CN115236156A - 用于色氨酸对映体手性识别的pan-bsa复合物修饰电极及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于分析化学领域,涉及用于色氨酸对映体手性识别的PAN‑BSA复合物修饰电极及其制备方法和应用,PAN‑BSA复合物为聚苯胺和牛血清白蛋白通过相互吸附作用形成,聚苯胺与牛血清白蛋白的质量比为[1:2,1:1),制备方法包括:将均匀稳定的PAN‑BSA悬浮液滴涂于电极表面,在红外灯下烘干,然后再滴涂Nafion溶液并烘干,制得PAN‑BSA复合物修饰电极。本发明的PAN‑BSA手性表面制备过程简洁,制备成本低,基于简单的亲水疏水原理及氢键相互作用使牛血清白蛋白吸附在聚苯胺表面并形成特定的空间结构,所制备的手性表面达到了较好的手性识别效果。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域,特别涉及一种用于色氨酸对映体手性识别的PAN-BSA复合物修饰电极及其制备方法和应用。
背景技术
路易·巴斯德曾说过,大多数生命的基本物质是不对称的,具有这样的不对称,使得他们不能与其镜像重叠。这也许是目前唯一可以在无生命物质的化学和有生命物质的化学之间划清界限的方法。从路易斯·巴斯德19世纪中叶手工分离出酒石酸铵钠晶体的两种镜像形式引起人们对立体化学的兴趣,到1904年开尔文勋爵首次定义手性,人们对分子手性的兴趣全部来自生物学的研究。由于构成生命体的L-氨基酸、D-糖、蛋白质和核酸等基本物质的天然不对称性,所以,尽管手性化合物在所有各向同性条件下都具有完全相同的物理化学性质,但在生物化学系统这个各向同性的环境下,手性活性药物的两种对映体往往表现出显著不同的药理作用。这使得手性对映体的识别与分离研究意义重大,同时也成为了对映体分离和所有手性识别的理论基础。
手性识别的方法有许多,相比于色谱法,光谱法和毛细管电泳等传统方法,电化学方法以其强稳定性、高灵敏度、低成本、检测速度快等优势引起了越来越多的关注。电化学手性对映体识别的关键是构建手性表面材料,利用化合物间的氢键、静电相互作用、共价作用构建电化学手性表面的方法司空见惯,而基于吸附作用构建手性表面的报道鲜有耳闻。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于色氨酸对映体手性识别的PAN-BSA复合物修饰电极及其制备方法和应用。聚苯胺由于其良好的电学性能、通过可逆的酸碱转换可控制电导率以及良好的环境稳定性,是导电聚合物领域最受欢迎的研究课题之一。牛血清白蛋白(BSA)是人血清白蛋白的一种同源物,相比于人血清白蛋白不仅廉价易得,且有丰富的手性位点来结合手性对映体,用导电性能良好的掺杂态聚苯胺吸附具有丰富的手性结合位点的牛血清白蛋白构建电化学手性表面,该手性表面材料不仅成本低,制备过程简洁,检测周期短,而且与两种对映体作用的电信号差异明显。对色氨酸对映体的具有较好的识别效果。
用于色氨酸对映体手性识别的PAN-BSA复合物修饰电极,PAN-BSA复合物为聚苯胺和牛血清白蛋白通过相互吸附作用形成。
上述修饰电极的制备方法,包括步骤如下:
(1)配制PAN-BSA悬浮液:称取设定量的聚苯胺粉末与BSA分散于去离子水中,超声分散后室温搅拌至充分吸附,制得PAN-BSA悬浮液;聚苯胺与牛血清白蛋白的质量比为[1:2,1:1),优选1:2。
(2)配制PAN-BSA粉末:将制得的PAN-BSA悬浮液置于离心管中离心后(离心速度优选10000rpm/min)移除上清液,用蒸馏水洗涤多次。最后置于烘箱中下烘干(烘干温度优选40℃),得到的粉末状PAN-BSA复合物冷藏储存(优选于4℃下存储于冰柜备用)。
(3)制备PAN-BSA复合物修饰电极:取制得的PAN-BSA复合物分散于去离子水中超声,即可制得PAN-BSA悬浮液。取适量该悬浮液滴涂于电极表面,在红外灯下烘干,再滴涂适量Nafion溶液用于固定PAN-BSA复合物,即可制得PAN-BSA复合物修饰电极。
电化学法识别色氨酸对映体:采用三电极体系(PAN-BSA复合物修饰电极电极为工作电极,铂片电极为对电极,饱和甘汞电极为参比电极)在室温下将该三电极体系浸入配制的含PBS的L-色氨酸和D-色氨酸溶液中,静置。
具体的:配制的L-色氨酸和D-色氨酸溶液的浓度均为10mM,PBS溶液的PH=5,浓度为0.1M静置时间为15min,
修饰电极在支持电解质中循环伏安扫描的圈数为8圈。
本发明的有益效果是:制备PAN-BSA复合物修饰电极的方法操作简便,原料成本低,制备过程无毒害无污染,且该PAN-BSA修饰电极对色氨酸对映体的识别效果显著。
附图说明
图1为PAN-BSA复合物的红外光谱图。
图2为实施例1中用于色氨酸对映体手性识别的PAN-BSA复合物修饰电极的差分脉冲伏安图。
图3为实施例2中用于色氨酸对映体手性识别的PAN-BSA复合物修饰电极的循环伏安图。
图4为实施例3中用于谷氨酸对映体手性识别的PAN-BSA复合物修饰电极的阻抗图。
图5为实施例4中PAN和BSA的质量浓度比对对映体的作用效果。
图6为实施例5中聚苯胺和牛血清白蛋白吸附时间测试结果。
图7为实施例6中PAN-BSA复合物修饰电极稳定性测试结果。
具体实施方式
现在结合具体实施例对本发明作进一步说明,以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
本发明通过聚苯胺与BSA吸附复合物修饰电极对色氨酸对映体按下述方法进行识别:
RL/D=IL/ID
△E=EL-ED
式中,RL/D表示色氨酸对映体氧化峰电流比值,△E表示色氨酸对映体氧化峰电位差值,IL和ID分别表示L-色氨酸和D-色氨酸的氧化峰电流,EL和ED分别表示L-色氨酸和D-色氨酸的氧化峰电位。
实施例1
(1)制备PAN-BSA复合物:称取一定量的50mg聚苯胺与100mgBSA分散于25mL去离子水中,超声分散后磁力搅拌24h即可制得PAN-BSA悬浮液;将制得的PAN-BSA悬浮液置于离心管中离心后(10000rpm/min)移除上清液,用去离子水洗涤三次。最后置于烘箱中于40℃下烘干,得到PAN-BSA复合物,其固体粉末于4℃下存储于冰柜备用。
(2)制备PAN-BSA复合物修饰电极:取制得的PAN-BSA粉末2mg分散于1mL去离子水中超声,即可制得PAN-BSA悬浮液。取8μL该悬浮液滴涂于玻碳电极表面,在红外灯下烘干,再滴涂适量5μL质量浓度为0.001%的Nafion溶液用于固定PAN-BSA复合物,即可制得PAN-BSA复合物修饰电极;
(3)电化学法识别色氨酸对映体:采用三电极体系,PAN-BSA修饰电极为工作电极,铂片电极为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,在室温下将该三电极体系分别浸入配制的含PBS的L-色氨酸和D-色氨酸溶液中,静置15min后,进行差分脉冲测试。电位范围为-0.4~1.2V。
含PBS的L-色氨酸和D-色氨酸溶液的配制方法为:向PBS缓冲溶液中添加L-色氨酸和D-色氨酸溶液,控制L-色氨酸和D-色氨酸的浓度均为10mM,PBS缓冲溶液的PH=5,浓度为0.1M。静置时间为15min
修饰电极在支持电解质中循环伏安扫描的圈数为8圈。
实施例2
(1)制备PAN-BSA复合物:称取50mg聚苯胺与100mgBSA分散于25mL去离子水中,超声分散后磁力搅拌24h即可制得PAN-BSA悬浮液;将制得的PAN-BSA悬浮液置于离心管中离心后(10000rpm/min)移除上清液,用蒸馏水洗涤三次。最后置于烘箱中于40℃下烘干,得到PAN-BSA复合物,其固体粉末于4℃下存储于冰柜备用。
(2)制备PAN-BSA复合物修饰电极:取制得的PAN-BSA粉末2mg分散于1mL去离子水中超声,即可制得PAN-BSA悬浮液。取8μL该悬浮液滴涂于玻碳电极表面,在红外灯下烘干,再滴涂5μL Nafion溶液(质量浓度0.001%)用于固定PAN-BSA复合物,即可制得PAN-BSA复合物修饰电极,以同样的方法制备了PAN修饰电极,BSA修饰电极;
(3)电化学法表征手性表面材料的负载情况:采用三电极体系,玻碳电极为工作电极,铂片电极为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,在室温下将裸玻,PAN修饰电极,BSA修饰电极和PAN-BSA修饰电极于三电极体系下各自浸入0.1M K3Fe(CN)6溶液中,进行循环伏安扫描,电位范围为-0.2~0.6V,参见图3。
实施例3
(1)制备PAN-BSA复合物:称取50mg的聚苯胺与100mg BSA分散于25mL去离子水中,超声分散后磁力搅拌24h即可制得PAN-BSA悬浮液;将制得的PAN-BSA悬浮液置于离心管中离心后(10000rpm/min)移除上清液,用蒸馏水洗涤三次。最后置于烘箱中于40℃下烘干,得到PAN-BSA复合物,其固体粉末于4℃下存储于冰柜备用。
(2)制备PAN-BSA修饰电极:取制得的PAN-BSA粉末2mg分散于1mL去离子水中超声,即可制得PAN-BSA悬浮液。取8μL该悬浮液滴涂于玻碳电极表面,在红外灯下烘干,再滴涂5μL质量浓度为0.001%的Nafion溶液用于固定PAN-BSA复合物,即可制得PAN-BSA修饰电极,以同样的方法制备了PAN修饰电极,BSA修饰电极;
(3)电化学法表征手性表面材料的负载情况:采用三电极体系,铂片电极为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,在室温下将裸玻,PAN修饰电极,BSA修饰电极或PAN-BSA复合物修饰电极分别作为工作电极,各自浸入0.1M K3Fe(CN)6溶液中进行阻抗测试,EIS的频率范围为10-2-10-5Hz。
实施例4:
为了得到手性表面的最佳配比,在实施例1的基础上对手性表面材料作了配比优化,分别制取PAN和BSA的质量浓度比从3:1到1:3的五种配比的PAN-BSA悬浮液样品,各自负载到电极表面分别与对映体作用后进行DPV测试,以峰电流值作图,见图5,得到PAN和BSA的最佳质量浓度比为1:2。
实施例5:
为了确定聚苯胺和牛血清白蛋白的最佳吸附时间,首先配制2mg/mL的BSA标准溶液,用移液管分别吸取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL BSA标准溶液于50mL容量瓶中,然后用移液管取pH=5的PBS溶液10mL,最后加入适量去离子水至刻度线,将空白试剂作参比量,取各自吸光度值获得图6中左图的BSA的标准曲线,取适量PAN(100mg)加入50mL 0.2mg/mL的BSA溶液中,分别间隔4h、8h、12h、16h、20h、24h、28h、32h取样测其吸光度数值获得图6中右图的吸附曲线,最佳吸附时间选为24h。
实施例6:
为了确定该修饰电极的稳定性和重现性,用实施例1制备的PAN-BSA复合物修饰电极进行十次修饰并进行循环伏安扫描,获得图7中左图的稳定性曲线;用五个不同修饰的电极每间隔三天进行对映体识别,以峰电流比值为纵轴,电极编号为横轴,获得图7中右边的重现性图。
以上述依据本发明的理想实施例为启示,通过上述的说明内容,相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内,进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容,必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。
Claims (5)
1.一种用于色氨酸对映体手性识别的PAN-BSA复合物修饰电极,其特征在于:PAN-BSA复合物为聚苯胺和牛血清白蛋白通过相互吸附作用形成,聚苯胺与牛血清白蛋白的质量比为[1:2,1:1)。
2.如权利要求1所述的用于色氨酸对映体手性识别的PAN-BSA复合物修饰电极的制备方法,其特征在于,包括步骤如下:
(1)配制PAN-BSA悬浮液,称取设定量聚苯胺粉末和BSA分散于去离子水中,超声分散后室温搅拌至充分吸附,然后离心分离取沉淀烘干,取适量分散于去离子水中超声制得PAN-BSA悬浮液;
(2)制备PAN-BSA复合物修饰的电极,取PAN-BSA悬浮液滴涂于电极表面,在红外灯下烘干,然后再滴涂Nafion溶液并烘干,制得PAN-BSA复合物修饰电极。
3.根据权利要求2所述的用于色氨酸对映体手性识别的PAN-BSA复合物修饰电极的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述PAN-BSA悬浮液的浓度为2mg/ml;
步骤(2)所述PAN-BSA悬浮液和Nafion溶液的体积分别为8μL和5μL,Nafion溶液的质量浓度为0.001%。
4.一种电化学法识别色氨酸对映体的方法,其特征在于:采用三电极体系,以权利要求1所述的用于色氨酸对映体手性识别的PAN-BSA复合物修饰电极作为工作电极,铂片电极为对电极,饱和甘汞电极为参比电极,在室温下将该三电极体系浸入配制的含PBS的L-色氨酸和D-色氨酸溶液中,静置孵育,然后于-0.4-1.2v的电位范围内记录差分脉冲伏安曲线。
5.根据权利要求4所述的电化学法识别色氨酸对映体的方法,其特征在于,含PBS的L-色氨酸和D-色氨酸溶液的配制方法为:向PBS缓冲溶液中添加L-色氨酸和D-色氨酸溶液,控制L-色氨酸和D-色氨酸的浓度均为10mM,PBS缓冲溶液的PH=5,浓度为0.1M,静置时间为15min。
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