霉菌：分离自临沂兰山区汪沟镇草莓地，也可以在现有的菌种保藏中心购买同种菌替代。
核盘菌：由新疆农科院提供，也可以在现有的菌种保藏中心购买同种菌替代。
青枯假单胞菌BNCC335855，以下简称“青枯假单胞菌”：购自北京北纳创联生物技术研究院。
酸疮痂链霉菌CGMCC 4.1789，以下简称“疮痂链霉菌”：由山东省科学院提供，也可以在现有的菌种保藏中心购买同种菌替代。
实验例
(一)通过对原始菌种2501进行钴60辐照诱变，诱变后，对突变菌株进行分离纯化，共分离出突变株155株。
将分离出的突变株进行发酵培养，具体方法如下：
(1)将2501及突变株分别在KMB固体培养基上活化，培养温度为30±0.5℃，培养时间为48h，制得活化的菌种；
(2)将步骤(1)活化的菌种分别接种于KMB液体培养基，培养温度30±0.5℃，转速180rpm，培养时间24h，制得种子液；
(3)将步骤(2)制备的种子液分别接种于液体发酵培养基，培养温度30±0.5℃，转速180rpm，培养时间30h，发酵结束后分别得到2501及突变株的发酵液。
步骤(1)中的KMB固体培养基的组分如下：蛋白胨20g/L，甘油10ml/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁1.5g/L，琼脂20g/L，余量水，pH值7.2。
步骤(2)中的KMB液体培养基的组分如下：蛋白胨20g/L，甘油10ml/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁1.5g/L，余量水，pH值7.2。
步骤(3)中的液体发酵培养基的组分如下：玉米粉30g/L，豆饼粉30g/L,麸皮粉20g/L，磷酸氢二钾2g/L，磷酸二氢钾0.8g/L，硫酸镁0.75g/L，余量水，pH值7.2-7.4。
步骤(3)中的种子液接种量按体积分数计为5％。
(二)以植物病原真菌为靶标，对上述突变株进一步筛选。
将保存于4℃冰箱的供试植物病原真菌(尖孢镰刀菌、疫霉菌、核盘菌)转接到PDA平板中进行活化，30℃培养3d，采用平板对峙法，以供试植物病原真菌为靶标，测定突变株的抗菌活性。
具体方法为：待病原菌长满平板后，用打孔器打取菌饼(Φ5mm)，将菌饼倒贴在PDA平板中央，挑取在KMB固体培养基上活化后的菌种2501及突变株分别接种到离病原菌等距离的三个角上，距离为30mm，30℃培养3d，观察是否有拮抗作用，并测量抑菌带的宽度，抑菌带宽度是指连接接种点与病原菌菌饼中心点，该连接线上透明带的宽度；以抑菌带宽度作为拮抗作用强弱的标志，不同突变株对植株病原菌的抑菌带检测结果见表1。
表1
Figure GDA0003428161730000051
注：表中所列菌株是抑菌效果相对较好的菌株。
从表1中可以看出突变株编号为2502的菌株对上述三种植物病原真菌的抑菌效果均较好。
(三)以植物病原细菌青枯假单胞菌、放线菌疮痂链霉菌为靶标，对上述突变株进一步筛选。
取100μL 108cfu/mL的青枯病菌稀释液涂布于PDA固体培养基平板表面，取100μL108cfu/mL的疮痂链霉菌稀释液涂布于OMA固体培养基(燕麦琼脂培养基：燕麦片20.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1000ml)平板表面，然后在每个平板中央放置1个无菌牛津杯(6mm×7.8mm×10mm)，将牛津杯轻轻按压，使其与培养基接触无缝隙后，向每个牛津杯中加入300μL步骤(一)中制得的2501及突变株发酵液的50倍稀释液，使稀释液的菌浓度相同，以无菌水为对照CK，每个处理重复3次，然后将青枯假单胞菌平板置于37℃培养箱中恒温培养24h，疮痂链霉菌平板置于28℃培养箱中恒温培养48h，测量各个样品的抑菌圈直径，所述抑菌圈直径为牛津杯外抑菌圈的宽度，结果见表2。
表2
Figure GDA0003428161730000052
注：表中所列菌株是抑菌效果相对较好的菌株。
从表2中，可以看出原始菌2501发酵液对病原细菌青枯假单胞菌、疮痂链霉菌没有抑菌效果，而突变株2502发酵液对青枯病原菌和疮痂链霉菌抑菌效果均较好。
(四)2501及突变株的发酵液对棉花红蜘蛛的效果。
试验选择室内饲养、生理状态一致的雌成虫。将双面胶剪成2cm长，贴于载玻片的一端，然后选取健康雌成虫，将其背部粘于双面胶上(注意不要粘着足、触须和口器)，每片30头，沿双面胶两侧排列，放入底部垫有湿卫生纸的白瓷盘中，盖上盖子，置于25±1℃条件下，2h后镜检，剔除死亡和受伤个体，补足每片30头。将玻片浸于发酵液的50倍稀释液中轻轻振荡10s后取出，用吸水纸吸去载玻片、双面胶及试虫周围多余药液，置于底部垫有湿卫生纸的白瓷盘中，每处理3次重复，并设无菌水处理作空白对照CK。
将盛有处理试虫的白瓷盘置于温度25±1℃，光周期为L:D＝16:8h条件下饲养与观察。处理后48h检查红蜘蛛死亡情况，记录活虫数量，结果见表3。
表3
Figure GDA0003428161730000061
注：死亡率(％)＝死亡虫数/总虫数x 100；
由表3可以看出，原始菌2501对棉花红蜘蛛的防治效果较差，50倍稀释液死亡率仅达13.3％，而突变株2502发酵液50倍稀释液对红蜘蛛的防效达到93.3％，效果较好。
(五)突变株2502的稳定性实验
由上述实验数据结果可以看出，突变株2502的生物防治效果明显优于原始菌2501，因此对突变株2502进行鉴定保藏，将突变株2502命名为绿针假单胞菌橙黄亚种(Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca)2502。
绿针假单胞菌橙黄亚种(Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca)2502，于2021年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.22022。
利用步骤(一)的发酵培养方法对突变株2502进行连续传代培养，共转接5代；
利用上述对病虫害的试验方法，对每代培养的突变株2502进行防治效果检测，检测结果见表4。
表4
Figure GDA0003428161730000071
由表4中的实验数据可以看出，本发明涉及的突变株2502遗传稳定性良好。
应用例1
步骤(一)中制备的突变株2502发酵液对番茄青枯病的防治实验，包括如下步骤：
使用地点：寿光南部纪台镇番茄种植区。
大田试验选择在番茄青枯病历年发生严重的地块进行，严格按照随机区组设计，共设6个处理，其中设一个空白对照和5个试验处理，每个处理重复4次，共24个小区，每个小区20㎡，5个试验处理的剂量设计如下：突变株2502发酵液50倍稀释液、100倍稀释液、200倍稀释液、300倍稀释液、500倍稀释液；CK为空白对照。
使用时期及使用方法：移栽苗时使用一次，使用量200mL/株，然后间隔15天使用一次，使用量200mL/株，之后再间隔15天使用一次，使用量300mL/株，整个生长季共计使用3次，通过灌根的方式施用，各重复用量一致。
调查与统计：试验结束后15d，每个小区调查全部植株，记录总株数与病株数，结果见表5。
表5
处理 发病率％ 防治效果％
50倍液 10.94e 88.67a
100倍液 15.35e 84.10a
200倍液 25.37d 73.72b
300倍液 33.28c 65.53c
500倍液 50.13b 48.08d
CK空白 96.55a ---
注：1、发病率(％)＝(发病株数/总株数)×100；2、防治效果(％)＝(对照区病株率－处理区病株率)/对照区病株率×100；3、同列数据后标小写字母表示其差异达显著水平(P<0.05)，字母相同差异不显著，字母不同差异显著。
由表5可以看出，经过突变株2502发酵液处理后，不同浓度对番茄青枯病的防治效果不同，发病率随着稀释倍数的增大而增加，防治效果随稀释倍数的增加而降低；其中空白对照发病率高达96％以上，300倍以下稀释液效果显著，特别是100倍以下，防治效果均达84％以上，基本能够控制住病害，稀释500倍以上防治效果低于50％。
应用例2
步骤(一)中制备的突变株2502发酵液对马铃薯疮痂病的防治实验，包括如下步骤：
使用地点：内蒙古包头市达茂旗马铃薯种植区。
大田试验选择在马铃薯疮痂病历年发生严重的地块进行，严格按照随机区组设计，共设6个处理，其中设一个空白对照和5个试验处理，每个处理重复4次，共24个小区，每个小区20㎡。5个试验处理的试验剂量设计如下：突变株2502发酵液50倍稀释液、100倍稀释液、200倍稀释液、300倍稀释液、500倍稀释液，CK为空白对照。
使用时期及使用方法：马铃薯块刚种植时，使用量200mL/株，然后间隔15天使用一次，使用量200mL/株，之后再间隔15天使用一次，使用量300mL/株，整个生长季共计使用3次，通过灌根的方式施用，各重复用量一致。
调查与统计：马铃薯收获后，每个小区调查50株，计算发病率与防治效果，结果见表6。
表6
处理 发病率％ 防治效果％
50倍液 12.26e 86.69a
100倍液 15.21e 83.49a
200倍液 30.88d 66.48b
300倍液 45.56c 50.55c
500倍液 52.19b 43.35d
CK空白 92.13a —
注：1、发病率(％)＝(发病株数/总株数)×100；2、防治效果(％)＝(对照发病率-处理发病率)/对照发病率×100；3、同列数据后标小写字母表示其差异达显著水平(P<0.05)，字母相同差异不显著，字母不同差异显著。
由表6可以看出，突变株2502发酵液处理后，对马铃薯疮痂病具有不同的防治效果，发病率随着稀释倍数的增大而增加，防治效果随稀释倍数的增加而降低。其中空白对照发病率高达92％以上，使用100倍液以下效果显著，防治效果均达83％以上，基本能够控制住病害，使用200倍以上稀释液时，防治效果不佳，在66％以下。
应用例3
步骤(一)中制备的突变株2502发酵液对棉花红蜘蛛的防治实验，包括如下步骤：
使用地点：新疆伊犁州塔城地区棉花地。
大田试验选择在红蜘蛛历年发生严重的地块进行，严格按照随机区组设计，共设6个处理，其中设一个空白对照和5个试验处理，每个处理重复4次，共24个小区，每个小区20㎡。5个试验处理的试验剂量设计如下：突变株2502发酵液50倍稀释液、100倍稀释液、200倍稀释液、300倍稀释液、500倍稀释液，CK为空白对照。
使用方法：棉花植株上红蜘蛛的量达到20％时施用，棉花整个生育期喷施2次，第1次喷雾后10d进行第2次喷雾，使全部叶片均匀着液，每个小区用量约900ml。
调查与统计：施用前调查虫口基数，每小区定点调查10株棉花，按每株上、中、下三个方位挂牌标记l5个叶片，施用后调查3次，第二次喷雾后第5、10、15d调查，用手持放大镜检查叶片，记录红蜘蛛数量。结果见表7。
表7
Figure GDA0003428161730000091
注：1、虫口减退率(％)＝(施药前活虫数-施药后活虫数)/施药前活虫数×100；
2、死亡率(％)＝(药剂处理区虫口减退率-空白对照区虫口减退率)/(100-空白对照区虫口减退率)x 100；
3、同列数据后标小写字母表示其差异达显著水平(P<0.05)，字母相同差异不显著，字母不同差异显著。
由表7可以看出，突变株2502发酵液对棉花红蜘蛛的防治效果显著：将2502发酵液稀释到50、100、200倍施用，其对棉花红蜘蛛的防治效果差异不显著，均达到84％以上，稀释到500倍以上，防治效果较差，防效在60％以下，建议稀释200倍以下使用。
以植物病原真菌(尖刀镰孢菌、疫霉菌、核盘菌)、疮痂链霉菌、青枯假单胞菌和红蜘蛛为靶标，筛得既能够防治真菌性病害又能防治细菌性病害，同时也能够杀虫的微生物突变菌株—突变株2502，即绿针假单胞菌橙黄亚种2502，填补了目前已发现的绿针假单胞菌不能防治细菌性病害的空白，并且通过大田应用实验取得了良好的防治效果。本发明具有以下优点：经过实际测试，本发明涉及的突变株2502既具有杀菌功能又具有杀虫功能，对植物病原真菌(尖刀镰孢菌、疫霉菌、核盘菌)、疮痂链霉菌、青枯假单胞菌和红蜘蛛防治效果显著，对目前难以防治的青枯病和马铃薯疮痂病均有良好的效果，并且通过大田实验取得了显著的成效，本发明涉及的绿针假单胞菌橙黄亚种2502与化学药剂相比，安全、无污染、无残留、生防谱广，可替代部分化学农药，减少化学农药的使用量和使用次数，延缓抗药性的发生，对于农业可持续发展具有重要意义。

Claims (6)

1.一种绿针假单胞菌橙黄亚种（Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca）2502，于2021年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.22022。
2.权利要求1所述绿针假单胞菌橙黄亚种（Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca）2502的制备方法，包括如下步骤：
（1）将绿针假单胞菌橙黄亚种2502在KMB固体培养基上活化，培养温度为30±0.5℃，培养时间为36-48h，制得活化的菌种；
（2）将步骤（1）活化的菌种接种于KMB液体培养基，培养温度30±0.5℃，转速180-200rpm，培养时间20-24h，制得种子液；
（3）将步骤（2）制备的种子液接种至液体发酵培养基，培养温度30±0.5℃，转速150-180rpm，培养时间24-30h，得到绿针假单胞菌橙黄亚种2502；
步骤（1）中的KMB固体培养基的组分如下：蛋白胨20g/L，甘油10ml/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁1.5g/L，琼脂20g/L，余量水，pH值7.2；
步骤（2）中KMB液体培养基的组分如下：蛋白胨20g/L，甘油10ml/L，磷酸氢二钾1.5g/L，硫酸镁1.5g/L，余量水，pH值7.2。
3.如权利要求2所述绿针假单胞菌橙黄亚种（Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca）2502的制备方法，其特征在于，步骤（3）中液体发酵培养基的组分如下：玉米粉30g/L，豆饼粉30g/L,麸皮粉20g/L，磷酸氢二钾2g/L，磷酸二氢钾0.8g/L，硫酸镁0.75g/L，余量水，pH值7.2-7.4。
4.如权利要求2所述绿针假单胞菌橙黄亚种（Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca）2502的制备方法，其特征在于，步骤（3）中种子液接种量按体积分数计为5-10%。
5.权利要求1所述绿针假单胞菌橙黄亚种（Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca）2502
对尖刀镰孢菌、疫霉菌、核盘菌、青枯假单胞菌、疮痂链霉菌和/或红蜘蛛的防治应用。
6.如权利要求5所述应用，其特征在于，绿针假单胞菌橙黄亚种（Pseudomonas chlororaphis subsp.aurantiaca）2502对番茄青枯病、马铃薯疮痂病和/或棉花红蜘蛛的防治应用。
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