CN115300449B - 榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，包括：提供温郁金的根茎，经浸泡、蒸馏后获得榄香烯提取物；在乙醇溶剂中加入榄香烯提取物，采用吸附柱色谱分离法进行提纯，吸附剂选用活性炭，洗脱剂选用乙醇，收集榄香烯洗脱液；对榄香烯洗脱液进行减压蒸发，对蒸发后获得的物质进行萃取，获得榄香烯；提供碘放射颗粒，所述碘放射颗粒具有钛合金壳体，对钛合金壳体的表面进行打磨、清洗和抛光处理；以及利用阳极氧化法在钛合金壳体的表面制备纳米管阵列，并在纳米管阵列中装载榄香烯。本发明在应用中能抑制肿瘤耐药株的活性，加强放射粒子植入术在肿瘤遏制方面的效果。

Description

榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用
技术领域
本发明涉及用于治疗恶性肿瘤的生物技术药物领域，同时也是一种抗耐药菌药物，属于化学药品与原料药制造领域，具体地，本发明涉及一种榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用。
背景技术
榄香烯，拉丁名为ELENMNUM，英文名为Elemene，化学名为1-甲基-1-乙烯基-2，4-二异丙基环己烷，分子式为C15H24，化学结构式为：
Figure BDA0003496735640000011
榄香烯是我国首先从姜科植物温莪术的根茎中提取到的，广泛存在于多种中药中，如人参、白术、丁香、丝穗金粟兰、多穗金粟兰、没药和防风等。榄香烯有许多异构体，主要有α-榄香烯、β-榄香烯、γ-榄香烯、δ-榄香烯、姜黄烯和丁香烯等。其中，β-榄香烯、γ-榄香烯和δ-榄香烯的含量之和占85％以上，故统称为榄香烯。
现有技术中，榄香烯是具有抗癌活性的天然抗癌药物，与传统抗癌药物相比，具有抗癌谱广、毒副作用小、疗效确切等优点。榄香烯在抑制肿瘤耐药性方面的研究也有一定的进展，但是榄香烯在抗肿瘤领域的应用还停留在口服液体制剂上。
在肿瘤的治疗上，发展出一种放射粒子植入治疗方法，这种方法将碘放射粒子通过穿刺针植入患者肿瘤中，使粒子有效辐射直径覆盖肿瘤直径，植入的碘放射粒子不间断发出射线对病灶进行辐射，低剂量的持续性辐照能够杀死肿瘤细胞、同时抑制其生长，是一种有效的肿瘤放疗治疗手段。对放射粒子植入术的应用和研究还在发展之中。
发明内容
本发明的目的在于至少部分地克服现有技术的缺陷，提供一种榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用。
本发明的目的还在于提供一种榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，加强放射粒子植入术在肿瘤遏制方面的效果。
本发明的目的还在于提供一种榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，抑制肿瘤耐药株的活性。
本发明的目的还在于提供一种榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，减少肿瘤术后的炎性发作。
为达到上述目的或目的之一，本发明的技术解决方案如下：
一种榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，所述应用包括：
制备榄香烯；以及
将制备的榄香烯用于肿瘤治疗术所使用的器械和材料的准备中。
根据本发明的一个优选实施例，所述应用包括如下步骤：
提供温郁金的根茎，经浸泡、蒸馏后获得榄香烯提取物；
在乙醇溶剂中加入榄香烯提取物，采用吸附柱色谱分离法进行提纯，吸附剂选用活性炭，洗脱剂选用乙醇，收集榄香烯洗脱液；
对榄香烯洗脱液进行减压蒸发，对蒸发后获得的物质进行萃取，获得榄香烯；
提供碘放射颗粒，所述碘放射颗粒具有钛合金壳体，对钛合金壳体的表面进行打磨、清洗和抛光处理；以及
利用阳极氧化法在钛合金壳体的表面制备纳米管阵列，并在纳米管阵列中装载榄香烯。
根据本发明的一个优选实施例，所述利用阳极氧化法在钛合金壳体的表面制备纳米管阵列，并在纳米管阵列中装载榄香烯的步骤包括：
制备去离子水的质量浓度为15％并且NH4F的质量浓度为1％的乙二醇溶液；
在上述乙二醇溶液中，采用钛合金壳体作为阳极，采用铂作为阴极，进行阳极氧化反应，以程序升压控制氧化进行，得到具有TiO2纳米管阵列的钛合金壳体；
用去离子水清洗钛合金壳体表面，并真空干燥钛合金壳体；
在真空条件下，向真空腔室内通入氩气对TiO2纳米管阵列进行清洗；
将制得的榄香烯溶解在乙醇中，并将具有TiO2纳米管阵列的钛合金壳体放置在榄香烯乙醇溶液中，使得钛合金壳体表面的纳米管内装载榄香烯。
根据本发明的一个优选实施例，升压程序被控制为：先以1V/分的速度升压至15V，稳定氧化1小时，然后提高升压速度，以4V/分钟的升压速度升压至31V，稳定氧化2小时。
根据本发明的一个优选实施例，在向钛合金壳体表面的纳米管内装载榄香烯之前，在榄香烯乙醇溶液中添加头孢菌素类抗生素和多肽类抗生素的混合药剂。
根据本发明的一个优选实施例，在向钛合金壳体表面的纳米管内装载榄香烯之后，所述应用还包括：
提供聚己内酯的三氯甲烷有机溶液，将头孢菌素类抗生素和多肽类抗生素的混合药剂与聚己内酯按照1:15-20的比例加入到所述有机溶液中，再在该有机溶液中加入疏水性聚合物，混合搅拌均匀，得到混合溶液；
将上述混合溶液以喷涂方式涂覆到钛合金壳体表面上，然后真空干燥、灭菌处理。
根据本发明的一个优选实施例，所述控释制剂用于抑制肺腺癌耐药株的耐药性。
根据本发明的一个优选实施例，所述肺腺癌耐药株为SPC-A-1/顺铂细胞。
根据本发明的一个优选实施例，涂覆到钛合金壳体表面上的涂层的厚度为10-100微米。
根据本发明的一个优选实施例，所述疏水性聚合物为生物可降解高分子材料，选自聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物或二者的混合物。
设计人发现，榄香烯能够抑制肿瘤耐药性，以肺腺癌为基础开展的研究表明，榄香烯能够显著提高SPC-A-1/顺铂细胞中Beclin-1的表达并增强顺铂对该细胞的杀伤作用，同时发现榄香烯显著促进SPC-A-1/顺铂细胞的自噬水平并增加顺铂诱导的细胞死亡。Beclin-1过表达与榄香烯均能促进SPC-A-1/顺铂对顺铂的敏感性，而干扰Beclin-1的表达后，榄香烯的诱导作用被拮抗。可见，榄香烯可以通过诱导Becline-1的表达抑制SPC-A-1/顺铂细胞的耐药性。榄香烯促进肺腺癌细胞耐药株SPC-A-1/顺铂对顺铂的药物敏感性，这种作用与Beclin-1诱导的细胞自噬有关。因此榄香烯可以用于制备抑制肺腺癌耐药株的药剂，开辟了榄香烯新的用途。
基于榄香烯在抑制肿瘤耐药性方面的作用，本发明提出了将其用于肿瘤治疗术所使用的器械和材料中，尤其是，在采用放射粒子植入治疗方法时，对碘放射颗粒进行处理，获得缓控释放药剂的碘放射颗粒，采用榄香烯制备这样的药剂，能够抑制肿瘤耐药株的活性，能够加强放射粒子植入术在肿瘤遏制方面的效果。
进一步地，在钛合金壳体表面的纳米管内引入头孢菌素类抗生素和多肽类抗生素的混合药剂，或者在钛合金壳体表面涂覆缓释的抗生素薄膜，使得经穿刺针引入碘放射颗粒过程中对身体损失引发的炎性反应得到预防和抑制。
附图说明
图1为根据本发明的实施例的榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用的步骤流程图；
图2示出了不同浓度榄香烯作用下两种细胞自噬率
Figure BDA0003496735640000041
图3示出了不同浓度DDP作用下4组细胞活性变化
Figure BDA0003496735640000042
图4示出了组细胞中自噬相关蛋白表达量的变化
Figure BDA0003496735640000043
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
首先，对榄香烯在抑制肿瘤耐药性方面的作用进行介绍。本发明基于人肺腺癌细胞株SPC-A-1和顺铂耐药株SPC-A-1/DDP开展榄香烯的相关研究。将人肺腺癌细胞株SPC-A-1和顺铂耐药株SPC-A-1/DDP细胞株分别培养于RPMI 1640培养基，添加10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100mg/L链霉素，置于含37℃、5％CO2的细胞培养箱中。SPC-A-1/DDP细胞用2μg/ml DDP处理3d后更换为正常培养基，然后进行后续实验。
利用Oligo 6.0软件设计引物，聚合酶链反应(PCR)扩增Beclin-1完整编码(CDS)区全长，产物纯化、双酶切后连接于pcDNA3.1载体上，重组质粒经双酶切和测序鉴定，鉴定正确的质粒命名为pcDNA-Beclin-1，pcDNA3.1空载为对照。利用脂质体3000转染试剂将1μg/ml pcDNA-Beclin-1、50nmol/L Beclin-1siRNAagainstBeclin-1以及等量对照转染于SPC-A-1/DDP细胞中，转染24h后细胞用于后续处理或检测。
细胞接种于96孔板中，接种密度为每孔1×104个细胞，培养过夜，生长状况良好的细胞添加不同浓度的DDP或榄香烯，孵育24h后，细胞置于暗处添加10μl CCK-8培养3h，运用多功能酶标仪于450nm处检测吸光度值，并计算半数抑制浓度(IC50)。
实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Beclin-1的表达：Trizol法提取细胞总RNA，运用反转录试剂盒进行反转录反应。运用Real-time PCR试剂盒进行反应。Western blot检测蛋白表达：收集细胞，加入RIPA裂解液，提取总蛋白质，应用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。每孔50μg蛋白样品上样行12％十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，120V电泳2.5h，湿转法转移于聚偏氟乙烯(PVDF)膜上。5％脱脂奶粉溶液封闭的PVDF膜分别孵育以下一抗：LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1、VPS34、p-VPS34、ATG-14L、p150和GAPDH，4℃孵育过夜。随后，PVDF膜与山羊抗兔IgG(1∶1000，Abcam公司)室温孵育2h。增强型化学发光试剂(ECL)蛋白检测试剂盒中的A、B液等量混匀后，孵育PVDF膜，凝胶成像系统下曝光，然后用系统自带的Image J软件进行定量。
细胞自噬检测：细胞自噬检测方法为GFP标记的LC3转染法。细胞接种于96孔板中，利用脂质体3000转染GFP-LC3质粒，24h后运用相差显微镜检测细胞中的GFP表达，并计算LC3阳性细胞百分比。
实验结果
SPC-A-1/DDP细胞对DDP的耐药性：
以不同浓度DDP分别处理SPC-A-1和SPC-A-1/DDP细胞，24h检测细胞活力，DDP以剂量依赖的方式抑制SPC-A-1和SPC-A-1/DDP细胞的活力，如表1所示。DDP对SPC-A-1的IC50值为9μg/ml，显著低于其对SPC-A-1/DDP细胞的IC50值(55μg/ml)。
表1不同浓度DDP作用下两组细胞活性变性
Figure BDA0003496735640000051
DDP浓度 SPC-A-1 SPC-A-1/DDP P值
20μg/ml 42.00±0.35 67.00±0.40 0.000
40μg/ml 42.00±0.34 58.00±0.38 0.000
60μg/ml 32.00±0.32 48.00±0.35 0.002
注：DDP顺铂。
10μg/ml榄香烯处理SPC-A-1/DDP细胞时可显著提高其对DDP的敏感性：分别以空白对照组和10μg/ml的榄香烯处理SPC-A-1和SPC-A-1/DDP细胞，再加入不同浓度DDP并检测IC50，IC50值从55μg/ml降至15μg/ml，如表2所示。
表2榄香烯及不同浓度DDP作用下SPC-A-1/DDP细胞活性变化
Figure BDA0003496735640000061
Figure BDA0003496735640000062
Figure BDA0003496735640000063
注：DDP：顺铂。
不同浓度榄香烯对两种细胞多药耐药相关蛋白-1(MRP-1)和P-糖蛋白(P-gp)表达水平的影响：
分别以5μg/ml和10μg/ml浓度的榄香烯及空白对照组处理SPC-A-1和SPC-A-1/DDP细胞。MRP-1和P-gp的表达水平显著受到抑制，如表3所示，空白组SPC-A-1/DDP细胞中MRP-1和P-gp的表达水平显著高于SPC-A-1细胞。
表3不同浓度榄香烯作用下两组细胞多重耐药蛋白表达量
Figure BDA0003496735640000064
Figure BDA0003496735640000065
Figure BDA0003496735640000071
注：P-gp：P-糖蛋白；DDP：顺铂；MRP-1：多药耐药相关蛋白-1。
榄香烯促进SPC-A-1/DDP细胞的自噬：
分别以0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml浓度的榄香烯处理SPC-A-1和SPC-A-1/DDP细胞，可见自噬细胞的比例显著增加(图2)。
榄香烯通过诱导Beclin-1的表达抑制SPC-A-1/DDP对DDP的耐药性：
对SPC-A-1/DDP细胞分别施加10μg/ml榄香烯、Beclin-1过表达或Beclin-1干扰处理，可见榄香烯处理与Beclin-1过表达效果类似，如图3所示，均可促进SPC-A-1/DDP对DDP的敏感性，而阻断Beclin-1的表达可拮抗榄香烯的致敏作用。同时，榄香烯处理与Beclin-1过表达均可抑制MRP-1和P-gp的表达，如图4所示，且阻断Beclin-1的表达可拮抗榄香烯对MRP-1和P-gp的抑制作用。
设计人发现，榄香烯能够抑制肿瘤耐药性，以肺腺癌为基础开展的研究表明，榄香烯能够显著提高SPC-A-1/顺铂细胞中Beclin-1的表达并增强顺铂对该细胞的杀伤作用，同时发现榄香烯显著促进SPC-A-1/顺铂细胞的自噬水平并增加顺铂诱导的细胞死亡。Beclin-1过表达与榄香烯均能促进SPC-A-1/顺铂对顺铂的敏感性，而干扰Beclin-1的表达后，榄香烯的诱导作用被拮抗。可见，榄香烯可以通过诱导Becline-1的表达抑制SPC-A-1/顺铂细胞的耐药性。榄香烯促进肺腺癌细胞耐药株SPC-A-1/顺铂对顺铂的药物敏感性，这种作用与Beclin-1诱导的细胞自噬有关。因此榄香烯可以用于制备抑制肺腺癌耐药株的药剂，开辟了榄香烯新的用途。
基于此，设计人将榄香烯应用于放射粒子植入治疗，具体地，在放射粒子植入治疗中，对所使用的器械和材料进行榄香烯处理。在放射粒子植入治疗中，碘放射颗粒是手术的核心，基于本发明的发明构思，将榄香烯以控释制剂的形式附着于碘放射颗粒上。
下面介绍本发明的榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用的实施例。
实施例
首先，制备榄香烯提取物：提供温郁金的根茎，将温郁金的根茎浸泡在纯净水中，保持24小时，水温保持在高于40摄氏度更好，然后取根茎和浸泡溶液，放入蒸馏塔中进行蒸馏，蒸馏后获得莪术挥发油混合物；而后对莪术挥发油混合物进行精馏处理，将莪术挥发油混合物放入精馏装置中，真空度控制在2-3mmHg,收集柱温100-110℃的馏份，得到榄香烯提取物。
对制备的榄香烯提取物进行分离提纯处理，提纯采用吸附柱色谱分离法，利用液相洗脱榄香烯提取物中的有效成分，利用固相吸附榄香烯提取物中的其它成分，吸附剂选用吸附能力较强的活性炭，洗脱剂选用乙醇，乙醇质量百分比为75的乙醇溶液，洗脱剂流速可以控制在10ml/min，持续10-20分钟，含有榄香烯提取物的乙醇溶剂在吸附柱中的供给量控制在8-12ml。洗脱完毕后，收集榄香烯洗脱液，密闭条件下静置1-2小时。
取榄香烯洗脱液在蒸发器中进行减压蒸发，温度控制在摄氏零度以下，蒸发直至液滴质量的增加速度小于1g/min。
萃取：将蒸发后获得的物质放入间歇萃取机中，采用间歇萃取法对榄香烯进行萃取，萃取剂采用烷烃类有机物，优先选用石油醚，收集萃取柱中的油相，获得榄香烯。
提供碘放射颗粒，所述碘放射颗粒具有钛合金壳体，对碘放射颗粒进行预处理。
碘放射性颗粒(125I颗粒)是一种微型密封放射源，它在结构上由吸附同位素125I的银棒和外层的钛合金组成，颗粒在肿瘤内持续发射放射线辐射肿瘤，以杀死肿瘤细胞并抑制肿瘤细胞生长。碘放射性颗粒的半衰期为60.2天，植入体内后其起效时间能持续1年以上。其辐照半径可控制在很小的范围内，通常只有几毫米至十几毫米，对正常人体组织的影响微乎其微，因此不会对身体造成伤害。在植入过程中，需要在成像辅助设备的监视和引导下，利用穿刺针将碘放射性颗粒植入肿瘤内部，对一些特定类型的肿瘤的控制率非常高，例如具有实体肿瘤的肝癌、肺癌、胆管癌、胰腺癌等等。
对钛合金壳体的表面进行打磨处理和抛光处理，其目的是使钛合金壳体的表面足够光洁，打磨在打磨机中进行，打磨后在乙醇溶液中超声清洗一段时间，取出后待其干燥后，进行砂纸抛光，表面粗糙度控制在0.15-0.25之间。抛光后利用去离子水进行清洗，晾干被用。
利用阳极氧化法在钛合金壳体的表面制备纳米管阵列：首先准备电解液，在乙二醇中加入NH4F和去离子水得到乙二醇溶液，去离子水的质量浓度为15％，NH4F的质量浓度为1％左右，获得电解液；在上述电解液中，采用钛合金壳体作为阳极，阴极采用铂，进行阳极氧化，程序升压控制氧化电压，得到具有TiO2纳米管阵列的钛合金壳体。
升压程序优选地先以1V/分的速度升压至15V，稳定氧化1小时，然后在提高升压速度，以4V/分钟的升压速度升压至31V，稳定氧化2小时。
在氧化后用去离子水清洗钛合金壳体表面，并真空干燥钛合金壳体。
在真空条件下，向真空腔室内通入氩气对TiO2纳米管阵列进行清洗。
将前述制得的榄香烯溶解在乙醇中，将具有TiO2纳米管阵列的钛合金壳体放置在榄香烯乙醇溶液中，保持24小时，使得钛合金壳体表面的纳米管内装载榄香烯。
对比数据1：
取2019年4月-2020年10月，郑州大学第一附属医院肺腺癌患者26例，分为对照组和测试组，对照组14例，测试组12例，对比两组治疗效果，结果测试组短期缓解率和无进展率优于对照组。
对比方法概述：实验患者来自上述时间段郑州大学第一附属医院肺腺癌患者，共26例，患者临床分期均为中晚期，其中，III期患者18例，IV患者6例，同比例分配于对照组和测试组中，临床采用放射粒子植入法进行放疗，以延长患者生存期。
两组病例均采用放射粒子植入法进行治疗，测试组的碘放射颗粒经榄香烯控释处理，处理流程同实施例1。
观察短期治疗效果，随访12个月，统计患者的短期缓解率和无进展率。
表4两组短期疗效对比[N(％)]
N 稳定 进展 部分缓解 完全缓解 总缓解率
对照组 14 2(14) 7(50) 5(36) 0(0) 5(36)
测试组 12 3(25) 3(25) 6(50) 0(0) 6(50)
其中，稳定：病灶尺寸有一定缩小，但未达到部分缓解，或有增加但未达到进展；进展：出现新病灶或病灶尺寸增加程度达到20％以上；部分缓解：病灶尺寸减小达到20％以上；完全缓解：病灶完全消失；总缓解率＝部分缓解率+完全缓解率。
统计结果显示，采用榄香烯控释处理的碘放射颗粒具有明显优的短期缓解率和和无进展率。
对比数据2：
取2019年4月-2020年10月，郑州大学第一附属医院肺腺癌患者12例，采用放射粒子植入法进行治疗，其中碘放射颗粒经榄香烯控释处理，作为对照组；取2019年8月-2020年10月，郑州大学第一附属医院肺腺癌患者12例，采用放射粒子植入法+口服榄香烯口服液进行治疗，其中碘放射颗粒经榄香烯控释处理，作为测试组，观察短期治疗效果，随访12个月，统计患者的短期缓解率和无进展率，对比两组治疗效果。
表5两组短期疗效对比[N(％)]
N 稳定 进展 部分缓解 完全缓解 总缓解率
对照组 12 3(25) 3(25) 6(50) 0(0) 6(50)
测试组 12 2(16.5) 2(16.5) 8(67) 0(0) 8(67)
统计结果显示，采用放射粒子植入法+口服榄香烯口服液的治疗方案在短期缓解率和和无进展率方面由于对照组。
在碘放射颗粒的植入过程中，控制细菌感染也是需要考虑的，口服抗生素或给予局部药物治疗是常规的措施，口服抗生素对全身带来的副作用很大，特别是对于癌症治疗过程中的患者，身体虚弱，为此，在向钛合金壳体表面的纳米管内装载榄香烯之前，在榄香烯乙醇溶液中添加头孢菌素类抗生素和多肽类抗生素的混合药剂。这是因为，在进行放射颗粒的植入时，穿刺针的刺入植入部位的损伤引起炎性反应，在控制制剂中增加抗生素药剂，可对肿瘤部位的发炎进行预防。
替代地，考虑到，头孢菌素类抗生素和多肽类抗生素的混合药剂也可以非长效控释方式发生作用，因为穿刺针对植入部位的损伤往往在植入术发生后的短暂时间内，因此，一种可选的实施方式是，在钛合金壳体表面的纳米管内装载榄香烯完成之后，制备短效控释涂层，具体地：
提供聚己内酯(PCL)配制成质量百分比浓度为10％的三氯甲烷有机溶液，将头孢菌素类抗生素和多肽类抗生素的混合药剂与聚己内酯按照1:15-20的比例加入上述有机溶液中，再在该有机溶液中加入疏水性聚合物，疏水性聚合物可降解，这种可降解疏水性聚合物在控释药剂中的使用时常见的，混合搅拌均匀；所述疏水性聚合物为生物可降解高分子材料，选自聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物或二者的混合物。
将上述控释作用溶液以喷涂方式涂敷到钛合金壳体表面上，然后真空干燥、灭菌处理。涂覆到钛合金壳体表面上的涂层的厚度为10-100微米。
作为本发明的进一步的技术方案，在得到上述混合溶液后，还包括附加的步骤，采用联合水凝胶、化学渗透增强剂对钛合金壳体表面进行涂覆，然后再将上述控释作用溶液以喷涂方式涂敷到钛合金壳体表面上，两次涂覆可以交替进行多次。化学渗透增强剂能够提高药物渗透性，与未施加联合水凝胶和化学渗透增强剂膜层的碘放射颗粒相比，采用联合水凝胶和化学渗透增强剂处理的放射颗粒，感染控制更有效。
优选地，所述控释制剂用于抑制肺腺癌耐药株的耐药性，所述肺腺癌耐药株为SPC-A-1/顺铂细胞。榄香烯对SPC-A-1/顺铂细胞具有较好的抑制效果。
设计人发现，榄香烯能够抑制肿瘤耐药性，以肺腺癌为基础开展的研究表明，榄香烯能够显著提高SPC-A-1/顺铂细胞中Beclin-1的表达并增强顺铂对该细胞的杀伤作用，同时发现榄香烯显著促进SPC-A-1/顺铂细胞的自噬水平并增加顺铂诱导的细胞死亡。Beclin-1过表达与榄香烯均能促进SPC-A-1/顺铂对顺铂的敏感性，而干扰Beclin-1的表达后，榄香烯的诱导作用被拮抗。可见，榄香烯可以通过诱导Becline-1的表达抑制SPC-A-1/顺铂细胞的耐药性。榄香烯促进肺腺癌细胞耐药株SPC-A-1/顺铂对顺铂的药物敏感性，这种作用与Beclin-1诱导的细胞自噬有关。因此榄香烯可以用于制备抑制肺腺癌耐药株的药剂，开辟了榄香烯新的用途。
基于榄香烯在抑制肿瘤耐药性方面的作用，本发明提出了将其用于肿瘤治疗术所使用的器械和材料中，尤其是，在采用放射粒子植入治疗方法时，对碘放射颗粒进行处理，获得缓控释放药剂的碘放射颗粒，采用榄香烯制备这样的药剂，能够抑制肿瘤耐药株的活性，能够加强放射粒子植入术在肿瘤遏制方面的效果。
进一步地，在钛合金壳体表面的纳米管内引入头孢菌素类抗生素和多肽类抗生素的混合药剂，或者在钛合金壳体表面涂覆缓释的抗生素薄膜，使得经穿刺针引入碘放射颗粒过程中对身体损失引发的炎性反应得到预防和抑制。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，其特征在于，所述应用包括：
制备榄香烯；以及
将制备的榄香烯用于肿瘤治疗术所使用的器械和材料的准备中，
其中，所述将制备的榄香烯用于肿瘤治疗术所使用的器械和材料的准备中包括如下步骤：
提供碘放射颗粒，所述碘放射颗粒具有钛合金壳体，对钛合金壳体的表面进行打磨、清洗和抛光处理；以及
利用阳极氧化法在钛合金壳体的表面制备纳米管阵列，并在纳米管阵列中装载榄香烯，
其中，所述利用阳极氧化法在钛合金壳体的表面制备纳米管阵列，并在纳米管阵列中装载榄香烯的步骤包括：
制备去离子水的质量浓度为15％并且NH4F的质量浓度为1％的乙二醇溶液；
在上述乙二醇溶液中，采用钛合金壳体作为阳极，采用铂作为阴极，进行阳极氧化反应，以程序升压控制氧化进行，得到具有TiO2纳米管阵列的钛合金壳体；
用去离子水清洗钛合金壳体表面，并真空干燥钛合金壳体；
在真空条件下，向真空腔室内通入氩气对TiO2纳米管阵列进行清洗；
将制得的榄香烯溶解在乙醇中，并将具有TiO2纳米管阵列的钛合金壳体放置在榄香烯乙醇溶液中，使得钛合金壳体表面的纳米管内装载榄香烯。
2.根据权利要求1所述的榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，其特征在于，所述应用包括如下步骤：
提供温郁金的根茎，经浸泡、蒸馏后获得榄香烯提取物；
在乙醇溶剂中加入榄香烯提取物，采用吸附柱色谱分离法进行提纯，吸附剂选用活性炭，洗脱剂选用乙醇，收集榄香烯洗脱液；
对榄香烯洗脱液进行减压蒸发，对蒸发后获得的物质进行萃取，获得榄香烯。
3.根据权利要求2所述的榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，其特征在于：
升压程序被控制为：先以1V/分的速度升压至15V，稳定氧化1小时，然后提高升压速度，以4V/分钟的升压速度升压至31V，稳定氧化2小时。
4.根据权利要求2所述的榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，其特征在于：
在向钛合金壳体表面的纳米管内装载榄香烯之前，在榄香烯乙醇溶液中添加头孢菌素类抗生素和多肽类抗生素的混合药剂。
5.根据权利要求2所述的榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，其特征在于：在向钛合金壳体表面的纳米管内装载榄香烯之后，所述应用还包括：
提供聚己内酯的三氯甲烷有机溶液，将头孢菌素类抗生素和多肽类抗生素的混合药剂与聚己内酯按照1:15-20的比例加入到所述有机溶液中，再在该有机溶液中加入疏水性聚合物，混合搅拌均匀，得到混合溶液；
将上述混合溶液以喷涂方式涂覆到钛合金壳体表面上，然后真空干燥、灭菌处理。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，其特征在于：
所述控释制剂用于抑制肺腺癌耐药株的耐药性。
7.根据权利要求6所述的榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，其特征在于：
所述肺腺癌耐药株为SPC-A-1/顺铂细胞。
8.根据权利要求5所述的榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，其特征在于：
涂覆到钛合金壳体表面上的涂层的厚度为10-100微米。
9.根据权利要求5所述的榄香烯在制备抑制肿瘤耐药性的控释制剂中的应用，其特征在于：
所述疏水性聚合物为生物可降解高分子材料，选自聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物或二者的混合物。
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