CN115336593A - 嗜麦芽宅养单胞菌菌株Sma在制备杀死甘蔗黄单胞菌的菌剂中的应用 - Google Patents

嗜麦芽宅养单胞菌菌株Sma在制备杀死甘蔗黄单胞菌的菌剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于抗甘蔗白条黄单胞菌的技术领域。本发明提供了一种嗜麦芽宅养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)菌株Sma CGMCCNO.1.1788在制备杀死甘蔗黄单胞菌(Xanthomonas albilineans)的菌剂中的应用。本发明提供的菌株具有杀死甘蔗白条黄单胞菌的能力，同时免疫甘蔗后使其具有免疫或杀死甘蔗白条黄单胞菌的能力。

Description

嗜麦芽宅养单胞菌菌株Sma在制备杀死甘蔗黄单胞菌的菌剂 中的应用
技术领域
本发明属于抗甘蔗白条黄单胞菌的技术领域。
背景技术
由甘蔗白条黄单胞菌(Xanthomonas albilineans,Xa)引起的甘蔗白条病严重影响甘蔗的产量和糖分，是威胁甘蔗生产安全的重要病害。Xa在2007年已被列入《中华人民共和国进口植物检疫性有害生物》名录。
甘蔗白条黄单胞菌(Xanthomonas albilineans,Xa)主要通过甘蔗种苗和砍蔗工具传播，目前对甘蔗白条病尚无有效的治疗技术，因此针对该病害的技术多集中于前期检疫，通过提高对携带病原菌Xa的种苗的检测灵敏度，防止Xa随甘蔗种苗传播。而对已染病的甘蔗种苗或整片蔗田，一经发现只能采取全部销毁的策略。因此，亟需发展抵抗Xa的技术，以保证甘蔗的生产安全，减少经济损失。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种嗜麦芽宅养单胞菌 (Stenotrophomonasmaltophilia,Sma)在制备杀死甘蔗白条黄单胞菌 (Xanthomonas albilineans)的菌剂中的应用。
同时本发明还提供了一种嗜麦芽宅养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia,Sma)在制备免疫甘蔗抗甘蔗白条黄单胞菌(Xanthomonas albilineans)的菌剂中的应用。
本发明提供的菌株具有杀死甘蔗白条黄单胞菌的能力，同时能使甘蔗具有免疫甘蔗白条黄单胞菌的能力。
附图说明
图1.Sma与Xa等比例混合后Xa的活细胞数逐渐减少图。
图2.Sma菌液喷洒免疫增强甘蔗本身抗Xa的能力图。
其中，A是Sma分泌的代谢产物不影响Xa的存活率图。B是 Sma菌液喷洒免疫甘蔗后，甘蔗叶片分泌的代谢产物显著降低Xa的存活率图。
具体实施方式
从中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)购买获得嗜麦芽宅养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)菌株，其保藏编号为 CGMCC NO.1.1788的菌株，简称为Sma。
甘蔗白条黄单胞菌(Xanthomonas albilineans)菌株Xa-FJ1，其 NCBI菌株信息为Xa-FJ1，GENBANK NO.16069368，简称为Xa。
实施例
1.菌株Sma杀死甘蔗白条黄单胞菌Xa
麦芽宅养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)，简称为Sma。
甘蔗黄单胞菌(Xanthomonas albilineans)，简称为Xa。
实验准备：
培养基LB(胰蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，pH 7.0)。
培养基MW(蔗糖10g，胰蛋白胨5g，磷酸氢二钾0.5g，七水硫酸镁0.25g，亚硫酸钠0.05g，pH 6.8-7.0)。
实验步骤：
分别用LB培养基和MW培养基28℃摇菌培养Sma和Xa，分别用各自培养基调至OD600＝0.2，显微镜下观察调整比例，使二者混合后的细胞个数比例为1:1，混合培养1、2、3小时后分别取样，计数混合液中二者的细胞个数比例，各时间点的细菌细胞个数比分别为：1小时Xa:Sma＝0.6：1，2小时Xa:Sma＝0.5：1，3小时Xa: Sma＝0.2：1。
实验结果：
如图1所示，起始(0小时)时二者的细胞比例为1:1，随着混合培养时间的延长，混合液中Xa的比例逐渐下降，至3小时时，Xa：Sma＝0.2:1(1:5)，表明Sma能有效杀死混合培养液中的Xa。
2.喷洒免疫甘蔗能有效提高甘蔗本身抗Xa的能力
实验准备：
MgSO4 10mM，液氮，研钵，0.15％琼脂。
实验步骤：
分别用LB培养基和MW培养基28℃摇菌培养Sma和Xa，离心收集Sma菌体，用10mMMgSO4洗涤Sma菌体并重悬，用10mM MgSO4调菌液OD600＝0.4，用10mM MgSO4稀释菌液100倍后喷洒甘蔗进行免疫，同时喷洒10mM MgSO4作为对照组；重复2次，每两次间隔24小时。
取甘蔗叶片加入液氮研磨，将研磨物置于无菌培养皿中，在表面加入少量0.15％琼脂(40度左右)制成平整表面，待其凉透后，表面置0.2μm无菌滤膜，备用。
同时，在LB固体平板表面涂布Sma菌液，待菌液完全干后，表面置0.2μm无菌滤膜，备用。
将过夜培养的Xa菌液用MW培养基调至OD600＝0.4，取100μL 小心加到滤膜上方，28度培养。24小时后，用MW培养基从滤膜上洗下Xa并对其进行平板计数。
实验结果：
如图2所示，与对照组(1.000)相比，经Sma免疫处理的甘蔗叶片培养基中Xa的存活率下降至0.024(表1)，这表明Sma免疫处理甘蔗叶片产生的代谢产物透过滤膜杀死Xa(图2B)。
而Sma自身分泌的代谢产物透过滤膜，并没有导致Xa存活率的下降(图2A和表2)。
因此Sma免疫处理可显著增强甘蔗本身抵抗Xa的能力。
表1.Xa的存活数目
Figure BDA0003802783810000051
表2.Xa的存活数目
Figure BDA0003802783810000052

Claims (2)

1.嗜麦芽宅养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)菌株Sma CGMCC NO.1.1788在制备杀死甘蔗白条黄单胞菌(Xanthomonas albilineans)的菌剂中的应用。
2.嗜麦芽宅养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)菌株Sma CGMCC NO.1.1788在制备免疫甘蔗后使其具有抗或杀死甘蔗黄单胞菌(Xanthomonas albilineans)的菌剂中的应用。
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