JP2024515618A - 抗腫瘍処置における抗体の使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、ＣＴＬＡ４及びＰＤ－１に対する二重特異性抗体に関し、ここで、該抗体は、腫瘍を処置するのに使用され、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体と組み合わせて投与されかつＰＤ－１をターゲットとする第１のタンパク質機能領域と、ＣＴＬＡ４をターゲットとする第２のタンパク質機能領域とを含み、第１のタンパク質機能領域は、免疫グロブリンであり、第２のタンパク質機能領域は、一本鎖抗体であるか又は第１のタンパク質機能領域は、一本鎖抗体であり、第２のタンパク質機能領域は、免疫グロブリンである。

Description

技術分野
本発明は、分子免疫学の分野に関し、特に、腫瘍の処置における抗血管内皮増殖因子レセプターＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体の抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体と組み合わせた使用に関する。

背景
腫瘍は、健康を脅かす深刻な疾患であり、効果的な処置及び薬剤を開発することが急務である。

血管内皮増殖因子レセプター２（ＶＥＧＦＲ２）は、血管内皮細胞の増殖因子に特異的に作用するレセプターで、ＫＤＲ又はＦＬＫ１とも呼ばれる。現在、主に５つのタイプのＶＥＧＦＲ：ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３、ＮＰ－１及びＮＰ－２が発見されている。ここで、ＶＥＧＦＲ－１及びＶＥＧＦＲ２は、主に血管内皮細胞に存在し、ＶＥＧＦＲ３は、主にリンパ管内皮細胞に存在する。ＮＰ－１及びＮＰ－２は、内皮細胞だけでなく、一部の腫瘍細胞でも発現される。ただし、ＶＥＧＦは、主にＶＥＧＦＲ２に結合することにより、その生理活性、例えば、血管内皮細胞の増殖の促進を発揮する。

新生血管の形成は、ヒトにおける各種の疾患、例えば、網膜症、関節炎、子宮内膜症等において重要な役割を果たしている。腫瘍の成長は、通常、新生血管の形成を伴う。早くも１９７１年には、J.Folkmanによって、腫瘍の成長及び転移を腫瘍の血管新生を抑制することにより阻害することができることが提唱された。近年、ますます多くの悪性腫瘍が、発生、転移及び予後において、血管内皮増殖因子及びそのレセプターファミリーと関連していることが見出されている。したがって、再度、ＶＥＧＦ及びそのレセプターをターゲットとする抗腫瘍療法が注目されており、レセプターファミリーの中でも、ＶＥＧＦＲ－２をターゲットとすることが、最も広く研究されている。

ＰＤ－１は、活性化Ｔリンパ球及びＢリンパ球により発現され、免疫サプレッションを媒介する重要な免疫チェックポイントレセプターであり、そのリガンドは、少なくともＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２を含む。抗ＰＤ－１抗体は、プログラム死レセプター－１（ＰＤ－１）に特異的に結合し、阻害ＰＤ－１／ＰＤ－１リガンド経路を遮断する（Topalian et al., (2012a) N Engl J Med 366: 2443-54）。

ＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド１）は、ＣＤ２７４又はＢ７－Ｈ１としても公知であり、ＣＤ２７４遺伝子によりコードされる４０kDaの１回膜貫通型タンパク質であり、ＰＤ－１のリガンドである。ＰＤ－Ｌ１は、リンパ系組織及び非リンパ系組織における白血球及び非造血細胞だけでなく、種々のガン細胞にも広く分布しており、種々の腫瘍細胞の表面で高発現しており、腫瘍の悪性度及び予後不良は、ＰＤ－Ｌ１の発現レベルに密接に関連している。ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－１は両方とも、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、２つの細胞外Ｉｇドメインを有する。ＰＤ－Ｌ１とプログラム死レセプター－１（ＰＤ－１）及びＢ７－１（ＣＤ８０）との結合界面は、ＩｇＶ様ドメインにある（Lin et al., (2008) PNAS 105: 3011-3016）。ＰＤ－Ｌ１は、保存された短い細胞内テイル（約３０個のアミノ酸）を含有し、ＰＤ－１は、２つの細胞質チロシンベースのシグナル伝達モチーフ、すなわち、免疫レセプターチロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）及び免疫レセプターチロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含有する。Ｔ細胞刺激後、ＰＤ－１により、その細胞質テイルにあるＩＴＳＭモチーフに、チロシンホスファターゼＳＨＰ－２がリクルートされ、ＣＤ３＋ Ｔ細胞のシグナル伝達カスケードに関与するエフェクター分子（例えば、ＣＤ３ζ、ＰＫＣθ及びＺＡＰ７０）の脱リン酸化がもたらされる（Freeman et al., (2000) J Exp Med 192: 1027-34；Latchman et al., (2001) Nat Immunol 2: 261-8；Carter et al., (2002) Eur J Immunol 32: 634-43）。臨床データから、ＰＤ－Ｌ１の腫瘍における高発現は、腫瘍の浸潤性の増大及び予後不良に関連することが示唆されている。

ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１は、重要な特異的免疫チェックポイントである。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１複合体の形成により、阻害シグナルが伝達され、Ｔ細胞免疫応答がネガティブにレギュレーションされる。それにより、ＴＣＲ媒介Ｔ細胞活性化、サイトカイン産生及びＴ細胞増殖が阻害され（Fife et al., (2011) Nature Immunology 10: 1185-1193）、同族抗原特異的Ｔ細胞の疲弊又はアネルギーが誘引され（Hofmeyer et al., (2011) Journal of Biomedicine and Biotechnology 2011: 1-9）、Ｔｈ１細胞のＦｏｘｐ３＋レギュラトリーＴ細胞への分化が促進され（Armanath et al., (2011) Science TransMed 3: 1-13；Francisco et al., (2009) J.Exp.Med.206: 3015-3029）、エフェクターＴ細胞のアポトーシスが誘引される。ＰＤ－Ｌ１遺伝子を破壊すると、Ｔ細胞応答がアップレギュレーションされ、自己反応性Ｔ細胞が産生される（Latchman et al., (2004) PNAS, 101:10691-10696）。抗体によるＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１の遮断により、抗腫瘍免疫の上昇がもたらされる（Iwai et al., (2002) PNAS, 99:12293-12297）。

また、ＣＴＬＡ－４も、代表的な特異的免疫チェックポイントタンパク質のうちの１つである。ＣＴＬＡ－４は、臨床応用された最初のターゲットである。抗ＣＴＬＡ－４抗体により、Ｔ細胞の活性化を促進し、その抗腫瘍効果を改善することができる。イピリムマブは、以前に処置された転移性メラノーマ患者の全生存期間を改善することが実証され、ＦＤＡにより承認されている、最初のＣＴＬＡ－４免疫チェックポイント阻害剤である。現在の研究では、ＣＴＬＡ－４は、主に２つの経路でＴ細胞の応答を阻害することが示されている。１つは、ＣＤ２８とのＢ７への競合的結合又はＣＴＬＡ－４の細胞内ドメインへのホスファターゼのリクルートにより、ＴＣＲ（Ｔ細胞レセプター）及びＣＤ２８のシグナルを減少させることである。もう１つは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上でのＣＤ８０及びＣＤ８６の発現レベルを低下させること又はトランスエンドサイトーシスにより、ＡＰＣからそれらを除去し、これにより、ＣＤ２８が関与するＴ細胞の活性化を低下させることである。加えて、ＣＴＬＡ－４は、樹状細胞がＣＤ８０／ＣＤ８６に結合するのも媒介し、トリプトファン分解酵素であるＩＤＯの発現を誘引し、その結果、ＴＣＲが阻害される。ＣＴＬＡ－４抗体により、Ｔｒｅｇが減少し、ＣＴＬＡ－４に結合することにより、ＴＣＲが活性化される。

ＰＤ－１抗体とＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）抗体医薬との併用から、ＰＤ－１抗体単独より複数の腫瘍に対して良好な効果が示されている。ただし、この併用の効果の改善は、常に、高い毒性を伴い、その適用は大きく制限される。

ベバシズマブは、抗血管新生をターゲットとする薬剤であり、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合することにより、血管の成長を妨げ、腫瘍の転移を阻害する。ベバシズマブは、幅広いスペクトルの抗ガン剤である。発売以来、ベバシズマブは、主に、種々のガン、例えば、脳ガン（例えば、侵襲性脳ガン、例えば、膠芽腫）、腎臓ガン、肺ガン（例えば、転移性非扁平上皮非小細胞肺ガン）、結腸ガン、直腸ガン、子宮頸ガン（例えば、転移性子宮頸ガン）、子宮内膜ガン、卵巣ガン（例えば、進行性卵巣ガン）又は卵管ガン、腎臓ガン等の処置について承認されている。

概要
本発明者らは、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体を抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体と併用し又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体と併用することにより、腫瘍を効果的に予防し、治療することができ、毒性及び副作用が低いことを見出した。以下に、本発明を詳述する。

具体的には、本発明は、以下に関する。

１．
抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体であって、
抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体は、好ましくは、腫瘍を処置するのに使用され、好ましくは、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体は、成分Ａと組み合わせて投与され、
ここで、成分Ａは、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体もしくはその抗原結合フラグメント、抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体もしくはその抗原結合フラグメント又はそれらの組み合わせから選択され、
ここで、
（１）抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体は、
ＰＤ－１をターゲットとする第１のタンパク質機能領域と、
ＣＴＬＡ４をターゲットとする第２のタンパク質機能領域とを含み、
ここで、第１のタンパク質機能領域は、免疫グロブリンであり、第２のタンパク質機能領域は、一本鎖抗体であるか又は第１のタンパク質機能領域は、一本鎖抗体であり、第２のタンパク質機能領域は、免疫グロブリンであり、
ここで、該免疫グロブリンは、配列番号：１４に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：２７～２９に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：１６に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３０～３２に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含み、該一本鎖抗体が、配列番号：２に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３３～３５に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：４に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３６～３８に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含み又は
該免疫グロブリンは、配列番号：２に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３３～３５に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：４に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３６～３８に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含み、該一本鎖抗体が、配列番号：１４に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：２７～２９に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：１６に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３０～３２に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含み、
（２）抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体が、配列番号：５０に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：５３～５５に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：５２に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：５６～５８に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含み又は
（３）抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体が、配列番号：６０に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：６３～６５に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：６２に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：６６～６８に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含む、
抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。

２．
（１）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４、配列番号：１８又はそれらの変異体から選択され、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６、配列番号：２０又はそれらの変異体から選択され、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２、配列番号：６、配列番号：１０、配列番号：４１、配列番号：４３又はそれらの変異体から選択され、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４、配列番号：８、配列番号：１２、配列番号：４２、配列番号：４４又はそれらの変異体から選択され又は
該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２、配列番号：６、配列番号：１０、配列番号：４１、配列番号：４３又はそれらの変異体から選択され、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４、配列番号：８、配列番号：１２、配列番号：４２、配列番号：４４又はそれらの変異体から選択され、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４、配列番号：１８又はそれらの変異体から選択され、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６、配列番号：２０又はそれらの変異体から選択され、
（２）抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：５０に示される配列又はその変異体であり、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：５２に示される配列又はその変異体であり又は
（３）抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６０に示される配列又はその変異体であり、抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６２に示される配列又はその変異体である、項１記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。

３．
該二重特異性抗体が、下記（１）～（２０）：
（１）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４に示される配列又はその変異体であり、
（２）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：８に示される配列又はその変異体であり、
（３）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１２に示される配列又はその変異体であり、
（４）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４に示される配列又はその変異体であり、
（５）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：８に示される配列又はその変異体であり、
（６）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１２に示される配列又はその変異体であり、
（７）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、
（８）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、
（９）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、
（１０）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、
（１１）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１０に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、
（１２）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１０に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、
（１３）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４１に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４２に示される配列又はその変異体であり、
（１４）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４３に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４４に示される配列又はその変異体であり、
（１５）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４１に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４２に示される配列又はその変異体であり、
（１６）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４３に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４４に示される配列又はその変異体であり、
（１７）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４１に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、
（１８）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４３に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、
（１９）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４１に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、
（２０）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４３に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、
のうちのいずれか１つから選択され、
ここで、該変異体が、対応する配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は少なくとも９９％の相同性を有する、項１又は２記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。

４．
該免疫グロブリンの重鎖のアミノ酸配列が、配列番号：４０に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖のアミノ酸配列が、配列番号：２４に示される配列又はその変異体であり、ここで、該変異体の配列が、対応する配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は少なくとも９９％の相同性を有する、項１～３のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。

第１のタンパク質機能領域が、第２のタンパク質機能領域に直接又はリンカーフラグメントを介してのいずれかで連結しておりかつ／又は該一本鎖抗体の重鎖可変領域が、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域に直接又はリンカーフラグメントを介してのいずれかで連結している、項１～４のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。

６．
リンカーフラグメントが、（ＧＧＧＧＳ）_ｎであり、ｎが、正の整数であり、好ましくは、ｎが、１、２、３、４、５又は６である、項５記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。

７．
第１及び第２のタンパク質機能領域の数が、それぞれ独立して、１、２又はそれ以上である、項１～６のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。

８．
該一本鎖抗体（好ましくは、重鎖可変領域）が、該免疫グロブリンの重鎖のＣ末端に連結している、項１～７のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。

９．
該免疫グロブリンが、ヒトＩｇＧ１サブタイプのものであり、
ここで、ＥＵナンバリングシステムに従って、該免疫グロブリンが、下記突然変異：
Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ又は
Ｌ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ又は
Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ又は
Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ
から選択されるＡ突然変異を有する重鎖定常領域を含みかつ
ＥＵナンバリングシステムに従って、該免疫グロブリンが、下記突然変異：
Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｔ３９４Ｄ、Ｇ２３６Ｒ、Ｇ２３６Ａ、Ｌ３２８Ｒ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｅ３１８Ａ及びＫ３２０Ａ
のうちの１つ以上から選択されるＢ突然変異を有する重鎖定常領域を含み又は
ＥＵナンバリングシステムに従って、該免疫グロブリンが、Ａ突然変異とＢ突然変異との組み合わせを有する重鎖定常領域を含み又は
抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体の重鎖定常領域が、Ｉｇガンマ－１鎖Ｃ領域，アクセッションＰ０１８５７であり、その軽鎖定常領域が、Ｉｇカッパ鎖Ｃ領域，アクセッションＰ０１８３４である、項１～８のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。

１０．
該二重特異性抗体が、
ＰＤ－１をターゲットとする第１のタンパク質機能領域と、
ＣＴＬＡ４をターゲットとする第２のタンパク質機能領域とを含み、
第１のタンパク質機能領域の数が、１であり、第２のタンパク質機能領域の数が、２であり、
ここで、第１のタンパク質機能領域が、免疫グロブリンであり、第２のタンパク質機能領域が、一本鎖抗体であり、
該免疫グロブリンの重鎖のアミノ酸配列が、配列番号：４０に示される又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖のアミノ酸配列が、配列番号：２４に示される配列又はその変異体であり、ここで、該変異体が、対応する配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は少なくとも９９％の相同性を有し、
該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４３に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４４に示される配列又はその変異体であり、ここで、該変異体が、対応する配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は少なくとも９９％の相同性を有し、
該一本鎖抗体が、該免疫グロブリンの重鎖のＣ末端に連結しており、
第１のタンパク質機能領域が、第２のタンパク質機能領域に第１のリンカーフラグメントを介して連結しており、該一本鎖抗体の重鎖可変領域が、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域に第２のリンカーフラグメントを介して連結しており、第１のリンカーフラグメント及び第２のリンカーフラグメントが同一又は異なり、
好ましくは、第１のリンカーフラグメント及び第２のリンカーフラグメントがそれぞれ、配列番号：２５及び配列番号：２６から独立して選択されるアミノ酸配列を有し、
好ましくは、第１のリンカーフラグメント及び第２のリンカーフラグメントのアミノ酸配列が、配列番号：２６に示され、
好ましくは、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二特異性抗体の軽鎖が、配列番号：７２に示される配列を有し、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二特異性抗体の重鎖が、配列番号：７０に示される配列を有し、
好ましくは、該抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂ、Ｆａｂ／ｃ、相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、二価抗体又はドメイン抗体から選択される、項１～９のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。

１１．
腫瘍（特に、悪性腫瘍）を処置するための医薬組成物であって、
有効量の項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体と、項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａとを含み、ここで、該医薬組成物が、好ましくは、固体又は液体の形態にあり、好ましくは、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体と成分Ａとの質量比は、（１：５）～（５：１）、例えば、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１又は５：１から選択され、場合により、該医薬組成物は、１種以上の化学療法剤（好ましくは、化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質、植物由来薬剤及び／又はホルモン性薬剤、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、パクリタキセル、アルブミン結合パクリタキセル、リポソームパクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ゲムシタビン、ペメトレキセド、カペシタビン、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、フルゾパリブ、ビンカアルカロイド、タモキシフェン、メゲストロール、ゴセレリン、アスパラギナーゼ及び／又はフルオロウラシル抗悪性腫瘍剤である）をさらに含む、
医薬組成物。

１２．
腫瘍（特に、悪性腫瘍）を予防しかつ／又は治療するための医薬又はキットを製造するのにおける、項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体の使用であり、
該医薬又はキットは、好ましくは、項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａをさらに含み、場合により、該医薬又はキットが、腫瘍を処置するための１種以上の薬剤（好ましくは、該薬剤は、化学療法剤又は増殖阻害剤（例えば、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン剤、プロテインキナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒又は抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管剤、ＥＧＦＲアンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、アンギオポエチン２アンタゴニスト、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、ターゲット化治療剤（例えば、Ｂ－ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、Ｋ－ｒａｓ阻害剤、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤、Ａｌｋ阻害剤、ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、二重ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ／ｍＴＯＲ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、抗体－薬剤コンジュゲート（例えば、メイタンシン、モノメチルオーリスタチンＥ、カリケアマイシン、エスペラマイシン及び放射性同位体キレーター）、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、抗体又はその抗原結合フラグメント、血管新生阻害剤、抗悪性腫瘍剤、ガンワクチン、アジュバント及びそれらの組み合わせ、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質、植物由来薬剤及び／又はホルモン性薬剤、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、パクリタキセル、アルブミン結合パクリタキセル、リポソームパクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ゲムシタビン、ペメトレキセド、カペシタビン、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、フルゾパリブ、ビンカアルカロイド、タモキシフェン、メゲストロール、ゴセレリン、アスパラギナーゼ及び／又はフルオロウラシル抗悪性腫瘍剤）である）をさらに含む、
使用。

１３．
腫瘍（特に、悪性腫瘍）を予防しかつ／又は治療するための方法であって、
治療上有効量の項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体を項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａと組み合わせて、より好ましくは、腫瘍を処置するための１種以上の薬剤（好ましくは、該薬剤は、化学療法剤又は増殖阻害剤（例えば、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン剤、プロテインキナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒又は抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管剤、ＥＧＦＲアンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、アンギオポエチン２アンタゴニスト、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、ターゲット化治療剤（例えば、Ｂ－ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、Ｋ－ｒａｓ阻害剤、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤、Ａｌｋ阻害剤、ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、二重ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ／ｍＴＯＲ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、抗体－薬剤コンジュゲート（例えば、メイタンシン、モノメチルオーリスタチンＥ、カリケアマイシン、エスペラマイシン及び放射性同位体キレーター）、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、抗体又はその抗原結合フラグメント、血管新生阻害剤、抗悪性腫瘍剤、ガンワクチン、アジュバント及びそれらの組み合わせ、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質、植物由来薬剤及び／又はホルモン性薬剤、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、パクリタキセル（例えば、アルブミン結合パクリタキセル、リポソームパクリタキセル及びドセタキセル）、エトポシド、ゲムシタビン、ペメトレキセド、カペシタビン、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、フルゾパリブ、ビンカアルカロイド、タモキシフェン、メゲストロール、ゴセレリン、アスパラギナーゼ及び／又はフルオロウラシル抗悪性腫瘍剤）である）とさらに組み合わせて、対象に投与することを含み、
ここで、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体、成分Ａ及び抗腫瘍化学療法剤は、好ましくは、同時に又は連続的に投与される、
方法。

１４．
腫瘍（特に、悪性腫瘍）を予防しかつ／又は治療するためのキットであって、
（ａ）有効成分として項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体を含む第１の医薬組成物と、（ｂ）有効成分として項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａを含む第２の医薬組成物と、場合により、（ｃ）腫瘍を処置するための１種以上の薬剤（好ましくは、該薬剤は、化学療法剤又は増殖阻害剤（例えば、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン剤、プロテインキナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒又は抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管剤、ＥＧＦＲアンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、アンギオポエチン２アンタゴニスト、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、ターゲット化治療剤（例えば、Ｂ－ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、Ｋ－ｒａｓ阻害剤、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤、Ａｌｋ阻害剤、ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、二重ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ／ｍＴＯＲ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、抗体－薬剤コンジュゲート（例えば、メイタンシン、モノメチルオーリスタチンＥ、カリケアマイシン、エスペラマイシン及び放射性同位体キレーター）、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、抗体又はその抗原結合フラグメント、血管新生阻害剤、抗悪性腫瘍剤、ガンワクチン、アジュバント及びそれらの組み合わせ、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質、植物由来薬剤及び／又はホルモン性薬剤、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、パクリタキセル（例えば、アルブミン結合パクリタキセル、リポソームパクリタキセル及びドセタキセル）、エトポシド、ゲムシタビン、ペメトレキセド、カペシタビン、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、フルゾパリブ、ビンカアルカロイド、タモキシフェン、メゲストロール、ゴセレリン、アスパラギナーゼ及び／又はフルオロウラシル抗悪性腫瘍剤）である）とを含む、
キット。

１５．
腫瘍（特に、悪性腫瘍）を処置するのに好ましく使用される単位製剤であって、
該単位製剤は、１～１００００mg（好ましくは、１０～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg又は２００mg） 項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体と、１～１００００mg（好ましくは、１～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg又は２００mg） 項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａと、場合により、腫瘍を処置するための１種以上の薬剤（好ましくは、該薬剤が、化学療法剤又は増殖阻害剤（例えば、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン剤、プロテインキナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒又は抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管剤、ＥＧＦＲアンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、アンギオポエチン２アンタゴニスト、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、ターゲット化治療剤（例えば、Ｂ－ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、Ｋ－ｒａｓ阻害剤、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤、Ａｌｋ阻害剤、ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、二重ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ／ｍＴＯＲ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、抗体－薬剤コンジュゲート（例えば、メイタンシン、モノメチルオーリスタチンＥ、カリケアマイシン、エスペラマイシン及び放射性同位体キレーター）、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、抗体又はその抗原結合フラグメント、血管新生阻害剤、抗悪性腫瘍剤、ガンワクチン、アジュバント及びそれらの組み合わせ、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質、植物由来薬剤及び／又はホルモン性薬剤、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、パクリタキセル（例えば、アルブミン結合パクリタキセル、リポソームパクリタキセル及びドセタキセル）、エトポシド、ゲムシタビン、ペメトレキセド、カペシタビン、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、フルゾパリブ、ビンカアルカロイド、タモキシフェン、メゲストロール、ゴセレリン、アスパラギナーゼ及び／又はフルオロウラシル抗悪性腫瘍剤）である）とを含み、
ここで、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体と成分Ａと化学療法剤とは、別個に包装されている、
単位製剤。

１６．
ガン又は腫瘍を予防し又は治療するための方法であって、
ガン又は腫瘍の予防又は治療を必要とする対象に、１種以上の項１５記載の単位製剤を投与することを含み、好ましくは、該単位製剤中の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体、成分Ａ及び化学療法剤はそれぞれ、別個に投与される、
方法。

１７．
腫瘍（特に、悪性腫瘍）を処置するのに好ましく使用され、
０．１～１００００mg（好ましくは、１～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg、２００mg又は１００mg） 項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体と、０．１～１００００mg（好ましくは、１～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg、２００mg又は１００mg）項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａとを含む、
単回投与単位。

１８．
腫瘍が、以下：
子宮頸ガン（例えば、転移性子宮頸ガン）、肺ガン、例えば、非小細胞肺ガン（例えば、扁平上皮非小細胞肺ガン又は非扁平上皮非小細胞肺ガン）、食道ガン、食道扁平上皮ガン、回盲部腺ガン、膨大部腺ガン、小細胞肺ガン、胃ガン（例えば、進行性胃ガン、胃腺ガン又は胃食道接合部腺ガン）、腎臓ガン、子宮内膜ガン、副腎皮質ガン、前立腺ガン、甲状腺ガン、腹膜ガン、腺ガン、膵臓ガン、神経膠腫、頭頸部ガン、骨ガン、精巣ガン、白血病、骨髄腫、リンパ腫、肉腫、中皮腫、肝細胞ガン、結腸ガン、胆道ガン、胆管ガン、直腸ガン、結腸ガン、子宮内膜ガン、卵巣ガン（例えば、進行性卵巣ガン）又は卵管ガン、大細胞神経内分泌ガン、尿路上皮ガン（例えば、上部尿路上皮ガン又は膀胱ガン）、乳ガン、トリプルネガティブ乳ガン、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、メラノーマ、上咽頭ガン、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）又はミスマッチ修復機構欠損（ｄＭＭＲ）固形ガン、脳ガン（例えば、侵攻性脳ガン、例えば、膠芽腫）、卵巣ガン、扁平上皮ガン、基底細胞ガン、腺腫、粘液性又は漿液性嚢胞腺ガン、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、絨毛上皮腫、悪性胞状奇胎、悪性セルトリ細胞－間質細胞腫瘍、悪性顆粒球腫及び未分化胚細胞種
のうちの１種以上から選択される、項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体、項１１記載の医薬組成物、項１２記載の使用、項１３記載の方法、項１４記載のキット、項１５記載の単位製剤又は項１６記載の方法。

１９．
抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体、成分Ａ及び／又は化学療法剤が、静脈内注射又は静脈内点滴に適した形態、好ましくは、液状である、項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体、項１１記載の医薬組成物、項１２記載の使用、項１３記載の方法、項１４記載のキット、項１５記載の単位製剤又は項１６記載の方法。

２０．
対象者に有効量の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体を投与する工程が、外科的処置の前もしくは後及び／又は放射線療法の前もしくは後である、項１３又は１６記載の方法。

２１．
抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体の単位用量が、体重１kg当たりに、０．１～１００mg、好ましくは、１～１０mgであり、代替的には、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体の単位用量が、各対象において、１０～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg、２００mg又は１００mgであり、
成分Ａの単位用量が、体重１kg当たりに、０．１～１００mg、好ましくは、１～１０mgであり、代替的には、成分Ａの単位用量が、各対象において、１０～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg、２００mg又は１００mgであり、
好ましくは、該用量が、１日２回～約１日おきに１回又は３日、４日、５日、６日、１０日、１週間、２週間もしくは３週間に１回投与され、
好ましくは、投与経路が、静脈内点滴又は静脈内注射である、項１３又は１６記載の方法。

一部の実施態様では、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体は、１mg／kg 体重、２mg／kg 体重、３mg／kg 体重、５mg／kg 体重、６mg／kg 体重、９mg／kg 体重、１０mg／kg 体重、１１mg／kg 体重、１２mg／kg 体重、１３mg／kg 体重、１４mg／kg 体重、１５mg／kg 体重、１６mg／kg 体重、１７mg／kg 体重、１８mg／kg 体重、１９mg／kg 体重、２０mg／kg 体重、２１mg／kg 体重、２２mg／kg 体重、２３mg／kg 体重、２４mg／kg 体重又は２５mg／kg 体重の用量で投与される。

一部の実施態様では、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体は、ガンを効果的に処置することが可能な１つ以上の平坦用量で投与される。一部の具体的な実施態様では、平坦用量は、約１mg～約１０００mgの範囲である。一部の具体的な実施態様では、平坦用量は、約１００mg、約１５０mg、約２００mg、約２５０mg、約３００mg、約３５０mg、約４００mg、約４５０mg、約５００mg、約６００mg、約７００mg、約８００mg、約９００mg又は約１０００mgから選択される。

一部の実施態様では、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体の投与は、２週間（１４日）又は３週間（２１日）のサイクルで行われ、好ましくは、抗ＰＤ－１－抗ＣＴＬＡ４二重特異性抗体は、各サイクルの初日（Ｄ１）に静脈内投与される。すなわち、抗ＰＤ－１－抗ＣＴＬＡ４二特異性抗体は、２週間に１回（ｑ２ｗ）又は３週間に１回（ｑ３ｗ）投与される。

また、本発明は、固定用量の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体又は抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体（又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体）を収容する容器を含む、ガンを処置するための製品を製造するのにおける、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体及び抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体の使用も提供する。一部の具体的な実施態様では、容器は、アンプルである。固定用量は、約１０mg、約２０mg、約３０mg、約４０mg、約５０mg、約６０mg、約１００mg、約１５０mg、約２００mg、約２５０mg、約３００mg、約３５０mg、約４００mg、約５００mg又は約１０００mgから選択される。一部の具体的な実施態様では、該製品は、固定用量の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体をガン患者に投与するようユーザに指示する添付文書又は説明書をさらに含む。一部の具体的な実施態様では、該製品は、約５０mg、１００mg、２００mg、３００mg、３５０mg、４００mg、５００mg又は６００mg 抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体を収容する１つ以上のアンプルを含む。一部の具体的な実施態様では、該製品は、１バイアル当たりに、５０mg/５mL、１００mg/１０mL、２００mg/１０mL又は３５０mg/３５mL 抗ＰＤ－１－抗ＣＴＬＡ４二重特異性抗体、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体の溶液として包装される。

化学療法剤の量は、当業者が決定することができる。白金系化学療法薬については、シスプラチンの場合、シスプラチンの単位用量はＣａｌｖｅｒｔ式：
シスプラチン用量（mg）＝設定曲線下面積、すなわち、ＡＵＣ（mg/mL/分）×［クレアチニンクリアランス率（mL/分）＋２５］
に従って計算される。式中、ＡＵＣは、４～７、好ましくは、５である。該用量は、２～６週間に１回、好ましくは、３週間に１回又は４週間に１回投与されかつ／又は投与経路は、静脈内点滴又は静脈注射である。

本発明の１つ以上の実施態様では、化学療法剤又は増殖阻害剤は、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン剤、プロテインキナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、代謝アンタゴニスト、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒性剤又は抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管阻害剤、ＥＧＦＲアンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、アンギオポエチン２アンタゴニスト、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤及びそれらの組み合わせから選択される。

本発明の１つ以上の実施態様では、ターゲット化治療剤は、Ｂ－ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、Ｋ－ｒａｓ阻害剤、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤、Ａｌｋ阻害剤、ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、二重ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ／ｍＴＯＲ阻害剤及びそれらの組み合わせから選択される。

本発明の１つ以上の実施態様では、抗体－薬剤コンジュゲートは、メイタンシン、モノメチルオーリスタチンＥ、カリケアマイシン、エスペラマイシン及び放射性同位体キレート剤からなる群より選択される薬剤を含む。

本発明において、一部の表現は、下記意味を有する。

薬剤又は治療剤の「治療上有効量」又は「治療上有効用量」は、単独で又は別の治療剤と組み合わせて使用された場合に、対象を疾患の発症から保護し又は疾患症状の重症度の軽減、疾患症状のない期間の頻度及び期間の増加もしくは疾患の罹患により引き起こされる損傷もしくは障害の予防により証明されるように疾患の退縮を促進する、薬剤の任意の量である。疾患の退縮を促進する治療剤の能力を例えば、臨床試験におけるヒト対象、ヒトにおける有効性を予測する動物モデル系において当業者に公知の各種の方法を使用して又はｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおける薬剤の活性を決定することにより評価することができる。

薬剤の「予防上有効量」は、ガンを発症するリスクのある対象（例えば、前悪性状態を有する対象）又はガンを再発するリスクのある対象に、単独で又は抗悪性腫瘍剤と組み合わせて投与された場合、ガンの発生又は再発を阻害する薬剤の任意の量を指す。一部の実施態様では、予防上有効量は、ガンの発生又は再発を完全に予防する。ガンの発生又は再発を「阻害すること」は、ガンの発生もしくは再発の可能性を低減すること又はガンの発生もしくは再発を完全に予防することを意味する。

本明細書で使用する場合、「薬学的に許容し得る担体及び／又は賦形剤」という用語は、対象及び有効成分と薬理学的及び／又は生理学的に適合する担体及び／又は賦形剤を指す。このような担体及び／又は賦形剤は、当技術分野において周知であり（例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, edited by Gennaro AR, 19^thEd., Pennsylvania, Mack Publishing Company, 1995を参照のこと）、ｐＨレギュレーター、界面活性剤、アジュバント及びイオン強度増強剤を含むが、これらに限定されない。例えば、ｐＨレギュレーターは、リン酸バッファーを含むが、これに限定されない。界面活性剤は、カチオン性、アニオン性又は非イオン性界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ－８０を含むが、これらに限定されない。イオン強度増強剤は、塩化ナトリウムを含むが、これらに限定されない。

「再発性」ガンは、以前の処置（例えば、外科手術）を受けた後、元の部位又は離れた部位で再生するガンのことである。「局所再発性」ガンは、処置後に以前に処置されたガンと同じ部位に発生するガンのことである。

「転移性」ガンは、身体の一部（例えば、肺）から別の部位に広がるガンを指す。

軽鎖及び重鎖の可変領域により、抗原の結合が決定される。各鎖の可変領域は、３つの超可変領域、すなわち、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む（Kabat et alにより定義されたように、重鎖（Ｈ）のＣＤＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、軽鎖（Ｌ）のＣＤＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む。Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition (1991), Volumes 1-3, NIH Publication 91-3242, Bethesda Mdを参照のこと）。抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列が公知である場合、抗体のＣＤＲ領域を決定する方法は、Kabat、IMGT、Chothia及びABMナンバリングシステムを含めて幾つかある。ただし、抗体又はその変異体についてのＣＤＲの全ての定義の適用は、本明細書で定義され、使用される用語の範囲内に含まれるものとする。抗体の可変領域のアミノ酸配列が公知である場合、当業者であれば、一般的に、配列そのもの以外の実験データに何ら頼ることなく、特定のＣＤＲを決定することができる。

薬剤又は治療剤の「治療上有効量」又は「治療上有効用量」は、単独で又は別の治療剤と組み合わせて使用された場合に、対象を疾患の発症から保護し又は疾患症状の重症度の軽減、疾患症状のない期間の頻度及び期間の増加もしくは疾患の罹患により引き起こされる損傷もしくは障害の予防により証明されるように疾患の退縮を促進する、薬剤の任意の量である。疾患の退縮を促進する治療剤の能力を例えば、臨床試験におけるヒト対象、ヒトにおける有効性を予測する動物モデル系において当業者に公知の各種の方法を使用して又はｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおける薬剤の活性を決定することにより評価することができる。

薬剤の「予防上有効量」は、ガンを発症するリスクのある対象（例えば、前悪性状態を有する対象）又はガンを再発するリスクのある対象に、単独で又は抗悪性腫瘍剤と組み合わせて投与された場合、ガンの発生又は再発を阻害する薬剤の任意の量を指す。一部の実施態様では、予防上有効量は、ガンの発生又は再発を完全に予防する。ガンの発生又は再発を「阻害すること」は、ガンの発生もしくは再発の可能性を低減すること又はガンの発生もしくは再発を完全に予防することを意味する。

「再発性」ガンは、以前の処置（例えば、外科手術）を受けた後、元の部位又は離れた部位で再生するガンのことである。「局所再発性」ガンは、処置後に以前に処置されたガンと同じ部位に発生するガンのことである。

「転移性」ガンは、身体の一部（例えば、肺）から別の部位に広がるガンを指す。

「単回投与単位」という用語は、計画の時点で、好ましくは、対象の体重１kg当たりで、対象に投与される、本発明の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体、抗ＶＥＧＦＲ２抗体又は抗ＶＥＧＦ抗体を含む、単回医薬剤形、例えば、アンプルに入れられた注射剤を意味する。本発明の具体的な実施態様では、計画は、例えば、１日２回～約１日おきに又は３日、４日、５日、６日、１０日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間もしくは６週間に１回の投与サイクルに従って、単回投与単位を投与することを含む。

本発明において、「第１の」（例えば、第１のタンパク質機能領域又は第１のリンカーフラグメント）及び「第２の」（例えば、第２のタンパク質機能領域又は第２のリンカーフラグメント）という用語は、特に断らない限り、表現上の区別又は明瞭さのために使用され、典型的な連続的意味を有するものではない。

図１．混合リンパ球反応（ＭＬＲ）により測定されたＩＮＦ－γ分泌の促進に対する、抗ＶＥＧＦＲ２抗体ＨｐＬ３と組み合わせた抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体であるカドリニマブの生体活性についてのアッセイ結果。 図２．混合リンパ球反応（ＭＬＲ）により測定されたＰＢＭＣ活性化及びＩＬ－２分泌の促進に対する、ベバシズマブと組み合わせたカドリニマブの生体活性についてのアッセイ結果。

詳細な説明
以下に、本発明の実施態様を、実施例を参照して詳細に説明するものとするが、当業者であれば、下記実施例は、本発明を例証するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではないことを理解するであろう。実施例において条件が指定されていない実験手法は、従来の条件又は製造元が推奨する条件に従って行われる。使用された試薬又は器具は、その製造元が明記されていない場合、全て市販の従来品である。

本発明の下記実施例において、使用されたアイソタイプ対照抗体、すなわち、抗ＨＥＬは、ヒト抗ｈｅｎ卵リゾチーム（ＨＥＬ）をターゲットとする抗体であり、これらの抗体の可変領域配列は、Acierno et al.により、表題「Affinity maturation increases the stability and plasticity of the Fv domain of anti-protein antibodies」（Acierno et al., J Mol biol., 2007; 374(1): 130-46）に報告された研究によるものであり、ここで、重鎖可変領域の配列は、配列番号：４５に示されており、軽鎖可変領域の配列は、配列番号：４７に示されている。ｈＩｇＧ１ＷＴ（すなわち、抗ＨＥＬ）の定常領域フラグメントにおいて、重鎖定常領域（配列番号：４６）は、Ｉｇガンマ－１鎖Ｃ領域，アクセッション：Ｐ０１８５７であり、軽鎖定常領域（配列番号：４８）は、Ｉｇカッパ鎖Ｃ領域，アクセッション：Ｐ０１８３４である。抗ＨＥＬは、Akeso Biopharma、Inc.により調製されたものである。

実施例で使用されたベバシズマブ（抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体）は、Rocheにより製造された市販の薬剤である。

調製例１：抗ＣＴＬＡ４抗体の配列設計
抗ＣＴＬＡ４抗体４Ｇ１０並びにそのヒト化抗体４Ｇ１０Ｈ１Ｌ１及び４Ｇ１０Ｈ３Ｌ３の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列及びそれをコードする核酸配列はそれぞれ、中国特許出願公開第ＣＮ１０６９６７１７２Ａ号における４Ｇ１０、４Ｇ１０Ｈ１Ｌ１及び４Ｇ１０Ｈ３Ｌ３のものと同一である。

（１）４Ｇ１０の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列
重鎖可変領域の核酸配列：（３７２bp、配列番号：１）
そのコードされるアミノ酸配列：（１２４aa、配列番号：２）
軽鎖可変領域の核酸配列：（３７８bp、配列番号：３）
そのコードされるアミノ酸配列：（１２６aa、配列番号：４）
（２）ヒト化モノクローナル抗体４Ｇ１０Ｈ１Ｌ１の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列
重鎖可変領域（４Ｇ１０Ｈ１Ｖ）の核酸配列：（３４５bp、配列番号：５）
そのコードされるアミノ酸配列：（１１５aa、配列番号：６）
軽鎖可変領域（４Ｇ１０Ｌ１Ｖ）の核酸配列：（３２７bp、配列番号：７）
そのコードされるアミノ酸配列：（１０９aa、配列番号：８）
（３）ヒト化モノクローナル抗体４Ｇ１０Ｈ３Ｌ３の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列
重鎖可変領域（４Ｇ１０Ｈ３Ｖ）の核酸配列：（３４５bp、配列番号：９）
重鎖可変領域（４Ｇ１０Ｈ３Ｖ）のそのコードされるアミノ酸配列：（１１５aa、配列番号：１０）
軽鎖可変領域（４Ｇ１０Ｌ３Ｖ）の核酸配列：（３２７bp、配列番号：１１）
そのコードされるアミノ酸配列（４Ｇ１０Ｌ３Ｖ）：（１０９aa、配列番号：１２）

調製例２：抗ＰＤ－１抗体１４Ｃ１２及びそのヒト化抗体１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１の配列設計
抗ＰＤ－１抗体１４Ｃ１２及びそのヒト化抗体１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列及びそれをコードする核酸配列はそれぞれ、中国特許公開第ＣＮ１０６９６７１７２Ａ号における１４Ｃ１２及び１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１のものと同一である。

（１）１４Ｃ１２の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列
重鎖可変領域の核酸配列：（３５４bp、配列番号：１３）
そのコードされるアミノ酸配列：（１１８aa、配列番号：１４）
軽鎖可変領域の核酸配列：（３２１bp、配列番号：１５）
そのコードされるアミノ酸配列：（１０７aa、配列番号：１６）
（２）ヒト化モノクローナル抗体１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域並びに重鎖及び軽鎖の配列
重鎖可変領域の核酸配列：（３５４bp、配列番号：１７）
そのコードされるアミノ酸配列：（１１８aa、配列番号：１８）
軽鎖可変領域の核酸配列：（３２１bp、配列番号：１９）
そのコードされるアミノ酸配列：（１０７aa、配列番号：２０）
１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１重鎖（１４Ｃ１２Ｈ１）のＤＮＡ配列：（１３４４bp、配列番号：２１）
そのコードされるアミノ酸配列：（４４８aa、配列番号：２２）
１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１軽鎖（１４Ｃ１２Ｌ１）のＤＮＡ配列：（６４２bp、配列番号：２３）
そのコードされるアミノ酸配列：（２１４aa、配列番号：２４）

調製例３：二機能性抗体ＣＰ００１（Ｍ）、ＣＰ００２（Ｍ）、ＣＰ００３（Ｍ）及びＣＰ００４（Ｍ）の配列設計
二機能性抗体ＣＰ００１（Ｍ）、ＣＰ００２（Ｍ）、ＣＰ００３（Ｍ）及びＣＰ００４（Ｍ）の構造パターンは、モリソン形式（ＩｇＧ－ｓｃＦｖ）である。すなわち、１つのＩｇＧ抗体の２つの重鎖のＣ末端は、リンカーフラグメントを介して、別の抗体のｓｃＦｖフラグメントに別々に連結している。重鎖及び軽鎖の設計のための構成要素を以下の表Ａに示す。

上記表Ａにおいて、
リンカー１のアミノ酸配列は、（ＧＧＧＧＳ）_３（配列番号：２５）である。リンカー２のアミノ酸配列は（ＧＧＧＧＳ）_４（配列番号：２６）である。

上記表Ａにおいて、ＣＰ００１（Ｍ）、ＣＰ００２（Ｍ）、ＣＰ００３（Ｍ）及びＣＰ００４（Ｍ）抗体のｓｃＦｖフラグメント４Ｇ１０Ｈ１Ｖ（Ｍ）、４Ｇ１０Ｌ１Ｖ（Ｍ）、４Ｇ１０Ｈ３Ｖ（Ｍ）及び４Ｇ１０Ｌ３Ｖ（Ｍ）は、それぞれ４Ｇ１０Ｈ１Ｖ、４Ｇ１０Ｌ１Ｖ、４Ｇ１０Ｈ３Ｖ及び４Ｇ１０Ｌ３Ｖを基礎として、フレームワーク領域の個々のアミノ酸に突然変異を含んだ。これらにより、抗体の構造が効果的に最適化され、それらの有効性が改善された。

（１）４Ｇ１０Ｈ１Ｖ（Ｍ）：（１１５aa、突然変異位置には、４Ｇ１０Ｈ１Ｖに基づくアミノ酸配列に下線を引いている、配列番号：４１）
（２）４Ｇ１０Ｌ１Ｖ（Ｍ）：（１１０aa、突然変異位置には、４Ｇ１０Ｌ１Ｖに基づくアミノ酸配列に下線を引いている、配列番号：４２）
（３）４Ｇ１０Ｈ３Ｖ（Ｍ）：（１１５aa、突然変異位置には、４Ｇ１０Ｈ３Ｖに基づくアミノ酸配列に下線を引いている、配列番号：４３）
（４）４Ｇ１０Ｌ３Ｖ（Ｍ）：（１１０aa、突然変異位置には、４Ｇ１０Ｌ３Ｖに基づくアミノ酸配列に下線を引いている、配列番号：４４）

以下に、突然変異抗体と区別するために、本発明の実施例では、ＣＰ００４（Ｍ）は、ＣＰ００４（ｈＧ１ＷＴ）とも呼ばれる。上記されたＣＰ００４（Ｍ）は、重鎖定常領域としてＩｇガンマ－１鎖Ｃ領域（アクセッション：Ｐ０１８５７）及び軽鎖定常領域としてＩｇカッパ鎖Ｃ領域（アクセッション：Ｐ０１８３４）を含む「野生型」である。

調製例４：ヒト化二機能性抗体ＣＰ００４に基づく非可変領域のアミノ酸突然変異設計
調製例３で得られたＣＰ００４（ｈＧ１ＷＴ）に基づいて、ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ）を、重鎖における２３４位にロイシン－アラニン点突然変異（Ｌ２３４Ａ）、２３５位にロイシン－アラニン点突然変異（Ｌ２３５Ａ）及び２３７位にグリシン－アラニン点突然変異（Ｇ２３７Ａ）を導入することにより得た。
ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ）における免疫グロブリン部分の重鎖のＤＮＡ配列：（１３４４bp、突然変異位置には、下線を引いている、配列番号：３９）
ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ）における免疫グロブリン部分の重鎖のアミノ酸配列：（４４８aa、突然変異位置には、下線を引いている、配列番号：４０）

ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ）とＣＰ００４（ｈＧ１ＷＴ）とは、軽鎖の同じＤＮＡ配列及び同じコードされるアミノ酸配列を共有している。具体的な配列は、調製例３に示されている。

調製例５：抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体であるカドニリマブの調製
抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体であるカドニリマブ（すなわち、ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ））の構造パターンは、モリソン形式（ＩｇＧ－ｓｃＦｖ）である。すなわち、１つの免疫グロブリン部分（ＩｇＧ）抗体の２つの重鎖のＣ末端は、リンカーフラグメントを介して、別の抗体のｓｃＦｖフラグメントのＶＨ末端に連結している。ここで、免疫グロブリン部分は、ＰＤ－１抗体に基づいており、ｓｃＦｖフラグメントは、抗ＣＴＬＡ－４抗体に基づいており、間にあるリンカーフラグメントにより連結されている。

この実施例に記載された抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体あるカドニリマブ抗体（すなわち、ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ））の軽鎖配列（配列番号：７２）及び重鎖配列（配列番号：７０）は、WHO Drug Information, Proposed INN: List 124（WHO Drug Information, 2020; 34(4): 947-949）に由来し、調製方法は、下記のとおりである。

候補モノクローナル抗体の定常領域及び可変領域を含む重鎖コード遺伝子のＤＮＡ配列と、候補モノクローナル抗体の定常領域及び可変領域を含む軽鎖コード遺伝子のＤＮＡ配列とをそれぞれ、pUC57simple（GenScript提供）ベクターに別々にクローニングして、プラスミドpUC57simple-H及びpUC57simple-Lを得た。

上記プラスミドを酵素消化し（ＨｉｎｄＩＩＩ及びＥｃｏＲＩ）、電気泳動により単離された重鎖及び軽鎖を別々に発現ベクターpcDNA3.1（Invitrogenから購入）にサブクローニングした。リコンビナントプラスミドを抽出し、pcDNA3.1-H＋pcDNA3.1-Lの組み合わせを２９３Ｆ細胞に共トランスフェクションした。７日間の細胞培養後、培養物を高速で遠心分離した。上清を濃縮し、HiTrap MabSelect SuReカラムにロードし、タンパク質精製液体クロマトグラフィーシステム（AKTA Purifier 10, GE）を使用して精製した。

精製されたサンプル、すなわち、抗体カドニリマブを還元タンパク質電気泳動用ローディングバッファーと非還元タンパク質電気泳動用ローディングバッファーとの両方に加え、ついで、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動用に煮沸した。還元タンパク質サンプルのターゲットタンパク質は、７０kD及び３０kDであり、非還元タンパク質サンプル（単独抗体）のターゲットタンパク質は、２００kDであった。タンパク質は、理論的なサイズに適合し、このため、精製抗体が得られた。

調製例６：抗ＶＥＧＦＲ２抗体ＨｐＬ３の調製
この実施例に記載された抗ＶＥＧＦＲ２抗体ＨｐＬ３の抗体軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の配列及び調製方法は、特許出願第ＣＮ２０１６１０５７３６．Ｘ号、「AN ANTI-VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR RECEPTOR VEGFR2 MONOCLONAL ANTIBODY AND AN ENCODING GENE AND USE THEREOF」から引用した。

ＨｐＬ３の重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：５０に示されており、そのコード遺伝子のＤＮＡ配列は、配列番号：４９に示されており、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３の配列はそれぞれ、配列番号：５３～５５に示されている。

ＨｐＬ３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：５２に示されており、そのコード遺伝子のＤＮＡ配列は、配列番号：５１に示されており、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３の配列はそれぞれ、配列番号：５６～５８に示されている。

ＨｐＬ３は、重鎖定常領域としてＩｇガンマ－１鎖Ｃ領域（アクセッション：Ｐ０１８５７）を含み、軽鎖定常領域としてＩｇカッパ鎖Ｃ領域（アクセッション：Ｐ０１８３４）を含む。

候補モノクローナル抗体の定常領域及び可変領域を含む重鎖コード遺伝子のＤＮＡ配列と、候補モノクローナル抗体の定常領域及び可変領域を含む軽鎖コード遺伝子のＤＮＡ配列とをそれぞれ、pUC57simple（GenScript提供）ベクターに別々にクローニングして、プラスミドpUC57simple-PCABH及びpUC57simple-L3を得た。

上記プラスミドを酵素消化し（ＨｉｎｄＩＩＩ及びＥｃｏＲＩ）、電気泳動により単離された重鎖及び軽鎖を発現ベクターpcDNA3.1（Invitrogenから購入）に別々にサブクローニングした。リコンビナントプラスミドを抽出し、pcDNA3.1-PCABH＋pcDNA3.1-L3の組み合わせを２９３Ｆ細胞に共トランスフェクションした。７日間の細胞培養後、培養物を高速で遠心分離した。上清を濃縮し、HiTrap MabSelect SuReカラムにロードし、タンパク質精製液体クロマトグラフィーシステム（AKTA Purifier 10, GE）を使用して精製した。

精製されたサンプル、すなわち、抗体ＨｐＬ３を還元タンパク質電気泳動用ローディングバッファーと非還元タンパク質電気泳動用ローディングバッファーとの両方に加え、ついで、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動用に煮沸した。還元タンパク質サンプルのターゲットタンパク質は、４５kD及び３０kDであり、非還元タンパク質サンプル（単独抗体）のターゲットタンパク質は、１５０kDであった。タンパク質は、理論的なサイズに適合し、このため、精製モノクローナル抗体が得られた。

実施例１：混合リンパ球反応（ＭＬＲ）により測定されたＩＮＦ－γ分泌の促進に対する、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二重特異性抗体であるカドニリマブを抗ＶＥＧＦＲ２抗体ＨｐＬ３と組み合わせた生体活性
Ｒａｊｉ－ＰＤＬ１細胞の調製
ヒトＰＤ－Ｌ１過剰発現レンチウイルスベクターplenti6.3/V5-PDL1FL-BSDは、ウイルスパッケージング後に、Ｒａｊｉ細胞に感染させ、ＢＳＤ（ブラストサイジン、１０ug/mL）薬剤スクリーニング後に、薬剤耐性細胞系統Ｒａｊｉ－ＰＤＬ１を得た。plenti6.3/V5-PDL1FL-BSDを、供給元であるNanjing Genscriptからの遺伝子ＰＤＬ１ＦＬ（ＰＤＬ１、Genebank ID：ＮＰ＿０５４８６２．１）を合成し、ついで、酵素消化により、それをplenti6.3/V5-BSD（Invitrogen Cat. No: k531520）にライゲーションすることにより得た。

実験の２日前に、ＰＢＭＣ（正常ヒト末梢血から単離）を融解し、完全培地中において、３７℃、５％ 二酸化炭素インキュベーターで培養した。２時間後、ＰＢＭＣの状態が回復した時点で、ＳＥＢ（最終濃度０．５μg/mL）（Toxin technology, Cat. No: BT202）を加えて、２日間刺激した。実験当日、Ｒａｊｉ－ＰＤＬ１細胞を回収し、遠心分離し、再懸濁させ（１６４０＋１０％ ＦＢＳ中）、計数し、２×１０^６個/mLの密度に調整し、ＭＭＣ（マイトマイシンＣ、最終濃度２μg/mL、製造元：Stressmarq, Cat.No: SIH-246）を加え、この混合物を５％ 二酸化炭素インキュベーター中において、３７℃で１時間処理した。ＳＥＢ刺激２日後のＰＢＭＣ及びＭＭＣ処理後のＲａｊｉ－ＰＤＬ１細胞を回収し、１６４０基礎培地で２回洗浄し、細胞を完全培地で再懸濁させ、計数し、細胞を１×１０^５個/ウェル ＰＢＭＣ及び１×１０^５個/ウェル Ｒａｊｉ－ＰＤＬ１（それぞれ５０μL/ウェル）に従って、９６ウェルＵ字プレート（３７９９）に接種した。薬剤を実験設計に従って加え、ブランク対照及びネガティブ対照を設定し、細胞を３日間培養した（系の最終容量を２００μLとした）。３日後、細胞を２５０×ｇで５分間遠心分離し（Beckman遠心分離機）、細胞上清を回収し、ＩＦＮ－γ含量を、Dakeweキットを使用して検出した。

図１に示されたように、ＰＢＭＣ及びＲａｊｉ－ＰＤＬ１細胞の混合培養系において、カドニリマブ及びＨｐＬ３抗体の添加により、両方とも有意な用量依存的に、ＰＢＭＣにおけるＩＦＮ－γの分泌を有意に誘引することができる。ＩＦＮ－γ分泌促進活性のレベルに関して、カドニリマブとＨｐＬ３抗体との組み合わせは、カドニリマブ及びＨｐＬ３抗体単独と比較して、より良好なＩＦＮ－γ分泌促進能を有する。

実施例２：混合リンパ球反応（ＭＬＲ）により測定されたＰＢＭＣ活性化及びＩＬ－２分泌の促進に対する、カドニリマブをベバシズマブと組み合わせた生体活性
実験の２日前に、ＰＢＭＣ（健常人ボランティアからのインフォームドコンセント後の自発的な献血末梢血から単離）を融解し、完全培地中において、３７℃、５％ 二酸化炭素インキュベーターで培養した。２時間後、ＰＢＭＣの状態が回復した時点で、ＳＥＢ（最終濃度０．５μg/mL）（Toxin technology, Cat. No: BT202）を加えて、２日間刺激した。実験当日、Ｒａｊｉ－ＰＤＬ１細胞（Akeso Biopharma、Inc.製）を回収し、遠心分離し、再懸濁させ（１６４０＋１０％ ＦＢＳ中）、計数し、２×１０^６個/mLの密度に調整し、ＭＭＣ（マイトマイシンＣ、最終濃度２μg/mL）（マイトマイシンＣ、製造元：Stressmarq, Cat.No: SIH-246）を加え、この混合物を５％ 二酸化炭素インキュベーター中において、３７℃で１時間処理した。ＳＥＢ刺激２日後のＰＢＭＣ及びＭＭＣ処理後のＲａｊｉ－ＰＤＬ１細胞を回収し、１６４０基礎培地で２回洗浄し、細胞を分析培地で再懸濁させ、計数し、細胞を１×１０^５個/ウェル ＰＢＭＣ及び１×１０^５個/ウェル Ｒａｊｉ－ＰＤＬ１（それぞれ４０μL/ウェル）に従って、９６ウェルＵ字プレート（３７９９）に接種した。Ｈｅｌａ細胞（Chinese academy of sciencesから購入）を従来どおり消化し、２×１０^４個/ウェル（４０μL/ウェル）に従って、９６ウェルＵ字プレート（３７９９）に接種した。薬剤を実験設計に従って加え、ネガティブ対照及びアイソタイプ対照を設定し、細胞を３日間培養した（系の最終容量を２００μLとした）。３日後、細胞を２５０×ｇで５分間遠心分離し（Beckman遠心分離機）、細胞上清を回収し、ＩＬ－２含量を、Dakeweキットを使用して検出した。

図２に示されたように、ＰＢＭＣ、Ｒａｊｉ－ＰＤＬ１及びＨｅｌａ（子宮頸ガン）細胞、ＶＥＧＦ（バッチ番号：２０１８０１２６－１、Akeso Biopharma Inc.製）の混合培養系において、カドニリマブ及びベバシズマブの添加により、両方とも有意な用量依存的に、ＰＢＭＣにおけるＩＬ－２の分泌を有意に誘引することができる。ＩＬ－２分泌促進活性のレベルに関して、カドニリマブとベバシズマブとの組み合わせは、カドニリマブ及びベバシズマブ単独と比較して、より良好なＩＬ－２分泌促進能を有する。

ベバシズマブの重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：６０に示されており、そのコード遺伝子のＤＮＡ配列は、配列番号：５９に示されており、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３の配列はそれぞれ、配列番号：６３～６５に示されている。ベバシズマブの軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号：６２に示されており、そのコード遺伝子のＤＮＡ配列は、配列番号：６１に示されており、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３の配列はそれぞれ、配列番号：６６～６８に示されている。

配列表
配列番号：１：４Ｇ１０の重鎖可変領域の核酸配列

配列番号：２：４Ｇ１０の重鎖可変領域のアミノ酸配列

配列番号：３：４Ｇ１０の軽鎖可変領域の核酸配列

配列番号：４：４Ｇ１０の軽鎖可変領域のアミノ酸配列

配列番号：５：４Ｇ１０Ｈ１Ｌ１の重鎖可変領域の核酸配列

配列番号：６：４Ｇ１０Ｈ１Ｌ１の重鎖可変領域のアミノ酸配列

配列番号：７：４Ｇ１０Ｈ１Ｌ１の軽鎖可変領域の核酸配列

配列番号：８：４Ｇ１０Ｈ１Ｌ１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列

配列番号：９：４Ｇ１０Ｈ３Ｌ３の重鎖可変領域の核酸配列

配列番号：１０：４Ｇ１０Ｈ３Ｌ３の重鎖可変領域のアミノ酸配列

配列番号：１１：４Ｇ１０Ｈ３Ｌ３の軽鎖可変領域の核酸配列

配列番号：１２：４Ｇ１０Ｈ３Ｌ３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列

配列番号：１３：１４Ｃ１２の重鎖可変領域の核酸配列

配列番号：１４：１４Ｃ１２の重鎖可変領域のアミノ酸配列

配列番号：１５：１４Ｃ１２の軽鎖可変領域の核酸配列

配列番号：１６：１４Ｃ１２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列

配列番号：１７：１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１の重鎖可変領域の核酸配列

配列番号：１８：１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１の重鎖可変領域のアミノ酸配列

配列番号：１９：１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１の軽鎖可変領域の核酸配列

配列番号：２０：１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１の軽鎖可変領域のアミノ酸配列

配列番号：２１：１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１重鎖（１４Ｃ１２Ｈ１）のＤＮＡ配列（１３４４bp）

配列番号：２２：１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１重鎖（１４Ｃ１２Ｈ１）のコードされるアミノ酸配列（４４８aa）

配列番号：２３：１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１軽鎖（１４Ｃ１２Ｌ１）のＤＮＡ配列（６４２bp）

配列番号：２４：１４Ｃ１２Ｈ１Ｌ１軽鎖（１４Ｃ１２Ｌ１）のコードされるアミノ酸配列（２１４aa）

配列番号：２５：リンカー１のアミノ酸配列

配列番号：２６：リンカー２のアミノ酸配列

配列番号：２７：１４Ｃ１２のＨＣＤＲ１

配列番号：２８：１４Ｃ１２のＨＣＤＲ２

配列番号：２９：１４Ｃ１２のＨＣＤＲ３

配列番号：３０：１４Ｃ１２のＬＣＤＲ１

配列番号：３１：１４Ｃ１２のＬＣＤＲ２

配列番号：３２：１４Ｃ１２のＬＣＤＲ３

配列番号：３３：４Ｇ１０のＨＣＤＲ１

配列番号：３４：４Ｇ１０のＨＣＤＲ２

配列番号：３５：４Ｇ１０のＨＣＤＲ３

配列番号：３６：４Ｇ１０のＬＣＤＲ１

配列番号：３７：４Ｇ１０のＬＣＤＲ２

配列番号：３８：４Ｇ１０のＬＣＤＲ３

配列番号：３９：ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ）の免疫グロブリン部分の重鎖のＤＮＡ配列、突然変異位置には下線を引いている

配列番号：４０：ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ）における免疫グロブリン部分の重鎖のアミノ酸配列、突然変異位置には下線を引いている

配列番号：４１：４Ｇ１０Ｈ１Ｖ（Ｍ）のアミノ酸配列、突然変異位置には下線を引いている

配列番号：４２：４Ｇ１０Ｌ１Ｖ（Ｍ）のアミノ酸配列、突然変異位置には下線を引いている

配列番号：４３：４Ｇ１０Ｈ３Ｖ（Ｍ）のアミノ酸配列、突然変異位置には下線を引いている

配列番号：４４：４Ｇ１０Ｌ３Ｖ（Ｍ）のアミノ酸配列、突然変異位置には下線を引いている

配列番号：４５：ｈＩｇＧの重鎖可変領域の配列

配列番号：４６ ｈＩｇＧの重鎖定常領域の配列

配列番号：４７ ｈＩｇＧの軽鎖可変領域の配列

配列番号：４８ ｈＩｇＧの軽鎖定常領域の配列

配列番号：４９ ＨｐＬ３（ＶＥＧＦＲ２）の重鎖可変領域の核酸配列

（注記：下線部は、ＣＤＲ配列を表わす）

配列番号：５０ ＨｐＬ３の重鎖可変領域のアミノ酸配列

（注記：下線部は、ＣＤＲ配列を表わす）

配列番号：５１ ＨｐＬ３の軽鎖可変領域の核酸配列

（注記：下線部は、ＣＤＲ配列を表わす）

配列番号：５２ ＨｐＬ３の軽鎖可変領域のアミノ酸配列

（注記：下線部は、ＣＤＲ配列を表わす）
ＨｐＬ３の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３
ＨＣＤＲ１：GFTFSSYS（配列番号：５３）
ＨＣＤＲ２：ISSSSSYI（配列番号：５４）
ＨＣＤＲ３：ARVTDAFDI（配列番号：５５）
ＨｐＬ３の軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３
ＬＣＤＲ１：QGLDNW（配列番号：５６）
ＬＣＤＲ２：DAS（配列番号：５７）
ＬＣＤＲ３：QQAKAFPPT（配列番号：５８）

配列番号：５９ ベバシズマブ（ＶＥＧＦ）の重鎖可変領域の核酸配列

配列番号：６０ ベバシズマブの重鎖可変領域のアミノ酸配列

配列番号：６１ ベバシズマブの軽鎖可変領域の核酸配列

配列番号：６２ ベバシズマブの軽鎖可変領域のアミノ酸配列

ベバシズマブの重鎖可変領域の３つのＣＤＲのアミノ酸配列は、下記のとおりである。

ベバシズマブの軽鎖可変領域の３つのＣＤＲのアミノ酸配列は、下記のとおりである。

配列番号：６９ ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ）重鎖の核酸配列

配列番号：７０ ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ）重鎖（全長）のアミノ酸配列

（注記：下線部は、ＣＤＲ配列を表わす）

配列番号：７１ ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ）軽鎖の核酸配列

配列番号：７２ ＣＰ００４（ｈＧ１ＴＭ）軽鎖（全長）のアミノ酸配列

Claims (21)

1. 抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体であって、
   抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体は、好ましくは、腫瘍を処置するのに使用され、好ましくは、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体は、成分Ａと組み合わせて投与され、
   ここで、成分Ａは、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体もしくはその抗原結合フラグメント、抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体もしくはその抗原結合フラグメント又はそれらの組み合わせから選択され、
   ここで、
   （１）抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体は、
   ＰＤ－１をターゲットとする第１のタンパク質機能領域と、
   ＣＴＬＡ４をターゲットとする第２のタンパク質機能領域とを含み、
   ここで、第１のタンパク質機能領域は、免疫グロブリンであり、第２のタンパク質機能領域は、一本鎖抗体であるか又は第１のタンパク質機能領域は、一本鎖抗体であり、第２のタンパク質機能領域は、免疫グロブリンであり、
   ここで、該免疫グロブリンは、配列番号：１４に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：２７～２９に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：１６に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３０～３２に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含み、該一本鎖抗体は、配列番号：２に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３３～３５に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：４に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３６～３８に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含み又は
   該免疫グロブリンは、配列番号：２に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３３～３５に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：４に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３６～３８に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含み、該一本鎖抗体は、配列番号：１４に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：２７～２９に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：１６に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：３０～３２に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含み、
   （２）抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体は、配列番号：５０に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：５３～５５に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：５２に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：５６～５８に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含み又は
   （３）抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体は、配列番号：６０に示される重鎖可変領域におけるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：６３～６５に示されるＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３）及び配列番号：６２に示される軽鎖可変領域におけるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３（好ましくは、それぞれ、配列番号：６６～６８に示されるＬＣＤＲ１～ＬＣＤＲ３）を含む、
   抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。
2. （１）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４もしくは配列番号：１８に示される配列又はそれらの変異体から選択され、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６もしくは配列番号：２０に示される配列又はそれらの変異体から選択され、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２、配列番号：６、配列番号：１０、配列番号：４１もしくは配列番号：４３に示される配列又はそれらの変異体から選択され、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４、配列番号：８、配列番号：１２、配列番号：４２もしくは配列番号：４４に示される配列又はそれらの変異体から選択され又は
   該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２、配列番号：６、配列番号：１０、配列番号：４１もしくは配列番号：４３に示される配列又はそれらの変異体から選択され、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４、配列番号：８、配列番号：１２、配列番号：４２もしくは配列番号：４４に示される配列又はそれらの変異体から選択され、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４もしくは配列番号：１８に示される配列又はそれらの変異体から選択され、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６もしくは配列番号：２０に示される配列又はそれらの変異体から選択され、
   （２）抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：５０に示される配列又はその変異体であり、抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：５２に示される配列又はその変異体であり又は
   （３）抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６０に示される配列又はその変異体であり、抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６２に示される配列又はその変異体であり、
   ここで、該変異体の配列が、対応する配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は少なくとも９９％の相同性を有する、請求項１記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。
3. 該二重特異性抗体が、下記（１）～（２０）：
   （１）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４に示される配列又はその変異体であり、
   （２）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：８に示される配列又はその変異体であり、
   （３）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１２に示される配列又はその変異体であり、
   （４）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４に示される配列又はその変異体であり、
   （５）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：８に示される配列又はその変異体であり、
   （６）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１２に示される配列又はその変異体であり、
   （７）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、
   （８）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、
   （９）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、
   （１０）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：６に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、
   （１１）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１０に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、
   （１２）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１０に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、
   （１３）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４１に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４２に示される配列又はその変異体であり、
   （１４）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４３に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４４に示される配列又はその変異体であり、
   （１５）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４１に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４２に示される配列又はその変異体であり、
   （１６）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４３に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４４に示される配列又はその変異体であり、
   （１７）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４１に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、
   （１８）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４３に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１６に示される配列又はその変異体であり、
   （１９）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４１に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４２に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、
   のうちのいずれか１つから選択され、
   （２０）該免疫グロブリンの重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４３に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：４４に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：１８に示される配列又はその変異体であり、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号：２０に示される配列又はその変異体であり、
   ここで、該変異体の配列が、対応する配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は少なくとも９９％の相同性を有する、請求項１又は２記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。
4. 該免疫グロブリンの重鎖のアミノ酸配列が、配列番号：４０に示される配列又はその変異体であり、該免疫グロブリンの軽鎖のアミノ酸配列が、配列番号：２４に示される配列又はその変異体であり、ここで、該変異体の配列が、対応する配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は少なくとも９９％の相同性を有する、請求項１～３のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。
5. 第１のタンパク質機能領域が、第２のタンパク質機能領域に直接又はリンカーフラグメントを介してのいずれかで連結しておりかつ／又は該一本鎖抗体の重鎖可変領域が、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域に直接又はリンカーフラグメントを介してのいずれかで連結している、請求項１～４のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。
6. リンカーフラグメントが、（ＧＧＧＧＳ）_ｎであり、ｎが、正の整数であり、好ましくは、ｎが、１、２、３、４、５又は６である、請求項５記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。
7. 第１及び第２のタンパク質機能領域の数が、それぞれ独立して、１、２又はそれ以上である、請求項１～６のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。
8. 該一本鎖抗体（好ましくは、重鎖可変領域）が、該免疫グロブリンの重鎖に連結しており、好ましくは、該免疫グロブリンの重鎖のＣ末端に連結している、請求項１～７のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。
9. 該免疫グロブリンが、ヒトＩｇＧ１サブタイプのものであり、
   ここで、ＥＵナンバリングシステムに従って、該免疫グロブリンが、下記突然変異：
   Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ又は
   Ｌ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ又は
   Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ又は
   Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ
   から選択されるＡ突然変異を有する重鎖定常領域を含みかつ
   ＥＵナンバリングシステムに従って、該免疫グロブリンが、下記突然変異：
   Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｔ３９４Ｄ、Ｇ２３６Ｒ、Ｇ２３６Ａ、Ｌ３２８Ｒ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｅ３１８Ａ及びＫ３２０Ａ
   のうちの１つ以上から選択されるＢ突然変異を有する重鎖定常領域を含み又は
   ＥＵナンバリングシステムに従って、該免疫グロブリンが、Ａ突然変異とＢ突然変異との組み合わせを有する重鎖定常領域を含み、
   抗ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体又は抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体の重鎖定常領域が、Ｉｇガンマ－１鎖Ｃ領域，アクセッションＰ０１８５７であり、その軽鎖定常領域が、Ｉｇカッパ鎖Ｃ領域，アクセッションＰ０１８３４である、請求項１～８のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。
10. 該二重特異性抗体が、
    ＰＤ－１をターゲットとする第１のタンパク質機能領域と、
    ＣＴＬＡ４をターゲットとする第２のタンパク質機能領域とを含み、
    第１のタンパク質機能領域の数が、１であり、第２のタンパク質機能領域の数が、２であり、
    ここで、第１のタンパク質機能領域が、免疫グロブリンであり、第２のタンパク質機能領域が、一本鎖抗体であり、
    該免疫グロブリンの重鎖が、配列番号：４０に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の相同性を有する配列を有し、軽鎖が、配列番号：２４に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の相同性を有する配列を有し、
    該一本鎖抗体の重鎖可変領域が、配列番号：４３に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の相同性を有する配列を有し、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域が、配列番号：４４に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の相同性を有する配列を有し、
    該一本鎖抗体が、該免疫グロブリンの重鎖のＣ末端に連結しており、
    第１のタンパク質機能領域が、第２のタンパク質機能領域に第１のリンカーフラグメントを介して連結しており、該一本鎖抗体の重鎖可変領域が、該一本鎖抗体の軽鎖可変領域に第２のリンカーフラグメントを介して連結しており、第１のリンカーフラグメント及び第２のリンカーフラグメントが同一又は異なり、
    好ましくは、第１のリンカーフラグメント及び第２のリンカーフラグメントがそれぞれ、配列番号：２５及び配列番号：２６から独立して選択されるアミノ酸配列を有し、
    好ましくは、第１のリンカーフラグメント及び第２のリンカーフラグメントのアミノ酸配列が、配列番号：２６に示され、
    好ましくは、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二特異性抗体の軽鎖が、配列番号：７２に示される配列を有し、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二特異性抗体の重鎖が、配列番号：７０に示される配列を有し、
    好ましくは、該抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂ、Ｆａｂ／ｃ、相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、二価抗体又はドメイン抗体から選択される、請求項１～９のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体。
11. 腫瘍（特に、悪性腫瘍）を処置するための医薬組成物であって、
    有効量の請求項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体と、請求項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａとを含み、
    ここで、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体と成分Ａとの質量比は、好ましくは、（１：５）～（５：１）、例えば、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１又は５：１から選択され、好ましくは、該医薬組成物は、固体又は液体の形態にあり、場合により、該医薬組成物は、１種以上の化学療法剤（好ましくは、化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質、植物由来薬剤及び／又はホルモン性薬剤、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、パクリタキセル（例えば、アルブミン結合パクリタキセル、リポソームパクリタキセル及びドセタキセル）、エトポシド、ゲムシタビン、ペメトレキセド、カペシタビン、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、フルゾパリブ、ビンカアルカロイド、タモキシフェン、メゲストロール、ゴセレリン、アスパラギナーゼ及び／又はフルオロウラシル抗悪性腫瘍剤である）をさらに含む、
    医薬組成物。
12. 腫瘍（特に、悪性腫瘍）を予防しかつ／又は治療するための医薬又はキットを製造するのにおける、請求項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体の使用であり、
    該医薬又はキットは、好ましくは、請求項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａをさらに含み、場合により、該医薬又はキットは、腫瘍を処置するための１種以上の薬剤（好ましくは、該薬剤は、化学療法剤又は増殖阻害剤（例えば、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン剤、プロテインキナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒又は抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管剤、ＥＧＦＲアンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、アンギオポエチン２アンタゴニスト、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、ターゲット化治療剤（例えば、Ｂ－ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、Ｋ－ｒａｓ阻害剤、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤、Ａｌｋ阻害剤、ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、二重ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ／ｍＴＯＲ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、抗体－薬剤コンジュゲート（例えば、メイタンシン、モノメチルオーリスタチンＥ、カリケアマイシン、エスペラマイシン及び放射性同位体キレーター）、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、抗体又はその抗原結合フラグメント、血管新生阻害剤、抗悪性腫瘍剤、ガンワクチン、アジュバント及びそれらの組み合わせ、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質、植物由来薬剤及び／又はホルモン性薬剤、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、パクリタキセル、アルブミン結合パクリタキセル、リポソームパクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ゲムシタビン、ペメトレキセド、カペシタビン、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、フルゾパリブ、ビンカアルカロイド、タモキシフェン、メゲストロール、ゴセレリン、アスパラギナーゼ及び／又はフルオロウラシル抗悪性腫瘍剤）である）をさらに含む、
    使用。
13. 腫瘍（特に、悪性腫瘍）を予防しかつ／又は治療するための方法であって、
    治療上有効量の請求項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体を請求項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａと組み合わせて、より好ましくは、腫瘍を処置するための１種以上の薬剤（好ましくは、該薬剤は、化学療法剤又は増殖阻害剤（例えば、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン剤、プロテインキナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒又は抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管剤、ＥＧＦＲアンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、アンギオポエチン２アンタゴニスト、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、ターゲット化治療剤（例えば、Ｂ－ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、Ｋ－ｒａｓ阻害剤、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤、Ａｌｋ阻害剤、ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、二重ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ／ｍＴＯＲ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、抗体－薬剤コンジュゲート（例えば、メイタンシン、モノメチルオーリスタチンＥ、カリケアマイシン、エスペラマイシン及び放射性同位体キレーター）、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、抗体又はその抗原結合フラグメント、血管新生阻害剤、抗悪性腫瘍剤、ガンワクチン、アジュバント及びそれらの組み合わせ、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質、植物由来薬剤及び／又はホルモン性薬剤、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、パクリタキセル（例えば、アルブミン結合パクリタキセル、リポソームパクリタキセル及びドセタキセル）、エトポシド、ゲムシタビン、ペメトレキセド、カペシタビン、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、フルゾパリブ、ビンカアルカロイド、タモキシフェン、メゲストロール、ゴセレリン、アスパラギナーゼ及び／又はフルオロウラシル抗悪性腫瘍剤）である）とさらに組み合わせて、対象に投与することを含み、
    ここで、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体、成分Ａ及び抗腫瘍化学療法剤は、好ましくは、同時に又は連続的に投与される、
    方法。
14. 腫瘍（特に、悪性腫瘍）を予防しかつ／又は治療するためのキットであって、
    （ａ）有効成分として請求項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体を含む第１の医薬組成物と、（ｂ）有効成分として請求項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａを含む第２の医薬組成物と、場合により、（ｃ）腫瘍を処置するための１種以上の薬剤（好ましくは、該薬剤は、化学療法剤又は増殖阻害剤（例えば、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン剤、プロテインキナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒又は抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管剤、ＥＧＦＲアンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、アンギオポエチン２アンタゴニスト、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、ターゲット化治療剤（例えば、Ｂ－ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、Ｋ－ｒａｓ阻害剤、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤、Ａｌｋ阻害剤、ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、二重ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ／ｍＴＯＲ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、抗体－薬剤コンジュゲート（例えば、メイタンシン、モノメチルオーリスタチンＥ、カリケアマイシン、エスペラマイシン及び放射性同位体キレーター）、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、抗体又はその抗原結合フラグメント、血管新生阻害剤、抗悪性腫瘍剤、ガンワクチン、アジュバント及びそれらの組み合わせ、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質、植物由来薬剤及び／又はホルモン性薬剤、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、パクリタキセル（例えば、アルブミン結合パクリタキセル、リポソームパクリタキセル及びドセタキセル）、エトポシド、ゲムシタビン、ペメトレキセド、カペシタビン、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、フルゾパリブ、ビンカアルカロイド、タモキシフェン、メゲストロール、ゴセレリン、アスパラギナーゼ及び／又はフルオロウラシル抗悪性腫瘍剤）である）とを含む、
    キット。
15. 腫瘍（特に、悪性腫瘍）を処置するのに好ましく使用される単位製剤であって、
    該単位製剤は、１～１００００mg（好ましくは、１０～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg又は２００mg） 請求項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体と、１～１００００mg（好ましくは、１～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg、２００mg又は１００mg） 請求項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａと、場合により、腫瘍を処置するための１種以上の薬剤（好ましくは、該薬剤は、化学療法剤又は増殖阻害剤（例えば、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗ホルモン剤、アロマターゼ阻害剤、抗アンドロゲン剤、プロテインキナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒又は抗腫瘍抗生物質、プロテアソーム阻害剤、抗微小管剤、ＥＧＦＲアンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、アンギオポエチン２アンタゴニスト、レチノイド、チロシンキナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、ターゲット化治療剤（例えば、Ｂ－ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、Ｋ－ｒａｓ阻害剤、ｃ－Ｍｅｔ阻害剤、Ａｌｋ阻害剤、ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、二重ホスファチジリン－オシトール－３－キナーゼ／ｍＴＯＲ阻害剤及びそれらの組み合わせ）、抗体－薬剤コンジュゲート（例えば、メイタンシン、モノメチルオーリスタチンＥ、カリケアマイシン、エスペラマイシン及び放射性同位体キレーター）、キメラ抗原レセプターを発現するＴ細胞、抗体又はその抗原結合フラグメント、血管新生阻害剤、抗悪性腫瘍剤、ガンワクチン、アジュバント及びそれらの組み合わせ、代謝拮抗剤、抗生物質、植物由来薬剤及び／又はホルモン性薬剤、白金系薬剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、アドリアマイシン、シクロホスファミド、パクリタキセル（例えば、アルブミン結合パクリタキセル、リポソームパクリタキセル及びドセタキセル）、エトポシド、ゲムシタビン、ペメトレキセド、カペシタビン、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、フルゾパリブ、ビンカアルカロイド、タモキシフェン、メゲストロール、ゴセレリン、アスパラギナーゼ及び／又はフルオロウラシル抗悪性腫瘍剤）である）とを含み、
    ここで、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体と成分Ａと化学療法剤とは、別個に包装されている、
    単位製剤。
16. ガン又は腫瘍を予防し又は治療するための方法であって、
    ガン又は腫瘍の予防又は治療を必要とする対象に、１種以上の請求項１５記載の単位製剤を投与することを含み、
    好ましくは、該単位製剤中の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体、成分Ａ及び化学療法剤はそれぞれ、別個に投与される、
    方法。
17. 腫瘍（特に、悪性腫瘍）を処置するのに好ましく使用され、
    ０．１～１００００mg（好ましくは、１～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg、２００mg又は１００mg） 請求項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体と、０．１～１００００mg（好ましくは、１～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg、２００mg又は１００mg）請求項１～１０のいずれか一項で定義された成分Ａとを含む、
    単回投与単位。
18. 腫瘍が、以下：
    子宮頸ガン（例えば、転移性子宮頸ガン）、肺ガン、例えば、非小細胞肺ガン（例えば、扁平上皮非小細胞肺ガン又は非扁平上皮非小細胞肺ガン等）、食道ガン、食道扁平上皮ガン、回盲部腺ガン、膨大部腺ガン、小細胞肺ガン、胃ガン（例えば、進行性胃ガン、胃腺ガン又は胃食道接合部腺ガン）、腎臓ガン、子宮内膜ガン、副腎皮質ガン、前立腺ガン、甲状腺ガン、腹膜ガン、腺ガン、膵臓ガン、神経膠腫、頭頸部ガン、骨ガン、精巣ガン、白血病、骨髄腫、リンパ腫、肉腫、中皮腫、肝細胞ガン、結腸ガン、胆道ガン、胆管ガン、直腸ガン、結腸ガン、子宮内膜ガン、卵巣ガン（例えば、進行性卵巣ガン）又は卵管ガン、大細胞神経内分泌ガン、尿路上皮ガン（例えば、上部尿路上皮ガン又は膀胱ガン）、乳ガン、トリプルネガティブ乳ガン、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、メラノーマ、上咽頭ガン、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）又はミスマッチ修復機構欠損（ｄＭＭＲ）固形ガン、脳ガン（例えば、侵攻性脳ガン、例えば、膠芽腫）、卵巣ガン、扁平上皮ガン、基底細胞ガン、腺腫、粘液性又は漿液性嚢胞腺ガン、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、絨毛上皮腫、悪性胞状奇胎、悪性セルトリ細胞－間質細胞腫瘍、悪性顆粒球腫及び未分化胚細胞種
    のうちの１種以上から選択される、請求項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体、請求項１１記載の医薬組成物、請求項１２記載の使用、請求項１３記載の方法、請求項１４記載のキット、請求項１５記載の単位製剤又は請求項１６記載の方法。
19. 抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体、成分Ａ及び／又は化学療法剤が、静脈内注射又は静脈内点滴に適した形態、好ましくは、液状である、請求項１～１０のいずれか一項記載の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体、請求項１１記載の医薬組成物、請求項１２記載の使用、請求項１３記載の方法、請求項１４記載のキット、請求項１５記載の単位製剤又は請求項１６記載の方法。
20. 対象者に有効量の抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二特異性抗体を投与する工程が、外科的処置の前もしくは後及び／又は放射線療法の前もしくは後である、請求項１３又は１６記載の方法。
21. 抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体の単位用量が、体重１kg当たりに、０．１～１００mg、好ましくは、１～１０mgであり、代替的には、抗ＣＴＬＡ４－抗ＰＤ－１二重特異性抗体の単位用量が、各対象において、１０～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg又は２００mgであり、
    成分Ａの単位用量が、体重１kg当たりに、０．１～１００mg、好ましくは、１～１０mgであり、代替的には、成分Ａの単位用量が、各対象において、１０～１０００mg、好ましくは、５０～５００mg、１００～４００mg、１５０～３００mg、１５０～２５０mg、２００mg又は１００mgであり、
    好ましくは、該用量が、１日２回～約１日おきに１回又は３日、４日、５日、６日、１０日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間もしくは６週間に１回投与され、
    好ましくは、投与経路が、静脈内点滴又は静脈内注射である、請求項１３又は１６記載の方法。