CN115335410A - 生产多特异性抗原结合分子的方法 - Google Patents
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Abstract
提供了能够结合多种不同抗原但不非特异性交联两个或更多个免疫细胞例如T细胞的多特异性抗原结合分子。提供了产生或富集此类多特异性抗体蛋白的优选结构形式的方法，以及消除此类多特异性抗体蛋白的二硫化物异质性的方法。此外，提供了特异性识别多特异性抗体蛋白的优选形式的构象特异性抗体，以及构象特异性抗体的用途。
Description
技术领域
本发明涉及包含能够通过至少一个二硫键彼此连接的两个或多个抗原结合部分的多特异性抗原结合分子，以及生产这种多特异性抗原结合分子的方法。更具体地，本发明涉及增加或富集优选形式的多特异性抗体蛋白的方法，以及消除此类重组抗体蛋白的二硫化物异质性的方法。
背景技术
抗体作为药物受到关注，因为它们在血浆中高度稳定并且几乎没有副作用。在多种治疗性抗体中，某些类型的抗体需要效应细胞发挥抗肿瘤反应。抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)是效应细胞通过抗体的Fc区与存在于NK细胞和巨噬细胞上的Fc受体结合而针对抗体结合的细胞表现出的细胞毒性。迄今为止，已开发出多种可诱导ADCC发挥抗肿瘤功效的治疗性抗体作为治疗癌症的药物(Nat.Biotechnol.(2005)23,1073-1078)。
除了通过招募NK细胞或巨噬细胞作为效应细胞而诱导ADCC的抗体之外，自20世纪80年代以来，通过招募T细胞作为效应细胞而采用细胞毒性的T细胞招募抗体(TR抗体)已为人所知(NPL 2至4)。TR抗体是一种双特异性抗体，可识别并结合在T细胞上形成T细胞受体复合物的任何一个亚基，特别是CD3ε链和癌细胞上的抗原。目前正在开发几种TR抗体。卡妥索单抗(Catumaxomab)是一种针对EpCAM的TR抗体，已在欧盟获批用于治疗恶性腹水。此外，最近发现一种称为“双特异性T细胞衔接物(BiTE)”的TR抗体表现出很强的抗肿瘤活性(NPL5和NPL6)。博纳吐单抗(Blinatumomab)是一种针对CD19的BiTE分子，于2014年首次获得FDA批准。与利妥昔单抗相比，博纳吐单抗已被证明在体外针对CD19/CD20阳性癌细胞表现出更强的细胞毒活性，利妥昔单抗诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)(NPL 7)。
然而，众所周知，三功能抗体以不依赖癌抗原的方式同时与T细胞和细胞(例如NK细胞或巨噬细胞)结合，因此在细胞上表达的受体是交联的，并且以不依赖抗原的方式诱导多种细胞因子的表达。由于这种细胞因子表达的诱导，认为三功能抗体的全身施用会引起细胞因子风暴样副作用。事实上，据报道，在I期临床试验中，5微克/身体的极低剂量是对非小细胞肺癌患者全身施用卡妥索单抗的最大耐受剂量，而施用更高的剂量会导致多种严重的副作用(NPL 8)。当以如此低的剂量施用时，卡妥索单抗永远无法达到有效的血液水平。即，以如此低的剂量施用卡妥索单抗不能达到预期的抗肿瘤效果。
近年来，通过使用对FcγR的结合活性降低的Fc区，提供了一种修饰抗体，其引起由T细胞介导的细胞毒活性同时避免不良反应(PTL 1)。然而，鉴于其分子结构，即使这样的抗体在结合癌抗原时也不能作用于两种免疫受体，即CD3ε和FcγR。尚不清楚一种以癌抗原特异性方式发挥由T细胞介导的细胞毒活性和由除T细胞以外的细胞介导的细胞毒活性同时避免不良反应的抗体。
同时，与卡妥索单抗不同，一种双特异性sc(Fv)2形式分子(BiTE)，其没有Fcγ受体结合位点，因此它不会以不依赖癌症抗原的方式与T细胞和诸如NK细胞和巨噬细胞的细胞上表达的受体交联。然而，由于双特异性sc(Fv)2是没有Fc区的经修饰的低分子量抗体分子，因此问题在于其施用于患者后的血液半衰期明显短于常规用作治疗性抗体的IgG型抗体。事实上，据报道，体内施用的双特异性sc(Fv)2的血液半衰期约为数小时(NPL9和NPL10)。博纳吐单抗，一种与CD19和CD3结合的sc(Fv)2分子，已被批准用于治疗急性淋巴细胞性白血病。已发现博纳吐单抗在患者中的血清半衰期小于2小时(NPL 11)。在博纳吐单抗的临床试验中，使用微型泵通过持续静脉输注施用它。这种施用方法不仅给患者带来极大的不便，而且还存在由于设备故障等导致医疗事故的潜在风险。因此，不能说这样的施用方法是理想的。
T细胞在肿瘤免疫中发挥重要作用，并且已知被两个信号激活：1)T细胞受体(TCR)与主要组织相容性复合物(MHC)I类分子呈递的抗原肽结合并激活TCR；和2)T细胞表面的共刺激物与抗原呈递细胞上的配体结合并激活共刺激物。此外，T细胞表面上属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族和TNF受体超家族的分子(例如CD137(4-1BB))的激活，已被描述为对T细胞激活很重要(NPL 12)。在这方面，CD137激动剂抗体已被证明显示出抗肿瘤作用，这在实验上已被证明主要是由于CD8阳性T细胞和NK细胞的激活(NPL 13)。还可以理解的是，经过工程改造的T细胞具有嵌合抗原受体分子(CAR-T细胞)，该分子由作为细胞外结构域的肿瘤抗原结合结构域和作为细胞内结构域的CD3和CD137信号转导结构域组成，可以增强功效的持久性。(Porter,N ENGL J MED,2011,365；725-733(NPL 14))。然而，此类CD137激动剂抗体由于其非特异性肝毒性而产生的副作用在临床和非临床上一直是一个问题，并且药剂的开发并未取得进展(Dubrot,Cancer Immunol.Immunother.,2010,28,512-22(NPL 15))。已提出副作用的主要原因涉及抗体通过抗体恒定区与Fcγ受体结合(Schabowsky,Vaccine,2009,28,512-22(NPL 16))。此外，据报道，对于靶向属于TNF受体超家族的受体的激动剂抗体在体内发挥激动剂活性，通过Fcγ受体表达细胞(FcγRII-表达细胞)的抗体交联是必要的(Li，Proc Natl Acad Sci USA.2013,110(48),19501-6(NPL 17))。WO2015/156268(PTL2)描述了具有CD137激动活性的结合结构域和与肿瘤特异性抗原的结合结构域的双特异性抗体仅在表达肿瘤特异性抗原的细胞存在时才能发挥CD137激动活性并激活免疫细胞。
已经报道了包含肿瘤特异性抗原(EGFR)结合结构域、CD137结合结构域和CD3结合结构域的三特异性抗体(WO2014116846)。然而，由于具有这种分子形式的抗体可以同时结合三种不同的抗原，因此推测这些三特异性抗体可能通过同时与CD3和CD137结合导致表达CD3ε的T细胞和表达CD137的细胞(例如T细胞、B细胞、NK细胞、DC等)之间的交联。在这种情况下，目前尚不清楚一种抗体，其以癌抗原特异性方式既能发挥由T细胞介导的细胞毒活性，又能通过CD137激活T细胞和其他免疫细胞的活性，同时避免不良反应。
对于具有多个二硫键的抗体，已观察到抗体制剂之间的结构异质性，尽管这种异质性背后的原因仍未得到解释。例如，美国专利申请公开号：2005/0161399，Dillon等人讨论了分析高分子量蛋白质(包括抗体)的反相LC/MS方法。此外，美国专利申请公布号：2006/194280，Dillon等人涉及通过用还原/氧化偶联剂和任选地离液剂处理重组IgG蛋白的制剂，进行瞬时富集特定IgG同工型的方法。
引用列表
专利文献
[PTL 1]WO 2011/073985
[PTL 2]WO 2011/156268
[PTL 3]WO2014116846
非专利文献
[NPL 1]Nat.Biotechnol.(2005)23,1073-1078
[NPL 2]Nature.1985Apr 18-24；314(6012):628-31.
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[NPL 12]Vinay,2011,Cellular&Molecular Immunology,8,281-284
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[NPL 14]Porter,N ENGL J MED,2011,365；725-733
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[NPL 16]Schabowsky,Vaccine,2009,28,512-22
[NPL 17]Li,Proc Natl Acad Sci USA.2013,110(48),19501-6
发明内容
技术问题
目前尚不清楚一种抗体，其以靶抗原特异性方式既能发挥由免疫细胞(例如T细胞)介导的细胞毒活性，又能通过共刺激分子(例如CD137)激活T细胞和/或其他免疫细胞的活性，同时避免不良反应。本发明的一个目的是提供抗原结合分子，其表现出由免疫细胞(例如T细胞)介导的有效的靶特异性细胞杀伤功效，同时具有降低的或最小的副作用。
本发明的另一个目的是提供生产多特异性抗原结合分子的方法、增加或富集优选形式的多特异性抗体蛋白的方法、以及消除这种重组抗体蛋白的二硫化物异质性的方法。
解决问题的方案
提供了能够结合多种不同抗原(例如，T细胞上的CD3和T细胞、NK细胞、DC细胞和/或类似细胞上的CD137)但不非特异性交联两种或更多种免疫细胞(例如T细胞)的抗原结合分子。此类多特异性抗原结合分子能够调节和/或激活免疫反应，同时规避由常规多特异性抗原结合分子与在不同细胞上表达的抗原结合引起的不同细胞(例如不同T细胞)之间的交联，当多特异性抗原结合分子用作药物时，所述交联被认为是造成不良反应的原因。
一方面，本发明的抗原结合分子提供具有非常独特的结构形式的新的抗原结合分子，其改善或增强了多特异性抗原结合分子的功效。具有独特结构形式的新抗原结合分子提供了增加数量的抗原结合结构域，从而使效应细胞和靶细胞上的各个抗原的效价和/或特异性提高，而不需要的副作用减少。
在另一方面，本发明的具有这种新的独特结构形式的抗原结合分子之一包含至少两个(例如，通过Fc、二硫键、接头等)连接在一起的第一和第二抗原结合部分(例如Fab结构域)，它们各自与效应细胞(例如，免疫细胞如T细胞、NK细胞、DC细胞等)上的第一和/或第二抗原结合，并且进一步包含与第一或第二抗原结合部分中的任一个连接的第三(和任选地第四)抗原结合结构域，其与靶细胞(例如，肿瘤细胞)上的第三抗原结合。
在另一方面，本发明的具有这种新的独特结构形式的抗原结合分子中的一个至少包含(例如，通过Fc、二硫键、接头等)连接在一起的第一抗原结合部分和第二抗原结合部分(例如Fab结构域)，它们各自结合效应细胞(例如，免疫细胞，如T细胞、NK细胞、DC细胞等)上的第一和/或第二抗原，并且进一步包含与第一或第二抗原结合部分中的任一个连接的第三(和任选地第四)抗原结合部分，其与靶细胞(例如，肿瘤)上的第三抗原结合，其中能够结合第一抗原和/或第二抗原的第一和第二抗原结合部分(例如Fab结构域)分别包含至少一个氨基酸突变，其在第一和第二抗原结合部分之间产生二硫键，以使它们彼此靠近，并且例如由于空间位阻或两个双Fab之间的较短距离而促进顺式抗原结合到相同的单个效应细胞，从而通过防止由两个双Fab以DLL3非依赖性方式介导的两个表达CD3/CD137的免疫细胞的不期望的交联来改善三特异性抗体(三特异性Ab)的安全谱。在一个具体方面，所述第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个是Fab并且在CHl区包含至少一个半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，所述至少一个半胱氨酸残基能够在第一抗原结合部分的CH1区和第二抗原结合部分的CH1区之间形成至少一个二硫键。在另一个具体方面，所述第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个在CH1区中根据EU编号的位置191处包含一个半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，所述半胱氨酸残基能够在第一抗原结合部分的CH1区和第二抗原结合部分的CH1区之间形成一个二硫键。
出人意料地发现具有这种独特结构形式的抗原结合分子与其他多特异性抗体形式(例如BiTE)相比显示出优异的功效，同时表现出减少或最小的由于不同细胞(例如，效应细胞，如T细胞)之间不希望的交联引起的脱靶副作用。在一个方面，本发明涉及多特异性抗原结合分子，其包含第一抗原结合部分和第二抗原结合部分；以及第三抗原结合部分，所述第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个能够结合CD3和CD137，但不同时结合CD3和CD137(即能够与CD3和CD137结合，但不能同时结合)；所述第三抗原结合部分能够结合DLL3，优选人DLL3，其更有效地诱导T细胞依赖性细胞毒性，同时规避其他多特异性抗原结合分子可能具有的不利毒性问题或副作用。本发明提供多特异性抗原结合分子和药物组合物，其通过包含抗原结合分子作为活性成分，可以治疗各种癌症，特别是与DLL3相关的癌症，例如DLL3阳性肿瘤。
在另一个方面，本发明涉及产生新形式的多特异性抗原结合分子的方法，所述新形式包含在第一和第二抗原结合部分(例如在CH1区)之间的一个或多个二硫键；用于增加或富集具有所述至少一个二硫键的多特异性抗体蛋白的优选形式的方法，以及通过在允许所述至少一个二硫键(例如在CH1区)有效且正确地形成的条件下使抗体制剂与还原剂接触来消除此类重组抗体蛋白的二硫化物异质性的方法。在另一方面，本发明涉及特异性识别多特异性抗体蛋白的优选形式的构象特异性抗体，以及构象特异性抗体在纯化、分析或定量含抗体样品中的用途。
在一个具体的方面，本公开提供以下内容:
[1]多特异性抗原结合分子，其包含：
第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，其各自能够结合CD3和CD137，但不同时结合CD3和CD137；和
第三抗原结合部分，其能够结合第三抗原，优选在癌细胞/组织上表达的抗原。
[1A]多特异性抗原结合分子，其包含：
第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，其各自能够结合CD3和CD137，但不同时结合CD3和CD137；和
第三抗原结合部分，其能够结合DLL3，优选人DLL3。
[2][1]至[1A]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含如下(a1)至(a17)中任一项：
(a1)SEQ ID NO:17的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:31的重链CDR 2、SEQ IDNO:45的重链CDR 3、SEQ ID NO:64的轻链CDR 1、SEQ ID NO:69的轻链CDR 2和SEQ ID NO:74的轻链CDR 3；
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(a3)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a4)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ ID NO:75的轻链CDR 3；
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(a6)SEQ ID NO:22的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:36的重链CDR 2、SEQ IDNO:50的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
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(a9)SEQ ID NO:24的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:38的重链CDR 2、SEQ IDNO:52的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a10)SEQ ID NO:25的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:39的重链CDR 2、SEQID NO:53的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a11)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a12)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a13)SEQ ID NO:27的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:的41重链CDR 2、SEQID NO:55的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a14)SEQ ID NO:28的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:42的重链CDR 2、SEQID NO:56的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a15)SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR 2、SEQID NO:84的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ IDNO:75的轻链CDR 3；
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
[3][1]或[2]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a17)中的任一项：
(a1)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a6)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a7)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a8)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a9)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a10)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a11)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a12)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a13)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a14)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；和
(a15)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
[4]如[1]～[3]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自为Fab分子，并且包含在第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分之间形成的至少一个二硫键，优选地，所述至少一个二硫键在不在铰链区的氨基酸残基(半胱氨酸)之间形成，优选在每个抗原结合部分的CH1区中的氨基酸残基(半胱氨酸)之间形成。
[4A][4]所述的多特异性抗原结合分子，其中，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自是Fab，并且包含在所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自的CH1区中根据EU编号在位置191处的氨基酸残基间形成的一个二硫键。
[5][1]至[4A]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，所述第三抗原结合部分与所述第一抗原结合部分或所述第二抗原结合部分中的任一个融合。
[5A][5]所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第三抗原结合部分是Fab或scFv。
[6][5]至[5A]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第一、第二和第三抗原结合部分各自是Fab分子，其中所述第三抗原结合部分在Fab重链(CH1)的C末端与所述第一抗原结合部分或第二抗原结合部分之一的Fab重链的N末端融合，任选地通过肽接头融合。
[6A][5]至[6]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，所述肽接头选自由SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249或SEQ ID NO:259的氨基酸序列组成的组。
[6B][1]至[6A]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，所述第一抗原结合部分与所述第二抗原结合部分相同。
[7][1]至[6B]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第三抗原结合部分是交换Fab分子，其中Fab轻链的可变区和Fab重链的可变区被交换，并且其中第一和第二抗原结合部分各自是常规的Fab分子。
[8][7]所述的多特异性抗原结合分子，其中在所述第一和第二抗原结合部分各自的轻链的恒定结构域CL中，位置123和/或124处的氨基酸独立地被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)取代(根据Kabat编号)，并且其中在所述第一和第二抗原结合部分各自的重链的恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸和/或位置213处的氨基酸独立地是被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)取代(根据EU编号编号)。
[9][8]所述的多特异性抗原结合分子，其中，在所述第一和第二抗原结合部分各自的轻链的恒定结构域CL中，位置123和124处的氨基酸分别是精氨酸(R)和赖氨酸(K)(根据Kabat编号)，并且其中在所述第一和第二抗原结合部分各自的重链的恒定结构域CH1中，位置147和213处的氨基酸是谷氨酸(E)(根据EU编号编号)。
[10][1]至[9]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，能够与DLL3结合的第三抗原结合部位包含抗体可变区，所述抗体可变区包含如下(a1)至(a5)中任一项：
(a1)SEQ ID NO:233的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:234的重链CDR 2、SEQID NO:235的重链CDR 3、SEQ ID NO:237的轻链CDR 1、SEQ ID NO:238的轻链CDR 2和SEQID NO:239的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:276的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:277的重链CDR 2、SEQID NO:278的重链CDR 3、SEQ ID NO:279的轻链CDR 1、SEQ ID NO:280的轻链CDR 2和SEQID NO:281的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:285的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:286的重链CDR 2、SEQID NO:287的重链CDR 3、SEQ ID NO:288的轻链CDR 1、SEQ ID NO:289的轻链CDR 2和SEQID NO:290的轻链CDR 3；
(a4)与选自(a1)至(a3)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a5)与选自(a1)至(a3)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
[11][1]至[10]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，能够与DLL3结合的第三抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含如下(a1)至(a6)中任一项：
(a1)包含SEQ ID NO:232的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:236的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:264的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:265的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:266的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:267的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:268的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:269的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)与选自(a1)至(a4)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a6)与选自(a1)至(a4)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
[12][1]至[11]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其进一步包含Fc结构域。
[12A][12]所述的多特异性抗原结合分子，其中所述Fc结构域由能够稳定缔合的第一和第二Fc区亚基组成，并且其中所述Fc结构域与天然人IgG1 Fc结构域相比，表现出对人Fcγ受体的结合亲和力降低。
[12C][12]至[12A]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，与天然IgG的Fc区相比，Fc结构域在酸性pH条件(例如pH 5.8)下表现出增强的FcRn结合活性。
[12D][12C]所述的多特异性抗原结合分子，其中，Fc结构域包含根据EU编号在位置434处的Ala；位置438处的Glu、Arg、Ser或Lys；位置440处的Glu、Asp或Gln。
[12E][12D]所述的多特异性抗原结合分子，其中，Fc结构域包含根据EU编号位置434处的Ala；位置438处的Arg或Lys；和位置440处的Glu或Asp。
[12F][12E]所述的多特异性抗原结合分子，其中，Fc结构域还包含根据EU编号在位置428处的Ile或Leu；和/或位置436处的Ile、Leu、Val、Thr或Phe。
[12G][12C]至[12F]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，Fc结构域包含选自由以下组成的组的氨基酸取代的组合：
根据EU编号
(a)N434A/Q438R/S440E；
(b)N434A/Q438R/S440D；
(c)N434A/Q438K/S440E；
(d)N434A/Q438K/S440D；
(e)N434A/Y436T/Q438R/S440E；
(f)N434A/Y436T/Q438R/S440D；
(g)N434A/Y436T/Q438K/S440E；
(h)N434A/Y436T/Q438K/S440D；
(i)N434A/Y436V/Q438R/S440E；
(j)N434A/Y436V/Q438R/S440D；
(k)N434A/Y436V/Q438K/S440E；
(l)N434A/Y436V/Q438K/S440D；
(m)N434A/R435H/F436T/Q438R/S440E；
(n)N434A/R435H/F436T/Q438R/S440D；
(o)N434A/R435H/F436T/Q438K/S440E；
(p)N434A/R435H/F436T/Q438K/S440D；
(q)N434A/R435H/F436V/Q438R/S440E；
(r)N434A/R435H/F436V/Q438R/S440D；
(s)N434A/R435H/F436V/Q438K/S440E；
(t)N434A/R435H/F436V/Q438K/S440D；
(u)M428L/N434A/Q438R/S440E；
(v)M428L/N434A/Q438R/S440D；
(w)M428L/N434A/Q438K/S440E；
(x)M428L/N434A/Q438K/S440D；
(y)M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E；
(z)M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440D；
(aa)M428L/N434A/Y436T/Q438K/S440E；
(ab)M428L/N434A/Y436T/Q438K/S440D；
(ac)M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440E；
(ad)M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440D；
(ae)M428L/N434A/Y436V/Q438K/S440E；
(af)M428L/N434A/Y436V/Q438K/S440D；
(ag)L235R/G236R/S239K/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E；和
(ah)L235R/G236R/A327G/A330S/P331S/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E。
[12H][12C]至[12G]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，Fc结构域包含M428L/N434A/Q438R/S440E的氨基酸取代的组合。
[12I][12]至[12H]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，所述Fc结构域为IgG Fc结构域，优选为人IgG Fc结构域，更优选为人IgG1 Fc结构域。
[12J][12]至[12I]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中，所述Fc结构域包含以下任一项：
(a)包含SEQ ID NO:100所示氨基酸序列的第一Fc亚基和包含SEQ ID NO:111所示氨基酸序列的第二Fc亚基；或
(b)包含SEQ ID NO:99所示氨基酸序列的第一Fc亚基和包含SEQ ID NO:109所示氨基酸序列的第二Fc亚基。
[12K][12]至[12J]中任一项的多特异性抗原结合分子，其中所述第一和第二抗原结合部分各自为Fab，其中所述第一抗原结合部分在Fab重链的C末端与Fc结构域的第一或第二亚基的N末端融合，所述第二抗原结合部分在Fab重链的C末端与Fc结构域的剩余亚基的N末端融合。
[12L][12K]所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第三抗原结合部分在C末端与所述第一抗原结合部分或第二抗原结合部分之一的Fab重链的N末端融合，任选地通过肽接头融合。
[13][1]至[12L]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其包含选自以下(a1)至(a15)中任一项的组合的五条多肽链：
(a1)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a2)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a3)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a4)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a5)包含SEQ ID NO:216的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:229的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a6)包含SEQ ID NO:217的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a7)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a8)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a9)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a10)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:230的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a11)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:212的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a12)包含SEQ ID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a13)包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a14)包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；和
(a15)包含SEQ ID NO:228的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:231的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
其中，优选地，五条多肽链(链1至链5)按照图1(a)所示的方向相互连接和/或缔合。
本发明的另一方面涉及：
[1]一种用于(i)生产多特异性抗原结合分子的制剂(其已由哺乳动物细胞重组生产)，(ii)纯化具有期望构象的多特异性抗体结合分子，或(iii)改进多特异性抗原性结合分子制剂的同质性的方法；
其中多特异性抗原结合分子包含第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个是Fab并且能够结合第一抗原和不同于第一抗原的第二抗原，但不同时结合两种抗原；
其中，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个包含至少一个不在铰链区的半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，优选地所述至少一个半胱氨酸残基位于CH1区；所述至少一个半胱氨酸残基能够在所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分之间(优选在CH1区)形成至少一个二硫键。
其中所述方法包括使所述制剂与还原剂接触。
[2][1]的方法，其中所述第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个在CH1区中根据EU编号的位置191处包含一个半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，所述半胱氨酸残基能够在第一抗原结合部分的CH1区和第二抗原结合部分的CH1区之间形成一个二硫键。
[3][1]或[2]的方法，其中所述将制剂与还原试剂接触允许和/或促进形成至少一个二硫键，所述二硫键形成于位于CH1区的氨基酸残基之间或在CH1区的位置191处(EU编号)。
[4][3]的方法，其中所述多特异性抗原结合分子制剂(在与还原剂接触之前)包含两种或更多种结构同工型，它们的区别在于位于CH1区的氨基酸残基之间或位于CH1区的位置191处(EU编号)形成的至少一个二硫键，并且其中与还原剂的接触优先富集或增加结构同工型的群体，该结构同工型具有在位于CH1区的氨基酸残基之间或位于CH1区的位置191处(EU编号)的至少一个二硫键。
[5][1]至[4]中任一项所述的方法，其中与所述多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约3至约10。
[6][5]的方法，其中与多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约6、7或8。
[7][6]的方法，其中与多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约7。
[8][5]的方法，其中与多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约3。
[9][1]至[8]中任一项所述的方法，其中所述还原剂选自由TCEP、2-MEA、DTT、半胱氨酸、GSH和Na2SO3组成的组。
[10][9]的方法，其中所述还原剂是TCEP，优选0.25mM TCEP。
[11][1]至[9]中任一项所述的方法，其中，还原剂的浓度为约0.01mM至约100mM。
[12][11]的方法，其中还原剂的浓度为约0.01、0.05、0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10、25、50、100mM，优选约0.25mM。
[13][1]至[12]中任一项所述的方法，其中，所述接触步骤进行至少30分钟。
[14][1]至[12]中任一项所述的方法，其中所述接触步骤进行约10分钟至约48小时。
[15][1]至[12]中任一项所述的方法，其中，所述接触步骤进行约2小时或约18小时。
[16][1]至[15]中任一项所述的方法，其中，所述接触步骤在约4摄氏度至37摄氏度的温度下进行，优选在23摄氏度至25摄氏度的温度下进行。
[17][1]至[16]中任一项的方法，其中所述多特异性抗原结合分子在所述与还原剂接触步骤之前被至少部分纯化。
[18][17]的方法，其中所述多特异性抗原结合分子在所述接触之前通过亲和层析(优选蛋白A层析)部分纯化。
[19][1]至[18]中任一项的方法，其中所述多特异性抗原结合分子的浓度为约0.1mg/ml至约50mg/ml或更高。
[20][19]的方法，其中所述多特异性抗原结合分子的浓度为约10mg/ml或约20mg/ml。
[21][1]至[20]中任一项所述的方法，进一步包括促进半胱氨酸二硫键再氧化的步骤，优选通过除去还原剂，优选通过透析或缓冲液交换。
[22][1]至[21]中任一项的方法，其中第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个能够结合CD3和CD137，但不同时结合CD3和CD137两者。
[23][22]的方法，其中，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a17)中的任一项：
(a1)SEQ ID NO:17的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:31的重链CDR 2、SEQ IDNO:45的重链CDR 3、SEQ ID NO:64的轻链CDR 1、SEQ ID NO:69的轻链CDR 2和SEQ ID NO:74的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:18的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:32的重链CDR 2、SEQ IDNO:46的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a4)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ ID NO:75的轻链CDR 3；
(a5)SEQ ID NO:20的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:34的重链CDR 2、SEQ IDNO:48的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a6)SEQ ID NO:22的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:36的重链CDR 2、SEQ IDNO:50的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a7)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a8)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ ID NO:76的轻链CDR 3；
(a9)SEQ ID NO:24的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:38的重链CDR 2、SEQ IDNO:52的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a10)SEQ ID NO:25的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:39的重链CDR 2、SEQID NO:53的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a11)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a12)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a13)SEQ ID NO:27的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:41的重链CDR 2、SEQID NO:55的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a14)SEQ ID NO:28的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:42的重链CDR 2、SEQID NO:56的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a15)SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR 2、SEQID NO:84的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ IDNO:75的轻链CDR 3；
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(A17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
[24][23]的方法，其中，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a17)中的任一项：
(a1)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a6)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a7)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a8)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a9)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a10)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a11)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a12)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a13)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a14)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；和
(a15)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
[25][1]至[24]中任一项的方法，其中所述多特异性抗原结合分子进一步包含第三抗原结合部分，所述第三抗原结合部分能够结合不同于第一和第二抗原的第三抗原，优选在癌细胞/组织上表达的抗原。
[26][25]的多特异性抗原结合分子，其中，所述第三抗原结合部分与所述第一抗原结合部分或所述第二抗原结合部分中的任一个融合。
[27][25]至[26]中任一项所述的方法，其中所述第三抗原结合部分是Fab或scFv。
[28][25]至[27]中任一项所述的方法，其中所述第一、第二和第三抗原结合部分中的每一个是Fab分子，其中所述第三抗原结合部分在Fab重链(CH1)的C末端与所述第一抗原结合部分或第二抗原结合部分中任一个的Fab重链的N末端融合，任选地通过肽接头融合。
[29][28]的方法，其中，所述肽接头选自由SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249或SEQID NO:259的氨基酸序列组成的组。
[30][1]至[29]中任一项所述的方法，其中，所述第一抗原结合部分与所述第二抗原结合部分相同。
[30A][25]至[30]中任一项所述的方法，其中所述第三抗原结合部分是交换Fab分子，其中Fab轻链的可变区和Fab重链的可变区被交换，并且其中第一和第二抗原结合部分中的每一个是常规的Fab分子。
[30B][25]至[30A]中任一项所述的方法，其中在所述第一和第二抗原结合部分中每一个的轻链的恒定结构域CL中，位置123和/或124处的氨基酸独立地被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)取代，并且其中在所述第一和第二抗原结合部分中每一个的重链的恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸和/或位置213处的氨基酸独立地被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据EU编号编号)取代。
[30C]30B]的方法，其中，在所述第一和第二抗原结合部分中每一个的轻链的恒定结构域CL中，位置123和124处的氨基酸分别是精氨酸(R)和赖氨酸(K)(根据Kabat编号)，并且其中在所述第一和第二抗原结合部分中每一个的重链的恒定结构域CH1中，位置147和213处的氨基酸是谷氨酸(E)(根据EU编号编号)。
[31][1]至[30]中任一项的方法，其中所述第三抗原结合部分能够结合DLL3，优选人DLL3。
[32][31]的方法，其中，能够结合DLL3的第三抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含SEQ ID NO:233的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:234的重链CDR 2、SEQ ID NO:235的重链CDR 3、SEQ ID NO:237的轻链CDR 1、SEQ ID NO:238的轻链CDR 2和SEQ ID NO:239的轻链CDR 3。
[33][32]的方法，其中能够结合DLL3的第三抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含：包含SEQ ID NO:232的氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID NO:236的氨基酸序列的轻链可变区。
[34][1]至[33]中任一项的方法，其中所述多特异性抗原结合分子进一步包含Fc结构域。
[35][34]的方法，其中所述Fc结构域由能够稳定缔合的第一和第二Fc区亚基组成，并且其中所述Fc结构域与天然人IgG1 Fc结构域相比，表现出对人Fcγ受体的结合亲和力降低。
[36][1]至[35]中任一项所述的方法，其中所述多特异性抗原结合分子包含选自以下(a1)至(a15)中任一项的组合的五条多肽链：
(a1)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a2)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a3)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a4)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a5)包含SEQ ID NO:216的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:229的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a6)包含SEQ ID NO:217的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a7)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a8)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a9)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a10)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:230的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a11)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:212的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a12)包含SEQ ID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a13)包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a14)包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；和
(a15)包含SEQ ID NO:228的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:231的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
其中，优选地，五条多肽链(链1至链5)按照图1(a)所示的方向相互连接和/或缔合。
[37][1]至[36]中任一项所述的方法，其中，第四多肽(链4)和第五多肽(链5)相同。
[38]根据[1]至[37]中任一项的方法制备的多特异性抗原结合分子的制剂，所述制剂具有在CH1区(根据EU编号的位置191)具有至少一个二硫键的所述多特异性抗原结合分子的同质群体。
[39]一种根据[1]至[37]中任一项的方法制备的多特异性抗原结合分子的制剂，所述制剂具有至少50％、60％、70％、80％、90％，优选至少95％摩尔比的所述多特异性抗原结合分子，所述多特异性抗原结合分子在CH1区(根据EU编号的位置191)具有至少一个二硫键。
本发明的又一方面涉及：
[1]一种多特异性抗原结合分子的生产方法，其中，所述多特异性抗原结合分子包含：
第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，其中第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个是Fab并且能够结合第一抗原和不同于第一抗原的第二抗原，但不同时结合两种抗原；和
包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的第三抗原结合部分，其能够结合不同于第一和第二抗原的第三抗原，优选在癌症细胞/组织上表达的抗原，
所述方法包括：
(a)提供一种或多种核酸，其编码：
i.第一多肽，其包含(从N端至C端)第三抗原结合部分的VH或VL，任选地重链恒定区(CH1)；和第一抗原结合部分的VH或VL，重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
ii.第二多肽，其包含(从N端到C端)第三抗原结合部分的VH或VL，任选地轻链恒定区(CL)；
iii.第三多肽，其包含(从N端至C端)第二抗原结合部分的VH或VL、重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
iv.第四多肽，其包含(从N端至C端)第二抗原结合部分的VH或VL，任选地轻链恒定区(CL)；和
v.第五多肽，其包含(从N端到C端)第一抗原结合部分的VH或VL，任选地轻链恒定区(CL)
(b)将(a)中产生的一种或多种核酸引入宿主细胞；
(c)培养宿主细胞以使(i)至(v)中的多肽被表达；和
(d)从步骤(c)中培养的细胞的培养液中收集包含(i)至(v)中的五种多肽的多特异性抗原结合分子；并且其中任选地，(iv)至(v)中的多肽是相同的；和
其中，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个包含至少一个不在铰链区的半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，优选地所述至少一个半胱氨酸残基位于CH1区；所述至少一个半胱氨酸残基能够在所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分之间(优选在CH1区)形成至少一个二硫键。
其中所述方法包括使所述制剂与还原剂接触。
[2][1]的方法，其中所述第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个在CH1区中根据EU编号的位置191处包含一个半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，所述半胱氨酸残基能够在第一抗原结合部分的CH1区和第二抗原结合部分的CH1区之间形成一个二硫键。
[3][1]至[2]中任一项所述的方法，进一步包括步骤(e)使从步骤(d)收集的多特异性抗原结合分子(多特异性抗原结合分子)制剂与还原剂在还原条件下接触，所述还原条件允许在CH1区(根据EU编号的位置191)中的半胱氨酸形成一个或多个二硫键。
[4][3]的方法，其中从步骤(d)收集的所述多特异性抗原结合分子制剂(在与还原剂接触之前)包含两种或更多种结构同工型，它们的区别在于位于CH1区的氨基酸残基之间或位于CH1区的位置191处(EU编号)形成的至少一个二硫键，并且其中步骤(e)与还原剂的接触优先富集或增加多特异性抗原结合分子结构同工型的群体，该多特异性抗原结合分子结构同工型具有在位于CH1区的氨基酸残基之间或位于CH1区的位置191处(EU编号)的至少一个二硫键。
[5][3]至[4]中任一项所述的方法，其中与所述多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约3至约10。
[6][5]的方法，其中与多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约6、7或8。
[7][6]的方法，其中与多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约7。
[8][5]的方法，其中与多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约3。
[9][3]至[8]中任一项所述的方法，其中所述还原剂选自由TCEP、2-MEA、DTT、半胱氨酸、GSH和Na2SO3组成的组。
[10][9]的方法，其中所述还原剂是TCEP，优选0.25mM TCEP。
[11][3]至[9]中任一项所述的方法，其中，还原剂的浓度为约0.01mM至约100mM。
[12][11]的方法，其中还原剂的浓度为约0.01、0.05、0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10、25、50、100mM，优选约0.25mM。
[13][3]至[12]中任一项所述的方法，其中，所述接触步骤进行至少30分钟。
[14][3]至[12]中任一项所述的方法，其中所述接触步骤进行约10分钟至约48小时。
[15][3]至[12]中任一项所述的方法，其中，所述接触步骤进行约2小时或约18小时。
[16][3]至[15]中任一项所述的方法，其中，所述接触步骤在约4摄氏度至37摄氏度的温度下进行，优选在23摄氏度至25摄氏度的温度下进行。
[17][3]至[16]中任一项的方法，其中所述多特异性抗原结合分子在所述与还原剂接触步骤之前至少部分纯化。
[18][17]的方法，其中所述多特异性抗原结合分子在所述接触之前通过亲和层析(优选蛋白A层析)部分纯化。
[19][3]至[18]中任一项的方法，其中所述多特异性抗原结合分子的浓度为约0.1mg/ml至约50mg/ml或更高。
[20][19]的方法，其中所述多特异性抗原结合分子的浓度为约10mg/ml或约20mg/ml。
[21][3]至[20]中任一项所述的方法，进一步包括促进半胱氨酸二硫键再氧化的步骤，优选通过除去还原剂，优选通过透析或缓冲液交换。
[22]根据[3]至[21]中任一项的方法制备的多特异性抗原结合分子的制剂，所述制剂具有在CH1区(根据EU编号的位置191)具有至少一个二硫键的所述多特异性抗原结合分子的同质群体。
[23]一种根据[3]至[21]中任一项的方法制备的多特异性抗原结合分子的制剂，所述制剂具有至少50％、60％、70％、80％、90％，优选至少95％摩尔比的所述多特异性抗原结合分子，所述多特异性抗原结合分子在CH1区(根据EU编号的位置191)具有至少一个二硫键。
[24][1]至[21]中任一项所述的方法，其中所述第三抗原结合部分是常规的Fab，和其中
(a)第一多肽，其包含(从N端至C端)第三抗原结合部分的VH，重链恒定区(CH1)；和第一抗原结合部分的VH，重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
(b)第二多肽，其包含(从N端到C端)第三抗原结合部分的VL，和轻链恒定区(CL)；
(c)第三多肽，其包含(从N端至C端)第二抗原结合部分的VH、重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
(d)第四多肽，其包含(从N端至C端)第二抗原结合部分的VL，和轻链恒定区(CL)；以及
(e)第五多肽，其包含(从N端到C端)第一抗原结合部分的VL，和轻链恒定区(CL)。
[25][1]至[21]中任一项所述的方法，其中所述第三抗原结合部分是VH/VL交换Fab分子(其中Fab轻链的可变区和Fab重链的可变区被交换)，并且其中
(a)第一多肽，其包含(从N端至C端)第三抗原结合部分的VL，重链恒定区(CH1)；和第一抗原结合部分的VH，重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
(b)第二多肽，其包含(从N端到C端)第三抗原结合部分的VH，和轻链恒定区(CL)；
(c)第三多肽，其包含(从N端至C端)第二抗原结合部分的VH、重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
(d)第四多肽，其包含(从N端至C端)第二抗原结合部分的VL，和轻链恒定区(CL)；以及
(e)第五多肽，其包含(从N端到C端)第一抗原结合部分的VL，和轻链恒定区(CL)。
[26][25]的方法，其中，在所述第一和第二抗原结合部分中每一个的CL中，位置123和124处的氨基酸分别是精氨酸(R)和赖氨酸(K)(根据Kabat编号)，并且其中在所述第一和第二抗原结合部分中每一个的重链的恒定结构域CH1中，位置147和213处的氨基酸是谷氨酸(E)(根据EU编号编号)。
[26-2][1]至[21]中任一项的方法，其中在步骤(a)(i)中，在第三抗原结合部分和第一抗原结合部分的VH或VL之间的第一多肽进一步包含肽接头。
[27][26-2]的方法，其中，所述肽接头选自由SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249或SEQ ID NO:259的氨基酸序列组成的组。
[28][1]至[27]中任一项的方法，其中第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个能够结合CD3和CD137，但不同时结合CD3和CD137两者。
[29][28]的方法，其中，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a17)中的任一项：
(a1)SEQ ID NO:17的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:31的重链CDR 2、SEQ IDNO:45的重链CDR 3、SEQ ID NO:64的轻链CDR 1、SEQ ID NO:69的轻链CDR 2和SEQ ID NO:74的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:18的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:32的重链CDR 2、SEQ IDNO:46的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a4)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ ID NO:75的轻链CDR 3；
(a5)SEQ ID NO:20的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:34的重链CDR 2、SEQ IDNO:48的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a6)SEQ ID NO:22的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:36的重链CDR 2、SEQ IDNO:50的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a7)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a8)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ ID NO:76的轻链CDR 3；
(a9)SEQ ID NO:24的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:38的重链CDR 2、SEQ IDNO:52的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a10)SEQ ID NO:25的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:39的重链CDR 2、SEQID NO:53的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a11)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a12)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a13)SEQ ID NO:27的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:41的重链CDR 2、SEQID NO:55的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a14)SEQ ID NO:28的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:42的重链CDR 2、SEQID NO:56的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a15)SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR 2、SEQID NO:84的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ IDNO:75的轻链CDR 3；
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
[30][29]的方法，其中，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a17)中的任一项：
(a1)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a6)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a7)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a8)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a9)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a10)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a11)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a12)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a13)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a14)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；和
(a15)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
[31][1]至[30]中任一项的方法，其中第三抗原结合部分能够结合DLL3，优选人DLL3。
[32][31]的方法，其中，能够结合DLL3的第三抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含SEQ ID NO:233的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:234的重链CDR 2、SEQ ID NO:235的重链CDR 3、SEQ ID NO:237的轻链CDR 1、SEQ ID NO:238的轻链CDR 2和SEQ ID NO:239的轻链CDR 3。
[33][32]的方法，其中能够结合DLL3的第三抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含:包含SEQ ID NO:232的氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID NO:236的氨基酸序列的轻链可变区。
[34][1]至[33]中任一项的方法，其中所述多特异性抗原结合分子进一步包含Fc结构域。
[35][34]的方法，其中所述Fc结构域由能够稳定缔合的第一和第二Fc区亚基组成，并且其中所述Fc结构域与天然人IgG1 Fc结构域相比，表现出对人Fcγ受体的结合亲和力降低。
[36][1]至[35]中任一项所述的方法，其中所述多特异性抗原结合分子包含选自以下(a1)至(a15)中任一项的组合的五条多肽链：
(a1)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a2)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a3)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a4)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a5)包含SEQ ID NO:216的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:229的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a6)包含SEQ ID NO:217的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a7)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a8)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a9)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a10)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:230的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a11)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:212的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a12)包含SEQ ID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a13)包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a14)包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；和
(a15)包含SEQ ID NO:228的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:231的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
其中，优选地，五条多肽链(链1至链5)按照图1(a)所示的方向相互连接和/或缔合。
[37][1]至[36]中任一项所述的方法，其中，第四多肽(链4)和第五多肽(链5)相同。
[38][1]或[37]中任一项的方法，其中仅一种核酸，或两种、三种、四种或五种不同的核酸编码并表达第一、第二、第三、第四和第五多肽。
在又一方面，本发明涉及：
[1]一种从抗体制剂中捕获和/或去除靶抗体的方法，包括以下步骤：
a)使包含靶抗体的抗体制剂与固定在支持物上的抗原结合分子接触；和
b)允许通过与抗原结合分子特异性结合来捕获靶抗体；
其中所述抗体包含来自IgG(优选人IgG或人IgGl)的至少两个Fab，并且所述抗体制剂包含两个抗体结构同工型，其不同之处在于在CHl结构域的两个Fab之间形成的二硫键；和
其中所述抗原结合分子特异性结合并捕获不包含二硫键的靶抗体。
[2][1]的方法，其中所述抗原结合分子在仅当靶抗体不具有二硫键时抗原结合分子可接近的表位处与靶抗体结合。
[3][1]或[2]的方法，其中所述二硫键是在抗体的两个Fab之间CH1结构域中根据EU编号的位置191处形成的二硫键。
[4][1]至[3]中任一项所述的方法，其中，所述抗原结合分子是包含选自由以下组成的组中的任一项的抗体：
(a1)SEQ ID NO:166的重链CDR1、SEQ ID NO:170的重链CDR 2、SEQ ID NO:174的重链CDR 3、SEQ ID NO:182的轻链CDR 1、SEQ ID NO:186的轻链CDR 2和SEQ ID NO:190的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:167的重链CDR1、SEQ ID NO:的171的重链CDR 2、SEQ ID NO:175的重链CDR 3、SEQ ID NO:183的轻链CDR 1、SEQ ID NO:187的轻链CDR 2和SEQ ID NO:191的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:168的重链CDR1、SEQ ID NO:172的重链CDR 2、SEQ ID NO:176的重链CDR 3、SEQ ID NO:184的轻链CDR 1、SEQ ID NO:188的轻链CDR 2和SEQ ID NO:192的轻链CDR 3；
(a4)SEQ ID NO:169的重链CDR1、SEQ ID NO:173的重链CDR 2、SEQ ID NO:177的重链CDR 3、SEQ ID NO:185的轻链CDR 1、SEQ ID NO:189的轻链CDR 2和SEQ ID NO:193的轻链CDR 3；
(a5)SEQ ID NO:166的重链CDR1、SEQ ID NO:170的重链CDR 2、SEQ ID NO:174的重链CDR 3、SEQ ID NO:115的轻链CDR 1、SEQ ID NO:124的轻链CDR 2和SEQ ID NO:134的轻链CDR 3；
(a6)SEQ ID NO:167的重链CDR1、SEQ ID NO:171的重链CDR 2、SEQ ID NO:175的重链CDR 3、SEQ ID NO:116的轻链CDR 1、SEQ ID NO:125的轻链CDR 2和SEQ ID NO:135的轻链CDR 3；
(a7)SEQ ID NO:168的重链CDR1、SEQ ID NO:172的重链CDR 2、SEQ ID NO:176的重链CDR 3、SEQ ID NO:118的轻链CDR 1、SEQ ID NO:128的轻链CDR 2和SEQ ID NO:137的轻链CDR 3；
(a8)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的相同表位结合的抗体；和
(a9)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的结合竞争的抗体。
[5][1]至[3]中任一项所述的方法，其中，所述抗原结合分子是包含选自由以下组成的组中的任一项的抗体：
(a1)包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:179的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:165的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:196的氨基酸序列的轻链可变区；
(a6)包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:197的氨基酸序列的轻链可变区；
(a7)包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:198的氨基酸序列的轻链可变区；
(a8)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的相同表位结合的抗体；和
(a9)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的结合竞争的抗体。
[5A][1]至[5]中任一项所述的方法，其中所述靶抗体包含选自以下(a1)至(a15)中任一项的组合的五条多肽链：
(a1)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a2)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a3)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a4)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a5)包含SEQ ID NO:216的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:229的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a6)包含SEQ ID NO:217的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a7)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a8)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a9)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a10)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:230的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a11)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:212的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a12)包含SEQ ID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a13)包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a14)包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；和
(a15)包含SEQ ID NO:228的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:231的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
其中，优选地，五条多肽链(链1至链5)按照图1(a)所示的方向相互连接和/或缔合。
[6]抗原结合分子，其包含选自由以下组成的组中的任一项：
(a1)SEQ ID NO:166的重链CDR1、SEQ ID NO:170的重链CDR 2、SEQ ID NO:174的重链CDR 3、SEQ ID NO:182的轻链CDR 1、SEQ ID NO:186的轻链CDR 2和SEQ ID NO:190的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:167的重链CDR1、SEQ ID NO:171的重链CDR 2、SEQ ID NO:175的重链CDR 3、SEQ ID NO:183的轻链CDR 1、SEQ ID NO:187的轻链CDR 2和SEQ ID NO:191的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:168的重链CDR1、SEQ ID NO:172的重链CDR 2、SEQ ID NO:176的重链CDR 3、SEQ ID NO:184的轻链CDR 1、SEQ ID NO:188的轻链CDR 2和SEQ ID NO:192的轻链CDR 3；
(a4)SEQ ID NO:169的重链CDR1、SEQ ID NO:173的重链CDR 2、SEQ ID NO:177的重链CDR 3、SEQ ID NO:185的轻链CDR 1、SEQ ID NO:189的轻链CDR 2和SEQ ID NO:193的轻链CDR 3；
(a5)SEQ ID NO:166的重链CDR1、SEQ ID NO:170的重链CDR 2、SEQ ID NO:174的重链CDR 3、SEQ ID NO:115的轻链CDR 1、SEQ ID NO:124的轻链CDR 2和SEQ ID NO:134的轻链CDR 3；
(a6)SEQ ID NO:167的重链CDR1、SEQ ID NO:171的重链CDR 2、SEQ ID NO:175的重链CDR 3、SEQ ID NO:116的轻链CDR 1、SEQ ID NO:125的轻链CDR 2和SEQ ID NO:135的轻链CDR 3；
(a7)SEQ ID NO:168的重链CDR1、SEQ ID NO:172的重链CDR 2、SEQ ID NO:176的重链CDR 3、SEQ ID NO:118的轻链CDR 1、SEQ ID NO:128的轻链CDR 2和SEQ ID NO:137的轻链CDR 3；
(a8)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的相同表位结合的抗体；和
(a9)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的结合竞争的抗体。
[7]抗原结合分子，其包含选自由以下组成的组中的任一项：
(a1)包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:179的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:165的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:196的氨基酸序列的轻链可变区；
(a6)包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:197的氨基酸序列的轻链可变区；
(a7)包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:198的氨基酸序列的轻链可变区；
(a8)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的相同表位结合的抗体；和
(a9)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的结合竞争的抗体。
[8][6]或[7]的抗原结合分子，其与人IgG1的CH1特异性的结合。
[9][8]的抗原结合分子，在人IgG1的2个Fab的CH1结构域之间形成二硫键时，所述抗原结合分子不与人IgG1的CH1特异性的结合。
[10][9]的抗原结合分子，其中所述二硫键是在IgG1的两个Fab之间在CH1结构域中在根据EU编号的位置191处形成的二硫键。
[11][8]至[10]中任一项所述的抗原结合分子，其不与人IgG4的CH1结合。
[12][6]至[11]中任一项所述的抗原结合分子在抗体试样的纯化、分析或定量中的用途。
附图说明
[图1]图1说明了各种抗体形式。表2中每个Fv区的注释。描述(a)应用LINC技术的(1+2)三价抗体，名称1+2双/LINC(“LINC”表示在例如CH1区的工程化的二硫键)；和(b)不含工程化的二硫键的(1+2)形式的三价抗体的图。
[图2a]图2a是描述1+2形式的LINC-Ig技术可以降低毒性的图示。LINC-Ig(包含“LINC”，即在例如CH1区的工程化的二硫键)可以将图1(a)中所示抗体的抗原结合主要限制为顺式模式，即与同一免疫细胞上存在的抗原结合。相反，图1(b)中所示的没有工程化的二硫键的(1+2)三价形式可能导致反式抗原结合模式，即图1(b)的抗体与两种不同免疫细胞上存在的抗原结合。这可能导致两个免疫细胞不依赖于肿瘤抗原结合的交联，这可能增加毒性。
[图2b]图2b是示意图，其描述了具有未配对的表面半胱氨酸的图1(b)中没有工程化的二硫键的(1+2)三价抗体可以与抗体制剂中含有游离硫醇基团(例如游离半胱氨酸或谷胱甘肽)的分子形成二硫键，这会导致抗体上未配对的半胱氨酸的封端，从而阻止LINC形成(左)。用还原剂处理此类封端的抗体可以帮助使表面半胱氨酸去封端(中)，并且去封端的抗体的进一步再氧化(例如通过缓冲液交换去除还原剂)促进去封端的半胱氨酸之间形成二硫键以促进LINC形成(右)。(为简单起见，未显示抗体的铰链区之间以及重链CH1和轻链CL之间的天然二硫键)。
[图3]图3显示了具有和没有LINC工程化(具有或没有用于工程化的二硫键形成的S191C突变)的三价(1+2)Ab的非还原性SDS-PAGE分析。观察到没有引入S191C突变的(1+2)三价形式的单个蛋白质迁移带(泳道2和5)。虽然对于(1+2)双/LINC抗体变体检测到两条蛋白质迁移带，但较慢的迁移带显示出与没有引入LINC突变的(1+2)三价形式相似的电泳迁移率。这表明更快的迁移带是双/LINC-Ig。抗体样品中具有未配对半胱氨酸(unLINC形式)的双-LINC-Ig的百分比可以通过对应于“UnLINC”形式的较慢条带/上条带的强度除以对应于“LINC”和“UnLINC”结构的两条条带的强度总和来计算。
[图4]图4显示了用不同还原剂处理后双-LINC-Ig的非还原性SDS-PAGE。“-”代表“不添加CuSO4”。“+”表示在过夜(O/N)再氧化过程中添加25微摩尔/50微摩尔CuSO4。
[图5]图5显示了用不同浓度的双-LINC-Ig进行TCEP处理后双-LINC-Ig的非还原性SDS-PAGE。
[图6]图6显示了TCEP处理不同温育期后双-LINC-Ig的非还原性SDS-PAGE。抗体样品中具有未配对半胱氨酸(unLINC形式)的双-LINC-Ig的百分比可以通过对应于“UnLINC”形式的较慢条带/上部条带的强度除以对应于“LINC”和“UnLINC”结构的两条条带的总和来计算。
[图7]图7是显示构象特异性抗体(例如构象特异性抗CH1抗体)概念的示意图，当抗体不具有例如在CH1区的工程化的二硫键(“未配对半胱氨酸”形式)时，所述抗体仅结合靶抗体(例如CH1区内的表位)，其中当所述靶抗体具有工程化的二硫键(“配对半胱氨酸”形式)时，所述表位对于构象特异性抗体是/不可接近的，例如，由于工程化的二硫键引起的空间位阻或两个Fab之间的距离减小。
[图8]图8说明了包含三个Fab的双/LINC(1+2)抗体形式，其中两个Fab(Fab B和C，分别包含在链1-链5和链3-链4中)各自包含工程化的半胱氨酸(能够形成连接两个Fab的工程化的二硫键，因此可以以“未配对半胱氨酸”形式或“配对半胱氨酸”形式存在)和一个不包含工程化的半胱氨酸的Fab(Fab A，包含在链1-链2中)(仅以“配对半胱氨酸”形式存在)。(a)Fab A的CH1为“未配对半胱氨酸”或“unLINC”形式/构象，Fab B和Fab C的CH1为“配对半胱氨酸”或“LINC”形式/构象(b)构象特异性抗IgG1CH1抗体只能以“未配对半胱氨酸”或“unLINC”形式/构象与IgG1的CH1结合。Fab A的CH1被工程改造为具有IgG4 CH1序列。因此，构象特异性抗IgG1 CH1抗体将仅与“未配对半胱氨酸”或“unLINC”形式/构象的双/LINC(1+2)抗体结合，而不与具有“配对半胱氨酸”或“LINC”形式/构象的抗体种类结合。
[图9a]图9a说明了具有不同抗体形式的各种工具抗体，用于筛选构象特异性抗CH1抗体。
[图9b]图9b显示了工具抗体的每条多肽链的氨基酸序列SEQ ID NO。
[图10a]图10a显示了使用构象特异性抗CH1抗体FAB0133Hh/FAB0133L0001亲和柱亲和纯化DLL3-DualAE05/DualAE05-FF056的层析图谱。
[图10b]图10b显示了使用构象特异性抗CH1抗体FAB0133Hh/FAB0133L0001亲和柱亲和纯化DLL3-DualAE05/DualAE05-FF056中洗脱抗体的非还原性SDS-PAGE分析。具体而言，流穿级分包含高纯度的DualAE05/DualAE05-FF056，其呈“成对的半胱氨酸”或“LINC”形式(流穿液：白色条)，如在非还原性SDS-PAGE分析(泳道1至13)中迁移速度更快的一个主要蛋白质条带所示；洗涤级分包含“未配对半胱氨酸”形式的DualAE05/DualAE05-FF056和“配对半胱氨酸”形式的DualAE05/DualAE05-FF056的混合物(洗涤：灰色条)；和洗脱的级分主要包含DualAE05/DualAE05-FF056，其呈“未配对半胱氨酸”或“unLINC”形式(50mM HCl酸洗脱：黑色条)，如在非还原性SDS-PAGE分析(泳道20至23)中迁移较慢的一个主要蛋白质条带所示。抗体样品的纯度通过非还原性SDS-PAGE的带光密度测定法确定。此处显示的未染色凝胶图像由ChemiDoc Imaging Systems(Bio-Rad)捕获，并且使用Image Lab软件(Bio-Rad)对unLINC和LINC形式的LINC-Ig抗体的蛋白质条带进行光密度分析。由于构象差异，unLINC形式的迁移速度比LINC形式稍慢。将含有30-40％unLINC形式的蛋白质样品(表示为输入)上样到抗CH1柱以获得更高纯度的抗体。
具体实施方式
本文描述或引用的技术和程序通常被本领域技术人员充分理解并且通常使用常规方法学来使用，例如Sambrook等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual第三版(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；CurrentProtocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel等人编辑,(2003))；the series Methodsin Enzymology(Academic Press,Inc.)：PCR 2：APractical Approach(M.J.MacPherson，B.D.Hames和G.R.Taylor编辑(1995))，Harlow和Lane编辑(1988)Antibodies,ALaboratoryManual,and Animal Cell Culture(R.I.Freshney编辑(1987))；OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait编辑，1984)；Methods in Molecular Biology，Humana Press；CellBiology:A Laboratory Notebook(J.E.Cellis编辑，1998)Academic Press；Animal CellCulture(R.I.Freshney)编辑，1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P.Mather和P.E.Roberts，1998)Plenum Press；Cell and Tissue Culture:LaboratoryProcedures(A.Doyle,J.B.Griffiths和D.G.Newell编辑，1993-8)J.Wiley和Sons；Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir和C.C.Blackwell编辑)；GeneTransfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller和M.P.Calos编辑，1987)；PCR:ThePolymerase Chain Reaction，(Mullis等人编辑，1994)；Current Protocols inImmunology(J.E.Coligan等人编辑,1991)；Short Protocols in Molecular Biology(Wiley和Sons，1999)；Immunobiology(C.A.Janeway和P.Travers，1997)；Antibodies(P.Finch，1997)；Antibodies:A Practical Approach(D.Catty编辑,IRL出版社,1988-1989)；Monoclonal Antibodies:A Practical Approach(P.Shepherd和C.Dean编辑，牛津大学出版社，2000)；Using Antibodies:A Laboratory Manual(E.Harlow和D.Lane(SpringHarbor Laboratory Press，1999)；The Antibodies(M.Zanetti和J.D.Capra编辑，HarwoodAcademic Publishers，1995)；和Cancer:Principles and Practice of Oncology(V.T.DeVita等人编辑，J.B.Lippincott Company，1993)中描述的广泛使用的方法学。
提供以下定义和详细描述以有助于理解本文所示的本公开。
定义
氨基酸
在本文中，氨基酸由单字母代码或三字母代码或两者描述，例如Ala/A、Leu/L、Arg/R、Lys/K、Asn/N、Met/M、Asp/D、Phe/F、Cys/C、Pro/P、Gln/Q、Ser/S、Glu/E、Thr/T、Gly/G、Trp/W、His/H、Tyr/Y、Ile/I或Val/V。
氨基酸的改变
对于抗原结合分子的氨基酸序列中的氨基酸改变(在本说明书中也称为“氨基酸取代”或“氨基酸突变”)，已知方法例如定点诱变法(Kunkel等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1985)82,488-492))和重叠延伸PCR可以适当地使用。此外，几种已知的方法也可以用作氨基酸改变方法以取代非天然氨基酸(Annu Rev.Biophys.Biomol.Struct.(2006)35,225-249；和Proc.Natl.Acad.Sci.美国(2003)100(11),6353-6357)。例如，适合使用含有tRNA的无细胞翻译系统(Clover Direct(Protein Express))，该tRNA具有与终止密码子之一UAG密码子(琥珀密码子)的互补琥珀抑制tRNA结合的非天然氨基酸。
在本说明书中，当描述氨基酸改变的位点时，术语“和/或”的含义包括适当组合“和”和“或”的所有组合。具体而言，例如，“位置33、55和/或96处的氨基酸被取代”包括以下氨基酸改变的变体：(a)位置33，(b)位置55，(c)位置96，(d)位置33和55，(e)位置33和96，(f)位置55和96，以及(g)位置33、55和96处的氨基酸。
此外，在本文中，作为表示氨基酸改变的表述，可以适当地使用在表示特定位置的数字的前后分别显示改变前后的氨基酸的1个字母或3个字母的代码的表述。例如，当取代抗体可变区中包含的氨基酸时使用的改变N100bL或Asn100bLeu表示在位置100b(根据Kabat编号)用Leu取代Asn。即，数字表示根据Kabat编号的氨基酸位置，数字前写的1个字母或3个字母的氨基酸代码表示取代前的氨基酸，数字后写的1个字母或3个字母的氨基酸代码表示取代后的氨基酸。类似地，当取代抗体恒定区中包含的Fc区的氨基酸时使用的改变P238D或Pro238Asp表明在位置238(根据EU编号)用Asp取代Pro。即，数字表示根据EU编号的氨基酸位置，数字前写的1个字母或3个字母的氨基酸代码表示取代前的氨基酸，数字后写的1个字母或3个字母的氨基酸代码表示取代后的氨基酸。
多肽
如本文所用，术语“多肽”是指由通过酰胺键(也称为肽键)线性连接的单体(氨基酸)组成的分子。术语“多肽”是指两个或多个氨基酸的任何链，而不是指特定长度的产物。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或用于指代两个或多个氨基酸的链的任何其他术语都包括在“多肽”的定义中，并且术语“多肽”可以用来代替这些术语中的任何一个，或与这些术语中的任何一个互换使用。术语“多肽”还意指多肽的表达后修饰的产物，包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护/封闭基团衍生、蛋白水解切割或通过非天然发生的氨基酸修饰。多肽可以源自天然生物来源或通过重组技术产生，但不一定翻译自指定的核酸序列。它可以任何方式产生，包括通过化学合成。如本文所述的多肽的大小可为约3或更多、5或更多、10或更多、20或更多、25或更多、50或更多、75或更多、100或更多、200或更多、500或更多、1,000或更多、或2,000或更多个氨基酸。多肽可以具有确定的三维结构，尽管它们不一定具有这样的结构。具有确定的三维结构的多肽称为折叠的，不具有确定的三维结构而是可以采用大量不同构象的多肽称为未折叠的。
百分比(％)氨基酸序列同一性
相对于参考多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为在比对序列并引入空位(如有必要)，以实现最大的百分比序列同一性，并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分后，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定百分比氨基酸序列同一性的目的的比对可以以本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用公开可用的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN、或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括在被比较序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。然而，出于本文的目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生％氨基酸序列同一性值。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech,Inc.编写，源代码已与用户文档一起提交给美国版权局，华盛顿特区，20559，其以美国版权注册号TXU510087被注册。ALIGN-2程序可从加利福尼亚州南圣弗朗西斯科的Genentech,Inc.公开获得，或者可以从源代码编译。ALIGN-2程序应被编译以在UNIX操作系统上使用，包括数字UNIX V4.0D。所有序列比较参数均由ALIGN-2程序设置，并且不会发生变化。在使用ALIGN-2进行氨基酸序列比较的情况下，给定氨基酸序列A与、和或针对给定氨基酸序列B(可以备选地表述为给定氨基酸A与、和或针对给定氨基酸序列B具有或包括特定％氨基酸序列同一性)的％氨基酸序列同一性计算如下：
分数X/Y的100倍
其中X是序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数，其中Y是B中氨基酸残基的总数。将理解的是，氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度，A与B的氨基酸序列同一性％将不等于B与A的氨基酸序列同一性％。除非另有特别说明，本文使用的所有％氨基酸序列同一性值都是如上一段所述使用ALIGN-2计算机程序获得的。
重组方法和组合物
可以使用重组方法和组合物产生抗体和抗原结合分子，例如，如美国专利号4,816,567中所述。在一个实施方案中，提供了编码本文所述抗体的分离的核酸。此类核酸可编码包含抗体的VL的氨基酸序列和/或包含VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在另一个实施方案中，提供了一种或多种包含此类核酸的载体(例如，表达载体)。在另一个实施方案中，提供了包含这种核酸的宿主细胞。在一个这样的实施方案中，宿主细胞包括(例如，已用以下转化)：(1)包含核酸的载体，所述核酸编码包括抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列，或(2)包含核酸的第一载体,所述核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含核酸的第二载体，所述核酸编码包含抗体的VH的氨基酸序列。在一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如Y0、NS0、Sp2/0细胞)。在一个实施方案中，提供了一种制备本发明的多特异性抗原结合分子的方法，其中所述方法包括在适合表达抗体的条件下培养如上文所提供的包含编码抗体的核酸的宿主细胞，并且任选地从所述宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收所述抗体。
对于本文所述抗体的重组生产，分离例如如上所述编码抗体的核酸，将其插入一种或多种载体中以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。此类核酸可以使用常规程序(例如，通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)被容易地分离和测序。
用于克隆或表达抗体编码载体的合适宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，抗体可以在细菌中产生，特别是当不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见例如美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(另见Charlton,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,NJ,2003),pp.245-254，描述了抗体片段在大肠杆菌中的表达。)表达后，抗体可从可溶级分中的细菌细胞糊中分离，并可进一步纯化。
除原核生物外，真核微生物如丝状真菌或酵母是抗体编码载体的合适克隆或表达宿主，包括糖基化途径已被“人源化”的真菌和酵母菌株，从而产生具有部分或完全人的糖基化模式的抗体。参见Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)和Li等,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
用于表达糖基化抗体的合适宿主细胞也来源于多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了许多杆状病毒株，它们可以与昆虫细胞结合使用，特别是用于草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的转染。
植物细胞培养物也可用作宿主。参见，例如，美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述了用于在转基因植物中生产抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，适于悬浮生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。其他有用的哺乳动物宿主细胞系的例子是由SV40(COS-7)转化的猴肾CV1细胞系；人胚胎肾系(293或293细胞，如Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977)中所述)；小仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(TM4细胞，如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；水牛鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如Mather等，Annals N.Y.Acad Sci.383:44-68(1982)中所述；MRC 5细胞；和FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系，例如Y0、NS0和Sp2/0。对于适用于抗体生产的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki和Wu，Methodsin Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo，编辑，Humana Press，Totowa，NJ)，第255-268页(2003年)。
本文所述的抗原结合分子的重组生产可以用类似于上述那些的方法通过使用宿主细胞进行，所述宿主细胞包含(例如，已经转化有)一种或多种载体，所述载体包含编码氨基酸序列的核酸，所述氨基酸序列包含整个抗原结合分子或抗原结合分子的一部分。
抗原结合分子和多特异性抗原结合分子
如本文所用，术语“抗原结合分子”是指包含抗原结合位点的任何分子或对抗原具有结合活性的任何分子，并且可以进一步指这样的分子，例如长度为大约五个氨基酸或更多的肽或蛋白质。肽和蛋白质不限于来源于生物体的那些，例如，它们可以是由人工设计的序列产生的多肽。它们也可以是任何天然存在的多肽、合成多肽、重组多肽等。包含已知稳定构象结构如α/β桶作为支架，并且其中部分分子被制成抗原结合位点的支架分子，也是本文所述的抗原结合分子的一个实施方案。
“多特异性抗原结合分子”是指特异性结合多于一种抗原的抗原结合分子。术语“双特异性”是指抗原结合分子能够特异性结合至少两个不同的抗原决定簇。术语“三特异性”是指抗原结合分子能够特异性结合至少三个不同的抗原决定簇。在某些实施方案中，本申请的多特异性抗原结合分子是三特异性抗原结合分子，即它能够特异性结合三种不同的抗原——能够结合CD3或CD137中的任一种但不同时结合两种抗原，并且能够特异性结合DLL3。
在一个方面，本公开提供了一种多特异性抗原结合分子，其包含：
第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，其各自能够结合CD3和CD137，但不同时结合CD3和CD137；和
第三抗原结合部分，其能够结合第三抗原，优选在癌细胞/组织上表达的抗原。
在一个方面，本公开提供了一种多特异性抗原结合分子，其包含：
第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，其各自能够结合CD3和CD137，但不同时结合CD3和CD137；和
第三抗原结合部分，其能够结合DLL3，优选人DLL3。
在一个方面，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a17)中的任一项：
(a1)SEQ ID NO:17的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:31的重链CDR 2、SEQ IDNO:45的重链CDR 3、SEQ ID NO:64的轻链CDR 1、SEQ ID NO:69的轻链CDR 2和SEQ ID NO:74的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:18的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:32的重链CDR 2、SEQ IDNO:46的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a4)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ ID NO:75的轻链CDR 3；
(a5)SEQ ID NO:20的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:34的重链CDR 2、SEQ IDNO:48的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a6)SEQ ID NO:22的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:36的重链CDR 2、SEQ IDNO:50的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a7)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a8)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ ID NO:76的轻链CDR 3；
(a9)SEQ ID NO:24的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:38的重链CDR 2、SEQ IDNO:52的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a10)SEQ ID NO:25的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:39的重链CDR 2、SEQID NO:53的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a11)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a12)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a13)SEQ ID NO:27的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:的41重链CDR 2、SEQID NO:55的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a14)SEQ ID NO:28的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:42的重链CDR 2、SEQID NO:56的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a15)SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR 2、SEQID NO:84的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ IDNO:75的轻链CDR 3；
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
在一个方面，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a17)中的任一项：
(a1)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a6)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a7)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a8)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a9)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a10)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a11)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a12)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a13)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a14)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；和
(a15)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
在一个方面，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个是Fab分子并且包含在第一抗原结合部分和第二抗原结合部分之间形成的至少一个二硫键，优选地至少一个二硫键在不在铰链区的氨基酸残基(半胱氨酸)之间形成，优选在每个抗原结合部分的CH1区的氨基酸残基(半胱氨酸)之间形成。
在一个方面，第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分中的每一个是Fab分子，并且包含在所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自的CH1区中根据EU编号在位置191处的氨基酸残基(半胱氨酸)之间形成的一个二硫键。
在一个方面，第三抗原结合部分与第一抗原结合部分或第二抗原结合部分中的任一项融合。
在一个方面，第三抗原结合部分是Fab或scFv。
在一个方面，第一、第二和第三抗原结合部分中的每一个是Fab分子，其中第三抗原结合部分可以在Fab重链(CH1)的C末端与第一抗原结合部分或第二抗原结合部分中任一项的Fab重链的N末端融合，任选地通过肽接头融合。
在一个方面，所述肽接头选自由SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249或SEQ ID NO:259的氨基酸序列组成的组。
在一个方面，第一抗原结合部分与第二抗原结合部分相同。
在一个方面，第三抗原结合部分是交换Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区被交换，并且其中第一和第二抗原结合部分中的每一个是常规Fab分子。
在一个方面，在第一和第二抗原结合部分中每一个的轻链的恒定结构域CL中，位置123和/或124处的氨基酸独立地被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(根据Kabat编号)取代，并且其中在所述第一和第二抗原结合部分中每一个的重链的恒定结构域CH1中，位置147处的氨基酸和/或位置213处的氨基酸独立地被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)(根据EU编号编号)取代。
在一个方面，在第一和第二抗原结合部分中每一个的轻链的恒定结构域CL中，位置123和124处的氨基酸分别是精氨酸(R)和赖氨酸(K)(根据Kabat编号)，并且其中在第一和第二抗原结合部分中每一个的重链的恒定结构域CH1中，位置147和213处的氨基酸是谷氨酸(E)(根据EU编号编号)。
在一个方面，能够结合DLL3的第三抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含如下(a1)至(a5)中任一项：
(a1)SEQ ID NO:233的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:234的重链CDR 2、SEQID NO:235的重链CDR 3、SEQ ID NO:237的轻链CDR 1、SEQ ID NO:238的轻链CDR 2和SEQID NO:239的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:276的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:277的重链CDR 2、SEQID NO:278的重链CDR 3、SEQ ID NO:279的轻链CDR 1、SEQ ID NO:280的轻链CDR 2和SEQID NO:281的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:285的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:286的重链CDR 2、SEQID NO:287的重链CDR 3、SEQ ID NO:288的轻链CDR 1、SEQ ID NO:289的轻链CDR 2和SEQID NO:290的轻链CDR 3；
(a4)与选自(a1)至(a3)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a5)与选自(a1)至(a3)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
在一个方面，能够结合DLL3的第三抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含如下(a1)至(a6)中任一项：
(a1)包含SEQ ID NO:232的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:236的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:264的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:265的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:266的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:267的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:268的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:269的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)与选自(a1)至(a4)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a6)与选自(a1)至(a4)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
在一个方面，本发明的多特异性抗原结合分子还包含Fc结构域。
在一个方面，所述Fc结构域由能够稳定缔合的第一和第二Fc区亚基组成，并且其中所述Fc结构域与天然人IgG1 Fc结构域相比，表现出对人Fcγ受体的结合亲和力降低。
在一个方面，与天然IgG的Fc区相比，Fc结构域在酸性pH条件(例如，pH 5.8)下表现出增强的FcRn结合活性。
在一个方面，Fc结构域包含根据EU编号位置434处的Ala；位置438处的Glu,Arg,Ser,或Lys；和位置440处的Glu,Asp,或Gln。
在一个方面，Fc结构域包含根据EU编号位置434处的Ala；位置438处的Arg或Lys；和位置440处的Glu或Asp。
在一个方面，Fc结构域还包含根据EU编号位置428处的Ile或Leu；和/或位置436处的Ile、Leu、Val、Thr或Phe。
在一个方面，Fc结构域包含选自由以下组成的组的氨基酸取代的组合：
根据EU编号(a)N434A/Q438R/S440E；
(b)N434A/Q438R/S440D；
(c)N434A/Q438K/S440E；
(d)N434A/Q438K/S440D；
(e)N434A/Y436T/Q438R/S440E；
(f)N434A/Y436T/Q438R/S440D；
(g)N434A/Y436T/Q438K/S440E；
(h)N434A/Y436T/Q438K/S440D；
(i)N434A/Y436V/Q438R/S440E；
(j)N434A/Y436V/Q438R/S440D；
(k)N434A/Y436V/Q438K/S440E；
(l)N434A/Y436V/Q438K/S440D；
(m)N434A/R435H/F436T/Q438R/S440E；
(n)N434A/R435H/F436T/Q438R/S440D；
(o)N434A/R435H/F436T/Q438K/S440E；
(p)N434A/R435H/F436T/Q438K/S440D；
(q)N434A/R435H/F436V/Q438R/S440E；
(r)N434A/R435H/F436V/Q438R/S440D；
(s)N434A/R435H/F436V/Q438K/S440E；
(t)N434A/R435H/F436V/Q438K/S440D；
(u)M428L/N434A/Q438R/S440E；
(v)M428L/N434A/Q438R/S440D；
(w)M428L/N434A/Q438K/S440E；
(x)M428L/N434A/Q438K/S440D；
(y)M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E；
(z)M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440D；
(aa)M428L/N434A/Y436T/Q438K/S440E；
(ab)M428L/N434A/Y436T/Q438K/S440D；
(ac)M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440E；
(ad)M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440D；
(ae)M428L/N434A/Y436V/Q438K/S440E；
(af)M428L/N434A/Y436V/Q438K/S440D；
(ag)L235R/G236R/S239K/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E；和
(ah)L235R/G236R/A327G/A330S/P331S/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E。
在一个方面，Fc结构域包含M428L/N434A/Q438R/S440E的氨基酸取代的组合。
在一个方面，Fc结构域是IgG Fc结构域，优选人IgG Fc结构域，更优选人IgG1 Fc结构域。
在一个方面，Fc结构域包含以下任一项：
(a)包含SEQ ID NO:100所示氨基酸序列的第一Fc亚基和包含SEQ ID NO:111所示氨基酸序列的第二Fc亚基；或者
(b)包含SEQ ID NO:99所示氨基酸序列的第一Fc亚基和包含SEQ ID NO:109所示氨基酸序列的第二Fc亚基。
在一个方面，第一和第二抗原结合部分中的每一个是Fab，其中第一抗原结合部分在Fab重链的C末端与Fc结构域的第一或第二亚基的N末端融合,和第二抗原结合部分在Fab重链的C末端与Fc结构域的剩余亚基的N末端融合。
在一个方面，第三抗原结合部分在C末端与第一抗原结合部分或第二抗原结合部分中任一项的Fab重链的N末端，任选地通过肽接头融合。
在一个方面，本发明的多特异性抗原结合分子，包含选自以下(a1)至(a15)中任一项的组合的五条多肽链：
(a1)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a2)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a3)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a4)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a5)包含SEQ ID NO:216的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:229的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a6)包含SEQ ID NO:217的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a7)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a8)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a9)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a10)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:230的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a11)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:212的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a12)包含SEQ ID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a13)包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a14)包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；和
(a15)包含SEQ ID NO:228的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:231的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
其中，优选地，五条多肽链(链1至链5)按照图1(a)所示的方向相互连接和/或缔合。
本发明的多特异性抗原结合分子的组分可以多种构型相互融合。图1(a)中描绘了示例性构型，并与表2一起阅读。
根据上述实施方案中任一项，多特异性抗原结合分子的组分(例如抗原结合部分、Fc结构域)可以直接或通过各种接头，特别是包含一个或多个氨基酸，通常约2-20个氨基酸的肽接头融合，接头在本文中进行描述或在本领域中是已知的。合适的非免疫原性肽接头包括，例如，(G4S)n、(SG4)n、(G4S)n或G4(SG4)n肽接头，其中n通常为1至10之间的数字，通常为2至4。
焦谷氨酰化
已知当抗体在细胞中表达时，抗体在翻译后被修饰。翻译后修饰的例子包括重链C末端的赖氨酸被羧肽酶切割；通过焦谷氨酰化将重链和轻链N末端的谷氨酰胺或谷氨酸修饰为焦谷氨酸；糖基化；氧化；脱酰胺；和糖化，并且已知这种翻译后修饰发生在各种抗体中(Journal of Pharmaceutical Sciences,2008,第97卷,p.2426-2447)。
在一些实施方案中，本发明的多特异性抗原结合分子还包括翻译后修饰。翻译后修饰的例子包括在重链可变区的N末端发生焦谷氨酰化和/或在重链的C末端缺失赖氨酸。本领域已知，由于N末端焦谷氨酰化和C末端赖氨酸缺失而导致的这种翻译后修饰对抗体的活性没有任何影响(Analytical Biochemistry,2006,Vol.348,p.24-39)。
抗原结合部分
如本文所用，术语“抗原结合部分”是指特异性结合抗原的多肽分子。在一个实施方案中，抗原结合部分能够将其所连接的实体引导至靶位点，例如引导至表达癌抗原(DLL3)的特定类型的肿瘤细胞。在另一个实施方案中，抗原结合部分能够通过其靶抗原，例如T细胞受体复合物抗原(特别是CD3)和/或共刺激受体(CD137)激活信号传导。抗原结合部分包括如本文进一步定义的抗体及其片段。具体的抗原结合部分包括抗体的抗原结合结构域或抗体可变区，包括抗体重链可变区和抗体轻链可变区。在某些实施方案中，抗原结合部分可包含如本文进一步定义和本领域已知的抗体恒定区。有用的重链恒定区包括五种同种型中的任何一种：α、δ、ε、γ或μ。有用的轻链恒定区包括两种同种型中的任何一种：κ和λ。
如本文所用，关于抗原结合部分等的术语“第一”、“第二”和“第三”是为了当每种类型的部分有一个以上时便于区分。除非明确说明，否则这些术语的使用不旨在赋予多特异性抗原结合分子的特定顺序或方向。
能够与CD3和CD137结合但不能同时结合的抗原结合部分
本文所述的多特异性抗原结合分子包含至少一个能够结合CD3和CD137但不同时结合CD3和CD137的抗原结合部分(本文也称为“双抗原结合部分”或“第一抗原结合部分”或“双Fab”或“双Ig”)。在特定实施方案中，多特异性抗原结合分子包含两个双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)。在一些实施方案中，两个双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)中的每一个提供与CD3或CD137的单价结合，但不同时结合CD3和CD137。在特定实施方案中，多特异性抗原结合分子包含不超过两个双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)。
在某些实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)通常是Fab分子，特别是常规Fab分子。在某些实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”是包含抗体轻链和重链可变区(VL和VH)的结构域。包含抗体轻链和重链可变区的此类结构域的合适例子包括“单链Fv(scFv)”、“单链抗体”、“Fv”、“单链Fv 2(scFv2)”、“Fab”、“F(ab')2”等。
在某些实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)特异性结合CD3的部分肽的全部或部分。在特定实施方案中，CD3是人CD3或食蟹猴CD3，最特别是人CD3。在特定实施方案中，第一抗原结合部分对人和食蟹猴CD3具有交叉反应性(即特异性结合)。在一些实施方案中，第一抗原结合部分能够特异性结合CD3的ε亚基，特别是SEQ ID NO:7(NP_000724.1)(RefSeq注册号显示在括号中)中所示的人CD3ε亚基CD3。在一些实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)能够特异性结合真核细胞表面上表达的CD3ε链。在一些实施方案中，第一抗原结合部分结合在T细胞表面上表达的CD3ε链。
在某些实施方案中，CD137是人CD137。在一些实施方案中，本发明的抗原结合分子的有利例子包含与由以下组成的组的抗体结合的人CD137表位结合相同表位的双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)：
识别包含SPCPPNSFSSAGGQRTCD
ICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGC
序列(SEQ ID NO:21)的区域的抗体，
识别包含DCTPGFHCLGAGCSMCEQDC
KQGQELTKKGC序列(SEQ ID NO:35)的区域的抗体，
识别包含LQDPCSNC
PAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAEC序列(SEQ IDNO:49)的区域的抗体，和
识别包含人CD137蛋白中LQDPCSNCPAGTFCDNNRN
QIC序列(SEQ ID NO:105)的区域的抗体。
在具体实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)包含下表1A中所示的任何一种抗体可变区序列。在具体实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)包含表1A中所示的重链可变区和轻链可变区的组合中的任何一种。
[表1A]
双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)可变区的SEQ ID NO
在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)包含重链可变区序列和轻链可变区序列，所述重链可变区序列与SEQ IDNO:6具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，所述轻链可变区序列与SEQID NO:58具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQ IDNO:58的氨基酸序列。
在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)包含重链可变区序列和轻链可变区序列，所述重链可变区序列与SEQ IDNO:14具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，所述轻链可变区序列与SEQ ID NO:58具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。
在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)包含重链可变区序列和轻链可变区序列，所述重链可变区序列与SEQ IDNO:81具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，所述轻链可变区序列与SEQ ID NO:58具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。
在具体实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)包含下表1B中所示的HVR序列的任何一种组合。
[表1B]
双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双-Fab”)的HVR(CDR)序列的SEQ ID NO
在一些实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含SEQ ID NO:17的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:31的重链CDR 2、SEQ ID NO:45的重链CDR 3、SEQ ID NO:64的轻链CDR 1、SEQ ID NO:69的轻链CDR 2和SEQ ID NO:74的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:18的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:32的重链CDR 2、SEQ IDNO:46的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a4)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ ID NO:75的轻链CDR 3；
(a5)SEQ ID NO:20的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:34的重链CDR 2、SEQ IDNO:48的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a6)SEQ ID NO:22的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:36的重链CDR 2、SEQ IDNO:50的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a7)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a8)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ ID NO:76的轻链CDR 3；
(a9)SEQ ID NO:24的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:38的重链CDR 2、SEQ IDNO:52的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a10)SEQ ID NO:25的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:39的重链CDR 2、SEQID NO:53的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a11)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a12)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a13)SEQ ID NO:27的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:41的重链CDR 2、SEQID NO:55的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a14)SEQ ID NO:28的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:42的重链CDR 2、SEQID NO:56的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a15)SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR 2、SEQID NO:84的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ IDNO:75的轻链CDR 3；
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
在一些实施方案中，本发明的多特异性抗原结合分子或双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”或“双Fab”)还包含翻译后修饰。翻译后修饰的例子包括在重链可变区的N末端发生焦谷氨酰化和/或在重链的C末端缺失赖氨酸。本领域已知，由于N末端焦谷氨酰化和C末端赖氨酸缺失而导致的这种翻译后修饰对抗体的活性没有任何影响(Analytical Biochemistry,2006,第348卷,p.24-39)。
能够与DLL3结合的抗原结合部分
本文所述的多特异性抗原结合分子包含至少一种能够结合δ样3(DLL3)的抗原结合部分(本文也称为“DLL3抗原结合部分”或“第三抗原结合部分”)。
在某些实施方案中，多特异性抗原结合分子包含一种能够结合DLL3的抗原结合部分。在某些实施方案中，多特异性抗原结合分子包含两个能够结合DLL3的抗原结合部分(“DLL3抗原结合部分”)。在特定的此类实施方案中，这些抗原结合部分中的每一个特异性结合DLL3的相同表位。在甚至更特定的实施方案中，所有这些“DLL3抗原结合部分”都是相同的。在一个实施方案中，多特异性抗原结合分子包含能够特异性结合DLL3的免疫球蛋白分子(“DLL3抗原结合部分”)。在一个实施方案中，多特异性抗原结合分子包含不超过两个能够结合DLL3的抗原结合部分(“DLL3抗原结合部分”)。
在某些实施方案中，DLL3抗原结合部分是交换Fab分子，即其中Fab重链和轻链的可变区或恒定区被交换的DLL3分子。在某些实施方案中，DLL3抗原结合部分是交换Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区被交换。
在一些实施方案中，DLL3抗原结合部分特异性结合DLL3的细胞外结构域。在一些实施方案中，DLL3抗原结合部分特异性结合DLL3细胞外结构域内的表位。在一些实施方案中，DLL3抗原结合部分与真核细胞表面上表达的DLL3蛋白结合。在一些实施方案中，DLL3抗原结合部分与癌细胞表面上表达的DLL3蛋白结合。
在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分结合细胞外结构域(ECD)内的表位，即从N末端到紧接TM区之前的结构域，但不结合TM区或C末端细胞内结构域。多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分可以结合ECD内任何上述结构域/区域内的表位。在优选的实施方案中，多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分与从EGF6到紧接TM区之前的区域内的表位结合。更具体地，多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分可以结合人DLL3中SEQ ID NO:89中定义的区域内的表位。在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分结合EGF1、EGF2、EGF3、EGF4、EGF5或EGF6区或从EGF6到紧接在人DLL3的TM区之前的区域，或在EGF1、EGF2、EGF3、EGF4、EGF5或EGF6区或从EGF6到紧接在人DLL3的TM区域之前的区域内的表位。在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分可源自先前报道的抗DLL3抗体，其中结合的DLL3表位已被表征(例如WO2019131988和WO2011093097)。
在具体实施方案中，多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分包含下表1C中所示的任何一种抗体可变区序列。在具体实施方案中，多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分包含表1C所示的重链可变区和轻链可变区的任一种组合。在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分包含结构域，所述结构域包含与表1C中所示抗体可变区中的任一项竞争结合DLL3的抗体可变片段。
[表1C]
示例性DLL3抗原结合部分的可变区的SEQ ID NO
在一个实施方案中，DLL3抗原结合部分包含重链可变区序列和轻链可变区序列，所述重链可变区序列与SEQ ID NO:232具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，所述轻链可变区序列与SEQ ID NO:236具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一个实施方案中，DLL3抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:232的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:236的氨基酸序列。
在一个实施方案中，DLL3抗原结合部分包含重链可变区序列和轻链可变区序列，所述重链可变区序列与SEQ ID NO:300具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，所述轻链可变区序列与SEQ ID NO:236具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一个实施方案中，DLL3抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:300的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:236的氨基酸序列。
在一个实施方案中，DLL3抗原结合部分包含重链可变区序列和轻链可变区序列，所述重链可变区序列与SEQ ID NO:301具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，所述轻链可变区序列与SEQ ID NO:236具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一个实施方案中，DLL3抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:301的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:236的氨基酸序列。
在一个实施方案中，DLL3抗原结合部分包含重链可变区序列和轻链可变区序列，所述重链可变区序列与SEQ ID NO:274具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，所述轻链可变区序列与SEQ ID NO:275具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一个实施方案中，DLL3抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:274的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:275的氨基酸序列。
在一个实施方案中，DLL3抗原结合部分包含重链可变区序列和轻链可变区序列，所述重链可变区序列与SEQ ID NO:264具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性，所述轻链可变区序列与SEQ ID NO:265具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性。在一个实施方案中，DLL3抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:264的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:265的氨基酸序列。
在具体实施方案中，DLL3抗原结合部分包含下表1D中所示的HVR序列的任一种组合。在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分包含结构域，所述结构域包含抗体可变片段，所述抗体可变片段与表1D中所示的任一抗体可变区竞争结合DLL3，或与包含与表1D中所示抗体可变区的HVR区相同的HVR序列的任何抗体可变片段竞争结合DLL3。
[表1D]
示例性DLL3抗原结合部分的HVR(CDR)序列的SEQ ID NO
在一些实施方案中，本发明的多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a5)中任一项：
(a1)SEQ ID NO:233的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:234的重链CDR 2、SEQID NO:235的重链CDR 3、SEQ ID NO:237的轻链CDR 1、SEQ ID NO:238的轻链CDR 2和SEQID NO:239的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:276的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:277的重链CDR 2、SEQID NO:278的重链CDR 3、SEQ ID NO:279的轻链CDR 1、SEQ ID NO:280的轻链CDR 2和SEQID NO:281的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:285的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:286的重链CDR 2、SEQID NO:287的重链CDR 3、SEQ ID NO:288的轻链CDR 1、SEQ ID NO:289的轻链CDR 2和SEQID NO:290的轻链CDR 3；
(a4)与选自(a1)至(a3)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a5)与选自(a1)至(a3)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
在一些实施方案中，本发明的多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分还包含翻译后修饰。翻译后修饰的例子包括在重链可变区的N末端发生焦谷氨酰化和/或在重链的C末端缺失赖氨酸。本领域已知，由于N末端焦谷氨酰化和C末端赖氨酸缺失而导致的这种翻译后修饰对抗体的活性没有任何影响(Analytical Biochemistry,2006,第348卷,p.24-39)。
在另一个方面，本发明的DLL3抗原结合部分可用于参入了DLL3结合结构域(DLL3CAR)的新型嵌合抗原受体(CAR)。在某些实施方案中，本发明的DLL3结合结构域(和DLL3CAR)将包含scFv构建体，并且在优选的实施方案中，将包含和包含如本文所公开的重链和轻链可变区。在其他优选实施方案中，本发明的DLL3结合结构域(和DLL3 CAR)将包含scFv构建体或其片段，所述scFv构建体或其片段包含本文公开的重链和轻链可变区。在优选的实施方案中，所公开的嵌合抗原受体可用于治疗或预防增殖性病症及其任何复发或转移。
在某些实施方案中，DLL3蛋白在肿瘤起始细胞上表达。DLL3 CAR通过基因修饰(例如转导)在细胞毒性淋巴细胞(优选自体细胞毒性淋巴细胞)上表达，产生可用于靶向和杀死DLL3阳性肿瘤细胞的DLL3敏感性淋巴细胞。如本文将广泛讨论的，本发明的CAR通常包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，所述细胞内信号传导结构域包含激活某些淋巴细胞并产生DLL3阳性肿瘤细胞的免疫应答的DLL3结合结构域。本发明的选定实施方案包括免疫活性宿主细胞，所述免疫活性宿主细胞表现出所公开的CAR和编码本发明的DLL3 CAR的各种多核苷酸序列和载体。其他方面包括通过将表达DLL3 CAR分子的宿主细胞引入患有癌症的个体来增强个体中T淋巴细胞或自然杀伤(NK)细胞的活性并治疗个体的方法。这些方面尤其包括肺癌(例如，小细胞肺癌)和黑素瘤。
生产多特异性抗原结合分子的方法
本公开提供了生产本文所述的任何多特异性抗原结合分子的方法。
在一个方面,本公开提供了一种多特异性抗原结合分子的生产方法，其中，所述多特异性抗原结合分子包含：
第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，其中第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个是Fab并且能够结合第一抗原和不同于第一抗原的第二抗原，但不同时结合两种抗原；和
包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的第三抗原结合部分，其能够结合不同于第一和第二抗原的第三抗原，优选在癌症细胞/组织上表达的抗原，
所述方法包括：
(a)提供一种或多种核酸，其编码：
i.第一多肽，其包含(从N末端至C末端)第三抗原结合部分的VH或VL，任选地重链恒定区(CH1)；和第一抗原结合部分的VH或VL，重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
ii.第二多肽，其包含(从N末端到C末端)第三抗原结合部分的VH或VL，任选地轻链恒定区(CL)；
iii.第三多肽，其包含(从N末端至C末端)第二抗原结合部分的VH或VL、重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
iv.第四多肽，其包含(从N末端至C末端)第二抗原结合部分的VH或VL，任选地轻链恒定区(CL)；和
v.第五多肽，其包含(从N端到C端)第一抗原结合部分的VH或VL，任选地轻链恒定区(CL)
(b)将(a)中产生的一种或多种核酸引入宿主细胞；
(c)培养宿主细胞以使(i)至(v)中的多肽被表达；和
(d)从步骤(c)中培养的细胞的培养液中收集包含(i)至(v)中的五种多肽的多特异性抗原结合分子；并且其中任选地，(iv)至(v)中的多肽是相同的；和
其中，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个包含至少一个不在铰链区的半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，优选地所述至少一个半胱氨酸残基位于CH1区；所述至少一个半胱氨酸残基能够在所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分之间(优选在CH1区)形成至少一个二硫键；
其中所述方法包括使所述制剂与还原剂接触。
在一个方面，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个在CH1区中根据EU编号的位置191处包含一个半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，其能够在所述第一抗原结合部分的CH1区和所述第二抗原结合部分的CH1区之间形成一个二硫键。
在一个方面,所述方法进一步包括步骤(e)使从步骤(d)收集的多特异性抗原结合分子(多特异性抗原结合分子)制剂与还原剂在还原条件下接触，所述还原条件允许在CH1区(根据EU编号的位置191)中的半胱氨酸形成一个或多个二硫键。
在一个方面，从步骤(d)收集的所述多特异性抗原结合分子制剂(在与还原剂接触之前)包含两种或更多种结构同工型，它们的区别在于位于CH1区的氨基酸残基之间或位于CH1区的位置191处(EU编号)形成的至少一个二硫键，并且步骤(e)与还原剂的接触优先富集或增加多特异性抗原结合分子结构同工型的群体，该多特异性抗原结合分子结构同工型具有在位于CH1区的氨基酸残基之间或位于CH1区的位置191处(EU编号)的至少一个二硫键。
在一个方面，与所述多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约3至约10。
在一个方面，与多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约6、7或8。
在一个方面，与多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约7。
在一个方面，与多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约3。
在一个方面，所述还原剂选自由TCEP、2-MEA、DTT、半胱氨酸、GSH和Na2SO3组成的组。
在一个方面，所述还原剂是TCEP，优选0.25mM TCEP。
在一个方面，所述还原剂的浓度为约0.01mM至约100mM。
在一个方面，所述还原剂的浓度为约0.01、0.05、0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10、25、50、100mM，优选约0.25mM。
在一个方面，接触步骤进行至少30分钟。
在一个方面，接触步骤进行约10分钟至约48小时。
在一个方面，接触步骤进行约2小时或约18小时。
在一个方面，所述接触步骤在约4摄氏度至37摄氏度的温度，优选在23摄氏度至25摄氏度的温度下进行。
在一个方面，多特异性抗原结合分子在与还原剂接触步骤之前至少部分纯化。
在一个方面，多特异性抗原结合分子在接触之前通过亲和层析(优选蛋白A层析)部分纯化。
在一个方面，所述多特异性抗原结合分子的浓度为约0.1mg/ml至约50mg/ml或更高。
在一个方面，所述多特异性抗原结合分子的浓度为约10mg/ml或约20mg/ml。
在一个方面,所述方法进一步包括促进半胱氨酸二硫键再氧化的步骤，优选通过除去还原剂，优选通过透析或缓冲液交换。
在一个方面，第三抗原结合部分是常规Fab,并且其中
(a)第一多肽，其包含(从N末端至C末端)第三抗原结合部分的VH，重链恒定区(CH1)；和第一抗原结合部分的VH，重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
(b)第二多肽，其包含(从N末端到C末端)第三抗原结合部分的VL，和轻链恒定区(CL)；
(c)第三多肽，其包含(从N末端至C末端)第二抗原结合部分的VH、重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
(d)第四多肽，其包含(从N末端至C末端)第二抗原结合部分的VL，和轻链恒定区(CL)；以及
(e)第五多肽，其包含(从N末端到C末端)第一抗原结合部分的VL，和轻链恒定区(CL)。
在一个方面，所述第三抗原结合部分是VH/VL交换Fab分子(其中Fab轻链的可变区和Fab重链的可变区被交换)，并且其中
(a)第一多肽，其包含(从N末端至C末端)第三抗原结合部分的VL，重链恒定区(CH1)；和第一抗原结合部分的VH，重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
(b)第二多肽，其包含(从N末端到C末端)第三抗原结合部分的VH，和轻链恒定区(CL)；
(c)第三多肽，其包含(从N末端至C末端)第二抗原结合部分的VH、重链恒定区(CH1)；和任选地铰链区和/或Fc区(CH2和CH3)；
(d)第四多肽，其包含(从N末端至C末端)第二抗原结合部分的VL，和轻链恒定区(CL)；以及
(e)第五多肽，其包含(从N末端到C末端)第一抗原结合部分的VL，和轻链恒定区(CL)。
在一个方面，在所述第一和第二抗原结合部分中每一个的CL中，位置123和124处的氨基酸分别是精氨酸(R)和赖氨酸(K)(根据Kabat编号)，并且其中在所述第一和第二抗原结合部分中每一个的重链的恒定结构域CH1中，位置147和213处的氨基酸是谷氨酸(E)(根据EU编号编号)。
在一个方面，其中在步骤(a)(i)中，在第三抗原结合部分和第一抗原结合部分的VH或VL之间的第一多肽进一步包含肽接头。
在一个方面，所述肽接头选自由SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249或SEQ ID NO:259的氨基酸序列组成的组。
在一个方面，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个能够结合CD3和CD137，但不同时结合CD3和CD137两者。
在一个方面，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a17)中的任一项：
(a1)SEQ ID NO:17的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:31的重链CDR 2、SEQ IDNO:45的重链CDR 3、SEQ ID NO:64的轻链CDR 1、SEQ ID NO:69的轻链CDR 2和SEQ ID NO:74的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:18的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:32的重链CDR 2、SEQ IDNO:46的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a4)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ ID NO:75的轻链CDR 3；
(a5)SEQ ID NO:20的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:34的重链CDR 2、SEQ IDNO:48的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a6)SEQ ID NO:22的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:36的重链CDR 2、SEQ IDNO:50的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a7)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a8)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ ID NO:76的轻链CDR 3；
(a9)SEQ ID NO:24的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:38的重链CDR 2、SEQ IDNO:52的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a10)SEQ ID NO:25的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:39的重链CDR 2、SEQID NO:53的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a11)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；
(a12)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a13)SEQ ID NO:27的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:41的重链CDR 2、SEQID NO:55的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a14)SEQ ID NO:28的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:42的重链CDR 2、SEQID NO:56的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；
(a15)SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR 2、SEQID NO:84的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ IDNO:75的轻链CDR 3；
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
在一个方面，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a17)中的任一项：
(a1)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a6)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a7)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a8)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a9)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a10)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a11)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a12)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a13)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a14)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；和
(a15)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区；
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
在一个方面,第三抗原结合部分能够结合DLL3，优选人DLL3。
在一个方面，能够结合DLL3的第三抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含SEQ ID NO:233的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:234的重链CDR 2、SEQ ID NO:235的重链CDR 3、SEQ ID NO:237的轻链CDR 1、SEQ ID NO:238的轻链CDR 2和SEQ ID NO:239的轻链CDR 3。
在一个方面，能够结合DLL3的第三抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含：包含SEQ ID NO:232的氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID NO:236的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个方面，多特异性抗原结合分子还包含Fc结构域。
在一个方面，所述Fc结构域由能够稳定缔合的第一和第二Fc区亚基组成，并且其中所述Fc结构域与天然人IgG1 Fc结构域相比，表现出对人Fcγ受体的结合亲和力降低。
在一个方面,多特异性抗原结合分子包含选自以下(a1)至(a15)中任一项的组合的五条多肽链：
(a1)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a2)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a3)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a4)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a5)包含SEQ ID NO:216的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:229的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a6)包含SEQ ID NO:217的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a7)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a8)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a9)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a10)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:230的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a11)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:212的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a12)包含SEQ ID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a13)包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a14)包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；和
(a15)包含SEQ ID NO:228的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:231的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
其中，优选地，五条多肽链(链1至链5)按照图1(a)所示的方向相互连接和/或缔合。
在一个方面，第四多肽(链4)和第五多肽(链5)是相同的。
在一个方面，其中仅一种核酸，或两种、三种、四种或五种不同的核酸编码并表达第一、第二、第三、第四和第五多肽。
与还原剂接触
“接触”是指在溶液中经受、暴露。抗体、蛋白质或多肽可以与还原剂接触，同时也与固体支持物(例如亲和柱或层析基质)结合。优选地，溶液是缓冲的。为了最大化具有所需构象的抗体/蛋白质的产量，选择溶液的pH值以保护抗体/蛋白质的稳定性并使其最适合二硫化物交换。在本发明的实践中，溶液的pH优选不是强酸性的。因此，一些pH范围大于pH 5，优选约pH 6至约pH 11，更优选约pH 7至约pH 10，还更优选约pH 6至约pH 8。在本发明的一个非限制性实施方案中，发现最适pH约为pH 7。然而，本领域技术人员可以容易地通过实验确定本发明特定实施方案的最适pH。
虽然不希望受以下理论的束缚，但认为UnLINC形式(即，没有工程化的二硫键或“配对半胱氨酸”的三价1+2抗体)的存在可能是由于未配对的Cys残基经常与含有游离硫醇基团的分子形成二硫键，例如半胱氨酰化和谷胱甘肽化，其“封端”了未配对的cys残基并防止LINC形成(工程化的二硫键的形成)。如图2(b)所示，为了去除未配对半胱氨酸的封端分子，还原剂可以帮助使表面半胱氨酸去封端，并且去封端的抗体的进一步再氧化(例如通过缓冲液交换去除还原剂)可以促进去封端的半胱氨酸之间形成二硫键用于LINC形成。因此，通过还原和再氧化从UnLINC形式的未配对巯基中去除半胱氨酸化可以去除UnLINC形式并提高抗体的同质性。
术语“还原试剂(reduction reagent)”和“还原剂(reducing agent)”可互换使用。在一些实施方案中，所述还原剂是游离硫醇。还原剂优选包括化合物，所述化合物来自由谷胱甘肽(GSH)、二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇、2-氨基乙硫醇(2-MEA)、TCEP(三(2-羧乙基)膦)、二硫代硝基苯甲酸酯、半胱氨酸和Na2SO3组成的组。在一些实施方案中，可以使用TCEP、2-MEA、DTT、半胱氨酸、GSH或Na2SO3。在一些优选实施方案中，可以使用2-MEA。在一些优选实施方案中，可以使用TCEP。
可以将还原剂添加到发酵培养基中，产生重组蛋白的细胞在该发酵培养基中生长。在另外的实施方案中，还可以在用于分离重组蛋白的LC分离步骤期间将还原剂添加到LC流动相中。在某些实施方案中，蛋白质被固定在LC柱的固定相上并且还原剂是流动相的一部分。在具体的实施方案中，未处理的IgG抗体可以作为由峰数指示的异质混合物洗脱。使用还原/氧化偶联剂产生更简单和更均一的峰模式。预期这种更均一的目标峰可以作为更均一的IgG制剂分离。
还原剂以足以增加所需构象的相对比例的浓度存在(例如，抗体的“配对半胱氨酸”形式，其具有在抗体的两个Fab之间形成的一个或多个工程化的二硫键，例如不在铰链区的氨基酸残基之间)。还原剂的最适绝对浓度和摩尔比取决于总IgG的浓度，在某些情况下还取决于特定的IgG亚类。当用于制备IgG1分子时，它还取决于蛋白质中未配对半胱氨酸的数量和可及性。通常，来自还原剂的游离硫醇的浓度可以为约0.05mM至约100mM，更优选约0.1mM至约50mM，还更优选约0.2mM至约20mM。在一些优选的实施方案中，还原剂的浓度为0.01、0.05、0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10、25、50、100mM。在一些优选的实施方案中，可以使用0.05mM至1mM的2-MEA。在一些优选的实施方案中，可以使用0.01mM至25mM的TCEP。
将重组蛋白的制剂与还原剂接触足够长的时间以增加所需构象的相对比例。比例的任何相对增加都是合乎需要的，包括例如至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％和甚至80％或90％的具有不希望的构象的蛋白质转化为具有所需构象的蛋白质。可以通过将还原剂提供给正在产生蛋白质的发酵培养基来进行接触。或者，接触发生在从产生蛋白质的细胞培养物中部分纯化蛋白质时。在其他实施方案中，在蛋白质已经从层析柱洗脱之后但在任何进一步处理之前进行接触。基本上，接触可以在抗体的制备、纯化、储存或配制期间的任何阶段进行。在一些实施方案中，可以在接触之前通过亲和层析(例如蛋白A层析)进行部分纯化。
也可以用附着在层析柱的固定相上的抗体进行接触，而还原剂是流动相的一部分；在这种情况下，接触可以作为层析纯化程序的一部分进行。代表性层析重折叠过程的示例可能包括尺寸排阻(SEC)；蛋白A柱可逆吸附过程中的溶剂交换；疏水相互作用层析(HIC)；固定化金属亲和层析(IMAC)；反相层析(RPC)；使用固定的折叠催化剂，例如GroE1、GroES或其他具有折叠特性的蛋白质。柱上重折叠很有吸引力，因为它很容易使用市售的制备层析系统实现自动化。最近在(Li等人,2004)中综述了微生物细胞中产生的重组蛋白在柱上的重折叠。
如果接触步骤对重组蛋白的部分或高度纯化的制剂进行，则接触步骤可以进行短至约1小时至约4小时，并且长至约6小时至约4天。已经发现约2至约48小时或约16小时的接触步骤效果很好。接触步骤也可以在另一个步骤中进行，例如在固相上或在过滤或任何其他纯化步骤中。
本发明的方法可以在很宽的温度范围内进行。例如，本发明的方法已在约4℃至约37℃的温度下成功实施，然而在较低温度下获得最佳结果。用于接触重组蛋白的部分或完全纯化的制剂的典型温度为约4℃至约25℃(环境温度)，或优选为23℃，但也可在较低温度和较高温度下进行。
此外，预期该方法可以在高压下进行。以前，高静水压力(1000-2000bar)与低于1M的低的非变性浓度的盐酸胍已被用于解聚(溶解)和重折叠由大肠杆菌产生的作为包含体的几种变性蛋白质，该包含体包括人类生长激素和溶菌酶和β-内酰胺酶(St John等人，Proc Natl Acad Sci USA，96:13029-13033(1999))。即使不添加GdmHCl，β-内酰胺酶也能以高产量的活性蛋白被重折叠。在另一项研究(Seefeldt等人，Protein Sci，13:2639-2650(2004))中，通过RP HPLC，在2000bas下通过高压调节重折叠获得的哺乳动物细胞产生的蛋白质bikunin的重折叠产率为70％，显著高于用传统的盐酸胍“稀释-重折叠”获得的55％的值(通过RP-HPLC)。这些发现表明，高静水压力有助于破坏分子间和分子内相互作用，导致蛋白质解折叠和解聚。高压对蛋白质的相互作用类似于蛋白质与离液剂的相互作用。因此，预期在本发明的方法中，不使用离液剂，而是使用高压来解折叠蛋白质。当然，在某些情况下也可以使用高压和离液剂的组合。
重组抗体/蛋白质的制剂可以酌情与各种体积的还原剂接触。例如，本发明的方法已经在分析实验室规模(1-50mL)、制备规模(50mL-10L)和制造规模(10L或更多)上成功实施。本发明的方法可以在小规模和大规模上进行，具有可重复性。因此，抗体的浓度可以是工业量(以克为单位的重量)(例如，特定IgG的工业量)或者可以是毫克量。在具体实施方案中，反应混合物中重组抗体的浓度为约1mg/ml至约50mg/ml，更具体地，10mg/ml、15mg/ml或20mg/ml。特别考虑了这些浓度的重组IgG1分子。
在某些实施方案中，使用含有还原剂的培养基产生的蛋白质在使用离液变性剂例如十二烷基硫酸钠(SDS)、尿素或盐酸胍(GuHCl)的单独加工步骤中被进一步加工。需要大量的离液剂来观察可觉察的解折叠。在一些实施方案中，加工步骤使用0.1M至2M离液剂，其产生与使用0.1M至2M盐酸胍等效的效果。在一个具体实施方案中，在大约1.0M盐酸胍或产生与1M盐酸胍相同或相似量的重折叠的量的其他离液剂存在下实现氧化重折叠。在一些实施方案中，该方法使用约1.5M至0.5M的离液剂。使用的离液剂的量基于在所述离液剂存在下蛋白质的结构稳定性。人们需要存在足够的离液剂来扰乱蛋白质的结构域相互作用的局部三级结构和/或四级结构，但少于完全解折叠分子和/或单个结构域的二级结构所需的量。为了确定蛋白质将通过平衡变性开始解折叠的点，本领域技术人员将离液剂滴定到含有蛋白质的溶液中并通过诸如圆二色性或荧光的技术监测结构。还有其他参数可用于解折叠或稍微扰乱可用于代替离液剂的蛋白质结构。温度和压力是先前用于改变蛋白质结构的两个基本参数，并且可以在与氧化还原剂接触时代替离液剂使用。发明人考虑到，本领域技术人员可以使用已显示使蛋白质结构变性或扰动的任何参数来代替离液剂。
二硫化物交换可以以本领域技术人员已知的任何方式淬灭。例如，可以通过纯化步骤去除还原剂或降低其浓度，和/或通过例如酸化溶液使其化学灭活。通常，当反应通过酸化淬灭时，含有还原剂的溶液的pH值将降至7以下。在一些实施方案中，使pH值低于pH 6。通常，pH降低至约pH 2至约pH 6之间。
在一些实施方案中，可以通过透析、缓冲液交换或本文所述的任何层析法进行去除还原剂。
优先富集(或增加)
术语“优先富集(或增加)”是指增加所需形式的相对丰度，或增加所需形式的相对比例，或增加所需形式(结构同工型)的群体。在一些实施方案中，本文所述的方法增加抗体结构同工型的相对丰度，例如具有在铰链区外的氨基酸残基之间形成的至少一个二硫键的抗体。在一个实施方案中，在第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域的相应CH1区中根据EU编号在位置191处的氨基酸残基之间形成所述至少一个二硫键。在某些实施方案中，所述方法产生具有至少50％、60％、70％、80％、90％、优选至少95％摩尔比的所述抗体的均质抗体制剂，所述抗体具有至少一个在铰链区外形成的二硫键。
同质
抗体的“同质”群体是指主要包含单一形式的抗体的抗体群体，例如溶液或组合物中至少50％、60％、70％、80％或更多，优选至少90％、95％，96％、97％、99％或100％的抗体处于适当折叠的形式。类似地，具有在铰链区外形成的至少一个二硫键的抗体的“同质”群体是指所述抗体群体主要包含单一的、适当折叠的形式，例如至少50％、60％、70％、80％或更多，优选至少90％、95％、96％、97％、99％或100％摩尔比的具有在铰链区外部形成的至少一个二硫键的所述抗体。在一个优选的实施方案中，所述抗体的“同质”群体包含至少一个二硫键，该二硫键形成于第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域的相应CH1区中根据EU编号在位置191处的氨基酸残基之间(即CH1区中的根据EU编号在位置191的“配对半胱氨酸”)。
在优选的实施方案中，本发明的方法通过本文所述的步骤产生同源抗体群体或同源抗体制剂。
可以使用多种分析和/或定性技术中的任何一种来确定抗体群体是否是同质的，以及混合物中蛋白质/抗体构象的相对丰度或比例。如果在诸如层析、电泳、过滤或其他纯化技术的分离技术中两种构象解析不同，则可以使用这种纯化技术确定混合物中构象的相对比例。例如，重组IgG的至少两种不同构象可以通过疏水相互作用层析法分离。此外，由于远紫外圆二色性已被用于估计蛋白质的二级结构组成(Perczel等人，1 991，ProteinEngrg.4：669-679)，因此这种技术可以确定是否存在蛋白质的备选构象。用于确定构象的另一种技术是荧光光谱法，它可用于确定可归属于色氨酸和酪氨酸荧光的三级结构中的互补差异。其他可用于确定构象差异并因此确定构象相对比例的技术为测量聚集状态的在线SEC、测量熔解转变(Tm's)和组分焓的差示扫描量热法，以及离液剂解折叠。另一种可用于确定构象差异并因此确定构象相对比例的技术是LC/MS检测以确定蛋白质的异质性。
或者，如果抗体/蛋白质的构象之间存在活性差异，则可以通过活性测定(例如，与配体的结合、酶活性、生物活性等)来确定混合物中构象的相对比例。也可以使用蛋白质的生物活性。或者，可以使用结合测定，其中活性表示为活性单位/mg蛋白质。
在下文详细描述的一些实施方案中，本发明使用IEC层析法来确定抗体/蛋白质的异质性。在这种情况下，抗体被纯化或被认为是“同质的”，这意味着在通过IEC层析分析时没有对应于其他多肽的多肽峰或级分是可检测到的。在某些实施方案中，抗体被纯化或被认为是“同质的”，使得在通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析时没有对应于其他多肽的多肽条带是可检测到的。相关领域的技术人员将认识到，由于不同的糖基化、不同的翻译后加工等，对应于多肽的多个条带可以通过SDS-PAGE显现。最优选地，本发明的多肽被纯化至基本同质，如通过SDS-PAGE分析后的单个多肽条带所表明的。多肽条带可以通过银染色、考马斯蓝染色和/或(如果多肽是放射性标记的)通过放射自显影来显现。
在此，SDS-PAGE分析条件的例子如下。使用4-20％Mini-PROTEAN(注册商标)TGXStain-FreeTM Precast Gels(Bio-Rad)和1x Tris/Glycine/SDS运行缓冲液(Bio-Rad)进行非还原性SDS-PAGE。将单克隆抗体样品在70℃下加热10分钟。上样0.2微克并在200V下进行电泳90分钟。用Chemidoc Imaging System(Bio-Rad)对蛋白质进行显现。通过Image Lab软件6.0版(Bio-Rad)分析单个条带的百分比，其中通过条带的强度除以这两个条带的总和计算单个条带的百分比强度(例如，更快的迁移(下部条带)和更慢的迁移(上部条带))。然后，凝胶可以用CBB染色，并且可以捕获凝胶图像，并且可以使用成像装置对条带进行量化。在凝胶图像中，对于抗体变体样品，可以观察到若干条带，例如两条条带，即“上部条带”和“下部条带”。在这种情况下，上部条带的分子量可以对应于亲本抗体(修饰前)的分子量。通过Fab的二硫键的诸如交联的结构变化可能是由半胱氨酸取代引起的，这可能导致电泳迁移率的变化。在这种情况下，可以认为下部的条带对应于具有在CH1区之间形成的一个或多个工程化的二硫键的抗体。与对照样品相比，具有额外半胱氨酸取代的抗体变体样品可能显示出更高的下部条带与上部条带比率。额外的半胱氨酸取代可以增强/促进Fab的二硫键交联；并且可以增加具有在突变位置形成的工程化的二硫键的抗体制剂的百分比或结构同质性；并且可以降低在突变位置没有形成工程化的二硫键的抗体制剂的百分比。
从抗体制剂中捕获和/或去除靶抗体的方法
本公开提供了用于从抗体制剂中捕获和/或去除靶抗体的方法。
在一个方面，本发明提供了一种从抗体制剂中捕获和/或去除靶抗体的方法，包括以下步骤：
a)使包含靶抗体的抗体制剂与固定在支持物上的抗原结合分子接触；和
b)允许通过与抗原结合分子特异性结合来捕获靶抗体；
其中所述抗体包含来自IgG(优选人IgG或人IgGl)的至少两个Fab，并且所述抗体制剂包含两个抗体结构同工型，其不同之处在于在CHl结构域的两个Fab之间形成的二硫键；和
其中所述抗原结合分子特异性结合并捕获不包含二硫键的靶抗体。
在一个方面，所述抗原结合分子在仅当靶抗体不具有二硫键时抗原结合分子可接近的表位处与靶抗体结合。
在一个方面，所述二硫键是在抗体的两个Fab之间在CH1结构域中根据EU编号在位置191形成的二硫键。
在一个方面，特异性结合靶抗体的抗原结合分子是包含选自由以下组成的组中的任一种的抗体：
(a1)SEQ ID NO:166的重链CDR1、SEQ ID NO:170的重链CDR 2、SEQ ID NO:174的重链CDR 3、SEQ ID NO:182的轻链CDR 1、SEQ ID NO:186的轻链CDR 2和SEQ ID NO:190的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:167的重链CDR1、SEQ ID NO:171的重链CDR 2、SEQ ID NO:175的重链CDR 3、SEQ ID NO:183的轻链CDR 1、SEQ ID NO:187的轻链CDR 2和SEQ ID NO:191的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:168的重链CDR1、SEQ ID NO:172的重链CDR 2、SEQ ID NO:176的重链CDR 3、SEQ ID NO:184的轻链CDR 1、SEQ ID NO:188的轻链CDR 2和SEQ ID NO:192的轻链CDR 3；
(a4)SEQ ID NO:169的重链CDR1、SEQ ID NO:173的重链CDR 2、SEQ ID NO:177的重链CDR 3、SEQ ID NO:185的轻链CDR 1、SEQ ID NO:189的轻链CDR 2和SEQ ID NO:193的轻链CDR 3；
(a5)SEQ ID NO:166的重链CDR1、SEQ ID NO:170的重链CDR 2、SEQ ID NO:174的重链CDR 3、SEQ ID NO:115的轻链CDR 1、SEQ ID NO:124的轻链CDR 2和SEQ ID NO:134的轻链CDR 3；
(a6)SEQ ID NO:167的重链CDR1、SEQ ID NO:171的重链CDR 2、SEQ ID NO:175的重链CDR 3、SEQ ID NO:116的轻链CDR 1、SEQ ID NO:125的轻链CDR 2和SEQ ID NO:135的轻链CDR 3；
(a7)SEQ ID NO:168的重链CDR1、SEQ ID NO:172的重链CDR 2、SEQ ID NO:176的重链CDR 3、SEQ ID NO:118的轻链CDR 1、SEQ ID NO:128的轻链CDR 2和SEQ ID NO:137的轻链CDR 3；
(a8)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的相同表位结合的抗体；和
(a9)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的结合竞争的抗体。
在一个方面，特异性结合靶抗体的抗原结合分子是包含选自由以下组成的组中的任一种的抗体：
(a1)包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:179的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:165的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:196的氨基酸序列的轻链可变区；
(a6)包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:197的氨基酸序列的轻链可变区；
(a7)包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:198的氨基酸序列的轻链可变区；
(a8)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的相同表位结合的抗体；和
(a9)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的结合竞争的抗体。
在一个方面，靶抗体包含选自以下(a1)至(a15)中任一项的组合的五条多肽链：
(a1)包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:208的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a2)包含SEQ ID NO:203的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a3)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a4)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:209的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a5)包含SEQ ID NO:216的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:229的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a6)包含SEQ ID NO:217的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a7)包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a8)包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a9)包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a10)包含SEQ ID NO:222的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:230的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:214的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a11)包含SEQ ID NO:223的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:212的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a12)包含SEQ ID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a13)包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
(a14)包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:213的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；和
(a15)包含SEQ ID NO:228的氨基酸序列的多肽链(链1)，包含SEQ ID NO:206的氨基酸序列的多肽链(链2)，包含SEQ ID NO:231的氨基酸序列的多肽链(链3)和各自包含SEQID NO:215的氨基酸序列的两条多肽链(链4和链5)；
其中，优选地，五条多肽链(链1至链5)按照图1(a)所示的方向相互连接和/或缔合。
构象特异性抗体
本公开提供了构象特异性抗体，其仅当靶抗体在两个Fab之间(例如在CH1区)不具有工程化的二硫键(“未配对半胱氨酸”形式)时特异性结合靶抗体。在一个方面，当靶抗体具有工程化的二硫键(“配对的半胱氨酸”形式)时，由于例如空间位阻或由工程化的二硫键造成的两个Fab之间的距离减小，表位对于构象特异性抗体是不可及的。
在一个方面，构象特异性抗体(特异性结合靶抗体的抗原结合分子)包含选自由以下组成的组中的任一种：
(a1)SEQ ID NO:166的重链CDR1、SEQ ID NO:170的重链CDR 2、SEQ ID NO:174的重链CDR 3、SEQ ID NO:182的轻链CDR 1、SEQ ID NO:186的轻链CDR 2和SEQ ID NO:190的轻链CDR 3；
(a2)SEQ ID NO:167的重链CDR1、SEQ ID NO:171的重链CDR 2、SEQ ID NO:175的重链CDR 3、SEQ ID NO:183的轻链CDR 1、SEQ ID NO:187的轻链CDR 2和SEQ ID NO:191的轻链CDR 3；
(a3)SEQ ID NO:168的重链CDR1、SEQ ID NO:172的重链CDR 2、SEQ ID NO:176的重链CDR 3、SEQ ID NO:184的轻链CDR 1、SEQ ID NO:188的轻链CDR 2和SEQ ID NO:192的轻链CDR 3；
(a4)SEQ ID NO:169的重链CDR1、SEQ ID NO:173的重链CDR 2、SEQ ID NO:177的重链CDR 3、SEQ ID NO:185的轻链CDR 1、SEQ ID NO:189的轻链CDR 2和SEQ ID NO:193的轻链CDR 3；
(a5)SEQ ID NO:166的重链CDR1、SEQ ID NO:170的重链CDR 2、SEQ ID NO:174的重链CDR 3、SEQ ID NO:115的轻链CDR 1、SEQ ID NO:124的轻链CDR 2和SEQ ID NO:134的轻链CDR 3；
(a6)SEQ ID NO:167的重链CDR1、SEQ ID NO:171的重链CDR 2、SEQ ID NO:175的重链CDR 3、SEQ ID NO:116的轻链CDR 1、SEQ ID NO:125的轻链CDR 2和SEQ ID NO:135的轻链CDR 3；
(a7)SEQ ID NO:168的重链CDR1、SEQ ID NO:172的重链CDR 2、SEQ ID NO:176的重链CDR 3、SEQ ID NO:118的轻链CDR 1、SEQ ID NO:128的轻链CDR 2和SEQ ID NO:137的轻链CDR 3；
(a8)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的相同表位结合的抗体；和
(a9)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的结合竞争的抗体。
在一个方面，构象特异性抗体(特异性结合靶抗体的抗原结合分子)包含选自由以下组成的组中的任一种：
(a1)包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:179的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:165的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:181的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:196的氨基酸序列的轻链可变区；
(a6)包含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:197的氨基酸序列的轻链可变区；
(a7)包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:198的氨基酸序列的轻链可变区；
(a8)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的相同表位结合的抗体；和
(a9)与包含(a1)至(a7)中任一项的抗体的结合竞争的抗体。
在一个方面，构象特异性抗体(特异性结合靶抗体的抗原结合分子)特异性地结合人IgG1的CH1。
在一个方面，构象特异性抗体(特异性结合靶抗体的抗原结合分子)在人IgG1的2个Fab的CH1结构域之间形成二硫键时，不与人IgG1的CH1特异性的结合。在还一个方面，所述二硫键是在IgG1的两个Fab之间在CH1结构域中根据EU编号的位置191处形成的二硫键。
在一个方面，构象特异性抗体(特异性结合靶抗体的抗原结合分子)不特异性地结合人IgG4的CH1。
本公开提供了构象特异性抗体(特异性结合靶抗体的抗原结合分子)在纯化、分析或定量含抗体样品中的用途。
抗原
如本文所用，术语“抗原”是指多肽大分子上与抗原结合部分结合、形成抗原结合部分-抗原复合物的位点(例如连续的氨基酸段或由不连续氨基酸的不同区域组成的构象构型)。有用的抗原决定簇可发现于例如肿瘤细胞表面、病毒感染细胞表面、其他患病细胞的表面、免疫细胞的表面、游离于血清中和/或细胞外基质(ECM)。
第一抗原结合部分和/或第二抗原结合部分所结合的“第一抗原”或“第二抗原”优选为例如免疫细胞表面分子(例如T细胞表面分子、NK细胞表面分子、树突细胞表面分子、B细胞表面分子、NKT细胞表面分子、MDSC细胞表面分子和巨噬细胞表面分子)，或不仅在肿瘤细胞、肿瘤血管、基质细胞等上而且在正常组织上表达的抗原(整联蛋白、组织因子、VEGFR、PDGFR、EGFR、IGFR、MET趋化因子受体、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、CD44、纤连蛋白、DR5、TNFRSF等)。
对于“第一抗原”和“第二抗原”的组合，优选地，第一抗原和第二抗原中的任一个例如是在T细胞上特异性表达的分子，另一个抗原是在T细胞或任何其他免疫细胞的表面上表达的分子。在“第一抗原”和“第二抗原”组合的另一个实施方案中，优选地，第一抗原和第二抗原中的任一个为例如在T细胞上特异性表达的分子，另一个抗原是在免疫细胞上表达的并与初步选择的抗原不同的分子。
在T细胞上特异性表达的分子的具体例子包括CD3和T细胞受体。特别地，优选CD3。例如，在人CD3的情况下，本发明的抗原结合分子结合的CD3中的一个位点可以是构成人CD3的γ链、δ链或ε链序列中存在的任何表位。特别优选存在于人CD3复合物中ε链的细胞外区域中的表位。构成CD3的γ链、δ链和ε链结构的多核苷酸序列为NM_000073.2、NM_000732.4和NM_000733.3，并且其多肽序列为NP_000064.1、NP_000723.1和NP_000724.1(RefSeq注册号)。其他抗原的例子包括FCγ受体，TLR，凝集素，IGA，免疫检查点分子，TNF超家族分子，TNFR超家族分子和NK受体分子。
在一个实施方案中，第一抗原是在T细胞上特异性表达的分子，优选T细胞受体复合物分子例如CD3，更优选人CD3。在另一个实施方案中，第二抗原是在T细胞或任何其他免疫细胞上表达的分子，优选在免疫细胞上的细胞表面调节剂，更优选在T细胞上表达的共刺激分子，甚至更优选“TNF超家族”或“TNF受体超家族”的蛋白质，包括但不限于人CD137(4-1BB)、CD137L、CD40、CD40L、0X40、0X40L、CD27、CD70、HVEM、LIGHT、RANK、RANKL、CD30、CD153、GITR、和GITRL。在一个优选的实施方案中，第一抗原是CD3，第二抗原是CD137。这里，第一抗原和第二抗原可互换定义。
本文中的术语“CD137”，也称为4-1BB，是肿瘤坏死因子(TNF)受体家族的成员。属于TNF超家族或TNF受体超家族的因子的示例包括CD137、CD137L、CD40、CD40L、OX40、OX40L、CD27、CD70、HVEM、LIGHT、RANK、RANKL、CD30、CD153、GITR和GITRL。
在本发明的一些实施方案中，本发明的抗原结合分子还包含与不同于上述“第一抗原”和“第二抗原”的“第三抗原”结合的第三抗原结合部分。与本发明的第三抗原结合的第三抗原结合结构域可以是识别任意抗原的抗原结合部分。与本发明的第三抗原结合的第三抗原结合部分可以是识别在癌组织中特异性表达的分子的抗原结合部分。
在本发明中，本发明的抗原结合分子中的第三抗原结合部分与不同于“第一抗原”和“第二抗原”的“第三抗原”结合。在一些实施方案中，第三抗原来源于人、小鼠、大鼠、猴、兔或狗。在一些实施方案中，第三抗原是在源自人、小鼠、大鼠、猴、兔或狗的细胞或器官上特异性表达的分子。第三抗原优选地是不在细胞或器官上系统表达的分子。第三抗原优选为例如肿瘤细胞特异性抗原，并且还包括与细胞恶性改变相关表达的抗原以及在细胞恶性转化过程中出现在细胞表面上的异常糖链或蛋白质分子。其具体实例包括ALK受体(多营养因子受体)、多营养因子、KS 1/4胰腺癌抗原、卵巢癌抗原(CA125)、前列腺酸磷酸盐、前列腺特异性抗原(PSA)、黑素瘤相关抗原p97、黑素瘤抗原gp75、高分子量黑素瘤抗原(HMW-MAA)、前列腺特异性膜抗原、癌胚抗原(CEA)、多形性上皮粘蛋白抗原、人乳脂肪球抗原、结直肠肿瘤相关抗原(例如CEA、TAG-72、CO17-1A、GICA 19-9、CTA-1和LEA)、伯基特淋巴瘤抗原38.13、CD19、人B淋巴瘤抗原CD20、CD33、黑素瘤特异性抗原(例如，神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、神经节苷脂GM2和神经节苷脂GM3)、肿瘤特异性移植抗原(TSTA)、T抗原、病毒诱导的肿瘤抗原(例如DNA肿瘤病毒和RNA肿瘤病毒的包膜抗原)、结肠CEA、癌胚抗原甲胎蛋白(例如癌胚滋养层糖蛋白5T4和癌胚膀胱肿瘤抗原)，分化抗原(例如，人肺癌抗原L6和L20)，纤维肉瘤抗原，人T细胞白血病相关抗原Gp37，新生糖蛋白，鞘脂，乳腺癌抗原(例如，EGFR(上皮生长因子受体))，NY-BR-16、NY-BR-16和HER2抗原(p185HER2)、多形性上皮粘蛋白(PEM)、恶性人淋巴细胞抗原APO-1、分化抗原如胎儿红细胞中发现的I抗原、成人红细胞中发现的原代内胚层I抗原，移植或胃癌前胚胎中发现的I(Ma)，乳腺上皮中发现的M18，M39、骨髓细胞中发现的SSEA-1，VEP8、VEP9、Myl、VIM-D5，结直肠癌中发现的D156-22，TRA-1-85(H血型),睾丸和卵巢癌中发现的SCP-1,结肠癌中发现的C14,肺癌中发现的F3,胃癌中发现的AH6,Y半抗原,胚胎癌细胞中发现的Ley,TL5(A血型)，A431细胞中发现的EGF受体，胰腺癌中发现的E1系列(B血型),胚胎癌细胞中发现的FC10.2,胃癌抗原,腺癌中发现的CO-514(Lea血型)，腺癌中发现的NS-10,CO-43(Leb血型)，A431细胞EGF受体中发现的G49，结肠癌中发现的MH2(血型ALeb/Ley)，结肠癌中发现的19.9，胃癌粘蛋白，骨髓细胞中发现的T5A7，黑素瘤中发现的R24，胚胎癌细胞中发现的4.2、GD3、D1.1、OFA-1、GM2、OFA-2、GD2和M1:22:25:8，4细胞至8细胞胚胎中发现的SSEA-3和SSEA-4，皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原，MART-1抗原，唾液酸Tn(STn)抗原，结肠癌抗原NY-CO-45，肺癌抗原NY-LU-12变体A、腺癌抗原ART1，副肿瘤相关脑睾丸癌抗原(癌神经元抗原MA2和副肿瘤神经元抗原),神经肿瘤腹侧抗原2(NOVA2),血细胞癌抗原基因520,肿瘤相关抗原CO-029,肿瘤相关抗原MAGE-C1(癌症/睾丸抗原CT7),MAGE-B1(MAGE-XP抗原),MAGE-B2(DAM6),MAGE-2,MAGE-4a,MAGE-4b MAGE-X2,癌症-睾丸抗原(NY-EOS-1),YKL-40，以及这些多肽的任何片段，及其修饰结构(上述修饰的磷酸基团、糖链等)，EpCAM，EREG，CA19-9，CA15-3，唾液酸SSEA-1(SLX)，HER2，PSMA，CEA和CLEC12A。
在一个优选的实施方案中，第三抗原是磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)。在又一个实施方案中，第三抗原是DLL3(δ样3)。
除非另有说明，本文使用的术语“DLL3”是指来自任何脊椎动物来源的任何天然DLL3(δ样3)，包括哺乳动物如灵长类动物(例如人)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。该术语包括“全长”未加工的DLL3以及由细胞中加工产生的任何形式的DLL3。该术语还包括天然存在的DLL3变体，例如剪接变体或等位基因变体。示例性人DLL3的氨基酸序列已知为NCBI参考序列(RefSeq)NM_016941.3，示例性食蟹猴DLL3的氨基酸序列已知为NCBI参考序列XP_005589253.1，和示例性小鼠DLL3的氨基酸序列已知为NCBI参考序列NM_007866.2。
人DLL3蛋白在C末端侧包含跨膜(TM)区和细胞内结构域，在N末端侧包含DSL(Notch)结构域。另外，DLL3具有EGF结构域,所述EGF结构域包含从N末端侧到C末端侧的6个区域，EGF1至EGF6。在一些实施方案中，本发明的多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分结合细胞外结构域(ECD)内的表位，即从N末端到紧接TM区之前的结构域，但不结合TM区或C末端细胞内结构域。本发明的多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分可以结合ECD内的任何上述结构域/区域内的表位。在优选的实施方案中，本发明的多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分与从EGF6到紧接TM区之前的区域内的表位结合。更具体地，本发明的多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分可以结合人DLL3中SEQ ID NO:89中定义的区域内的表位。在一些实施方案中，本发明的分子/抗体结合EGF1、EGF2、EGF3、EGF4、EGF5或EGF6区域或从EGF6到紧接在人DLL3的TM区之前的区域，或EGF1、EGF2、EGF3、EGF4、EGF5或EGF6区域或从EGF6到紧接在人DLL3的TM区之前的区域内的表位。
在人DLL3中，上述结构域/区域具有以下氨基酸残基(参见例如http://www.uniprot.org/uniprot/Q9NYJ7或WO2013/126746)：
细胞外结构域(ECD)：位置1至492处的氨基酸残基；
DSL结构域：位置176至215处的氨基酸残基；
EGF结构域：位置216至465处的氨基酸残基；
EGF1区：位置216至249处的氨基酸残基；
EGF2区：位置274至310处的氨基酸残基；
EGF3区：位置312至351处的氨基酸残基；
EGF4区：位置353至389处的氨基酸残基；
EGF5区：位置391至427处的氨基酸残基；
EGF6区：位置429至465处的氨基酸残基；
从EGF6到紧接TM区之前的区域：位置429至492处的氨基酸残基；
TM区：位置493至513处的氨基酸残基；和
C末端细胞内结构域：位置516至618处的氨基酸残基(或在某些同工型中为516至587处)。上述氨基酸位置也指在SEQ ID NO:90所示氨基酸序列中的氨基酸位置。
因此，本发明的多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分可以与具有在人DLL3的上述位置的氨基酸残基的上述区域/结构域结合。即，本发明的多特异性抗原结合分子或DLL3抗原结合部分可以与具有在人DLL3中上述位置的氨基酸残基的上述区域/结构域内的表位结合。
本发明中使用的DLL3蛋白质可以是具有上述序列的DLL3蛋白质，也可以是通过一个或多个氨基酸的修饰具有来自上述序列的序列的修饰蛋白质。通过一个或多个氨基酸的修饰具有来自上述序列的序列的修饰蛋白质的例子可以包括与上述氨基酸序列具有70％或更多、优选80％或更多、更优选90％或更多、甚至更优选95％或更多同一性的多肽。或者，可以使用这些DLL3蛋白质的部分肽。
本发明中使用的DLL3蛋白质不受其来源的限制，优选人或食蟹猴DLL3蛋白质。
在一些实施方案中，对于DLL3蛋白，可以使用DLL3 ECD片段蛋白质(或ECD变体)。取决于截短位点，片段/变体可以从N末端侧到C末端侧包含DSL结构域至EGF6、EGF1至EGF6、EGF2至EGF6、EGF3至EGF6、EGF4至EGF6、EGF5和EGF6，或EGF6。片段/变体还可以包含跨越从紧接在EGF6区之后到紧接在TM区之前的区域。可以使用本领域公知的技术将Flag标签连接到片段/变体的C末端。
在某些实施方案中，本文所述的多特异性抗原结合分子结合在来自不同物种的CD3、CD137或DLL3中保守的CD3、CD137或DLL3的表位。在某些实施方案中，本申请的多特异性抗原结合分子是三特异性抗原结合分子，即它能够特异性结合三种不同的抗原——能够结合CD3或CD137中的任一种但不同时结合两种抗原，并且能够特异性结合DLL3。
在某些实施方案中，多特异性抗原结合分子特异性结合CD3的部分肽的全部或部分。在特定实施方案中，CD3是人CD3或食蟹猴CD3，最特别是人CD3。在特定实施方案中，多特异性抗原结合分子对人和食蟹猴CD3具有交叉反应性(即特异性结合)。在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子能够特异性结合CD3的ε亚基，特别是SEQ ID NO:7(NP_000724.1)(RefSeq注册号显示在括号内)中所示的CD3的人CD3ε亚基。在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子能够特异性结合在真核细胞表面上表达的CD3ε链。在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子结合在T细胞表面上表达的CD3ε链。
在某些实施方案中，CD137是人CD137。在一些实施方案中，本发明的抗原结合分子的有利实例包括与选自由以下组成的组的抗体结合的人CD137表位相同的表位结合的抗原结合分子：
识别包含SPCPPNSFSSAGGQRTCD
ICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGC
序列(SEQ ID NO:21)的区域的抗体
识别包含DCTPGFHCLGAGCSMCEQDC
KQGQELTKKGC序列(SEQ ID NO:35)的区域的抗体
识别包含LQDPCSNC
PAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAEC
序列(SEQ ID NO:49)的区域的抗体，和
识别包含人CD137蛋白中LQDPCSNCPAGTFCDNNRN
QIC序列(SEQ ID NO:105)的区域的抗体。
至少一个二硫键
在本发明的一个方面，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个包含至少一个半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，优选在CH1区，并且所述至少一个半胱氨酸残基能够在所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分之间形成至少一个二硫键。在某些实施方案中，半胱氨酸残基存在于抗体重链恒定区的CHl区内，例如，它存在于CH1区中选自由根据EU编号的位置119、122、123、131、132、133、134、135、136、137、139、140、148、150、155、156、157、159、160、161、162、163、165、167、174、176、177、178、190、191、192、194、195、197、213和214组成的组中的位置。在一个实施方案中，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个在CH1区中根据EU编号的位置191处包含一个半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，其能够在所述第一抗原结合部分的CH1区和所述第二抗原结合部分的CH1区之间形成一个二硫键。
在上述方面的实施方案中，如上所述形成的连接第一抗原结合部分和第二抗原结合部分的“至少一个键”可以保持两个抗原结合部分(即，如上所述的第一抗原结合部分和第二抗原结合部分)在空间上接近的位置。借助于第一抗原结合部分和第二抗原结合部分之间通过二硫键的连接，本发明的抗原结合分子能够将两个抗原结合部分保持在比对照抗原结合分子更近的位置，其与本发明的抗原结合分子的不同之处仅在于对照抗原结合分子在两个抗原结合部分之间不具有引入的另外的键。在一些实施方案中，术语“空间上接近的位置”或“更接近的位置”包括这样的含义，即如上所述的第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域保持在缩短的距离和/或降低的柔韧性。
结果，本发明的抗原结合分子的两个抗原结合部分(即，如上所述的第一抗原结合部分和第二抗原结合部分)与在相同单个细胞上表达的抗原结合。换句话说，本发明的抗原结合分子的各自的两个抗原结合部分(即，如上所述的第一抗原结合部分和第二抗原结合部分)不与在不同细胞上表达的抗原结合，从而导致不同细胞的交联。在本申请中，本发明的抗原结合分子的这种抗原结合方式可以称为“顺式结合”，而抗原结合分子的两个抗原结合部分各自与在不同细胞上表达的抗原结合，从而引起不同细胞的交联的抗原结合分子的抗原结合方式可以被称为“反式结合”。在一些实施方案中，本发明的抗原结合分子主要以“顺式-结合”方式与在相同单个细胞上表达的抗原结合。
在上述方面的实施方案中，借助于如上所述的第一抗原结合部分和第二抗原结合部分之间的二硫键的连接，本发明的抗原结合分子能够还原和/或防止免疫细胞(例如T细胞，NK细胞，DC细胞等)的不想要的交联和活化。也就是说，在本发明的一些实施方案中，本发明的抗原结合分子的第一抗原结合部分与在免疫细胞例如T细胞上表达的任何信号分子(例如，第一抗原)结合，本发明的抗原结合分子的第二抗原结合结构域也与在免疫细胞例如T细胞上表达的任何信号分子(例如，第一抗原或不同于第一抗原的第二抗原)结合。因此，本发明的抗原结合分子的第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域可以与在相同单个免疫细胞例如T细胞(即，顺式结合方式)或在不同的免疫细胞(例如T细胞)上(即反式结合方式)表达的第一或第二信号分子中的任意一个结合。当第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域以反式结合方式与在不同的免疫细胞例如T细胞上表达的信号分子结合时，那些不同的免疫细胞例如T细胞被交联，并且在某些情况下，诸如T细胞的免疫细胞的这种交联可能导致诸如T细胞的免疫细胞的不希望的活化。
另一方面，在本发明的抗原结合分子的另一个实施方案的情况下，即，包含第一抗原结合部分和第二抗原结合部分的抗原结合分子，所述第一抗原结合部分和第二抗原结合部分通过CH1区(根据EU编号的位置191处)中的至少一个二硫键彼此连接，第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域都可以与在相同单个免疫细胞如T细胞上表达的信号分子以“顺式-结合”的方式结合，从而可以减少不同的免疫细胞例如T细胞通过抗原结合分子的交联，以避免免疫细胞的不希望的活化。
在本申请中，上述特征，在CH1区(例如，根据EU编号的位置191处)中，连接第一抗原结合部分和第二抗原结合部分的的至少一个二硫键可以用缩写术语“LINC”来描述。使用该缩写，在一些实施方案中，本发明的上述抗原结合分子可以表示为例如“双/LINC”、“DLL3-双/LINC”，“配对半胱氨酸形式”或“GPC3-双/双(linc)”等。其第一抗原结合部分和第二抗原结合部分未通过CH1区(例如根据EU编号的位置191处)中的至少一个二硫键彼此连接/尚未连接的抗原结合分子可以用缩写术语“UnLINC”或“具有未配对半胱氨酸的双-LINC-Ig”等来描述。
铰链区
术语“铰链区”表示野生型抗体重链中的抗体重链多肽部分，其连接CH1结构域和CH2结构域，例如根据EU编号系统从大约位置216到大约位置230，或根据Kabat编号系统从大约位置226到大约位置243。已知在天然IgG抗体中，铰链区中根据EU编号的位置220处的半胱氨酸残基与抗体轻链中位置214处的半胱氨酸残基形成二硫键。还已知在两条抗体重链之间，铰链区中根据EU编号，在位置226的半胱氨酸残基之间和位置229的半胱氨酸残基之间形成二硫键。通常，“铰链区”定义为从人IgG1从216延伸到238(EU编号)或从226延伸到251(Kabat编号)。该铰链可以进一步分为三个不同的区域，上铰链、中央铰链和下铰链。在人IgG1抗体中，这些区域通常定义如下：
上铰链：216-225(EU编号)或者226-238(Kabat编号),
中央铰链：226-230(EU编号)或者239-243(Kabat编号),
下铰链：231-238(EU编号)或者244-251(Kabat编号)。
其他IgG同种型的铰链区可以通过将形成重链间SS键的第一个和最后一个半胱氨酸残基放在相同位置与IgG1序列比对(例如，Brekke等人，1995，Immunol(参见Today 16:85-90的表1)。本文的铰链区包括野生型铰链区以及变体，其中野生型铰链区中的一个或多个氨基酸残基通过取代、添加或缺失而改变。
术语“不在铰链区的氨基酸之间形成的二硫键”(或“在铰链区外的氨基酸之间形成的二硫键”)是指通过位于上述“铰链区”外的任何抗体区中的氨基酸形成、连接(connect)或连接(link)的二硫键。例如，此类二硫键通过抗体中除铰链区以外的任何位置的氨基酸形成、连接或连接(例如，根据EU编号系统，从大约位置216至大约位置230，或根据Kabat编号系统从大约位置226到大约位置243)。在一些实施方案中，此类二硫键通过位于CH1区、CL区、VL区、VH区和/或VHH区中的氨基酸形成、连接或连接。在一些实施方案中，此类二硫键通过在CH1区中根据EU编号位于位置119至123、131至140、148至150、155至167、174至178、188至197、201至214的氨基酸形成、连接或连接。在一些实施方案中，此类二硫键通过在CH1区中根据EU编号位于位置119,122,123,131,132,133,134,135,136,137,138,139,140,148,150,155,156,157,159,160,161,162,163,164,165,167,174,176,177,178,188,189,190,191,192,193,194,195,196,197,201,203,205,206,207,208,211,212,213,214的氨基酸形成、连接或连接。在一些实施方案中，此类二硫键通过在CHl区中根据EU编号位于位置188、189、190、191、192、193、194、195、196和197的氨基酸形成、连接或连接。在一个优选的实施方案中，这种二硫键通过在CH1区中根据EU编号位于位置191的氨基酸形成、连接或连接。
抗原结合结构域
术语“抗原结合结构域”是指抗体的一部分，其包含与抗原的部分或全部特异性结合并互补的区域。抗原结合结构域可以由例如一个或多个抗体可变结构域(也称为抗体可变区)提供。优选地，抗原结合结构域包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)两者。这种优选的抗原结合结构域包括例如“单链Fv(scFv)”、“单链抗体”、“Fv”、“单链Fv2(scFv2)”、“Fab”和“F(ab')2”。
可变区
术语“可变区”或“可变结构域”是指参与抗体与抗原结合的抗体重链或轻链的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个高变区(HVR)。(参见，例如Kindt等人，KubyImmunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91页(2007))。单个VH或VL结构域可能足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合抗原的抗体的VH或VL结构域来分别筛选互补VL或VH结构域的文库，从而分离结合特定抗原的抗体。参见，例如，Portolano等，J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson等，Nature 352：624-628(1991)。
HVR或CDR
如本文所用，术语“高变区”或“HVR”是指在序列上高变(“互补决定区”或“CDR”)和/或形成结构上定义的环(“高变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原接触”)的抗体可变结构域的每个区域。高变区(HVR)也称为“互补决定区”(CDR)，这些术语在本文中可互换使用，指的是形成抗原结合区的可变区部分。通常，抗体包含六个HVR：VH中的三个(H1，H2，H3)和VL中的三个(L1，L2，L3)。本文中的示例性HVR包括：
(a)出现在氨基酸残基26-32(L1)，50-52(L2)，91-96(L3)，26-32(H1)，53-55(H2)和96-101(H3)处的高变环(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987))；
(b)出现在氨基酸残基24-34(L1)，50-56(L2)，89-97(L3)，31-35b(H1)，50-65(H2)和95-102(H3)处的CDR(Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第五版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))；
(c)出现在氨基酸残基27c-36(L1)，46-55(L2)，89-96(L3)，30-35b(H1)，47-58(H2)和93-101(H3)处的抗原接触(MacCallum等人，J.Mol.Biol.262：732-745(1996))；和
(d)(a)、(b)和/或(c)的组合，包括HVR氨基酸残基46-56(L2)，47-56(L2)，48-56(L2)，49-56(L2)，26-35(H1)，26-35b(H1)，49-65(H2)，93-102(H3)和94-102(H3)。
除非另有说明，否则可变结构域中的HVR残基和其他残基(例如FR残基)在本文中根据Kabat等编号,见上文。
HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3也分别被称为“H-CDR1”、“H-CDR2”、“H-CDR3”、“L-CDR1”、“L-CDR2”和“L-CDR3”。
能够与CD3和CD137结合，但不能同时与CD3和CD137结合
可以通过本领域中已知的方法来确定本发明的抗体可变区是否“能与CD3和CD137结合”。
例如，这可以通过电化学发光法(ECL法)来确定(BMC Research Notes2011,4:281)。
具体而言，例如，由经生物素标记的待测抗原结合分子的能够与CD3和CD137结合的区(例如Fab区)构成的低分子抗体或者其单价抗体(缺少通常抗体所具有的两个Fab区之一的抗体)与用磺基标签(Ru络合物)标记的CD3或CD137混合，将混合物添加到链霉亲和素固定化板上。在该操作中，待测试的生物素标记的抗原结合分子与平板上的链霉亲和素结合。使磺基标签发光，利用Sector Imager 600或2400(MSD K.K.)等检测发光信号，从而确认待测抗原结合分子的上述区域与CD3或CD137的结合。
或者，可以通过ELISA或FACS(荧光激活细胞分选术)、ALPHAScreen(AmplifiedLuminescent Proximity Homogeneous Assay，放大发光邻近均质测定筛选)或基于表面等离振子共振(SPR)现象的BIACORE法等来进行该测定(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010)。
具体而言，例如，可以使用基于表面等离振子共振(SPR)现象的相互作用分析仪Biacore(GE Healthcare Japan Corp.)来进行该测定。Biacore分析仪包括任意型号，例如Biacore T100、T200、X100、A100、4000、3000、2000、1000、8K或C。可将Biacore的任意传感器芯片，例如，CM7、CM5、CM4、CM3、C1、SA、NTA、L1、HPA或Au芯片用作传感器芯片。通过例如胺偶联、二硫化物偶联(disulfide coupling)、醛偶联的偶联方法将捕获本发明的抗原结合分子的蛋白(例如蛋白A、蛋白G、蛋白L、抗人IgG抗体、抗人IgG-Fab、抗人L链抗体、抗人Fc抗体、抗原蛋白或抗原肽)固定在传感器芯片上。将CD3或CD137作为分析物注射在芯片上，测定相互作用以获取传感图。在该操作中，CD3或CD137的浓度可以根据测定样品的相互作用强度(例如KD等)在数μM至数pM的范围内选择。
或者，可以将CD3或CD137而并非抗原结合分子固定在传感器芯片上，使要评价的抗体样品与CD3或CD137相互作用。根据由相互作用的传感图算出的解离常数(KD)值、或根据抗原结合分子样品作用后相对于作用前水平的传感图的增加程度，可以确认本发明的抗原结合分子的抗体可变区是否具有对CD3或CD137的结合活性。
在一些实施方案中，使用例如Biacore T200仪器(GE Healthcare)或Biacore 8K仪器(GE Healthcare)在37摄氏度(℃)(对于CD137)或25℃(对于CD3)下评估本发明的抗体可变区与目的抗原(即CD3或CD137)的结合活性或亲和力。使用胺偶联试剂盒(例如GEHealthcare)，将抗人Fc(例如GE Healthcare)固定在CM4传感器芯片的所有流通池上。将抗原结合分子或抗体可变区捕获到抗Fc传感器表面上，然后将抗原(CD3或CD137)注射到流通池上。抗原结合分子或抗体可变区的捕获水平的目标可以为200个共振单位(RU)。重组人CD3或CD137可以以400到25nM的浓度注射，其通过两倍连续稀释，然后进行解离来制备。在含有20mM ACES，150mM NaCl，0.05％吐温20、0.005％NaN3的ACES pH 7.4中制备所有抗原结合分子或抗体可变区和分析物。每个循环用3M MgCl2再生传感器表面。通过使用例如Biacore T200 Evaluation software 2.0版(GE Healthcare)或Biacore InsightEvaluation software(GE Healthcare)将数据处理并将其拟合到1：1结合模型来确定结合亲和力。计算KD值以评估本发明的抗原结合结构域的特异性结合活性或亲和力。
ALPHAScreen是通过使用两种珠子(供体和受体)的ALPHA技术，基于下述原理来实施的：通过结合于供体珠子的分子和结合于受体珠子的分子之间的生物学相互作用，仅在这两个珠子靠近时检测到发光信号。供体珠子内的激光激发的光敏剂将周围的氧转换为具有激发状态的单线态氧。单线态氧扩散至供体珠子周围，到达靠近供体珠子的受体珠子，从而引起珠子内的化学发光反应，最终发出光。结合于供体珠子的分子和结合于受体珠子的分子不发生相互作用时，供体珠子产生的单线态氧不会到达受体珠子。因此，不会发生化学发光反应。
将观察相互作用的物质的一个(配体)固定在传感器芯片的金薄膜上。从传感器芯片的背面照射光使得在金薄膜和玻璃之间的界面发生全反射。结果，在一部分反射光中形成了反射强度(SPR信号)下降的位点。将观察相互作用的物质的另一个(分析物)注射到传感器芯片的表面。分析物与配体结合时，固定化配体分子的质量会增加，从而改变传感器芯片表面的溶剂的折射率。折射率的变化使SPR信号的位置发生移位(相反，结合分子的解离会使信号返回到原始位置)。Biacore系统在纵坐标上绘制位移量，即传感器芯片表面上的质量变化，并显示与时间依赖的质量变化作为测定数据(传感图)。由传感图可确定与被捕获到传感器芯片表面上的配体结合的分析物的量(在分析物相互作用前后的传感图上的响应的变化量)。但是，由于结合量也取决于配体的量，必须在使用基本上相同量的配体的条件下进行比较。由传感图·的曲线可确定动力学：缔合速率常数(ka)和解离速率常数(kd)，而由这些常数之间的比例可确定亲和力(KD)。BIACORE法中还优选使用抑制测定法。抑制测定的实例如Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010中所述。
术语“不同时结合CD3和CD137(4-1BB)”或“不同时地结合CD3和CD137(4-1BB)”是指本发明的抗原结合部分或抗体可变区不能在与CD3结合的状态下与CD137结合，而抗原结合部分或抗体可变区在与CD137结合的状态下不能与CD3结合。在本文中，短语“不同时与CD3和CD137结合”也包括表达CD3的细胞和表达CD137的细胞不交联、或者不同时结合各自在不同细胞上表达的CD3和CD137。该短语进一步包括下述的情形：当CD3和CD137如可溶性蛋白那样不在细胞膜上表达、或者二者均存在于同一细胞上时，可变区能够同时结合CD3和CD137，但不同时结合各自在不同细胞上表达的CD3和CD137。这样的抗体可变区没有特别限定，只要抗体可变区具有这些功能即可。其实例可包括：通过将IgG型抗体可变区的一部分氨基酸改变成与所期望的抗原结合而源自IgG型抗体可变区的可变区。待改变的氨基酸选自，例如在与CD3或CD137结合的抗体可变区中，其改变不消除与抗原的结合的氨基酸。
在本文中，短语“在不同细胞上表达”仅是指抗原在分开的细胞上表达。这样的细胞组合可以是，例如，T细胞与其它T细胞这样的同一种类的细胞，或者可以是例如T细胞与NK细胞这样的不同种类的细胞。
本发明的抗原结合分子是否“不同时与CD3和CD137结合”可如下进行确认：确认抗原结合分子对CD3和CD137都具有结合活性，然后使CD3或CD137预先结合到包含具有结合活性的可变区的抗原结合分子上，然后通过上述方法确定其对另一个是否具有结合活性。或者，这也可以通过确定抗原结合分子与固定在ELISA板或传感器芯片上的CD3或CD137的结合是否被加入到溶液中的另一个抑制来确认。在一些实施方案中，本发明的抗原结合分子与CD3或CD137的结合被抗原结合分子与CD3的CD137中另一个的结合抑制了至少50％，优选60％以上，更优选70％以上，更优选80％以上，进一步优选90％以上，或甚至更优选95％以上。
在一方面，当一种抗原(例如CD3)被固定时，可以通过现有技术中已知的方法(即ELISA，BIACORE等)在存在另一种抗原(例如CD137)的情况下确定对抗原结合分子与CD3的结合的抑制。在另一方面，当CD137被固定时，也可以在CD3存在下确定对抗原结合分子与CD137的结合的抑制。当进行上述两个方面中的任何一个时，如果结合被抑制至少50％，优选60％以上，优选70％以上，进一步优选80％以上，进一步优选90％以上，甚至更优选95％以上，则确定本发明的抗原结合分子不同时与CD3和CD137结合。
在一些实施方案中，作为分析物注射的抗原的浓度比待固定的另一抗原的浓度高至少1倍、2倍、5倍、10倍、30倍、50倍或100倍。
以优选的方式，作为分析物注射的抗原的浓度比待固定的另一抗原的浓度高100倍，并且结合被抑制至少80％。
在一个实施方案中，计算了抗原结合分子的CD3(分析物)结合活性的KD值与抗原结合分子的CD137(固定化)结合活性的KD之比(KD(CD3)/KD(CD137))，并且比CD137(固定化)浓度高的CD3(分析物)的浓度(其是KD值比(KD(CD3)/KD(CD137)的10倍、50倍、100倍或200倍)可用于上面的竞争性测量。(例如，当KD值的比为0.1时，可以选择高1倍、5倍、10倍或20倍的浓度。另外，当KD值的比为10时，可以选择高100倍、500倍、1000倍或2000倍的浓度。)
在一方面，当一种抗原(例如CD3)被固定时，可以通过现有技术中已知的方法(即ELISA，ECL等)确定在存在另一种抗原(例如CD137)的情况下抗原结合分子与CD3的结合信号的衰减。在另一方面，当CD137被固定时，也可以确定在CD3存在下抗原结合分子与CD137的结合信号的衰减。当进行上述两个方面中的任何一个时，如果结合信号衰减至少50％，优选60％以上，优选70％以上，进一步优选80％以上，进一步优选90％以上，甚至更优选95％以上，则确定本发明的抗原结合分子不同时与CD3和CD137结合。
在一些实施方案中，作为分析物注射的抗原的浓度比待固定的其他抗原的浓度高至少1倍、2倍、5倍、10倍、30倍、50倍或100倍。
以优选的方式，作为分析物注射的抗原的浓度比待固定的其他抗原的浓度高100倍，并且结合被抑制至少80％。
在一个实施方案中，计算了抗原结合分子的CD3(分析物)结合活性的KD值与抗原结合分子的CD137(固定化)结合活性的KD之比(KD(CD3)/KD(CD137))，并且高于CD137(固定化)浓度的CD3(分析物)的浓度(其是KD值比(KD(CD3)/KD(CD137)的10倍、50倍、100倍或200倍)可用于上面的测量。(例如，当KD值的比为0.1时，可以选择高1倍、5倍、10倍或20倍的浓度。另外，当KD值的比为10时，可以选择高100倍、500倍、1000倍或2000倍的浓度。)
具体地，在使用例如ECL方法的情况下，制备了待测的生物素标记的抗原结合分子、用磺基标签(Ru复合物)标记的CD3和未标记的CD137。当待测抗原结合分子能够与CD3和CD137结合，但不同时与CD3和CD137结合时，通过将待测抗原结合分子和标记的CD3的混合物添加到固定有链霉亲和素的板上，然后进行光显影,在不存在未标记的CD137的情况下检测到了磺基标签的发光信号。相反，在未标记的CD137存在下发光信号降低。发光信号的这种降低可以被量化以确定相对结合活性。可以通过使用标记的CD137和未标记的CD3类似地进行该分析。
在ALPHAScreen的情况下，待测抗原结合分子在不存在竞争CD137的情况下与CD3相互作用，从而产生520至620nm的信号。未标记的CD137与CD3竞争与待测抗原结合分子的相互作用。可以定量由于竞争而导致的荧光减少，从而确定相对结合活性。使用磺基-NHS-生物素等的多肽生物素化是本领域已知的。可以通过适当采用的方法用GST标记CD3，该方法包括例如将编码CD3的多核苷酸与编码GST的多核苷酸在框内融合；使得到的融合基因在具有能够表达其的载体的细胞等中表达，然后使用谷胱甘肽柱进行纯化。优选地，使用例如基于非线性回归分析的适于单位点竞争(one-site competition)模型的软件GRAPHPADPRISM(GraphPad Software，Inc.，圣地亚哥)来分析所获得的信号。可以使用标记的CD137和未标记的CD3类似地进行该分析。
或者，可以采用使用荧光共振能量转移(FRET)的方法。FRET是一种激发能通过电子共振直接在彼此相邻的两个荧光分子之间转移的现象。当发生FRET时，供体(具有激发态的荧光分子)的激发能被转移到受体(位于供体附近的另一个荧光分子)，从而从供体发出的荧光消失(准确地说，荧光的寿命缩短)，反之，从受体发出荧光。通过使用这种现象，可以分析是否同时结合CD3和CD137。例如，当带有荧光供体的CD3和带有荧光受体的CD137同时与待测抗原结合分子结合时，供体的荧光消失，而从受体发出荧光。因此，观察到荧光波长的变化。确认这样的抗体同时结合CD3和CD137。另一方面，如果CD3、CD137和待测抗原结合分子的混合不改变与CD3结合的荧光供体的荧光波长，则该待测抗原结合分子可被认为是能够结合CD3和CD137但不同时结合CD3和CD137的抗原结合结构域。
例如，使待测的生物素标记的抗原结合分子与供体珠上的链霉亲和素结合，而使标记有谷胱甘肽S转移酶(GST)的CD3与受体珠结合。在不存在竞争性第二抗原的情况下，待测抗原结合分子与CD3相互作用，以产生520至620nm的信号。未标记的第二抗原与CD3竞争与待测抗原结合分子的相互作用。可以定量由于竞争而导致的荧光减少，从而确定相对结合活性。使用磺基-NHS-生物素等的多肽生物素化是本领域已知的。可以通过适当采用的方法用GST标记CD3，该方法包括例如将编码CD3的多核苷酸与编码GST的多核苷酸在框内融合；使得到的融合基因在具有能够表达其的载体的细胞等中表达，然后使用谷胱甘肽柱进行纯化。优选地，使用例如基于非线性回归分析的适于单位点竞争(one-sitecompetition)模型的软件GRAPHPAD PRISM(GraphPad Software，Inc.，圣地亚哥)来分析所获得的信号。
标签不限于GST标签，并且可以利用任何标签来进行，例如但不限于，组氨酸标签、MBP、CBP、Flag标签、HA标签、V5标签或c-myc标签。待测抗原结合分子与供体珠的结合不限于使用生物素-链霉亲和素反应的结合。特别地，当待测抗原结合分子包含Fc时，可能的方法涉及使待测抗原结合分子通过Fc识别蛋白例如蛋白A或蛋白G结合到供体珠上。
同样，当CD3和CD137如可溶性蛋白那样不在细胞膜上表达、或者二者均存在于同一细胞上时，可变区能够同时结合CD3和CD137，但不同时结合各自在不同细胞上表达的CD3和CD137，这种情况也可以通过本领域已知的方法进行测定。
具体而言，在检测与CD3和CD137同时结合的ECL-ELISA中被确认为是阳性的待测抗原结合分子，还与表达CD3的细胞和表达CD137的细胞混合。可以证明，除非抗原结合分子和这些细胞彼此同时结合，否则待测抗原结合分子不能同时结合在不同细胞上表达的CD3和CD137。该测定可以通过例如基于细胞的ECL-ELISA进行。将表达CD3的细胞预先固定在板上。在将待测抗原结合分子结合到板上之后，将表达CD137的细胞添加到板上。使用针对该抗原的磺基标签标记的抗体检测仅在表达CD137的细胞上表达的不同抗原。当抗原结合分子同时与分别在两个细胞上表达的两个抗原结合时，观察到信号。当抗原结合分子不同时与这些抗原结合时，没有观察到信号。
或者，该测定可以通过ALPHAScreen方法进行。将待测抗原结合分子与结合于供体珠的表达CD3的细胞和结合于受体珠的表达CD137的细胞混合。当抗原结合分子同时与分别在两个细胞上表达的两个抗原结合时，观察到信号。当抗原结合分子不同时与这些抗原结合时，没有观察到信号。
或者，该测定也可以通过Octet相互作用分析方法进行。首先，使用肽标签标记的表达CD3的细胞与识别该肽标签的生物传感器结合。将表达CD137的细胞和待测抗原结合分子置于孔中，并分析其相互作用。当抗原结合分子同时结合分别在两个细胞上表达的两个抗原时，观察到由待测抗原结合分子和表达CD137的细胞与生物传感器的结合而引起的较大波长移位。当抗原结合分子不同时与这些抗原结合时，观察到仅由待测抗原结合分子与生物传感器的结合而引起的较小波长移位。
代替这些基于结合活性的方法，可以进行基于生物活性的测定。例如，将表达CD3的细胞和表达CD137的细胞与待测抗原结合分子混合，并进行培养。当抗原结合分子同时与这两个抗原结合时，分别在两个细胞上表达的两个抗原通过待测抗原结合分子相互活化。因此，可以检测到活化信号的改变，例如抗原的相应下游磷酸化水平的增加。或者，由于活化而诱导了细胞因子的产生。因此，可以测量产生的细胞因子的量，从而确认是否同时与两个细胞结合。或者，由于活化而诱导了针对表达CD137的细胞的细胞毒性。或者，报告基因的表达由启动子诱导，该启动子由于活化而在CD137或CD3的信号转导途径的下游被激活。因此，可以测量细胞毒性或产生的报告蛋白的量，从而确认是否同时与两个细胞结合。
Fab分子
“Fab分子”是指由免疫球蛋白的重链(“Fab重链”)的VH和CH1结构域以及轻链(“Fab轻链”)的VL和CL结构域组成的蛋白质。
融合的
“融合的”是指组分(例如Fab分子和Fc结构域亚基)通过肽键直接连接或通过一个或多个肽接头连接。
“交换”Fab
“交换”Fab分子(也称为“Crossfab”)是指Fab分子，其中Fab重链和轻链的可变区或恒定区被交换，即交换Fab分子包含由轻链可变区和重链恒定区组成的肽链，以及由重链可变区和轻链恒定区组成的肽链。为清楚起见，在其中Fab轻链和Fab重链的可变区被交换的交换Fab分子中，包含重链恒定区的肽链在本文中称为交换Fab分子的“重链”。相反，在其中Fab轻链和Fab重链的恒定区被交换的交换Fab分子中，包含重链可变区的肽链在本文中被称为交换Fab分子的“重链”。
“常规”Fab
与此相反，“常规”Fab分子是指天然形式的Fab分子，即包含由重链可变区和恒定区(VH-CH1)组成的重链和由轻链可变区和恒定区(VL-CL)组成的轻链。术语“免疫球蛋白分子”是指具有天然存在的抗体的结构的蛋白质。例如，IgG类免疫球蛋白是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由二硫键键合的两条轻链和两条重链组成。从N末端到C末端，每条重链都有可变区(VH)，也称为可变重结构域或重链可变结构域，其后是三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)，也称为重链链恒定区。类似地，从N末端到C末端，每条轻链都有可变区(VL)，也称为可变轻结构域或轻链可变结构域，其后是恒定轻链(CL)结构域，也称为轻链恒定区。免疫球蛋白的重链可分配到五种类型之一，称为α(IgA)、δ(IgD)、ε(IgE)、γ(IgG)或μ(IgM)，其中一些可进一步分为亚型，例如γ1(IgG1)、γ2(IgG2)、γ3(IgG3)、γ4(IgG4)、α1(IgA1)和α2(IgA2)。基于其恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白的轻链可以被分配到称为κ和λ的两种类型中的一种。免疫球蛋白基本上由通过免疫球蛋白铰链区连接的两个Fab分子和Fc结构域组成。
亲和力
“亲和力”是指分子(例如，抗原结合分子或抗体)的单个结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间的非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗原结合分子和抗原,或抗原和抗原)之间的1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其伴侣Y的亲和力通常可以用解离常数(KD)表示，它是解离速率常数和缔合速率常数(分别为koff和kon)的比值。因此，等效亲和力可以包括不同的速率常数，只要速率常数的比率保持相同。亲和力可以通过本领域已知的公认方法测量，包括本文所述的那些。测量亲和力的一种特定方法是表面等离振子共振(SPR)。
确定亲和力的方法
在某些实施方案中，本文提供的抗原结合分子或抗体对其抗原的解离常数(KD)为1微摩尔(μM)或更小、120nM或更小、100nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、2nM或更小、1nM或更小、0.1nM或更小、0.01nM或更小、或0.001nM或更小(例如，10-8M或更小，10-8M至10-13M，10-9M至10-13M)。在某些实施方案中，抗体/抗原结合分子对CD3、CD137或DLL3的KD值在1-40、1-50、1-70、1-80、30-50、30-70、30-80、40-70、40-80或60-80nM的范围内。
在一个实施方案中，KD通过放射性标记的抗原结合测定法(RIA)测量。在一个实施方案中，使用目的抗体及其抗原的Fab版本进行RIA。例如，Fab对抗原的溶液结合亲和力是通过在存在滴定系列的未标记抗原的情况下用最小浓度的(125I)标记的抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的板捕获结合的抗原来测量的(参见，例如，Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了建立测定条件，用50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml的捕获抗Fab抗体(Cappel Labs)包被MICROTITER(注册商标)多孔板(Thermo Scientific)过夜，随后在室温(约23℃)下用PBS中的2％(w/v)牛血清白蛋白封闭2至5小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与目的Fab的系列稀释液混合(例如，与在Presta等人,Cancer Res.57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗体，Fab-12的评估一致)。然后将目标Fab温育过夜；然而，温育可能会持续更长的时间(例如，约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕获板以在室温下温育(例如，1小时)。然后除去溶液并用PBS中的0.1％聚山梨醇酯20(TWEEN-20(注册商标))洗涤板8次。当板干燥后，加入150微升/孔闪烁剂(MICROSCINT-20TM；Packard)，并在TOPCOUNTTMγ计数器(Packard)上对板计数10分钟。选择产生小于或等于最大结合的20％的每个Fab的浓度用于竞争性结合测定。
根据另一个实施方案，使用BIACORE(注册商标)表面等离振子共振测定法测量Kd。例如，使用BIACORE(注册商标)-2000或BIACORE(注册商标)-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)在25℃下用固定化抗原CM5芯片以约10个响应单位(RU)进行测定。在一个实施方案中，羧甲基化葡聚糖生物传感器芯片(CM5，BIACORE，Inc.)根据供应商的说明用N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化。抗原用10mM乙酸钠，pH 4.8稀释至5微克/毫升(约0.2微摩尔)，然后以5微升/分钟的流速注射，以实现约10个响应单位(RU)的偶联蛋白。注射抗原后，注射1M乙醇胺以阻断未反应的基团。对于动力学测量，将Fab的两倍系列稀释液(0.78nM至500nM)在具有0.05％聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂(PBST)的PBS中在25℃下以约25微升/分钟的流速注射。通过同时拟合缔合和解离传感图，使用简单的一对一朗格缪尔结合模型(BIACORE(注册商标)评估软件版本3.2)计算缔合率(kon)和解离率(koff)。平衡解离常数(Kd)计算为比率koff/kon。参见，例如，Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果上述表面等离振子共振测定的缔合速率超过106M-1s-1，则可以通过使用在25℃下在PBS,pH 7.2中20nM抗-抗原抗体(Fab形式),在存在增加的抗原浓度的情况下,如在光谱仪中测量的,例如配备有停止流的分光光度计(Aviv Instruments)或带有搅拌比色皿的8000系列SLM-AMINCOTM分光光度计(ThermoSpectronic)中,测量荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm,16nm带通)中的增加或减少的荧光猝灭技术来确定缔合速率。
根据上述测定抗原结合分子或抗体的亲和性的方法，本领域技术人员可以对其他抗原结合分子或抗体对各种抗原的亲和力进行测定。
抗体
术语“抗体”在本文中以最广泛的含义使用并且包括各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出期望的抗原-结合活性。
抗体片段
“抗体片段”是指除完整抗体之外的分子，其包含完整抗体的一部分，与完整抗体结合的抗原结合。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、双抗体、线性抗体、单链抗体分子(例如scFv)和单域抗体。对于某些抗体片段的综述，参见Hudson等人,Nat Med 9,129-134(2003)。对于scFv片段的综述，请参见例如Pluckthun，在ThePharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,New York,第269-315页(1994)中；另参见WO 93/16185；以及美国专利号5,571,894和5,587,458。关于包含补救受体结合表位残基并具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab')2片段的讨论，参见美国专利号5,869,046。双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，可以是二价或双特异性的。参见，例如，EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson etal.,Nat Med9,129-134(2003)；和Hollinger et al.,Proc Natl Acad Sci USA 90,6444-6448(1993)。Hudson等人,Nat Med 9,129-134(2003)中也描述了三抗体和四抗体。单域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见，例如，美国专利号6,248,516B1)。如本文所述，抗体片段可通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及由重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)产生。
抗体类别
抗体的“类别”是指其重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。有五类主要的抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。
除非另有说明，本文中轻链恒定区氨基酸残基按照Kabat等人编号，重链恒定区氨基酸残基的编号按照EU编号系统，也称为EU索引编号，如Kabat等人,Sequences ofProteins ofImmunological Interest,第5版Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。
框架
“框架”或“FR”是指高变区(HVR)残基以外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。相应地，HVR和FR序列在VH(或VL)中一般按以下顺序出现：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
人共有框架
“人共有框架”是代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选择中最常见的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。通常，序列亚组是Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,NIHPublication 91-3242,Bethesda MD(1991),第1-3卷中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，该亚组是上述Kabat等人中的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，亚组是上述Kabat等人的亚组III。
嵌合抗体
术语“嵌合”抗体是指其中重链和/或轻链的一部分源自特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源自不同来源或物种的抗体。类似地，术语“嵌合抗体可变结构域”是指抗体可变区，其中重链和/或轻链可变区的一部分源自特定来源或物种，而重链和/或轻链可变区的其余部分来自不同的来源或物种。
人源化抗体
“人源化”抗体是指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体包括基本上所有的、至少一个且通常为两个可变结构域，其中所有或基本上所有的HVR(例如CDR)对应于非人抗体的那些HVR，并且所有或基本上所有的FR对应于人抗体的那些FR。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体例如，非人抗体的“人源化形式”是指经过人源化的抗体。“人源化抗体可变区”是指人源化抗体的可变区。
人抗体
“人抗体”是具有与由人或人细胞产生的或源自利用人抗体库或其他人抗体编码序列的非人来源的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的这一定义明确排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。“人抗体可变区”是指人抗体的可变区。
多核苷酸(核酸)
如本文可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何长度的核苷酸的聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基和/或它们的类似物，或可以通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应掺入聚合物的任何底物。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，例如甲基化的核苷酸及其类似物。核苷酸序列可被非核苷酸成分中断。多核苷酸可包含合成后进行的修饰，例如与标记缀合。其他类型的修饰包括例如“帽”、用类似物取代一个或多个天然存在的核苷酸、核苷酸间修饰例如具有不带电荷的键(例如，甲基膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)和带电荷的键(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些，含有垂饰部分的那些，例如蛋白质(例如核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)，带有嵌入剂(例如，吖啶，补骨脂素等)的那些，含有螯合剂(例如，金属，放射性金属，硼，氧化金属等)的那些，含有烷基化剂的那些，带有修饰的键的那些(例如，α异头核酸等)，以及未修饰形式的多核苷酸。此外，糖中通常存在的任何羟基可以被例如膦酸酯基团、磷酸酯基团替代，被标准保护基团保护，或被激活以制备额外核苷酸的额外键，或可以缀合到固体或半固体支持体。5'和3'末端OH可以被磷酸化或被胺或1至20个碳原子的有机帽化基团部分取代。其他羟基也可以衍生为标准保护基团。多核苷酸还可以包含本领域公知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括例如2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基-、2'-氟-或2'-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-异头糖、差向异构糖如阿拉伯糖、木糖或来苏糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、无环类似物和诸如甲基核苷的碱性核苷类似物。一个或多个磷酸二酯键可以被备选的连接基团替代。这些备选的连接基团包括但不限于其中磷酸酯被P(O)S(“硫代酸酯”)、P(S)S(“二硫代酸酯”)、(O)NR2(“酰胺酸酯”)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2(“甲缩醛(formacetal)”)替代的实施方案，其中每个R或R'独立地为H或取代或未取代的烷基(1-20C)，任选地包含醚(-O-)键、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基(araldyl)。并非多核苷酸中的所有键都需要相同。前述描述适用于本文提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
分离的(核酸)
“分离的”核酸分子是已经从其自然环境的组分中分离出来的核酸分子。分离的核酸分子还包括包含在通常含有该核酸分子的细胞中的核酸分子，但该核酸分子存在于染色体外或存在于不同于其天然染色体位置的染色体位置。
载体
如本文所用，术语“载体”是指能够增殖与其连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自我复制核酸结构的载体，以及参入其已被引入的宿主细胞基因组中的载体。某些载体能够指导与它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。可以使用病毒或电穿孔将载体引入宿主细胞。然而，载体的引入不限于体外方法。例如，也可以直接使用体内方法将载体引入受试者。
宿主细胞
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和由其衍生的后代，不考虑传代次数。后代在核酸含量上可能与亲本细胞不完全相同，但可能包含突变。在最初转化的细胞中筛选或选择的具有相同功能或生物活性的突变后代包括在本文中。
特异性
“特异性”是指特异性结合一个或多个结合配偶体,不显示与配偶体以外的分子的任何显著结合的分子。此外，当抗原结合位点对抗原中包含的多个表位中的特定表位具有特异性时，也使用“特异性”。如果抗原结合分子与抗原特异性结合，则它也被描述为“抗原结合分子具有/显示出对/针对抗原的特异性”。当与抗原结合位点结合的表位包含在多个不同的抗原中时，包含该抗原结合位点的抗原结合分子可以与具有该表位的各种抗原结合。
抗体片段
“抗体片段”是指除完整抗体之外的分子，其包含完整抗体的一部分，与完整抗体结合的抗原结合。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，是指具有与天然抗体结构基本相似的结构或具有包含本文定义的Fc区的重链的抗体。
可变片段(Fv)
在本文中，术语“可变片段(Fv)”是指由抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)对组成的来自抗体的抗原结合位点的最小单位。1988年，Skerra和Pluckthun发现可以通过在细菌信号序列的下游插入抗体基因并在大肠杆菌中诱导该基因的表达来从大肠杆菌周质级分制备均一且具有活性的抗体(Science(1988)240(4855)，1038-1041)。在由周质级分制备的Fv中，VH以与抗原结合的方式与VL缔合。
scFv、单链抗体和sc(Fv)2
本文中，术语“scFv”、“单链抗体”和“sc(Fv)2”均指包含衍生自重链和轻链的可变区而非恒定区的单个多肽链的抗体片段。一般而言，单链抗体还在VH和VL结构域之间包含多肽接头，这使得能够形成被认为允许抗原结合的所需结构。Pluckthun在“ThePharmacology of Monoclonal Antibodies，Vol.113，Rosenburg and Moore，eds.，Springer-Verlag，New York，269-315(1994)”中详细讨论了单链抗体。还参见国际专利公开WO1988/001649；美国专利号4,946,778和5,260,203。在特定的实施方案中，单链抗体可以是双特异性的和/或人源化的。
scFv是单链低分子量抗体，其中形成Fv的VH和VL通过肽接头连接在一起(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1988)85(16),5879-5883)。VH和VL可以通过肽接头保留在非常接近的位置。
sc(Fv)2是单链抗体，其中两个VL和两个VH的四个可变区通过接头如肽接头连接以形成单链(J Immunol.Methods(1999)231(1-2),177-189)。两个VH和两个VL可以源自不同的单克隆抗体。此类sc(Fv)2优选包括例如识别单个抗原中存在的两个表位的双特异性sc(Fv)2，如Journal of Immunology(1994)152(11),5368-5374中所公开的。sc(Fv)2可以通过本领域技术人员已知的方法来产生。例如，sc(Fv)2可以通过经诸如肽接头的接头连接scFv来制备。
在本文中，sc(Fv)2包括两个VH单元和两个VL单元,其从单链多肽的N末端开始,以VH、VL、VH和VL([VH]-接头-[VL]-接头-[VH]-接头-[VL])的顺序排列。两个VH单元和两个VL单元的顺序不限于上述形式，并且它们可以以任何顺序布置。形式的示例为如下所列出的。
[VL]-接头-[VH]-接头-[VH]-接头-[VL]，
[VH]-接头-[VL]-接头-[VL]-接头-[VH]，
[VH]-接头-[VH]-接头-[VL]-接头-[VL]，
[VL]-接头-[VL]-接头-[VH]-接头-[VH]，
[VL]-接头-[VH]-接头-[VL]-接头-[VH]。
sc(Fv)2的分子形式也在WO2006/132352中详细描述。根据这些描述，本领域技术人员可以适当地制备所需的sc(Fv)2以产生本文公开的多肽复合物。
此外，本公开的抗原结合分子或抗体可以与载体聚合物例如PEG或有机化合物例如抗癌剂缀合。或者，优选将糖链添加序列插入到抗原结合分子或抗体中，使得糖链产生期望的效果。
用于连接抗体可变区的接头包括可通过基因工程引入的任意肽接头、合成接头和例如Protein Engineering,9(3),299-305,1996中公开的接头。然而，肽接头在本公开中是优选的。肽接头的长度没有被特别地限制，并且可以根据目的由本领域技术人员适当地选择。长度优选为5个氨基酸以上(没有特别限制，上限通常为30个氨基酸以下，优选20个氨基酸以下)，特别优选15个氨基酸。当sc(Fv)2包含三个肽接头时，它们的长度可以全部相同或不同。
例如，此类肽接头包括：
Ser,
Gly-Ser,
Gly-Gly-Ser,
Ser-Gly-Gly,
Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO:91),
Ser-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO:92),
Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO:93),
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO:94),
Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO:95),
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO:96),
Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO:97),
Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO:98),
(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO:93))n,和
(Ser-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO:94))n,
其中n是1或更大的整数。本领域技术人员可以根据目的相应地选择肽接头的长度或序列。
合成接头(化学交联剂)通常用于交联肽，示例包括：
N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，
辛二酸二琥珀酰亚胺酯(DSS)，
双(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯(BS3)，
二硫代双(琥珀酰亚胺丙酸酯)(DSP)，
二硫代双(磺基琥珀酰亚胺丙酸酯)(DTSSP)，
乙二醇双(琥珀酰亚胺基琥珀酸酯)(EGS)，
乙二醇双(磺基琥珀酰亚胺基琥珀酸酯)(磺基-EGS)，
酒石酸二琥珀酰亚胺酯(DST)、酒石酸二磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-DST)、
双[2-(琥珀酰亚胺氧基羰基氧基)乙基]砜(BSOCOES)，和
双[2-(磺基琥珀酰亚胺氧基羰基氧基)乙基]砜(磺基-BSOCOES)。这些交联剂是可商购的。
通常，需要三个接头将四个抗体可变区连接在一起。要使用的接头可以是相同类型或不同类型。
Fab、F(ab')2和Fab'
“Fab”由单条轻链和来自单条重链的CH1结构域和可变区组成。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。
“F(ab')2”或“Fab”是通过用诸如胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的蛋白酶处理免疫球蛋白(单克隆抗体)而产生的，是指通过存在于两条H链中每一个的铰链区之间的二硫键附近消化免疫球蛋白(单克隆抗体)而产生的抗体片段。例如，木瓜蛋白酶剪切在两条H链中每一个的铰链区之间存在的二硫键上游的IgG，以产生两个同源抗体片段，其中包含VL(L链可变区)和CL(L链恒定区)的L链通过在其C末端区域的二硫键与包含VH(H链可变区)和CHγ1(H链恒定区的γ1区)的H链片段连接。这两个同源抗体片段中的每一个都称为Fab'。
“F(ab')2”由两条轻链和两条重链组成，所述两条轻链和两条重链包含CH 1结构域的恒定区和CH2结构域的一部分，从而在两条重链之间形成二硫键。在本文公开的F(ab')2可以优选如下制备。用诸如胃蛋白酶的蛋白酶部分消化完整单克隆抗体或包含所需抗原结合位点的单克隆抗体；Fc片段通过吸附到蛋白A柱上而去除。蛋白酶没有特别限制，只要其可以在合适的设定酶反应条件下例如pH下以选择性方式切割整个抗体以产生F(ab')2即可。这样的蛋白酶包括例如胃蛋白酶和无花果蛋白酶。
Fc区
术语“Fc区”或“Fc结构域”是指包含由铰链或其部分和抗体分子中的CH2和CH3结构域组成的片段的区域。IgG类的Fc区是指但不限于从例如半胱氨酸226(EU编号(在本文中也称为EU索引))到C末端或从脯氨酸230(EU编号)到C末端的区域。Fc区可以优选通过以下方式获得：例如，用蛋白水解酶例如胃蛋白酶部分消化例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4单克隆抗体，然后重新洗脱吸附在蛋白A柱或蛋白G柱上的级分。这种蛋白水解酶没有特别限制，只要该酶在适当设定的酶反应条件(例如pH)下能够消化全长抗体以限制性地形成Fab或F(ab')2即可。其实例可以包括胃蛋白酶和木瓜蛋白酶。
源自例如天然存在的IgG的Fc区可以用作本发明的“Fc区”。在本文中，天然存在的IgG是指含有与天然存在的IgG相同的氨基酸序列的多肽，并且属于基本上由免疫球蛋白γ基因编码的一类抗体。天然存在的人IgG是指例如天然存在的人IgG1，天然存在的人IgG2，天然存在的人IgG3或天然存在的人IgG4。天然存在的IgG还包括由其自发衍生的变体等。NIH出版号91-3242的Sequences of proteins of immunological interest中，将基于基因多态性的多个同种异型序列描述为人IgG1、人IgG2、人IgG3和人IgG4抗体的恒定区，其中任何一个都可以用于本发明中。特别地，人IgG1的序列可以具有作为EU编号位置356至358的氨基酸序列的DEL或EEM。
在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子的Fc结构域由一对多肽链组成，所述多肽链包含免疫球蛋白分子的重链结构域。例如，免疫球蛋白G(IgG)分子的Fc结构域是二聚体，其每个亚基都包含CH2和CH3 IgG重链恒定结构域。Fc结构域的两个亚基能够相互稳定缔合。在一个实施方案中，本文所述的多特异性抗原结合分子包含不超过一个Fc结构域。
在本文所述的一个实施方案中，多特异性抗原结合分子的Fc结构域是IgG Fc结构域。在特定实施方案中，Fc结构域是IgG1 Fc结构域。在另一个实施方案中，Fc结构域是IgG1Fc结构域。在进一步的特定实施方案中，Fc结构域是人IgG1 Fc区。
在一个实施方案中，多特异性抗原结合分子包含Fc结构域。
在一个实施方案中，所述Fc结构域由能够稳定缔合的第一和第二Fc区亚基组成，并且所述Fc结构域与天然人IgG1 Fc结构域相比，表现出对人Fcγ受体的结合亲和力降低。
在一个实施方案中，与天然IgG的Fc区相比，Fc结构域在酸性pH条件(例如，pH5.8)下表现出增强的FcRn结合活性。
在一个实施方案中，Fc结构域包含根据EU编号位置434处的Ala；位置438处的Glu,Arg,Ser,或Lys；和位置440处的Glu,Asp,或Gln。
在一个实施方案中，Fc结构域包含根据EU编号位置434处的Ala；位置438处的Arg或Lys；和位置440处的Glu或Asp。
在一个实施方案中，Fc结构域还包含根据EU编号位置428处的Ile或Leu；和/或位置436处的Ile、Leu、Val、Thr或Phe。
在一个实施方案中，Fc结构域包含选自由以下组成的组的氨基酸取代的组合：
根据EU编号(a)N434A/Q438R/S440E；
(b)N434A/Q438R/S440D；
(c)N434A/Q438K/S440E；
(d)N434A/Q438K/S440D；
(e)N434A/Y436T/Q438R/S440E；
(f)N434A/Y436T/Q438R/S440D；
(g)N434A/Y436T/Q438K/S440E；
(h)N434A/Y436T/Q438K/S440D；
(i)N434A/Y436V/Q438R/S440E；
(j)N434A/Y436V/Q438R/S440D；
(k)N434A/Y436V/Q438K/S440E；
(l)N434A/Y436V/Q438K/S440D；
(m)N434A/R435H/F436T/Q438R/S440E；
(n)N434A/R435H/F436T/Q438R/S440D；
(o)N434A/R435H/F436T/Q438K/S440E；
(p)N434A/R435H/F436T/Q438K/S440D；
(q)N434A/R435H/F436V/Q438R/S440E；
(r)N434A/R435H/F436V/Q438R/S440D；
(s)N434A/R435H/F436V/Q438K/S440E；
(t)N434A/R435H/F436V/Q438K/S440D；
(u)M428L/N434A/Q438R/S440E；
(v)M428L/N434A/Q438R/S440D；
(w)M428L/N434A/Q438K/S440E；
(x)M428L/N434A/Q438K/S440D；
(y)M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E；
(z)M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440D；
(aa)M428L/N434A/Y436T/Q438K/S440E；
(ab)M428L/N434A/Y436T/Q438K/S440D；
(ac)M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440E；
(ad)M428L/N434A/Y436V/Q438R/S440D；
(ae)M428L/N434A/Y436V/Q438K/S440E；
(af)M428L/N434A/Y436V/Q438K/S440D；
(ag)L235R/G236R/S239K/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E；和
(ah)L235R/G236R/A327G/A330S/P331S/M428L/N434A/Y436T/Q438R/S440E。
在一个实施方案中，Fc结构域包含M428L/N434A/Q438R/S440E的氨基酸取代的组合。
在一个实施方案中，Fc结构域是IgG Fc结构域，优选人IgG Fc结构域，更优选人IgG1 Fc结构域。
在一个实施方案中，Fc结构域包含以下任一项：
(a)包含SEQ ID NO:100所示氨基酸序列的第一Fc亚基和包含SEQ ID NO:111所示氨基酸序列的第二Fc亚基；或者
(b)包含SEQ ID NO:99所示氨基酸序列的第一Fc亚基和包含SEQ ID NO:109所示氨基酸序列的第二Fc亚基。
具有降低的Fcγ受体结合活性的Fc区
在本文中，“降低的Fcγ受体结合活性”是指，例如，基于上述分析方法，被测抗原结合分子或抗体的竞争活性比对照抗原结合分子或抗体的竞争活性低50％或更少，优选45％或更少，40％或更少,35％或更少,30％或更少,20％或更少,15％或更少，特别优选10％或更少,9％或更少,8％或更少,7％或更少,6％或更少,5％或更少,4％或更少,3％或更少,2％或更少,或1％或更少。
包含单克隆IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的Fc结构域的抗原结合分子或抗体可以适当地用作对照抗原结合分子或抗体。Fc结构域结构显示在SEQ ID NO：85(A添加到RefSeq登录号AAC82527.1的N末端)、86(A添加到RefSeq登录号AAB59393.1的N末端)、87(A被添加到RefSeq登录号CAA27268.1的N末端)和88(A被添加到RefSeq登录号AAB59394.1的N末端)。此外，当将包含特定同种型抗体的Fc结构域突变体的抗原结合分子或抗体用作待测物质时，突变体的突变对Fcγ受体结合活性的影响使用包含相同同种型的Fc结构域的抗原结合分子或抗体作为对照进行评价。如上所述，适当地制备包含Fc结构域突变体的抗原结合分子或抗体，其Fcγ受体结合活性已被判断为降低的。
此类已知突变体包括，例如，具有氨基酸231A-238S(EU编号)缺失的突变体(WO2009/011941)，以及突变体C226S、C229S、P238S、(C220S)(J.Rheumatol(2007)34,11)；C226S和C229S(Hum.Antibod.Hybridomas(1990)1(1),47-54)；C226S、C229S、E233P、L234V和L235A(Blood(2007)109,1185-1192)。
具体地，优选的抗原结合分子或抗体包括那些包含具有选自以下氨基酸位置的至少一个氨基酸的突变(例如取代)的Fc结构域的那些：在形成特定同种型抗体的Fc结构域的氨基酸中，220,226,229,231,232,233,234,235,236,237,238,239,240,264,265,266,267,269,270,295,296,297,298,299,300,325，327，328，329，330，331或332(EU编号)。对Fc结构域起源的抗体的同种型没有特别限制，可以使用来源于单克隆IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的适当的Fc结构域。优选使用源自IgG1抗体的Fc结构域。
优选的抗原结合分子或抗体包括，例如，包含在形成IgG1抗体Fc结构域的氨基酸中具有以下所示任一取代的Fc结构域的那些，所述取代的位置根据EU编号指定(每个编号表示氨基酸残基在EU编号中的位置；并且数字前的单字母氨基酸符号代表取代前的氨基酸残基，而数字后的单字母氨基酸符号代表取代后的氨基酸残基)：
(a)L234F,L235E,P331S；
(b)C226S,C229S,P238S；
(c)C226S,C229S；或
(d)C226S,C229S,E233P,L234V,L235A；
以及具有在位置231至238处的氨基酸序列缺失的Fc结构域的那些。
此外，优选的抗原结合分子或抗体还包括包含在形成IgG2抗体的Fc结构域的氨基酸中具有如下所示任一取代的Fc结构域的那些，所述取代的位置根据EU编号来指定：
(e)H268Q,V309L,A330S和P331S；
(f)V234A；
(g)G237A；
(h)V234A和G237A；
(i)A235E和G237A；或
(j)V234A,A235E和G237A。每个数字代表氨基酸残基在EU编号中的位置；数字前的单字母氨基酸符号表示取代前的氨基酸残基，数字后的单字母氨基酸符号表示取代后的氨基酸残基。
此外，优选的抗原结合分子或抗体还包括包含在形成IgG3抗体的Fc结构域的氨基酸中具有如下所示任一取代的Fc结构域的那些，所述取代的位置根据EU编号来指定：
(k)F241A；
(l)D265A；或者
(m)V264A。每个数字代表氨基酸残基在EU编号中的位置；数字前的单字母氨基酸符号表示取代前的氨基酸残基，数字后的单字母氨基酸符号表示取代后的氨基酸残基。
此外，优选的抗原结合分子或抗体还包括包含在形成IgG4抗体的Fc结构域的氨基酸中具有如下所示任一取代的Fc结构域的那些，其位置根据EU编号来指定：
(n)L235A,G237A和E318A；
(o)L235E；或
(p)F234A和L235A。每个数字代表氨基酸残基在EU编号中的位置；数字前的单字母氨基酸符号表示取代前的氨基酸残基，数字后的单字母氨基酸符号表示取代后的氨基酸残基。
其他优选的抗原结合分子或抗体包括，例如，包含Fc结构域的那些，其中在形成IgG1抗体的Fc结构域的氨基酸中，位置233、234、235、236、237、327、330或331处(EU编号)的任一氨基酸被相应IgG2或IgG4中EU编号中相应位置的氨基酸取代。
优选的抗原结合分子或抗体还包括，例如，包含Fc结构域的那些，其中在形成IgG1抗体的Fc结构域的氨基酸中，位置234、235和297(EU编号)的任何一个或多个氨基酸被其他氨基酸取代。取代后的氨基酸类型没有特别限制；但是，特别优选包含位置234、235、297处的氨基酸中的任意一个或多个的氨基酸被取代为丙氨酸的Fc结构域的抗原结合分子或抗体。
优选的抗原结合分子或抗体还包括例如包含Fc结构域的那些，其中在形成IgG1抗体的Fc结构域的氨基酸中，位置265处(EU编号)的氨基酸被另一个氨基酸取代。取代后的氨基酸类型没有特别限制；但是，特别优选包含位置265处的氨基酸被丙氨酸取代的Fc结构域的抗原结合分子或抗体。
Fc受体
术语“Fc受体”或“FcR”是指结合抗体Fc区的受体。在一些实施方案中，FcR是天然人FcR。在一些实施方案中，FcR是结合IgG抗体(γ受体)并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和备选的可变剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，主要在其细胞质结构域中不同。活化受体FcγRIIA在其细胞质结构域中包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其细胞质结构域中包含基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)。(参见，例如，Daeron,Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。例如，Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)；Capel等人,Immunomethods 4:25-34(1994)；和de Haas等人,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中综述了FcR。本文中的术语“FcR”涵盖了其他FcR，包括将来要鉴定的那些。
术语“Fc受体”或“FcR”还包括新生儿受体，FcRn，其负责母体IgG至胎儿的转移(Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)和Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))和免疫球蛋白稳态的调节。测量与FcRn的结合的方法是已知的(参见，例如，Ghetie和Ward.,Immunol.Today 18(12):592-598(1997)；Ghetie等人,Nature Biotechnology,15(7):637-640(1997)；Hinton等人,J.Biol.Chem.279(8):6213-6216(2004)；WO 2004/92219(Hinton等人)。
可以例如在转基因小鼠或表达人FcRn的转染的人细胞系中，或在施用具有变体Fc区的多肽的灵长类动物中测定与人FcRn的体内结合和人FcRn高亲和力结合多肽的血浆半衰期。WO 2000/42072(Presta)描述了与FcR结合增加或减少的抗体变体。另见，例如，Shields等人J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。
Fcγ受体
Fcγ受体是指能够与单克隆IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的Fc结构域结合的受体，包括属于基本上由Fcγ受体基因编码的蛋白质家族的所有成员。在人类中，该家族包括FcγRI(CD64)，其包括同工型FcγRIa、FcγRIb和FcγRIc；FcγRII(CD32)，其包括同工型FcγRIIa(包括同种异型H131和R131)、FcγRIIb(包括FcγRIIb-1和FcγRIIb-2)和FcγRIIc；和FcγRIII(CD16)，其包括同工型FcγRIIIa(包括同种异型V158和F158)和FcγRIIIb(包括同种异型FcγRIIIb-NA1和FcγRIIIb-NA2)；以及所有未鉴定的人Fcγ受体、Fcγ受体同工型及其同种异型。然而，Fcγ受体不限于这些例子。不限于此，Fcγ受体包括来源于人、小鼠、大鼠、兔和猴的那些。Fcγ受体可以来源于任何生物体。小鼠Fcγ受体包括但不限于FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII(CD16)和FcγRIII-2(CD16-2)，以及所有未鉴定的小鼠Fcγ受体、Fcγ受体同工型及其同种异体。此类优选的Fcγ受体包括例如人FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32)、FcγRIIB(CD32)、FcγRIIIA(CD16)和/或FcγRIIIB(CD16)。FcγRI的多核苷酸序列和氨基酸序列分别显示在RefSeq登录号NM_000566.3和RefSeq登录号NP_000557.1中；FcγRIIA的多核苷酸序列和氨基酸序列分别显示在RefSeq登录号BC020823.1和RefSeq登录号AAH20823.1中；FcγRIIB的多核苷酸序列和氨基酸序列分别显示在RefSeq登录号BC146678.1和RefSeq登录号AAI46679.1中；FcγRIIIA的多核苷酸序列和氨基酸序列分别显示在RefSeq登录号BC033678.1和RefSeq登录号AAH33678.1中；和FcγRIIIB的多核苷酸序列和氨基酸序列分别显示在RefSeq登录号BC128562.1和RefSeq登录号AAI28563.1中。Fcγ受体是否具有与单克隆IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的Fc结构域的结合活性可以通过ALPHA筛选(放大发光邻近均相测定)、基于表面等离振子共振(SPR)的BIACORE方法和其他方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010)，以及上述FACS和ELISA形式。
同时，“Fc配体”或“效应配体”是指与抗体Fc结构域结合形成Fc/Fc配体复合物的分子，优选多肽。该分子可以衍生自任何生物体。Fc配体与Fc的结合优选诱导一种或多种效应子功能。此类Fc配体包括但不限于Fc受体、Fcγ受体、Fcα受体、Fcβ受体、FcRn、Clq和C3、甘露聚糖结合凝集素、甘露糖受体、葡萄球菌蛋白A、葡萄球菌蛋白G和病毒Fcγ受体。Fc配体还包括Fc受体同源物(FcRH)(Davis等人,(2002)Immunological Reviews 190,123-136)，它们是与Fcγ受体同源的Fc受体家族。Fc配体还包括与Fc结合的未知分子。
Fcγ受体结合活性
Fc结构域与Fcγ受体FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、FcγRIIIA和/或FcγRIIIB中任一种的结合活性受损可以通过使用上述FACS和ELISA形式，以及ALPHA筛选(放大发光邻近均相测定)和基于表面等离振子共振(SPR)的BIACORE方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010)来评估。
ALPHA筛选是通过ALPHA技术基于下述原理使用两种类型的珠子：供体珠子和受体珠子进行的。仅当与供体珠子连接的分子与和受体珠子连接的分子发生生物学相互作用并且两个珠子位置非常接近时，才会检测到发光信号。在激光束的激发下，供体珠子中的光敏剂将珠子周围的氧转化为激发的单线态氧。当单线态氧在供体珠子周围扩散并到达附近的受体珠子时，引发在受体珠子内的化学发光反应。该反应最终导致发光。如果连接到供体珠子的分子不与连接到受体珠子的分子相互作用，则供体珠子产生的单线态氧不会到达受体珠子，并且不会发生化学发光反应。
例如，生物素标记的抗原结合分子或抗体固定在供体珠子上，而谷胱甘肽S-转移酶(GST)标记的Fcγ受体固定在受体珠子上。在不存在包含竞争性突变Fc结构域的抗原结合分子或抗体的情况下，Fcγ受体与包含野生型Fc结构域的抗原结合分子或抗体相互作用，结果诱导520至620nm的信号。具有未标记的突变Fc结构域的抗原结合分子或抗体与包含野生型Fc结构域的抗原结合分子或抗体竞争与Fcγ受体的相互作用。可以通过量化竞争导致的荧光减少来确定相对结合亲和力。已知使用磺基-NHS-生物素等对抗原结合分子或抗体如抗体进行生物素化的方法。将GST标签添加到Fcγ受体的适当方法包括以下方法：将编码Fcγ受体的多肽和GST框内融合，使用引入了携带基因的载体的细胞表达融合基因，然后使用谷胱甘肽柱纯化。可以优选地分析诱导的信号，例如，通过使用诸如GRAPHPAD PRISM(GraphPad；圣地亚哥)之类的软件基于非线性回归分析拟合至单点竞争模型。
用于观察它们相互作用的物质之一作为配体固定在传感器芯片的金薄层上。当光线照射到传感器芯片的背面，使金薄层和玻璃之间的界面发生全反射时，反射光的强度会在某个位置部分降低(SPR信号)。将用于观察它们相互作用的另一种物质作为分析物注入传感器芯片的表面。当分析物与配体结合时，固定的配体分子的质量会增加。这会改变传感器芯片表面上溶剂的折射率。折射率的变化导致SPR信号的位置偏移(相反，解离将信号移回原始位置)。在Biacore系统中，将上述位移量(即传感器芯片表面的质量变化)绘制在垂直轴上，因此质量随时间的变化显示为测量数据(传感图)。动力学参数(缔合速率常数(ka)和解离速率常数(kd))由传感图曲线确定，亲和力(KD)由这两个常数之间的比值确定。BIACORE方法中优选使用抑制测定。该抑制测定法的实例描述在Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010中。
多特异性抗体的生产和纯化
本文所述的多特异性抗原结合分子包含两种不同的抗原结合部分(例如，“第一抗原结合部分”和“第二抗原结合部分”)，融合到Fc结构域的两个亚基中的一个或另一个，因此Fc结构域的两个亚基通常包含在两条不同的多肽链中。这些多肽的重组共表达和随后的二聚化导致两种多肽的几种可能组合。为了提高重组生产中多特异性抗原结合分子的产率和纯度，因此在多特异性抗原结合分子的Fc结构域中引入促进所需多肽缔合的修饰将是有利的。
因此，在特定实施方案中，本文所述的多特异性抗原结合分子的Fc结构域包含促进Fc结构域的第一和第二亚基缔合的修饰。人IgG Fc结构域的两个亚基之间最广泛的蛋白质-蛋白质相互作用的位点是在Fc结构域的CH3结构域中。因此，在一个实施方案中，所述修饰在Fc结构域的CH3结构域中。
在具体的实施方案中，所述修饰是所谓的“杵臼(knob-into-hole)”修饰，包括在Fc结构域的两个亚基之一中的“杵”修饰和在Fc结构域的两个亚基中的另一个中的“臼”修饰。
例如在US5,731,168中；US7,695,936；Ridgway等人,Prot Eng 9,617-621(1996)和Carter,J Immunol Meth 248,7-15(2001)中描述了杵臼技术。通常，该方法包括在第一多肽的界面处引入突起(“杵”)和在第二多肽的界面中引入相应的空腔(“臼”)，使得突起可以定位在空腔中以便促进异二聚体形成并阻碍同二聚体形成。通过用较大的侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换来自第一多肽界面的小氨基酸侧链来构建突起。通过用较小的氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换大的氨基酸侧链，在第二个多肽的界面中产生与突起大小相同或相似的补偿空腔。
因此，在特定实施方案中，在多特异性抗原结合分子的Fc结构域的第一亚基的CH3结构域中，氨基酸残基被具有更大侧链体积的氨基酸残基替换，从而在第一亚基的CH3结构域内产生突起，所述突起可定位在第二亚基的CH3结构域内的空腔中，并且在Fc结构域的第二亚基的CH3结构域中，氨基酸残基被具有较小侧链体积的氨基酸残基替换，从而在第二亚基的CH3结构域内产生空腔，第一亚基的CH3结构域内的突起可定位在该空腔内。
可以通过改变编码多肽的核酸来形成突起和空腔，例如通过位点特异性诱变或肽合成。
在具体实施方案中，在Fc结构域的第一亚基的CH3结构域中，位置366处的苏氨酸残基被色氨酸残基(T366W)替换，并且在Fc结构域的第二亚基的CH3结构域中，位置407处的酪氨酸残基被缬氨酸残基替换(Y407V)。在一个实施方案中，在Fc结构域的第二亚基中，位置366处的苏氨酸残基另外被丝氨酸残基替换(T366S)并且位置368处的亮氨酸残基被丙氨酸残基替换(L368A)。
在又一个实施方案中，在Fc结构域的第一亚基中，位置354处的丝氨酸残基另外被半胱氨酸残基替换(S354C)，并且在Fc结构域的第二亚基中，位置349的酪氨酸残基另外被半胱氨酸残基替换(Y349C)。这两个半胱氨酸残基的引入导致在Fc结构域的两个亚基之间形成二硫键，进一步稳定二聚体(Carter,J Immunol Methods 248,7-15(2001))。
在其他实施方案中，用于促进具有期望组合的H链之间以及L和H链之间缔合的其他技术可以应用于本发明的多特异性抗原结合分子。
例如，通过在抗体H链(CH2或CH3)的第二恒定区或第三恒定区的界面处引入静电排斥来抑制不希望的H链缔合的技术可应用于多特异性抗体缔合(WO2006/106905)。
在通过在CH2或CH3的界面引入静电排斥来抑制非预期的H链缔合的技术中，在H链的另一个恒定区的界面接触的氨基酸残基的实例包括对应于CH3区中EU编号位置356、439、357、370、399和409处的残基。
更具体地，实例包括包含两种类型的H链CH3区的抗体，其中第一H链CH3区中的1至3对氨基酸残基选自(1)至(3)中如下所示的氨基酸残基对，携带相同类型的电荷：(1)包含在H链CH3区中EU编号位置356和439处的氨基酸残基；(2)包含在H链CH3区中EU编号位置357和370处的氨基酸残基；和(3)包含在H链CH3区中EU编号位置399和409处的氨基酸残基。
此外，该抗体可以是这样的抗体，其中与上述第一H链CH3区不同的第二H链CH3区中的氨基酸残基对选自上述(1)至(3)的氨基酸残基对，其中对应于上述在所述第一H链CH3区中携带相同类型的电荷的(1)至(3)的氨基酸残基对的1至3对氨基酸残基，与上面提到的第一H链CH3区的相应氨基酸残基带有相反的电荷。
上述(1)至(3)中所示的每个氨基酸残基在缔合期间彼此接近。本领域技术人员可以使用市售软件通过同源性建模等找出与所需H链CH3区或H链恒定区中的上述(1)至(3)的氨基酸残基相对应的位置，并且这些位置的氨基酸残基可以适当地进行修饰。
在上述抗体中，“带电荷的氨基酸残基”优选地选自例如包括在以下任一组中的氨基酸残基：
(a)谷氨酸(E)和天冬氨酸(D)；和
(b)赖氨酸(K)、精氨酸(R)和组氨酸(H)。
在上述抗体中，短语“携带相同电荷”是指，例如，2个或以上的氨基酸残基全部选自上述组(a)和(b)的任一个中包含的氨基酸残基。短语“带相反电荷”是指，例如，当两个或更多个氨基酸残基中的至少一个氨基酸残基选自上述组(a)和(b)的任一个中所包含的氨基酸残基时上，剩余的氨基酸残基选自包含在其他组中的氨基酸残基。
在优选的实施方案中，上述抗体可以具有通过二硫键交联的它们的第一H链CH3区和第二H链CH3区。
在本发明中，进行修饰的氨基酸残基不限于上述抗体可变区或抗体恒定区的氨基酸残基。本领域技术人员可以使用市售软件通过同源建模等方法鉴定突变多肽或异源多聚体中形成界面的氨基酸残基；然后可以对这些位置的氨基酸残基进行修饰以调节缔合。
此外，其他已知技术也可用于形成本发明的多特异性抗体。具有不同序列的多肽的缔合可以使用链交换工程化的结构域CH3通过CH3的互补缔合来有效诱导，所述链交换工程化的结构域CH3是通过将抗体的H链CH3的一部分改变为相应的IgA衍生序列并将相应的IgA衍生序列引入另一个H链CH3的互补部分而产生的(Protein Engineering Design&Selection,23；195-202,2010)。这种已知的技术也可用于有效地形成目的多特异性抗体。
此外，如WO2011/028952、WO2014/018572和Nat Biotechnol 2014年2月；32(2)：191-8中描述的使用抗体CH1和CL的缔合以及VH和VL的缔合的抗体生产技术；如WO2008/119353和WO2011/131746中所描述的组合使用单独制备的单克隆抗体生产双特异性抗体的技术(Fab臂交换)；如WO2012/058768和WO2013/063702中所描述的用于调节抗体重链CH3之间缔合的技术；如WO2012/023053中所描述的用于生产由两种类型的轻链和一种类型的重链组成的多特异性抗体的技术；如Christoph等人(Nature Biotechnology第31卷,p 753-758(2013))所描述的使用两种细菌细胞株(其分别表达包含单个H链和单个L链的抗体的链之一)生产多特异性抗体的技术；等可用于形成多特异性抗体。
或者，即使在不能有效地形成目的多特异性抗体的情况下，也可以通过从产生的抗体中分离纯化目的多特异性抗体来获得本发明的多特异性抗体。例如，已经报道了通过将氨基酸取代引入两种类型的H链的可变区而赋予等电点差异，从而能够通过离子交换层析法纯化两种类型的同聚(homomeric)形式和目的异聚(heteromeric)抗体的方法(WO2007114325)。迄今为止，作为纯化异聚抗体的方法，已经报道了使用蛋白A纯化包含与蛋白A结合的小鼠IgG2a H链和不与蛋白A结合的大鼠IgG2b H链的异二聚体抗体的方法(WO98050431和WO95033844)。此外，可以通过使用包含将作为IgG蛋白A结合位点的EU编号位置435和436的氨基酸残基用产生不同蛋白A亲和力的氨基酸Tyr、His等氨基酸取代的H链,或使用具有不同蛋白A亲和力的H链来改变每个H链与蛋白A的相互作用，然后使用蛋白A柱而有效地单独纯化异二聚体抗体。
此外，Fc区C末端异质性得到改善的Fc区可以适当地用作本发明的Fc区。更具体地，本发明提供通过从构成源自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc区的两个多肽的氨基酸序列中缺失如EU编号指定的位置446处的甘氨酸和位置447处的赖氨酸而产生的Fc区。
如本文所述制备的多特异性抗原结合分子可以通过本领域已知的技术例如高效液相层析、离子交换层析、凝胶电泳、亲和层析、大小排阻层析等来纯化。用于纯化特定蛋白质的实际条件将部分取决于诸如净电荷、疏水性、亲水性等因素，并且对于本领域技术人员来说是显而易见的。对于亲和层析纯化，可以使用与多特异性抗原结合分子结合的抗体、配体、受体或抗原。例如，对于本发明的多特异性抗原结合分子的亲和层析纯化，可以使用具有蛋白A或蛋白G的基质。顺序蛋白A或G亲和层析和大小排阻层析可用于分离多特异性抗原结合分子。多特异性抗原结合分子的纯度可以通过多种众所周知的分析方法中的任一种来确定，包括凝胶电泳、高压液相层析等。
本文引用的所有文献通过引用整体并入本文。
以下是本公开的方法和组合物的实施例。应当理解，鉴于上面提供的大体描述，可以实施各种其他实施方案。
实施例
[实施例1](1+2)三价形式和(1+2)双/LINC三价形式的抗体生成
1.1.三价(1+2)形式和三价(1+2)双/LINC形式的生成和序列。
CD137受体聚簇对于有效的激动活性至关重要。为了提高细胞毒性，通过设计一种名为双/LINC，1+2的新三价抗体形式来增加与CD137分子的结合数(图1(a)，表2)。具体而言，新抗体形式是具有“1+2”形式的三价三特异性抗体，其包含两个单价双Fab，每个都能够与一个CD3或CD137结合但不能同时结合(参考实施例3中制备的，图1的FvB和FvC)，以及一个单价肿瘤抗原结合臂(图1的FvA)，其中通过例如在两个双Fab中每一个的CH1结构域的位置191引入半胱氨酸取代(S191C，Kabat编号)，在两个双Fab之间引入/改造一个二硫键(“LINC”)(图1a)。不希望受理论束缚，我们设想这种工程化的二硫键(“LINC”)将由于两个双Fab之间的空间位阻或更短距离，限制两个双Fab的抗原(CD3或CD137)结合方向为顺式抗原结合(即结合相同细胞上的两个抗原，从而通过阻止两个双Fab以不依赖肿瘤抗原的方式介导的两个表达CD3/CD137的免疫细胞发生不期望的交联，从而提高三特异性抗体的安全谱(图2a)。Fc区是FcγR沉默和去糖基化的。三特异性抗体中各Fv区的靶抗原及各结合结构域的命名规则如表2a所示)，SEQ ID NO：在表2b)和c)中显示。
[表2]
a)抗体名称和靶向臂
| 抗体名称 | 形式 | Fv A | 接头 | Fv B | Fv C |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF091 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 长 | DualAE05 | DualAE05 |
| 对照-DualAE05/DualAE05-FF091 | (1+2)双/LINC | 对照 | 长 | DualAE05 | DualAE05 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF102 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 长 | DualAE05 | DualAE05 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF110 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 中 | DualAE05 | DualAE05 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF111 | (1+2)双/LINC | 杭DLL3 | 短 | DualAE05 | DualAE05 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF056 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 长 | DualAE05 | DualAE05 |
| DLL3-DualAE15/DualAE15-FF119 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 长 | DualAE15 | DualAE15 |
| 对照-DualAE15/DualAE15-FF119 | (1+2)双/LINC | 对照 | 长 | DualAE15 | DualAE15 |
| DLL3-DualAE15/DualAE15-FF120 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 长 | DualAE15 | DualAE15 |
| DLL3-DualAE15/DualAE15-FF121 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 中 | DualAE15 | DualAE15 |
| DLL3-DualAE15/DualAE15-FF122 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 短 | DualAE15 | DualAE15 |
| DLL3-DualAE15/DualAE15-FF123 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 长 | DualAE15 | DualAE15 |
| DLL3-DualAE16/DualAE16-FF124 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 长 | DualAE16 | DualAE16 |
| 对照-DualAE16/DualAE16-FF124 | (1+2)双/LINC | 对照 | 长 | DualAE16 | DualAE16 |
| DLL3-DualAE16/DualAE16-FF125 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 长 | DualAE16 | DualAE16 |
| DLL3-DualAE16/DualAE16-FF126 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 中 | DualAE16 | DualAE16 |
| DLL3-DualAE16/DualAE16-FF127 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 短 | DualAE16 | DualAE16 |
| DLL3-DualAE16/DualAE16-FF128 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 长 | DualAE16 | DualAE16 |
| GPC3-DualAE05/DualAE05-FF056 | (1+2)双/LINC | 抗GPC3 | 长 | DualAE05 | DualAE05 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF029 | (1+2)双/LINC | 抗DLL3 | 长 | DualAE05 | DualAE05 |
| 对照-DualAE05/DualAE05-FF030 | (1+2)无LINC | 对照 | 长 | DualAE05 | DualAE05 |
| GPC3-DuaIAE05/DualAE05-FF028 | (1+2)双/LINC | 抗GPC3 | 长 | DualAE05 | DualAE05 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF117 | (1+2)无LINC | 抗DLL3 | 长 | DualAE05 | DualAE05 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF115 | (1+2)无LINC | 抗DLL3 | 中 | DualAE05 | DualAE05 |
| GPC3-DualAE05/DualAE05-FF030 | 1+2)无LINC | 抗GPC3 | 长 | DualAE05 | DualAE05 |
b)抗体链编号和序列ID
| 变体名称 | 接头 | 链1 | 链2 | 链3 | 链4和5 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF091 | 249 | 201 | 206 | 208 | 214 |
| Ctrl-DualAE05/DualAE05-FF091 | 249 | 202 | 207 | 208 | 214 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF102 | 249 | 203 | 206 | 209 | 214 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF110 | 248 | 204 | 206 | 209 | 214 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF111 | 259 | 205 | 206 | 209 | 214 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF056 | 249 | 216 | 206 | 229 | 214 |
| DLL3-DualAE15/DualAE15-FF119 | 249 | 217 | 206 | 210 | 214 |
| 对照-DualAE15/DualAE15-FF119 | 249 | 218 | 207 | 210 | 214 |
| DLL3-DualAE15/DualAE15-FF120 | 249 | 219 | 206 | 211 | 214 |
| DLL3-DualAE15/DualAE15-FF121 | 248 | 220 | 206 | 211 | 214 |
| DLL3-DualAE15/DualAE15-FF122 | 259 | 221 | 206 | 211 | 214 |
| DLL3-DualAE15/DualAE15-FF123 | 249 | 222 | 206 | 230 | 214 |
| DLL3-DualAE16/DualAE16-FF124 | 249 | 223 | 206 | 212 | 215 |
| 对照-DualAE16/DualAE16-FF124 | 249 | 224 | 207 | 212 | 215 |
| DLL3-DualAE16/DualAE16-FF125 | 249 | 225 | 206 | 213 | 215 |
| DLL3-DualAE16/DualAE16-FF126 | 248 | 226 | 206 | 213 | 215 |
| DLL3-DualAE16/DualAE16-FF127 | 259 | 227 | 206 | 213 | 215 |
| DLL3-DualAE16/DualAE16-FF128 | 249 | 228 | 206 | 231 | 215 |
| GPC3-DualAE05/DualAE05-FF056 | 249 | 321 | 327 | 229 | 214 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF029 | 249 | 322 | 206 | 328 | 214 |
| 对照-DualAE05/DualAE05-FF030 | 249 | 323 | 207 | 329 | 214 |
| GPC3-DualAE05/DualAE05-FF028 | 249 | 324 | 327 | 229 | 214 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF117 | 249 | 325 | 206 | 330 | 214 |
| DLL3-DualAE05/DualAE05-FF115 | 248 | 326 | 206 | 330 | 214 |
| GPC3-DualAE05/DualAE05-FF030 | 249 | 339 | 327 | 329 | 214 |
c)可变区的序列ID和它们的CDR1至CDR3
所有抗体通过在Expi293细胞(Invitrogen)中瞬时表达以三价形式表达并根据参考实施例1纯化。如图3所示，通过非还原性SDS-PAGE(参考实施例2)分析抗体的纯度，观察到(1+2)双/LINC三价抗体样品的双条带。已经表明蛋白质三级结构可能影响多肽SDS-PAGE迁移率，其中二硫化物连接的构象在非还原条件下导致SDS-PAGE迁移率增加(Therien AG，Grant FE,Deber CM(2001)Interhelical hydrogen bonds in the CFTR membranedomain.Nat Struct Biol 8:597-601.)。在图3中,观察到没有引入S191C突变的(1+2)三价形式的单个蛋白质迁移条带(图3,泳道2,5和7)。虽然对于具有S191C突变的(1+2)双/LINC抗体变体样品检测到两条蛋白质迁移条带，但较慢的迁移条带(或上部条带)显示出与没有引入S191C突变的(1+2)三价形式相似的电泳迁移率。这表明较快的迁移条带(或较慢的条带)是具有工程化的二硫键的三价1+2抗体(双/LINC，图1a)。由于UnLINC形式(即，没有工程化的二硫键的三价1+2抗体，图1b)可能导致表达CD137和/或CD3的免疫细胞在不与肿瘤抗原结合的情况下交联(如图2a所示)，需要进一步纯化以减少最终形式产品中的UnLINC形式。
[实施例2]通过减少试剂处理提高双/LINC纯度
实施例2.1使用还原剂促进双/LINC抗体中“配对半胱氨酸”(工程化的二硫键)形成
虽然不希望受以下理论的束缚，但认为UnLINC形式(即，没有工程化的二硫键或“未配对半胱氨酸”形式的三价1+2抗体)的存在可能是由于未配对的Cys残基经常与含有游离硫醇基团的分子形成二硫键，例如半胱氨酰化和谷胱甘肽化，其“加帽”了未配对的Cys残基并阻止LINC形成(工程化的二硫键的形成)。如图2(b)所示，为了去除未配对半胱氨酸的加帽分子，还原剂可以帮助使表面半胱氨酸脱帽，并且脱帽的抗体的进一步再氧化(例如通过缓冲液交换去除还原剂)可以促进脱帽的半胱氨酸之间形成二硫键用于LINC形成。因此，通过还原和再氧化从UnLINC形式的未配对巯基中去除半胱氨酸化可以去除UnLINC形式并提高抗体的同质性。
为了获得均质的双-LINC抗体制剂，需要将用半胱氨酸加帽的未配对半胱氨酸脱帽以促进“配对半胱氨酸”(工程化的二硫键)形成。为了使未配对的半胱氨酸脱帽，使用了各种还原剂。通过添加还原剂如半胱氨酸或TCEP(三(2-羧基乙基)膦)或2MEA(2-巯基乙胺)，对包含配对和未配对半胱氨酸形式的异质双-LINC抗体制剂进行脱帽。脱帽后缓冲液交换以去除还原剂并促进双-LINC抗体制剂中的“配对半胱氨酸”(工程化的二硫键)形成。除缓冲液交换外，已知可促进半胱氨酸键形成的CuSO4用于增强“配对半胱氨酸”(工程化的二硫键)的形成。用2mM半胱氨酸、5mM半胱氨酸、50微摩尔TCEP、100微摩尔TCEP和25mM 2MEA在37℃下处理0.5mg/ml(2.5微摩尔)双-LINC抗体制剂2小时，然后用不加CuSO4或加25微摩尔/50微摩尔CuSO4的1xTBS进行缓冲液交换。在所有条件中，观察到TCEP处理显示在双-LINC抗体制剂中“配对半胱氨酸”(工程化的二硫键)的形成显著增加。添加半胱氨酸、2MEA和CuSO4不会像TCEP那样增加“配对半胱氨酸”形成(工程化的二硫键)(图4)。
为了进一步优化TCEP处理，将不同浓度的双-LINC-Ig与不同摩尔比的TCEP在室温下温育2小时，然后缓冲液交换为1x PBS(以去除TCEP)以促进“配对半胱氨酸”的形成。双-LINC抗体制剂和TCEP以1:10、1:20和1:30的摩尔比在0.5mg/ml(2.5微摩尔)、1mg/ml(5微摩尔)、5mg/ml(25微摩尔)和10mg/ml(50微摩尔)的双-LINC-Ig的不同浓度下添加。基于SDS-PAGE分析(图5)，高浓度(例如5mg/ml和10mg/ml)也显示“配对半胱氨酸”(工程化的二硫键)形成显著增加。
为了进一步优化TCEP处理的温育期，反应以2小时或18小时的不同温育期用摩尔比为1:2、1:5和1:10的双-LINC-Ig(50微摩尔)和TCEP进行。在所有条件下，基于SDS-PAGE分析(对应于“UnLINC”形式的较慢条带/上部条带的强度除以对应于图6中的“LINC”和“UnLINC”结构的两个条带的强度之和)，具有未配对半胱氨酸(工程化的二硫键)的双-LINC-Ig减少到<10％并进一步增加了双-LINC-Ig的同质性(图6)。在所有条件中，1:5比例的双-LINC抗体制剂和TCEP在RT下温育18小时，然后将缓冲液交换为1xPBS过夜(O/N)再氧化，显示最佳的具有配对半胱氨酸形成的双-LINC。
下面显示本发明的氨基酸序列的例子。
[表3]
[实施例3]从抗体制剂中分离不具有“配对半胱氨酸”形成的双/LINC的亲和层析方法
实施例3.1仅与具有“未配对半胱氨酸”形式(无工程化的二硫键)的抗体特异性结合的构象特异性抗体的概念
如实施例2中所述，具有工程化的半胱氨酸的抗体制剂(例如，图1、表2中所示的三价1+2抗体)包含具有工程化的二硫键(“配对半胱氨酸”或“LINC”形式)和没有工程化的二硫键(“未配对半胱氨酸”或“unLINC”形式)的抗体同工型的异质群体。为了从抗体制剂中分离或去除这些没有工程化的二硫键(“未配对半胱氨酸”或“unLINC”形式)的抗体，可以特异性结合和/或捕获“未配对半胱氨酸”形式的抗体但不结合“配对半胱氨酸”形式的抗体的构象特异性抗体，可以作为工具抗体产生，用于亲和层析纯化、分析和/或定量应用。
在一个实施方案中，靶抗体是IgG(1+1)形式，其在两个Fab的每一个处包含工程化的半胱氨酸，并且这种构象特异性抗体是特异性结合/识别一个或多个表位的抗体，所述一个或多个表位是仅当靶抗体不具有工程化的二硫键(“未配对半胱氨酸”形式)时对构象特异性抗体是可及的，其中当靶抗体具有工程化的二硫键(“配对半胱氨酸”形式)时,由于例如两个Fab之间的空间位阻或距离减小,这种一个或多个表位对构象特异性抗体是不可及的(图7)。在一个优选实施方案中，工程化的半胱氨酸位于两个Fab的每一个的CH1区处，并且位于CH1区内的一个或多个表位是仅当靶抗体具有“未配对半胱氨酸”形式时对构象特异性抗体是可及的，其中当靶抗体具有“配对半胱氨酸”形式时,由于例如两个Fab之间的空间位阻或距离减小，这种一个或多个表位对构象特异性抗体是不可及的(图7)。
在又一个实施方案中，靶抗体是称为双/LINC的三价1+2抗体，图8中所示的1+2包含三个Fab部分—其中两个Fab(即FabB和C，分别包含在链1-链5和链3-链4中)各自包含工程化的半胱氨酸，该工程化的半胱氨酸能够形成连接两个Fab的工程化的二硫键，因此可以“未配对半胱氨酸”或“unLINC”形式或“配对半胱氨酸”或“LINC”形式存在”；并且一个Fab(FabA，包含在链1-链2中)不包含只能以“未配对半胱氨酸”或“unLINC”形式存在的工程化的半胱氨酸。为了从抗体制剂中分离具有“未配对半胱氨酸”或“unLINC”形式的双/LINC、1+2形式的抗体，进一步选择构象特异性抗体以特异性结合表位,该表位对两个Fab(Fab B和C，分别包含在链1-链5和链3-链4中)是独有的并且不存在于另一个Fab(Fab A，包含在链1-链2)中,所述两个Fab可以以“未配对半胱氨酸”形式或“配对半胱氨酸”形式存在，所述另一个Fab不包含工程化的半胱氨酸(仅以“配对半胱氨酸”形式存在)。在一个优选的实施方案中，可以以“未配对半胱氨酸”形式或“配对半胱氨酸”形式存在的两个Fab(FabB和C，分别包含在链1-链5和链3-链4中)各自包含第一人IgG亚类(例如人IgG1 CH1)的CH1结构域，而另一个Fab(FabA，包含在链1-链2中)包含不同于第一人IgG亚类(例如人IgG4 CH1)的其他IgG亚类的CH1结构域。在这样的优选实施方案中，构象特异性抗体被生成并选择为仅特异性结合“未配对半胱氨酸”形式的第一人IgG亚类(例如人IgG1 CH1)的CH1结构域(图8b)，但不结合“配对半胱氨酸”形式的第一人IgG亚类(例如人IgG1 CH1)的CH1结构域或不同于第一人IgG亚类(例如人IgG4 CH1)的其他IgG亚类的CH1结构域(图8c)。
实施例3.2生成特异性结合“未配对半胱氨酸”形式的双/LINC1+2抗体的CH1的构象特异性抗CH1抗体
如下制备、选择和表达抗CH1抗体：
用工程化的人IgG1 Fab对6只NZW兔进行皮内免疫。在2个月内重复给药4次，然后采集血液和脾脏。使用细胞分选仪分选可以与工程化的人IgG结合的B细胞，然后根据WO2016098356A1中描述的程序进行铺板和培养。培养后，收集B细胞培养上清液用于进一步分析，并将B细胞沉淀冷冻保存。使用B细胞培养上清液通过ELISA评估与具有κ轻链的重组IgG1和具有λ轻链的重组IgG的结合。可以结合具有κ轻链的重组IgG1和具有λ轻链的重组IgG的B细胞是优选的并被选择用于基因克隆。
使用ZR-96Quick-RNA试剂盒(ZYMO RESEARCH，Cat No.R1053)从其冷冻保存的细胞沉淀中纯化具有所需结合特征的选定B细胞系的RNA。通过逆转录PCR扩增所选系中编码抗体重链可变区的DNA，并与编码兔IgG重链恒定区的DNA重组。还通过逆转录PCR扩增编码抗体轻链可变区的DNA，并与编码兔κ轻链恒定区的DNA重组。按照上述程序从培养上清液中表达和纯化克隆的抗体。
实施例3.3鉴定与“未配对半胱氨酸”形式的双/LINC 1+2抗体的CH1特异性结合的构象特异性抗CH1抗体
为了筛选和鉴定构象特异性抗CH1抗体，产生了以下五种抗体作为筛选工具。五种抗体的抗体形式如(图9a)所示，抗体多肽链的氨基酸序列如(图9b)所示：
(1)和(2)IgG1_001和DualAE05-SG1201中的每一个都是具有没有S191C半胱氨酸取代的人IgG1 CH1的二价抗体(图9a左图)。该抗体用于筛选和鉴定特异性结合人IgG1的CH1结构域(在EU编号位置191处没有工程化的二硫键)但不结合人IgG4的CH1结构域(在EU编号位置191处没有工程化的二硫键)的抗CH1抗体。
(3)DualAE05-SG1202对应于具有S191C半胱氨酸取代的DualAE05-SG1201(图9a中图)。它对应于能够形成通过S191C连接两个Fab的工程化的二硫键的抗体，因此可以以“未配对半胱氨酸”形式或“配对半胱氨酸”形式存在。
(4)DualAE05-SG1202k/SG1201hV11对应于具有人IgG1 CH1的双特异性抗体，其中一个Fab臂包含S191C突变，而另一个Fab臂不包含S191C突变(图9a右图)。DualAE05-SG1202k/SG1201hV11重链的异二聚化通过杵臼工程化来控制。它代表一种包含S191C突变但不能通过S191C连接两个Fab形成工程化的二硫键的抗体，因此只能以“未配对的半胱氨酸”形式存在。
(5)IgG4_001是具有没有S191C半胱氨酸取代的人IgG4 CH1的二价抗体(图9a左图)。该抗体用于筛选和鉴定特异性结合人IgG1的CH1结构域(无工程化的二硫键结合)但不结合人IgG4的CH1结构域(无工程化的二硫键结合)的抗CH1抗体。
DualAE05-SG1201、DualAE05-SG1202、DualAE05-SG1202k/SG1201hV11、IgG1_001和IgG4_001抗体在Expi293(Invitrogen)中表达并通过蛋白A纯化然后凝胶过滤进行纯化。
使用Biacore T200仪器(GE Healthcare)进行Biacore结合实验以表征实施例3.2中制备的抗CH1抗体与DualAE05-SG1201、DualAE05-SG1202、DualAE05-SG1202k/SG1201hV11、IgG1_001和IgG4_001在37℃下的结合活性。使用胺偶联试剂盒(GEHealthcare)，将小鼠抗人Fc(GE Healthcare)固定在CM4传感器芯片的所有流通池上。将工具抗体DualAE05-SG1201、DualAE05-SG1202、DualAE05-SG1202k/SG1201hV11、IgG1_001和IgG4_001捕获到流动池上，然后将从实施例3.2获得的抗CH1抗体注射到所有流动池上。在含有20mM ACES、150mM NaCl、0.05％吐温20、0.005％NaN3的ACES pH 7.4中制备所有抗体。每个周期用3M MgCl2再生传感器表面。
已确定基本上与IgG1_001、DualAE05-SG1201和DualAE05-SG1202k/SG1201hV11结合但基本上不与IgG4_001和DualAE05-SG1202中的每一个结合的抗CH1抗体将满足筛选标准以获得构象特异性抗体,该构象特异性抗体特异性结合“未配对半胱氨酸”形式的人IgG1的CH1结构域，但不与“配对半胱氨酸”形式的人IgG1的CH1结构域或人IgG4 CH1的CH1结构域结合。作为筛选的结果，发现并选择四种抗体即FAB0059ff、FAB0060hh、FAB0133hh和FAB0135hh作为构象特异性抗CH1抗体，其特异性结合“未配对半胱氨酸”形式的双/LINC 1+2抗体(表5)。如表4所示，这些构象特异性抗CH1抗体对IgG1_001、DualAE05-SG1201和DualAE05-SG1202k/SG1201hV11中的每一个都表现出相对强的结合活性(相对结合活性>0.8)，而对IgG4_001(相对结合活性<0.1)和DualAE05-SG1202(相对结合活性<0.5)没有表现出结合活性或表现出相对弱的结合活性。
表4显示了抗CH1抗体与工具抗体DualAE05-SG1201、DualAE05-SG1202、DualAE05-SG1202k/SG1201hV11、IgG1_001和IgG4_001中的每一个的相对结合活性。通过将抗CH1抗体与工具抗体的Biacore结合反应(RU)除以抗CH1抗体与IgG1_001的RU结合值，获得与工具抗体的相对结合活性值(针对IgG1_001的RU结合值归一化)。
[表4]
为了改善构象特异性抗CH1抗体的理化性质，将FAB0059ff、FAB0060hh和FAB0133hh中CDR区的胱氨酸残基去除，随后分别命名为FAB0059Hf/FAB0059L0001、FAB0060Hh/FAB0060L0001和FAB01301h/FAB0133L0。构象特异性抗CH1抗体的氨基酸序列SEQ ID NO：如表5所示。
[表5]
实施例3.4使用构象特异性抗CH1抗体从抗体制剂中去除具有“未配对半胱氨酸”形式的双/LINC 1+2抗体
实施例3.3中描述的构象特异性抗CH1抗体可用作配体或结合剂，以从(例如从细胞培养上清液中收获的)抗体制剂中选择性捕获或去除“未配对半胱氨酸”形式的双/LINC1+2抗体。例如，构象特异性抗CH1抗体可以固定在柱上，用于使用亲和纯化从抗体制剂中去除“未配对半胱氨酸”形式的双/LINC 1+2抗体。
构象特异性抗CH1抗体，FAB0133Hh/FAB0133L0001；和双/LINC 1+2抗体，DLL3-DualAE05/DualAE05-FF056使用Expi293表达系统(Thermo Fisher Scientific)瞬时转染和表达。DLL3-DualAE05/DualAE05-FF056的形式具有图8a所示的分子形式，并包含由SEQID NO:142(链1)、SEQ ID NO:147(链2)、SEQ ID NO:148(链3)和SEQ ID NO:157(链4和5)的氨基酸序列表示的五个多肽链。收获细胞培养上清液，并使用MabSelect SuRe亲和层析(GEHealthcare)从上清液中纯化抗体，然后使用Superdex200(GE Healthcare)进行凝胶过滤层析。
对于亲和纯化，将与纯化的FAB0133Hh/FAB0133L0001缀合的NHS Sepharose树脂装入XK 16/20柱(GE Healthcare)中。在蛋白A层析处理后，将DLL3-DualAE05/DualAE05-FF056的抗体制剂应用于XK 16/20柱，以允许将“未配对半胱氨酸”形式的DLL3-DualAE05/DualAE05-FF056特异性捕获/结合到柱上，其中“配对半胱氨酸”形式的DLL3-DualAE05/DualAE05-FF056抗体不会被柱捕获或结合，并且主要出现在流穿级分中。随后，通过用50mMHCl处理洗脱被亲和捕获的“未配对半胱氨酸”形式的DLL3-DualAE05/DualAE05-FF056。图10b显示了使用构象特异性抗CH1抗体FAB0133Hh/FAB0133L0001柱亲和纯化DLL3-DualAE05/DualAE05-FF056中洗脱抗体的层析图(图10a)和非还原性SDS-PAGE分析(图10b)。具体而言，流穿级分包含高纯度的DualAE05/DualAE05-FF056，其呈“配对半胱氨酸”或“LINC”形式(流穿液：白色条)，如在非还原性SDS-PAGE分析(泳道1至13)中迁移速度更快的一个主要蛋白质条带所示；洗涤级分包含“未配对半胱氨酸”形式的DualAE05/DualAE05-FF056和“配对半胱氨酸”形式的DualAE05/DualAE05-FF056的混合物(洗涤：灰色条，泳道14至19)；和洗脱的级分主要包含DualAE05/DualAE05-FF056，其呈“未配对半胱氨酸”形式(酸洗脱：黑色条)，如在非还原性SDS-PAGE分析(泳道20至23)中迁移较慢的一个主要蛋白质条带所示。
实施例4使用构象特异性抗CH1抗体定量分析具有“未配对半胱氨酸”形式的双/LINC 1+2抗体
实施例3中鉴定的构象特异性抗CH1抗体如FAB0133Hh/FAB0133L0001用作进行定量分析的工具，以使用本领域已知的分析方法例如SPR测量来测量“未配对半胱氨酸”形式的抗体的纯度或比率。
具体而言，DLL3-DualAE05/DualAE05-FF110由细胞收获物制备，首先用Pro A柱处理，然后用实施例3.4中描述的抗CH1抗体柱亲和纯化。收集从Pro A柱洗脱的DLL3-DualAE05/DualAE05-FF110样品和从抗CH1抗体柱流穿的DLL3-DualAE05/DualAE05-FF110样品，用于使用Biacore8K仪器进行Biacore结合分析。通过使用SPR结合分析，在2.5％、5％、7.5％、10％、15％、20％、40％、60％、80％、100％的多种浓度比率下观察到在FAB0133Hh/FAB0133L0001对含有“未配对半胱氨酸”形式的抗体样品的结合应答间R2为0.9987的线性相关关系(数据未显示)。因此，可以通过测量FAB0133Hh/FAB0133L0001与抗体样品的结合百分比来计算抗体样品中“未配对半胱氨酸”形式的DLL3-DualAE05/DualAE05-FF110的百分比(％)量或比率。抗体样品被捕获在包被美洲驼抗体片段的抗人Fc的CM5传感器芯片上。注射1微摩尔浓度的FAB0133Hh/FAB0133L0001并测量相互作用的结合反应。测定温度设定为25℃。在包含20mM ACES、150mM NaCl、0.05％吐温20、0.005％NaN3的ACES pH 7.4中制备所有抗体和分析物。
如表6所示，FAB0133Hh/FAB0133L0001显示出对来自抗CH1抗体柱的DLL3-DualAE05/DualAE05-FF110流穿样品的结合反应降低，表明在使用抗CH1抗体柱的纯化过程后，“未配对半胱氨酸”形式的量减少(<2％)。
[表6]
参考实施例1抗体表达载体的制备以及抗体的表达和纯化
使用PCR或In-fusion Advantage PCR克隆试剂盒(Takara Bio Inc.)等通过本领域技术人员通常已知的方法进行氨基酸取代或IgG转化，以构建表达载体。通过本领域技术人员通常已知的方法对获得的表达载体进行测序。将制备的质粒瞬时转移至FreeStyle293细胞(ThermoFisher Scientific)或Expi293F细胞(ThermoFisher Scientific)以表达抗体。使用rProtein A Sepharose(TM)Fast Flow(GE Healthcare Japan Corp.)通过本领域技术人员通常已知的方法从获得的培养上清液中纯化每种抗体。关于纯化抗体的浓度，使用分光光度计在280nm处测量吸光度，并使用由PACE(Protein Science 1995；4：2411-2423)获得的值计算出的消光系数来计算抗体浓度。
参考实施例2用于表征抗体纯度的非还原性SDS-PAGE
使用4-20％Mini-PROTEAN(注册商标)TGX Stain-FreeTM Precast Gels(Bio-Rad)和1x Tris/Glycine/SDS运行缓冲液(Bio-Rad)进行非还原性SDS-PAGE。将单克隆抗体样品在70℃下加热10分钟。上样0.2微克并在200V下进行电泳90分钟。用Chemidoc ImagingSystem(Bio-Rad)对蛋白质进行显现。通过Image Lab软件6.0版(Bio-Rad)分析单个条带的百分比，其中通过条带的强度除以这两个条带的总和计算单个条带的百分比强度，例如，更快的迁移(下部条带)和更慢的迁移(上部条带)。
参考实施例3
用于改善对肿瘤细胞的体外细胞毒性的亲本双Fab
H183L072的亲和力成熟变体
的筛选
1.1亲和力成熟变体的序列
在WO2019111871(通过引用并入本文)中公开了提供结合CD3和CD137但不同时结合CD3和CD137的免疫球蛋白可变(Fab)区的概念。为了增加WO2019111871中公开的亲本双Fab H183L072(重链：SEQ ID NO:1；轻链：SEQ ID NO:57)的结合亲和力，使用H183L072作为模板通过在可变区上引入单个或多个突变来生成超过1,000个双Fab变体。Expi293(Invitrogen)表达抗体，并通过蛋白质A纯化和随后的凝胶过滤(如果需要进行凝胶过滤的话)进行纯化。具有多个突变的22个代表的双-Fab变体的序列列于表7和表8-1至8-6中，并且在参考实施例3的1.2.2中在25℃和/或37℃下使用下述Biacore T200仪器(GEHealthcare)评估了对CD3和CD137的结合亲和力和动力学(表11-1和11-2)。
[表7]
[表8-1]
[表8-2]
[表8-3]
[表8-4]
[表8-5]
[表8-6]
1.2.亲和力成熟变体的结合动力学信息
1.2.1人CD3和CD137的表达和纯化
人CD3复合物的γ和ε亚基(人CD3eg接头)通过29聚体接头连接，并将Flag标签融合到γ亚基的C末端(SEQ ID NO:102，表9和10)。使用FreeStyle293F细胞系(ThermoFisher)瞬时表达该构建体。使用装有QHP树脂(GE Healthcare)的柱子浓缩表达人CD3eg接头的条件培养基，然后将其施加到FLAG标签亲和层析。收集含有人CD3eg接头的级分，然后将其置于用1x D-PBS平衡的Superdex200凝胶过滤柱(GE Healthcare)上。然后合并含有人CD3eg接头的级分。使用FreeStyle293F细胞系(Thermo Fisher)瞬时表达在其C末端带有六组氨酸(His标签)和生物素受体肽(BAP)的人CD137细胞外结构域(ECD)(SEQ ID NO：103，表9和10)。将表达人CD137 ECD的条件培养基施加到HisTrap HP柱(GE Healthcare)，并用含咪唑(Nacalai)的缓冲液洗脱。收集含有人CD137 ECD的级分，然后将其置于用1x D-PBS平衡的Superdex 200凝胶过滤柱(GE Healthcare)上。然后合并含有人CD137 ECD的级分，并储存在-80℃下。
[表9]
| 抗原名称 | SEQ列表 |
| 人CD3eg接头 | 102 |
| 人CD137 ECD | 103 |
[表10]
1.2.2对人CD3和CD137的亲和力测量
使用Biacore 8K仪器(GE Healthcare)在25℃下评估双Fab抗体(双-Ig)对人CD3的结合亲和力。使用胺偶联试剂盒(GE Healthcare)，将抗人Fc(GE Healthcare)固定在CM4传感器芯片的所有流通池上。将抗体捕获到抗Fc传感器表面上，然后将重组人CD3或CD137注射到流通池上。在包含20mM ACES、150mM NaCl、0.05％吐温20、0.005％NaN3的ACES pH7.4中制备所有抗体和分析物。每个周期用3M MgCl2再生传感器表面。通过使用BiacoreInsight Evaluation软件(GE Healthcare)处理数据并将其拟合到1：1结合模型来确定结合亲和力。CD137结合亲和力测定在相同条件下进行，只是测定温度设定在37℃。双-Fab抗体对重组人CD3和CD137的结合亲和力显示在表11-1和11-2中。如表11-1和11-2所示，与H183/L072相比，双Fab变体对CD3和CD137显示出不同的结合动力学。
[表11-1]
[表11-2]
工业实用性
本发明的多特异性抗原结合分子能够调节和/或激活免疫反应，同时规避由常规多特异性抗原结合分子与在不同细胞上表达的抗原结合引起的不同细胞(例如不同T细胞)之间的交联，当多特异性抗原结合分子用作药物时，这种交联被认为是造成不良反应的原因。
序列表
<110> 中外制药株式会社
<120> 生产多特异性抗原结合分子的方法
<130> C1-A2007P
<150> JP 2020-062601
<151> 2020-03-31
<160> 339
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Gly Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Val Leu Pro Ala
100 105 110
Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 2
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 3
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 3
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 4
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 4
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 5
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 5
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Ile Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 6
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 7
<211> 207
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 7
Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser
1 5 10 15
Val Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr
20 25 30
Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr
35 40 45
Cys Pro Gln Tyr Pro Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys
50 55 60
Asn Ile Gly Gly Asp Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp
65 70 75 80
His Leu Ser Leu Lys Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr
85 90 95
Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu
100 105 110
Tyr Leu Arg Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met
115 120 125
Ser Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu
130 135 140
Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys
145 150 155 160
Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn
165 170 175
Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg
180 185 190
Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile
195 200 205
<210> 8
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 8
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Thr
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Asp Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 9
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Glu Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 10
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 10
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 11
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 12
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 12
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Glu Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Ile Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 13
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 14
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 15
Asn Ala Trp Met His
1 5
<210> 16
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 16
Asn Val Trp Met His
1 5
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 17
Asn Val Trp Met His
1 5
<210> 18
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 18
Asn Val Trp Phe His
1 5
<210> 19
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 19
Asn Val Trp Met His
1 5
<210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 20
Asn Val Trp Phe His
1 5
<210> 21
<211> 72
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 21
Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr
1 5 10 15
Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu
20 25 30
Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His
35 40 45
Cys Leu Gly Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly
50 55 60
Gln Glu Leu Thr Lys Lys Gly Cys
65 70
<210> 22
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 22
Asn Thr Trp Phe His
1 5
<210> 23
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 23
Asn Val Trp Phe His
1 5
<210> 24
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 24
Asn Val Trp Phe His
1 5
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 25
Asn Val Trp Phe His
1 5
<210> 26
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 26
Asn Val Trp Phe His
1 5
<210> 27
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 27
Asn Val Trp Phe His
1 5
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 28
Asn Val Trp Phe His
1 5
<210> 29
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 29
Gln Ile Lys Asp Lys Gly Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 30
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 30
Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 31
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 31
Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 32
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 32
Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 33
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 33
Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 34
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 34
Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 35
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 35
Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly Ala Gly Cys Ser Met Cys
1 5 10 15
Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu Thr Lys Lys Gly Cys
20 25 30
<210> 36
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 36
Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Asp Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 37
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 37
Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Glu
<210> 38
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 38
Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Glu Gly
<210> 39
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 39
Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Glu Gly
<210> 40
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 40
Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Glu
<210> 41
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 41
Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 42
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 42
Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 43
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 43
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Val Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 44
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 45
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 45
Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 46
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 46
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 47
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 47
Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Ile Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 48
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 49
<211> 63
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 49
Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn
1 5 10 15
Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser
20 25 30
Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val
35 40 45
Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys
50 55 60
<210> 50
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 50
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 51
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 51
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 52
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 53
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 54
Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Ile Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 55
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 55
Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 56
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 56
Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 57
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 57
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Ala Ser Gln Glu Leu Val His Met
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly
85 90 95
Thr Ser Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 58
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 58
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly
85 90 95
Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 59
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 59
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met
20 25 30
Asn Asn Val Val Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly
85 90 95
Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 60
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 60
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Val Phe Pro Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly
85 90 95
Thr His His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 61
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 61
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Glu Glu Val Val His Met
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Pro Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly
85 90 95
Thr His His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 62
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 62
Gln Ala Ser Gln Glu Leu Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 63
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 63
Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 64
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 64
Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met Asn Asn Val Val Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 65
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 65
Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 66
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 66
Gln Pro Ser Glu Glu Val Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 67
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 67
Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro
1 5
<210> 68
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 68
Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro
1 5
<210> 69
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 69
Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro
1 5
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 70
Lys Val Ser Asn Val Phe Pro
1 5
<210> 71
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 71
Lys Val Ser Asn Leu Phe Pro
1 5
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 72
Ala Gln Gly Thr Ser Val Pro Phe Thr
1 5
<210> 73
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 73
Ala Gln Gly Thr Ser His Pro Phe Thr
1 5
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 74
Ala Gln Gly Thr Ser His Pro Phe Thr
1 5
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 75
Ala Gln Gly Thr His His Pro Phe Thr
1 5
<210> 76
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 76
Ala Gln Gly Thr His His Pro Phe Thr
1 5
<210> 77
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 77
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser Gln Asn Tyr Ala Thr Tyr Val Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Arg Tyr Val His Tyr Ala Ala Gly Tyr Gly Val Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 78
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 78
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 79
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 79
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Gly Gly Tyr Val Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Glu
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Tyr Gly Pro Gly Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 80
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 80
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Ala Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 81
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 81
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 82
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 82
Asn Val Trp Phe His
1 5
<210> 83
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 83
Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 84
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 84
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 85
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 85
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 86
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 86
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 87
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 87
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro
100 105 110
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
115 120 125
Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys
130 135 140
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 88
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 88
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 89
<211> 88
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 89
Met Val Leu Ala Ser Ser Thr Thr Ser Ile His Thr Met Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Met Leu Ala Gln Pro Ala Met Ala Arg Ala Asp Pro Cys Ala
20 25 30
Ala Arg Pro Cys Ala His Gly Gly Arg Cys Tyr Ala His Phe Ser Gly
35 40 45
Leu Val Cys Ala Cys Ala Pro Gly Tyr Met Gly Ala Arg Cys Glu Phe
50 55 60
Pro Val His Pro Asp Gly Ala Ser Ala Leu Pro Ala Ala Pro Pro Gly
65 70 75 80
Leu Arg Pro Gly Asp Pro Gln Arg
85
<210> 90
<211> 618
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 90
Met Val Ser Pro Arg Met Ser Gly Leu Leu Ser Gln Thr Val Ile Leu
1 5 10 15
Ala Leu Ile Phe Leu Pro Gln Thr Arg Pro Ala Gly Val Phe Glu Leu
20 25 30
Gln Ile His Ser Phe Gly Pro Gly Pro Gly Pro Gly Ala Pro Arg Ser
35 40 45
Pro Cys Ser Ala Arg Leu Pro Cys Arg Leu Phe Phe Arg Val Cys Leu
50 55 60
Lys Pro Gly Leu Ser Glu Glu Ala Ala Glu Ser Pro Cys Ala Leu Gly
65 70 75 80
Ala Ala Leu Ser Ala Arg Gly Pro Val Tyr Thr Glu Gln Pro Gly Ala
85 90 95
Pro Ala Pro Asp Leu Pro Leu Pro Asp Gly Leu Leu Gln Val Pro Phe
100 105 110
Arg Asp Ala Trp Pro Gly Thr Phe Ser Phe Ile Ile Glu Thr Trp Arg
115 120 125
Glu Glu Leu Gly Asp Gln Ile Gly Gly Pro Ala Trp Ser Leu Leu Ala
130 135 140
Arg Val Ala Gly Arg Arg Arg Leu Ala Ala Gly Gly Pro Trp Ala Arg
145 150 155 160
Asp Ile Gln Arg Ala Gly Ala Trp Glu Leu Arg Phe Ser Tyr Arg Ala
165 170 175
Arg Cys Glu Pro Pro Ala Val Gly Thr Ala Cys Thr Arg Leu Cys Arg
180 185 190
Pro Arg Ser Ala Pro Ser Arg Cys Gly Pro Gly Leu Arg Pro Cys Ala
195 200 205
Pro Leu Glu Asp Glu Cys Glu Ala Pro Leu Val Cys Arg Ala Gly Cys
210 215 220
Ser Pro Glu His Gly Phe Cys Glu Gln Pro Gly Glu Cys Arg Cys Leu
225 230 235 240
Glu Gly Trp Thr Gly Pro Leu Cys Thr Val Pro Val Ser Thr Ser Ser
245 250 255
Cys Leu Ser Pro Arg Gly Pro Ser Ser Ala Thr Thr Gly Cys Leu Val
260 265 270
Pro Gly Pro Gly Pro Cys Asp Gly Asn Pro Cys Ala Asn Gly Gly Ser
275 280 285
Cys Ser Glu Thr Pro Arg Ser Phe Glu Cys Thr Cys Pro Arg Gly Phe
290 295 300
Tyr Gly Leu Arg Cys Glu Val Ser Gly Val Thr Cys Ala Asp Gly Pro
305 310 315 320
Cys Phe Asn Gly Gly Leu Cys Val Gly Gly Ala Asp Pro Asp Ser Ala
325 330 335
Tyr Ile Cys His Cys Pro Pro Gly Phe Gln Gly Ser Asn Cys Glu Lys
340 345 350
Arg Val Asp Arg Cys Ser Leu Gln Pro Cys Arg Asn Gly Gly Leu Cys
355 360 365
Leu Asp Leu Gly His Ala Leu Arg Cys Arg Cys Arg Ala Gly Phe Ala
370 375 380
Gly Pro Arg Cys Glu His Asp Leu Asp Asp Cys Ala Gly Arg Ala Cys
385 390 395 400
Ala Asn Gly Gly Thr Cys Val Glu Gly Gly Gly Ala His Arg Cys Ser
405 410 415
Cys Ala Leu Gly Phe Gly Gly Arg Asp Cys Arg Glu Arg Ala Asp Pro
420 425 430
Cys Ala Ala Arg Pro Cys Ala His Gly Gly Arg Cys Tyr Ala His Phe
435 440 445
Ser Gly Leu Val Cys Ala Cys Ala Pro Gly Tyr Met Gly Ala Arg Cys
450 455 460
Glu Phe Pro Val His Pro Asp Gly Ala Ser Ala Leu Pro Ala Ala Pro
465 470 475 480
Pro Gly Leu Arg Pro Gly Asp Pro Gln Arg Tyr Leu Leu Pro Pro Ala
485 490 495
Leu Gly Leu Leu Val Ala Ala Gly Val Ala Gly Ala Ala Leu Leu Leu
500 505 510
Val His Val Arg Arg Arg Gly His Ser Gln Asp Ala Gly Ser Arg Leu
515 520 525
Leu Ala Gly Thr Pro Glu Pro Ser Val His Ala Leu Pro Asp Ala Leu
530 535 540
Asn Asn Leu Arg Thr Gln Glu Gly Ser Gly Asp Gly Pro Ser Ser Ser
545 550 555 560
Val Asp Trp Asn Arg Pro Glu Asp Val Asp Pro Gln Gly Ile Tyr Val
565 570 575
Ile Ser Ala Pro Ser Ile Tyr Ala Arg Glu Val Ala Thr Pro Leu Phe
580 585 590
Pro Pro Leu His Thr Gly Arg Ala Gly Gln Arg Gln His Leu Leu Phe
595 600 605
Pro Tyr Pro Ser Ser Ile Leu Ser Val Lys
610 615
<210> 91
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 91
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 92
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 92
Ser Gly Gly Gly
1
<210> 93
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 93
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 94
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 94
Ser Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 95
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 95
Gly Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 96
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 96
Ser Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 97
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 97
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 98
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 98
Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 99
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 99
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
195 200 205
Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
210 215 220
<210> 100
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 100
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
195 200 205
Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
210 215 220
<210> 101
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 101
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Phe Gly Ile Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 102
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 102
Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys
1 5 10 15
Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Pro Gln Tyr Pro
20 25 30
Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys Asn Ile Gly Gly Asp
35 40 45
Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp His Leu Ser Leu Lys
50 55 60
Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg
65 70 75 80
Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu Tyr Leu Arg Ala Arg
85 90 95
Val Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Asp
100 105 110
Ala Lys Lys Asp Asp Ala Lys Lys Asp Gly Ser Gln Ser Ile Lys Gly
115 120 125
Asn His Leu Val Lys Val Tyr Asp Tyr Gln Glu Asp Gly Ser Val Leu
130 135 140
Leu Thr Cys Asp Ala Glu Ala Lys Asn Ile Thr Trp Phe Lys Asp Gly
145 150 155 160
Lys Met Ile Gly Phe Leu Thr Glu Asp Lys Lys Lys Trp Asn Leu Gly
165 170 175
Ser Asn Ala Lys Asp Pro Arg Gly Met Tyr Gln Cys Lys Gly Ser Gln
180 185 190
Asn Lys Ser Lys Pro Leu Gln Val Tyr Tyr Arg Met Asp Tyr Lys Asp
195 200 205
Asp Asp Asp Lys
210
<210> 103
<211> 189
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 103
Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn
1 5 10 15
Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser
20 25 30
Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val
35 40 45
Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp
50 55 60
Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu
65 70 75 80
Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp
85 90 95
Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro
100 105 110
Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys Ser Val Leu Val Asn Gly Thr
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala Pro Ala Arg Glu Pro Gly His
145 150 155 160
Ser Pro Gln His His His His His His Gly Gly Gly Gly Ser Gly Leu
165 170 175
Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu
180 185
<210> 104
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 104
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Thr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 105
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 105
Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn
1 5 10 15
Asn Arg Asn Gln Ile Cys
20
<210> 106
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 106
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 107
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 107
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser His Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 108
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 108
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
210 215 220
<210> 109
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 109
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
195 200 205
Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
210 215 220
<210> 110
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 110
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 111
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 111
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His
195 200 205
Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
210 215 220
<210> 112
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 112
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
210 215 220
<210> 113
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 113
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Gly Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Arg Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 114
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 114
Asn Val Trp Met His
1 5
<210> 115
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 115
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 116
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 116
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 117
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 117
Asn Thr Trp Met His
1 5
<210> 118
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 118
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 119
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 119
Asn Val Trp Phe His
1 5
<210> 120
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 120
His Val Trp Phe His
1 5
<210> 121
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 121
Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 122
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 122
Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 123
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 123
Asn Val Trp Phe His
1 5
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 124
Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 125
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 125
Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 126
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 126
Asn Ala Trp Met His
1 5
<210> 127
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 127
Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 128
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 128
Gly Ala Ser Ile Leu Glu Ser
1 5
<210> 129
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 129
Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Asn Ala
1 5 10
<210> 130
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 130
Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 131
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 131
Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Asn Asn Tyr Gly Asn Ala
1 5 10
<210> 132
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 132
Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 133
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 133
Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 134
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 134
Gln Ser Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Asn Ala
1 5 10
<210> 135
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 135
Gln Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Asn Tyr Gly Asn Ala
1 5 10
<210> 136
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 136
Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 137
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 137
Gln Ser Thr Tyr Tyr Gly Ile Ser Tyr Gly Asn Ala
1 5 10
<210> 138
<211> 433
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 138
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Tyr
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Thr Ile Thr Ile Asp Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ala Ala
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr Asp
85 90 95
Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr
115 120 125
Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro
130 135 140
Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val
145 150 155 160
Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val
180 185 190
Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser
195 200 205
Thr Cys Ser Lys Pro Met Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
210 215 220
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
225 230 235 240
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp
245 250 255
Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr
260 265 270
Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val
275 280 285
Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu
290 295 300
Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
305 310 315 320
Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr
325 330 335
Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr
340 345 350
Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu
355 360 365
Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Thr Val Leu
370 375 380
Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr
385 390 395 400
Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu
405 410 415
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly
420 425 430
Lys
<210> 139
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 139
Gln Ile Lys Asp Lys Gly Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 140
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 140
Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Ile Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 141
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 141
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
His Gly Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Tyr Tyr Gly Ile Ser
85 90 95
Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp
100 105 110
Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val
115 120 125
Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro
130 135 140
Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly
145 150 155 160
Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys
180 185 190
Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Asp Cys
210
<210> 142
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 142
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn
245 250 255
Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
260 265 270
Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala
275 280 285
Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
290 295 300
Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro
325 330 335
Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
340 345 350
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
355 360 365
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp
370 375 380
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
385 390 395 400
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
405 410 415
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln
420 425 430
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
435 440 445
Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro
465 470 475 480
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
485 490 495
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
500 505 510
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
515 520 525
Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
530 535 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545 550 555 560
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
565 570 575
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu
580 585 590
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
595 600 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
610 615 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625 630 635 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
645 650 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
660 665 670
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 143
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 143
Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 144
<400> 144
000
<210> 145
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 145
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 146
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 146
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 147
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 147
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Asp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Thr Ile Tyr Thr Gly Asp Tyr Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Thr Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
115 120 125
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val
130 135 140
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
145 150 155 160
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
165 170 175
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
180 185 190
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
195 200 205
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
210 215 220
Glu Cys
225
<210> 148
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 148
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 149
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 149
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 150
<400> 150
000
<210> 151
<400> 151
000
<210> 152
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 152
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp
1 5 10 15
Ala
<210> 153
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 153
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 154
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 154
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 155
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 155
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 156
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 156
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 157
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 157
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly
85 90 95
Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg
115 120 125
Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 158
<211> 458
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 158
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser Gln Asn Tyr Ala Thr Tyr Val Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Arg Tyr Val His Tyr Ala Ala Gly Tyr Gly Val Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Arg
225 230 235 240
Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Ala Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Tyr Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
450 455
<210> 159
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 159
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 160
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 160
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
His Ala Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
<210> 161
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 161
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 162
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 162
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Trp
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Thr Val Asn Ile Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ala Ala
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr Gly
85 90 95
Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Ile Val Ser Leu
100 105 110
<210> 163
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 163
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Trp
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Thr Ile Asn Ile Asp Gly Ser Ala Ala Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ala Ala
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Thr Tyr Gly
85 90 95
Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 164
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 164
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Tyr
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Thr Ile Thr Ile Asp Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ala Ala
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr Asp
85 90 95
Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 165
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 165
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Tyr
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Trp Ile Ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Tyr
85 90 95
Ala Ala Ser Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 166
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 166
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 167
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 167
Thr Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 168
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 168
Thr Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 169
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 169
Ser Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 170
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 170
Thr Val Asn Ile Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 171
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 171
Thr Ile Asn Ile Asp Gly Ser Ala Ala Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 172
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 172
Thr Ile Thr Ile Asp Gly Thr Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 173
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 173
Trp Ile Ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 174
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 174
Tyr Gly Gly Asp Ile
1 5
<210> 175
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 175
Tyr Gly Gly Asp Ile
1 5
<210> 176
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 176
Tyr Asp Gly Asp Ile
1 5
<210> 177
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 177
Asp Tyr Ala Ala Ser Asn Ile
1 5
<210> 178
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 178
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser
85 90 95
Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 179
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 179
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Asn Asn
85 90 95
Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 180
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 180
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
His Gly Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Ile Ser
85 90 95
Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 181
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 181
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Gly Asn Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser
85 90 95
Tyr Ser Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 182
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 182
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 183
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 183
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 184
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 184
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 185
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 185
Gln Ala Ser Glu Asn Ile Gly Asn Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 186
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 186
Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 187
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 187
Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 188
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 188
Gly Ala Ser Ile Leu Glu Ser
1 5
<210> 189
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 189
Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 190
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 190
Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Asn Ala
1 5 10
<210> 191
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 191
Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Asn Asn Tyr Gly Asn Ala
1 5 10
<210> 192
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 192
Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Ile Ser Tyr Gly Asn Ala
1 5 10
<210> 193
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 193
Gln Ser Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Tyr Ser Asn Pro
1 5 10
<210> 194
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 194
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Ala
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser
85 90 95
Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 195
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 195
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Ala
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Gly Asn Asn
85 90 95
Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 196
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 196
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Tyr Tyr Gly Ser Ser
85 90 95
Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 197
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 197
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Asn
85 90 95
Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 198
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 198
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
His Gly Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Tyr Tyr Gly Ile Ser
85 90 95
Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 199
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 199
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 200
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 200
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 201
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 201
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn
245 250 255
Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
260 265 270
Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala
275 280 285
Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
290 295 300
Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro
325 330 335
Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
340 345 350
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
355 360 365
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp
370 375 380
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
385 390 395 400
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
405 410 415
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln
420 425 430
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
435 440 445
Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
465 470 475 480
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
485 490 495
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
500 505 510
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
515 520 525
Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
530 535 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545 550 555 560
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
565 570 575
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp
580 585 590
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
595 600 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
610 615 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625 630 635 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
645 650 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr
660 665 670
Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 202
<211> 678
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 202
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg Ser Thr Ser
115 120 125
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
180 185 190
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
210 215 220
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu
225 230 235 240
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val Trp Phe
245 250 255
His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln
260 265 270
Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser Val
275 280 285
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Ile Tyr
290 295 300
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
305 310 315 320
His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly
325 330 335
Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
340 345 350
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
355 360 365
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro
370 375 380
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
385 390 395 400
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
405 410 415
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
420 425 430
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val
435 440 445
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
450 455 460
Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
465 470 475 480
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
485 490 495
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
500 505 510
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
515 520 525
Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
530 535 540
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
545 550 555 560
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
565 570 575
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr
580 585 590
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
595 600 605
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
610 615 620
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
625 630 635 640
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
645 650 655
Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys
660 665 670
Glu Leu Ser Leu Ser Pro
675
<210> 203
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 203
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn
245 250 255
Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
260 265 270
Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala
275 280 285
Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
290 295 300
Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro
325 330 335
Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
340 345 350
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
355 360 365
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp
370 375 380
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
385 390 395 400
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
405 410 415
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln
420 425 430
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
435 440 445
Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
465 470 475 480
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
485 490 495
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
500 505 510
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
515 520 525
Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
530 535 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545 550 555 560
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
565 570 575
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp
580 585 590
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
595 600 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
610 615 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625 630 635 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
645 650 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr
660 665 670
Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 204
<211> 676
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 204
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu
210 215 220
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu
225 230 235 240
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val Trp Phe His Trp
245 250 255
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys
260 265 270
Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser Val Lys Gly
275 280 285
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Ile Tyr Leu Gln
290 295 300
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys His Tyr
305 310 315 320
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
325 330 335
Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
340 345 350
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
355 360 365
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
370 375 380
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
385 390 395 400
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
405 410 415
Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
420 425 430
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro
435 440 445
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
450 455 460
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
465 470 475 480
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
485 490 495
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
500 505 510
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala
515 520 525
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
530 535 540
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
545 550 555 560
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
565 570 575
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
580 585 590
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
595 600 605
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
610 615 620
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
625 630 635 640
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
645 650 655
Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu
660 665 670
Ser Leu Ser Pro
675
<210> 205
<211> 671
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 205
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
225 230 235 240
Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro
245 250 255
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala
260 265 270
Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
275 280 285
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys
290 295 300
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser
305 310 315 320
Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly
325 330 335
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
340 345 350
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
355 360 365
Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
370 375 380
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
385 390 395 400
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
405 410 415
Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
420 425 430
Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
435 440 445
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
450 455 460
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
465 470 475 480
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
485 490 495
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
500 505 510
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val
515 520 525
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
530 535 540
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
545 550 555 560
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
565 570 575
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
580 585 590
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
595 600 605
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
610 615 620
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
625 630 635 640
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu
645 650 655
Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
660 665 670
<210> 206
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 206
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Asp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Thr Ile Tyr Thr Gly Asp Tyr Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Thr Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
115 120 125
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val
130 135 140
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
145 150 155 160
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
165 170 175
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
180 185 190
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
195 200 205
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
210 215 220
Glu Cys
225
<210> 207
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 207
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Tyr Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Leu Tyr Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
115 120 125
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
130 135 140
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
145 150 155 160
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
165 170 175
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
180 185 190
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
195 200 205
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 208
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 208
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
355 360 365
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr
435 440 445
Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 209
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 209
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
355 360 365
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr
435 440 445
Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 210
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 210
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
355 360 365
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr
435 440 445
Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 211
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 211
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
355 360 365
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr
435 440 445
Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 212
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 212
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
355 360 365
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr
435 440 445
Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 213
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 213
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
355 360 365
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr
435 440 445
Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 214
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 214
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly
85 90 95
Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg
115 120 125
Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 215
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 215
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Val Phe Pro Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly
85 90 95
Thr His His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg
115 120 125
Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 216
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 216
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn
245 250 255
Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
260 265 270
Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala
275 280 285
Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
290 295 300
Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro
325 330 335
Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
340 345 350
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
355 360 365
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp
370 375 380
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
385 390 395 400
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
405 410 415
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln
420 425 430
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
435 440 445
Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro
465 470 475 480
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
485 490 495
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
500 505 510
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
515 520 525
Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
530 535 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545 550 555 560
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
565 570 575
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu
580 585 590
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
595 600 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
610 615 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625 630 635 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
645 650 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
660 665 670
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 217
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 217
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn
245 250 255
Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
260 265 270
Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His
275 280 285
Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
290 295 300
Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro
325 330 335
Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
340 345 350
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
355 360 365
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp
370 375 380
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
385 390 395 400
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
405 410 415
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln
420 425 430
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
435 440 445
Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
465 470 475 480
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
485 490 495
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
500 505 510
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
515 520 525
Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
530 535 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545 550 555 560
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
565 570 575
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp
580 585 590
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
595 600 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
610 615 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625 630 635 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
645 650 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr
660 665 670
Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 218
<211> 678
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 218
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg Ser Thr Ser
115 120 125
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
180 185 190
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
210 215 220
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu
225 230 235 240
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val Trp Phe
245 250 255
His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln
260 265 270
Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro Ser Val
275 280 285
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Ile Tyr
290 295 300
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
305 310 315 320
His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala Glu Gly
325 330 335
Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
340 345 350
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
355 360 365
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro
370 375 380
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
385 390 395 400
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
405 410 415
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
420 425 430
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val
435 440 445
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
450 455 460
Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
465 470 475 480
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
485 490 495
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
500 505 510
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
515 520 525
Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
530 535 540
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
545 550 555 560
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
565 570 575
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr
580 585 590
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
595 600 605
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
610 615 620
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
625 630 635 640
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
645 650 655
Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys
660 665 670
Glu Leu Ser Leu Ser Pro
675
<210> 219
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 219
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
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Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn
245 250 255
Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
260 265 270
Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His
275 280 285
Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
290 295 300
Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro
325 330 335
Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
340 345 350
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
355 360 365
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp
370 375 380
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
385 390 395 400
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
405 410 415
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln
420 425 430
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
435 440 445
Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
465 470 475 480
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
485 490 495
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
500 505 510
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
515 520 525
Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
530 535 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545 550 555 560
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
565 570 575
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp
580 585 590
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
595 600 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
610 615 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625 630 635 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
645 650 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr
660 665 670
Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 220
<211> 676
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 220
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
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115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
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145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
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210 215 220
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu
225 230 235 240
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val Trp Phe His Trp
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Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
325 330 335
Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
340 345 350
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
355 360 365
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
370 375 380
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
385 390 395 400
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
405 410 415
Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
420 425 430
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro
435 440 445
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450 455 460
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
465 470 475 480
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
485 490 495
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
500 505 510
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala
515 520 525
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
530 535 540
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
545 550 555 560
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
565 570 575
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
580 585 590
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
595 600 605
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
610 615 620
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
625 630 635 640
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
645 650 655
Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu
660 665 670
Ser Leu Ser Pro
675
<210> 221
<211> 671
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 221
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
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145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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210 215 220
Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
225 230 235 240
Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro
245 250 255
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala
260 265 270
Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
275 280 285
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys
290 295 300
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala
305 310 315 320
Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly
325 330 335
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
340 345 350
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
355 360 365
Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
370 375 380
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385 390 395 400
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
405 410 415
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420 425 430
Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
435 440 445
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
450 455 460
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
465 470 475 480
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
485 490 495
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
500 505 510
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val
515 520 525
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
530 535 540
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
545 550 555 560
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
565 570 575
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
580 585 590
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
595 600 605
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610 615 620
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
625 630 635 640
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu
645 650 655
Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
660 665 670
<210> 222
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 222
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
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Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
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Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
385 390 395 400
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
405 410 415
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln
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485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
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565 570 575
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595 600 605
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625 630 635 640
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645 650 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
660 665 670
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 223
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 223
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
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Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn
245 250 255
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275 280 285
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355 360 365
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370 375 380
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
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485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545 550 555 560
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565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
610 615 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625 630 635 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
645 650 655
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660 665 670
Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 224
<211> 678
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 224
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg Ser Thr Ser
115 120 125
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
180 185 190
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
210 215 220
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu
225 230 235 240
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val Trp Phe
245 250 255
His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln
260 265 270
Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser Val
275 280 285
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Ile Tyr
290 295 300
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
305 310 315 320
His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly
325 330 335
Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
340 345 350
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
355 360 365
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro
370 375 380
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
385 390 395 400
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
405 410 415
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
420 425 430
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val
435 440 445
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
450 455 460
Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
465 470 475 480
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
485 490 495
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
500 505 510
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
515 520 525
Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
530 535 540
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
545 550 555 560
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
565 570 575
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr
580 585 590
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
595 600 605
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
610 615 620
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
625 630 635 640
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
645 650 655
Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys
660 665 670
Glu Leu Ser Leu Ser Pro
675
<210> 225
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 225
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn
245 250 255
Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
260 265 270
Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala
275 280 285
Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
290 295 300
Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro
325 330 335
Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
340 345 350
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
355 360 365
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp
370 375 380
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
385 390 395 400
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
405 410 415
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln
420 425 430
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
435 440 445
Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
465 470 475 480
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
485 490 495
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
500 505 510
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
515 520 525
Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
530 535 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545 550 555 560
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
565 570 575
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp
580 585 590
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
595 600 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
610 615 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625 630 635 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
645 650 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr
660 665 670
Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 226
<211> 676
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 226
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu
210 215 220
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu
225 230 235 240
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val Trp Phe His Trp
245 250 255
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys
260 265 270
Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser Val Lys Gly
275 280 285
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Ile Tyr Leu Gln
290 295 300
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys His Tyr
305 310 315 320
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
325 330 335
Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
340 345 350
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
355 360 365
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
370 375 380
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
385 390 395 400
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
405 410 415
Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
420 425 430
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro
435 440 445
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
450 455 460
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
465 470 475 480
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
485 490 495
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
500 505 510
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala
515 520 525
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
530 535 540
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
545 550 555 560
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
565 570 575
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
580 585 590
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
595 600 605
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
610 615 620
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
625 630 635 640
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
645 650 655
Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu
660 665 670
Ser Leu Ser Pro
675
<210> 227
<211> 671
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 227
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
225 230 235 240
Gly Phe Val Phe Ser Asn Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro
245 250 255
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala
260 265 270
Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
275 280 285
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys
290 295 300
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser
305 310 315 320
Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly
325 330 335
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
340 345 350
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
355 360 365
Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
370 375 380
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
385 390 395 400
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
405 410 415
Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
420 425 430
Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
435 440 445
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
450 455 460
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
465 470 475 480
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
485 490 495
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
500 505 510
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val
515 520 525
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
530 535 540
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
545 550 555 560
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
565 570 575
Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
580 585 590
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
595 600 605
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
610 615 620
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
625 630 635 640
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu
645 650 655
Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
660 665 670
<210> 228
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 228
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn
245 250 255
Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
260 265 270
Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala
275 280 285
Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
290 295 300
Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro
325 330 335
Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
340 345 350
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
355 360 365
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp
370 375 380
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
385 390 395 400
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
405 410 415
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln
420 425 430
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
435 440 445
Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro
465 470 475 480
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
485 490 495
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
500 505 510
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
515 520 525
Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
530 535 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545 550 555 560
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
565 570 575
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu
580 585 590
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
595 600 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
610 615 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625 630 635 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
645 650 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
660 665 670
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 229
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 229
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 230
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 230
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 231
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 231
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 232
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 232
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Asp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Thr Ile Tyr Thr Gly Asp Tyr Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Thr Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 233
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 233
Ser Ser Tyr Asp Met Gly
1 5
<210> 234
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 234
Thr Ile Tyr Thr Gly Asp Tyr Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 235
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 235
His Thr Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu
1 5
<210> 236
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 236
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 237
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 237
Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser Asp Trp Leu Ser
1 5 10
<210> 238
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 238
Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile
1 5
<210> 239
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 239
Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly Tyr Ile Tyr Ala
1 5 10
<210> 240
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 240
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Tyr Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Leu Tyr Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 241
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 241
Ser Tyr Trp Met His
1 5
<210> 242
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 242
Met Ile Asp Pro Ser Tyr Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 243
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 243
Tyr Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 244
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 244
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys
100 105
<210> 245
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 245
Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg Leu Ala
1 5 10
<210> 246
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 246
Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr
1 5
<210> 247
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 247
Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 248
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 248
Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 249
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 249
Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 250
<211> 984
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 250
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Val Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ser Ile Ala Val Thr Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu
130 135 140
Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Arg Val Asn Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln
165 170 175
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
210 215 220
Tyr Asp Arg Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
225 230 235 240
Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
245 250 255
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
260 265 270
Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro
275 280 285
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn
290 295 300
Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser
305 310 315 320
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys
325 330 335
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly
340 345 350
Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
355 360 365
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser
385 390 395 400
Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val
405 410 415
Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
420 425 430
Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro
435 440 445
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu
450 455 460
Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp
465 470 475 480
Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
485 490 495
Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
500 505 510
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
515 520 525
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
530 535 540
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
545 550 555 560
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr
565 570 575
Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
580 585 590
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
595 600 605
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
610 615 620
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
625 630 635 640
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
645 650 655
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
660 665 670
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
675 680 685
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
690 695 700
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
705 710 715 720
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
725 730 735
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
740 745 750
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
755 760 765
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
770 775 780
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
785 790 795 800
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
805 810 815
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln
820 825 830
Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
835 840 845
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
850 855 860
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
865 870 875 880
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
885 890 895
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
900 905 910
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
915 920 925
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
930 935 940
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
945 950 955 960
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
965 970 975
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980
<210> 251
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 251
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser Gln Asn Tyr Ala Thr Tyr Val Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Arg Tyr Val His Tyr Ala Ala Gly Tyr Gly Val Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 252
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 252
Asn Ala Trp Met His
1 5
<210> 253
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 253
Gln Ile Lys Asp Lys Ser Gln Asn Tyr Ala Thr Tyr Val Ala Glu Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 254
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 254
Val His Tyr Ala Ala Gly Tyr Gly Val Asp Ile
1 5 10
<210> 255
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 255
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 256
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 256
Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 257
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 257
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 258
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 258
Gly Gln Gly Thr Gln Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 259
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 259
Val Glu Pro Lys Ser Cys
1 5
<210> 260
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 260
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Asn Ser Gly Ser Gly Phe Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Val Lys Ile
65 70 75 80
Ser Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Val
85 90 95
Phe Asp Ala Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Pro Trp
100 105 110
Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 261
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 261
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Glu Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Arg Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Tyr Tyr Asp Ser Ser
85 90 95
Gly Val Asp Trp Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 262
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 262
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Thr Gly Gly Gly Asp Pro Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Met Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Met Ile
85 90 95
Gly Ser Glu Tyr Ala Ser Ser Ser Glu Tyr Tyr Asp Ala Phe Asp Pro
100 105 110
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 263
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 263
Ala Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Arg Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Tyr Tyr Thr Thr Ser
85 90 95
Val Asp Val Leu Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 264
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 264
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asp Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asp Pro Ala Phe Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val
50 55 60
Asn Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser His Asn Ala Gln Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Arg Val Ala Leu Val Val Ala Gly Val Ala Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 265
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 265
Ala Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser
20 25 30
Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ser
85 90 95
Gly Ser Ser Tyr Gly Ala Phe Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val
100 105 110
Val Lys
<210> 266
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 266
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Asn Thr Tyr His
20 25 30
Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Val Asp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ala Thr
65 70 75 80
Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly
85 90 95
Ser Trp Asp Gly Phe Asn Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 267
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 267
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asn Ser
20 25 30
Asp Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Thr Tyr Glu Asp
85 90 95
Val Gly Trp Phe Asn Asp Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 268
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 268
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Thr Ser Asn
20 25 30
Ala Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Cys Ile Tyr Asn Asp Asp Gly Ser Ala Tyr Ser Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Lys Thr Ser Ser Thr Ala Val Thr Leu
65 70 75 80
Gln Val Thr Gly Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Pro Tyr Tyr Thr Tyr Gly Gly Ala Pro Ser Ala Tyr Ala Ser
100 105 110
Gly Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 269
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 269
Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Asn
20 25 30
Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Met His Asp Ala Ser Val Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Asp Tyr Tyr Ser Thr
85 90 95
Gly Gly Ser Tyr Gly Phe Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val
100 105 110
Lys
<210> 270
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 270
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Thr Ser
20 25 30
Tyr Cys Pro Cys Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Asp Ala Gly Tyr Ser Gly Ala Thr Trp Tyr Ala Asn
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val
65 70 75 80
Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Gly Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
85 90 95
Cys Val Arg Cys Asp Ala Ala Gly Ser Gly Ala Phe Asn Leu Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 271
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 271
Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Gly Tyr Met Asp
85 90 95
Val Asp Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 272
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 272
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Ser Gly Gly Ser Ser Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Asn
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val
65 70 75 80
Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Val Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Val Tyr Ile Asp Ser Thr Ile Phe Asn Phe Asn Leu
100 105 110
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 273
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 273
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ala Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Thr Tyr Tyr Ser Ser
85 90 95
Gly Trp Tyr Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 274
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 274
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Tyr Thr Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Lys Ala Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Ala Val Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Ser Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 275
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 275
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser Asp
20 25 30
Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Val Leu
35 40 45
Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly Tyr
85 90 95
Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105
<210> 276
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 276
Asn Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 277
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 277
Tyr Ile Asp Pro Ala Phe Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn
1 5 10 15
Gly
<210> 278
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 278
Val Ala Leu Val Val Ala Gly Val Ala Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 279
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 279
Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 280
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 280
Arg Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 281
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 281
Gln Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ser Gly Ser Ser Tyr Gly Ala Phe Ala
1 5 10 15
<210> 282
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 282
Ser Ser Tyr Asp Met Cys
1 5
<210> 283
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 283
Cys Ile Tyr Thr Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 284
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 284
Asn Ser Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu
1 5
<210> 285
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 285
Ser Asn Ala Met Cys
1 5
<210> 286
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 286
Cys Ile Tyr Asn Asp Asp Gly Ser Ala Tyr Ser Ala Ser Trp Ala Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 287
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 287
Ser Pro Tyr Tyr Thr Tyr Gly Gly Ala Pro Ser Ala Tyr Ala Ser Gly
1 5 10 15
Tyr Phe Asn Leu
20
<210> 288
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 288
Gln Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Asn Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 289
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 289
Asp Ala Ser Val Leu Thr Ser
1 5
<210> 290
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 290
Gln Ser Asp Tyr Tyr Ser Thr Gly Gly Ser Tyr Gly Phe Ala
1 5 10
<210> 291
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 291
Ser Ser Gly Tyr Met Cys
1 5
<210> 292
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 292
Cys Ile Ser Gly Gly Ser Ser Gly Asp Thr Asp Tyr Ala Asn Trp Ala
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 293
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 293
Asp Val Tyr Ile Asp Ser Thr Ile Phe Asn Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 294
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 294
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 295
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 295
Ala Ala Ser Ser Leu Ala Ser
1 5
<210> 296
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 296
Gln Gly Thr Tyr Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Ser Thr
1 5 10
<210> 297
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 297
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Asp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Thr Ile Tyr Thr Gly Asp Tyr Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala
65 70 75 80
Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asn Thr Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 298
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 298
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Asp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Thr Ile Tyr Thr Gly Asp Tyr Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Thr Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 299
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 299
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Ala Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Asp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Thr Ile Tyr Thr Gly Asp Tyr Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Thr Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 300
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 300
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Asp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Thr Ile Tyr Thr Gly Asp Tyr Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Ser Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Thr Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 301
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 301
Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Asp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Thr Ile Tyr Thr Gly Asp Tyr Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Thr Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 302
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 302
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ser Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 303
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 303
Asn Thr Gly Tyr Gly Tyr Phe Gly Leu
1 5
<210> 304
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 304
Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly Tyr Ser Tyr Ala
1 5 10
<210> 305
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 305
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Asp Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Ile Glu Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Met Asn Pro Gly Ser Gly Gly Thr His Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ile Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Asp Tyr Asp Tyr Val Thr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 306
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 306
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Asn Tyr Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 307
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 307
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Asp Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ala Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Ser Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Ala Arg Glu Pro Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 308
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 308
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Leu Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Asn Ile
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ala Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Glu Tyr Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 309
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 309
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Leu Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Asn Ser Ala Phe Tyr Ser Tyr Tyr Asp Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 310
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 310
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Ser Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ser Ile Ala Val Arg Gly Phe Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 311
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 311
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Val Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ser Ile Ala Val Thr Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 312
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 312
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ala Ser Ile Ser Ser Phe
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ile Ala Val Ala Gly Phe Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 313
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 313
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ile Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Thr Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr
65 70 75 80
Gly Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 314
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 314
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Phe Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
His Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 315
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 315
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 316
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 316
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Glu Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Phe Ala Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Ser Asp Phe Ser Leu Ser Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 317
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 317
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Arg
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Trp Gln Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly
85 90 95
Thr His Trp Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 318
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 318
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Thr Ser Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 319
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 319
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Arg Ser Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 320
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 320
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asn Lys Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Arg Ser Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 321
<211> 683
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 321
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
225 230 235 240
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe
245 250 255
Ser Asn Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
260 265 270
Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr
275 280 285
Tyr Ala Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
290 295 300
Lys Asn Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr
305 310 315 320
Ala Val Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu
325 330 335
Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
340 345 350
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
355 360 365
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
370 375 380
Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
385 390 395 400
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
405 410 415
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly
420 425 430
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
435 440 445
Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
450 455 460
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu
465 470 475 480
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
485 490 495
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
500 505 510
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
515 520 525
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
530 535 540
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
545 550 555 560
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
565 570 575
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys
580 585 590
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys
595 600 605
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
610 615 620
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
625 630 635 640
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
645 650 655
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
660 665 670
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 322
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 322
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
180 185 190
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn
245 250 255
Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
260 265 270
Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala
275 280 285
Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
290 295 300
Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro
325 330 335
Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
340 345 350
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
355 360 365
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp
370 375 380
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
385 390 395 400
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
405 410 415
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln
420 425 430
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
435 440 445
Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro
465 470 475 480
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
485 490 495
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
500 505 510
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
515 520 525
Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
530 535 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545 550 555 560
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
565 570 575
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu
580 585 590
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
595 600 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
610 615 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625 630 635 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
645 650 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
660 665 670
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 323
<211> 678
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 323
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
210 215 220
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu
225 230 235 240
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val Trp Phe
245 250 255
His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln
260 265 270
Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser Val
275 280 285
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Ile Tyr
290 295 300
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
305 310 315 320
His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly
325 330 335
Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
340 345 350
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
355 360 365
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro
370 375 380
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
385 390 395 400
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
405 410 415
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
420 425 430
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val
435 440 445
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
450 455 460
Pro Glu Leu Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
465 470 475 480
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
485 490 495
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
500 505 510
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
515 520 525
Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
530 535 540
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
545 550 555 560
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
565 570 575
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr
580 585 590
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
595 600 605
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
610 615 620
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
625 630 635 640
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
645 650 655
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
660 665 670
Ser Leu Ser Leu Ser Pro
675
<210> 324
<211> 683
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 324
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
225 230 235 240
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe
245 250 255
Ser Asn Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
260 265 270
Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr
275 280 285
Tyr Ala Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
290 295 300
Lys Asn Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr
305 310 315 320
Ala Val Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu
325 330 335
Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
340 345 350
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
355 360 365
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
370 375 380
Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
385 390 395 400
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
405 410 415
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly
420 425 430
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
435 440 445
Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
450 455 460
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Arg Gly Gly Pro Lys Val Phe Leu
465 470 475 480
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
485 490 495
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
500 505 510
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
515 520 525
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
530 535 540
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
545 550 555 560
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
565 570 575
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys
580 585 590
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys
595 600 605
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
610 615 620
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
625 630 635 640
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
645 650 655
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
660 665 670
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 325
<211> 681
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 325
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
225 230 235 240
Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn
245 250 255
Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
260 265 270
Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala
275 280 285
Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
290 295 300
Ser Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro
325 330 335
Ala Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
340 345 350
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
355 360 365
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp
370 375 380
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
385 390 395 400
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
405 410 415
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
420 425 430
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
435 440 445
Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
450 455 460
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
465 470 475 480
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
485 490 495
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
500 505 510
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
515 520 525
Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
530 535 540
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
545 550 555 560
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
565 570 575
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp
580 585 590
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe
595 600 605
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
610 615 620
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
625 630 635 640
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
645 650 655
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr
660 665 670
Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
675 680
<210> 326
<211> 676
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 326
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Thr Glu Ser Val Tyr Gly Ser
20 25 30
Asp Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Leu Glu Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Tyr Ser Gly
85 90 95
Tyr Ile Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser
100 105 110
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Arg
115 120 125
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
130 135 140
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
145 150 155 160
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
180 185 190
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
195 200 205
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu
210 215 220
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu
225 230 235 240
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val Trp Phe His Trp
245 250 255
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys
260 265 270
Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser Val Lys Gly
275 280 285
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Ile Tyr Leu Gln
290 295 300
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys His Tyr
305 310 315 320
Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp
325 330 335
Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
340 345 350
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
355 360 365
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
370 375 380
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
385 390 395 400
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
405 410 415
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
420 425 430
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro
435 440 445
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
450 455 460
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
465 470 475 480
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
485 490 495
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
500 505 510
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala
515 520 525
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
530 535 540
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
545 550 555 560
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
565 570 575
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
580 585 590
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
595 600 605
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
610 615 620
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
625 630 635 640
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
645 650 655
Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu
660 665 670
Ser Leu Ser Pro
675
<210> 327
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 327
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Glu Met His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
130 135 140
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
145 150 155 160
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
165 170 175
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
180 185 190
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
195 200 205
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 328
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 328
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Cys Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 329
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 329
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Arg Arg Gly Pro Lys Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 330
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 330
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val
20 25 30
Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala
100 105 110
Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
355 360 365
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr
435 440 445
Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 331
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 331
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Glu Met His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 332
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 332
Asp Tyr Glu Met His
1 5
<210> 333
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 333
Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 334
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 334
Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr
1 5
<210> 335
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 335
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
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100 105 110
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 336
Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 338
Gly Gln Gly Thr Gln Val Pro Tyr Thr
1 5
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<211> 683
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工合成的序列
<400> 339
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly
85 90 95
Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
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225 230 235 240
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe
245 250 255
Ser Asn Val Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
260 265 270
Glu Trp Val Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr
275 280 285
Tyr Ala Pro Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
290 295 300
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305 310 315 320
Ala Val Tyr Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu
325 330 335
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340 345 350
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370 375 380
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660 665 670
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675 680
Claims (17)
1.一种多特异性抗原结合分子的制剂的生产方法，其中，所述多特异性抗原结合分子包含：
(a)第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个能够结合第一抗原和不同于第一抗原的第二抗原，但不同时结合两种抗原；和
(b)第三抗原结合部分，其能够结合不同于第一和第二抗原的第三抗原，优选在癌细胞/组织上表达的抗原，其中，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个包含至少一个不在铰链区的半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，优选地所述至少一个半胱氨酸位于CH1区；所述至少一个半胱氨酸残基能够在所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分之间，优选在CH1区，形成至少一个二硫键；
其中所述方法包括使所述制剂与还原剂接触。
2.权利要求1的方法，其中所述第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个在CH1区中根据EU编号的位置191处包含一个半胱氨酸残基(通过突变、取代或插入)，所述半胱氨酸残基能够在第一抗原结合部分的CH1区和第二抗原结合部分的CH1区之间形成一个二硫键。
3.权利要求2的方法，其中所述多特异性抗原结合分子制剂(在与还原剂接触之前)包含两种或更多种结构同工型，它们的区别在于位于CH1区的氨基酸残基之间或位于CH1区的位置191处(EU编号)形成的至少一个二硫键，并且其中与还原剂的接触优先富集或增加在位于CH1区的氨基酸残基之间或位于CH1区的位置191处(EU编号)具有形成的至少一个二硫键的结构同工型的群体。
4.权利要求1至3中任一项所述的方法，其中与所述多特异性抗原结合分子接触的所述还原剂的pH为约3至约10，优选pH6-8。
5.权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述还原剂选自由TCEP、2-MEA、DTT、半胱氨酸、GSH和Na2SO3组成的组，优选TCEP。
6.权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，还原剂的浓度为约0.01mM至约100mM。
7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述多特异性抗原结合分子的浓度为约0.1mg/ml至约50mg/ml，优选约10mg/ml。
8.权利要求1至7中任一项所述的方法，进一步包括促进半胱氨酸二硫键再氧化的步骤，优选通过除去还原剂，优选通过透析或缓冲液交换。
9.权利要求1至8中任一项的方法，其中第一抗原结合部分和第二抗原结合部分中的每一个能够结合CD3和CD137，但不同时结合CD3和CD137两者。
10.权利要求9的方法，其中，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a17)中的任一项：
(a1)SEQ ID NO:17的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:31的重链CDR 2、SEQ ID NO:45的重链CDR 3、SEQ ID NO:64的轻链CDR 1、SEQ ID NO:69的轻链CDR 2和SEQ ID NO:74的轻链CDR 3；
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(a8)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ ID NO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ ID NO:76的轻链CDR 3；
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(a10)SEQ ID NO:25的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:39的重链CDR 2、SEQ IDNO:53的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ ID NO:76的轻链CDR 3；
(a11)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQ IDNO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ ID NO:76的轻链CDR 3；
(a12)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQ IDNO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
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(a14)SEQ ID NO:28的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:42的重链CDR 2、SEQ IDNO:56的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；
(a15)SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR 2、SEQ IDNO:84的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ ID NO:75的轻链CDR 3；
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
11.权利要求10的方法，其中，所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自包含抗体可变区，所述抗体可变区包含以下(a1)至(a17)中的任一项：
(a1)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区；
(a2)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a3)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a4)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区；
(a5)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a6)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a7)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a8)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a9)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a10)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a11)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；
(a12)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a13)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；
(a14)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；和
(a15)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。
(a16)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变区的相同表位结合的抗体可变区；和
(a17)与选自(a1)至(a15)中任一项的抗体可变片段的结合竞争的抗体可变片段。
12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述第三抗原结合部分能够结合DLL3，优选人DLL3。
13.权利要求12的方法，其中，能够结合DLL3的第三抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含SEQ ID NO:233的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:234的重链CDR 2、SEQ ID NO:235的重链CDR 3、SEQ ID NO:237的轻链CDR 1、SEQ ID NO:238的轻链CDR 2和SEQ ID NO：239的轻链CDR 3。
14.权利要求13的方法，其中能够结合DLL3的第三抗原结合部分包含抗体可变区，所述抗体可变区包含:包含SEQ ID NO:232的氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID NO：236的氨基酸序列的轻链可变区。
15.权利要求1至14中任一项的方法，其中所述多特异性抗原结合分子进一步包含Fc结构域。
16.根据权利要求1至15中任一项的方法制备的多特异性抗原结合分子的制剂，所述制剂具有在CH1区(根据EU编号的位置191)具有至少一个二硫键的所述多特异性抗原结合分子的同质群体。
17.根据权利要求1至15中任一项的方法制备的多特异性抗原结合分子的制剂，所述制剂具有至少80％、90％，优选至少95％摩尔比的所述多特异性抗原结合分子，所述多特异性抗原结合分子在CH1区(根据EU编号的位置191)具有至少一个二硫键。
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