CN109651526A - 一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法,属于分离提纯技术领域。本发明以超临界CO2为萃取剂,以水为夹带剂,对佛手粉碎物进行超临界萃取,得到佛手多糖提取液;所述超临界萃取包括依次进行的静态萃取和动态萃取。本发明通过控制静态萃取和动态萃取的操作条件使细胞壁脆性增强,通透性提高,进而提高佛手多糖的溶出性,在不破坏佛手多糖结构的同时使佛手多糖的提取率有较大的提升;同时,本发明的萃取过程不涉及温度的变化,操作简单,易于控制产品质量,且萃取温度接近常温,不会破坏佛手多糖的结构。实施例结果表明,本发明提供的方法佛手多糖的萃取率可达5.35%。
Description
技术领域
本发明涉及分离提纯技术领域,特别涉及一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法。
背景技术
佛手(bergamot),为芸香科柑橘属植物佛手的果实,主要产于广东、四川、台湾、浙江等地,产于浙江金华的佛手俗称“金佛手”。佛手是传统的中药,具有理气止痛、消食化痰之功效,研究发现佛手挥发油可抑制哮喘小鼠外周血、支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞水平,减少肺组织嗜酸性粒细胞浸润,拮抗气道炎症而发挥平喘作用。以金佛手为主药,配以黄芪、白术等研制成复方金佛手口服液,具有祛痰、镇咳、增强免疫、镇静作用。佛手中水溶性成分多糖是药物的有效成分之一。
佛手多糖的提取方法主要有水提醇沉法、超声波提取法和酶法提取法等。水提醇沉法简单经济,但多糖得率低,且浸提温度过高会破坏多糖活性;超声波提取法较水提醇沉法能提高多糖得率,但增幅不大,且对多糖结构也有一定破坏;酶法操作繁琐,且产品质量不易控制。
发明内容
有鉴于此,本发明目的在于提供一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法。本发明提供的超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法操作简单,所得佛手多糖的提取率高,提取时间短,且不会破坏多糖结构和活性。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法,包括以下步骤:
以超临界CO2为萃取剂,以水为夹带剂,对佛手粉碎物进行超临界萃取,得到佛手多糖提取液;
所述超临界萃取包括依次进行的静态萃取和动态萃取;所述静态萃取的时间为15~25min,压力为10~20MPa,温度为35~45℃;所述动态萃取的时间为100~220min,所述动态萃取的压力和温度与所述静态萃取的压力和温度相同。
优选的,所述佛手粉碎物的制备方法为:
将佛手依次进行浸泡、洗涤、离心、烘干、粉碎和过筛,得到佛手粉碎物。
优选的,所述佛手粉碎物的粒径≤60目。
优选的,所述夹带剂的体积与佛手粉碎物的质量之比为0.2~0.4mL:1g。
优选的,所述夹带剂的流量为2mL/min。
优选的,所述超临界CO2的流量为20L/h。
本发明提供了一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法,本发明以超临界CO2为萃取剂,以水为夹带剂,对佛手粉碎物进行超临界萃取,得到佛手多糖提取液;所述超临界萃取包括依次进行的静态萃取和动态萃取;所述静态萃取的时间为15~25min,压力为10~20MPa,温度为35~45℃;所述动态萃取的时间为100~220min,所述动态萃取的压力和温度与所述静态萃取的压力和温度相同。本发明通过控制静态萃取和动态萃取的操作条件使细胞壁脆性增强,通透性提高,进而提高佛手多糖的溶出性,在不破坏佛手多糖结构的同时使佛手多糖的提取率有较大的提升;同时,本发明的萃取过程不涉及温度的变化,操作简单,易于控制产品质量,且萃取温度接近常温,不会破坏佛手多糖的结构,可以保证佛手多糖的活性。实施例结果表明,本发明提供的方法佛手多糖的萃取率可达5.35%。
具体实施方式
本发明提供了一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法,包括以下步骤:
以超临界CO2为萃取剂,以水为夹带剂,对佛手粉碎物进行超临界萃取,得到佛手多糖提取液;所述超临界萃取包括依次进行的静态萃取和动态萃取;所述静态萃取的时间为15~25min,压力为10~20MPa,温度为35~45℃;所述动态萃取的时间为100~220min,所述动态萃取的压力和温度与所述静态萃取的压力和温度相同。
本发明对所述佛手的产地没有特殊的要求,在本发明实施例中,优选使用产自于浙江金华的金华佛手;在本发明中,所述佛手粉碎物的粒径优选≤60目;所述佛手粉碎物的制备方法优选为:
将佛手依次进行浸泡、洗涤、离心、烘干、粉碎和过筛,得到佛手粉碎物。
本发明优选将佛手置于20℃以下的冷水中进行浸泡,所述浸泡的时间优选为1~2h,更优选为1.5h;本发明优选使用流动水对浸泡后的佛手进行洗涤,以去除泥沙及不可食用杂质;本发明对所述离心的方式没有特殊的要求,使用本领域技术人员熟知的离心方式即可。在本发明中,所述烘干的温度优选低于60℃,更优选为45~55℃;本发明对所述烘干的时间没有特殊的要求,能够使离心后的佛手完全干燥即可。本发明对所述粉碎和过筛的方式没有特殊的要求,使用本领域技术人员熟知的粉碎和过筛方式即可。
在本发明中,所述超临界萃取包括依次进行的静态萃取和动态萃取。所述静态萃取的时间为15~25min,优选为20min;所述静态萃取的温度为35~45℃,优选为35~40℃;所述静态萃取的压力为10~20MPa,优选为15MPa。在本发明中,静态萃取可以使佛手细胞发生膨胀,促进佛手多糖的溶出。
在本发明中,所述动态萃取的时间为100~220min,优选为200~220min;所述动态萃取的压力和温度与所述静态萃取的压力和温度相同。本发明在动态萃取过程中得到佛手多糖提取液。
在本发明中,所述夹带剂的体积与佛手粉碎物的质量之比优选为0.2~0.4mL:1g,更优选为0.3~0.4mL:1g,所述夹带剂的流量优选为2mL/min。在本发明中,所述超临界CO2的流量优选为20L/h。
本发明通过控制静态萃取和动态萃取的操作条件使细胞壁脆性增强,通透性提高,进而提高佛手多糖的溶出性,在不破坏佛手多糖结构的同时使佛手多糖的提取率有较大的提升;同时,本发明的萃取过程不涉及温度的变化,操作简单,易于控制产品质量,且萃取温度接近常温,不会破坏佛手多糖的结构,可以保证佛手多糖的活性。
本发明优选使用本领域技术人员熟知的超临界萃取装置进行超临界萃取;所述超临界萃取装置包括萃取釜和分离釜;在静态萃取时,萃取釜与分离釜不连通,超临界CO2进入萃取釜后,关闭萃取釜的进出口,保温保压,超临界CO2并不进入超临界萃取装置的循环系统;在动态萃取时,萃取釜与分离釜连通,在动态萃取过程中,超临界CO2进入萃取釜进行萃取,同时溶解着溶质的超临界CO2持续从萃取釜出口出来,进入分离釜中,在分离釜中超临界CO2被分离出来,分离后的超临界CO2进入超临界萃取装置的循环系统,分离釜中剩余的物质即为佛手多糖提取液。
在本发明的具体实施例中,在进行萃取前,先开启超临界萃取装置的冷凝系统,冷却CO2泵的泵头30min左右,让冷箱中的循环水温度低至0~5℃;在进行萃取时,本发明将所述佛手粉碎物置于超临界萃取装置的萃取釜中,打开排气口排出杂质气体后依次关闭放气阀、萃取釜、分离釜上的阀门。之后开启CO2钢瓶,来自钢瓶的CO2气体先经过过滤器,进入制冷机的储液罐里,当温度达到设定的萃取温度时,打开CO2泵、夹带剂和萃取釜的阀门,开始加压,进行静态萃取;静态萃取完成后,打开超临界萃取装置的萃取釜和分离釜之间的阀门,开始进行动态萃取,动态萃取过程中,从分离釜出液口每隔20min收集一次佛手多糖提取液;在本发明中,所述分离釜优选包括串联设置的分离釜I和分离釜II,所述分离釜I和分离釜II的压力均优选为4MPa,分离釜的温度优选与萃取釜的温度相同;所述分离釜I和分离釜II均设有出液口。
得到佛手多糖提取液后,本发明优选对所述提取液进行后处理,所述后处理优选包括以下步骤:
(1)对所述佛手多糖提取液进行固液分离,得到上层清液与沉淀物;
(2)使用乙醇对所述沉淀物进行洗涤,洗涤后将所得洗涤液与所述上层清液混合,得到纯化的佛手多糖提取液。
本发明对所述固液分离的具体方式没有特殊的要求,使用本领域技术人员熟知的固液分离方式即可;本发明优选使用体积浓度为70%的乙醇对所述沉淀物进行洗涤。
下面结合实施例对本发明提供的超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
首先开启超临界萃取装置的冷凝系统,冷却CO2泵的泵头30min左右,让冷箱中的循环水温度低至5℃,然后称取干燥后的60目金华粉碎物100g,放入1L规格超临界萃取装置的萃取釜,设定萃取釜的压力为15MPa,温度为35℃,分离釜的压力为4MPa,温度为35℃。打开排气口排出杂质气体后依次关闭放气阀、萃取釜、分离釜上的阀门。
开启CO2钢瓶,来自钢瓶的CO2气体先经过过滤器,进入制冷机的储液罐里,当温度达到设定温度时,打开CO2泵、夹带剂和萃取釜的阀门,开始加压,进行静态萃取,其中夹带剂为水,CO2的流量为20L/h,夹带剂的体积与佛手粉碎物的质量之比为0.4mL:1g,静态萃取时间为20min。
静态萃取完成后后,打开分离釜阀门和管道循环阀门,设置萃取釜的压力为15MPa,温度为35℃,开始动态萃取220min,每隔20min在出液口收集佛手多糖提取液。
对所述佛手多糖提取液进行固液分离,得到上层清液与沉淀物;使用体积浓度为70%的乙醇对所述沉淀物进行洗涤,洗涤后将所得洗涤液与所述上层清液混合,得到纯化的佛手多糖提取液。
将提取所得样品制成1g/mL的溶液,精密量取2mL,用紫外分光光度法测定其吸光度,从标准曲线的回归方程中计算佛手多糖的提取率,经计算,此操作下佛手多糖的提取率为5.35%。
其中标准曲线的制备方法如下:
(1)4%苯酚溶液的配制:取苯酚100g,加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g,蒸馏并收集182℃馏分,称取4g,在100mL容量瓶加水溶解至刻度线,然后放冰箱内冷藏备用。
(2)对照品溶液的制备:精密称取置105℃干燥12h以上的无水佛手多糖标准品15mg,置25mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀置室温下(约24℃)备用(浓度为0.6mg/mL)。
(3)标准曲线的制备:精密量取对照品溶液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL,分别置于100mL容量瓶中,并加水至刻度,摇匀。精密量取上述各溶液2mL,置于试管中,分别加入4%的苯酚溶液1mL,混匀后迅速加入浓硫酸7.0mL,摇匀,并于45℃水浴中保温30min后取出,置冰水浴中5min后取出。然后以第1份为空白对照组,用分光光度法在490nm的波长处测定其吸收度A,以吸光度A为纵坐标,溶液浓度C为横坐标,进行线性回归,得回归方程Y=0.0114+0.0183X,相关系数r=0.9995。佛手多糖浓度在0.006~0.03mg/mL范围内吸光度与浓度呈良好的线性关系。
实施例2
首先开启超临界萃取装置的冷凝系统,冷却CO2泵的泵头30min左右,让冷箱中的循环水温度低至5℃,然后称取干燥后的60目金华粉碎物100g,放入1L规格超临界萃取装置的萃取釜,设定萃取釜的压力为20MPa,温度为40℃,分离釜的压力为4MPa,温度为40℃。打开排气口排出杂质气体后依次关闭放气阀、萃取釜、分离釜上的阀门。
开启CO2钢瓶,来自钢瓶的CO2气体先经过过滤器,进入制冷机的储液罐里,当温度达到设定温度时,打开CO2泵、夹带剂和萃取釜的阀门,开始加压,进行静态萃取,其中夹带剂为水,CO2的流量为20L/h,夹带剂的体积与佛手粉碎物的质量之比为0.3mL:1g,静态萃取时间为20min。
静态萃取完成后,打开分离釜阀门和管道循环阀门,设置动态萃取压力为20MPa,温度为40℃,开始动态萃取160min,每隔20min在出液口收集佛手多糖提取液。
对所述佛手多糖提取液进行固液分离,得到上层清液与沉淀物;使用体积浓度为70%的乙醇对所述沉淀物进行洗涤,洗涤后将所得洗涤液与所述上层清液混合,得到纯化的佛手多糖提取液。
使用实施例1的方法计算佛手多糖的提取率,经计算,此操作下佛手多糖的提取率为4.16%。
实施例3
首先开启超临界萃取装置的冷凝系统,冷却CO2泵的泵头30min左右,让冷箱中的循环水温度低至0℃,然后称取干燥后的50目金华粉碎物100g,放入1L规格超临界萃取装置的萃取釜,设定萃取釜的压力为10MPa,温度为45℃,分离釜的压力为4MPa,温度为45℃。打开排气口排出杂质气体后依次关闭放气阀、萃取釜、分离釜上的阀门。
开启CO2钢瓶,来自钢瓶的CO2气体先经过过滤器,进入制冷机的储液罐里,当温度达到设定温度时,打开CO2泵、夹带剂和萃取釜的阀门,开始加压,进行静态萃取,其中夹带剂为水,CO2的流量为20L/h,夹带剂的体积与佛手粉碎物的质量之比为0.2mL:1g,静态萃取时间为25min。
静态萃取完成后,打开分离釜阀门和管道循环阀门,设置动态萃取压力为10MPa,温度为45℃,开始动态萃取100min,每隔20min在出液口收集含有佛手多糖提取液。
对所述佛手多糖提取液进行固液分离,得到上层清液与沉淀物;使用体积浓度为70%的乙醇对所述沉淀物进行洗涤,洗涤后将所得洗涤液与所述上层清液混合,得到纯化的佛手多糖提取液。
使用实施例1的方法计算佛手多糖的提取率,经计算,此操作下佛手多糖的提取率为3.21%。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种超临界二氧化碳萃取佛手多糖的方法,包括以下步骤:
以超临界CO2为萃取剂,以水为夹带剂,对佛手粉碎物进行超临界萃取,得到佛手多糖提取液;
所述超临界萃取包括依次进行的静态萃取和动态萃取;所述静态萃取的时间为15~25min,压力为10~20MPa,温度为35~45℃;所述动态萃取的时间为100~220min,所述动态萃取的压力和温度与所述静态萃取的压力和温度相同。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述佛手粉碎物的制备方法为:
将佛手依次进行浸泡、洗涤、离心、烘干、粉碎和过筛,得到佛手粉碎物。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述佛手粉碎物的粒径≤60目。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述夹带剂的体积与佛手粉碎物的质量之比为0.2~0.4mL:1g。
5.根据权利要求1或4所述的方法,其特征在于,所述夹带剂的流量为2mL/min。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述超临界CO2的流量为20L/h。
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20190419 |