CN115399295A - 一种提高中国被毛孢感染蝙蝠蛾幼虫存活率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高中国被毛孢感染蝙蝠蛾幼虫存活率的方法。该方法包括以下步骤：先用氮气将待注射的蝙蝠蛾幼虫熏晕，然后用注射针将中国被毛孢孢子液在倒数第1对和第2对腹足背部注入蝙蝠蛾幼虫体内，注射完成后将幼虫放置在10‑13℃环境中进行培养观察。本发明首次发现，相较于腹部注射法，采用背部注射法将中国被毛孢孢子液注入蝙蝠蛾幼虫体内，可显著提高蝙蝠蛾幼虫的存活率，并且保持相当的幼虫僵化率。相较于胸部注射法，采用背部注射法可提高蝙蝠蛾幼虫的存活率和僵化率。综上所述，背部注射菌种的方法优于传统腹部注射方法及胸部注射方法。
Description
技术领域
本发明属于冬虫夏草人工培育领域，具体涉及一种提高中国被毛孢感染蝙蝠蛾幼虫存活率的方法。
背景技术
冬虫夏草是冬虫夏草菌侵染寄主昆虫-蝙蝠蛾科Hepialidae幼虫，在合适环境下形成的幼虫尸体与真菌子座的复合形态结构。由于良好的药理药效作用，冬虫夏草被称为“中药三大宝”(人参、鹿茸和冬虫夏草)之一。冬虫夏草主要产于海拔3000米以上的青藏高原，生长周期长，生存条件恶劣，因此，野生资源极为有限。随着“亚健康”人群的扩大，冬虫夏草日益受到人们的青睐；而过度采挖和气候变暖导致野生冬虫夏草处于濒危。唯一选择是进行冬虫夏草人工培育。
虫生真菌主要通过昆虫体壁、自然孔口或消化道进入到虫体内部。冬虫夏草菌感染蝙蝠蛾幼虫的途径和方法研究报道有限。尽管目前人工感染幼虫方法包括将中国被毛孢孢子液涂抹于寄主体表，孢子混合饲料喂食从食道进入寄主体内，或注射到寄主体内。但是，体表涂布和饲喂方法均时间长、被感染幼虫过程死亡率高、感染率低；现有的穿刺感染方法易因操作不慎造成虫体表面伤口过大、幼虫体液流失过多而死亡率高。
发明内容
基于上述问题，本发明的目的是提供一种提高中国被毛孢感染蝙蝠蛾幼虫存活率的方法，为冬虫夏草人工培养产业提供重要的技术支撑。
本发明通过实验发现，采用背部注射法将中国被毛孢孢子液注入蝙蝠蛾幼虫体内，可提高蝙蝠蛾幼虫存活率。
因此，本发明的目的是提供一种提高中国被毛孢感染蝙蝠蛾幼虫存活率的方法，将中国被毛孢孢子液从背部注入蝙蝠蛾幼虫体内。
优选的，所述从背部注入的注射位置在倒数第1对和第2对腹足背部。
优选的，上述的方法包括以下步骤：先用氮气将待注射的蝙蝠蛾幼虫熏晕，然后用注射针将中国被毛孢孢子液在倒数第1对和第2对腹足背部注入蝙蝠蛾幼虫体内，注射完成后将幼虫放置在10-13℃环境中进行培养观察。
优选的，所述的中国被毛孢孢子液的注射孢子量为每头幼虫注射4000-12000个孢子。
优选的，所述的注射针，若为人工注射用，则为玻璃针，若为自动注射机器用，则为注射钢针。
本发明的又一个目的是提供上述的方法在提高中国被毛孢感染蝙蝠蛾幼虫存活率中的应用。
本发明首次发现，相较于腹部注射法，采用背部注射法将中国被毛孢孢子液注入蝙蝠蛾幼虫体内，可显著提高蝙蝠蛾幼虫的存活率，并且保持相当的幼虫僵化率(两者差异不显著)。相较于胸部注射法，采用背部注射法可提高蝙蝠蛾幼虫的存活率和僵化率。综上所述，背部注射菌种的方法优于传统腹部注射方法及胸部注射方法。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明的具体实施方式进行详细描述，这些实施例用于理解而不是限制本发明的范围。
实施例1
1、材料
4龄蝙蝠蛾幼虫幼虫、同批次的虫草菌液(中国被毛孢Hirsutella sinensis孢子液)、两种不同的注射用注射针(人工注射用玻璃针、自动注射机器用注射钢针)、氮气。
2、方法
(1)先用氮气将待注射的蝙蝠蛾幼虫熏晕，然后用两种不同注射用针分别将虫草菌液(中国被毛孢孢子液)从幼虫的背部(新的技术方法)、胸部及腹部(常规做法，倒数第二对足)注入蝙蝠蛾幼虫体内，每组各注射300头重复，每头幼虫分别注射浓度为3×106个/mL的虫草菌液4μL，具体的注射位置见表1。
(2)注射完成后将幼虫放置在10-13℃环境中进行常规培养观察(给予相应的食物)。
(3)每周观察一次，记录幼虫的存活数，死亡率及僵化率，结果见表1。
表1.不同注射方法的效果比较
说明：幼虫接种菌种后先变成僵虫后，再经过培育生成虫草。
由上表可知，无论是利用玻璃针还是钢针注射幼虫，发现背部的死亡率均低于常规注射部位腹部，原因可能是背部的脂肪层较厚，对幼虫的损伤相对其他部位较小，同时也利于注射时避开幼虫中肠道，降低死亡率；对比背部和腹部的僵化率，两者差异不显著；但是可以提高注射幼虫存活率，故背部注射菌种的方法优于传统腹部注射方法。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种提高中国被毛孢感染蝙蝠蛾幼虫存活率的方法，其特征在于，将中国被毛孢孢子液从背部注入蝙蝠蛾幼虫体内。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的从背部注入的注射位置在倒数第1对和第2对腹足背部。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：先用氮气将待注射的蝙蝠蛾幼虫熏晕，然后用注射针将中国被毛孢孢子液在倒数第1对和第2对腹足背部注入蝙蝠蛾幼虫体内，注射完成后将幼虫放置在10-13℃环境中进行培养观察。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的中国被毛孢孢子液的注射孢子量为每头幼虫注射4000-12000个孢子。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的注射针，若为人工注射用，则为玻璃针，若为自动注射机器用，则为注射钢针。
6.权利要求1-5任一项所述的方法在提高中国被毛孢感染蝙蝠蛾幼虫存活率中的应用。
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