CN115287779A - 一种甲基丙烯酰化明胶同轴微丝及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种甲基丙烯酰化明胶同轴微丝及其制备方法。甲基丙烯酰化明胶同轴微丝包括：内芯，内芯包含至少一个具有生物学特性的细胞悬液；纤维外层，纤维外层包覆内芯，纤维外层与内芯同轴设置，纤维外层为甲基丙烯酰化明胶层。本发明提供了一种成型性好，生物亲和性高，细胞容易附着和迁移的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝，以及该甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法。
Description
技术领域
本发明涉及医用材料领域，特别是涉及一种甲基丙烯酰化明胶同轴微丝及其制备方法。
背景技术
同轴细胞微丝目前广泛用于生物医学工程领域，实现细胞培养，工程化组织构建等。同轴细胞微丝包含内芯和包裹内芯的纤维外层。目前同轴细胞微丝多采用海藻酸钠等非细胞黏附材料来进行制造，而自然衍生的材料，生物亲和性好但难于成型，尤其用于同轴微丝的外壳制造。同时现有同轴微丝不能有效促进细胞黏附，不利于细胞迁移，细胞不能高效扩增，使其在许多应用领域受到限制。
发明内容
基于此，有必要针对上述问题，提供一种成型性好，生物亲和性高，细胞容易附着和迁移的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝，以及该甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法。
本发明一个方面提供了一种甲基丙烯酰化明胶同轴微丝，所述的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝包括：内芯，所述内芯包含至少一个具有生物学特性的细胞悬液；纤维外层，所述纤维外层包覆所述内芯，所述纤维外层与所述内芯同轴设置，所述纤维外层为甲基丙烯酰化明胶层。
上述甲基丙烯酰化明胶同轴微丝，纤维外层为甲基丙烯酰化明胶，甲基丙烯酰化明胶具有和明胶类似的生物相容性，且可由紫外光或可见光激发固化反应，形成适于细胞生长与分化且具有一定强度的三维结构。因此，本申请提供的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝利用外层甲基丙烯酰化明胶网络，有利于细胞的三维展开黏附，能够促进内芯中具有生物学特性的细胞快速黏附和增值。此外，上述的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝提供了类似体内的三维细胞外基质环境，有利于细胞功能的表达和还原体内特性。
可选地，甲基丙烯酰化明胶同轴微丝外层包覆材料也可以替换成其他可供细胞黏附生长的材料，如水凝胶、胶原、透明质酸、纤维蛋白、壳聚糖、聚乳酸、聚己酸内酯、聚乳酸-羟基乙酸、聚乙烯对苯二甲酸酯等，以及上述物质的组合。
可选地，具有生物学特性的细胞可以加载在内芯也可以加载在同轴微丝的外层，也可以同时加载多种生物学特性不一样的细胞。
在其中一个实施例中，所述内芯包含所述具有生物学特性的细胞以及明胶。
本发明另外一个方面提供了一种甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法，包括以下步骤：
S1、将甲基丙烯酰化明胶与光引发剂溶解在溶剂中，制备A溶液；
S2、将细胞悬液与明胶溶液混合，获得B溶液；
S3、将A溶液加载于同轴微丝装置与外针头相连的注射器中，将B溶液置于同轴微丝装置与内针头相连的注射器中；
S4、将同轴微丝装置置于加热装置下，辐照加热；
S5、推动外针头注射器内的A溶液移动，推动内针头注射器内的B溶液移动；
S6、将外针头出口处的A溶液以及内针头出口处的B溶液通过蓝光或紫外光进行交联，获得甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
在其中一个实施例中，内针头的孔径为14G～32G。
在其中一个实施例中，外针头的孔径为15G～34G。
在其中一个实施例中，在所述内针头出口处和所述外针头出口处设置一段透明管，将所述透明管置于蓝光或紫外光照射范围内。可选地，透明管的长度为0.5cm～10cm。可选地，透明管与蓝光或紫外光灯光的距离值为0.1cm～10cm。可选地，紫外光的波长为10nm～400nm，或蓝光的波长为470nm～475nm。
在其中一个实施例中，还包括将所述内针头的出口和所述外针头的出口没入冰水中，冰浴交联，获得所述甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。在光固化交联的基础上再增加冰浴交联的步骤，有利于提高甲基丙烯酰化明胶同轴微丝固化效果的稳定性。
可选地，在所述内针头和外针头形成同轴针头，在同轴针头的出口处设置一段透明管，透明管置于蓝光或紫外灯光照射的范围内。透明管出口处没入冰水浴中，没入长度范围值为0.5cm～10cm，最终形成所述甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
在其中一个实施例中，所述外针头注射器中A溶液的流速为5mL/h～100mL/h。优选地，流速为30mL/h～50mL/h。
在其中一个实施例中，所述内针头注射器中B溶液的流速为1mL/h～30mL/h。优选地，流速为3mL/h～10mL/h。
在其中一个实施例中，所述A溶液中所述光引发剂的质量浓度为0.1%～3.0%。优选地，光引发剂的质量浓度为0.2%～1.0%。更优选地，光引发剂的质量浓度为0.3%。
在其中一个实施例中，所述A溶液中甲基丙烯酰化明胶的质量浓度为3.0%～10.0%。优选地，甲基丙烯酰化明胶的质量浓度为5.0%～8.0%。更优选地，A溶液中甲基丙烯酰化明胶的质量浓度为7.5%。
在其中一个实施例中，所述A溶液中所述光引发剂为LAP。可选地在一些实施例中，A溶液中的所述光引发剂为Irgacure 2959。
在其中一个实施例中，步骤S1和步骤S2中的溶剂为PBS、水、氯化钠溶液、六氟异丙醇、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺的至少其中一种。
在其中一个实施例中，所述B溶液中所述细胞悬液的细胞浓度为1.0×102～1.0×109。优选地，B溶液中所述细胞悬液的细胞浓度为1.0×105～1.0×108。
在其中一个实施例中，所述B溶液中所述明胶溶液的质量浓度为5%～20%。优选地，B溶液中所述明胶溶液的质量浓度为8%～15%。更优选地，明胶溶液的质量浓度为12%。
在其中一个实施例中，所述B溶液中，所述细胞悬液与所述明胶溶液的体积比为5:1～1:5。优选地，所述细胞悬液与所述明胶溶液的体积比为2:1～1:2。更优选地，所述细胞悬液与所述明胶溶液的体积比为1:1。
在其中一个实施例中，所述辐照加热的温度为25℃～40℃。
在其中一个实施例中，所述外针头注射器包括外针头和第一注射器，所述内针头注射器包括内针头和第二注射器，所述在将A溶液加载于同轴微丝装置的外针头注射器中，将B溶液置于同轴微丝装置的内针头注射器中之前，还包括以下步骤：
将同轴针头固定在基座上；
将外针头通过管道连接到第一注射器上，将内针头通过管道连接到第二注射器上；
将第一注射器以及第二注射器分别连接到注射泵上，最终形成具有同轴针头的注射装置。
附图说明
图1为甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法示意图；
图2为甲基丙烯酰化明胶制备的工艺流程图；
图3为细胞在甲基丙烯酰化明胶同轴微丝中伸展状态图；
图4为细胞在海藻酸钠同轴微丝中的状态图。
其中，附图标记与部件名称之间的对应关系为：
101-内层通道；102-外层通道。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本发明的上述目的、特征和优点，下面结合附图和具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是，本发明还可以采用其他不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本发明的保护范围并不受下面公开的具体实施例的限制。
本发明第一方面公开了一种甲基丙烯酰化明胶同轴微丝，包括：内芯和纤维外层。内芯包含至少一个具有生物学特性的细胞悬液。纤维外层包覆内芯，纤维外层与内芯同轴设置，纤维外层为甲基丙烯酰化明胶层。可选地，具有生物特性的细胞为干细胞。
上述甲基丙烯酰化明胶同轴微丝，纤维外层为甲基丙烯酰化明胶，甲基丙烯酰化明胶具有和明胶类似的生物相容性，且可由紫外光或可见光激发固化反应，形成适于细胞生长与分化且具有一定强度的三维结构。因此，本发明提供的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝利用外层甲基丙烯酰化明胶网络，有利于细胞的三维展开黏附，能够促进内芯中具有生物学特性的细胞快速黏附和增值。此外，上述的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝提供了类似体内的三维细胞外基质环境，有利于细胞功能的表达和还原体内特性。
在本实施例中，甲基丙烯酰化明胶同轴微丝包括：内芯和纤维外层。内芯包含明胶以及至少一个具有生物学特性的细胞。纤维外层包覆内芯，纤维外层与内芯同轴设置，纤维外层包括甲基丙烯酰化明胶层和至少一个具有生物学特性的细胞。
在本实施例中，甲基丙烯酰化明胶同轴微丝包括：内芯和纤维外层。内芯包含至少一个具有生物学特性的细胞悬液，纤维外层包覆内芯，纤维外层与内芯同轴设置，纤维外层包括甲基丙烯酰化明胶层和至少一个具有生物学特性的细胞。
上述甲基丙烯酰化明胶同轴微丝外层包覆材料也可以包括或替换成其他可供细胞黏附生长的材料，如水凝胶、胶原、透明质酸、纤维蛋白、壳聚糖、聚乳酸、聚己酸内酯、聚乳酸-羟基乙酸、聚乙烯对苯二甲酸酯或者上述物质的组合。
本发明另外一个方面公开了一种甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法，包括以下步骤：
S1、将甲基丙烯酰化明胶与光引发剂溶解在溶剂中，制备A溶液；
S2、将细胞悬液与明胶溶液混合，获得B溶液；
S3、将A溶液加载于轴微丝装置与外针头相连的注射器中，将B溶液置于同轴微丝装置与内针头相连的注射器中；
S4、将同轴微丝装置置于加热装置下，辐照加热；
S5、推动外针头注射器内的A溶液移动，推动内针头注射器内的B溶液移动；
S6、将外针头出口处的A溶液以及内针头出口处的B溶液通过蓝光或紫外光进行交联，获得甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
以下为本发明的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝制备方法的一些具体实施例。
实施例1
按照图1和图2中的技术路线制备甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
将甲基丙烯酰化明胶溶液由同轴针头的外层通道102挤出，细胞悬液从内层通道101挤出，在出口处进行光固化交联，最终得到由外层甲基丙烯酰化明胶包覆内层细胞芯材的同轴微丝。
具体包括如下步骤：
（1）将同轴针头固定在基座上；
（2）将内外针头通过管道连接到两个注射器上，一个装入甲基丙烯酰化明胶溶液，一个装入细胞悬液；
（3）两个注射器分别连接到注射泵上；
（4）将上述针头和注射器置于加热装置的辐照下，保持温度在25℃～40℃之间；
（5）在同轴针头前端加装一段透明管，并置于蓝光照射范围内。
（6）两个注射泵开始挤出，外层通道102的甲基丙烯酰化明胶溶液流速为 5mL/h，内层通道101内细胞悬液速度为1mL/h。最终形成甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
实施例2
按照图1和图2中的技术路线制备甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
将甲基丙烯酰化明胶溶液由同轴针头的外层通道102挤出，细胞悬液从内层通道101挤出，在出口处进行光固化交联和冰浴交联，最终得到由外层甲基丙烯酰化明胶包覆内层细胞芯材的同轴微丝。
具体包括如下步骤：
（1）将同轴针头固定在基座上；
（2）将内外针头通过管道连接到两个注射器上，一个装入甲基丙烯酰化明胶溶液，一个装入细胞悬液；
（3）两个注射器分别连接到注射泵上；
（4）将上述针头和注射器置于加热装置的辐照下，保持温度在25℃～40℃之间；
（5）在同轴针头前端加装一段透明管，并置于蓝光或紫外照射范围内。
（6）将透明管稍许没入冰水中。
（7）两个注射泵开始挤出，外层甲基丙烯酰化明胶溶液流速为 5mL/h～100 mL/h,内层细胞悬液速度为1mL/h～30 mL/h。最终形成甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
实施例3
配置含0.3% LAP的7.5%甲基丙烯酰化明胶溶液，配置12%明胶溶液。准备1.5×107个/mL的细胞悬液。将上述细胞悬液与12%明胶按1：1混匀得到含细胞的6%明胶溶液。辐照加热条件为30℃～35℃。将含细胞的明胶溶液加载于内层流道，甲基丙烯酰化明胶溶液加载于外层流道。以外层流道流速30mL/h～50 mL/h，内层流道流速3mL/h～10mL/h进行推动，在出口处进行光固化交联和冰浴交联形成甲基丙烯酰化明胶同轴细胞微丝。
将所获甲基丙烯酰化明胶同轴细胞微丝置于37℃细胞培养箱中培养，培养过程中内芯融化，细胞开始黏附于甲基丙烯酰化明胶上，细胞粘附效果如图3所示。与图4为现有的海藻酸钠制备的同轴微丝，与图3中细胞的粘附效果相比，细胞在海藻酸钠同轴微丝中粘附性差，且容易聚集呈球形，不利于细胞的迁移和扩增。
实施例4
配制含2.5%LAP的5.0%的甲基丙烯酰化明胶溶液，配制10%的明胶溶液。准备1.5×106个/mL的细胞悬液。将上述细胞悬液与5%明胶按4:1混匀得到含细胞的5%明胶溶液。将同轴针头固定在基座上，同轴针头的内针头的孔径为30G，外针头的孔径为32G。将内外针头通过管道连接到两个注射器上，一个装入甲基丙烯酰化明胶溶液，一个装入细胞悬液。两个注射器分别连接到注射泵上。在同轴针头的出口处加装一段长度为10cm的透明管。将上述针头和注射器置于加热装置的辐照下，保持温度在25℃～27℃之间。将同轴针头前端的一段透明管置于蓝光照射范围，透明管与蓝光灯的距离为0.1cm，选择蓝光的波长为470nm。将透明管离出口处1cm没入冰水中。两个注射泵开始挤出，外层甲基丙烯酰化明胶溶液流速为5mL/h,内层细胞悬液速度为1mL/h。最终形成甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
实施例5
配制含0.3%LAP的7.5%的甲基丙烯酰化明胶溶液，配制12%的明胶溶液。准备1.5×107个/mL的细胞悬液。将上述细胞悬液与12%明胶按1:1混匀得到含细胞的6%明胶溶液。将同轴针头固定在基座上，同轴针头的内针头的孔径为20G，外针头的孔径为24G。将内外针头通过管道连接到两个注射器上，一个装入甲基丙烯酰化明胶溶液，一个装入细胞悬液。两个注射器分别连接到注射泵上。在同轴针头的出口处加装一段长度为1cm的透明管。将上述针头和注射器置于加热装置的辐照下，保持温度在35℃～37℃之间。将同轴针头前端的一段透明管置于紫外照射范围，透明管与紫外灯的距离为10cm，选择紫外灯的波长为265nm。将透明管离出口处5cm没入冰水中。两个注射泵开始挤出，外层甲基丙烯酰化明胶溶液流速为35mL/h,内层细胞悬液速度为10mL/h。最终形成甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
实施例6
配制含0.3%LAP的7.5%的甲基丙烯酰化明胶溶液，配制12%的明胶溶液。准备1.5×107个/mL的细胞悬液。将上述细胞悬液与12%明胶按1:1混匀得到含细胞的6%明胶溶液。将同轴针头固定在基座上，同轴针头的内针头的孔径为20G，外针头的孔径为24G。将内外针头通过管道连接到两个注射器上，一个装入甲基丙烯酰化明胶溶液，一个装入细胞悬液。两个注射器分别连接到注射泵上。在同轴针头的出口处加装一段长度为1cm的透明管。将上述针头和注射器置于加热装置的辐照下，保持温度在37℃～40℃之间。将同轴针头前端的一段透明管置于紫外照射范围，透明管与紫外灯的距离为10cm，选择紫外灯的波长为100nm。两个注射泵开始挤出，外层甲基丙烯酰化明胶溶液流速为 100mL/h,内层细胞悬液速度为30mL/h。最终形成甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
实施例7
配制含0.1%Irgacure 2959的10.0%的甲基丙烯酰化明胶溶液，配制15%的明胶溶液。准备1.5×109个/mL的细胞悬液。将上述细胞悬液与15%明胶按1:2混匀得到含细胞的5%明胶溶液。将同轴针头固定在基座上，同轴针头的内针头的孔径为14G，外针头的孔径为15G。将内外针头通过管道连接到两个注射器上，一个装入甲基丙烯酰化明胶溶液，一个装入细胞悬液。两个注射器分别连接到注射泵上。在同轴针头的出口处加装一段长度为5cm的透明管。将上述针头和注射器置于加热装置的辐照下，保持温度在37℃～40℃。将同轴针头前端的一段透明管置于紫外照射范围，透明管与紫外灯的距离为5cm，选择紫外灯的波长为398nm。将透明管离出口处10cm没入冰水中。两个注射泵开始挤出，外层甲基丙烯酰化明胶溶液流速为40mL/h,内层细胞悬液速度为15mL/h。最终形成甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
实施例8
实施例3中7.5%的甲基丙烯酰化明胶的合成步骤。将7.5g明胶加入100mL超纯水中，在50℃下搅拌1h至其完全溶解。在无氧条件下加入甲基丙烯酸酐搅拌反应1h，反应结束后转入50mL离心管3500g室温离心5min，取上清加入300mL预热超纯水终止反应，转入12KDa～14KDa透析袋中透析，透析结束后以NaHCO3调节pH至7.4，冻干后-20℃避光保存得到甲基丙烯酰化明胶。
实施例9
实施例7中甲基丙烯酰化明胶的制备：称取10g的明胶置于烧杯中，加入100mL PBS缓冲溶液，60℃水浴下搅拌至完全溶解，配制成10％的明胶溶液，再以0.5mL/min的速度滴加8mL甲基丙烯酸酐，在60℃水浴下搅拌反应3h后，加入400mLPBS缓冲溶液混合均匀以终止反应；将混合后的溶液用12KDa～14KDa透析袋分装，置于装有超纯水的大烧杯中，于45℃恒温水浴锅中透析一周，每隔4h换超纯水一次，以除去未反应的甲基丙烯酸酐、小分子及盐类等。透析一周后，将溶液分装于离心管中，离心，将上清液分装于培养皿中，放置-20℃冷冻过夜，再置于冷冻干燥机中冷冻至完全干燥，制得泡沫状甲基丙烯酰化明胶，用50℃超纯水进行溶解，制备得到的甲基丙烯酰化明胶溶液中甲基丙烯酰化明胶的质量分数为10％。
实施例10
本实施例提供了实施例3中配置含0.3% LAP的7.5%甲基丙烯酰化明胶溶液的方法。称取0.3g的LAP，用100mL浓度为0.005mol/L～0.02mol/L，pH值为7.2～7.4的PBS溶液在50℃加热0.5h～2h溶解。称取0.75g实施例3中制备获得的甲基丙烯酰化明胶，将甲基丙烯酰化明胶置于0.5mL上述含0.3%LAP的PBS中，39℃加热溶解1h，即得浓度为15%的含0.3%LAP的甲基丙烯酰化明胶溶液。
在一优选例中，LAP溶液和甲基丙烯酰化明胶溶液采用0.22μm针头式过滤器过滤除菌，且灭菌后的操作均为无菌操作。
实施例11
本实施例提供了实施例3中明胶溶液的配制。称取16g明胶固体放入耐高温高压的瓶子中，加入少量水混合，加热使明胶融化，最后加水至120ml，封口，放入蒸汽灭菌锅灭菌，冷却至常温后即得12%的明胶溶液。
实施例12
本实施例提供了实施例3中细胞悬液的制备方法。去除细胞培养基，用少量新的细胞培养基清洗1～2遍。加入少量新的细胞培养基直接吹打一遍。再用培养基洗一遍，两次所悬液混合转入新的容器内。吸干净容器内的培养基液体，加入0.25%的胰酶0.3mL润洗一遍，吸掉上清，再加入1mL的0.25%的胰酶消化,37℃消化5min。细胞消化的同时置于显微镜下观察，计数。用细胞培养基重悬至一定浓度，细胞浓度控制为1.5×107左右。将上述细胞悬液与12%明胶按1：1混匀得到含细胞的6%明胶溶液。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种甲基丙烯酰化明胶同轴微丝，其特征在于，包括：
内芯，所述内芯包含至少一个具有生物学特性的细胞悬液；
纤维外层，所述纤维外层包覆所述内芯，所述纤维外层与所述内芯同轴设置，所述纤维外层为甲基丙烯酰化明胶层。
2.根据权利要求1所述的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝，其特征在于，所述内芯包含所述具有生物学特性的细胞以及明胶。
3.一种甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将甲基丙烯酰化明胶与光引发剂溶解在溶剂中，制备A溶液；
S2、将细胞悬液与明胶溶液混合，获得B溶液；
S3、将A溶液加载于同轴微丝装置与外针头相连的注射器中，将B溶液置于同轴微丝装置与内针头相连的注射器中；
S4、将同轴微丝装置置于加热装置下，辐照加热；
S5、推动外针头注射器内的A溶液移动，推动内针头注射器内的B溶液移动；
S6、将外针头出口处的A 溶液以及内针头出口处的B溶液通过蓝光或紫外光进行交联，获得甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
4.根据权利要求3所述的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法，其特征在于，在所述内针头出口处和所述外针头出口处设置一段透明管，将所述透明管置于蓝光或紫外光照射范围内。
5.根据权利要求3所述的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法，其特征在于，还包括将所述内针头的出口和所述外针头的出口没入冰水中，冰浴交联，获得所述甲基丙烯酰化明胶同轴微丝。
6.根据权利要求3所述的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法，其特征在于，所述外针头注射器中A溶液的流速为5mL/h～100mL/h；和/或
所述内针头注射器中B溶液的流速为1mL/h～30mL/h。
7.根据权利要求3所述的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法，其特征在于，
所述A溶液中所述光引发剂的质量浓度为0.1%～3.0%；和/或
所述A溶液中甲基丙烯酰化明胶的质量浓度为3.0%～10.0%；和/或
所述A溶液中所述光引发剂为LAP或Irgacure 2959；和/或
步骤S1和步骤S2中所述溶剂为PBS、水、氯化钠溶液、六氟异丙醇、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺的至少其中一种。
8.根据权利要求3所述的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法，其特征在于，
所述B溶液中所述细胞悬液的细胞浓度为1.0×102～1.0×109；和/或
所述B溶液中所述明胶溶液的质量浓度为5%～20%；和/或
所述B溶液中，所述细胞悬液与所述明胶溶液的体积比为5:1～1:5。
9.根据权利要求3所述的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法，其特征在于，所述辐照加热的温度为25℃～40℃。
10.根据权利要求3所述的甲基丙烯酰化明胶同轴微丝的制备方法，其特征在于，所述外针头注射器包括外针头和第一注射器，所述内针头注射器包括内针头和第二注射器，所述在将A溶液加载于同轴微丝装置的外针头注射器中，将B溶液置于同轴微丝装置的内针头注射器中之前，还包括以下步骤：
将同轴针头固定在基座上；
将外针头通过管道连接到第一注射器上，将内针头通过管道连接到第二注射器上；
将第一注射器以及第二注射器分别连接到注射泵上，最终形成具有同轴针头的注射装置。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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