CN115389686B - 一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种水果中巴西棕榈蜡的检测方法，属于食品检测技术领域。检测操作如下：(1)将被检测水果去核匀浆；(2)在匀浆物中加入甲苯混匀，加入适量氯化钠超声、离心，旋转蒸发至近干，加入正己烷稀释复溶两次，获得待净化液；(3)将待净化液过固相萃取柱，将洗脱液用氮气吹至近干，加入十七烷酸甘油三酯内标溶液，最后用二氯甲烷定容，得到待检测液；(4)定性分析操作：将巴西棕榈蜡标准溶液的图谱与待检测液的图谱进行比较，确定待检测液中是否含有巴西棕榈蜡；定量分析操作：将待检测液中C56、C58、C60峰面积之和带入标准曲线方程计算并计算公式计算，得到试样中巴西棕榈蜡的含量。本发明填补了水果中巴西棕榈蜡检测的空白。
Description
技术领域
本发明属于食品检测技术领域，具体涉及应用固相萃取技术和气相色谱质谱检测技术对水果中巴西棕榈蜡的检测方法。
背景技术
巴西棕榈蜡(Carnauba Wax)是从生长于南美洲巴西东北部的棕榈树叶上提取的天然植物蜡，由于其具有良好的防潮湿性和抗氧化性，因此在食品的加工和保存中大量使用，可作为新鲜水果、可可制品及糖果的被膜剂和拮抗剂。但是，动物实验表明，过量的巴西棕榈蜡会对肠道组织造成一定的损伤，并且可能还会引起一些过敏反应。在GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中，规定其在新鲜水果中用量为0.4mg/kg。国际方面，欧盟(EU)规定巴西棕榈蜡(E903)在水果如柑橘、梨、桃子等进行表面处理时，其限量为200mg/kg。CAC规定了巴西棕榈蜡在经表面处理的新鲜水果中限量为400mg/kg。美国FDA对巴西棕榈蜡也有相应的限量要求，将其归类为公认的安全(GRAS)产品，允许在几种食品中使用，但应控制在良好生产规范中规定的量的范围内。
目前市场上有些生产企业为了增加商品卖相，延长货架期，无视国家标准规定，超限量使用巴西棕榈蜡等被膜剂。尤其是一些水果，由于果皮薄，肉质多汁，易腐烂变质和受冷害，不易保存，运输成本高，因此添加被膜剂的现象更为常见。近几年来，受疫情影响，我国进口水果数量有所回落，但也维持在高达六七百万吨每年的进口量，据2021年的数据显示，中国水果进口额达134.7亿美元，同比增长30.9％；进口量达702.7万吨，同比增长11.5％，鲜榴莲、车厘子、芭蕉等水果每年会大量进口。因此对于巴西棕榈蜡的检测，以及如何确保食品用蜡的绿色安全也成为了一项重要的议题。目前我国还没有水果中巴西棕榈蜡的检测标准，因此造成了面临着市场流通和进出口监管都无法对其跟踪检验该指标的问题。我国每年进出口的大量水果，均有必要对该项目进行监管控制，但由于缺少相应的标准检测方法，因此该项目的监管还处于空白状态，给双边贸易和食品安全都带来了考验，因此迫切需要建立检测方法。现下食品用蜡主要包括巴西棕榈蜡、石蜡，其检测的主要方法有气相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法等，但缺乏对水果尤其是浆果中巴西棕榈蜡检测方面的研究。
发明内容
为了实现水果中巴西棕榈蜡的快速提取、净化及准确定性定量检测，本发明提供一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法。
一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测操作步骤如下：
(1)被检测物前处理
(1.1)用料理机将待检测水果制成均质的浆状物，即试样；
(1.2)称取25.00g试样，分别用40mL甲苯提取两次，合并提取液，将提取液旋蒸，用正己烷复溶，制成待净化液；
(1.3)将待净化液过固相萃取柱净化，将洗脱液用氮气吹至近干，再加入0.05mL浓度400μg/mL的十七烷酸甘油三酯内标溶液，最后用二氯甲烷定容至1ml，得到待检测液；
所述固相萃取柱内的填料为氨丙基硅胶和硅胶按质量比1:2组成的复合填料；
(2)定性定量检测
将5μL巴西棕榈蜡标准系列溶液和待检测液分别先后注入气相色谱质谱联用仪，采用相同色谱条件与质谱条件进行测定，获得巴西棕榈蜡标准溶液和待检测液的色谱质谱图谱；
定性分析操作如下：将巴西棕榈蜡标准溶液的图谱与待检测液的图谱进行比较，对比两者C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间和相对离子丰度比；当该C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间偏差小于5％，且相对离子丰度比满足最大容许误差时，则说明待检测液中含有巴西棕榈蜡；
定量分析操作如下：使用内标法进行定量，根据添加到相应标准品的内标溶液十七烷酸甘油三酯的浓度与测得的相应的峰面积比值来校正测得的巴西棕榈蜡标准溶液浓度，以校正后的巴西棕榈蜡标准系列溶液的浓度为横坐标，校正后的C56、C58、C60峰面积之和为纵坐标，作线性回归得到标准曲线方程；根据待检测液中添加的内标溶液的浓度和对应峰面积比值来校正测得的C56、C58、C60峰面积之和，最后，将校正后的待检测液中C56、C58、C60峰面积之和带入标准曲线方程计算，得到待检测液中巴西棕榈蜡的浓度，根据公式计算得待检测液中巴西棕榈蜡的含量，公式中X是试样中巴西棕榈蜡含量，单位为mg/kg；C为由标准曲线计算出定容后的待检测液中巴西棕榈蜡的浓度，单位为μg/mL；M为试样的质量，单位为g；V为试样最后的定容体积，单位为mL。
进一步的技术方案如下：
步骤(1.2)中，称取25.00g试样，置于100mL离心管中，加入40mL甲苯，涡旋震荡1min，加入10g氯化钠，于60℃超声30min，转速4000r/min条件下离心5min，取上清液为第一次提取液；下层残渣加入40mL甲苯，重复提取一次，合并两次提取液；将合并的提取液于温度70℃下，旋转蒸发至近干后，加入5mL正己烷，充分溶解旋干物，将溶解液转移至50ml离心管，再分别用5mL正己烷洗旋蒸瓶内壁两次，洗液均转移至离心管，作为待净化液。
步骤(1.3)中，用15mL二氯甲烷活化固相萃取柱，将待净化液倾入柱中，先用10mL体积浓度7％的二氯甲烷淋洗小柱，再用10mL正己烷淋洗小柱，弃去流出液；然后以15mL体积浓度20％的二氯甲烷洗脱，并收集洗脱液，于温度50℃条件下水浴氮吹至近干，在吹干物中加入0.05mL十七烷酸甘油三酯内标溶液，再用二氯甲烷定容至1.0mL，得到待检测液。
所述固相萃取柱为过滤器式，柱管内由上至下依次设有上层筛板、氨丙基硅胶、中层筛板、硅胶和下层筛板；所述氨丙基硅胶的质量为1g，硅胶的质量为2g；所述氨丙基硅胶的厚度和硅胶的厚度相同，均为15-25mm；上层筛板、中层筛板、下层筛板的结构和材料均相同。
所述巴西棕榈蜡标准系列溶液为质量体积浓度5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的标准系列溶液，其中代表质量的物质为巴西棕榈蜡，代表体积的物质为溶剂二氯甲烷。
步骤(2)中，高温气相色谱质谱联用仪检测条件为：30m×0.25mm×0.1μm的CD-5HT色谱柱；进样口：360℃；进样量：5μL；柱流速：1.0mL/min；脉冲不分流进样：脉冲压力500kPa，脉冲时间0.2min；升温程序：160℃保持3min，以20℃/min升至320℃保持13min，以5℃/min升至350℃保持16min，以5℃/min升至360℃保持34min；传输线：300℃，离子源：300℃；SIM模式，特征成分选择离子质核比如下：C56酯为369、397、425、817，以质核比为369的离子定量；C58酯为369、397、425、845，以质核比为397的离子定量；C60酯为397、425、453、873，以质核比为425的离子定量；十七烷酸甘油三酯为327、381、579。
本发明的有益技术效果体现在以下方面：
1、科学选择特征物质，实现准确定性定量。本发明提供的方法通过保留时间和相对离子丰度比选定C52、C54、C56、C58和C60作为特征峰，可以有效的区分巴西棕榈蜡和其他蜡酯成分，详见图1为100μg/mL巴西棕榈蜡标准溶液色谱图；进一步地，以巴西棕榈蜡为对照品，在相同条件下对比果冻蜡、蜂蜡、椰子蜡、大豆蜡、冰花蜡、酥油蜡几种常见谱图，如图2所示，果冻蜡、蜂蜡、冰花蜡对巴西棕榈蜡中的C52、C54、C56、C58和C60基本无干扰，而大豆蜡、椰子蜡和酥油蜡则会对C52、C54的出峰有所干扰，而对C56、C58、C60影响相对较小，因此选择C56、C58和C60为特征峰进行水果中巴西棕榈蜡检测的定性定量分析。
2、优化提取试剂，保证提取效果最佳。巴西棕榈蜡难提取问题是限制其检测方法形成的重要原因之一，针对这个问题，本发明对比了三种常用提取试剂正己烷、甲苯和二氯甲烷发现：在提取效率上，二氯甲烷的平均提取效率在70％～80％之间，正己烷提取效率小于50％，而甲苯的提取效率均大于80％；在提取过程中，二氯甲烷离心分层后位于下层，不利于提取操作，而甲苯离心分层位于上层，提取操作更为简便；其次，本发明对比不同体积甲苯的提取效率发现，30ml甲苯提取效率48.2％，40ml提取效率85.7％，50ml提取效率为87.2％，考虑到节约有机溶剂兼顾环境友好，同时保证较高的提取效率，最终选择40ml甲苯作提取溶剂。
3、新型固相萃取柱确保净化能力。本发明提供了一种优化配比的复合氨基小柱，以1g氨丙基和2g硅胶组成复合填料，一方面，氨丙基硅胶填料可以有效去除水果中一些酸性干扰物，硅胶填料则可以将水果中巴西棕榈蜡的蜡酯成分和其他杂质进行有效分离；另一方面，氨丙基和硅胶的组成，可以对颜色较深的核果进行有效的色素和杂质去除。与传统固相萃取柱富集能力低和净化功能单一相比，本发明中的复合氨基小柱能使基线减低三份之一，可以有效地降低基线噪音的干扰。
4、方法学指标满足分析要求。本发明检测低限为0.2mg/kg，满足GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中规定的其在新鲜水果中用量为0.4mg/kg的要求，同时本发明通过选取具有代表性的基质进行检测方法的加标回收率及重现性验证，相对标准偏差在4.00％～10.74％，回收率均在80.75％～109.00％，符合GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》中回收率80.00％～110.00％和精密度小于15.00％的要求，进一步证明本发明检测方法的科学性和可靠性。
附图说明
图1为100μg/mL巴西棕榈蜡标准溶液色谱图。
图2为七种蜡成分的气相色谱图对比图。
图3为樱桃样品添加巴西棕榈蜡标准品色谱图，添加水平为0.8mg/kg。
图4为苹果样品添加巴西棕榈蜡标准品色谱图，添加水平为0.8mg/kg。
图5为柑橘样品添加巴西棕榈蜡标准品色谱图，添加水平为0.8mg/kg。
具体实施方式
下面结合附图，通过实施例对本发明作进一步地说明。
实施例1
一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测操作步骤如下：
步骤(1)、制样
(1.1)制浆状物试样
将樱桃样品去核后用料理机匀浆混匀，获得匀质的樱桃浆状物试样。
(1.2)萃取
称取25.00g樱桃浆状物试样，置于100mL离心管中，加入40mL甲苯，涡旋震荡1min，加入10g氯化钠，于60℃超声30min，转速4000r/min条件下离心5min，取上清液为第一次提取液；下层残渣加入40mL甲苯，重复提取一次，合并两次提取液；将合并的提取液于温度70℃下，旋转蒸发至近干后，加入5mL正己烷，充分溶解旋干物，将溶解液转移至50ml离心管，再分别用5mL正己烷洗旋蒸瓶内壁两次，洗液均转移至离心管，作为待净化液。
(1.3)净化
使用固相萃取柱净化，固相萃取柱内的填料为氨丙基硅胶和硅胶按质量比1:2的复合填料；净化操作如下：用15mL二氯甲烷活化固相萃取柱，将待净化液倾入柱中，先用10mL体积浓度7％的二氯甲烷淋洗小柱，再用10mL正己烷淋洗小柱，弃去流出液。然后以15mL体积浓度20％的二氯甲烷洗脱，并收集洗脱液，于温度50℃条件下水浴氮吹至近干，在吹干物中加入0.05mL十七烷酸甘油三酯内标溶液，再用二氯甲烷定容至1.0mL，得到待检测液。
(2)检测
取5μL待检测液经高温气相色谱质谱联用仪分析，从而确定待检测液中巴西棕榈蜡的残留量。具体条件如下：
CD-5HT色谱柱参数为30m×0.25mm×0.1μm，进样口：360℃；进样量：5μL；柱流速：1.0mL/min；脉冲不分流进样：脉冲压力：500kPa，脉冲时间：0.2min；
升温程序：160℃保持3min，以20℃/min升至320℃保持13min，以5℃/min升至350℃保持16min，以5℃/min升至360℃保持34min。
接口温度：300℃，离子源：300℃；SIM模式，特征成分选择离子质核比如下：C56酯为369、397、425、817，以质核比为369的离子定量；C58酯为369、397、425、845，以质核比为397的离子定量；C60酯为397、425、453、873，以质核比为425的离子定量；十七烷酸甘油三酯为327、381、579。
定性：将巴西棕榈蜡标准溶液的图谱与樱桃待检测液的图谱进行比较，对比两者C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间和相对离子丰度比。当该C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间偏差小于5％，且相对离子丰度比满足最大容许误差时，则说明樱桃待检测液中含有巴西棕榈蜡。
定量：配置体积浓度为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的巴西棕榈蜡标准系列溶液，巴西棕榈蜡标准系列溶液中代表质量的物质为巴西棕榈蜡，代表体积的物质为溶剂二氯甲烷；内含0.05mL浓度400μg/mL的十七烷酸甘油三酯内标溶液，定容至1.00ml，按照步骤(2)依次进样检测。使用内标法进行定量，根据添加到相应标准品的内标溶液十七烷酸甘油三酯的浓度400μg/mL与测得的相应峰面积比值来校正测得的巴西棕榈蜡标准溶液浓度，将校正后的巴西棕榈蜡浓度与校正后的C56、C58、C60峰面积之和作标准曲线，标准曲线线性回归方程为y＝0.109995x，式中y为校正后的C56、C58、C60峰面积之和，x为巴西棕榈蜡浓度，相关系数R2＝0.999，具有良好的线性关系，满足分析方法要求。在测定樱桃待检测液时，根据标准曲线方程计算得到樱桃待检测液中巴西棕榈蜡的浓度C＝0.31μg/mL。根据公式代入称取的试样质量M＝25.00g，定容体积V＝10mL,计算得樱桃样品中巴西棕榈蜡的含量为0.1mg/kg，因定量限为0.2mg/kg，所以该樱桃样品为未检出。
为验证上述方法的灵敏度和准确度，对不含巴西棕榈蜡的樱桃样品分别添加0.2mg/kg、0.4mg/kg、0.8mg/kg 3个水平的巴西棕榈蜡，进行回收测定，每个水平重复6次，利用本实施例的方法进行提取、净化和检测，通过换算最终得到加标样品中巴西棕榈蜡的测定浓度；按照下式进行回收率计算：
式中：R—回收率，％；
Cs—加标样品中巴西棕榈蜡的测定浓度，mg/kg；
C0—实际样品中巴西棕榈蜡的浓度，mg/kg；
C—加标样品中巴西棕榈蜡的理论加标浓度，mg/kg；
表1 6次实验樱桃样品平均回收率与精密度
结果如表1和图3所示，巴西棕榈蜡的回收率均高于80％，相对标准偏差在4.00％～10.52％，图3为樱桃样品添加0.8mg/kg标准品色谱图，结果满足检测方法学要求。
实施例2
一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测操作步骤如下：
步骤(1)制样
(1.1)制浆状物试样
将苹果样品直接用料理机匀浆混匀，获得匀质的苹果浆状物试样。
(1.2)萃取
称取25.00g苹果浆状物试样，置于100mL离心管中，加入40mL甲苯，涡旋震荡1min，加入10g氯化钠，于60℃超声30min，转速4000r/min条件下离心5min，取上清液为第一次提取液；下层残渣加入40mL甲苯，重复提取一次，合并两次提取液；将合并的提取液于温度70℃下，旋转蒸发至近干后，加入5mL正己烷，充分溶解旋干物，将溶解液转移至50ml离心管，再分别用5mL正己烷洗旋蒸瓶内壁两次，洗液均转移至离心管，作为待净化液。
(1.3)净化
使用固相萃取柱净化，固相萃取柱内的填料为氨丙基硅胶和硅胶按质量比1:2组成的复合填料；净化操作如下：用15mL二氯甲烷活化固相萃取柱，将待净化液倾入柱中，先用10mL体积浓度7％的二氯甲烷淋洗小柱，再用10mL正己烷淋洗小柱，弃去流出液。然后以15mL体积浓度20％的二氯甲烷洗脱，并收集洗脱液，于温度50℃条件下水浴氮吹至近干，在吹干物中加入0.05mL十七烷酸甘油三酯内标溶液，再用二氯甲烷定容至1.0mL，得到待检测液。
步骤(2)检测
取5μL待检测液经高温气相色谱质谱联用仪分析，从而确定待检测液中巴西棕榈蜡的残留量。具体条件如下：
CD-5HT色谱柱参数为30m×0.25mm×0.1μm，进样口：360℃；进样量：5μL；柱流速：1.0mL/min；脉冲不分流进样：脉冲压力：500kPa，脉冲时间：0.2min；
升温程序：160℃保持3min，以20℃/min升至320℃保持13min，以5℃/min升至350℃保持16min，以5℃/min升至360℃保持34min。
接口温度：300℃，离子源：300℃；SIM模式，特征成分选择离子质核比如下：C56酯为369、397、425、817，以质核比为369的离子定量；C58酯为369、397、425、845，以质核比为397的离子定量；C60酯为397、425、453、873，以质核比为425的离子定量；十七烷酸甘油三酯为327、381、579。
定性操作：定性操作同实施例1，故不赘述。
定量操作：定量操作同实施例1，检测结果为未检出，故不赘述。
为验证上述方法的灵敏度和准确度，对不含巴西棕榈蜡的苹果样品分别添加0.2mg/kg、0.4mg/kg、0.8mg/kg 3个水平的巴西棕榈蜡，进行回收测定，每个水平重复6次，利用本实施例的方法进行提取、净化和检测，通过换算最终得到加标样品中巴西棕榈蜡的测定浓度；按照下式进行回收率计算：
表2 6次实验苹果样品平均回收率与精密度
结果如表2和图4所示，表1中巴西棕榈蜡的回收率均高于96％，相对标准偏差在6.38％～10.12％，图4为苹果样品添加0.8mg/kg标准品色谱图，结果满足检测方法学要求。
实施例3
一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测操作步骤如下：
步骤(1)制样
(1.1)制浆状物试样
将柑橘样品直接用料理机匀浆混匀，获得匀质的柑橘浆状物。
(1.2)萃取
称取25.00g柑橘浆状物，置于100mL离心管中，加入40mL甲苯，涡旋震荡1min，加入10g氯化钠，于60℃超声30min，转速4000r/min条件下离心5min，取上清液为第一次提取液；下层残渣加入40mL甲苯，重复提取一次，合并两次提取液；将合并的提取液于温度70℃下，旋转蒸发至近干后，加入5mL正己烷，充分溶解旋干物，将溶解液转移至50ml离心管，再分别用5mL正己烷洗旋蒸瓶内壁两次，洗液均转移至离心管，作为待净化液。
(1.3)净化
使用固相萃取柱净化，固相萃取柱内的填料为氨丙基硅胶和硅胶按质量比1:2的复合填料；净化操作如下：用15mL二氯甲烷活化固相萃取柱，将待净化液倾入柱中，先用10mL体积浓度7％的二氯甲烷淋洗小柱，再用10mL正己烷淋洗小柱，弃去流出液。然后以15mL体积浓度20％的二氯甲烷洗脱，并收集洗脱液，于温度50℃条件下水浴氮吹至近干，在吹干物中加入0.05mL十七烷酸甘油三酯内标溶液，再用二氯甲烷定容至1.0mL，得到待检测液。
步骤(2)检测
取5μL待检测液经高温气相色谱质谱联用仪分析，从而确定待检测液中巴西棕榈蜡的残留量。具体条件如下：
CD-5HT色谱柱参数为30m×0.25mm×0.1μm，进样口：360℃；进样量：5μL；柱流速：1.0mL/min；脉冲不分流进样：脉冲压力：500kPa，脉冲时间：0.2min；
升温程序：160℃保持3min，以20℃/min升至320℃保持13min，以5℃/min升至350℃保持16min，以5℃/min升至360℃保持34min。
接口温度：300℃，离子源：300℃；SIM模式，特征成分选择离子质核比如下：C56酯为369、397、425、817，以质核比为369的离子定量；C58酯为369、397、425、845，以质核比为397的离子定量；C60酯为397、425、453、873，以质核比为425的离子定量；十七烷酸甘油三酯为327、381、579。
定性操作：定性操作同实施例1，故不赘述。
定量操作：定量操作同实施例1，检测结果为未检出，故不赘述。
为验证上述方法的灵敏度和准确度，对不含巴西棕榈蜡的柑橘样品分别添加0.2mg/kg、0.4mg/kg、0.8mg/kg 3个水平的巴西棕榈蜡，进行回收测定，每个水平重复6次，利用本实施例的方法进行提取、净化和检测，通过换算最终得到加标样品中巴西棕榈蜡的测定浓度；按照下式进行回收率计算：
表3 6次实验柑橘样品平均回收率与精密度
结果如表3和图5所示，巴西棕榈蜡的回收率均高于87％，室内精密度在10％以下，图5为柑橘样品添加0.8mg/kg标准品色谱图，结果满足检测方法学要求。
本领域的技术人员容易理解，以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于，检测操作步骤如下：
(1)被检测物前处理
(1.1)用料理机将待检测水果制成均质的浆状物，即试样；
(1.2)称取25.00g试样，分别用40mL甲苯提取两次，合并提取液，将提取液旋蒸，用正己烷复溶，制成待净化液；
(1.3)将待净化液过固相萃取柱净化，将洗脱液用氮气吹至近干，再加入0.05mL浓度400μg/mL的十七烷酸甘油三酯内标溶液，最后用二氯甲烷定容至1ml，得到待检测液；
所述固相萃取柱内的填料为氨丙基硅胶和硅胶按质量比1:2组成的复合填料；
(2)定性定量检测
将5μL巴西棕榈蜡标准系列溶液和待检测液分别先后注入气相色谱质谱联用仪，采用相同色谱条件与质谱条件进行测定，获得巴西棕榈蜡标准溶液和待检测液的色谱质谱图谱；
定性分析操作如下：将巴西棕榈蜡标准溶液的图谱与待检测液的图谱进行比较，对比两者C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间和相对离子丰度比；当该C52、C54、C56、C58、C60和C62蜡酯的保留时间偏差小于5％，且相对离子丰度比满足最大容许误差时，则说明待检测液中含有巴西棕榈蜡；
定量分析操作如下：使用内标法进行定量，根据添加到相应标准品的内标溶液十七烷酸甘油三酯的浓度与测得的相应的峰面积比值来校正测得的巴西棕榈蜡标准溶液浓度，以校正后的巴西棕榈蜡标准系列溶液的浓度为横坐标，校正后的C56、C58、C60峰面积之和为纵坐标，作线性回归得到标准曲线方程；根据待检测液中添加的内标溶液的浓度和对应峰面积比值来校正测得的C56、C58、C60面积之和，最后，将校正后的待检测液中C56、C58、C60峰面积之和带入标准曲线方程计算，得到待检测液中巴西棕榈蜡的浓度，根据公式计算得试样中巴西棕榈蜡的含量，公式中X是试样中巴西棕榈蜡含量，单位为mg/kg；C为由标准曲线计算出定容后的待检测液中巴西棕榈蜡的浓度，单位为μg/mL；M为试样的质量，单位为g；V为待检测液最后定容体积，单位为mL。
2.根据权利要求1所述的一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于：步骤(1.2)中，称取25.00g试样，置于100mL离心管中，加入40mL甲苯，涡旋震荡1min，加入10g氯化钠，于60℃超声30min，转速4000r/min条件下离心5min，取上清液为第一次提取液；下层残渣加入40mL甲苯，重复提取一次，合并两次提取液；将合并的提取液于温度70℃下，旋转蒸发至近干后，加入5mL正己烷，充分溶解旋干物，将溶解液转移至50ml离心管，再分别用5mL正己烷洗旋蒸瓶内壁两次，洗液均转移至离心管，作为待净化液。
3.根据权利要求1所述的一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于：步骤(1.3)中，用15mL二氯甲烷活化固相萃取柱，将待净化液倾入柱中，先用10mL体积浓度7％的二氯甲烷淋洗小柱，再用10mL正己烷淋洗小柱，弃去流出液；然后以15mL体积浓度20％的二氯甲烷洗脱，并收集洗脱液，于温度50℃条件下水浴氮吹至近干，在吹干物中加入0.05mL十七烷酸甘油三酯内标溶液，再用二氯甲烷定容至1.0mL，得到待检测液。
4.根据权利要求1所述的一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于：所述固相萃取柱为过滤器式，柱管内由上至下依次设有上层筛板、氨丙基硅胶、中层筛板、硅胶和下层筛板；所述氨丙基硅胶的质量为1g，硅胶的质量为2g；所述氨丙基硅胶的厚度和硅胶的厚度相同，均为15-25mm；上层筛板、中层筛板、下层筛板的结构和材料均相同。
5.根据权利要求1所述的一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所述巴西棕榈蜡标准系列溶液为质量体积浓度5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的标准系列溶液，其中代表质量的物质为巴西棕榈蜡，代表体积的物质为溶剂二氯甲烷。
6.根据权利要求1所述的一种用于水果中巴西棕榈蜡的检测方法，其特征在于：步骤(2)中，高温气相色谱质谱联用仪检测条件为：30m×0.25mm×0.1μm的CD-5HT色谱柱；进样口：360℃；进样量：5μL；柱流速：1.0mL/min；脉冲不分流进样：脉冲压力500kPa，脉冲时间0.2min；升温程序：160℃保持3min，以20℃/min升至320℃保持13min，以5℃/min升至350℃保持16min，以5℃/min升至360℃保持34min；传输线：300℃，离子源：300℃；SIM模式，特征成分选择离子质核比如下：C56酯为369、397、425、817，以质核比为369的离子定量；C58酯为369、397、425、845，以质核比为397的离子定量；C60酯为397、425、453、873，以质核比为425的离子定量；十七烷酸甘油三酯为327、381、579。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02279794A (ja) * | 1989-04-21 | 1990-11-15 | Noda Wax:Kk | カルナウバワックスの品質改良法 |
| DE10231886A1 (de) * | 2002-07-12 | 2004-02-05 | Völpker Montanwachs GmbH | Carnaubawachsoxidate |
| CN108717056A (zh) * | 2018-07-25 | 2018-10-30 | 合肥合源药业有限公司 | 一种测定瑞舒伐他汀钙及其组合物中砷、汞含量的方法 |
| CN215218694U (zh) * | 2021-03-30 | 2021-12-17 | 合肥海关技术中心 | 一种用于水果中巴西棕榈蜡萃取净化的固相萃取柱 |
-
2022
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02279794A (ja) * | 1989-04-21 | 1990-11-15 | Noda Wax:Kk | カルナウバワックスの品質改良法 |
| DE10231886A1 (de) * | 2002-07-12 | 2004-02-05 | Völpker Montanwachs GmbH | Carnaubawachsoxidate |
| CN108717056A (zh) * | 2018-07-25 | 2018-10-30 | 合肥合源药业有限公司 | 一种测定瑞舒伐他汀钙及其组合物中砷、汞含量的方法 |
| CN215218694U (zh) * | 2021-03-30 | 2021-12-17 | 合肥海关技术中心 | 一种用于水果中巴西棕榈蜡萃取净化的固相萃取柱 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 用于棉织物表面超疏水的生物蜡乳液制备与性能表征;黄婵娟;张丹;郑磊;郑君红;龙柱;;高分子材料科学与工程(第11期);全文 * |
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| CN115389686A (zh) | 2022-11-25 |
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Lv Yaning Inventor after: Zhou Dianbing Inventor after: Han Fang Inventor after: Zhao Jingjuan Inventor after: Ma Haijian Inventor after: Liu Wen Inventor after: Liu Yuxin Inventor after: Ding Lei Inventor after: Zhao Min Inventor after: Jin Yujuan Inventor before: Lv Yaning Inventor before: Zhou Dianbing Inventor before: Han Fang Inventor before: Zhao Jingjuan Inventor before: Ma Haijian Inventor before: Liu Wen Inventor before: Liu Yuxin Inventor before: Ding Lei Inventor before: Zhao Min Inventor before: Jin Yujuan |
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| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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