CN115260324B - 一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法 - Google Patents
一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115260324B CN115260324B CN202210734267.8A CN202210734267A CN115260324B CN 115260324 B CN115260324 B CN 115260324B CN 202210734267 A CN202210734267 A CN 202210734267A CN 115260324 B CN115260324 B CN 115260324B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fingered citron
- ethanol
- polysaccharide
- centrifuging
- intestinal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 240000007126 Citrus medica var. sarcodactylis Species 0.000 title claims abstract description 53
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 45
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 45
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 45
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims abstract description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 56
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000010009 beating Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000004537 pulping Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 3
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 3
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 abstract description 14
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 abstract description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 244000179970 Monarda didyma Species 0.000 description 9
- 235000010672 Monarda didyma Nutrition 0.000 description 9
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 8
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 7
- 150000004666 short chain fatty acids Chemical class 0.000 description 7
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 235000021391 short chain fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 3
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- AEMOLEFTQBMNLQ-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactopyranuronic acid Natural products OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O AEMOLEFTQBMNLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 3
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 3
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 description 2
- 241000701474 Alistipes Species 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 2
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-DTEWXJGMSA-N D-Galacturonic acid Natural products O[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-DTEWXJGMSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000203475 Neopanax arboreus Species 0.000 description 2
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 2
- 241000160321 Parabacteroides Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N aldehydo-D-galacturonic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- QELUYTUMUWHWMC-UHFFFAOYSA-N edaravone Chemical compound O=C1CC(C)=NN1C1=CC=CC=C1 QELUYTUMUWHWMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 2
- -1 polysaccharide monosaccharide Chemical class 0.000 description 2
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 2
- 238000000513 principal component analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 2
- YAHHFDSODKFKOV-ULDVYXPFSA-N (2s,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;(2r,3r,4s,5s)-2,3,4,5-tetrahydroxyhexanal Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O YAHHFDSODKFKOV-ULDVYXPFSA-N 0.000 description 1
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187643 Amycolatopsis Species 0.000 description 1
- 241001645380 Bassia scoparia Species 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 240000004307 Citrus medica Species 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 241000605909 Fusobacterium Species 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N L-Fucose Natural products C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N L-ribopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241001520299 Phascolarctos cinereus Species 0.000 description 1
- 241001093501 Rutaceae Species 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000125947 Tyzzerella Species 0.000 description 1
- 241000082085 Verticillium <Phyllachorales> Species 0.000 description 1
- FGDQGIKMWOAFIK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;phosphoric acid Chemical group CC#N.OP(O)(O)=O FGDQGIKMWOAFIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-YBSDWZGDSA-N d-mannuronic acid Chemical compound O[C@@H]1O[C@@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-YBSDWZGDSA-N 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000004129 fatty acid metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000036397 gastrointestinal physiology Effects 0.000 description 1
- 230000004110 gluconeogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000010224 hepatic metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007366 host health Effects 0.000 description 1
- 230000003516 hyperlipidaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 229940076230 magnesium sulfate monohydrate Drugs 0.000 description 1
- LFCFXZHKDRJMNS-UHFFFAOYSA-L magnesium;sulfate;hydrate Chemical compound O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O LFCFXZHKDRJMNS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 238000003068 pathway analysis Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008855 peristalsis Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明公开了一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法：(1)挑选：挑选佛手，洗净；(2)打浆：佛手加水打成糊状，即得浆液；(3)酶解：向浆液中加入复合酶，酶解，高温灭酶；(4)离心：在8000rpm、4℃下离心15min，取上清液；(5)超滤：上清液过10kDa超滤膜，收集分子量大于10kDa的组分；(6)醇沉：加乙醇至乙醇，醇沉，在8000rpm、4℃下离心15min，取沉淀；(7)冻干：沉淀挥发干乙醇后重新溶解在水中，真空冷冻干燥，即得佛手多糖。本发明制备所得佛手多糖具有很好的调节高血脂人群的肠道菌群及代谢效果，同时具有肠道益生功效。
Description
技术领域
本发明涉及食品加工技术、食品保健领域，特别涉及一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法。
背景技术
佛手(Citrus medica L.)是芸香科柑橘属植物香橼的变种，在我国有悠久的栽培历史，国内的佛手主要栽培在广东、广西、福建等地。它的果实顶端分裂，形成如手指状的果瓣，一般有10～15瓣，呈张开或握拳状，又名佛手柑、五指柑、五指香橼。佛手果肉白嫩、香脆甘甜，可制成佛手果脯、佛手茶和佛手酒等食品。
益生元是指不可被人体消化利用但可选择性促进肠道有益菌增殖和代谢的碳水化合物，它通过选择性的刺激一种或几种细菌的生长与活性，而对寄主产生有益的影响，从而改善寄主健康。
中国发明申请《一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法》(申请号CN201910084499.1)公布了一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法,包括以下步骤：以超临界CO2为萃取剂，以水为夹带剂，对佛手粉碎物进行超临界萃取，得到佛手多糖提取液；所述超临界萃取包括依次进行的静态萃取和动态萃取；所述静态萃取的时间为15～25min，压力为10～20MPa，温度为35～45℃；所述动态萃取的时间为100～220min，所述动态萃取的压力和温度与所述静态萃取的压力和温度相同。该技术虽然能够萃取得到佛手多糖，但是并没有探究佛手多糖的功能活性，而这是佛手多糖的重要性能指标。
发明内容
本发明针对现有技术一般是集中在佛手多糖的提取或是将佛手多糖加入到相关产品当中，没有深入探究佛手多糖的功能活性以及如何制备得到功能活性强的佛手多糖的问题，发明一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法，旨在得到一种制备过程简洁、佛手多糖功能活性强的方法。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：
一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法，包括以下步骤：
(1)挑选：挑选没有损伤、不发霉变质的佛手，洗净；
(2)打浆：佛手加水打成糊状，即得浆液；
(3)酶解：向浆液中加入复合酶，在50℃下酶解，之后将温度升高，进行高温灭酶；
(4)离心：将步骤(3)酶解后所得物质在8000rpm、4℃下离心15min，取上清液；
(5)超滤：上清液过10kDa超滤膜，收集分子量大于10kDa的组分；
(6)醇沉：向收集所得组分中加乙醇至乙醇的最终浓度为80％，醇沉，在8000rpm、4℃下离心15min，取沉淀；
(7)冻干：沉淀挥发干乙醇后重新溶解在水中，真空冷冻干燥，即得佛手多糖。
作为优选，步骤(2)中加入的佛手与水质量比为1:10。
作为优选，步骤(3)中所述的复合酶为纤维素酶:酸性蛋白酶:果胶酶＝1:1:1体积比混合所得，加入复合酶至其最终体积浓度为1.2％。
作为优选，步骤(3)中在50℃下酶解150min，之后将温度升至100℃，高温灭酶10min
作为优选，步骤(6)中所述的乙醇为体积浓度为95％的乙醇；所述的醇沉为4℃醇沉24h。
作为优选，步骤(7)中真空冷冻干燥48h。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明制备所得佛手多糖具有很好的调节高血脂人群的肠道菌群及代谢效果，同时具有肠道益生功效。
附图说明
图1是一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法流程图。
图2为佛手多糖GPC出峰图。
图3是菌群的主成分分析。
图4是菌群的香农指数。
图5是体外培养48h后不同组短链脂肪酸的浓度。
图6不同组之间的差异代谢物火山图。
具体实施方式
下面结合附图具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。实施例中采用的原料、试剂若无特殊说明，皆为市售所得。
实施例1
一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法，操作步骤如下：
(1)挑选：挑选没有损伤、不发霉变质的佛手，洗净；
(2)打浆：佛手加水打成糊状(料液质量比为1:10)，即得浆液；
(3)酶解：向浆液中加入复合酶(纤维素酶:酸性蛋白酶:果胶酶体积比为1:1:1)至最终体积浓度为1.2％(复合酶在浆液中的体积浓度为1.2％)，在50℃下酶解150min，之后将温度升至100℃，高温灭酶10min；
(4)离心：将步骤(3)酶解后所得物质在8000rpm、4℃下离心15min，取上清液；
(5)超滤：上清液过10kDa超滤膜，收集分子量大于10kDa的组分；
(6)醇沉：向收集所得组分中加体积浓度为95％的乙醇至乙醇的最终浓度为80％，4℃醇沉24h，在8000rpm、4℃下离心15min，取沉淀；
(7)冻干：沉淀挥发干乙醇后重新溶解在水中，真空冷冻干燥48h，即得佛手多糖。
性能检测：
1、佛手多糖的结构特性：
佛手多糖分子量的测定：采用凝胶渗透色谱(GPC)测定实施例1制备所得佛手多糖的分子量，Agilent_1260高效液相色谱仪，配备TSK-G2500 PWXL色谱柱；样品(20μL，0.5％)进样后，使用超纯水作为流动相，流速0.5mL/min，柱温30℃，用示差折光检测器(RID)检测多糖峰，图2所示为出峰图，检测结果为佛手多糖的分子量约为2×104kDa。
佛手多糖单糖组成的测定：用衍生化法测定佛手多糖单糖组成，将实施例1制备所得佛手多糖配置成10mg/mL浓度的样品，然后取200μL样品(10mg/mL)用三氟乙酸水解2h，加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)反应1h，再用氯仿萃取，最后将水相过0.22μm微孔滤膜并分析，用Agilent_1260高效液相系统连接VWD检测器进行HPLC分析，使用C18色谱柱，流动相为乙腈-磷酸盐缓冲溶液，标准品包括D-甘露糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖、D-阿拉伯糖、L-岩藻糖、D-半乳糖、D-甘露糖醛酸、D-葡萄糖醛酸和D-半乳糖醛酸；245nm下进行紫外检测，检测结果如表1所示。
表1佛手多糖的单糖组成
| 单糖 | D-甘露糖 | L-鼠李糖 | D-半乳糖醛酸 | D-半乳糖 |
| 组成/％ | 63.62 | 24.16 | 10.62 | 1.60 |
2、佛手多糖肠道益生活性验证
微生物样本：
微生物样本来自4名高血脂志愿者和4名健康人(2男2女，年龄20～40之间)的粪便。
培养基配制：
空白培养基：厌氧培养液(成分：37.5mL溶液A(0.78％磷酸氢二钾)，37.5mL溶液B(0.47％磷酸二氢钾，1.18％氯化钠，1.2％硫酸铵，0.12％氯化钙，0.25％一水硫酸镁)，L-半胱氨酸0.5g，25％L-抗坏血酸2mL，8％碳酸钠50mL，牛肉膏1g，蛋白胨1g，营养琼脂1g，加蒸馏水定容至1L，调pH7.5-8.0。
佛手多糖培养基：除了空白组的所有成分外，另外加入5g本发明实施例1制备所得佛手多糖，加蒸馏水定容至1L，充分溶解，调pH 7.5-8.0。
培养方式：
分成3组进行培养，接种量5％：
正常组(NC组)：健康人粪便菌群接种到空白培养基中；
高血脂组(HC组)：高血脂人群粪便菌群接种到空白培养基中；
佛手多糖组(HF组)：高血脂人群粪便菌群接种到佛手多糖培养基中；
在厌氧条件下37℃振荡培养48h，每组做3个平行。
菌群检测：培养48h后取培养液，采用16S rDNA测序来对菌群结构进行检测，结果如图3、4、表2所示。
表2主要菌群在属水平上的相对丰度
短链脂肪酸的检测：培养过程中每12h取一次培养液，并采用GC-MS来检测其中的短链脂肪酸含量，结果如图5所示。
代谢检测：培养48h后取培养液，用UPLC/MS-MS进行非靶向代谢物测定，结果如图6、表3所示。
表3NC组与其他2组的三种代谢途径差异显著性分析
| p value | 酪氨酸代谢 | 色氨酸代谢 | 甾体激素生物合成代谢 |
| HC | 0.0002 | 0.0213 | 0.0328 |
| HF | 0.0108 | 0.1391 | 0.5402 |
结果分析：
图3的主成分分析表明，高血脂人群的菌群结构和健康人群差异显著，而HF组的水平介于HC和NC之间，说明本发明实施例1制备所得佛手多糖能够有效地调节高血脂人群的肠道菌群。香农指数反应的是样品中微生物的多样性，香农指数越高微生物的多样性越高。从图4中可看出HC组的香农指数要显著低于NC组，说明高血脂人群的肠道微生物的多样性遭到破坏，而HF组的香农指数显著高于HC组，说明佛手多糖能够使高血脂人群的肠道微生物的多样性得到恢复。
从表3中可看出，相较于健康人群，高血脂人群肠道内的拟杆菌属(Bacteroides)、副拟杆菌属(Parabacteroide)、泰泽雷拉菌属(Tyzzerella)和另枝菌属(Alistipes)的比例显著下降，而梭菌属(Fusobacterium)和考拉杆菌属(Phascolarctobacterium)的比例显著升高。而HF组的拟杆菌属、副拟杆菌属和另枝菌属的比例显著高于HC组，而梭菌属和考拉杆菌属的比例则显著低于HC组。其中，拟杆菌属(Bacteroides)是一种正常寄居于人体肠道内的细菌，可参与到人体肠道中的许多代谢活动中，如碳水化合物的发酵等，也可以调节脂肪酸代谢，从而缓解肥胖，降低肥胖人群的体重，还具有一定的免疫调节作用。副拟杆菌属(Parabacteroide)是人体肠道内的一种重要菌群，可以促进胆汁酸的转化以及产生琥珀酸盐，能够改善脂代谢紊乱、修复肠壁完整性、激活肠道糖异生，具有改善肥胖、非酒精性脂肪肝等功效。另枝菌属(Alistipes)是存在于健康人肠道中的一种有益菌，能够发酵糖类产生琥珀酸和少量的乙酸、丙酸，能够缓解结肠炎和肝硬化等疾病症状。
上述结果说明本发明实施例1制备所得佛手多糖可以改变高血脂人群的肠道菌群结构，降低有害菌的水平，促进对健康具有有益作用的细菌的增殖。
从图5中可以看出，培养48h后，HF组的短链脂肪酸浓度，特别是乙酸、丙酸和丁酸的浓度要显著高于HC组，甚至比NC组还要高。研究表明，乙酸、丙酸、丁酸等短链脂肪酸具有诸多生理活性。它们不仅可以降低肠道pH来抑制有害菌的生长，同时还能作为肠道上皮细胞的燃料，促进肠道蠕动，缓解便秘。丁酸盐可以影响胃肠生理，使结肠细胞恢复活力，降低炎症性结肠炎、克罗恩氏病等疾病的患病率，提高葡萄糖耐受性，帮助减肥，并加强肝脏代谢的外周免疫。佛手多糖干预能够促进高血脂人群菌群产生更多的短链脂肪酸，促进机体健康。
如图6所示，与NC组相比，HC组有91种代谢物显著下调，79种代谢物显著上调。与HC组相比，HF组有86种代谢物显著下调，247种代谢物显著上调。差异代谢通路分析(表2)表明HC组和NC组存在三条差异代谢通路(p<0.05)，这是高脂血症区别于正常人的主要代谢途径，可能与高脂血症的形成有关。经本发明实施例1制备所得佛手多糖处理后，这3种高脂血症代谢途径与NC组相比几乎无差异，这意味着佛手多糖的干预可以恢复高脂血症引起的差异代谢途径。
综上所述，本发明实施例1制备所得佛手多糖可能通过改变肠道菌群结构、影响短链脂肪酸及代谢产物的产生，从而改善高脂血症、维护肠道健康。前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
Claims (3)
1.一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）挑选：挑选没有损伤、不发霉变质的佛手，洗净；
（2）打浆：佛手加水打成糊状，即得浆液；
（3）酶解：向浆液中加入复合酶，在50 ℃下酶解150 min，之后将温度升至100 ℃，高温灭酶10 min；所述复合酶为纤维素酶:酸性蛋白酶:果胶酶=1:1:1体积比混合所得，加入复合酶至其最终体积浓度为1.2%；
（4）离心：将步骤（3）酶解后所得物质在8000 rpm、4 ℃下离心15 min，取上清液；
（5）超滤：上清液过10 kDa超滤膜，收集分子量大于10 kDa的组分；
（6）醇沉：向收集所得组分中加乙醇至乙醇的最终浓度为80%，醇沉，在8000 rpm、4 ℃下离心15 min，取沉淀；
（7）冻干：沉淀挥发干乙醇后重新溶解在水中，真空冷冻干燥48h，即得佛手多糖。
2.根据权利要求1所述的具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法，其特征在于：步骤（2）中加入的佛手与水质量比为1:10。
3.根据权利要求1所述的具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法，其特征在于：步骤（6）中所述的乙醇为体积浓度为95%的乙醇；所述的醇沉为4 ℃醇沉24 h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210734267.8A CN115260324B (zh) | 2022-06-27 | 2022-06-27 | 一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210734267.8A CN115260324B (zh) | 2022-06-27 | 2022-06-27 | 一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115260324A CN115260324A (zh) | 2022-11-01 |
| CN115260324B true CN115260324B (zh) | 2023-10-31 |
Family
ID=83761691
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210734267.8A Active CN115260324B (zh) | 2022-06-27 | 2022-06-27 | 一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115260324B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109259086A (zh) * | 2018-07-31 | 2019-01-25 | 浙江工商大学 | 可调节便秘的营养大米及其制备方法 |
| CN109651526A (zh) * | 2019-01-29 | 2019-04-19 | 金华职业技术学院 | 一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法 |
| CN113209177A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-08-06 | 浙江工商大学 | 超声辅助提取柑橘果皮中黄酮类化合物的方法 |
| WO2021250159A1 (de) * | 2020-06-10 | 2021-12-16 | Herbstreith & Fox Gmbh & Co. Kg Pektin-Fabriken | Verwendung einer aktivierbaren pektinhaltigen citrusfaser zur herstellung von erzeugnissen |
| WO2022067774A1 (zh) * | 2020-09-30 | 2022-04-07 | 牡丹江友搏药业有限责任公司 | 一种海参多糖的制备方法与应用 |
-
2022
- 2022-06-27 CN CN202210734267.8A patent/CN115260324B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109259086A (zh) * | 2018-07-31 | 2019-01-25 | 浙江工商大学 | 可调节便秘的营养大米及其制备方法 |
| CN109651526A (zh) * | 2019-01-29 | 2019-04-19 | 金华职业技术学院 | 一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法 |
| WO2021250159A1 (de) * | 2020-06-10 | 2021-12-16 | Herbstreith & Fox Gmbh & Co. Kg Pektin-Fabriken | Verwendung einer aktivierbaren pektinhaltigen citrusfaser zur herstellung von erzeugnissen |
| WO2022067774A1 (zh) * | 2020-09-30 | 2022-04-07 | 牡丹江友搏药业有限责任公司 | 一种海参多糖的制备方法与应用 |
| CN113209177A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-08-06 | 浙江工商大学 | 超声辅助提取柑橘果皮中黄酮类化合物的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 刘绍贵主编.《临床常用中草药鉴别与应用》.湖南科学技术出版社,2015,第292页. * |
| 章斌等.复合酶法提取广佛手多糖的工艺研究.《安徽农业科学》.2010,第第38卷卷(第第38卷期),第7833-7836页. * |
| 赵立平著.《微生物组学与精准医学》.上海交通大学出版社,2017,第259页. * |
| 陈孝云.佛手多糖的提取纯化及其对酒精性肝细胞损伤保护作用研究.《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》.2019,(第undefined期),第12页第2.3.1.6节、第5页第1.3.2.5节、第15页第2.4.1.4节. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115260324A (zh) | 2022-11-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liu et al. | In vitro saliva-gastrointestinal digestion and fecal fermentation of Oudemansiella radicata polysaccharides reveal its digestion profile and effect on the modulation of the gut microbiota | |
| CN109750070B (zh) | 一种功能性桑叶低聚糖及其制备方法和应用 | |
| CN108823261B (zh) | 一种超低分子量铁皮石斛多糖及其制备与应用 | |
| CN105147715B (zh) | 一种蝙蝠蛾拟青霉中性胞外多糖的新用途 | |
| CN113773984A (zh) | 提高黄精多糖得率并调节皮肤屏障与免疫的鼠李糖乳杆菌 | |
| CN115029279A (zh) | 植物乳植杆菌mb11及其在生物转化制备稀有人参皂苷中的应用 | |
| CN118416115A (zh) | 一种富含β-葡聚糖的猴头菇子实体多糖及其高效提取方法和应用 | |
| Ge et al. | In vitro fermentation characteristics of polysaccharides from coix seed and its effects on the gut microbiota | |
| Sun et al. | Fractionation, preliminary structural characterization and prebiotic activity of polysaccharide from the thin stillage of distilled alcoholic beverage | |
| CN112724270B (zh) | 一种低分子量苜蓿多糖及其制备方法与调节肠道菌群的应用 | |
| CN116590373B (zh) | 一种发酵粘液乳杆菌胞外多糖、制备方法及应用 | |
| CN115260324B (zh) | 一种具有肠道益生活性的佛手多糖的制备方法 | |
| CN114686542B (zh) | 一种低分子量牛樟芝胞外多糖及其制备和应用 | |
| CN113278549B (zh) | 一株蜡样芽孢杆菌及其应用 | |
| CN114231576B (zh) | 罗伊氏乳杆菌在制备植物多糖中的应用 | |
| CN113151071B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
| CN113826900A (zh) | 一种结冷胶寡糖及其在益生元中的应用 | |
| CN116836872B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌多糖类α-淀粉酶抑制剂及其应用 | |
| CN107267420B (zh) | 一种高产β-1,3-葡聚糖枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN117159561B (zh) | 一种具有抗肥胖功效的亚麻籽多糖发酵物及其制备方法与应用 | |
| CN113372463B (zh) | 一种从蒸馏米酒蒸馏残液中提取益生功能糖的方法 | |
| CN115074291B (zh) | 一株能够提高发酵桔梗的活性成分及抗氧化能力的巨大芽孢杆菌、方法和应用 | |
| CN114875104B (zh) | 一种桑叶酵素原液及其制备方法和应用 | |
| CN111718971B (zh) | 一种具有降脂活性的米糠多糖及其制备方法 | |
| CN117547572B (zh) | 一种组合物的复合乳酸菌发酵品的制备方法、产品及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |