CN115197325A - 抗体在抗肿瘤治疗中的用途 - Google Patents

抗体在抗肿瘤治疗中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN115197325A
CN115197325A CN202210401367.9A CN202210401367A CN115197325A CN 115197325 A CN115197325 A CN 115197325A CN 202210401367 A CN202210401367 A CN 202210401367A CN 115197325 A CN115197325 A CN 115197325A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
variable region
amino acid
chain variable
acid sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210401367.9A
Other languages
English (en)
Inventor
夏瑜
王忠民
李百勇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ad Pharmaceuticals Co ltd
Akeso Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Ad Pharmaceuticals Co ltd
Akeso Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ad Pharmaceuticals Co ltd, Akeso Pharmaceuticals Inc filed Critical Ad Pharmaceuticals Co ltd
Publication of CN115197325A publication Critical patent/CN115197325A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen

Abstract

本发明涉及抗CTLA4‑抗PD‑1双特异性抗体，其用于治疗肿瘤，所述抗CTLA4‑抗PD‑1双特异性抗体与抗VEGFR2单克隆抗体或抗VEGF单克隆抗体联合施用，其中(1)所述抗CTLA4‑抗PD‑1双特异性抗体包括：靶向PD‑1的第一蛋白功能区，和靶向CTLA4的第二蛋白功能区；其中，所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；或者，所述第一蛋白功能区为单链抗体，所述第二蛋白功能区为免疫球蛋白。

Description

抗体在抗肿瘤治疗中的用途
技术领域
本发明属于分子免疫学领域，具体涉及一类抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体或抗VEGF的单克隆抗体联合抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体在治疗肿瘤中的应用。
背景技术
肿瘤是危害人类健康的重大疾病，亟需开发有效的治疗手段和药物。
血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2)是一种特异作用于血管内皮细胞的生长因子的受体，又称作KDR或FLK1。目前发现的VEGFR主要有5种：VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3、NP-1和NP-2，其中VEGFR-1和VEGFR2主要存在于血管内皮细胞，VEGFR3主要存在于淋巴管内皮细胞。NP-1和NP-2不仅在内皮细胞表达，还表达于某些肿瘤细胞内。但VEGF促血管内皮细胞增殖等生物活性的发挥主要是通过与VEGFR2结合实现。
新生血管的形成在人类的多种疾病中发挥重要作用，如视网膜病变、关节炎、子宫内膜异位症等。肿瘤的生长通常也会伴随着新生血管的形成，早在1971年，J.Folkman就提出可通过阻断肿瘤血管的生成来抑制肿瘤的生长及转移，近年来，研究发现，越来越多的恶性肿瘤其发展、转移、预后与血管内皮细胞生长因子及其受体家族相关。因此，以VEGF及其受体为靶点的抗肿瘤治疗再次受到关注，在受体家族中，以对VEGFR-2为靶点的研究最为广泛。
PD-1(PD-1)是一种由活化的T淋巴细胞和B淋巴细胞表达的关键免疫检查点受体并介导免疫抑制，其配体至少包括PD-L1和PD-L2。抗PD-1抗体特异性地结合程序性死亡受体-1(programmed death-1，PD-1)并阻断抑制PD-1/PD-1配体途径(Topalian等人(2012a)NEngl J Med 366：2443-54)。
PD-L1(Programmed death-ligand 1)又称为CD274或B7-H1，是由CD274基因编码的40kDa的1型跨膜蛋白，是PD-1的一个配体，PD-L1不仅在淋巴和非淋巴组织中的白细胞和非造血细胞上广泛分布，而且还在各种癌细胞中广泛分布，在多种肿瘤细胞表面高表达，而且肿瘤的恶性程度以及不良预后与PD-L1的表达水平密切相关。PD-L1和PD-1两者都属于免疫球蛋白超家族并且都有两个细胞外Ig结构域。PD-L1与程序性死亡受体-1(PD-1)和B7-1(CD80)的结合界面是在IgV样结构域上(Lin等(2008)PNAS 105：3011-3016)。PD-L1含有保守的短的细胞内尾区(约30个氨基酸)，PD-1含有两个基于细胞质酪氨酸的信号基序，即基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)和基于免疫受体酪氨酸的转换基序(ITSM)。在T细胞刺激之后，PD-1将酪氨酸磷酸酶SHP-2募集到其胞质尾区内的ITSM基序，导致参与CD3+T细胞信号传导级联的效应分子(诸如CD3ζ、PKCθ和ZAP70)的去磷酸化(Freeman等(2000)J ExpMed 192：1027-34；Latchman等(2001)Nat Immunol 2:261-8；Carter等(2002)Eur JImmunol32：634-43)。有临床数据表明PD-L1的高肿瘤表达与增加的肿瘤侵袭性和较差的预后相关联。
PD-1/PD-L1是一个重要的特异性免疫检查点，PD-1/PD-L1复合物的形成传输抑制信号并负调节T细胞免疫应答；它抑制TCR介导的T细胞活化、细胞因子产生和T细胞增殖(Fife等(2011)Nature Immunology 10：1185-1193)；诱导同源抗原特异性T细胞之中的衰竭或无反应性(Hofmeyer等(2011)Journal of Biomedicine and Biotechnology 2011：1-9)；促进Th1细胞分化成Foxp3+调节性T细胞(Armanath等(2011)Science TransMed 3：1-13；Francisco等(2009)J.Exp.Med.206：3015-3029)；并诱导效应T细胞的凋亡。PD-L1基因的破坏导致上调的T细胞应答和自身反应性T细胞的产生(Latchman等(2004)PNAS 101：10691-10696)。PD-1或PD-L1的抗体阻断导致增加的抗肿瘤免疫性(Iwai等(2002)PNAS 99：12293-12297)。
CTLA-4也是一个具有代表性的特异性免疫检查点蛋白之一。CTLA-4是首个应用于临床的靶点，抗CTLA-4抗体可促进T细胞活化，提高其抗肿瘤效果。Ipilimumab是首个被证实可以提高经治转移性黑色素瘤患者总生存率且获FDA批准上市的CTLA-4免疫检查点抑制剂。目前的研究表明CTLA-4抑制T细胞的反应主要是通过两种途径：一是通过与CD28竞争性的结合B7或者招募磷酸酶到CTLA-4的胞内结构域部分从而降低TCR(T cell receptor)和CD28的信号。另一种是降低CD80和CD86在抗原呈递细胞(APC)的表达水平或者通过转胞吞作用(transendocytosis)将它们从APC移除，这样就减少了CD28参与进行T细胞激活。此外，CTLA-4还会介导树突细胞结合CD80/CD86并诱导色氨酸降解酶IDO的表达，从而导致TCR的抑制。CTLA-4抗体通过结合CTLA-4来减少Treg，激活TCR
PD-1抗体和CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)抗体药物的联合用药在多种肿瘤上显示出药效优于PD-1抗体单药。然而联合用药药效的提升始终伴随更高的毒性，应用受到了很大限制。
贝伐珠单抗(Bevacizumab)是一种抗血管生成的靶向药物，通过与血管内皮生长因子(VEGF)结合，阻碍血管的生长，抑制肿瘤的转移,是一种广谱抗癌药。上市以来，贝伐单抗主要被获批用于治疗各种类型的癌症，如脑癌(如侵袭性脑癌，例如胶质母细胞瘤)、肾癌、肺癌(如转移性非鳞状非小细胞肺癌)、结肠癌、直肠癌、宫颈癌(如转移性宫颈癌)、子宫内膜癌、卵巢癌(如晚期卵巢癌)或输卵管癌、肾癌等。
发明内容
本发明人发现抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体联合VEGFR2的单克隆抗体或联合抗VEGF的单克隆抗体能够有效地防治肿瘤，毒副作用较低。由此提供了下述发明。
具体地，本发明涉及：
1.抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其优选用于治疗肿瘤，优选所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体与组分A联合施用，其中所述组分A选自抗VEGFR2单克隆抗体或其抗原结合片段，抗VEGF单克隆抗体或其抗原结合片段，或其组合，
其中
(1)所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体包括：
靶向PD-1的第一蛋白功能区，和
靶向CTLA4的第二蛋白功能区；
其中，所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；或者，所述第一蛋白功能区为单链抗体，所述第二蛋白功能区为免疫球蛋白；
其中，
所述的免疫球蛋白，其包含SEQ ID NO:14所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3)，和SEQ ID NO:16所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3)；和所述的单链抗体，其包含SEQ ID NO:2所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3)和SEQ ID NO:4所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3)；
或者，
所述的免疫球蛋白，其包含SEQ ID NO:2所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3)和SEQ ID NO:4所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3)；和所述的单链抗体，其包含SEQ ID NO:14所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3)，和SEQ ID NO:16所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3)；
(2)所述抗VEGFR2单克隆抗体包含SEQ ID NO:50所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:53-55所示的HCDR1－HCDR3)和SEQ ID NO:52所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:56-58所示的LCDR1－LCDR3)；或
(3)所述抗VEGF单克隆抗体包含SEQ ID NO:60所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:63-65所示的HCDR1－HCDR3)和SEQ ID NO:62所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:66-68所示的LCDR1－LCDR3)。
2.根据项目1所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，
(1)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18或其变体；并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16、SEQ IDNO:20或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43或其变体；并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:42、SEQ IDNO:44或其变体；
或者，
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQID NO:10、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43或其变体；并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18或其变体；并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:20或其变体；
(2)所述抗VEGFR2单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:50所示的序列或其变体；并且所述抗VEGFR2单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:52所示的序列或其变体；或
(3)所述抗VEGF单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:60所示的序列或其变体；并且所述抗VEGF单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:62所示的序列或其变体。
3.根据项目1至2中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述双特异性抗体选自如下的(1)－(20)中的任一项：
(1)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示的序列或其变体；
(2)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:6所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；
(3)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:10所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:12所示的序列或其变体；
(4)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示的序列或其变体；
(5)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:6所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；
(6)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:10所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:12所示的序列或其变体；
(7)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；
(8)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；
(9)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:6所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；
(10)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:6所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；
(11)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:所示的序列10或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:12所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；
(12)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:10所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:12所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；
(13)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:41所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:42所示的序列或其变体；
(14)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:43所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:44所示的序列或其变体；
(15)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:41所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:42所示的序列或其变体；
(16)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:43所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:44所示的序列或其变体；
(17)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:41所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:42所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；
(18)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:43所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:44所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；
(19)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:41所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:42所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；
以及，
(20)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:43所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:44所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体，
其中所述变体与对应序列具有至少60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同源性。
4.根据项目1至3中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，
所述免疫球蛋白的重链的氨基酸序列为SEQ ID NO:40所示的序列或其变体，并且其轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO:24所示的序列或其变体，其中所述变体序列与对应序列具有至少60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同源性。
5.根据项目1至4中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区与所述第二蛋白功能区直接连接或者通过连接片段连接；和/或所述单链抗体的重链可变区与所述单链抗体的轻链可变区直接连接或者通过连接片段连接。
6.根据项目5所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述连接片段为(GGGGS)n，n为正整数；优选地，n为1、2、3、4、5或6。
7.根据项目1至6中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区和第二蛋白功能区独立地为1个、2个或者2个以上。
8.根据项目1至7中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述单链抗体(优选重链可变区)连接在免疫球蛋白的重链的C末端。
9.根据项目1至8中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，
所述免疫球蛋白为人IgG1亚型；
其中，按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区具有A突变，所述A突变选自如下突变组合之一：
L234A和L235A；或者
L234A和G237A；或者
L235A和G237A；或者
L234A、L235A、G237A；或者
按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区具有B突变，所述B突变选自如下的一个或多个突变：
N297A、D265A、D270A、P238D、L328E、E233D、H268D、P271G、A330R、C226S、C229S、E233P、P331S、S267E、L328F、A330L、M252Y、S254T、T256E、N297Q、P238S、P238A、A327Q、A327G、P329A、K322A、T394D、G236R、G236A、L328R、A330S、P331S、H268A、E318A和K320A；
或者，按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区具有A突变和B突变的组合；
或者
所述抗VEGFR2单克隆抗体或所述抗VEGF单克隆抗体的重链恒定区为Ig gamma-1chain C region，ACCESSION P01857，轻链恒定区为:Ig kappa chain C region，ACCESSION:P01834。
10.根据项目1至9中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，
其中，所述双特异性抗体包括：
靶向PD-1的第一蛋白功能区，和
靶向CTLA4的第二蛋白功能区；
所述第一蛋白功能区为1个，所述第二蛋白功能区为2个；
其中，所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；
所述免疫球蛋白的重链的氨基酸序列为SEQ ID NO:40所示的序列或其变体，并且其轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO:24所示的序列或其变体，其中所述变体与对应序列具有至少60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同源性；
所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:43所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:44所示的序列或其变体，其中所述变体与对应序列具有至少60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同源性；
所述单链抗体连接在免疫球蛋白的重链的C末端；
所述第一蛋白功能区与所述第二蛋白功能区通过第一连接片段连接；并且所述单链抗体的重链可变区与所述单链抗体的轻链可变区通过第二连接片段连接；所述第一连接片段和所述第二连接片段相同或不同；
优选地，所述第一连接片段和所述第二连接片段的氨基酸序列独立地选自SEQ IDNO:25和SEQ ID NO:26；
优选地，所述第一连接片段和所述第二连接片段的氨基酸序列均如SEQ ID NO:26所示，
优选地，所述抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体轻链序列如SEQ ID NO:72所示，重链序列如SEQ ID NO:70所示，
优选地，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、Fab/c、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如，scFv)、双价抗体或结构域抗体。
11.药物组合物，用于治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)，其包含有效量的项目1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体和项目1-10任一项中定义的组分A，，优选所述药物组合物为固体形式或液体形式，优选地，抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体和组分A的质量比选自(1：5)-(5：1)，例如：1：5、1：4、1：3、1：2、1：1、2：1、3：1、4：1或5：1；任选地，所述药物组合物还包含一种或多种化疗药物(优选所述化疗药为烷化剂，抗代谢药物，抗生素，植物类药物和/或激素类药物，铂类药物(如顺铂、卡铂、奥沙利铂)，阿霉素类，环磷酰胺，紫杉醇，白蛋白紫杉醇，脂质体紫杉醇，多烯紫杉醇，依托泊苷，吉西他滨，培美曲塞，卡培他滨，奥拉帕利、芦卡帕利、尼拉帕利、他拉唑帕利、氟唑帕利，长春碱类，他莫昔芬，甲地孕酮，戈舍瑞林，门冬酰胺酶和/或氟尿嘧啶类抗肿瘤药)。
12.项目1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体在制备用于预防和/或治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)的药物或试剂盒中的应用，优选所述药物或试剂盒还包含项目1-10任一项中定义的组分A，任选地，所述药物或试剂盒还包含一种或多种用于治疗肿瘤的药物(优选所述药物为化疗剂或生长抑制剂(如烷化剂、蒽环类、抗激素剂、芳香酶抑制剂、抗雄激素剂、蛋白激酶抑制剂、脂质激酶抑制剂、反义寡核苷酸、核酶、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒剂或抗肿瘤抗生素、蛋白酶体抑制剂、抗微管剂、EGFR拮抗剂、VEGF拮抗剂、血管生成素2拮抗剂、类视色素、酪氨酸激酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂及其组合)，靶向治疗剂(如B-raf抑制剂、MEK抑制剂、K-ras抑制剂、c-Met抑制剂、Alk抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、Akt抑制剂、mTOR抑制剂、VEGF抑制剂、PARP抑制剂、双磷脂酰肌醇3-激酶/mTOR抑制剂及其组合)、抗体-药物缀合物(如美登新碱、单甲基auristatin E、加利车霉素、esperamicin和放射性同位素螯合剂)、表达嵌合抗原受体的T细胞、抗体或其抗原结合片段、血管生成抑制剂、抗肿瘤剂、癌症疫苗、佐剂及其组合、烷化剂、抗代谢药物、抗生素、植物类药物和/或激素类药物、铂类药物(如顺铂、卡铂、奥沙利铂)、阿霉素类、环磷酰胺、紫杉醇、白蛋白紫杉醇、脂质体紫杉醇、多烯紫杉醇、依托泊苷、吉西他滨、培美曲塞、卡培他滨、奥拉帕利、芦卡帕利、尼拉帕利、他拉唑帕利、氟唑帕利、长春碱类、他莫昔芬、甲地孕酮、戈舍瑞林、门冬酰胺酶和/或氟尿嘧啶类抗肿瘤药)。
13.预防和/或治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)的方法，包括给受试者施用治疗有效量的项目1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，联合施用项目1-10任一项中定义的组分A，更优选地，进一步联合施用一种或多种用于治疗肿瘤的药物(优选所述药物为化疗剂或生长抑制剂(如烷化剂、蒽环类、抗激素剂、芳香酶抑制剂、抗雄激素剂、蛋白激酶抑制剂、脂质激酶抑制剂、反义寡核苷酸、核酶、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒剂或抗肿瘤抗生素、蛋白酶体抑制剂、抗微管剂、EGFR拮抗剂、VEGF拮抗剂、血管生成素2拮抗剂、类视色素、酪氨酸激酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂及其组合)、靶向治疗剂(如B-raf抑制剂、MEK抑制剂、K-ras抑制剂、c-Met抑制剂、Alk抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、Akt抑制剂、mTOR抑制剂、VEGF抑制剂、PARP抑制剂、双磷脂酰肌醇3-激酶/mTOR抑制剂及其组合)、抗体-药物缀合物(如美登新碱、单甲基auristatin E、加利车霉素、esperamicin和放射性同位素螯合剂)、表达嵌合抗原受体的T细胞、抗体或其抗原结合片段、血管生成抑制剂、抗肿瘤剂、癌症疫苗、佐剂及其组合，抗代谢药物，抗生素、植物类药物和/或激素类药物、铂类药物(如顺铂、卡铂、奥沙利铂)、阿霉素类、环磷酰胺、紫杉醇(如白蛋白紫杉醇、脂质体紫杉醇，多烯紫杉醇)、依托泊苷、吉西他滨、培美曲塞、卡培他滨、奥拉帕利、芦卡帕利、尼拉帕利、他拉唑帕利、氟唑帕利、长春碱类、他莫昔芬、甲地孕酮、戈舍瑞林、门冬酰胺酶和/或氟尿嘧啶类抗肿瘤药)，优选地，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体、所述组分A和肿瘤化疗药物同时或顺序施用。
14.试剂盒，用于预防和/或治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)，其含有(a)第一药物组合物，含有项目1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体作为活性成分；和(b)第二药物组合物，其中含有项目1-10任一项中定义的组分A作为活性成分；和任选地(c)一种或多种用于治疗肿瘤的药物(优选所述药物为化疗剂或生长抑制剂(如烷化剂、蒽环类、抗激素剂、芳香酶抑制剂、抗雄激素剂、蛋白激酶抑制剂、脂质激酶抑制剂、反义寡核苷酸、核酶、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒剂或抗肿瘤抗生素、蛋白酶体抑制剂、抗微管剂、EGFR拮抗剂、VEGF拮抗剂、血管生成素2拮抗剂、类视色素、酪氨酸激酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂及其组合)、靶向治疗剂(如B-raf抑制剂、MEK抑制剂、K-ras抑制剂、c-Met抑制剂、Alk抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、Akt抑制剂、mTOR抑制剂、VEGF抑制剂、PARP抑制剂、双磷脂酰肌醇3-激酶/mTOR抑制剂及其组合)、抗体-药物缀合物(如美登新碱、单甲基auristatin E、加利车霉素、esperamicin和放射性同位素螯合剂)、表达嵌合抗原受体的T细胞、抗体或其抗原结合片段、血管生成抑制剂、抗肿瘤剂、癌症疫苗、佐剂及其组合、烷化剂、抗代谢药物、抗生素、植物类药物和/或激素类药物、铂类药物(如顺铂、卡铂、奥沙利铂)、阿霉素类、环磷酰胺、紫杉醇(如白蛋白紫杉醇，脂质体紫杉醇，多烯紫杉醇)、依托泊苷、吉西他滨、培美曲塞、卡培他滨、奥拉帕利、芦卡帕利、尼拉帕利、他拉唑帕利、氟唑帕利、长春碱类、他莫昔芬、甲地孕酮、戈舍瑞林、门冬酰胺酶和/或氟尿嘧啶类抗肿瘤药)。
15.单位制剂，优选用于治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)，其中，所述单位制剂包含：1～1000mg(优选10-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg或200mg)的项目1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，1～1000mg(优选10-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg或200mg)的项目1-10任一项中定义的组分A和任选地一种或多种用于治疗肿瘤的药物(优选所述药物为化疗剂或生长抑制剂(如烷化剂、蒽环类、抗激素剂、芳香酶抑制剂、抗雄激素剂、蛋白激酶抑制剂、脂质激酶抑制剂、反义寡核苷酸、核酶、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒剂或抗肿瘤抗生素、蛋白酶体抑制剂、抗微管剂、EGFR拮抗剂、VEGF拮抗剂、血管生成素2拮抗剂、类视色素、酪氨酸激酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂及其组合)、靶向治疗剂(如B-raf抑制剂、MEK抑制剂、K-ras抑制剂、c-Met抑制剂、Alk抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、Akt抑制剂、mTOR抑制剂、VEGF抑制剂、PARP抑制剂、双磷脂酰肌醇3-激酶/mTOR抑制剂及其组合)、抗体-药物缀合物(如美登新碱、单甲基auristatin E、加利车霉素、esperamicin和放射性同位素螯合剂)、表达嵌合抗原受体的T细胞、抗体或其抗原结合片段、血管生成抑制剂、抗肿瘤剂、癌症疫苗、佐剂及其组合、烷化剂、抗代谢药物、抗生素、植物类药物和/或激素类药物、铂类药物(如顺铂、卡铂、奥沙利铂)、阿霉素类、环磷酰胺、紫杉醇(如白蛋白紫杉醇、脂质体紫杉醇、多烯紫杉醇)、依托泊苷、吉西他滨、培美曲塞、卡培他滨、奥拉帕利、芦卡帕利、尼拉帕利、他拉唑帕利、氟唑帕利、长春碱类、他莫昔芬、甲地孕酮、戈舍瑞林、门冬酰胺酶和/或氟尿嘧啶类抗肿瘤药)；其中，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体、组分A和化疗药分别单独包装。
16.用于预防或治疗癌症或肿瘤的方法，其中，向有需要的受试者给予一份或多份项目15所述的单位制剂，优选地，所述单位制剂中的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，组分A和化疗药各自分开施用。
17.单次药物剂量单元，优选用于治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)，其包含0.1-10000mg(优选1-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg、200mg或100mg)的项目1-10任一项所述的抗CTLA4抗PD-1双特异性抗体，0.1-10000mg(优选1-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg、200mg或100mg)的项目1-10任一项中定义的组分A。
18.项目1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，项目11所述的药物组合物，项目12所述的应用，项目13所述的方法，项目14所述的试剂盒，项目15所述的单位制剂，或，项目16所述的方法，其中
所述肿瘤选自如下的一种或多种：
宫颈癌(如转移性宫颈癌)、肺癌如非小细胞肺癌(例如鳞状非小细胞肺癌或非鳞状非小细胞肺癌)、食管癌、食管鳞癌、回盲部腺癌、壶腹部腺癌、小细胞肺癌、胃癌(例如晚期胃癌、胃腺癌或胃食管结合部腺癌)、肾癌、肾癌子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、前列腺癌、甲状腺癌、腹膜癌、腺癌、胰腺癌、胶质瘤、头颈癌、骨癌、睾丸癌、白血病、骨髓瘤、淋巴瘤、肉瘤、间皮瘤、肝细胞癌、结肠癌、胆癌、胆管癌、直肠癌、结肠癌、子宫内膜癌、卵巢癌(如晚期卵巢癌)或输卵管癌、大细胞神经内分泌癌、尿路上皮癌(例如上尿路上皮癌或膀胱癌)、乳腺癌、三阴乳腺癌、外周T细胞淋巴瘤、黑色素瘤、鼻咽癌，以及高度微卫星不稳定型(MSI-H)或错配修复缺陷型(dMMR)实体瘤、脑癌(如侵袭性脑癌，例如胶质母细胞瘤)、卵巢癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺瘤、粘液性或浆液性囊腺癌、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、绒毛膜上皮癌、恶性葡萄胎、恶性支持细胞-间质细胞瘤、恶性颗粒细胞瘤、无性细胞瘤。
19.项目1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，项目11所述的药物组合物，项目12所述的应用，项目13所述的方法，项目14所述的试剂盒，项目15所述的单位制剂，或，项目16所述的方法，其中所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，组分A和/或所述化疗药为适于静脉注射或静脉滴注的形式，优选液体的形式。
20.根据项目13或16所述的方法，其中，所述给受试者施用有效量的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的步骤为在手术治疗之前或之后，和/或在放射治疗之前或之后。
21.根据项目13或16所述的方法，其中，
抗CTLA4抗PD-1双特异性抗体的单次给药剂量为每千克体重0.1-100mg，优选1-10mg；或者，抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的单次给药剂量为每位受试者10-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg、200mg或100mg；
组分A的单次给药剂量为每千克体重0.1-100mg，优选1-10mg；或者，组分A的单次给药剂量为每位受试者10-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg、200mg或100mg，
优选地，每天两次至约每隔一天一次给药、或每3天、4天、5天、6天、10天、1周、2周或3周给药一次；
优选地，给药方式为静脉滴注或静脉注射。
在一些实施方案中，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体、抗VEGFR2单克隆抗体或抗VEGF单克隆抗体以1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、9mg/kg、10mg/kg，11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、21mg/kg、22mg/kg、23mg/kg、24mg/kg、25mg/kg体重的剂量施用。
在一些实施方案中，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体、抗VEGFR2单克隆抗体或抗VEGF单克隆抗体以能够有效治疗所述癌症的一个或多个统一剂量施用。在一些具体实施方式中，所述统一剂量在大约1mg至大约1000mg的范围内。在一些具体实施方式中，所述统一剂量选自大约100mg、大约150mg、大约200mg、大约250mg、大约300mg、大约350mg、大约400mg、大约450mg、大约500mg、大约600mg、大约700mg、大约800mg、大约900mg、或大约1000mg。
在一些实施方案中，抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体、抗VEGFR2单克隆抗体或抗VEGF单克隆抗体的施用治疗以2周(14天)或3周(21天)为一个周期，优选在每个周期第一天(D1)静脉给予抗PD-1和CTLA4双特异性抗体。即，所述抗PD-1和CTLA4双特异性抗体以每两周一次(q2w)或者每三周一次(q3w)的频率施用。
本发明还提供抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体、抗VEGFR2单克隆抗体和抗VEGF单克隆抗体在制备用于治疗癌症的包括含有固定剂量的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体、抗VEGFR2单克隆抗体(或抗VEGF单克隆抗体)的容器的制品中的用途。在一些具体实施方式中，所述容器是安瓿瓶。所述固定剂量选自大约10mg、大约20mg、大约30mg、大约40mg、大约50mg、大约60mg、大约100mg、大约150mg、大约200mg、大约250mg、大约300mg、大约350mg、大约400mg、大约500mg、或大约1000mg。在一些具体实施方式中，所述制品进一步包括指导使用者为癌症病人施用所述固定剂量的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体、抗VEGFR2单克隆抗体或抗VEGF单克隆抗体的包装插页或药品说明书。在一些具体实施方式中，所述制品包括1个或1个以上的安瓿瓶，所述安瓿瓶含有大约50mg、100mg、200mg、300mg、350mg、400mg、500mg或600mg的、抗VEGFR2单克隆抗体或抗VEGF单克隆抗体。在一些具体实施方式中，所述制品以50mg/5mL/瓶、100mg/10mL/瓶、200mg/10mL/瓶、或350mg/35mL/瓶的抗PD-1和CTLA4双特异性抗体、抗VEGFR2单克隆抗体或抗VEGF单克隆抗体溶液的形式进行包装。
化疗药的用量是本领域的普通技术人员可以确定的。如对于铂类化疗药，以顺铂为例，顺铂的单次给药剂量按照Calvert公式计算：
顺铂剂量(mg)＝所设定的曲线下的面积即AUC(mg/ml/min)×[肌酐清除率(ml/min)+25]，其中，AUC取值为4-7，优选5；
每2-6周给药一次，优选每3周或每4周给药一次；
和/或
给药方式为静脉滴注或静脉注射。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述化疗剂或生长抑制剂选自烷化剂、蒽环类、抗激素剂、芳香酶抑制剂、抗雄激素剂、蛋白激酶抑制剂、脂质激酶抑制剂、反义寡核苷酸、核酶、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒剂或抗肿瘤抗生素、蛋白酶体抑制剂、抗微管剂、EGFR拮抗剂、VEGF拮抗剂、血管生成素2拮抗剂、类视色素、酪氨酸激酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂及其组合。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述靶向治疗剂选自B-raf抑制剂、MEK抑制剂、K-ras抑制剂、c-Met抑制剂、Alk抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、Akt抑制剂、mTOR抑制剂、VEGF抑制剂、PARP抑制剂、双磷脂酰肌醇3-激酶/mTOR抑制剂及其组合。
在本发明的一个或多个实施方案中，所述抗体-药物缀合物包含选自下组的药物：美登新碱、单甲基auristatin E、加利车霉素、esperamicin和放射性同位素螯合剂。
本发明中，一些表述具有如下含义：
药物或治疗剂的“治疗有效量”或“治疗上有效的剂量”是当单独使用或与另一种治疗剂联合使用时保护主体免于疾病发作或促进疾病消退的药物的任何量，所述疾病消退通过疾病征状的严重程度的降低、无疾病征状阶段的频率和持续时间的增加、或由疾病折磨引起的损伤或失能的预防来证明。使用熟练的从业人员已知的多种方法可以评价治疗剂的促进疾病消退的能力，诸如在临床试验期间在人主体中，在预测对于人类的效力的动物模型系统中，或通过在体外测定法中测定所述药剂的活性。
药物的“预防有效量”是指，其为当单独地或与抗肿瘤剂联合施用给处于发生癌症的风险的主体(例如，具有恶化前病症的主体)或具有癌症复发的风险的主体时，抑制癌症的发生或复发的任何药物量。在某些实施方案中，预防有效量完全阻止癌症的发生或复发。“抑制”癌症的发生或复发是指减少癌症的发生或复发的可能性，或完全阻止癌症的发生或复发。
如本文中所使用的，术语“药学上可接受的载体和/或赋形剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences.Edited by Gennaro AR,19thed.Pennsylvania:Mack Publishing Company,1995)，并且包括但不限于：pH调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂。例如，pH调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液；表面活性剂包括但不限于阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂，例如Tween-80；离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。
“复发性”癌症是在对初始治疗(例如手术)产生应答后，在初始部位或远处部位再生的癌症。“局部复发性”癌症是在治疗后，在与先前治疗的癌症相同的位置出现的癌症。
“转移性”癌症是指从身体的一部分(例如肺部)扩散到身体的另一部分的癌症。
轻链和重链的可变区决定抗原的结合：每条链的可变区均含有三个高变区，称互补决定区(CDR)(重链(H)的CDR包含HCDR1、HCDR2、HCDR3，轻链(L)的CDR包含LCDR1、LCDR2、LCDR3；其由Kabat等人命名，见Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition(1991),第1-3卷,NIH Publication 91-3242,Bethesda Md)。在已知抗体重链和轻链可变区序列的情况下，目前有几种确定抗体CDR区的方法，包括Kabat，IMGT，Chothia和AbM编号系统。然而，每种关于抗体或其变体的CDR的定义的应用都将在本文定义和使用的术语的范围内。如果给定该抗体的可变区氨基酸序列，则本领域技术人员通常可确定特定CDR，而不依赖于该序列自身之外的任何实验数据。
药物或治疗剂的“治疗有效量”或“治疗上有效的剂量”是当单独使用或与另一种治疗剂联合使用时保护主体免于疾病发作或促进疾病消退的药物的任何量，所述疾病消退通过疾病征状的严重程度的降低、无疾病征状阶段的频率和持续时间的增加、或由疾病折磨引起的损伤或失能的预防来证明。使用熟练的从业人员已知的多种方法可以评价治疗剂的促进疾病消退的能力，诸如在临床试验期间在人主体中，在预测对于人类的效力的动物模型系统中，或通过在体外测定法中测定所述药剂的活性。
药物的“预防有效量”是指，其为当单独地或与抗肿瘤剂联合施用给处于发生癌症的风险的主体(例如，具有恶化前病症的主体)或具有癌症复发的风险的主体时，抑制癌症的发生或复发的任何药物量。在某些实施方案中，预防有效量完全阻止癌症的发生或复发。“抑制”癌症的发生或复发是指减少癌症的发生或复发的可能性，或完全阻止癌症的发生或复发。
“复发性”癌症是在对初始治疗(例如手术)产生应答后，在初始部位或远处部位再生的癌症。“局部复发性”癌症是在治疗后，在与先前治疗的癌症相同的位置出现的癌症。
“转移性”癌症是指从身体的一部分(例如肺部)扩散到身体的另一部分的癌症。
术语“单次药物剂量单元”表示在给药方案时刻，(优选按照受试者每kg体重)待给药于受试者的包含本发明所述的抗CTLA4抗PD-1双特异性抗体、抗VEGFR2抗体或抗VEGF抗体的单次药物剂型，如注射剂，例如置于安瓿瓶中。在本发明的具体实施方案中，给药方案例如包括根据每天两次至约每隔一天一次的给药周期来给药单次药物剂量单元，或者每3天、4天、5天、6天、10天、1周、2周、3周、4周、5周或6周给药一次。
在本发明中，如果没有特别说明，所述“第一”(例如第一蛋白功能区、第一连接片段)和“第二”(例如第二蛋白功能区、第二连接片段)是为了指代上的区分或表述上的清楚，并不具有典型的次序上的含义。
附图说明
图1.混合淋巴细胞反应MLR检测抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体Cadonilimab与抗VEGFR2抗体HpL3联用促INF-γ分泌的生物活性检测结果。
图2.混合淋巴细胞反应MLR检测Cadonilimab联合贝伐珠单抗促PBMC活化分泌IL-2的生物活性检测结果。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
在本发明的下述实施例中，所用到同型对照抗体anti-HEL为靶向人抗鸡蛋溶酶体(HEL)的抗体，这些抗体的可变区序列来自于Acierno等人发表的Affinity maturationincreases the stability and plasticity of the Fv domain of anti-proteinantibodies(Acierno等人.J Mol Biol.2007；374(1):130-46.其中重链可变区序列为SEQID No:45所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO:47所示)，hIgG1WT(即anti-HEL)的恒定区片段采用Ig gamma-1chain C region，ACCESSION:P01857作为重链恒定区(SEQ ID NO:46)，Ig kappa chain C region，ACCESSION:P01834为轻链恒定区(SEQ ID NO:48)；anti-HEL为在中山康方生物医药有限公司实验室制备而成。
实施例中所使用的贝伐珠单抗(Bevacizumab，抗VEGF单克隆抗体)为罗氏制药生产的商品化药物。
制备例1：抗CTLA4的抗体的序列设计
抗CTLA4的抗体4G10及其人源化抗体4G10H1L1、4G10H3L3的重链和轻链的氨基酸序列、以及编码核酸序列分别与中国专利公开CN106967172A中的4G10、4G10H1L1、4G10H3L3相同。
(1)4G10的重链可变区序列和轻链可变区序列
重链可变区的核酸序列：(372bp，SEQ ID NO:1)
其编码的氨基酸序列：(124aa，SEQ ID NO:2)
轻链可变区的核酸序列：(378bp，SEQ ID NO:3)
其编码的氨基酸序列：(126aa，SEQ ID NO:4)
(2)人源化单克隆抗体4G10H1L1的重链可变区序列和轻链可变区序列
重链可变区(4G10H1V)的核酸序列：(345bp，SEQ ID NO:5)
其编码的氨基酸序列：(115aa，SEQ ID NO:6)
轻链可变区(4G10L1V)的核酸序列：(327bp，SEQ ID NO:7)
其编码的氨基酸序列：(109aa，SEQ ID NO:8)
(3)人源化单克隆抗体4G10H3L3的重链可变区序列和轻链可变区序列
重链可变区(4G10H3V)的核酸序列：(345bp，SEQ ID NO:9)
其编码的重链可变区氨基酸序列(4G10H3V)：(115aa，SEQ ID NO:10)
轻链可变区(4G10L3V)的核酸序列：(327bp，SEQ ID NO:11)其编码的氨基酸序列(4G10L3V)：(109aa，SEQ ID NO:12)
制备例2：抗PD-1的抗体14C12及其人源化抗体14C12H1L1的序列设计
抗PD-1的抗体14C12及其人源化抗体14C12H1L1的重链和轻链的氨基酸序列、以及编码核酸序列分别与中国专利公开CN 106967172A中的14C12、14C12H1L1相同。
(1)14C12的重链可变区序列和轻链可变区序列
重链可变区的核酸序列：(354bp，SEQ ID NO:13)
其编码的氨基酸序列：(118aa，SEQ ID NO:14)
轻链可变区的核酸序列：(321bp，SEQ ID NO:15)
其编码的氨基酸序列：(107aa，SEQ ID NO:16)
(2)人源化单克隆抗体14C12H1L1的重链可变区序列和轻链可变区序列、重链序列和轻链序列
重链可变区的核酸序列：(354bp，SEQ ID NO:17)
其编码的氨基酸序列：(118aa，SEQ ID NO:18)
轻链可变区的核酸序列：(321bp，SEQ ID NO:19)
其编码的氨基酸序列：(107aa，SEQ ID NO:20)
14C12H1L1重链(14C12H1)的DNA序列：(1344bp，
SEQ ID NO:21)
其编码的氨基酸序列：(448aa，SEQ ID NO:22)
14C12H1L1轻链(14C12L1)的DNA序列：(642bp，SEQ ID NO:23)
其编码的氨基酸序列：(214aa，SEQ ID NO:24)
制备例3：双功能抗体CP001(M)、CP002(M)、CP003(M)和CP004(M)的序列设计
双功能抗体CP001(M)、CPb002(M)、CP003(M)和CP004(M)的结构模式属于Morrison模式(IgG-scFv)，即在一个IgG抗体的两条重链的C端均通过连接片段连接另一个抗体的scFv片段，其重链和轻链的设计组成如下面的表A。
表A：CP001(M)、CP002(M)、CP003(M)和CP004(M)的序列设计
Figure BDA0003596610940000241
上面的表A中:
Linker1的氨基酸序列为(GGGGS)3(SEQ ID NO:25)
Linker2的氨基酸序列为(GGGGS)4(SEQ ID NO:26)
另外，上述的表A中，CP001(M)、CP002(M)、CP003(M)和CP004(M)抗体的scFv片段中的4G10H1V(M)、4G10L1V(M)、4G10H3V(M)、4G10L3V(M)是分别在4G10H1V、4G10L1V、4G10H3V、4G10L3V基础上对其骨架区中个别氨基酸进行了突变，有效地优化了抗体的结构，提高了其有效性。
(1)4G10H1V(M)：(115aa，基于4G10H1V所做的氨基酸序列突变位点用下划线标出，SEQ ID NO:41)
(2)4G10L1V(M)：(110aa，基于4G10L1V所做的氨基酸序列突变位点用下划线标出，SEQ ID NO:42)
(3)4G10H3V(M)：(115aa，基于4G10H3V所做的氨基酸序列突变位点用下划线标出，SEQ ID NO:43)
(4)4G10L3V(M)：(110aa，基于4G10L3V所做的氨基酸序列突变位点用下划线标出，SEQ ID NO:44)
为了与下述的突变后的抗体相区分，在本发明实施例中CP004(M)亦称为CP004(hG1WT)。上述的CP004(M)作为“野生型”，其采用Ig gamma-1 chain C region，ACCESSION:P01857作为重链恒定区，Ig kappa chain C region，ACCESSION:P01834为轻链恒定区。
制备例4：基于人源化双功能抗体CP004的非可变区氨基酸突变设计
本发明人在制备例3所获得的CP004(hG1WT)的基础上，通过在其重链的第234号位点引进了亮氨酸到丙氨酸的点突变(L234A)，第235号位点引进了亮氨酸到丙氨酸的点突变(L235A)，第237号位点引进了甘氨酸到丙氨酸的点突变(G237A)，获得了CP004(hG1TM)。
CP004(hG1TM)中的免疫球蛋白部分的重链的DNA序列：(1344bp，突变位点用下划线标出，SEQ ID NO:39)
CP004(hG1TM)中的免疫球蛋白部分的重链的氨基酸序列：(448aa，突变位点用下划线标出，SEQ ID NO:40)
CP004(hG1TM)和CP004(hG1WT)轻链的DNA序列相同，其编码的氨基酸序列也相同，具体序列见制备例3。
制备例5：抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体Cadonilimab的制备
抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体Cadonilimab(即CP004(hG1TM))的结构模式属于Morrison模式(IgG-scFv)，即在一个免疫球蛋白部分(IgG)抗体的两条重链的C端均通过连接片段连接另一个抗体的scFv片段的VH端，其免疫球蛋白部分基于PD-1抗体，scFv片段基于抗CTLA-4抗体，中间由连接片段链接。
本实施例所述的抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体Cadonilimab抗体(即CP004(hG1TM))轻链序列(SEQ ID NO:72)和重链序列(SEQ ID NO:70)序列来源于WHO DrugInformation，Proposed INN:List 124(WHO Drug Information,2020；34(4)：947-949)，制备方法如下述。
将候选单克隆抗体的重链编码基因的DNA序列，包括恒定区和可变区，和轻链编码基因的DNA序列，包括恒定区和可变区，分别克隆到pUC57simple(金斯瑞公司提供)载体中，分别获得pUC57simple-H，pUC57simple-L质粒。
分别将以上质粒进行酶切(HindIII&EcoRI)，电泳回收得到的重链、轻链分别亚克隆到表达载体pcDNA3.1中(购自Invitrogen公司)，提取重组质粒，按pcDNA3.1-H+pcDNA3.1-L进行组合共转染293F细胞。细胞培养7天后，将培养液通过高速离心、上清浓缩后上样至HiTrap MabSelect SuRe柱，使用蛋白纯化液相色谱系统(AKTA Purifier 10，GE)进行纯化。
将纯化后的样品，即抗体Cadonilimab，加入还原型蛋白电泳上样缓冲液和非还原型蛋白电泳上样缓冲液，煮沸后进行SDS-PAGE电泳检测，还原型蛋白样品目标蛋白在70kD和30KD处，非还原型蛋白样品(单个抗体)目标蛋白在200kD处。与理论大小符合，由此得到纯化的抗体。
制备例6：抗VEGFR2抗体HpL3的制备
本实施例所述的抗VEGFR2抗体HpL3的抗体轻链可变区和重链可变区序列及制备方法均引自申请号为CN201610573836.X的专利《一类抗血管内皮生长因子受体VEGFR2的单克隆抗体及其编码基因和应用》。
HpL3的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:50所示，其编码基因的DNA序列如SEQID NO:49所示，重链可变区CDR1-3的序列分别如SEQ ID NO:53-55所示。
HpL3的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:52所示，其编码基因的DNA序列如SEQID NO:51所示，轻链可变区CDR1-3的序列分别如SEQ ID NO:56-58所示。
HpL3采用Ig gamma-1chain C region，ACCESSION:P01857作为重链恒定区，Igkappa chain C region，ACCESSION:P01834为轻链恒定区
将候选单克隆抗体的重链编码基因的DNA序列，包括恒定区和可变区，和轻链编码基因的DNA序列，包括恒定区和可变区，分别克隆到pUC57simple(金斯瑞公司提供)载体中，分别获得pUC57simple-PCABH，pUC57simple-L3质粒。
分别将以上质粒进行酶切(HindIII&EcoRI)，电泳回收得到的重链、轻链分别亚克隆到表达载体pcDNA3.1中(购自Invitrogen公司)，提取重组质粒，按pcDNA3.1-PCABH+pcDNA3.1-L3进行组合共转染293F细胞。细胞培养7天后，将培养液通过高速离心、上清浓缩后上样至HiTrap MabSelect SuRe柱，使用蛋白纯化液相色谱系统(AKTA Purifier 10，GE)进行纯化。
将纯化后的样品，即抗体HpL3，加入还原型蛋白电泳上样缓冲液和非还原型蛋白电泳上样缓冲液，煮沸后进行SDS-PAGE电泳检测，还原型蛋白样品目标蛋白在45kD和30KD处，非还原型蛋白样品(单个抗体)目标蛋白在150kD处。与理论大小符合，由此得到纯化的单克隆抗体。
实施例1.混合淋巴细胞反应MLR检测抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体Cadonilimab与抗VEGFR2抗体HpL3联用促INF-γ分泌的生物活性
Raji-PDL1细胞的制备：
人PD-L1过表达慢病毒载体plenti6.3/V5-PDL1FL-BSD经病毒包装后感染Raji细胞，经10ug/ml BSD(杀稻瘟菌素，Blasticidin)加药筛选后，获得抗药性细胞株Raji-PDL1。plenti6.3/V5-PDL1FL-BSD由供应商南京金斯瑞合成基因PDL1FL(PDL1，Genebank ID:NP_054862.1)，然后通过酶切连接到plenti6.3/V5-BSD(Invitrogen货号k531520)上获得。
实验前两天，复苏PBMC(分离自正常人外周血)，完全培养基培养于37℃，5％二氧化碳培养箱；2h后，待PBMC状态恢复，添加SEB(终浓度0.5μg/mL)(Toxin technology，货号：BT202)刺激两天；实验当天，收集Raji-PDL1细胞，离心重悬计数(用1640+10％FBS重悬)，调整细胞密度至2×106/mL，加入MMC(Mito-mycin C，终浓度为2μg/mL，丝裂霉素C，厂家：Stressmarq，货号：SIH-246)于37℃，5％二氧化碳培养箱处理1小时；收集SEB刺激两天后的PBMC以及MMC处理后的Raji-PDL1细胞，用1640基础培养基洗涤两次，完全培养基重悬细胞计数，按PBMC 1×105/孔、Raji-PDL1 1×105/孔(各50μL/孔)接种到96孔U型板中(3799)；按实验设计加药，并设置空白对照和阴性对照，共培养3天(体系终体积为200μL)；3天后，250xg离心5min(Beckman离心机)，收集细胞上清，达科为试剂盒检测IFN-γ含量。
如图1所示，在PBMC、Raji-PDL1细胞混合培养体系中，加入Cadonilimab和HpL3抗体均能显著诱导PBMC进一步分泌IFN-γ，具有显著剂量依赖关系，促IFN-γ分泌活性水平方面，与Cadonilimab和HpL3抗体单药相比，Cadonilimab和HpL3联用具有更佳的促IFN-γ分泌潜能。实施例2.混合淋巴细胞反应MLR检测Cadonilimab联合贝伐珠单抗促PBMC活化分泌IL-2的生物活性
实验前两天，复苏PBMC(分离自健康志愿者知情同意后自愿捐献的外周血)，完全培养基培养于37℃，5％二氧化碳培养箱；2h后，待PBMC状态恢复，添加SEB(终浓度0.5μg/mL)(Toxin technology，货号：BT202)刺激两天；实验当天，收集Raji-PDL1(康方生物构建)细胞，离心重悬计数(用1640+10％FBS重悬)，调整细胞密度至2×106/mL，加入MMC(Mito-mycin C，终浓度为2μg/mL)(丝裂霉素C，厂家：Stressmarq，货号：SIH-246)于37℃，5％二氧化碳培养箱处理1小时；收集SEB刺激两天后的PBMC以及MMC处理后的Raji-PDL1细胞，用1640基础培养基洗涤两次，分析培养基重悬细胞计数，按PBMC 1×105/孔、Raji-PDL1 1×105/孔(各40μL/孔)接种到96孔U型板中(3799)；常规消化收集Hela细胞(购自中国科学院)，按2×104/孔(40μL/孔)接种到96孔U型板中(3799)；按实验设计加药，并设置阴性对照和同型对照，共培养3天(体系终体积为200μL)；3天后，250xg离心5min(Beckman离心机)，收集细胞上清，达科为试剂盒检测IL-2含量。
如图2所示，在PBMC、Raji-PDL1、Hela(宫颈癌)细胞以及VEGF(批号：20180126-1，康方生物生产)的混合培养体系中，加入Cadonilimab和贝伐珠单抗均能显著诱导PBMC进一步分泌IL-2，具有显著剂量依赖关系，促IL-2分泌活性水平方面，与Cadonilimab和贝伐珠单抗单药相比，Cadonilimab和贝伐珠单抗联用具有更佳的促IL-2分泌潜能。
贝伐珠单抗的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:60所示，其编码基因的DNA序列如SEQ ID NO:59所示，重链可变区CDR1-3的序列分别如SEQ ID NO:63-65所示。贝伐珠单抗的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:62所示，其编码基因的DNA序列如SEQ ID NO:61所示，轻链可变区CDR1-3的序列分别如SEQ ID NO:66-68所示。
序列表：
SEQ ID No.1：4G10重链可变区的核酸序列
caggtcaagctgcaggagtctggacctgagctggtgaagcctggagcttcaatgaagatatcctgcaaggcttctggttactcattcactggctacaccatgaactgggtgaagcagagccatggaaagaaccttgaatggattggacttattaatccttacaataatattactaactacaaccagaagttcatgggcaaggccacatttactgtagacaagtcatccagcacagcctacatggaactcctcagactgacatctgaagactctggagtctatttctgtgcaagactcgactataggtcttattggggccaagggactctggtcactgtctctgcagccaaaacgacacccccatctgtct at
SEQ ID No.2：4G10重链可变区的氨基酸序列
QVKLQESGPELVKPGASMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWIGLINPYNNITNYNQKFMGKATFTVDKSSSTAYMELLRLTSEDSGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVY
SEQ ID No.3：4G10轻链可变区的核酸序列
caggctgttgtgactcaggaatctgcactcaccacatcacctggtgaaacagtcacactcacttgtcgctcaagtactggggctgttacaactagtaactttgccaactgggtccaagaaaaaccagatcatttattcactagtctaataggtggtaccaacaaccgagctccaggtgttcctgccagattctcaggctccctgattggagacaaggctgccctcaccatcacaggggcacagactgaggatgaggcaatatatttctgtgctctatggtacagcaaccattgggtgttcggtggaggaaccaaactgactgtcctaggccagcccaagtcttcgccatcagtcaccctgtttcaagggcaattctgc
SEQ ID No.4：4G10轻链可变区的氨基酸序列
QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNFANWVQEKPDHLFTSLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVLGQPKSSPSVTLFQGQFC
SEQ ID No.5：4G10H1L1重链可变区的核酸序列
caggtgcagctggtggagtctggggccgagctggtgaagcccggcgcctccatgaagatctcttgcaaggccagcggatacagtttcactggctataccatgaactgggtcaaacaggctccaggacagggactggagtggatcgggctgattaatccttacaacaacatcaccaactacaaccagaagttcatgggaaaagcaacctttacagtggacaagagcatttccacagcctacatggaactgagccggctgacttcagacgatagcggggtctatttttgtgcaaggctggattatcgctcttactgggggcagggaactctggtcactgtctccgct
SEQ ID No.6：4G10H1L1重链可变区的氨基酸序列
QVQLVESGAELVKPGASMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQAPGQGLEWIGLINPYNNITNYNQKFMGKATFTVDKSISTAYMELSRLTSDDSGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA
SEQ ID No.7：4G10H1L1轻链可变区的核酸序列
caggctgtcgtcactcaggaaccttcactgactgtgagcccaggaggaactgtcaccctgacatgcggaagctccaccggagcagtgaccacatccaacttcgccaattgggtccaggaaaagccaggccaggcatttcgatccctgatcggaggcacaaacaatcgggcttcttgggtgcccgcaagattctcaggaagcctgctggggggaaaagccgctctgaccattagtggcgctcagcctgaggacgaagccgagtacttctgcgctctgtggtatagcaaccactgggtgtttggcgggggaacaaagctgactgtgctg
SEQ ID No.8：4G10H1L1轻链可变区的氨基酸序列
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFANWVQEKPGQAFRSLIGGTNNRASWVPARFSGSLLGGKAALTISGAQPEDEAEYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVL
SEQ ID No.9：4G10H3L3重链可变区的核酸序列
caggtgcagctggtcgagtctggggccgaagtgaagaaacccggcgcctcagtgaaggtcagctgcaaggccagcgggtacagtttcactggatataccatgaactgggtccgacaggcccctggccaggggctggagtggatcggcctgattaacccttacaacaacatcactaactacgcacagaagttccaggggagagtgacctttacagtggacaccagcatttccacagcctacatggaactgtcccggctgagatctgacgatacaggcgtgtacttctgcgctaggctggattaccgcagctattggggacagggcacactggtgactgtcagcgca
SEQ ID No.10：4G10H3L3重链可变区的氨基酸序列
QVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQGLEWIGLINPYNNITNYAQKFQGRVTFTVDTSISTAYMELSRLRSDDTGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA
SEQ ID No.11：4G10H3L3轻链可变区的核酸序列
caggctgtcgtcactcaggaaccttcactgaccgtgtctcctggcgggactgtcaccctgacatgcggcagctccacaggggccgtgaccacaagtaacttcccaaattgggtccagcagaagccaggacaggctccccggagtctgatcggaggcaccaacaacaaggccagctggacacccgcacggttcagcggcagcctgctgggcggcaaggccgctctgacaattagcggagcccagcctgaggacgaagccgagtactattgcgctctgtggtactccaaccactgggtgttcggcggcggcaccaagctgactgtgctg
SEQ ID No.12：4G10H3L3轻链可变区的氨基酸序列
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFPNWVQQKPGQAPRSLIGGTNNKASWTPARFSGSLLGGKAALTISGAQPEDEAEYYCALWYSNHWVFGGGTKLTVL
SEQ ID No.13：14C12重链可变区的核酸序列
gaggtcaaactggtggagagcggcggcgggctggtgaagcccggcgggtcactgaaactgagctgcgccgcttccggcttcgcctttagctcctacgacatgtcatgggtgaggcagacccctgagaagcgcctggaatgggtcgctactatcagcggaggcgggcgatacacctactatcctgactctgtcaaagggagattcacaattagtcgggataacgccagaaatactctgtatctgcagatgtctagtctgcggtccgaggatacagctctgtactattgtgcaaaccggtacggcgaagcatggtttgcctattggggacagggcaccctggtgacagtctctgcc
SEQ ID No.14：14C12重链可变区的氨基酸序列
EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVATISGGGRYTYYPDSVKGRFTISRDNARNTLYLQMSSLRSEDTALYYCANRYGEAWFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID No.15：14C12轻链可变区的核酸序列
gacattaagatgacacagtccccttcctcaatgtacgctagcctgggcgagcgagtgaccttcacatgcaaagcatcccaggacatcaacacatacctgtcttggtttcagcagaagccaggcaaaagccccaagaccctgatctaccgggccaatagactggtggacggggtccccagcagattctccggatctggcagtgggcaggattactccctgaccatcagctccctggagtatgaagacatgggcatctactattgcctgcagtatgatgagttccctctgacctttggagcaggcacaaaactggaactgaag
SEQ ID No.16：14C12轻链可变区的氨基酸序列
DIKMTQSPSSMYASLGERVTFTCKASQDINTYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRL VDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELK
SEQ ID No.17：14C12H1L1重链可变区的核酸序列
gaagtgcagctggtcgagtctgggggagggctggtgcagcccggcgggtcactgcgactgagctgcgcagcttccggattcgcctttagctcctacgacatgtcctgggtgcgacaggcaccaggaaagggactggattgggtcgctactatctcaggaggcgggagatacacctactatcctgacagcgtcaagggccggttcacaatctctagagataacagtaagaacaatctgtatctgcagatgaacagcctgagggctgaggacaccgcactgtactattgtgccaaccgctacggggaagcatggtttgcctattgggggcagggaaccctggtgacagtctctagt
SEQ ID No.18：14C12H1L1重链可变区的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSSYDMSWVRQAPGKGLDWVATISGGGRYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNNLYLQMNSLRAEDTALYYCANRYGEAWFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID No.19：14C12H1L1轻链可变区的核酸序列
gacattcagatgactcagagcccctcctccatgtccgcctctgtgggcgacagggtcaccttcacatgccgcgctagtcaggatatcaacacctacctgagctggtttcagcagaagccagggaaaagccccaagacactgatctaccgggctaatagactggtgtctggagtcccaagtcggttcagtggctcagggagcggacaggactacactctgaccatcagctccctgcagcctgaggacatggcaacctactattgcctgcagtatgatgagttcccactgacctttggcgccgggacaaaactggagctgaag
SEQ ID No.20：14C12H1L1轻链可变区的氨基酸序列
DIQMTQSPSSMSASVGDRVTFTCRASQDINTYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANR LVSGVPSRFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDMATYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELK
SEQ ID No.21：14C12H1L1重链(14C12H1)的DNA序列(1344bp)
GAAGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGGCTGGTGCAGCCCGGCGGGTCACTGCGACTGAGCTGCGCAGCTTCCGGATTCGCCTTTAGCTCCTACGACATGTCCTGGGTGCGACAGGCACCAGGAAAGGGACTGGATTGGGTCGCTACTATCTCAGGAGGCGGGAGATACACCTACTATCCTGACAGCGTCAAGGGCCGGTTCACAATCTCTAGAGATAACAGTAAGAACAATCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCTGAGGACACCGCACTGTACTATTGTGCCAACCGCTACGGGGAAGCATGGTTTGCCTATTGGGGGCAGGGAACCCTGGTGACAGTCTCTAGTGCCAGCACCAAAGGACCTAGCGTGTTTCCTCTCGCCCCCTCCTCCAAAAGCACCAGCGGAGGAACCGCTGCTCTCGGATGTCTGGTGAAGGACTACTTCCCTGAACCCGTCACCGTGAGCTGGAATAGCGGCGCTCTGACAAGCGGAGTCCATACATTCCCTGCTGTGCTGCAAAGCAGCGGACTCTATTCCCTGTCCAGCGTCGTCACAGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTCAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAATCCTGCGACAAGACACACACCTGTCCCCCCTGTCCTGCTCCCGAACTCCTCGGAGGCCCTAGCGTCTTCCTCTTTCCTCCCAAACCCAAGGACACCCTCATGATCAGCAGAACCCCTGAAGTCACCTGTGTCGTCGTGGATGTCAGCCATGAGGACCCCGAGGTGAAATTCAACTGGTATGTCGATGGCGTCGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAGGAACAGTACAACTCCACCTACAGGGTGGTGTCCGTGCTGACAGTCCTCCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGCTCTCCCTGCCCCCATTGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAAGGCCAACCCAGGGAGCCCCAGGTCTATACACTGCCTCCCTCCAGGGACGAACTCACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTCAAGGGCTTTTATCCCAGCGACATCGCCGTCGAGTGGGAGTCCAACGGACAGCCCGAGAATAACTACAAGACCACCCCTCCTGTCCTCGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAAAGCAGGTGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTCCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGTCCCTGAGCCCCGGCAAA
SEQ ID No.22：14C12H1L1重链(14C12H1)编码的氨基酸序列(448aa)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSSYDMSWVRQAPGKGLDWVATISGGGRYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNNLYLQMNSLRAEDTALYYCANRYGEAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID No.23：14C12H1L1轻链(14C12L1)的DNA序列(642bp)
GACATTCAGATGACTCAGAGCCCCTCCTCCATGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGGGTCACCTTCACATGCCGCGCTAGTCAGGATATCAACACCTACCTGAGCTGGTTTCAGCAGAAGCCAGGGAAAAGCCCCAAGACACTGATCTACCGGGCTAATAGACTGGTGTCTGGAGTCCCAAGTCGGTTCAGTGGCTCAGGGAGCGGACAGGACTACACTCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCTGAGGACATGGCAACCTACTATTGCCTGCAGTATGATGAGTTCCCACTGACCTTTGGCGCCGGGACAAAACTGGAGCTGAAGCGAACTGTGGCCGCTCCCTCCGTCTTCATTTTTCCCCCTTCTGACGAACAGCTGAAATCAGGCACAGCCAGCGTGGTCTGTCTGCTGAACAATTTCTACCCTAGAGAGGCAAAAGTGCAGTGGAAGGTCGATAACGCCCTGCAGTCCGGCAACAGCCAGGAGAGTGTGACTGAACAGGACTCAAAAGATAGCACCTATTCCCTGTCTAGTACACTGACTCTGTCCAAGGCTGATTACGAGAAGCACAAAGTGTATGCATGCGAAGTGACACATCAGGGACTGTCAAGCCCCGTGACTAAGTCTTTTAACCGGGGCGAATGT
SEQ ID No.24：14C12H1L1轻链(14C12L1)编码的氨基酸序列(214aa)
DIQMTQSPSSMSASVGDRVTFTCRASQDINTYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDMATYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID No.25：Linker1的氨基酸序列
GGGGSGGGGSGGGGS
SEQ ID No.26：Linker2的氨基酸序列
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
SEQ ID No.27：14C12的HCDR1：GFAFSSYD
SEQ ID No.28：14C12的HCDR2：ISGGGRYT
SEQ ID No.29：14C12的HCDR3：ANRYGEAWFAY
SEQ ID No.30：14C12的LCDR1：QDINTY
SEQ ID No.31：14C12的LCDR2：RAN
SEQ ID No.32：14C12的LCDR3：LQYDEFPLT
SEQ ID No.33：4G10的HCDR1：GYSFTGYT
SEQ ID No.34：4G10的HCDR2：INPYNNIT
SEQ ID No.35：4G10的HCDR3：ARLDYRSY
SEQ ID No.36：4G10的LCDR1：TGAVTTSNF
SEQ ID No.37：4G10的LCDR2：GTN
SEQ ID No.38：4G10的LCDR3：ALWYSNHWV
SEQ ID No.39：CP004(hG1TM)的免疫球蛋白部分的重链的DNA序列，突变位点用下划线标出
GAAGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGGCTGGTGCAGCCCGGCGGGTCACTGCGACTGAGCTGCGCAGCTTCCGGATTCGCCTTTAGCTCCTACGACATGTCCTGGGTGCGACAGGCACCAGGAAAGGGACTGGATTGGGTCGCTACTATCTCAGGAGGCGGGAGATACACCTACTATCCTGACAGCGTCAAGGGCCGGTTCACAATCTCTAGAGATAACAGTAAGAACAATCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCTGAGGACACCGCACTGTACTATTGTGCCAACCGCTACGGGGAAGCATGGTTTGCCTATTGGGGGCAGGGAACCCTGGTGACAGTCTCTAGTGCCAGCACCAAAGGGCCCAGCGTGTTTCCTCTCGCCCCCTCCTCCAAAAGCACCAGCGGAGGAACCGCTGCTCTCGGATGTCTGGTGAAGGACTACTTCCCTGAACCCGTCACCGTGAGCTGGAATAGCGGCGCTCTGACAAGCGGAGTCCATACATTCCCTGCTGTGCTGCAAAGCAGCGGACTCTATTCCCTGTCCAGCGTCGTCACAGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTCAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAATCCTGCGACAAGACACACACCTGTCCCCCCTGTCCTGCTCCCGAAGCTGCTGGAGCCCCTAGCGTCTTCCTCTTTCCTCCCAAACCCAAGGACACCCTCATGATCAGCAGAACCCCTGAAGTCACCTGTGTCGTCGTGGATGTCAGCCATGAGGACCCCGAGGTGAAATTCAACTGGTATGTCGATGGCGTCGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAGGAACAGTACAACTCCACCTACAGGGTGGTGTCCGTGCTGACAGTCCTCCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGCTCTCCCTGCCCCCATTGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAAGGCCAACCCAGGGAGCCCCAGGTCTATACACTGCCTCCCTCCAGGGACGAACTCACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTCAAGGGCTTTTATCCCAGCGACATCGCCGTCGAGTGGGAGTCCAACGGACAGCCCGAGAATAACTACAAGACCACCCCTCCTGTCCTCGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAAAGCAGGTGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTCCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGTCCCTGAGCCCCGGCAAA
SEQ ID No.40：CP004(hG1TM)中的免疫球蛋白部分的重链的氨基酸序列，突变位点用下划线标出
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSSYDMSWVRQAPGKGLDWVATISGGGRYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNNLYLQMNSLRAEDTALYYCANRYGEAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID No.41：4G10H1V(M)的氨基酸序列，突变位点用下划线标出
QVQLVESGAELVKPGASMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQAPGQCLEWIGLINPYNNITNYNQKFMGKATFTVDKSISTAYMELSRLTSDDSGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA
SEQ ID No.42：4G10L1V(M)的氨基酸序列，突变位点用下划线标出
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFANWVQEKPGQAFRSLIGGTNNRASWVPARFSGSLLGGKAALTISGAQPEDEAEYFCALWYSNHWVFGCGTKLTVLR
SEQ ID No.43：4G10H3V(M)的氨基酸序列，突变位点用下划线标出
QVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQCLEWIGLINPYNNITNYAQKFQGRVTFTVDTSISTAYMELSRLRSDDTGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA
SEQ ID No.44：4G10L3V(M)的氨基酸序列，突变位点用下划线标出
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFPNWVQQKPGQAPRSLIGGTNNKASWTPARFSGSLLGGKAALTISGAQPEDEAEYYCALWYSNHWVFGCGTKLTVLR
SEQ ID No:45:hIgG的重链可变区序列
EVQLEQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFTTYWIEWIKQRPGHSLEWIGEILPGSDSTYYNEKVKGKVTFTADASSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGDGFYVYWGQGTTLTVSS
SEQ ID No:46hIgG的重链恒定区序列
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID No:47hIgG的轻链可变区序列
DIELTQSPATLSVTPGDSVSLSCRASQSISNNLHWYQQKSHESPRLLIKYTSQSMSGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVETEDFGVYFCQQSGSWPRTFGGGTKLDIK
SEQ ID No:48hIgG的轻链恒定区序列
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID No:49HpL3重链可变区的核酸序列(VEGFR2)
GAAGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGGGGGACTGGTGAAGCCCGGCGGGTCCCTGCGACTGTCTTGCGCCGCTAGTGGCTTCACCTTCAGCTCCTACTCTATGAACTGGGTGAGACAGGCCCCTGGAAAAGGCCTGGAGTGGGTCTCTAGTATCTCAAGCTCCTCTAGTTACATCTACTATGCCGACAGCGTGAAGGGGCGGTTCACCATCTCAAGAGATAACGCTAAAAATAGTCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCAGAAGACACTGCCGTGTACTATTGTGCTCGCGT CACCGACGCATTTGATATTTGGGGGCAGGGAACCATGGTGACAGTCTCAAGC(注：下划线表示CDR序列)
SEQ ID No:50HpL3重链可变区的氨基酸序列
EVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVTDAFDIWGQGTMVTVSS(注：下划线表示CDR序列)
SEQ ID No:51HpL3轻链可变区的核酸序列
GACATTCAGATGACTCAGAGCCCTTCTTCAGTGTCCGCCTCTATCGGCGACCGGGTCACCATTACATGCAGAGCTTCCCAGGGCCTCGATAACTGGCTGGGGTGGTACCAGCAGAAGCCTGGGAAAGCCCCAAAGCTGCTGATCTACGACGCTTCCAATCTGGATACCGGAGTGCCATCTCGATTCAGTGGCTCAGGGAGCGGAACATACTTTACTCTGACCATCAGCTCCCTGCAGGCTGAGGACTTCGCAGTGTATTTTTGCCAGCAGGCAAAGGCCTTCCCTCCCACCTTTGGCGGGGGAACAAAAGTGGACATCAAG(注：下划线表示CDR序列)
SEQ ID No:52HpL3轻链可变区的氨基酸序列
DIQMTQSPSSVSASIGDRVTITCRASQGLDNWLGWYQQKPGKAPKLLIYDASNLDTGVPSRFSGSGSGTYFTLTISSLQAEDFAVYFCQQAKAFPPTFGGGTKVDIK(注：下划线表示CDR序列)
HpL3重链可变区的HCDR1-HCDR3
HCDR1：GFTFSSYS(SEQ ID NO：53)
HCDR2：ISSSSSYI(SEQ ID NO：54)
HCDR3：ARVTDAFDI(SEQ ID NO：55)
HpL3轻链可变区的LCDR1-LCDR3
LCDR1：QGLDNW(SEQ ID NO：56)
LCDR2：DAS(SEQ ID NO：57)
LCDR3：QQAKAFPPT(SEQ ID NO：58)
SEQ ID No:59Bevacizumab重链可变区的核酸序列(VEGF)
GAGGTGCAGCTGGTCGAGTCCGGGGGGGGGCTGGTGCAGCCAGGCGGGTCTCTGAGGCTGAGTTGCGCCGCTTCAGGGTACACCTTCACAAACTATGGAATGAATTGGGTGCGCCAGGCACCAGGAAAGGGACTGGAGTGGGTCGGCTGGATCAACACTTACACCGGGGAACCTACCTATGCAGCCGACTTTAAGCGGCGGTTCACCTTCAGCCTGGATACAAGCAAATCCACTGCCTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGAGCTGAGGACACCGCAGTCTACTATTGTGCTAAATATCCCCACTACTATGGGAGCAGCCATTGGTATTTTGACGTGTGGGGGCAGGGGACTCTGGTGACAGTGAGCAGC
SEQ ID No:60Bevacizumab重链可变区的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
SEQ ID No:61Bevacizumab轻链可变区的核酸序列
GATATTCAGATGACTCAGAGCCCCTCCTCCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGGGTCACCATCACATGCAGTGCTTCACAGGATATTTCCAACTACCTGAATTGGTATCAGCAGAAGCCAGGAAAAGCACCCAAGGTGCTGATCTACTTCACTAGCTCCCTGCACTCAGGAGTGCCAAGCCGGTTCAGCGGATCCGGATCTGGAACCGACTTTACTCTGACCATTTCTAGTCTGCAGCCTGAGGATTTCGCTACATACTATTGCCAGCAGTATTCTACCGTGCCATGGACATTTGGCCAGGGGACTAAAGTCGAGATCAAG
SEQ ID No:62Bevacizumab轻链可变区的氨基酸序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIK
Bevacizumab重链可变区的3个CDR区的氨基酸序列如下：
HCDR1:GYTFTNYG(SEQ ID NO:63)
HCDR2:INTYTGEP(SEQ ID NO:64)
HCDR3:AKYPHYYGSSHWYFDV(SEQ ID NO:65)
Bevacizumab轻链可变区的3个CDR区的氨基酸序列如下：
LCDR1:QDISNY(SEQ ID NO:66)
LCDR2:FTS(SEQ ID NO:67)
LCDR3:QQYSTVPWT(SEQ ID NO:68)
SEQ ID No.69CP004(hG1TM)重链的核酸序列
GAAGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGGCTGGTGCAGCCCGGCGGGTCACTGCGACTGAGCTGCGCAGCTTCCGGATTCGCCTTTAGCTCCTACGACATGTCCTGGGTGCGACAGGCACCAGGAAAGGGACTGGATTGGGTCGCTACTATCTCAGGAGGCGGGAGATACACCTACTATCCTGACAGCGTCAAGGGCCGGTTCACAATCTCTAGAGATAACAGTAAGAACAATCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCTGAGGACACCGCACTGTACTATTGTGCCAACCGCTACGGGGAAGCATGGTTTGCCTATTGGGGGCAGGGAACCCTGGTGACAGTCTCTAGTgccagcaccaaagggcccagcgtgtttcctctcgccccctcctccaaaagcaccagcggaggaaccgctgctctcggatgtctggtgaaggactacttccctgaacccgtcaccgtgagctggaatagcggcgctctgacaagcggagtccatacattccctgctgtgctgcaaagcagcggactctattccctgtccagcgtcgtcacagtgcccagcagcagcctgggcacccagacctacatctgtaacgtcaaccacaagccctccaacaccaaggtggacaagaaagtggagcccaaatcctgcgacaagacacacacctgtcccccctgtcctgctcccgaaGCTGCTggagCccctagcgtcttcctctttcctcccaaacccaaggacaccctcatgatcagcagaacccctgaagtcacctgtgtcgtcgtggatgtcagccatgaggaccccgaggtgaaattcaactggtatgtcgatggcgtcgaggtgcacaacgccaaaaccaagcccagggaggaacagtacaactccacctacagggtggtgtccgtgctgacagtcctccaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggctctccctgcccccattgagaagaccatcagcaaggccaaaggccaacccagggagccccaggtctatacactgcctccctccagggacgaactcaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctggtcaagggcttttatcccagcgacatcgccgtcgagtgggagtccaacggacagcccgagaataactacaagaccacccctcctgtcctcgactccgacggctccttcttcctgtacagcAAACTGACCGTGGATAAGTCCAGATGGCAGCAGGGCAATGTCTTTTCATGTTCCGTGATGCACGAGGCACTGCACAACCACTATACCCAGAAGTCTCTGAGTCTGTCACCAGGAAAAGGAGGAGGAGGCTCTGGAGGAGGCGGAAGTGGAGGCGGAGGATCAGGAGGGGGAGGATCTCAGGTGCAGCTGGTCGAATCCGGAGCCGAGGTGAAGAAACCCGGCGCTTCCGTGAAGGTCTCTTGCAAAGCATCAGGCTACAGCTTCACAGGGTATACTATGAACTGGGTGCGGCAGGCACCTGGACAGTGTCTGGAATGGATCGGCCTGATTAACCCATACAACAACATCACTAACTACGCCCAGAAGTTCCAGGGCCGGGTGACTTTTACCGTGGACACTAGCATTTCCACCGCTTACATGGAGCTGAGTCGGCTGAGATCAGACGATACCGGCGTGTATTTTTGCGCAAGGCTGGATTACAGAAGTTATTGGGGACAGGGAACACTTGTTACAGTCTCTGCTGGAGGAGGCGGATCTGGAGGAGGAGGATCTGGCGGAGGAGGCAGTGGAGGAGGAGGATCACAGGCTGTGGTTACTCAGGAACCAAGCCTGACCGTGAGCCCCGGAGGCACAGTCACTCTGACCTGTGGGAGCTCCACAGGAGCTGTGACCACATCTAACTTCCCTAATTGGGTGCAGCAGAAGCCAGGACAGGCACCTCGATCCCTGATCGGGGGAACCAACAACAAGGCCAGCTGGACACCCGCCAGATTTTCTGGCAGTCTGCTGGGCGGGAAAGCCGCTCTGACCATTAGCGGCGCTCAGCCTGAGGACGAAGCAGAGTACTATTGCGCCCTGTGGTATAGTAATCATTGGGTGTTCGGGTGTGGGACAAAACTGACCGTGCTGAGA
SEQ ID No.70CP004(hG1TM)重链的氨基酸序列(全长)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSSYDMSWVRQAPGKGLDWVATISGGGRYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNNLYLQMNSLRAEDTALYYCANRYGEAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQCLEWIGLINPYNN ITNYAQKFQGRVTFTVDTSISTAYMELSRLRSDDTGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFPNWVQQKPGQAPRSLIGGTNNKASWTPARFSGSLLGGKAALTISGAQPEDEAEYYCALWYSNHWVFGCGTKLTVLR(注：下划线表示CDR序列)
SEQ ID No.71CP004(hG1TM)轻链的核酸序列
GACATTCAGATGACTCAGAGCCCCTCCTCCATGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGGGTCACCTTCACATGCCGCGCTAGTCAGGATATCAACACCTACCTGAGCTGGTTTCAGCAGAAGCCAGGGAAAAGCCCCAAGACACTGATCTACCGGGCTAATAGACTGGTGTCTGGAGTCCCAAGTCGGTTCAGTGGCTCAGGGAGCGGACAGGACTACACTCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCTGAGGACATGGCAACCTACTATTGCCTGCAGTATGATGAGTTCCCACTGACCTTTGGCGCCGGGACAAAACTGGAGCTGAAGCGAACTGTGGCCGCTCCCTCCGTCTTCATTTTTCCCCCTTCTGACGAACAGCTGAAATCAGGCACAGCCAGCGTGGTCTGTCTGCTGAACAATTTCTACCCTAGAGAGGCAAAAGTGCAGTGGAAGGTCGATAACGCCCTGCAGTCCGGCAACAGCCAGGAGAGTGTGACTGAACAGGACTCAAAAGATAGCACCTATTCCCTGTCTAGTACACTGACTCTGTCCAAGGCTGATTACGAGAAGCACAAAGTGTATGCATGCGAAGTGACACATCAGGGACTGTCAAGCCCCGTGACTAAGTCTTTTAACCGGGGCGAATGT
SEQ ID No.72CP004(hG1TM)轻链的氨基酸序列(全长)
DIQMTQSPSSMSASVGDRVTFTCRASQDINTYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDMATYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

Claims (21)

1.抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其优选用于治疗肿瘤，优选所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体与组分A联合施用，所述组分A选自抗VEGFR2单克隆抗体或其抗原结合片段，抗VEGF单克隆抗体或其抗原结合片段，或其组合，
其中
(1)所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体包括：
靶向PD-1的第一蛋白功能区，和
靶向CTLA4的第二蛋白功能区；
其中，所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；或者，所述第一蛋白功能区为单链抗体，所述第二蛋白功能区为免疫球蛋白；
其中，
所述的免疫球蛋白，其包含SEQ ID NO:14所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3)，和SEQ ID NO:16所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3)；和所述的单链抗体，其包含SEQ ID NO:2所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3)和SEQ ID NO:4所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3)；
或者，
所述的免疫球蛋白，其包含SEQ ID NO:2所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:33－35所示的HCDR1－HCDR3)和SEQ ID NO:4所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:36－38所示的LCDR1－LCDR3)；和所述的单链抗体，其包含SEQ ID NO:14所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:27－29所示的HCDR1－HCDR3)，和SEQ ID NO:16所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:30－32所示的LCDR1－LCDR3)；
(2)所述抗VEGFR2单克隆抗体包含SEQ ID NO:50所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:53-55所示的HCDR1－HCDR3)和SEQ ID NO:52所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:56-58所示的LCDR1－LCDR3)；或
(3)所述抗VEGF单克隆抗体包含SEQ ID NO:60所示的重链可变区中的HCDR1-HCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:63-65所示的HCDR1－HCDR3)和SEQ ID NO:62所示的轻链可变区中的LCDR1-LCDR3(优选分别如SEQ ID NOs:66-68所示的LCDR1－LCDR3)。
2.根据权利要求1所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，
(1)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18所示的序列或其变体；并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43所示的序列或其变体；并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44所示的序列或其变体；
或者，
所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:10、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43所示的序列或其变体；并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:42、SEQ IDNO:44所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18所示的序列或其变体；并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；
(2)所述抗VEGFR2单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:50所示的序列或其变体；并且所述抗VEGFR2单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:52所示的序列或其变体；或
(3)所述抗VEGF单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:60所示的序列或其变体；并且所述抗VEGF单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:62所示的序列或其变体，
其中所述变体的序列与对应序列具有至少60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％，88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同源性。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述双特异性抗体选自如下的(1)－(20)中的任一项：
(1)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示的序列或其变体；
(2)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:6所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；
(3)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:10所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:12所示的序列或其变体；
(4)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示的序列或其变体；
(5)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:6所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；
(6)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:10所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:12所示的序列或其变体；
(7)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；
(8)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；
(9)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:6所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；
(10)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:6所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；
(11)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:10所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:12所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；
(12)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:10所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:12所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；
(13)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:41所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:42所示的序列或其变体；
(14)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:43所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:44所示的序列或其变体；
(15)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:41所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:42所示的序列或其变体；
(16)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:43所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:44所示的序列或其变体；
(17)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:41所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:42所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；
(18)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:43所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:44所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:14所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:16所示的序列或其变体；
(19)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:41所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:42所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体；
以及，
(20)所述免疫球蛋白的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:43所示的序列或其变体，并且所述免疫球蛋白的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:44所示的序列或其变体；和，所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:18所示的序列或其变体，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:20所示的序列或其变体，
其中所述变体的序列与对应序列具有至少60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同源性。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，
所述免疫球蛋白的重链的氨基酸序列为SEQ ID NO:40所示的序列或其变体，并且其轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO:24所示的序列或其变体，其中所述变体的序列与对应序列具有至少60％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％同源性。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区与所述第二蛋白功能区直接连接或者通过连接片段连接；和/或所述单链抗体的重链可变区与所述单链抗体的轻链可变区直接连接或者通过连接片段连接。
6.根据权利要求5所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述连接片段为(GGGGS)n，n为正整数；优选地，n为1、2、3、4、5或6。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述第一蛋白功能区和第二蛋白功能区独立地为1个、2个或者2个以上。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，所述单链抗体(优选重链可变区)连接在免疫球蛋白的重链，优选连接在免疫球蛋白重链的C末端。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，其中，
所述免疫球蛋白为人IgG1亚型；
其中，按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区具有A突变，所述A突变选自如下突变组合之一：
L234A和L235A；或者
L234A和G237A；或者
L235A和G237A；或者
L234A、L235A、G237A；或者
按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区具有B突变，所述B突变选自如下的一个或多个突变：
N297A、D265A、D270A、P238D、L328E、E233D、H268D、P271G、A330R、C226S、C229S、E233P、P331S、S267E、L328F、A330L、M252Y、S254T、T256E、N297Q、P238S、P238A、A327Q、A327G、P329A、K322A、T394D、G236R、G236A、L328R、A330S、P331S、H268A、E318A和K320A；或者
或者，按照EU编号系统，所述免疫球蛋白的重链恒定区具有A突变和B突变的组合；
所述抗VEGFR2单克隆抗体或所述抗VEGF单克隆抗体的重链恒定区为Ig gamma-1chainC region，ACCESSION P01857，轻链恒定区为:Ig kappa chain C region，ACCESSION:P01834。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，
其中，所述双特异性抗体包括：
靶向PD-1的第一蛋白功能区，和
靶向CTLA4的第二蛋白功能区；
所述第一蛋白功能区为1个，所述第二蛋白功能区为2个；
其中，所述第一蛋白功能区为免疫球蛋白，所述第二蛋白功能区为单链抗体；
所述免疫球蛋白的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:40或与其具有至少60％，70％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％同源性的序列所示，并且其轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:24或与其具有至少60％，70％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％同源性的序列所示；
所述单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43或与其具有至少60％，70％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％同源性的序列所示，并且所述单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:44或与其具有至少60％，70％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％同源性的序列所示；
所述单链抗体连接在免疫球蛋白的重链的C末端；
所述第一蛋白功能区与所述第二蛋白功能区通过第一连接片段连接；并且所述单链抗体的重链可变区与所述单链抗体的轻链可变区通过第二连接片段连接；所述第一连接片段和所述第二连接片段相同或不同；
优选地，所述第一连接片段和所述第二连接片段的氨基酸序列独立地选自SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；
优选地，所述第一连接片段和所述第二连接片段的氨基酸序列均如SEQ ID NO:26所示，
优选地，所述抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体轻链序列如SEQ ID NO:72所示，重链序列如SEQ ID NO:70所示，
优选地，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、Fab/c、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如，scFv)、双价抗体或结构域抗体。
11.药物组合物，用于治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)，其包含有效量的权利要求1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体和权利要求1-10任一项中定义的组分A，优选地，抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体和组分A的质量比选自(1：5)-(5：1)，例如：1：5、1：4、1：3、1：2、1：1、2：1、3：1、4：1或5：1；优选所述药物组合物为固体形式或液体形式，任选地，所述药物组合物还包含一种或多种化疗药物(优选所述化疗药为烷化剂，抗代谢药物，抗生素，植物类药物和/或激素类药物，铂类药物如顺铂、卡铂、奥沙利铂，阿霉素类，环磷酰胺，紫杉醇(如白蛋白紫杉醇，脂质体紫杉醇，多烯紫杉醇)，依托泊苷，吉西他滨，培美曲塞，卡培他滨，奥拉帕利、芦卡帕利、尼拉帕利、他拉唑帕利、氟唑帕利，长春碱类，他莫昔芬，甲地孕酮，戈舍瑞林，门冬酰胺酶和/或氟尿嘧啶类抗肿瘤药)。
12.权利要求1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体在制备用于预防和/或治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)的药物或试剂盒中的应用，优选所述药物或试剂盒还包含权利要求1-10任一项中定义的组分A，任选地，所述药物或试剂盒还包含一种或多种用于治疗肿瘤的药物(优选所述药物为化疗剂或生长抑制剂(如烷化剂、蒽环类、抗激素剂、芳香酶抑制剂、抗雄激素剂、蛋白激酶抑制剂、脂质激酶抑制剂、反义寡核苷酸、核酶、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒剂或抗肿瘤抗生素、蛋白酶体抑制剂、抗微管剂、EGFR拮抗剂、VEGF拮抗剂、血管生成素2拮抗剂、类视色素、酪氨酸激酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂及其组合)，靶向治疗剂(如B-raf抑制剂、MEK抑制剂、K-ras抑制剂、c-Met抑制剂、Alk抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、Akt抑制剂、mTOR抑制剂、VEGF抑制剂、PARP抑制剂、双磷脂酰肌醇3-激酶/mTOR抑制剂及其组合)、抗体-药物缀合物(如美登新碱、单甲基auristatin E、加利车霉素、esperamicin和放射性同位素螯合剂)、表达嵌合抗原受体的T细胞、抗体或其抗原结合片段、血管生成抑制剂、抗肿瘤剂、癌症疫苗、佐剂及其组合、烷化剂、抗代谢药物、抗生素、植物类药物和/或激素类药物、铂类药物(如顺铂、卡铂、奥沙利铂)、阿霉素类、环磷酰胺、紫杉醇、白蛋白紫杉醇、脂质体紫杉醇、多烯紫杉醇、依托泊苷、吉西他滨、培美曲塞、卡培他滨、奥拉帕利、芦卡帕利、尼拉帕利、他拉唑帕利、氟唑帕利、长春碱类、他莫昔芬、甲地孕酮、戈舍瑞林、门冬酰胺酶和/或氟尿嘧啶类抗肿瘤药)。
13.预防和/或治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)的方法，包括给受试者施用治疗有效量的权利要求1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，联合施用权利要求1-10任一项中定义的组分A，更优选地，进一步联合施用一种或多种用于治疗肿瘤的药物(优选所述药物为化疗剂或生长抑制剂(如烷化剂、蒽环类、抗激素剂、芳香酶抑制剂、抗雄激素剂、蛋白激酶抑制剂、脂质激酶抑制剂、反义寡核苷酸、核酶、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒剂或抗肿瘤抗生素、蛋白酶体抑制剂、抗微管剂、EGFR拮抗剂、VEGF拮抗剂、血管生成素2拮抗剂、类视色素、酪氨酸激酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂及其组合)，靶向治疗剂(如B-raf抑制剂、MEK抑制剂、K-ras抑制剂、c-Met抑制剂、Alk抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、Akt抑制剂、mTOR抑制剂、VEGF抑制剂、PARP抑制剂、双磷脂酰肌醇3-激酶/mTOR抑制剂及其组合)、抗体-药物缀合物(如美登新碱、单甲基auristatin E、加利车霉素、esperamicin和放射性同位素螯合剂)、表达嵌合抗原受体的T细胞、抗体或其抗原结合片段、血管生成抑制剂、抗肿瘤剂、癌症疫苗、佐剂及其组合、烷化剂，抗代谢药物、抗生素、植物类药物和/或激素类药物、铂类药物(如顺铂、卡铂、奥沙利铂)、阿霉素类、环磷酰胺、紫杉醇(如白蛋白紫杉醇、脂质体紫杉醇、多烯紫杉醇)、依托泊苷、吉西他滨、培美曲塞、卡培他滨、奥拉帕利、芦卡帕利、尼拉帕利、他拉唑帕利、氟唑帕利、长春碱类、他莫昔芬、甲地孕酮、戈舍瑞林、门冬酰胺酶和/或氟尿嘧啶类抗肿瘤药)，优选地，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体、所述组分A和肿瘤化疗药物同时或顺序施用。
14.试剂盒，用于预防和/或治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)，其含有(a)第一药物组合物，含有权利要求1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体作为活性成分；和(b)第二药物组合物，其中含有权利要求1-10任一项中定义的组分A作为活性成分；和任选地(c)一种或多种用于治疗肿瘤的药物(优选所述药物为化疗剂或生长抑制剂(如烷化剂、蒽环类、抗激素剂、芳香酶抑制剂、抗雄激素剂、蛋白激酶抑制剂、脂质激酶抑制剂、反义寡核苷酸、核酶、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒剂或抗肿瘤抗生素、蛋白酶体抑制剂、抗微管剂、EGFR拮抗剂、VEGF拮抗剂、血管生成素2拮抗剂、类视色素、酪氨酸激酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂及其组合)、靶向治疗剂(如B-raf抑制剂、MEK抑制剂、K-ras抑制剂、c-Met抑制剂、Alk抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、Akt抑制剂、mTOR抑制剂、VEGF抑制剂、PARP抑制剂、双磷脂酰肌醇3-激酶/mTOR抑制剂及其组合)、抗体-药物缀合物(如美登新碱、单甲基auristatin E、加利车霉素、esperamicin和放射性同位素螯合剂)、表达嵌合抗原受体的T细胞、抗体或其抗原结合片段、血管生成抑制剂、抗肿瘤剂、癌症疫苗、佐剂及其组合、烷化剂、抗代谢药物、抗生素、植物类药物和/或激素类药物、铂类药物(如顺铂、卡铂、奥沙利铂)、阿霉素类、环磷酰胺、紫杉醇(如白蛋白紫杉醇，脂质体紫杉醇，多烯紫杉醇)、依托泊苷、吉西他滨、培美曲塞、卡培他滨、奥拉帕利、芦卡帕利、尼拉帕利、他拉唑帕利、氟唑帕利、长春碱类、他莫昔芬、甲地孕酮、戈舍瑞林、门冬酰胺酶和/或氟尿嘧啶类抗肿瘤药)。
15.单位制剂，优选用于治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)，其中，所述单位制剂包含：1～10000mg(优选10-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg或200mg)的权利要求1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，1～10000mg(优选1-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg、200mg或100mg)的权利要求1-10任一项中定义的组分A和任选地一种或多种用于治疗肿瘤的药物(优选所述药物为化疗剂或生长抑制剂(如烷化剂、蒽环类、抗激素剂、芳香酶抑制剂、抗雄激素剂、蛋白激酶抑制剂、脂质激酶抑制剂、反义寡核苷酸、核酶、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒剂或抗肿瘤抗生素、蛋白酶体抑制剂、抗微管剂、EGFR拮抗剂、VEGF拮抗剂、血管生成素2拮抗剂、类视色素、酪氨酸激酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂及其组合)、靶向治疗剂(如B-raf抑制剂、MEK抑制剂、K-ras抑制剂、c-Met抑制剂、Alk抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂、Akt抑制剂、mTOR抑制剂、VEGF抑制剂、PARP抑制剂、双磷脂酰肌醇3-激酶/mTOR抑制剂及其组合)、抗体-药物缀合物(如美登新碱、单甲基auristatin E、加利车霉素、esperamicin和放射性同位素螯合剂)、表达嵌合抗原受体的T细胞、抗体或其抗原结合片段、血管生成抑制剂、抗肿瘤剂、癌症疫苗、佐剂及其组合、抗代谢药物、抗生素、植物类药物和/或激素类药物、铂类药物(如顺铂、卡铂、奥沙利铂)、阿霉素类、环磷酰胺、紫杉醇(如白蛋白紫杉醇、脂质体紫杉醇、多烯紫杉醇)、依托泊苷、吉西他滨、培美曲塞、卡培他滨、奥拉帕利、芦卡帕利、尼拉帕利、他拉唑帕利、氟唑帕利、长春碱类、他莫昔芬、甲地孕酮、戈舍瑞林、门冬酰胺酶和/或氟尿嘧啶类抗肿瘤药)；其中，所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体、组分A和化疗药分别单独包装。
16.用于预防或治疗癌症或肿瘤的方法，其中，向有需要的受试者给予一份或多份权利要求15所述的单位制剂，优选地，所述单位制剂中的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，所述组分A和化疗药各自分开施用。
17.单次药物剂量单元，优选用于治疗肿瘤(特别是恶性肿瘤)，其包含0.1-10000mg(优选1-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg、200mg或100mg)的权利要求1-10任一项所述的抗CTLA4抗PD-1双特异性抗体，0.1-10000mg(优选1-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg、200mg或100mg)的权利要求1-10任一项中定义的组分A。
18.权利要求1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，权利要求11所述的药物组合物，权利要求12所述的应用，权利要求13所述的方法，权利要求14所述的试剂盒，权利要求15所述的单位制剂，或，权利要求16所述的方法，其中
所述肿瘤选自如下的一种或多种：
宫颈癌(如转移性宫颈癌)、肺癌如非小细胞肺癌(例如鳞状非小细胞肺癌或非鳞状非小细胞肺癌)、食管癌、食管鳞癌、回盲部腺癌、壶腹部腺癌、小细胞肺癌、胃癌(例如晚期胃癌、胃腺癌或胃食管结合部腺癌)、肾癌、肾癌子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、前列腺癌、甲状腺癌、腹膜癌、腺癌、胰腺癌、胶质瘤、头颈癌、骨癌、睾丸癌、白血病、骨髓瘤、淋巴瘤、肉瘤、间皮瘤、肝细胞癌、结肠癌、胆癌、胆管癌、直肠癌、结肠癌、子宫内膜癌、卵巢癌(如晚期卵巢癌)或输卵管癌、大细胞神经内分泌癌、尿路上皮癌(例如上尿路上皮癌或膀胱癌)、乳腺癌、三阴乳腺癌、外周T细胞淋巴瘤、黑色素瘤、鼻咽癌，以及高度微卫星不稳定型(MSI-H)或错配修复缺陷型(dMMR)实体瘤、脑癌(如侵袭性脑癌，例如胶质母细胞瘤)、卵巢癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺瘤、粘液性或浆液性囊腺癌、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、绒毛膜上皮癌、恶性葡萄胎、恶性支持细胞-间质细胞瘤、恶性颗粒细胞瘤、无性细胞瘤。
19.权利要求1-10任一项所述的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，权利要求11所述的药物组合物，权利要求12所述的应用，权利要求13所述的方法，权利要求14所述的试剂盒，权利要求15所述的单位制剂，或，权利要求16所述的方法，其中所述抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体，所述组分A和/或所述化疗药为适于静脉注射或静脉滴注的形式，优选液体的形式。
20.根据权利要求13或16所述的方法，其中，所述给受试者施用有效量的抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的步骤为在手术治疗之前或之后，和/或在放射治疗之前或之后。
21.根据权利要求13或16所述的方法，其中，
抗CTLA4抗PD-1双特异性抗体的单次给药剂量为每千克体重0.1-100mg，优选1-10mg；或者，抗CTLA4-抗PD-1双特异性抗体的单次给药剂量为每位受试者10-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg或200mg；
组分A的单次给药剂量为每千克体重0.1-100mg，优选1-10mg；或者，组分A的单次给药剂量为每位受试者10-1000mg，优选50-500mg、100-400mg、150-300mg、150-250mg、200mg或100mg，
优选地，每天两次至约每隔一天一次给药，或每3天、4天、5天、6天、10天、1周、2周、3周、4周、5周或6周给药一次；
优选地，给药方式为静脉滴注或静脉注射。
CN202210401367.9A 2021-04-14 2022-04-14 抗体在抗肿瘤治疗中的用途 Pending CN115197325A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110404963 2021-04-14
CN2021104049638 2021-04-14

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115197325A true CN115197325A (zh) 2022-10-18

Family

ID=83574345

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210401367.9A Pending CN115197325A (zh) 2021-04-14 2022-04-14 抗体在抗肿瘤治疗中的用途

Country Status (9)

Country Link
EP (1) EP4324854A1 (zh)
JP (1) JP2024515618A (zh)
KR (1) KR20230171456A (zh)
CN (1) CN115197325A (zh)
AU (1) AU2022258365A1 (zh)
BR (1) BR112023021177A2 (zh)
CA (1) CA3213734A1 (zh)
IL (1) IL307494A (zh)
WO (1) WO2022218383A1 (zh)

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104974253A (zh) * 2014-04-01 2015-10-14 上海中信国健药业股份有限公司 抗ctla-4/pd-1双特异性抗体、其制备方法及应用
CN106188296B (zh) * 2016-07-19 2018-05-08 康融东方（广东）医药有限公司 一类抗血管内皮生长因子受体vegfr2的单克隆抗体及其编码基因和应用
CN106967172B (zh) 2016-08-23 2019-01-08 康方药业有限公司 抗ctla4-抗pd-1 双功能抗体、其药物组合物及其用途
WO2019179421A1 (en) * 2018-03-19 2019-09-26 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. Novel bispecific pd-1/ctla-4 antibody molecules
MX2021010997A (es) * 2019-03-13 2021-10-01 Merck Sharp & Dohme Llc Terapias anticancerigenas combinadas que comprenden agentes bloqueadores ctla-4 y pd-1.
BR112022002013A2 (pt) * 2019-08-02 2022-03-29 Akeso Pharmaceuticals Inc Anticorpo biespecífico anti-ctla4/anti-pd-1 e uso do mesmo

Also Published As

Publication number Publication date
JP2024515618A (ja) 2024-04-10
EP4324854A1 (en) 2024-02-21
BR112023021177A2 (pt) 2023-12-19
KR20230171456A (ko) 2023-12-20
AU2022258365A1 (en) 2023-11-30
IL307494A (en) 2023-12-01
CA3213734A1 (en) 2022-10-20
WO2022218383A1 (zh) 2022-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018301326B2 (en) Checkpoint inhibitor bispecific antibodies
CN109071666B (zh) 人脊髓灰质炎病毒受体(pvr)特异性抗体
CN110691795A (zh) 包含抗-lag3抗体、pd-1途径抑制剂和免疫治疗剂组合的组合物
CN112566661B (zh) 喹啉衍生物与抗体的药物组合
EP4273170A1 (en) Pharmaceutical composition comprising anti-tigit antibody and anti-pd-1-anti-vegfa bispecific antibody, and use
JP2021511372A (ja) Ｔｉｍ３に対する抗体で癌を処置する方法
WO2022243378A1 (en) Uses of anti-icos antibodies
WO2021169986A1 (en) A bifunctional fusion protein and uses thereof
JP2023103352A (ja) 抗原結合タンパク質
WO2019165982A1 (en) Monoclonal antibody against human lag-3, method for preparing same, and use thereof
WO2022218383A1 (zh) 抗体在抗肿瘤治疗中的用途
US20210340252A1 (en) Anti-tim-3 antibodies and uses thereof
CN115916819A (zh) 抗cldn18.2和cd3的双特异性抗体
WO2016163433A1 (ja) 抗ｆｇｆｒ２抗体と他剤を含む組成物
CN114685674B (zh) 一种抗体融合蛋白及其应用
WO2020119792A1 (en) Humanized antibodies against ox40, method for preparing the same, and use thereof
EP4340943A1 (en) Uses of anti-icos antibodies
WO2023222854A1 (en) Uses of anti-icos antibodies
KR20240038043A (ko) 약학적 조성물 및 용도
AU2022284342A1 (en) Treatment of pd-l1 negative or low expressing cancer with anti-icos antibodies
CN117192118A (zh) 一种抗cldn 18.2和cd47的双特异性抗体治疗疾病的用途
CN115245565A (zh) 含有TGF-β受体的融合蛋白在制备治疗非小细胞肺癌的药物中的用途
CN117679505A (zh) 药物组合及用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40080887

Country of ref document: HK