CN115192651A - 一种用于高血脂症的黎药组合物、黎药制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用于高血脂症的黎药组合物，按照重量份数计，其组分包括：鹧鸪茶28‑32份，鸡屎藤18‑22份，绞股蓝18‑22份，黑老虎果14‑16份，鸡骨草14‑16份，田基黄9‑11份，海南灵芝9‑11份，鲜余甘子48‑52份。本发明还提供了采用所述黎药组合物制备的黎药制剂及其应用。本发明以保肝护肝的药物成分为主，无肝毒或肾毒性药物成分，且混合剂以果实纤维组成，具有滋阴生津的作用，无蔗糖成分，不会升高血糖，多组药物配合，协同作用，泻中有补，清中有利，可有效针对多种证型的高血脂，对血脂有良好的抑制升高作用。

Description

一种用于高血脂症的黎药组合物、黎药制剂及其制备方法和 应用

技术领域

本发明涉及一种黎药制剂，尤其涉及一种用于高血脂症的黎药组合物、黎药制剂及其制备 方法和应用。

背景技术

随着经济社会的发展和人民生活水平的提高，人们越来越追求味蕾上的满足，肥(动物脂 肪)、甘(糖类淀粉)、厚(不易消化)、腻(高胆固醇)的食物越来越多的出现在了人们的餐 桌上。中医经典《素问》中写到“肥贵人，则膏粱之疾也”、“肥者令人内热”、“甘者令人中满”， 肥、甘、厚、腻的食物是引起高血脂病的重要因素。心血管疾病是全世界死亡的首要原因，而 高脂血症是导致心血管疾病最重要的危险因素之一。高脂血症是中老年人群最常见的病症，其 为动脉粥样硬化最重要的危险因素之一，一旦引发则易增加心脑血管疾病的发病率和死亡率， 还伴有各种器官和组织的并发症。目前中国成人血脂异常总体患病率高达40.4％，高血脂患者 的年龄也有年轻化趋势。

中医治疗高血脂症时，常从如下几个方向考虑：①痰浊阻遏型；②脾肾阳虚型；③肝肾阴 虚型；④阴虚阳亢型；⑤气滞血瘀型。现有成药大多只针对一种证型，在运用到其他证型的高 血脂症的时候，会出现一定的副作用或者无效。部分患者在自购药，或者临床西医生对中医认 识不足的时候，会单纯对病用药，极易选错成药，导致病情延误或加重。并且现代降脂中成药 根据现代药理学研究，部分中药成分具有肝毒性或肾毒性，久服会对人体造成一定的伤害。

在中药降脂领域，大部分成药以传统中药的组成为主，民族药为主要成分的成药只占据市 场很少的份额，如蒙药的五味清浊散、藏药七十味珍珠丸等。而祖国最南端的黎族人民，自古 虽以狩猎为生，以食肉为主，但鲜有肥胖之人，故可见黎药在血脂调节这方面有着自己独特的 疗效，但没有一款确定成分的降脂黎药成药在市场上服务大众。

中国专利文献CN1539475公开了一种防治高脂血症、动脉粥样硬化及相关疾病的天然产 物组合物，使用了人参、红曲、绿茶、银杏叶；中国专利文献CN108096381B公开了一种具有 降脂功能的中药复方制剂，使用了绿茶、大花紫薇、棠梨果、苦瓜子。但是关于这些中药复合 物组合应用目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种用于高血脂症的黎药组合物、黎药制 剂及其制备方法和应用。

本发明的第一个方面是提供一种用于高血脂症的黎药组合物，按照重量份数计，其组分包 括：鹧鸪茶28-32份，鸡屎藤18-22份，绞股蓝18-22份，黑老虎果14-16份，鸡骨草14-16 份，田基黄9-11份，海南灵芝9-11份，鲜余甘子48-52份。

优选地，按照重量份数计，所述黎药组合物组分包括：鹧鸪茶30份，鸡屎藤20份，绞股 蓝20份，黑老虎果15份，鸡骨草15份，田基黄10份，海南灵芝10份，鲜余甘子50份。

其中，所述绞股蓝为茎叶同用，茎和叶的重量比为(3.5-4.5):(5.5-6.5)，优选为4:6。

其中，所述鸡骨草为根叶同用，根和叶的重量比为(2.5-3.5):(6.5-7.5)，优选为3:7。

本发明的第二个方面是提供一种用于高血脂症的黎药制剂，其由权利要求1-4中任意一项 所述的黎药组合物制备而成。

本发明的第三个方面是提供一种如第二个方面所述的黎药制剂的制备方法，其特征在于， 包括以下步骤：(1)取鹧鸪茶、鸡屎藤、绞股蓝、黑老虎果、鸡骨草、田基黄、海南灵芝采用 水提法进行提取，得到中药水提物；(2)步骤(1)的中药水提物经适当浓缩后，加入鲜余甘 子，文火加热，搅拌，至余甘子果肉与果核完全分离成糊状，400-500目滤网进行过滤，得到 糊液；(3)糊液干燥、粉碎，既得。

其中，水提法为中药领域的制备浸出制剂最常用方法，本发明对此不作特别限制，本领域 技术人员根据常规操作进行即可。水提法的一般过程为：取规定药物，切碎或粉碎成粗粉，置 适宜煎器中，加水浸没药材，浸泡适宜时间后，加热至煮沸，保持微沸一定时间，分离煎出液， 药渣依法煎出数次(一般为2-3次)，至煎液味淡为止，合并各次煎出液，浓缩至规定浓度。

本发明的第四个方面是提供如本发明第一个方面所述的黎药组合物、或者本发明第二个所 述的黎药制剂在制备用于高血脂症的药物中的应用。

本发明的药物主要以味甘、苦，性平、寒药物为主，皆为黎族传统医药常用之药，亦为黎 族人民日常生活中常用保健之品。其中以鸡屎藤，绞股蓝为清食积郁热、化脾胃湿浊要药，可 有效清利由于过食肥膏厚腻而至的血脂之异；鹧鸪茶有清热解渴，消食利胆之功；鸡骨草、田 基黄归肝经，可利湿退黄，能够有效针对肝脏功能异常而至的血脂异常；黑老虎果有行气活血 之功，既能助推其他药性，又可解瘀血而导致的血脂异常；海南灵芝为滋补佳物，又有保肝之 功，在上述以泻为主的药物中加入滋补之物，可防治由于泄泻过多而致正气亏虚。余甘子甘酸 性凉，可保阴生津，育生体内清澈之津液，且果肉肥厚，煎熟之后，即可包裹其他药物，又可 改善此组处方药物之口感，便于服用。本发明将多组药物配合，协同作用，泻中有补，清中有 利，可有效针对多种证型的高血脂。

使用他汀类药物治疗高血脂症过程中，会伴随骨骼肌损伤，以及神经化学传导、甲状腺代 谢、呼吸系统及生殖异常，提示在用药前以及用药过程中需对患者的骨骼肌、神经系统、内分 泌系统、呼吸系统及生殖系统相关机体状态进行整体评估及密切关注，综合评估他汀类药物的 用药风险。其中，他汀类药物对人体的骨骼肌有明确的损伤作用，对人体的肝脏及神经系统有 一定的毒性，并且会导致人体血糖升高，对人体的不良反应较多，潜在危害较大。使用常规中 成药时，成分里多包涵一些现代研究已经明确或者尚未明确的具有肝毒性与肾毒性药物成分， 久服对身体会造成一定损害。检索得知，中成药的辅料一般为蔗糖，一定程度上会导致人体血 糖与血脂的增高，不利于病情的好转。而本发明以保肝护肝的药物成分为主，无肝毒或肾毒性 药物成分，且混合剂以果实纤维组成，具有滋阴生津的作用，无蔗糖成分，不会升高血糖，对 血脂有良好的抑制升高作用。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，以更好地理解本发明。实施例中未注明 具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用 试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1

本实施例的配伍为：

按照重量份数计，鹧鸪茶30份，鸡屎藤20份，绞股蓝20份，黑老虎果15份，鸡骨草15份，田基黄10份，海南灵芝10份，鲜余甘子50份。

处理及炮制：

(1)按照上述剂量取鹧鸪茶、鸡屎藤、绞股蓝、黑老虎果、鸡骨草、田基黄、海南灵芝于8倍重量的水，浸泡30分钟后武火煮开，文火慢煎10分钟，技术操作过程中去掉液体浮沫，制成煎煮液后，经800-1000目滤网进行第一次过滤获得第一次滤液。后再加入其8倍重量的水，武火煮开，文火慢煎20分钟，制成煎煮液后，经800-1000目滤网进行过滤获得第二次滤液，将第1、2次滤液混合。

(2)将步骤(1)中混合滤液继续武火加热浓缩，待水液浓缩至原液1/2时，加入余甘子， 改文火加热，期间不断搅拌，至余甘子果肉与果核完全分离，成糊状，水液为原液1/4时，取 出煎煮液，经400-500目滤网进行过滤，得到糊液。

(3)将糊液置入干燥机中，温度设置为4℃进行干燥处理48h，得到干燥固体后，对固体 进行粉碎，得到颗粒。

(4)将颗粒按照10g/袋规格密封分装。

(5)使用方法：每次一袋，每日三次，饭后50ml温开水冲服。

(6)使用禁忌：脾胃虚寒、便溏者慎用。

实施例2

本实施例与实施例1的不同之处在于配伍，处理及炮制同实施例1，本实施例的配伍为：

按照重量份数计，鹧鸪茶32份，鸡屎藤22份，绞股蓝18份，黑老虎果14份，鸡骨草16份，田基黄9份，海南灵芝11份，鲜余甘子48份。

实施例3

本实施例与实施例1的不同之处在于配伍，处理及炮制同实施例1，本实施例的配伍为：

按照重量份数计，鹧鸪茶28份，鸡屎藤18份，绞股蓝22份，黑老虎果16份，鸡骨草14份，田基黄11份，海南灵芝9份，鲜余甘子52份。

一、临床药效试验

在2019年12月至2021年3月期间，以《中药新药临床研究指导原则(试行)》为诊断标准，收录海南医学院第一附属医院就诊的120例高脂血症患者进行研究，随机分为黎药组与 对照组(西药治疗)，每组各60例。黎药组中，男32例，女28例；年龄54.5±3.2岁；病程4.3±1.5y。对照组中，男29例，女31例；年龄54.3±3.4岁，病程4.4±1.3y。两组在性别、 年龄、病程相比P＞0.05差异无统计学意义，有可比性(两组性别差异相比X²＝0.3，P＝0.58；两组年龄差异相比P＝0.52；两组病程差异相比P＝0.87)。本研究经海南医学院伦理委员会批 准并通过，且患者及其家属均签署了知情同意书。

治疗方法：①黎药组：采用实施例1的黎药制剂，遵循医嘱外用，10g/次，3次/d。②对 照组：辛伐他汀片，10mg/d，晚饭后顿服。治疗后对患者血脂进行检测检测间隔为24h。疗效 参照《中药新药临床研究指导原则(试行)》：实验室各项检查恢复正常为治愈。TC下降≥20％， TG下降≥40％；HDL—C上升≥0.26mmol/L(10mg/dl),TC—HDL—C/HDL—C≥20％，血脂 检测达到以上任何一项为显效。TC下降≥10％但＜40％；HDL—C上升≥0.104mmol/L(4mg/dl) 但＜0.26mmol/L(10mg/dl)，TC—HDL—C/HDL下降≥10％但＜20％，血脂检测达到以上任一 项者为有效。血脂检测未达到以上标准者为无效。最终结果如表1所示。

表1临床药效试验结果(n＝120)

	治愈	显效	有效	无效	有效率(％)	治愈率(％)
							黎药组	46	6	2	4	93.33％	76.67％
对照组	35	10	7	8	86.67％<sup>△</sup>	58.3％*

^△与黎药组比P＞0.05(X²＝0.16,P＝0.32)；*与黎药组比P＜0.05(X²＝3.82,P＝0.042)。

临床试验结果显示，本发明的黎药制剂在使用过程中与西药辛伐他汀片相比，二者对于患 者高血脂症状都能起到优势效果，差异无统计学意义(P＞0.05)；但是在治愈率上本发明治愈 率较对照组高，二者差异有统计学意义(P＜0.05)。基于治疗效果数据提示，在使用过程中， 见效快、治愈率高，疗效好是本发明的潜在优势。

二、体外细胞实验

1、细胞培养：

将大鼠肝癌细胞RH-35(购自上海佰晔生物科技中心)接种于25cm²培养瓶中，加入含 10％FBS，100U/mL青霉素，100ug/mL链霉素的DMEM培养液，置于37℃,5％CO₂条件下， 每2天换液一次，细胞密度为80％～90％时传代，取对数期细胞用于试验。

2、高脂细胞模型建立

实验细胞采用1％BSA的DMEM高糖培养基，加入油酸使其终浓度为1.5mmol/L，培养细胞48h后用流式细胞仪测定细胞内脂质相对含量。

3、含药血清制作

选用SPF级5周龄Wistar雄性大鼠，25只，体重250±20g(购自湖南斯莱克景达实验动 物有限公司，质量合格证编号：430727201101514646)。动物饲养于海南医学院动物实验中心， 所有程序和动物实验均经海南医学院伦理委员会批准。动物随机分为5组，每组五只，分别为： 原方组(使用实施例1制得的黎药制剂，每袋颗粒加50ml温水冲开)、加减方①组(使用实 施例1配方配成中的鹧鸪茶、鸡屎藤、绞股蓝、黑老虎果、鲜余甘子，严格遵循实施例1配置 而成，每袋颗粒加50ml温水冲开)、加减方②组(使用实施例1配方配成中的鸡骨草、田基 黄、海南灵芝、鲜余甘子，严格遵循实施例1配置而成，每袋颗粒加50ml温水冲开)、低剂 量①组(将实施例1制得的黎药制剂用50ml温水冲开后用无菌蒸馏水作1：2稀释)、低剂量 ②组(将实施例1制得的黎药制剂用50ml温水冲开后用无菌蒸馏水作1：4稀释)，各组大鼠 每日给予正常饮食，用黎药颗粒药液连续灌胃6日，1ml/50g/次，3次/d，第7日禁食一天， 禁食期间黎药颗粒药液正常灌胃，待第3次灌胃1h后，无菌操作下进行股动脉取血。采血后， 将血液于4℃下放置lh，3000r/min离心10min，取上清液，经0.22μm微孔滤膜过滤，同组混 匀，经56℃,30min灭活分装，-20℃保存备用。

4、确定大鼠血清加入浓度

用含10％胎牛血清的培养液将8×10³个/mL的细胞悬液接种于96孔培养板，每孔100ul， 待细胞贴壁达70％-80％后吸弃培养液，用无血清的DMEM同步化细胞24小时，然后分别加 入含5％、10％、15％、20％空白大鼠血清和10％胎牛血清的培养液。继续培养48小时后，所 有孔中加入10μL CCK-8测试液，培养箱中孵育3小时，使用酶标仪测定450nm光吸收值，以 溶剂处理的细胞为对照组，不含细胞的培养基为空白组，按公式计算各组增殖率。增殖率％＝ (对照组—实验组)/(对照组—空白组)*100％。选取与10％胎牛血清最接近的最高浓度为 实验时大鼠血清加入浓度。

5、给药方式

取高脂肝癌细胞，胰酶消化后，加DMEM(含10％FBS)培养液于离心管中，吹打、混匀。当细胞密度接近70％时，更换无血清的培养基继续培养24h，使细胞同步化于G0期。每 5孔细胞分为一组，共分为5组，即原方组、加减方①组、加减方①组、低剂量①组、低剂量 ②组，每组共设置2个分组，各个分组加入17％的对应含药血清，37℃、5％CO₂的培养箱分 别培养24h后，取出细胞。

6、细胞内脂质的含量测定

将细胞悬液按4×10⁵个/mL的密度接种至6孔板，每孔终体积2mL。培养24h后，弃上清液，加样，每孔终体积2mL，培养至预定时间后，弃上清液。pH7.4的磷酸缓冲液(PBS)洗2次，胰酶消化收集细胞，重悬细胞于1mLPBS，清洗一次。用500uL4％多聚甲醛固定细胞15min， PBS洗2次。加入尼罗红染液，终浓度为50ng/mL，水浴37℃，避光染色5min，用流式细胞 仪测定细胞荧光强度几何平均值(激发光波长为488nm，发射光波长约550nm，以未经药物处 理，未加尼罗红染色细胞为空白调零)。

7、结果

在各组细胞经含药血清处理完成后，按照“6、细胞内脂质的含量测定”测定细胞内脂质 含量。结果如表2。

表2原方与加减方、低剂量方体外荧光强度几何平均值(

n＝5)

	原方组	加减方①组	加减方②组	低剂量①组	低剂量②组
						G0期	195	195	195	195	195
24h	175	184<sup>△</sup>	184<sup>△</sup>	182<sup>△</sup>	182<sup>△</sup>

△与原方组比较P＜0.05。

通过体外细胞降脂实验发现：原方组24h细胞内脂质降低量最大，且与其他组差异明显(P ＜0.05)；体外细胞降脂实验结果提示本发明所选处方在对降低细胞内脂质的作用最大，与其 他实验组比较本发明为最优方案。

注：研究表明，肝脏是人体合成内源性甘油三脂及胆固醇的主要场所，同时也是脂肪酸进 行B-氧化最活跃的部位，通过促进脂肪酸的分解氧化，释放能量供机体利用。HepG2细胞株 虽属于癌细胞，但其保留了正常肝细胞的糖脂代谢等绝大多数生理功能，是国际公认的可用于 降脂功效研究的细胞。

三、动物实验

1、实验动物：选用SPF级5周龄Wistar雄性大鼠，42只，体重250±20g(购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，质量合格证编号：430727201101514646)。动物饲养于海南医学 院动物实验中心，所有程序和动物实验均经海南医学院伦理委员会批准。动物在20-25℃和50 ±5％的湿度下饲养，可随意获取食物和水。本次实验共分为7组：分组方法参照“二、体外 细胞实验”中的“3、含药血清制作”部分，增加空白组与实验对照组，每组6只大鼠。

2、主要试剂及仪器

总胆固醇((TC)试剂盒、甘油三}(TG)试剂盒、高密度脂蛋白(HDL-C)试剂盒、低密度脂蛋 白((LDL-C)试剂盒、天门冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒、丙氨酸转氨酶(ALT)试剂盒:宁波美康生 物科技有限公司；瘦素((LEP)酶联免疫试剂盒、肝脂酶(HL)酶联免疫试剂盒、胰脂酶(PL)酶联免 疫试剂盒、肝脏脂肪酸合成酶(FAS)酶联免疫试剂盒、同型半脱氨酸(Hcy)酶联免疫试剂盒:上海 信帆生物科技有限公司。

ACCUTE TBA-40FR全自动生化分析仪：东芝三厂医疗株式会社；Powerwave340酶标仪： 美国Bio-tek公司；FASCO-3010D全自动血流变仪、EHK血沉压积仪：重庆维多科皮有限公 司；DDL-5低速冷冻多管离心机：上海安亭科学仪器厂。

3、造模

所有大鼠均处于SPF级屏障系统饲养，除空白组大鼠给予正常饮食外，其余各组大鼠均 给予高脂饮食6周，各组随机抽取一只大鼠检测体重，并股动脉取血检测血液指标，与空白组 对比，其余组大鼠体重均见增高，TC、TG、LDL-C、HDL-C均显著增高(P＜0.05)，提示造 模成功。

4、刺激方法

空白组继续给予正常饮食，实验对照组改用正常饮食，其余各组均采用正常饮食，并按照 对应药物刺激方法予以食后1h黎药颗粒药液灌胃刺激，1ml/50g/次，3次/d，连续7d。

5、检测方法

每日对实验大鼠称重。药物刺激7d后，最后一次黎药灌胃1h后，无菌操作下股动脉采血， 检测TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。结果见表3。

表3各组大鼠经黎药颗粒药液刺激后指标结果

本实验结果显示：实验对照组大鼠血脂异常水平最高，且与其余组差异明显(P＜0.05) 提示本实验造模成功，与原方组比，其余药物治疗组降血脂幅度皆小于原方组，差异明显(P ＜0.05)。本实验结果提示本发明与其他实验组比较本方案为最优方案，对高血脂大鼠降脂效 果明显。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上 描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本 发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在 本发明的范围内。

Claims (7)

1.一种用于高血脂症的黎药组合物，其特征在于，按照重量份数计，其组分包括：鹧鸪茶28-32份，鸡屎藤18-22份，绞股蓝18-22份，黑老虎果14-16份，鸡骨草14-16份，田基黄9-11份，海南灵芝9-11份，鲜余甘子48-52份。

2.根据权利要求1所述的黎药组合物，其特征在于，按照重量份数计，其组分包括：鹧鸪茶30份，鸡屎藤20份，绞股蓝20份，黑老虎果15份，鸡骨草15份，田基黄10份，海南灵芝10份，鲜余甘子50份。

3.根据权利要求1或2所述的黎药组合物，其特征在于，所述绞股蓝为茎叶同用，茎和叶的重量比为(3.5-4.5):(5.5-6.5)，优选为4:6。

4.根据权利要求1或2所述的黎药组合物，其特征在于，所述鸡骨草为根叶同用，根和叶的重量比为(2.5-3.5):(6.5-7.5)，优选为3:7。

5.一种用于高血脂症的黎药制剂，其特征在于，其由权利要求1-4中任意一项所述的黎药组合物制备而成。

6.一种如权利要求5所述的黎药制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取鹧鸪茶、鸡屎藤、绞股蓝、黑老虎果、鸡骨草、田基黄、海南灵芝采用水提法进行提取，得到中药水提物；

(2)步骤(1)的中药水提物经适当浓缩后，加入鲜余甘子，文火加热，搅拌，至余甘子果肉与果核完全分离成糊状，400-500目滤网进行过滤，得到糊液；

(3)糊液干燥、粉碎，既得。

7.如权利要求1-4中任意一项所述的黎药组合物、或者权利要求5所述的黎药制剂在制备用于高血脂症的药物中的应用。