KR20230171456A - 항-종양 치료에서의 항체의 용도 - Google Patents

항-종양 치료에서의 항체의 용도 Download PDF

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아케소 파마슈티컬스, 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 CTLA4 및 PD-1에 대한 이중특이적 항체에 관한 것으로, 상기 항체는 종양 치료용으로 사용되고, 항-VEGFR2 단일클론 항체 또는 항-VEGF 단일클론 항체와 조합하여 투여되며,
PD-1을 표적으로 하는 제 1 단백질 기능성 영역 및
CTLA4를 표적으로 하는 제 2 단백질 기능성 영역
을 포함하고,
상기 제 1 단백질 기능성 영역은 면역글로불린이고 상기 제 2 단백질 기능성 영역은 단일 사슬 항체이거나, 또는 상기 제 1 단백질 기능성 영역은 단일 사슬 항체이고 상기 제 2 단백질 기능성 영역은 면역글로불린이다.

Description

항-종양 치료에서의 항체의 용도
본 발명은 분자면역학 분야에 관한 것으로, 특히 종양 치료에서의 항-혈관 내피 성장 인자 수용체 VEGFR2 단일클론 항체(anti-vascular endothelial growth factor receptor VEGFR2 monoclonal antibody), 또는 항-PD-1/CTLA-4 이중특이적 항체와의 조합에서 항-VEGF 단일클론 항체의 용도에 관한 것이다.
종양은 심각한 건강-위협 질환이어서 효과적인 치료 및 의약을 개발해야 할 시급한 요구가 있다.
혈관 내피 성장 인자 수용체 2(VEGFR2)는 혈관 내피 세포의 성장 인자에 특이적으로 작용하는 수용체이고, 또한 KDR 또는 FLK1이라고도 한다. 주로 현재 발견되는 VEGFR의 종류로는 주로 VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, NP-1 및 NP-2가 있으며, 상기 VEGFR-1 및 VEGFR-2는 혈관 내피 세포에 주로 존재하며, 상기 VEGFR-3는 림프 내피 세포에 존재한다. 상기 NP-1 및 NP-2는 내피 세포뿐만 아니라 일부 종양 세포에서도 발현된다. 그러나 VEGF는 주로 VEGFR2에 결합하여 혈관 내피 세포의 증식을 촉진하는 것과 같은 생물학적 활성을 발휘한다.
새로운 혈관의 형성은 망막증(retinopathy), 관절염, 자궁내막증 등과 같은 인간의 다양한 질환에서 중요한 역할을 한다. 종양의 성장은 통상적으로 새로운 혈관의 형성을 동반한다. 1971년 초에 J. Folkman은 종양의 혈관신생을 차단함으로써 종양의 성장 및 전이가 억제될 수 있다고 제안하였다. 최근에, 점점 더 많은 악성 종양이 발생, 전이 및 예후에 있어서 혈관 내피 세포 성장 인자 및 그의 수용체 패밀리(receptor families)와 관련되는 것으로 밝혀졌다. 따라서 다시 VEGF 및 그의 수용체를 표적으로 하는 항-종양 치료법이 관심을 끌고 있으며, 수용체 패밀리 중에서도 VEGFR-2를 표적으로 하는 것이 가장 널리 연구되고 있다.
PD-1은 활성화된 T 림프구 및 B 림프구에 의해 발현된 핵심 면역 관문 수용체(key immune checkpoint receptor)로서 면역억제(immunosuppression)를 매개하고, 그의 리간드는 적어도 PD-L1 및 PD-L2를 포함한다. 항-PD-1 항체는 프로그래밍된 사멸 수용체-1(programmed death receptor-1; PD-1)과 특이적으로 결합하여 억제제 PD-1/PD-1 리간드 경로를 차단한다(Topalian 등, (2012a) N Engl J Med 366: 2443-54).
PD-L1(프로그래밍된 사멸-리간드 1)은 CD274 또는 B7-H1로도 알려져 있으며, CD274 유전자에 의해 암호화된 40 kDa 유형 1 막관통 단백질이고, PD-1의 리간드이다. PD-L1은 림프구 및 비림프계 조직에서 백혈구 및 비조혈 세포(nonhematopoietic cells)뿐만 아니라 다양한 암세포에 널리 분포되어 있으며, 다양한 종양 세포의 표면에서 고도로 발현되며, 종양의 악성 정도 및 불량한 예후는 PD-L1의 발현 수준과 밀접한 관련이 있다. PD-L1 및 PD-1은 모두 면역글로불린 슈퍼패밀리에 속하며 2개의 세포외 Ig 도메인을 갖는다. 프로그래밍된 사멸 수용체-1(PD-1) 및 B7-1(CD80)에 대한 PD-L1의 결합 계면은 IgV-유사 도메인(Lin 등, (2008) PNAS 105: 3011-3016)이다. PD-L1은 보존된 짧은 세포내 꼬리(conserved short intracellular tail)(약 30개의 아미노산)를 함유하며, PD-1은 2개의 세포질 티로신계 신호전달 모티프(cytoplasmic tyrosine-based signaling motifs), 즉 면역수용체 티로신계 억제 모티프(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif; ITIM) 및 면역수용체 티로신계 스위치 모티프(immunoreceptor tyrosine-based switch motif; ITSM)를 함유한다. T 세포 자극에 따라, PD-1은 세포질 꼬리(cytoplasmic tail)에 티로신 포스파타제(tyrosine phosphatase) SHP-2를 ITSM 모티프로 모집하여, CD3+ T 세포 신호전달 캐스케이드에 포함된 이펙터 분자(CD3ζ, PKCθ 및 ZAP70)를 탈인산화시킨다(Freeman 등, (2000) J Exp Med 192:1027-34; Latchman 등, (2001) Nat Immunol 2: 261-8; Carter et al, (2002) Eur J Immunol 32: 634-43). 임상 데이터는 PD-L1의 높은 종양 발현이 증가된 종양 침습성 및 예후 불량과 관련이 있음을 시사하였다.
PD-1/PD-L1은 중요한 특이적 면역 관문(immune checkpoint)이다. PD-1/PD-L1 복합체의 형성은 억제 신호를 전달하고 T 세포 면역 반응을 음성으로 조절하며; 이는 TCR-매개된 T 세포 활성화, 사이토카인 생산, 및 T 세포 증식을 억제하고(Fife 등, (2011) Nature Immunology 10: 1185-1193), 동족 항원-특이적 T 세포들 중에서 고갈(exhaustion) 또는 아네르기(anergy)를 유도하며(Hofmeyer 등, (2011) Journal of Biomedicine and Biotechnology 2011: 1-9), Foxp3+ 조절 T 세포로의 Th1 세포의 분화를 촉진하고(Armanath 등, (2011) Science TransMed 3: 1-13; Francisco 등, (2009) J. Exp . Med.206: 3015-3029); 이펙터 T 세포의 세포사멸(apoptosis)을 유도한다PD-L1 유전자의 파괴는 상향조절된 T 세포 반응 및 자가반응성 T 세포의 생산을 초래한다(Latchman 등, (2004) PNAS, 101:10691-10696). 항체에 의한 PD-1 또는 PD-L1의 차단은 상승된 항-종양 면역성을 초래한다(Iwai 등, (2002) PNAS, 99:12293-12297).
CTLA-4는 대표적인 특이적 면역 관문 단백질 중의 하나이다. CTLA-4는 임상적으로 적용되는 제 1 표적이다. 항-CTLA-4 항체는 T 세포 활성화를 촉진하고 항-종양 효과를 개선시킬 수 있다. 이필리무맙(Ipilimumab)은 FDA에 의해 사전 치료 및 승인된 전이성 흑색종 환자의 전반적인 생존율을 개선하는 것으로 입증된 제 1 CTLA-4 면역 관문 억제제이다. 현재 연구는 CTLA-4는 주로 2가지 경로를 통해 T 세포의 반응을 억제하는 것으로 나타났다. 하나는 CD28과 B7에 경쟁적 결합하는 것이거나, 또는 포스파타제를 CTLA-4의 세포내 도메인에 모집함으로써 TCR(T 세포 수용체) 및 CD28의 신호를 감소시키는 것이다. 또 다른 것은 항원 제시 세포(antigen-presenting cells; APC)에 대한 CD80 및 CD86의 발현 수준을 감소시키거나 세포내이동(transendocytosis)을 통해 APC로부터 그들을 제거함으로써 CD28-관여 T 세포 활성화를 감소시킨다. 또한, CTLA-4는 CD80/CD86에 대한 수지상 세포의 결합을 매개하고 트립토판- 분해 효소(tryptophan-degrading enzyme) IDO의 발현을 유도하여 TCR을 억제한다. CTLA-4 항체는 Treg를 감소시키고 CTLA-4와의 결합에 의해 TCR을 활성화시킨다.
PD-1 항체 및 CTLA-4(세포독성 T 림프구-연관된 단백질 4) 항체 약제(medicament)의 조합은 PD-1 항체 단독보다 다수의 종양에 대한 월등한 효능을 보여준다. 그러나 조합 사용의 효능 개선은 항상 독성이 더 많이 수반되어 있어 그의 적용이 크게 제한된다.
항-혈관 신생 표적 약물(anti-angiogenesis targeted drug)인 베바시주맙(Bevacizumab)은 혈관의 성장을 저해하고 광범위한 스펙트럼의 항암제인 혈관 내피 성장 인자(VEGF)와의 결합에 의해서 종양의 전이를 억제한다. 출시 이후, 베바시주맙은 주로 뇌암(예를 들어 공격성 뇌암, 예를 들어 교모세포종), 신장암, 폐암(예를 들어 전이성 비-편평 비-소세포 폐암), 결장암, 직장암, 자궁경부암(예를 들어 전이성 자궁경부암), 자궁내막암, 난소암(예를 들어 진행성 난소암) 또는 난관암, 신장암 등의 다양한 유형의 암의 치료용으로 승인받았다.
본 발명자들은 항-VEGFR2 단일클론 항체와의 조합에서 또는 항-VEGF 단일클론 항체와의 조합에서 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체가 종양을 효과적으로 예방하고 치료할 수 있으며, 독성 및 부작용이 낮은 것을 발견하였다. 이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
구체적으로, 본 발명은 하기에 관한 것이다:
1. 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체로서,
상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체는 바람직하게는 종양 치료용으로 사용되고; 바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체는 성분 A와의 조합으로 투여되고, 상기 성분 A는 항-VEGFR2 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 항-VEGF 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 그들의 조합으로부터 선택되되,
(1) 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체는:
PD-1을 표적으로 하는 제 1 단백질 기능성 영역 및
CTLA4를 표적으로 하는 제 2 단백질 기능성 영역
을 포함하고,
상기 제 1 단백질 기능성 영역은 면역글로불린이고, 상기 제 2 단백질 기능성 영역은 단일 사슬 항체이거나; 또는 상기 제 1 단백질 기능성 영역은 단일 사슬 항체이고, 상기 제 2 단백질 기능성 영역은 면역글로불린이며;
상기 면역글로불린은 서열번호 14에 제시된 중쇄 가변 영역(heavy chain variable region)에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 27 내지 29에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 16에 제시된 경쇄 가변 영역(light chain variable region)에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 30 내지 32에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하고; 상기 단일 사슬 항체는 서열번호 2에 제시된 중쇄 가변 영역에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 33 내지 35에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 4에 제시된 경쇄 가변 영역에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 36 내지 38에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하거나;
또는,
상기 면역글로불린은 서열번호 2에 제시된 중쇄 가변 영역에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 33 내지 35에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 4에 제시된 경쇄 가변 영역에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 36 내지 38에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하고; 상기 단일 사슬 항체는 서열번호 14에 제시된 중쇄 가변 영역에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 27 내지 29에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 16에 제시된 경쇄 가변 영역에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 30 내지 32에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하고;
(2) 상기 항-VEGFR2 단일클론 항체는 서열번호 50에 제시된 중쇄 가변 영역에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 53 내지 55에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 52에 제시된 경쇄 가변 영역에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 56 내지 58에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하고; 또는
(3) 상기 항-VEGF 단일클론 항체는 서열번호 60에 제시된 중쇄 가변 영역에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 63 내지 65에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 62에 제시된 경쇄 가변 영역에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 66 내지 68에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하는,
항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
2. 항목 1에 있어서,
(1) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14, 서열번호 18, 또는 그의 변이체로부터 선택되고; 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16, 서열번호 20, 또는 그의 변이체로부터 선택되며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2, 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 41, 서열번호 43, 또는 그의 변이체로부터 선택되며; 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4, 서열번호 8, 서열번호 12, 서열번호 42, 서열번호 44, 또는 그의 변이체로부터 선택되거나;
또는,
상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2, 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 41, 서열번호 43, 또는 그의 변이체로부터 선택되며; 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4, 서열번호 8, 서열번호 12, 서열번호 42, 서열번호 44, 또는 그의 변이체로부터 선택되고; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14, 서열번호 18, 또는 그의 변이체로부터 선택되며; 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16, 서열번호 20, 또는 그의 변이체로부터 선택되고;
(2) 상기 항-VEGFR2 단일클론 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 50에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고; 상기 항-VEGFR2 단일클론 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고; 또는
(3) 상기 항-VEGF 단일클론 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 60에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고; 상기 항-VEGF 단일클론 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 62에 제시된 서열 또는 그의 변이체인,
항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
3. 항목 1 또는 2에 있어서,
상기 이중특이적 항체는:
(1) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(2) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 8에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(3) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 10에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 12에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(4) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(5) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 8에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(6) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 10에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 12에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(7) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(8) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(9) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 8에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(10) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 8에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(11) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 10에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 12에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(12) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 10에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 12에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(13) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 41에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 42에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(14) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(15) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 41에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 42에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(16) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(17) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 41에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 42에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(18) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
(19) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 41에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 42에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
및,
(20) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
중의 어느 하나로부터 선택되되,
상기 변이체는 대응하는 서열에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 가지는,
항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
4. 항목 1 내지 3 중의 어느 하나에 있어서,
상기 면역글로불린의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 40에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 24에 제시된 서열 또는 그의 변이체이되, 상기 변이체의 서열은 대응하는 서열에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 가지는, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
5. 항목 1 내지 4 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 단백질 기능성 영역은 직접 또는 링커 단편(linker fragment)을 통해 상기 제 2 단백질 기능성 영역에 연결되고/되거나; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역은 직접 또는 링커 단편을 통해 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역에 연결되는, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
6. 항목 5에 있어서,
상기 링커 단편은 (GGGGS)n이되, 상기 n은 양의 정수이고, 바람직하게는 상기 n은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6인, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
7. 항목 1 내지 6 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 및 제 2 단백질 기능성 영역의 수는 각각 독립적으로 1, 2, 또는 그 초과인, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
8. 항목 1 내지 7 중의 어느 하나에 있어서,
상기 단일 사슬 항체(바람직하게는 상기 중쇄 가변 영역)은 상기 면역글로불린의 중쇄의 C 말단(terminus)에 연결되는, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
9. 항목 1 내지 8 중의 어느 하나에 있어서,
상기 면역글로불린은 인간 IgG1 서브타입(subtype)이되;
EU 넘버링 시스템(EU numbering system)에 따르면, 상기 면역글로불린은, 돌연변이:
L234A 및 L235A; 또는
L234A 및 G237A; 또는
L235A 및 G237A; 또는
L234A, L235A, 및 G237A,
로부터 선택된 A 돌연변이를 갖는 중쇄 불변 영역(heavy chain constant region)을 포함하고;
EU 넘버링 시스템에 따르면, 상기 면역글로불린은, 돌연변이:
N297A, D265A, D270A, P238D, L328E, E233D, H268D, P271G, A330R, C226S, C229S, E233P, P331S, S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, T256E, N297Q, P238S, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, T394D, G236R, G236A, L328R, A330S, P331S, H268A, E318A, 및 K320A,
중의 하나 이상으로부터 선택된 B 돌연변이를 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하고; 또는
EU 넘버링 시스템에 따르면, 상기 면역글로불린은, A 돌연변이 및 B 돌연변이의 조합을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하거나;
또는
상기 항-VEGFR2 단일클론 항체 또는 상기 항-VEGF 단일클론 항체의 중쇄 불변 영역은 Ig 감마-1 사슬 C 영역, ACCESSION P01857이고, 상기 경쇄 불변 영역은 Ig 카파 사슬(kappa chain) C 영역, ACCESSION P01834인,
항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
10. 항목 1 내지 9 중의 어느 하나에 있어서,
상기 이중특이적 항체는:
PD-1을 표적으로 하는 제 1 단백질 기능성 영역 및
CTLA4를 표적으로 하는 제 2 단백질 기능성 영역
를 포함하고,
상기 제 1 단백질 기능성 영역의 수는 1이고, 상기 제 2 단백질 기능성 영역의 수는 2이며;
상기 제 1 단백질 기능성 영역은 면역글로불린이며, 상기 제 2 단백질 기능성 영역은 단일 사슬 항체이고;
상기 면역글로불린의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 40에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 24에 제시된 서열 또는 그의 변이체이되, 상기 변이체는 대응하는 서열에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 가지며;
상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44에 제시된 서열 또는 그의 변이체이되, 상기 변이체는 대응하는 서열에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 가지고;
상기 단일 사슬 항체는 상기 면역글로불린의 중쇄의 C 말단에 연결되며;
상기 제 1 단백질 기능성 영역은 제 1 링커 단편을 통해 상기 제 2 단백질 기능성 영역에 연결되고; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역은 제 2 링커 단편을 통해 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역에 연결되며; 상기 제 1 링커 단편 및 제 2 링커 단편은 동일하거나 또는 상이하고;
바람직하게는, 상기 제 1 링커 단편 및 제 2 링커 단편은 각각 서열번호 25 및 서열번호 26으로부터 독립적으로 선택된 아미노산 서열을 가지며;
바람직하게는, 상기 제 1 링커 단편 및 제 2 링커 단편의 아미노산 서열은 서열번호 26에 제시되고;
바람직하게는, 상기 항-PD-1/CTLA-4 이중특이적 항체의 경쇄는 서열번호 72에 제시된 서열을 가지고, 상기 항-PD-1/CTLA-4 이중특이적 항체의 중쇄는 서열번호 70에 제시된 서열을 가지며;
바람직하게는, 상기 항원-결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb, Fab/c, 상보성 결정 영역(complementarity determining region; CDR) 단편, 단일 사슬 항체(예를 들어 scFv), 2가 항체, 또는 도메인 항체로부터 선택되는;
항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
11. 종양(특히 악성 종양)을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
유효량의 항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 및 항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 정의된 성분 A를 포함하되,
상기 약학 조성물은 바람직하게는 고체 또는 액체의 형태이고;
바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 및 상기 성분 A의 질량비(mass ratio)는 (1:5) 내지 (5:1), 예를 들어 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 또는 5:1에서 선택되며;
선택적으로, 상기 약학 조성물은 하나 이상의 화학요법 약물(바람직하게는, 상기 화학요법 약물은 알킬화제, 항대사물질(antimetabolite), 항생제, 식물계 및/또는 호르몬 약물, 백금계 약물(예를 들어 시스플라틴, 카보플라틴 및 옥살리플라틴), 아드리아마이신, 사이클로포스파미드, 파클리탁셀(paclitaxel), 알부민-결합 파클리탁셀, 리포좀 파클리탁셀, 도세탁셀(docetaxel), 에토포시드(etoposide), 겜시타빈(gemcitabine), 페메트렉세드(pemetrexed), 카페시타빈(capecitabine), 올라파립(olaparib), 루카파립(rucaparib), 니라파립(niraparib), 탈라조파립(talazoparib), 플루조파립(fluzoparib), 빈카 알칼로이드(vinca alkaloid), 타목시펜(tamoxifen), 메게스트롤(megestrol), 고세렐린(goserelin), 아스파라기나제(asparaginase), 및/또는 플루오로우라실 항신생물제(fluorouracil antineoplastic agent)임)을 더 포함하는,
약학 조성물.
12. 종양(특히 악성 종양)을 예방하고/하거나 치료하기 위한 약제(medicament) 또는 키트(kit)를 제조함에 있어서 항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 용도로서,
상기 약제 또는 키트는 바람직하게는 항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 정의된 성분 A를 더 포함하되;
선택적으로, 상기 약제 또는 키트는 종양을 치료하기 위한 하나 이상의 약물(drugs)(바람직하게는, 상기 약물은 화학요법 약물(chemotherapeutic drug) 또는 성장 억제제(예를 들어 알킬화제, 안트라사이클린, 항-호르몬제, 아로마타제 억제제(aromatase inhibitor), 항-안드로겐제(anti-androgen agent), 단백질 키나제 억제제(protein kinase inhibitor), 지질 키나제 억제제, 안티센스 올리고뉴클레오티드(antisense oligonucleotide), 리보자임(ribozyme), 항대사물질, 토포이소머라제 억제제(topoisomerase inhibitor), 세포독소 또는 항-종양 항생제, 프로테아좀 억제제(proteasome inhibitor), 항-미세관제(anti-microtubule agent), EGFR 길항제, VEGF 길항제, 안지오포이에틴 2 길항제(angiopoietin 2 antagonist), 레티노이드, 티로신 키나제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제(histone deacetylase inhibitor) 및 그들의 조합물), 표적 치료제(targeted therapeutic)(예를 들어 B-raf 억제제, MEK 억제제, K-ras 억제제, c-Met 억제제, Alk 억제제, 포스파티딜린-오시톨-3-키나제 억제제(phosphatidylin-ositol-3-kinase inhibitor), Akt 억제제, mTOR 억제제, VEGF 억제제, PARP 억제제, 이중 포스파티딜린-오시톨-3-키나제/mTOR 억제제 및 그들의 조합물), 항체-약물 접합체(예를 들어 메이탄신(maytansine), 모노메틸 아우리스타틴 E(monomethyl auristatin E), 칼리케아미신(calicheamicin), 에스페라마이신(esperamicin) 및 방사성 동위원소 킬레이트제(radioisotope chelator)), 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포, 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 혈관신생 억제제, 항신생물제, 암 백신, 보조제(adjuvant) 및 그들의 조합물, 알킬화제, 항대사물질, 항생제, 식물계 및/또는 호르몬 약물, 백금계 약물(예를 들어 시스플라틴, 카보플라틴 및 옥살리플라틴), 아드리아마이신, 사이클로포스파미드, 파클리탁셀, 알부민-결합 파클리탁셀, 리포좀 파클리탁셀, 도세탁셀, 에토포시드, 겜시타빈, 페메트렉세드, 카페시타빈, 올라파립, 루카파립, 니라파립, 탈라조파립, 플루조파립, 빈카 알칼로이드, 타목시펜, 메게스트롤, 고세렐린, 아스파라기나제, 및/또는 플루오로우라실 항신생물제임)을 더 포함하는, 용도.
13. 종양(특히 악성 종양)을 예방하고/하거나 치료하는 방법으로서,
치료적 유효량의 항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체를,
항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 정의된 성분 A와의 조합으로,
보다 바람직하게는 종양을 치료하기 위한 하나 이상의 약물(바람직하게는, 상기 약물은 화학요법 약물 또는 성장 억제제(예를 들어 알킬화제, 안트라사이클린, 항-호르몬제, 아로마타제 억제제, 항-안드로겐제, 단백질 키나제 억제제, 지질 키나제 억제제, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 세포독소 또는 항-종양 항생제, 프로테아좀 억제제, 항-미세관제, EGFR 길항제, VEGF 길항제, 안지오포이에틴 2 길항제, 레티노이드, 티로신 키나제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제 및 그들의 조합물), 표적 치료제(예를 들어 B-raf 억제제, MEK 억제제, K-ras 억제제, c-Met 억제제, Alk 억제제, 포스파티딜린-오시톨-3-키나제 억제제, Akt 억제제, mTOR 억제제, VEGF 억제제, PARP 억제제, 이중 포스파티딜린-오시톨-3-키나제/mTOR 억제제 및 그들의 조합물), 항체-약물 접합체(예를 들어 메이탄신, 모노메틸 아우리스타틴 E, 칼리케아미신, 에스페라마이신 및 방사성 동위원소 킬레이트제), 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포, 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 혈관신생 억제제, 항신생물제, 암 백신, 보조제 및 그들의 조합물, 항대사물질, 항생제, 식물계 및/또는 호르몬 약물, 백금계 약물(예를 들어 시스플라틴, 카보플라틴 및 옥살리플라틴), 아드리아마이신, 사이클로포스파미드, 파클리탁셀(예를 들어 알부민-결합 파클리탁셀, 리포좀 파클리탁셀, 및 도세탁셀), 에토포시드, 겜시타빈, 페메트렉세드, 카페시타빈, 올라파립, 루카파립, 니라파립, 탈라조파립, 플루조파립, 빈카 알칼로이드, 타목시펜, 메게스트롤, 고세렐린, 아스파라기나제, 및/또는 플루오로우라실 항신생물제임)과의 추가 조합으로,
대상체에게 투여하는 것을 포함하되,
상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 성분 A, 및 항-종양 화학요법 약물은 바람직하게는 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것인,
방법.
14. 종양(특히 악성 종양)을 예방하고/하거나 치료하기 위한 키트로서,
(a) 활성 성분으로서 항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체를 포함하는 제 1 약학 조성물;
(b) 활성 성분으로서 항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 정의된 성분 A를 포함하는 제 2 약학 조성물; 및
선택적으로,
(c) 종양을 치료하기 위한 하나 이상의 약물(바람직하게는, 상기 약물은 화학요법 약물 또는 성장 억제제(예를 들어 알킬화제, 안트라사이클린, 항-호르몬제, 아로마타제 억제제, 항-안드로겐제, 단백질 키나제 억제제, 지질 키나제 억제제, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 세포독소 또는 항-종양 항생제, 프로테아좀 억제제, 항-미세관제, EGFR 길항제, VEGF 길항제, 안지오포이에틴 2 길항제, 레티노이드, 티로신 키나제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제 및 그들의 조합물), 표적 치료제(예를 들어 B-raf 억제제, MEK 억제제, K-ras 억제제, c-Met 억제제, Alk 억제제, 포스파티딜린-오시톨-3-키나제 억제제, Akt 억제제, mTOR 억제제, VEGF 억제제, PARP 억제제, 이중 포스파티딜린-오시톨-3-키나제/mTOR 억제제 및 그들의 조합물), 항체-약물 접합체(예를 들어 메이탄신, 모노메틸 아우리스타틴 E, 칼리케아미신, 에스페라마이신 및 방사성 동위원소 킬레이트제), 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포, 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 혈관신생 억제제, 항신생물제, 암 백신, 보조제 및 그들의 조합물, 알킬화제, 항대사물질, 항생제, 식물계 및/또는 호르몬 약물, 백금계 약물(예를 들어 시스플라틴, 카보플라틴 및 옥살리플라틴), 아드리아마이신, 사이클로포스파미드, 파클리탁셀(예를 들어 알부민-결합 파클리탁셀, 리포좀 파클리탁셀, 및 도세탁셀), 에토포시드, 겜시타빈, 페메트렉세드, 카페시타빈, 올라파립, 루카파립, 니라파립, 탈라조파립, 플루조파립, 빈카 알칼로이드, 타목시펜, 메게스트롤, 고세렐린, 아스파라기나제, 및/또는 플루오로우라실 항신생물제임);
을 포함하는, 키트.
15. 단위 제형(unit formulation)으로서,
바람직하게는 종양(특히 악성 종양) 치료용으로 사용되고,
상기 단위 제형은,
항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 1-1000 mg(바람직하게는 10-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 또는 200 mg);
항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 정의된 성분 A 1-1000 mg(바람직하게는 10-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 또는 200 mg); 및
선택적으로,
종양을 치료하기 위한 하나 이상의 약물(바람직하게는, 상기 약물은 화학요법 약물 또는 성장 억제제(예를 들어 알킬화제, 안트라사이클린, 항-호르몬제, 아로마타제 억제제, 항-안드로겐제, 단백질 키나제 억제제, 지질 키나제 억제제, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 세포독소 또는 항-종양 항생제, 프로테아좀 억제제, 항-미세관제, EGFR 길항제, VEGF 길항제, 안지오포이에틴 2 길항제, 레티노이드, 티로신 키나제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제 및 그들의 조합물), 표적 치료제(예를 들어 B-raf 억제제, MEK 억제제, K-ras 억제제, c-Met 억제제, Alk 억제제, 포스파티딜린-오시톨-3-키나제 억제제, Akt 억제제, mTOR 억제제, VEGF 억제제, PARP 억제제, 이중 포스파티딜린-오시톨-3-키나제/mTOR 억제제 및 그들의 조합물), 항체-약물 접합체(예를 들어 메이탄신, 모노메틸 아우리스타틴 E, 칼리케아미신, 에스페라마이신 및 방사성 동위원소 킬레이트제), 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포, 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 혈관신생 억제제, 항신생물제, 암 백신, 보조제 및 그들의 조합물, 알킬화제, 항대사물질, 항생제, 식물계 및/또는 호르몬 약물, 백금계 약물(예를 들어 시스플라틴, 카보플라틴 및 옥살리플라틴), 아드리아마이신, 사이클로포스파미드, 파클리탁셀(예를 들어 알부민-결합 파클리탁셀, 리포좀 파클리탁셀, 및 도세탁셀), 에토포시드, 겜시타빈, 페메트렉세드, 카페시타빈, 올라파립, 루카파립, 니라파립, 탈라조파립, 플루조파립, 빈카 알칼로이드, 타목시펜, 메게스트롤, 고세렐린, 아스파라기나제, 및/또는 플루오로우라실 항신생물제임);
을 포함하되,
상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 상기 성분 A, 및 상기 화학요법 약물은 바람직하게는 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것인,
단위 제형.
16. 암 또는 종양을 예방하거나 치료하는 방법으로서,
상기 방법은 항목 15에 따른 하나 이상의 단위 제형을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 바람직하게는 상기 단위 제형에서 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 상기 성분 A, 및 상기 화학요법 약물은 각각 개별적으로 투여되는 것인, 방법.
17. 단일 투여량 단위(single dose unit)로서,
바람직하게는 종양(특히 악성 종양) 치료용으로 사용되고,
항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 0.1-10000 mg(바람직하게는 1-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 200 mg, 또는 100 mg); 및
항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 정의된 성분 A 0.1-10000 mg(바람직하게는 1-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 200 mg, 또는 100 mg);
을 포함하는, 단일 투여량 단위.
18. 항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 항목 11에 따른 약학 조성물, 항목 12에 따른 용도, 항목 13에 따른 방법, 항목 14에 따른 키트, 항목 15에 따른 단위 제형, 또는 항목 16에 따른 방법에 있어서,
상기 종양은:
자궁경부암(예를 들어 전이성 자궁경부암), 폐암 예를 들어 비-소세포 폐암(예를 들어 편평 비-소세포 폐암 또는 비-편평 비-소세포 폐암), 식도암, 식도 편평암, 회장 선암(ileocecal adenocarcinoma), 췌장 선암, 소세포 폐암, 위암(예를 들어 진행성 위암, 위 선암, 또는 위식도 접합부 선암), 신장암, 자궁내막암, 부신피질 암종(adrenocortical carcinoma), 전립선암, 갑상선암, 복막암, 선암, 췌장암, 신경교종, 두경부암, 골암, 고환암, 백혈병, 골수종, 림프종, 육종, 중피종, 간세포 암종, 결장암, 담도암, 담관암, 직장암, 결장암, 자궁내막암, 난소암(예를 들어 진행성 난소암) 또는 나팔관암, 대세포 신경내분비암, 요로상피세포암(예를 들어 상부 요로상피세포암 또는 방광암), 유방암, 삼중 음성 유방암, 말초 T-세포 림프종, 흑색종, 비인두암, 높은 미세위성 불안정성(MSI-H) 또는 미스매치 수복 결핍(dMMR) 고형 종양, 뇌암(예를 들어 교모세포종과 같은 공격성 뇌암), 난소암, 편평 세포 암종, 기저세포 암종, 선종, 점액 또는 장액 낭선암, 평활근육종, 횡문근육종, 융모상피종, 악성 수산종, 악성 세르톨리 세포-기질 세포 종양, 악성 과립구종, 및 배아종,
중의 하나 이상으로부터 선택되는 것인,
항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 약학 조성물, 용도, 방법, 키트, 단위 제형, 또는 방법.
19. 항목 1 내지 10 중의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 항목 11에 따른 약학 조성물, 항목 12에 따른 용도, 항목 13에 따른 방법, 항목 14에 따른 키트, 항목 15에 따른 단위 제형, 또는 항목 16에 따른 방법에 있어서,
상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 성분 A 및/또는 화학요법 약물은 정맥 주사 또는 정맥 점적 주입에 적합한 형태, 바람직하게는 액체 형태인,
항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 약학 조성물, 용도, 방법, 키트, 단위 제형, 또는 방법.
20. 항목 13 또는 16에 있어서,
상기 대상체에게 유효량의 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체를 투여하는 것은 외과적 처치 전 또는 후에 및/또는 방사선 치료 전 또는 후인 것인, 방법.
21. 항목 13 또는 16에 있어서,
상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 단위 투여량은 0.1-100 mg/kg(체중), 바람직하게는 1-10 mg/kg(체중)이고; 대안으로, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 단위 투여량은 각각의 대상체에서 10-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 200 mg, 또는 100 mg이며;
상기 성분 A의 단위 투여량은 0.1-100 mg/kg(체중), 바람직하게는 1-10 mg/kg(체중)이고; 대안으로, 상기 성분 A의 단위 투여량은 각각의 대상체에서 10-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 200 mg, 또는 100 mg이고;
바람직하게는, 상기 투여량은 1일 2회 내지 격일 약 1회, 또는 3일, 4일, 5일, 6일, 10일, 1주, 2주 또는 3주마다 1회 투여되며;
바람직하게는, 상기 투여의 경로는 정맥 점적 주입 또는 정맥 주사인,
방법.
일부 구현예에서, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 항-VEGFR2 단일클론 항체 또는 항-VEGF 단일클론 항체는 1 mg/kg(체중), 2 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg, 20 mg/kg, 21 mg/kg, 22 mg/kg, 23 mg/kg, 24 mg/kg, 또는 25 mg/kg의 투여량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 항-VEGFR2 단일클론 항체 또는 항-VEGF 단일클론 항체는 암을 효과적으로 치료할 수 있는 하나 이상의 플랫 투여량(flat doses)으로 투여된다. 일부 특정 구현예에서, 상기 플랫 투여량은 약 1 mg 내지 약 1000 mg의 범위이다. 일부 특정 구현예에서, 상기 플랫 투여량은 약 100 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 600 mg, 약 700 mg, 약 800 mg, 약 900 mg, 또는 약 1000 mg로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 항-VEGFR2 단일클론 항체 또는 항-VEGF 단일클론 항체의 투여는 2주(14일) 또는 3주(21일)의 주기로 수행되며, 바람직하게는 각 주기의 첫날(D1)에 정맥 투여된다. 즉, 상기 항-PD-1-항-CTLA4 이중특이적 항체는 2주(q2w) 또는 3주(q3w) 마다 1회 투여된다.
본 발명은 또한, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 또는 항-VEGFR2 단일클론 항체(또는 항-VEGF 단일클론 항체)의 고정 투여량을 함유하는 용기를 포함하는 암 치료용 제조 물품의 제조에서의 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 항-VEGFR2 단일클론 항체 및 항-VEGF 단일클론 항체의 용도를 제공한다. 일부 특정 구현예에서, 상기 용기는 앰플(ampoule)이다. 상기 고정된 투여량은 약 10 mg, 약 20 mg, 약 30 mg, 약 40 mg, 약 50 mg, 약 60 mg, 약 100 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 500 mg 또는 약 1000 mg으로부터 선택된다. 일부 특정 구현예에서, 상기 제조 물품은 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 항-VEGFR2 단일클론 항체 또는 항-VEGF 단일클론 항체의 고정된 투여량을 암 환자에게 투여하도록 사용자에게 지시하는 패키지 삽입물 또는 지침서를 더 포함한다. 일부 특정 구현예에서, 제조 물품은 약 50mg, 100mg, 200mg, 300mg, 350mg, 400mg, 500mg, 또는 600mg의 항-CTLA4-항PD-1 이중특이적 항체, 항-VEGFR2 단일클론 항체, 또는 항-VEGF 단일클론 항체를 함유하는 1개 이상의 앰플을 포함한다. 일부 특정 구현예에서, 상기 제조 물품은 항-PD-1-항CTLA4 이중특이적 항체, 항-VEGFR2 단일클론 항체, 또는 항-VEGF 단일클론 항체의 용액 50mg/5ml/바이알, 100mg/10ml/바이알, 200mg/10ml/바이알 또는 350mg/35ml/바이알로 포장된다.
상기 화학요법 약물의 양은 당업자에 의해 결정될 수 있다. 백금계 화학요법 약물의 경우 시스플라틴에 대해, 시스플라틴의 단위 투여량은 하기 칼로버트 식(Calvert formula)에 따라 계산된다:
시스플라틴 투여량(mg) = 설정 곡선 아래 면적, 즉 AUC(mg/ml/min) × [크레아티닌 제거율(ml/min) + 25],
상기 AUC는 4 내지 7, 바람직하게는 5이며;
상기 투여량은 2 내지 6주마다 1회, 바람직하게는 3주마다 1회 또는 4주마다 1회 투여되고/되거나,
상기 투여 경로는 정맥 점적 주입 또는 정맥 주사이다.
본 발명의 하나 이상의 구현예에서, 화학요법 약물 또는 성장 억제제는 알킬화제, 안트라사이클린, 항-호르몬제, 아로마타제 억제제, 항-안드로겐제, 단백질 키나제 억제제, 지질 키나제 억제제, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 세포독소 또는 항-종양 항생제, 프로테아좀 억제제, 항미세관제, EGFR 길항제, VEGF 길항제, 안지오포이에틴 2 길항제, 레티노이드, 티로신 키나제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제 및 그들의 조합물로부터 선택된다.
본 발명의 하나 이상의 구현예에서, 상기 표적 치료제는 B-raf 억제제, MEK 억제제, K-ras 억제제, c-Met 억제제, Alk 억제제, 포스파티딜린-오시톨-3-키나제 억제제, Akt 억제제, mTOR 억제제, VEGF 억제제, PARP 억제제, 이중 포스파티딜린-오시톨-3-키나제/mTOR 억제제 및 그들의 조합물로부터 선택된다.
본 발명의 하나 이상의 구현예에서, 상기 항체-약물 접합체는 메이탄신, 모노메틸 아우리스타틴 E, 칼리케아미신, 에스페라마이신 및 방사성 동위원소 킬레이트제로 구성된 군으로부터 선택된 약물을 포함한다.
본 발명에서 일부 표현은 다음과 같은 의미를 갖는다:
약물 또는 치료제의 "치료적 유효량" 또는 "치료적 유효 투여량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용될 경우, 질환 증상의 중증도 감소, 질환 무증상 기간의 빈도 및 지속 증가, 또는 질환의 고통으로 인한 피해 또는 장애의 예방으로 증명되는 질환의 발병을 예방하거나 질환 퇴행을 촉진하는 약물의 임의의 양이다. 질환 퇴행을 촉진하는 치료제의 능력은 임상시험에서 인간 대상체, 인간에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서, 또는 시험관 내 분석에서 약물의 활성을 결정하는 것과 같이, 숙련된 의사에게 공지된 다양한 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
약물의 "예방적 유효량"은 단독으로 또는 항신생물제와 조합하여 투여될 때 암의 발생 또는 재발 위험이 있는 대상체(예를 들어 전암성 병태를 갖는 대상체) 또는 암의 재발 위험이 있는 대상체에게 투여하는, 암의 발생 또는 재발을 억제하는 약물의 임의의 양을 의미한다. 일부 구현예에서, 예방적 유효량은 암의 발생 또는 재발을 완전히 예방한다. 암의 발생 또는 재발을 "억제하는"은 암의 발생 또는 재발 가능성을 감소시키거나 암의 발생 또는 재발을 완전히 예방하는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제"는 대상체 및 활성 성분과 약리학적으로 및/또는 생리학적으로 상용성인 담체 및/또는 부형제를 의미한다.
이러한 담체 및/또는 부형제는 당업계에 잘 알려져 있으며(예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, edited by Gennaro AR, 19th Ed., Pennsylvania, Mack Publishing Company, 1995] 참조), 제한되지는 않지만, pH 조절제, 계면활성제, 보조제 및 이온 강도 증강제가 포함한다. 예를 들어 pH 조절제는, 제한되지는 않지만, 인산완충제를 포함하며, 계면활성제는, 제한되지는 않지만, Tween-80과 같은 양이온성, 음이온성 또는 비이온성 계면활성제를 포함하며, 이온 강도 증강제는, 제한되지는 않지만, 염화 나트륨을 포함한다.
"재발" 암은 기존 치료(예를 들어 수술)에 반응하여 원래 부위 또는 먼 부위에서 재생되는 암이다. "국소적으로 재발" 암은 치료 후 기존 치료된 암과 동일한 부위에서 발생하는 암이다.
"전이성" 암은 신체(예를 들어 폐)의 일부에서 다른 곳으로 퍼지는 암을 의미한다.
경쇄 및 중쇄의 가변 영역은 항원의 결합을 결정한다: 각 사슬의 가변 영역은 3개의 초가변 영역(hypervariable regions), 즉 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다(중쇄(H)의 CDR은 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하고, 경쇄(L)의 CDR은, Kabat 등의 문헌 ([Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition (1991), Volumes 1-3, NIH Publication 91-3242, Bethesda Md] 참조)에 정의된, LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함한다. 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 공지된 서열을 고려할 때, Kabat, IMGT, Chothia 및 AbM 넘버링 시스템을 포함한 항체의 CDR 영역을 결정하는 여러 방법이 있다. 그러나, 항체 또는 그의 변이체에 대한 CDR의 모든 정의는 본원에서 정의하고 사용하는 용어의 범위 내에 속할 것이다. 항체의 가변 영역의 아미노산 서열이 알려진 경우, 당업자는 일반적으로 서열 자체를 벗어나는 실험 데이터에 의존하지 않고 특정 CDR을 결정할 수 있다.
약물 또는 치료제의 "치료적 유효량" 또는 "치료적 유효 투여량"은 다른 치료제와 조합하여 사용할 때 질환 증상의 중증도 감소, 질환 증상-부재 기간의 빈도 및 기간의 증가, 또는 질환으로 인한 손상 또는 장애의 예방으로 증명되는 바와 같이 질환의 발병으로부터 대상체를 보호하거나 질환 퇴행을 촉진하는 약물의 임의의 양이다. 질환 퇴행을 촉진하는 치료제의 능력은 인간의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서 임상 시험 등의 인간 대상체에서 또는 시험관 내 분석에서 약물의 활성을 측정함으로써 숙련된 의사에게 공지된 다양한 방법을 이용하여 평가할 수 있다.
약물의 "예방적 유효량"은 암의 발생 위험이 있는 대상체(예를 들어 전암성 병태를 갖는 대상체) 또는 암의 재발 위험이 있는 대상체에게 단독으로 또는 항신생물제와 조합하여 투여될 때 암의 발생 또는 재발을 억제하는 약물의 임의의 양을 의미한다. 일부 구현예에서, 예방적 유효량은 암의 발생 또는 재발을 완전히 예방한다. 암의 발생 또는 재발을 "억제하는"은 암의 발생 또는 재발 가능성을 감소시키거나 암의 발생 또는 재발을 완전히 예방하는 것을 의미한다.
"재발" 암은 기존 치료(예를 들어 수술)에 반응하여 원래 부위 또는 먼 부위에서 재생되는 암이다. "국소적으로 재발" 암은 치료 후 기존에 치료된 암과 동일한 부위에서 발생하는 암이다.
"전이성" 암은 신체(예를 들어 폐)의 한 부분에서 다른 부분으로 퍼지는 암이다.
"단일 투여량 단위"란 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 항-VEGFR2 항체 또는 항-VEGF 항체를 포함하는 단일 약학적 투여 형태를 1회 투여 계획의 시점에, 바람직하게는 대상체의 체중 1 kg 당 주사, 예를 들어 앰플에 넣어 투여하는 것을 의미한다. 본 발명의 특정 구현예에서, 상기 계획은 예를 들어 1일 2회 내지 격일 약 1회, 또는 3일, 4일, 5일, 6일, 10일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주마다 1회의 투여 주기에 따른 단일 투여량 단위의 투여를 포함한다.
본 발명에서, 용어 "제 1"(예를 들어 제 1 단백질 기능성 영역 또는 제 1 링커 단편) 및 "제 2"(예를 들어 제 2 단백질 기능성 영역 또는 제 2 링커 단편)는 달리 명시하지 않는 한, 표현 상의 구별 또는 명확성을 위한 것으로, 통상적인 순차적 의미를 지니지 않는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은, 혼합 림프구 반응(mixed lymphocyte reaction; MLR)으로 측정된 INF-γ 분비를 촉진시키기 위한, 항-VEGFR2 항체 HpL3과의 조합에서 항-PD-1/CTLA-4 이중특이적 항체 카도닐리맙(Cadonilimab)의 생물학적 활성에 대한 분석 결과를 나타낸다.
도 2는 혼합 림프구 반응(MLR)으로 측정된 PBMC 활성화 및 IL-2 분비를 촉진시키기 위한 베바시주맙과의 조합에서 카도닐리맙의 생물학적 활성에 대한 분석 결과를 나타낸다.
본 발명의 구현예는 이하 실시예를 통하여 상세히 설명되지만, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되는 것으로 해석되어서는 안 된다는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 실시예에서 구체적인 조건이 없는 실험 절차는 제조사가 권장하는 통상의 조건 또는 조건에 따라 수행한다. 사용되는 시약 또는 기기는 제조사가 구체적이지 않은 경우 모두 상업적으로 이용가능한 통상의 제품이다.
본 발명의 하기 실시예에서, 사용된 이소타입 대조군 항체, 즉 항-HEL은 인간 항-hen 난자 라이소자임(HEL)을 표적으로 하는 항체였으며, 이들 항체의 가변 영역 서열은 문헌 [Acierno 등, entitled "Affinity maturation increases the stability and plasticity of the Fv domain of anti-protein antibodies" (Acierno et al., J Mol biol ., 2007; 374(1): 130-46]에 보고된 연구에서 얻었으며, 이 연구에서 중쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 45에, 경쇄 가변 영역의 서열은 서열번호 47에 제시되어 있다. hIgG1WT(즉, 항-HEL)의 불변 영역 단편에서 중쇄 불변 영역(서열번호 46)은 Ig 감마-1 사슬 C 영역, ACCESSION: P01857이며, 경쇄 불변 영역(서열번호 48)은 Ig 카파 사슬 C 영역, ACCESSION: P01834이며; 항-HEL은 Akeso Biopharma, Inc에서 제조된 것이다.
실시예에서 사용된 베바시주맙(항-VEGF 단일클론 항체)은 Roche에서 제조한 시판 약물이다.
제조 실시예 1: 항- CTLA4 항체의 서열 설계
항-CTLA4 항체 4G10의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열 및 암호화 핵산 서열 및 그의 인간화된 항체 4G10H1L1 및 4G10H3L3은 중국 특허공개번호 CN106967172A의 4G10, 4G10H1L1 및 4G10H3L3과 각각 동일하다.
(1) 4G10의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열
중쇄 가변 영역의 핵산 서열: (372bp, 서열번호 1)
그의 암호화된 아미노산 서열: (124aa, 서열번호 2)
경쇄 가변 영역의 핵산 서열: (378bp, 서열번호 3)
그의 암호화된 아미노산 서열: (126aa, 서열번호 4)
(2) 인간화된 단일클론 항체 4G10H1L1의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열
중쇄 가변 영역 (4G10H1V)의 핵산 서열: (345 bp, 서열번호 5)
그의 암호화된 아미노산 서열: (115 aa, 서열번호 6)
경쇄 가변 영역 (4G10L1V)의 핵산 서열: (327 bp, 서열번호 7)
그의 암호화된 아미노산 서열: (109 aa, 서열번호 8)
(3) 인간화된 단일클론 항체 4G10H3L3의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열
중쇄 및 경쇄 가변 영역 (4G10H3V)의 핵산 서열: (345 bp, 서열번호 9)
중쇄 가변 영역 (4G10H3V)의 그의 암호화된 아미노산 서열: (115 aa, 서열번호 10)
경쇄 가변 영역 (4G10L3V)의 핵산 서열: (327 bp, 서열번호 11)
그의 암호화된 아미노산 서열 (4G10L3V): (109 aa, 서열번호 12)
제조 실시예 2: 항-PD-1 항체 14C12 및 그의 인간화된 항체 14C12H1L1의 서열 설계
항-PD-1 항체 14C12 항체 및 그의 인강화된 항체 14C12H1L1의 아미노산 서열은 중국 특허공개번호 CN106967172A의 14C12 및 14C12H1L1과 각각 동일하다.
(1) 14C12의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열
중쇄 가변 영역의 핵산 서열: (354 bp, 서열번호 13)
그의 암호화된 아미노산 서열: (118 aa, 서열번호 14)
경쇄 가변 영역의 핵산 서열: (321 bp, 서열번호 15)
그의 암호화된 아미노산 서열: (107 aa, 서열번호 16)
(2) 인간화된 단일클론 항체 14C12H1L1의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 서열
중쇄 가변 영역의 핵산 서열: (345 bp, 서열번호 17)
그의 암호화된 아미노산 서열: (118 aa, 서열번호 18)
경쇄 가변 영역의 핵산 서열: (321 bp, 서열번호 19)
그의 암호화된 아미노산 서열: (107 aa, 서열번호 20)
14C12H1L1 중쇄 (14C12H1)의 DNA 서열: (1344 bp, 서열번호 21)
그의 암호화된 아미노산 서열: (448 aa, 서열번호 22)
14C12H1L1 경쇄 (14C12L1)의 DNA 서열: (642 bp, 서열번호 23)
그의 암호화된 아미노산 서열: (214 aa, 서열번호 24)
제조 실시예 3: 이기능성 항체( bifunctional antibodies) CP001(M), CP002(M), CP003(M) 및 CP004(M)의 서열 설계
이기능성 항체 CP001(M), CP002(M), CP003(M) 및 CP004(M)의 구조적 패턴은
모리슨 포맷(Morrison format) (IgG-scFv)으로, 즉 한 IgG 항체의 두 중쇄의 C 말단이 링커 단편을 통해 다른 항체의 scFv 단편에 별도로 연결된다. 중쇄 및 경쇄 설계를 위한 성분은 하기 표 A에 나타내었다.
[표 A]
CP001(M), CP002(M), CP003(M) 및 CP004(M)의 서열 설계
상기 표 A에서, 링커 1의 아미노산 서열은 (GGGGS)3 (서열번호 25)이다.
링커 2의 아미노산 서열은 (GGGGS)4 (서열번호 26)이다.
상기 표 A에서, 항체 CP001(M), CP002(M), CP003(M) 및 CP004(M)의 scFv 단편 4G10H1V(M), 4G10L1V(M), 4G10H3V(M) 및 4G10L3V(M)는 각각 4G10H1V, 4G10L1V, 4G10H3V 및 4G10L3V를 기준으로 골격 영역의 개별 아미노산의 돌연변이를 포함하여 항체의 구조를 효과적으로 최적화하고 그들의 효능을 향상시켰다.
(1) 4G10H1V(M): (115 aa, 4G10H1V 기반의 아미노산 서열에서 돌연변이 위치는 밑줄 표시함, 서열번호 41)
(2) 4G10L1V(M): (110 aa, 4G10L1V 기반의 아미노산 서열에서 돌연변이 위치는 밑줄 표시함, 서열번호 42)
(3) 4G10H3V(M): (115 aa, 4G10H3V 기반의 아미노산 서열에서 돌연변이 위치는 밑줄 표시함, 서열번호 43)
(4) 4G10L3V(M): (110 aa, 4G10L3V 기반의 아미노산 서열에서 돌연변이 위치는 밑줄 표시함, 서열번호 44)
이하, 변이된 항체와의 구별을 위해, CP004(M)는 또한 본 발명의 실시예에서 CP004(hG1WT)라고 한다. 위에서 기술한 CP004(M)는 중쇄 불변 영역으로서 Ig 감마-1 사슬 C 영역(ACCESSION: P01857), 경쇄 불변 영역으로서 Ig 카파 사슬 C 영역(ACCESSION: P01834)을 포함하는 "야생형"이다.
제조 실시예 4: 인간화된 이기능성 항체 CP004 기반의 비-변이 영역 아미노산 돌연변이 설계
제조 실시예 3에서 얻은 CP004(hG1WT)를 기준으로, 중쇄에 234번 위치(L234A)에서 류신-알라닌 점 돌연변이, 235번 위치(L235A)에서 류신-알라닌 점 돌연변이, 237번 위치(G237A)에서 글리신-알라닌 점 돌연변이를 도입하여 CP004(hG1TM)를 얻었다.
CP004(hG1TM)에서 면역글로불린 모이어티의 중쇄의 DNA 서열: (1344 bp, 돌연변이 위치는 밑줄 표시함, 서열번호 39)
CP004(hG1TM)에서 면역글로불린 모이어티의 중쇄의 아미노산 서열: (448 aa, 돌연변이는 밑줄 표시함, 서열번호 40)
CP004(hG1TM) 및 CP004(hG1WT)는 경쇄의 동일한 DNA 서열과 동일한 암호화 아미노산 서열을 공유한다. 구체적인 서열은 제조 실시예 3에 나타내었다.
제조 실시예 5: 항-PD-1/ CTLA -4 이중특이적 항체 카도닐리맙의 제조
카도닐리맙(즉, CP004(hG1TM))의 구조 패턴은 모리슨 포맷(IgG-scFv)으로, 즉 하나의 면역글로불린 모이어티(IgG) 항체의 두 중쇄의 C 말단이 링커 단편을 통해 다른 항체의 scFv 단편의 VH 말단에 연결되며, 상기 면역글로불린 모이어티는 PD-1 항체에 기반하고 scFv 단편은 항-CTLA-4 항체에 기반하며, 링커 단편에 의해서 그 사이가 연결된다.
본 실시예에서 기술된 항-PD-1/CTLA-4 이중특이적 항체 카도닐리맙 항체(즉, CP004(hG1TM))의 경쇄 서열(서열번호 72) 및 중쇄 서열(서열번호 70)은 WHO Drug Information, Proposed INN: List 124(WHO Drug Information, 2020; 34(4):947-949)에서 유래하였으며, 제조 방법은 다음과 같다:
후보 단일클론 항체의 불변 영역 및 가변 영역을 포함하는 중쇄-암호화 유전자의 DNA 서열, 및 불변 영역 및 가변 영역을 포함하는 경쇄 암호화 유전자의 DNA 서열을 pUC57simple(GenScript사 공급) 벡터에 개별적으로 클로닝하여 플라스미드 pUC57simple-H 및 pUC57simple-L을 각각 얻었다.
상기 플라스미드를 효소 분해하고(HindIII&EcoRI), 전기영동으로 단리된 중쇄 및 경쇄를 발현 벡터 pcDNA3.1(Invitrogen사 구매)로 개별적으로 서브클로닝하였다. 재조합 플라스미드를 추출하고, pcDNA3.1-H + pcDNA3.1-L의 조합을 293F 세포에 공-형질주입(co-transfect)시켰다. 세포 배양 7일 후 배양물을 고속으로 원심분리하였다. 상청액을 농축하여 HiTrap MabSelect SuRe 컬럼에 로딩하고 단백질 정제 액체 크로마토그래피(AKTA Purifier 10, GE)를 이용하여 정제하였다.
정제된 샘플, 즉 항체 카도닐리맙은 환원 단백질 전기영동 로딩 완충액(electrophoresis loading buffer) 및 비-환원 단백질 전기영동 로딩 완충액(non-reduced protein electrophoresis loading buffer) 모두에 첨가한 후 SDS-PAGE 전기영동을 위해 끓였다. 환원 단백질 샘플의 표적 단백질은 70 kD, 30 kD, 비-환원 단백질 샘플의 표적 단백질(단일 항체)은 200 kD이었다. 이론적 크기에 맞는 단백질을 얻어 정제된 항체를 얻었다.
제조 실시예 6: 항- VEGFR2 항체 HpL3의 제조
본 실시예에서 기술된 항-VEGFR2 항체 HpL3의 항체 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 서열 및 제조방법은 중국특허출원 CN201610573836.X(발명의 명칭: "AN ANTI-VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR RECEPTOR VEGFR2 MONOCLONAL ANTIBODY AND AN ENCODING GENE AND USE THEREOF")에서 인용된다.
HpL3의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 50에 제시되며, 그의 암호화 유전자의 DNA 서열은 서열번호 49에 제시되고, 중쇄 가변 영역의 CDR1-3의 서열은 각각 서열번호 53 내지 55에 제시된다.
HpL3의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52에 제시되며, 그의 암호화 유전자의 DNA 서열은 서열번호 51에 제시되고, 경쇄 가변 영역의 CDR1-3의 서열은 각각 서열번호 56 내지 58에 제시된다.
HpL3은 중쇄 불변 영역으로서 Ig 감마-1 사슬 C 영역(ACCESSION: P01857), 경쇄 불변 영역으로서 Ig 카파 사슬 C 영역(ACCESSION: P01834)을 포함한다.
후보 단일클론 항체의 불변 영역 및 가변 영역을 포함하는 중쇄 암호화 유전자의 DNA 서열, 및 불변 영역 및 가변 영역을 포함하는 경쇄 암호화 유전자의 DNA 서열을 pUC57simple(GenScript사 공급) 벡터에 각각 클로닝하여 플라스미드 pUC57simple-PCABH 및 pUC57simple-L3을 각각 얻었다.
상기 플라스미드를 효소 분해(HindIII&EcoRI)하고, 전기영동으로 분리된 중쇄 및 경쇄를 발현 벡터 pcDNA3.1(Invitrogen사 구매)에 각각 서브클로닝하였다. 재조합 플라스미드를 추출하여 pcDNA3.1-PCABH + pcDNA3.1-L3의 조합을 293F 세포에 공-형질주입시켰다. 세포 배양 7일 후 배양물을 고속으로 원심분리하였다. 상청액을 농축하여 HiTrap MabSelect SuRe 컬럼에 로딩하고 단백질 정제 액체 크로마토그래피 시스템(AKTA Purifier 10, GE)을 이용하여 정제하였다.
정제된 시료, 즉 항체 HpL3를 환원 단백질 전기영동 로딩 완충액 및 비-환원 단백질 전기영동 로딩 완충액에 모두 첨가한 후 SDS-PAGE 전기영동을 위해 끓였다. 환원 단백질 시료의 표적 단백질은 45kD, 30kD, 비-환원 단백질 시료(단일 항체)의 표적 단백질은 150kD이었다. 이론적 크기에 맞는 단백질을 얻어 정제된 단일클론 항체를 얻었다.
실시예 1: 혼합 림프구 반응(MLR)에 의해 측정된 INF-γ 분비를 촉진시키기 위한 항-VEGFR2 항체 HpL3와의 조합에서 항-PD-1/CTLA-4 이중특이적 항체 카도닐리맙의 생물학적 활성
Raji-PDL1 세포의 제조:
인간 PD-L1-과발현 렌티바이러스 벡터 plenti6.3/V5-PDL1-FL-BSD는 바이러스 포장 후 Raji 세포에 감염되었고, BSD(Blasticidin, 10ug/mL) 약물 스크리닝 후 약물-내성 세포주 Raji-PDL1을 얻었다. plenti6.3/V5-PDL1FL-BSD는 공급업체 Nanjing Genscript로부터 유전자 PDL1FL(PDL1, Genebank ID: NP_054862.1)을 합성한 후 효소 소화로 plenti6.3/V5-BSD(Invitrogen Cat. No: k531520)에 결찰하여 얻었다.
실험 2일 전에 PBMC(정상 말초혈액에서 단리됨)를 해동하여 5% 이산화탄소 인큐베이터에서 37℃의 완전 배지에서 배양하였고; 2시간 후 PBMC 상태가 회복되면 자극을 위해 2일 동안 SEB(0.5 μg/mL의 최종 농도)(Toxin technology, Cat. No: BT202)를 첨가하였으며; 실험 당일, Raji-PDL1 세포를 수거하여 원심분리하고, 재현탁하고(1640+10% FBS 중에서), 계수하여 2×106/mL의 밀도로 조정하고, MMC(2 μg/mL의 최종 동도를 갖는 Mito-mycin C, 제조업자: Stressmarq, Cat. No: SIH-246)를 첨가하였고; 혼합물을 5% 이산화탄소 인큐베이터에서 37℃에서 1시간 처리하였으며; SEB 자극 2일 후 PBMC 및 MMC 처리 후 Raji-PDL1 세포를 수거하여 1640 기본배지로 2회 세척하고 상기 세포를 완전 배지로 재현탁하여 계수하고, 1×105/PBMC의 웰 및 1×105/Raji-PDL1의 웰(각 50 μL/웰)에 따라 96-웰 U자형 플레이트(3799)에 접종하였고; 실험 설계에 따라 약물을 첨가하고, 블랭크 대조군 및 음성 대조군을 설정하고 3일 동안 배양하였으며(시스템의 최종 부피는 200 μL임); 3일 후 세포를 250× g으로 5분 동안 원심분리(Beckman centrifuge)하여 세포 상청액을 수거하고 Dakewe 키트를 이용하여 IFN-γ 함량을 검출하였다.
도 1에 나타낸 바와 같이, PBMC 및 Raji-PDL1 세포 혼합 배양 시스템에서 카도닐리맙 및 HpL3 항체의 첨가는 유의한 투여량 의존적인 방식으로 PBMC에서 IFN-γ의 분비를 유의하게 유도할 수 있다. IFN-γ 분비 촉진 활성 수준의 측면에서, HpL3와의 조합에서 카도닐리맙은 카도닐리맙 및 HpL3 항체 단독에 비해 IFN-γ 분비 촉진 잠재력이 우수하다.
실시예 2: 혼합 림프구 반응(MLR)에 의해 측정된 PBMC 활성화 및 IL-2 분비를 촉진시키기 위한 베바시주맙과의 조합에서 카도닐리맙의 생물학적 활성
실험 2일 전에 PBMC(건강한 자원봉사자들의 사전 동의 후 자발적 기증 말초혈액에서 단리됨)를 해동하여 5% 이산화탄소 인큐베이터에서 37℃의 완전 배지에서 배양하였고; 2시간 후 PBMC 상태가 회복되면 자극을 위해 2일 동안 SEB(0.5 μg/mL의 최종 농도)(Toxin technology, Cat. No: BT202)를 첨가하였으며; 실험 당일, Raji-PDL1(Akeso Biopharma, Inc.에 의해 구성됨) 세포를 수거하여 원심분리하고, 재현탁하고(1640+10% FBS 중에서), 계수하여 2×106/mL의 밀도로 조정하고, MMC(2 μg/mL의 최종 동도를 갖는 Mito-mycin C)(미토마이신(mitomycin) C, 제조업자: Stressmarq, Cat. No: SIH-246)를 첨가하였고; 혼합물을 5% 이산화탄소 인큐베이터에서 37℃에서 1시간 처리하였으며; SEB 자극 2일 후 PBMC 및 MMC 처리 후 Raji-PDL1 세포를 수거하여 1640 기본배지로 2회 세척하고 상기 세포를 완전 배지로 재현탁하여 계수하고, 1×105/PBMC의 웰 및 1×105/Raji-PDL1의 웰(각 40 μL/웰)에 따라 96-웰 U자형 플레이트(3799)에 접종하였고; 헬라(Hela) 세포(중국 과학원에서 구입)를 평범하게 분해하고 2×104/웰(40μL/웰)에 따라 96-웰 U-자형 플레이트(3799)에 접종시켰으며; 실험 설계에 따라 약물을 첨가하고, 음성 대조군 및 이소형 대조군을 설정하고 3일 동안 배양하였으며(시스템의 최종 부피는 200 μL임); 3일 후 세포를 250× g으로 5분 동안 원심분리(Beckman centrifuge)하여 세포 상청액을 수거하고 Dakewe 키트를 이용하여 IL-2 함량을 검출하였다.
도 2에 나타낸 바와 같이, PBMC, Raji-PDL1, Hela(자궁경부암) 세포, VEGF(배치 번호: 20180126-1, Akeso Biopharma, Inc에 의해 생산됨) 혼합배양 시스템에서 카도닐리맙 및 베바시주맙의 첨가는 모두 유의한 투여량 의존적인 방식으로 PBMC 내 IL-2 분비를 유의하게 유도할 수 있다. IL-2 분비 촉진 활성 수준의 측면에서, 베바시주맙과의 조합에서 카도닐리맙은 카도닐리맙 및 베바시주맙 항체 단독에 비해 IL-2 분비 촉진 잠재력이 우수하다.
베바시주맙의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 60에 제시되고, 암호화 유전자의 DNA 서열은 서열번호 59에 제시되며, 중쇄 가변 영역의 CDR1-3 서열은 서열번호 63 내지 65에 각각 제시된다. 베바시주맙의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 62에 제시되고, 암호화 유전자의 DNA 서열은 서열번호 61에 제시되며, 경쇄 가변 영역의 CDR1-3 서열은 서열번호 66 내지 68에 각각 제시된다.
서열목록
서열번호 1: 4G10의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 2: 4G10의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 3: 4G10의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 4: 4G10의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 5: 4G10H1L1의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 6: 4G10H1L1의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 7: 4G10H1L1의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 8: 4G10H1L1의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 9: 4G10H3L3의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 10: 4G10H3L3의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 11: 4G10H3L3의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 12: 4G10H3L3의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 13: 14C12의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 14: 14C12의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 15: 14C12의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 16: 14C12의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 17: 14C12H1L1의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 18: 14C12H1L1의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 19: 14C12H1L1의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 20: 14C12H1L1의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 21: 14C12H1L1 중쇄(14C12H1)(1344 bp)의 DNA 서열
서열번호 22: 14C12H1L1 중쇄(14C12H1)(448 aa)의 암호화된 아미노산 서열
서열번호 23: 14C12H1L1 경쇄(14C12L1)(642 bp)의 DNA 서열
서열번호 24: 14C12H1L1 경쇄(14C12L1)(214 aa)의 암호화된 아미노산 서열
서열번호 25: 링커 1의 아미노산 서열
서열번호 26: 링커 2의 아미노산 서열
서열번호 27: 14C12의 HCDR1: GFAFSSYD
서열번호 28: 14C12의 HCDR2: ISGGGRYT
서열번호 29: 14C12의 HCDR3: ANRYGEAWFAY
서열번호 30: 14C12의 LCDR1: QDINTY
서열번호 31: 14C12의 LCDR2: RAN
서열번호 32: 14C12의 LCDR3: LQYDEFPLT
서열번호 33: 4G10의 HCDR1: GYSFTGYT
서열번호 34: 4G10의 HCDR2: INPYNNIT
서열번호 35: 4G10의 HCDR3: ARLDYRSY
서열번호 36: 4G10의 LCDR1: TGAVTTSNF
서열번호 37: 4G10의 LCDR2: GTN
서열번호 38: 4G10의 LCDR3: ALWYSNHWV
서열번호 39: CP004(hG1TM)의 면역글로불린 모이어티의 중쇄의 DNA 서열, 돌연변이 위치는 밑줄로 표시함
서열번호 40: CP004(hG1TM)의 면역글로불린 모이어티의 중쇄의 아미노산 서열, 돌연변이 위치는 밑줄로 표시함
서열번호 41: 4G10H1V(M)의 아미노산 서열, 돌연변이 위치는 밑줄로 표시함
서열번호 42: 44G10L1V(M)의 아미노산 서열, 돌연변이 위치는 밑줄로 표시함
서열번호 43: 4G10H3V(M)의 아미노산 서열, 돌연변이 위치는 밑줄로 표시함
서열번호 44: 4G10L3V(M)의 아미노산 서열, 돌연변이 위치는 밑줄로 표시함
서열번호 45: hIgG의 중쇄 가변 영역의 서열
서열번호 46: hIgG의 중쇄 불변 영역의 서열
서열번호 47: hIgG의 경쇄 가변 영역의 서열
서열번호 48: hIgG의 경쇄 불변 영역의 서열
서열번호 49: HpL3(VEGFR2)의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 50: HpL3의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 51: HpL3의 경쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 52: HpL3의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 59: 베바시주맙(VEGF)의 중쇄 가변 영역의 핵산 서열
서열번호 60: 베바시주맙의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 61: 베바시주맙의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 62: 베바시주맙의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
서열번호 69: CP004(hG1TM) 중쇄의 핵산 서열
서열번호 70: CP004(hG1TM) 중쇄(전장(full-length))의 아미노산 서열
서열번호 71: CP004(hG1TM) 경쇄의 핵산 서열
서열번호 72: CP004(hG1TM) 경쇄(전장)의 아미노산 서열
<110> AKESO PHARMACEUTICALS, INC. AD Pharmaceuticals Co., Ltd. <120> USE OF ANTIBODY IN ANTI-TUMOR TREATMENT <130> IP220140 <160> 72 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-nucleic acid sequence of heavy chain variable region of 4G10 <400> 1 caggtcaagc tgcaggagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggagcttc aatgaagata 60 tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctacacca tgaactgggt gaagcagagc 120 catggaaaga accttgaatg gattggactt attaatcctt acaataatat tactaactac 180 aaccagaagt tcatgggcaa ggccacattt actgtagaca agtcatccag cacagcctac 240 atggaactcc tcagactgac atctgaagac tctggagtct atttctgtgc aagactcgac 300 tataggtctt attggggcca agggactctg gtcactgtct ctgcagccaa aacgacaccc 360 ccatctgtct at 372 <210> 2 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-amino acid sequence of heavy chain variable region of 4G10 <400> 2 Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr 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cagcaaggcc 1020 aaaggccaac ccagggagcc ccaggtctat acactgcctc cctccaggga cgaactcacc 1080 aagaaccagg tgtccctgac ctgcctggtc aagggctttt atcccagcga catcgccgtc 1140 gagtgggagt ccaacggaca gcccgagaat aactacaaga ccacccctcc tgtcctcgac 1200 tccgacggct ccttcttcct gtacagcaag ctgaccgtgg acaaaagcag gtggcagcag 1260 ggaaacgtgt tctcctgcag cgtgatgcac gaagccctcc acaaccacta cacccagaaa 1320 agcctgtccc tgagccccgg caaa 1344 <210> 22 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-encoded amino acid sequence of 14C12H1L1 heavy chain (14C12H1) <400> 22 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Asn Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 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Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 23 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-DNA sequence of 14C12H1L1 light chain (14C12L1) <400> 23 gacattcaga tgactcagag cccctcctcc atgtccgcct ctgtgggcga cagggtcacc 60 ttcacatgcc gcgctagtca ggatatcaac acctacctga gctggtttca gcagaagcca 120 gggaaaagcc ccaagacact gatctaccgg gctaatagac tggtgtctgg agtcccaagt 180 cggttcagtg gctcagggag cggacaggac tacactctga ccatcagctc cctgcagcct 240 gaggacatgg caacctacta ttgcctgcag tatgatgagt tcccactgac ctttggcgcc 300 gggacaaaac tggagctgaa gcgaactgtg gccgctccct ccgtcttcat ttttccccct 360 tctgacgaac agctgaaatc aggcacagcc agcgtggtct gtctgctgaa caatttctac 420 cctagagagg caaaagtgca gtggaaggtc gataacgccc tgcagtccgg caacagccag 480 gagagtgtga ctgaacagga ctcaaaagat agcacctatt ccctgtctag tacactgact 540 ctgtccaagg ctgattacga gaagcacaaa gtgtatgcat gcgaagtgac acatcaggga 600 ctgtcaagcc ccgtgactaa gtcttttaac cggggcgaat gt 642 <210> 24 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-encoded amino acid sequence of 14C12H1L1 light chain (14C12L1) <400> 24 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Met Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 25 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-amino acid sequence of Linker1 <400> 25 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 26 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-amino acid sequence of Linker2 <400> 26 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 27 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR1 of 14C12 <400> 27 Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr Asp 1 5 <210> 28 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR2 of 14C12 <400> 28 Ile Ser Gly Gly Gly Arg Tyr Thr 1 5 <210> 29 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR2 of 14C12 <400> 29 Ala Asn Arg Tyr Gly Glu Ala Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 30 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR1 of 14C12 <400> 30 Gln Asp Ile Asn Thr Tyr 1 5 <210> 31 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR2 of 14C12 <400> 31 Arg Ala Asn 1 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR3 of 14C12 <400> 32 Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 33 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR1 of 4G10 <400> 33 Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr 1 5 <210> 34 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR2 of 4G10 <400> 34 Ile Asn Pro Tyr Asn Asn Ile Thr 1 5 <210> 35 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR3 of 4G10 <400> 35 Ala Arg Leu Asp Tyr Arg Ser Tyr 1 5 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR1 of 4G10 <400> 36 Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Phe 1 5 <210> 37 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR2 of 4G10 <400> 37 Gly Thr Asn 1 <210> 38 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR3 of 4G10 <400> 38 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val 1 5 <210> 39 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-DNA sequence of heavy chain of immunoglobulin moiety of CP004(hG1TM) <400> 39 gaagtgcagc tggtcgagtc tgggggaggg ctggtgcagc ccggcgggtc actgcgactg 60 agctgcgcag cttccggatt cgcctttagc tcctacgaca tgtcctgggt gcgacaggca 120 ccaggaaagg gactggattg ggtcgctact atctcaggag gcgggagata cacctactat 180 cctgacagcg tcaagggccg gttcacaatc tctagagata acagtaagaa caatctgtat 240 ctgcagatga acagcctgag ggctgaggac accgcactgt actattgtgc caaccgctac 300 ggggaagcat ggtttgccta ttgggggcag ggaaccctgg tgacagtctc tagtgccagc 360 accaaagggc ccagcgtgtt tcctctcgcc ccctcctcca aaagcaccag cggaggaacc 420 gctgctctcg gatgtctggt gaaggactac ttccctgaac ccgtcaccgt gagctggaat 480 agcggcgctc tgacaagcgg agtccataca ttccctgctg tgctgcaaag cagcggactc 540 tattccctgt ccagcgtcgt cacagtgccc agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 600 tgtaacgtca accacaagcc ctccaacacc aaggtggaca agaaagtgga gcccaaatcc 660 tgcgacaaga cacacacctg tcccccctgt cctgctcccg aagctgctgg agcccctagc 720 gtcttcctct ttcctcccaa acccaaggac accctcatga tcagcagaac ccctgaagtc 780 acctgtgtcg tcgtggatgt cagccatgag gaccccgagg tgaaattcaa ctggtatgtc 840 gatggcgtcg aggtgcacaa cgccaaaacc aagcccaggg aggaacagta caactccacc 900 tacagggtgg tgtccgtgct gacagtcctc caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tgtccaacaa ggctctccct gcccccattg agaagaccat cagcaaggcc 1020 aaaggccaac ccagggagcc ccaggtctat acactgcctc cctccaggga cgaactcacc 1080 aagaaccagg tgtccctgac ctgcctggtc aagggctttt atcccagcga catcgccgtc 1140 gagtgggagt ccaacggaca gcccgagaat aactacaaga ccacccctcc tgtcctcgac 1200 tccgacggct ccttcttcct gtacagcaag ctgaccgtgg acaaaagcag gtggcagcag 1260 ggaaacgtgt tctcctgcag cgtgatgcac gaagccctcc acaaccacta cacccagaaa 1320 agcctgtccc tgagccccgg caaa 1344 <210> 40 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-amino acid sequence of heavy chain of immunoglobulin moiety in CP004(hG1TM) <400> 40 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys 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acid sequence of 4G10L3V(M) <400> 44 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Phe Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ser 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Lys Ala Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg 100 105 110 <210> 45 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-sequence of heavy chain variable region of hIgG <400> 45 Glu Val Gln Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly His Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Asn Glu Lys Val 50 55 60 Lys Gly Lys Val 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Artificial Sequence-sequence of light chain variable region of hIgG <400> 47 Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Thr Ser Gln Ser Met Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys 100 105 <210> 48 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-sequence of light chain constant region of hIgG <400> 48 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 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15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Thr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 51 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-nucleic acid sequence of light chain variable region of HpL3 <400> 51 gacattcaga tgactcagag cccttcttca gtgtccgcct ctatcggcga ccgggtcacc 60 attacatgca gagcttccca gggcctcgat aactggctgg ggtggtacca gcagaagcct 120 gggaaagccc caaagctgct gatctacgac gcttccaatc tggataccgg agtgccatct 180 cgattcagtg gctcagggag cggaacatac tttactctga ccatcagctc cctgcaggct 240 gaggacttcg cagtgtattt ttgccagcag gcaaaggcct tccctcccac ctttggcggg 300 ggaacaaaag tggacatcaa g 321 <210> 52 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-amino acid sequence of light chain variable region of HpL3 <400> 52 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Ile Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Leu Asp Asn Trp 20 25 30 Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Asp Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Lys Ala Phe Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 53 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR1 of heavy chain variable region of HpL3 <400> 53 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser 1 5 <210> 54 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR2 of heavy chain variable region of HpL3 <400> 54 Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile 1 5 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR3 of heavy chain variable region <400> 55 Ala Arg Val Thr Asp Ala Phe Asp Ile 1 5 <210> 56 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR1 of light chain variable region of HpL3 <400> 56 Gln Gly Leu Asp Asn Trp 1 5 <210> 57 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR2 of light chain variable region <400> 57 Asp Ala Ser 1 <210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR3 of light chain variable region of HpL3 <400> 58 Gln Gln Ala Lys Ala Phe Pro Pro Thr 1 5 <210> 59 <211> 369 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-nucleic acid sequence of heavy chain variable region of bevacizumab <400> 59 gaggtgcagc tggtcgagtc cggggggggg ctggtgcagc caggcgggtc tctgaggctg 60 agttgcgccg cttcagggta caccttcaca aactatggaa tgaattgggt gcgccaggca 120 ccaggaaagg gactggagtg ggtcggctgg atcaacactt acaccgggga acctacctat 180 gcagccgact ttaagcggcg gttcaccttc agcctggata caagcaaatc cactgcctac 240 ctgcagatga acagcctgcg agctgaggac accgcagtct actattgtgc taaatatccc 300 cactactatg ggagcagcca ttggtatttt gacgtgtggg ggcaggggac tctggtgaca 360 gtgagcagc 369 <210> 60 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-amino acid sequence of heavy chain variable region of bevacizumab <400> 60 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 61 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-nucleic acid sequence of light chain variable region of bevacizumab <400> 61 gatattcaga tgactcagag cccctcctcc ctgtccgcct ctgtgggcga cagggtcacc 60 atcacatgca gtgcttcaca ggatatttcc aactacctga attggtatca gcagaagcca 120 ggaaaagcac ccaaggtgct gatctacttc actagctccc tgcactcagg agtgccaagc 180 cggttcagcg gatccggatc tggaaccgac tttactctga ccatttctag tctgcagcct 240 gaggatttcg ctacatacta ttgccagcag tattctaccg tgccatggac atttggccag 300 gggactaaag tcgagatcaa g 321 <210> 62 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-amino acid sequence of light chain variable region of bevacizumab <400> 62 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 63 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR1 of heavy chain variable region of bevacizumab <400> 63 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly 1 5 <210> 64 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR2 of heavy chain variable region of bevacizumab <400> 64 Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro 1 5 <210> 65 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-HCDR3 of heavy chain variable region of bevacizumab <400> 65 Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 66 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR1 of light chain variable region of bevacizumab <400> 66 Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 1 5 <210> 67 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR2 of light chain variable region of bevacizumab <400> 67 Phe Thr Ser 1 <210> 68 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-LCDR3 of light chain variable region of bevacizumab <400> 68 Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 69 <211> 2139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-nucleic acid sequence of CP004(hG1TM) heavy chain <400> 69 gaagtgcagc tggtcgagtc tgggggaggg ctggtgcagc ccggcgggtc actgcgactg 60 agctgcgcag cttccggatt cgcctttagc tcctacgaca tgtcctgggt gcgacaggca 120 ccaggaaagg gactggattg ggtcgctact atctcaggag gcgggagata cacctactat 180 cctgacagcg tcaagggccg gttcacaatc tctagagata acagtaagaa caatctgtat 240 ctgcagatga acagcctgag ggctgaggac accgcactgt actattgtgc caaccgctac 300 ggggaagcat ggtttgccta ttgggggcag ggaaccctgg tgacagtctc tagtgccagc 360 accaaagggc ccagcgtgtt tcctctcgcc ccctcctcca aaagcaccag cggaggaacc 420 gctgctctcg gatgtctggt gaaggactac ttccctgaac ccgtcaccgt gagctggaat 480 agcggcgctc tgacaagcgg agtccataca ttccctgctg tgctgcaaag cagcggactc 540 tattccctgt ccagcgtcgt cacagtgccc agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 600 tgtaacgtca accacaagcc ctccaacacc aaggtggaca agaaagtgga gcccaaatcc 660 tgcgacaaga cacacacctg tcccccctgt cctgctcccg aagctgctgg agcccctagc 720 gtcttcctct ttcctcccaa acccaaggac accctcatga tcagcagaac ccctgaagtc 780 acctgtgtcg tcgtggatgt cagccatgag gaccccgagg tgaaattcaa ctggtatgtc 840 gatggcgtcg aggtgcacaa cgccaaaacc aagcccaggg aggaacagta caactccacc 900 tacagggtgg tgtccgtgct gacagtcctc caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tgtccaacaa ggctctccct gcccccattg agaagaccat cagcaaggcc 1020 aaaggccaac ccagggagcc ccaggtctat acactgcctc cctccaggga cgaactcacc 1080 aagaaccagg tgtccctgac ctgcctggtc aagggctttt atcccagcga catcgccgtc 1140 gagtgggagt ccaacggaca gcccgagaat aactacaaga ccacccctcc tgtcctcgac 1200 tccgacggct ccttcttcct gtacagcaaa ctgaccgtgg ataagtccag atggcagcag 1260 ggcaatgtct tttcatgttc cgtgatgcac gaggcactgc acaaccacta tacccagaag 1320 tctctgagtc tgtcaccagg aaaaggagga ggaggctctg gaggaggcgg aagtggaggc 1380 ggaggatcag gagggggagg atctcaggtg cagctggtcg aatccggagc cgaggtgaag 1440 aaacccggcg cttccgtgaa ggtctcttgc aaagcatcag gctacagctt cacagggtat 1500 actatgaact gggtgcggca ggcacctgga cagtgtctgg aatggatcgg cctgattaac 1560 ccatacaaca acatcactaa ctacgcccag aagttccagg gccgggtgac ttttaccgtg 1620 gacactagca tttccaccgc ttacatggag ctgagtcggc tgagatcaga cgataccggc 1680 gtgtattttt gcgcaaggct ggattacaga agttattggg gacagggaac acttgttaca 1740 gtctctgctg gaggaggcgg atctggagga ggaggatctg gcggaggagg cagtggagga 1800 ggaggatcac aggctgtggt tactcaggaa ccaagcctga ccgtgagccc cggaggcaca 1860 gtcactctga cctgtgggag ctccacagga gctgtgacca catctaactt ccctaattgg 1920 gtgcagcaga agccaggaca ggcacctcga tccctgatcg ggggaaccaa caacaaggcc 1980 agctggacac ccgccagatt ttctggcagt ctgctgggcg ggaaagccgc tctgaccatt 2040 agcggcgctc agcctgagga cgaagcagag tactattgcg ccctgtggta tagtaatcat 2100 tgggtgttcg ggtgtgggac aaaactgacc gtgctgaga 2139 <210> 70 <211> 713 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-amino acid sequence of CP004(hG1TM) heavy chain <400> 70 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Asn Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Asn Arg Tyr Gly Glu Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 450 455 460 Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys 465 470 475 480 Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser 485 490 495 Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys 500 505 510 Leu Glu Trp Ile Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Asn Ile Thr Asn Tyr 515 520 525 Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Phe Thr Val Asp Thr Ser Ile 530 535 540 Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Gly 545 550 555 560 Val Tyr Phe Cys Ala Arg Leu Asp Tyr Arg Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 565 570 575 Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 580 585 590 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr 595 600 605 Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr 610 615 620 Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Phe Pro Asn Trp 625 630 635 640 Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ser Leu Ile Gly Gly Thr 645 650 655 Asn Asn Lys Ala Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu 660 665 670 Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu 675 680 685 Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val Phe Gly 690 695 700 Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg 705 710 <210> 71 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-nucleic acid sequence of CP004(hG1TM) light chain <400> 71 gacattcaga tgactcagag cccctcctcc atgtccgcct ctgtgggcga cagggtcacc 60 ttcacatgcc gcgctagtca ggatatcaac acctacctga gctggtttca gcagaagcca 120 gggaaaagcc ccaagacact gatctaccgg gctaatagac tggtgtctgg agtcccaagt 180 cggttcagtg gctcagggag cggacaggac tacactctga ccatcagctc cctgcagcct 240 gaggacatgg caacctacta ttgcctgcag tatgatgagt tcccactgac ctttggcgcc 300 gggacaaaac tggagctgaa gcgaactgtg gccgctccct ccgtcttcat ttttccccct 360 tctgacgaac agctgaaatc aggcacagcc agcgtggtct gtctgctgaa caatttctac 420 cctagagagg caaaagtgca gtggaaggtc gataacgccc tgcagtccgg caacagccag 480 gagagtgtga ctgaacagga ctcaaaagat agcacctatt ccctgtctag tacactgact 540 ctgtccaagg ctgattacga gaagcacaaa gtgtatgcat gcgaagtgac acatcaggga 600 ctgtcaagcc ccgtgactaa gtcttttaac cggggcgaat gt 642 <210> 72 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence-amino acid sequence of CP004(hG1TM) light chain <400> 72 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Phe Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Met Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (21)

  1. 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체로서,
    상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체는 바람직하게는 종양 치료용으로 사용되고; 바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체는 성분 A와의 조합으로 투여되고, 상기 성분 A는 항-VEGFR2 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 항-VEGF 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 그들의 조합으로부터 선택되되,
    (1) 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체는:
    PD-1을 표적으로 하는 제 1 단백질 기능성 영역 및
    CTLA4를 표적으로 하는 제 2 단백질 기능성 영역
    을 포함하고,
    상기 제 1 단백질 기능성 영역은 면역글로불린이고, 상기 제 2 단백질 기능성 영역은 단일 사슬 항체이거나; 또는 상기 제 1 단백질 기능성 영역은 단일 사슬 항체이고, 상기 제 2 단백질 기능성 영역은 면역글로불린이며;
    상기 면역글로불린은 서열번호 14에 제시된 중쇄 가변 영역(heavy chain variable region)에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 27 내지 29에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 16에 제시된 경쇄 가변 영역(light chain variable region)에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 30 내지 32에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하고; 상기 단일 사슬 항체는 서열번호 2에 제시된 중쇄 가변 영역에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 33 내지 35에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 4에 제시된 경쇄 가변 영역에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 36 내지 38에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하거나;
    또는,
    상기 면역글로불린은 서열번호 2에 제시된 중쇄 가변 영역에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 33 내지 35에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 4에 제시된 경쇄 가변 영역에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 36 내지 38에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하고; 상기 단일 사슬 항체는 서열번호 14에 제시된 중쇄 가변 영역에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 27 내지 29에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 16에 제시된 경쇄 가변 영역에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 30 내지 32에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하고;
    (2) 상기 항-VEGFR2 단일클론 항체는 서열번호 50에 제시된 중쇄 가변 영역에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 53 내지 55에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 52에 제시된 경쇄 가변 영역에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 56 내지 58에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하고; 또는
    (3) 상기 항-VEGF 단일클론 항체는 서열번호 60에 제시된 중쇄 가변 영역에서 HCDR1-HCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 63 내지 65에 제시된 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 62에 제시된 경쇄 가변 영역에서 LCDR1-LCDR3(바람직하게는 각각 서열번호 66 내지 68에 제시된 LCDR1-LCDR3)을 포함하는,
    항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
  2. 제 1 항에 있어서,
    (1) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14 또는 서열번호 18에 제시된 서열, 또는 그의 변이체로부터 선택되고; 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16 또는 서열번호 20에 제시된 서열, 또는 그의 변이체로부터 선택되며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2, 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 41, 또는 서열번호 43에 제시된 서열, 또는 그의 변이체로부터 선택되며; 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4, 서열번호 8, 서열번호 12, 서열번호 42, 또는 서열번호 44에 제시된 서열, 또는 그의 변이체로부터 선택되거나;
    또는,
    상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2, 서열번호 6, 서열번호 10, 서열번호 41, 또는 서열번호 43에 제시된 서열, 또는 그의 변이체로부터 선택되며; 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4, 서열번호 8, 서열번호 12, 서열번호 42, 또는 서열번호 44에 제시된 서열, 또는 그의 변이체로부터 선택되고; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14 또는 서열번호 18에 제시된 서열, 또는 그의 변이체로부터 선택되며; 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16 또는 서열번호 20에 제시된 서열, 또는 그의 변이체로부터 선택되고;
    (2) 상기 항-VEGFR2 단일클론 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 50에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고; 상기 항-VEGFR2 단일클론 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고; 또는
    (3) 상기 항-VEGF 단일클론 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 60에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고; 상기 항-VEGF 단일클론 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 62에 제시된 서열 또는 그의 변이체이되,
    상기 변이체의 서열은 대응하는 서열에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 가지는,
    항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 이중특이적 항체는:
    (1) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (2) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 8에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (3) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 10에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 12에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (4) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (5) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 8에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (6) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 10에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 12에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (7) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (8) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 2에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 4에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (9) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 8에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (10) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 8에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (11) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 10에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 12에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (12) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 10에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 12에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (13) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 41에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 42에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (14) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (15) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 41에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 42에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (16) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (17) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 41에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 42에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (18) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 14에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 16에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    (19) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 41에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 42에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    및,
    (20) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44에 제시된 서열 또는 그의 변이체이며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 18에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 20에 제시된 서열 또는 그의 변이체임;
    중의 어느 하나로부터 선택되되,
    상기 변이체의 서열은 대응하는 서열에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 가지는,
    항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 면역글로불린의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 40에 제시된 서열 또는 그의 변이체이고, 상기 면역글로불린의 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 24에 제시된 서열 또는 그의 변이체이되, 상기 변이체의 서열은 대응하는 서열에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 가지는, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 1 단백질 기능성 영역은 직접 또는 링커 단편(linker fragment)을 통해 상기 제 2 단백질 기능성 영역에 연결되고/되거나; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역은 직접 또는 링커 단편을 통해 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역에 연결되는, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 링커 단편은 (GGGGS)n이되, 상기 n은 양의 정수이고, 바람직하게는 상기 n은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6인, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 1 및 제 2 단백질 기능성 영역의 수는 각각 독립적으로 1, 2, 또는 그 초과인, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 단일 사슬 항체(바람직하게는 상기 중쇄 가변 영역)은 상기 면역글로불린의 중쇄에 연결되고, 바람직하게는 상기 면역글로불린의 중쇄의 C 말단(terminus)에 연결되는, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 면역글로불린은 인간 IgG1 서브타입(subtype)이되;
    EU 넘버링 시스템(EU numbering system)에 따르면, 상기 면역글로불린은, 돌연변이:
    L234A 및 L235A; 또는
    L234A 및 G237A; 또는
    L235A 및 G237A; 또는
    L234A, L235A, 및 G237A;
    로부터 선택된 A 돌연변이를 갖는 중쇄 불변 영역(heavy chain constant region)을 포함하고;
    EU 넘버링 시스템에 따르면, 상기 면역글로불린은, 돌연변이:
    N297A, D265A, D270A, P238D, L328E, E233D, H268D, P271G, A330R, C226S, C229S, E233P, P331S, S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, T256E, N297Q, P238S, P238A, A327Q, A327G, P329A, K322A, T394D, G236R, G236A, L328R, A330S, P331S, H268A, E318A, 및 K320A,
    중의 하나 이상으로부터 선택된 B 돌연변이를 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하고; 또는
    EU 넘버링 시스템에 따르면, 상기 면역글로불린은, A 돌연변이 및 B 돌연변이의 조합을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하고;
    상기 항-VEGFR2 단일클론 항체 또는 상기 항-VEGF 단일클론 항체의 중쇄 불변 영역은 Ig 감마-1 사슬 C 영역, ACCESSION P01857이고, 상기 경쇄 불변 영역은 Ig 카파 사슬(kappa chain) C 영역, ACCESSION P01834인,
    항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 이중특이적 항체는:
    PD-1을 표적으로 하는 제 1 단백질 기능성 영역 및
    CTLA4를 표적으로 하는 제 2 단백질 기능성 영역
    을 포함하고,
    상기 제 1 단백질 기능성 영역의 수는 1이고, 상기 제 2 단백질 기능성 영역의 수는 2이며;
    상기 제 1 단백질 기능성 영역은 면역글로불린이며, 상기 제 2 단백질 기능성 영역은 단일 사슬 항체이고;
    상기 면역글로불린의 중쇄는 서열번호 40에 제시된 아미노산 서열 또는 그에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열을 가지고, 상기 경쇄는 서열번호 24에 제시된 아미노산 서열 또는 그에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열을 가지며;
    상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역은 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열 또는 그에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열을 가지고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역은 서열번호 44에 제시된 서열 또는 그에 대해 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열을 가지며;
    상기 단일 사슬 항체는 상기 면역글로불린의 중쇄의 C 말단에 연결되며;
    상기 제 1 단백질 기능성 영역은 제 1 링커 단편을 통해 상기 제 2 단백질 기능성 영역에 연결되고; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역은 제 2 링커 단편을 통해 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역에 연결되며; 상기 제 1 링커 단편 및 제 2 링커 단편은 동일하거나 또는 상이하고;
    바람직하게는, 상기 제 1 링커 단편 및 제 2 링커 단편은 각각 서열번호 25 및 서열번호 26으로부터 독립적으로 선택된 아미노산 서열을 가지며;
    바람직하게는, 상기 제 1 링커 단편 및 제 2 링커 단편의 아미노산 서열은 서열번호 26에 제시되고;
    바람직하게는, 상기 항-PD-1/CTLA-4 이중특이적 항체의 경쇄는 서열번호 72에 제시된 서열을 가지고, 상기 항-PD-1/CTLA-4 이중특이적 항체의 중쇄는 서열번호 70에 제시된 서열을 가지며;
    바람직하게는, 상기 항원-결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb, Fab/c, 상보성 결정 영역(complementarity determining region; CDR) 단편, 단일 사슬 항체(예를 들어 scFv), 2가 항체, 또는 도메인 항체로부터 선택되는,
    항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체.
  11. 종양(특히 악성 종양)을 치료하기 위한 약학 조성물로서,
    유효량의 제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 및 제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 정의된 성분 A를 포함하되,
    바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 및 상기 성분 A의 질량비(mass ratio)는 (1:5) 내지 (5:1), 예를 들어 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 또는 5:1에서 선택되며;
    바람직하게는, 상기 약학 조성물은 고체 또는 액체의 형태이고; 선택적으로, 상기 약학 조성물은 하나 이상의 화학요법 약물(바람직하게는, 상기 화학요법 약물은 알킬화제, 항대사물질(antimetabolite), 항생제, 식물계 및/또는 호르몬 약물, 백금계 약물(예를 들어 시스플라틴, 카보플라틴 및 옥살리플라틴), 아드리아마이신, 사이클로포스파미드, 파클리탁셀(예를 들어 알부민-결합 파클리탁셀, 리포좀 파클리탁셀, 및 도세탁셀), 에토포시드(etoposide), 겜시타빈(gemcitabine), 페메트렉세드(pemetrexed), 카페시타빈(capecitabine), 올라파립(olaparib), 루카파립(rucaparib), 니라파립(niraparib), 탈라조파립(talazoparib), 플루조파립(fluzoparib), 빈카 알칼로이드(vinca alkaloid), 타목시펜(tamoxifen), 메게스트롤(megestrol), 고세렐린(goserelin), 아스파라기나제(asparaginase), 및/또는 플루오로우라실 항신생물제(fluorouracil antineoplastic agent)임)을 더 포함하는,
    약학 조성물.
  12. 종양(특히 악성 종양)을 예방하고/하거나 치료하기 위한 약제(medicament) 또는 키트(kit)를 제조함에 있어서 제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 용도로서,
    상기 약제 또는 키트는 바람직하게는 제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 정의된 성분 A를 더 포함하되;
    선택적으로, 상기 약제 또는 키트는 종양을 치료하기 위한 하나 이상의 약물(drugs)(바람직하게는, 상기 약물은 화학요법 약물(chemotherapeutic drug) 또는 성장 억제제(예를 들어 알킬화제, 안트라사이클린, 항-호르몬제, 아로마타제 억제제(aromatase inhibitor), 항-안드로겐제(anti-androgen agent), 단백질 키나제 억제제(protein kinase inhibitor), 지질 키나제 억제제, 안티센스 올리고뉴클레오티드(antisense oligonucleotide), 리보자임(ribozyme), 항대사물질, 토포이소머라제 억제제(topoisomerase inhibitor), 세포독소 또는 항-종양 항생제, 프로테아좀 억제제(proteasome inhibitor), 항-미세관제(anti-microtubule agent), EGFR 길항제, VEGF 길항제, 안지오포이에틴 2 길항제(angiopoietin 2 antagonist), 레티노이드, 티로신 키나제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제(histone deacetylase inhibitor) 및 그들의 조합물), 표적 치료제(targeted therapeutic)(예를 들어 B-raf 억제제, MEK 억제제, K-ras 억제제, c-Met 억제제, Alk 억제제, 포스파티딜린-오시톨-3-키나제 억제제(phosphatidylin-ositol-3-kinase inhibitor), Akt 억제제, mTOR 억제제, VEGF 억제제, PARP 억제제, 이중 포스파티딜린-오시톨-3-키나제/mTOR 억제제 및 그들의 조합물), 항체-약물 접합체(예를 들어 메이탄신(maytansine), 모노메틸 아우리스타틴 E(monomethyl auristatin E), 칼리케아미신(calicheamicin), 에스페라마이신(esperamicin) 및 방사성 동위원소 킬레이트제(radioisotope chelator)), 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포, 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 혈관신생 억제제, 항신생물제, 암 백신, 보조제(adjuvant) 및 그들의 조합물, 알킬화제, 항대사물질, 항생제, 식물계 및/또는 호르몬 약물, 백금계 약물(예를 들어 시스플라틴, 카보플라틴 및 옥살리플라틴), 아드리아마이신, 사이클로포스파미드, 파클리탁셀, 알부민-결합 파클리탁셀, 리포좀 파클리탁셀, 도세탁셀, 에토포시드, 겜시타빈, 페메트렉세드, 카페시타빈, 올라파립, 루카파립, 니라파립, 탈라조파립, 플루조파립, 빈카 알칼로이드, 타목시펜, 메게스트롤, 고세렐린, 아스파라기나제, 및/또는 플루오로우라실 항신생물제임)을 더 포함하는, 용도.
  13. 종양(특히 악성 종양)을 예방하고/하거나 치료하는 방법으로서,
    치료적 유효량의 제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체를,
    제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 정의된 성분 A와의 조합으로,
    보다 바람직하게는 종양을 치료하기 위한 하나 이상의 약물(바람직하게는, 상기 약물은 화학요법 약물 또는 성장 억제제(예를 들어 알킬화제, 안트라사이클린, 항-호르몬제, 아로마타제 억제제, 항-안드로겐제, 단백질 키나제 억제제, 지질 키나제 억제제, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 세포독소 또는 항-종양 항생제, 프로테아좀 억제제, 항-미세관제, EGFR 길항제, VEGF 길항제, 안지오포이에틴 2 길항제, 레티노이드, 티로신 키나제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제 및 그들의 조합물), 표적 치료제(예를 들어 B-raf 억제제, MEK 억제제, K-ras 억제제, c-Met 억제제, Alk 억제제, 포스파티딜린-오시톨-3-키나제 억제제, Akt 억제제, mTOR 억제제, VEGF 억제제, PARP 억제제, 이중 포스파티딜린-오시톨-3-키나제/mTOR 억제제 및 그들의 조합물), 항체-약물 접합체(예를 들어 메이탄신, 모노메틸 아우리스타틴 E, 칼리케아미신, 에스페라마이신 및 방사성 동위원소 킬레이트제), 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포, 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 혈관신생 억제제, 항신생물제, 암 백신, 보조제 및 그들의 조합물, 알킬화제, 항대사물질, 항생제, 식물계 및/또는 호르몬 약물, 백금계 약물(예를 들어 시스플라틴, 카보플라틴 및 옥살리플라틴), 아드리아마이신, 사이클로포스파미드, 파클리탁셀(예를 들어 알부민-결합 파클리탁셀, 리포좀 파클리탁셀, 및 도세탁셀), 에토포시드, 겜시타빈, 페메트렉세드, 카페시타빈, 올라파립, 루카파립, 니라파립, 탈라조파립, 플루조파립, 빈카 알칼로이드, 타목시펜, 메게스트롤, 고세렐린, 아스파라기나제, 및/또는 플루오로우라실 항신생물제임)과의 추가 조합으로,
    대상체에게 투여하는 것을 포함하되,
    상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 성분 A, 및 항-종양 화학요법 약물은 바람직하게는 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것인,
    방법.
  14. 종양(특히 악성 종양)을 예방하고/하거나 치료하기 위한 키트로서,
    (a) 활성 성분으로서 제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체를 포함하는 제 1 약학 조성물;
    (b) 활성 성분으로서 제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 정의된 성분 A를 포함하는 제 2 약학 조성물; 및
    선택적으로,
    (c) 종양을 치료하기 위한 하나 이상의 약물(바람직하게는, 상기 약물은 화학요법 약물 또는 성장 억제제(예를 들어 알킬화제, 안트라사이클린, 항-호르몬제, 아로마타제 억제제, 항-안드로겐제, 단백질 키나제 억제제, 지질 키나제 억제제, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 세포독소 또는 항-종양 항생제, 프로테아좀 억제제, 항-미세관제, EGFR 길항제, VEGF 길항제, 안지오포이에틴 2 길항제, 레티노이드, 티로신 키나제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제 및 그들의 조합물), 표적 치료제(예를 들어 B-raf 억제제, MEK 억제제, K-ras 억제제, c-Met 억제제, Alk 억제제, 포스파티딜린-오시톨-3-키나제 억제제, Akt 억제제, mTOR 억제제, VEGF 억제제, PARP 억제제, 이중 포스파티딜린-오시톨-3-키나제/mTOR 억제제 및 그들의 조합물), 항체-약물 접합체(예를 들어 메이탄신, 모노메틸 아우리스타틴 E, 칼리케아미신, 에스페라마이신 및 방사성 동위원소 킬레이트제), 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포, 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 혈관신생 억제제, 항신생물제, 암 백신, 보조제 및 그들의 조합물, 알킬화제, 항대사물질, 항생제, 식물계 및/또는 호르몬 약물, 백금계 약물(예를 들어 시스플라틴, 카보플라틴 및 옥살리플라틴), 아드리아마이신, 사이클로포스파미드, 파클리탁셀(예를 들어 알부민-결합 파클리탁셀, 리포좀 파클리탁셀, 및 도세탁셀), 에토포시드, 겜시타빈, 페메트렉세드, 카페시타빈, 올라파립, 루카파립, 니라파립, 탈라조파립, 플루조파립, 빈카 알칼로이드, 타목시펜, 메게스트롤, 고세렐린, 아스파라기나제, 및/또는 플루오로우라실 항신생물제임);
    을 포함하는, 키트.
  15. 단위 제형(unit formulation)으로서,
    바람직하게는 종양(특히 악성 종양) 치료용으로 사용되고,
    상기 단위 제형은,
    제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 1-10000 mg(바람직하게는 10-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 또는 200 mg);
    제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 정의된 성분 A 1-10000 mg(바람직하게는 1-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 200 mg, 또는 100 mg); 및
    선택적으로,
    종양을 치료하기 위한 하나 이상의 약물(바람직하게는, 상기 약물은 화학요법 약물 또는 성장 억제제(예를 들어 알킬화제, 안트라사이클린, 항-호르몬제, 아로마타제 억제제, 항-안드로겐제, 단백질 키나제 억제제, 지질 키나제 억제제, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임, 항대사물질, 토포이소머라제 억제제, 세포독소 또는 항-종양 항생제, 프로테아좀 억제제, 항-미세관제, EGFR 길항제, VEGF 길항제, 안지오포이에틴 2 길항제, 레티노이드, 티로신 키나제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제 및 그들의 조합물), 표적 치료제(예를 들어 B-raf 억제제, MEK 억제제, K-ras 억제제, c-Met 억제제, Alk 억제제, 포스파티딜린-오시톨-3-키나제 억제제, Akt 억제제, mTOR 억제제, VEGF 억제제, PARP 억제제, 이중 포스파티딜린-오시톨-3-키나제/mTOR 억제제 및 그들의 조합물), 항체-약물 접합체(예를 들어 메이탄신, 모노메틸 아우리스타틴 E, 칼리케아미신, 에스페라마이신 및 방사성 동위원소 킬레이트제), 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포, 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 혈관신생 억제제, 항신생물제, 암 백신, 보조제 및 그들의 조합물, 항대사물질, 항생제, 식물계 및/또는 호르몬 약물, 백금계 약물(예를 들어 시스플라틴, 카보플라틴 및 옥살리플라틴), 아드리아마이신, 사이클로포스파미드, 파클리탁셀(예를 들어 알부민-결합 파클리탁셀, 리포좀 파클리탁셀, 및 도세탁셀), 에토포시드, 겜시타빈, 페메트렉세드, 카페시타빈, 올라파립, 루카파립, 니라파립, 탈라조파립, 플루조파립, 빈카 알칼로이드, 타목시펜, 메게스트롤, 고세렐린, 아스파라기나제, 및/또는 플루오로우라실 항신생물제임);
    을 포함하되,
    상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 상기 성분 A, 및 상기 화학요법 약물은 바람직하게는 동시에 또는 순차적으로 투여되는 것인,
    단위 제형.
  16. 암 또는 종양을 예방하거나 치료하는 방법으로서,
    상기 방법은 제 15 항에 따른 하나 이상의 단위 제형을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 바람직하게는 상기 단위 제형에서 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 상기 성분 A, 및 상기 화학요법 약물은 각각 개별적으로 투여되는 것인, 방법.
  17. 단일 투여량 단위(single dose unit)로서,
    바람직하게는 종양(특히 악성 종양) 치료용으로 사용되고,
    제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 0.1-10000 mg(바람직하게는 1-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 200 mg, 또는 100 mg); 및
    제 1 항 내지 제 10 항 중의 어느 한 항에 정의된 성분 A 0.1-10000 mg(바람직하게는 1-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 200 mg, 또는 100 mg);
    을 포함하는, 단일 투여량 단위.
  18. 제 1 항 내지 제 16 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 종양은:
    자궁경부암(예를 들어 전이성 자궁경부암), 폐암 예를 들어 비-소세포 폐암(예를 들어 편평 비-소세포 폐암 또는 비-편평 비-소세포 폐암), 식도암, 식도 편평암, 회장 선암(ileocecal adenocarcinoma), 췌장 선암, 소세포 폐암, 위암(예를 들어 진행성 위암, 위 선암, 또는 위식도 접합부 선암), 신장암, 자궁내막암, 부신피질 암종(adrenocortical carcinoma), 전립선암, 갑상선암, 복막암, 선암, 췌장암, 신경교종, 두경부암, 골암, 고환암, 백혈병, 골수종, 림프종, 육종, 중피종, 간세포 암종, 결장암, 담도암, 담관암, 직장암, 결장암, 자궁내막암, 난소암(예를 들어 진행성 난소암) 또는 나팔관암, 대세포 신경내분비암, 요로상피세포암(예를 들어 상부 요로상피세포암 또는 방광암), 유방암, 삼중 음성 유방암, 말초 T-세포 림프종, 흑색종, 비인두암, 높은 미세위성 불안정성(MSI-H) 또는 미스매치 수복 결핍(dMMR) 고형 종양, 뇌암(예를 들어 교모세포종과 같은 공격성 뇌암), 난소암, 편평 세포 암종, 기저세포 암종, 선종, 점액 또는 장액 낭선암, 평활근육종, 횡문근육종, 융모상피종, 악성 수산종, 악성 세르톨리 세포-기질 세포 종양, 악성 과립구종, 및 배아종(dysgerminoma),
    중의 하나 이상으로부터 선택되는 것인,
    항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 약학 조성물, 용도, 방법, 키트, 단위 제형, 또는 방법.
  19. 제 1 항 내지 제 16 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 상기 성분 A, 및/또는 상기 화학요법 약물은 정맥 주사 또는 정맥 점적 주입에 적합한 형태, 바람직하게는 액체 형태인,
    항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 약학 조성물, 용도, 방법, 키트, 단위 제형, 또는 방법.
  20. 제 13 항 또는 제 16 항에 있어서,
    상기 대상체에게 유효량의 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체를 투여하는 것은 외과적 처치 전 또는 후에 및/또는 방사선 치료 전 또는 후인 것인, 방법.
  21. 제 13 항 또는 제 16 항에 있어서,
    상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 단위 투여량은 0.1-100 mg/kg(체중), 바람직하게는 1-10 mg/kg(체중)이고; 대안으로, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 단위 투여량은 각각의 대상체에서 10-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 또는 200 mg이며;
    상기 성분 A의 단위 투여량은 0.1-100 mg/kg(체중), 바람직하게는 1-10 mg/kg(체중)이고; 대안으로, 상기 성분 A의 단위 투여량은 각각의 대상체에서 10-1000 mg, 바람직하게는 50-500 mg, 100-400 mg, 150-300 mg, 150-250 mg, 200 mg, 또는 100 mg이고;
    바람직하게는, 상기 투여량은 1일 2회 내지 격일 약 1회, 또는 3일, 4일, 5일, 6일, 10일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주마다 1회 투여되며;
    바람직하게는, 상기 투여의 경로는 정맥 점적 주입 또는 정맥 주사인,
    방법.
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