CN115166091A - 一种超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中5种化学降血压药物的方法 - Google Patents

一种超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中5种化学降血压药物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种超高效液相色谱‑串联质谱法同时检测食品中5种化学降血压药物的方法，该方法通过液相色谱‑串联质谱方法对食品（保健食品）中托拉塞米、坎地沙坦酯、拉西地平、美托拉宗和阿齐沙坦这5种成分同时检测。方法适用于食品（保健食品），该方法以压片糖果、固体饮料、口服液和代用茶为基质研究制定而成。与药典方法互补，为食品、药品的有效监管提供依据，打击食品（保健食品）中非法添加药物成分的行为，保障人民的饮食用药安全。

Description

一种超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中5种化学降 血压药物的方法
技术领域
本发明涉及食品安全领域，进一步涉及一种超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中5种化学降血压药物的方法。
背景技术
高血压是常见的慢性疾病，也是心血管病最重要的危险因素，其导致的冠心病、脑卒中及慢性肾病等主要并发症给家庭和社会均造成沉重负担。降压类药物起效快，疗效明确，应用广泛，但具有依赖性、停药后反弹以及长期服用对肝肾的损害等不良反应，这使得辅助降血压类中成药和保健食品普遍受到高血压患者的青睐。受利益驱动，一些不法商家为了突显产品疗效，迎合患者急于见效这一需求，在产品中不加标注非法添加降压类化合物，并且添加的种类和剂量更是存在随意性和不确定性，患者在不知情的情况下长期服用此类产品会对自身健康带来严重危害。
近年来，辅助降血压类食品(保健食品)种类不断增加，添加降血压类化学药物现象屡禁不绝，其中以添加利尿剂、钙拮抗剂和血管紧张素受体拮抗剂最为常见。托拉塞米、坎地沙坦酯、拉西地平、美托拉宗和阿齐沙坦都是常用的化学降压药，且使用方便、价格低廉。我国已批准托拉塞米、坎地沙坦酯、拉西地平和阿齐沙坦作为药品管理，美托拉宗为利尿降压类药物，临床使用已达30年，一直被美国药典所收载，但是未在我国上市。现有标准对于不断涌现的新型降压类化合物，还缺乏可靠的方法检测及兜底条款，距离监管需求还有差距，难以追究违法行为。上述5种非法添加化学降血压药物的基本信息如下：
Figure BDA0003739020960000021
目前托拉塞米、坎地沙坦酯、拉西地平、美托拉宗和阿齐沙坦均只有药典方法，无适用于食品的检测标准方法。其中美托拉宗为美国药典方法，中国药典尚未收录。现有技术中，CN113514584A、“QuEChERS-液相色谱-串联质谱法快速测定保健食品中违禁添加药物托拉塞米和双醋酚丁含量”(王岩松，食品安全质量检测学报)仅涉及托拉塞米在食品非法添加中的检测，未涉及其它4种药物；“HPLC-MS联用测定辅助降血压保健食品中添加钙通道阻滞剂类药物”(赵勇，药物分析杂志)仅涉及拉西地平在食品非法添加中的检测，未涉及其它4种药物；“液质联用检查15种降压类药物及数据检索库的建立”(高青，中国药学杂志)仅涉及拉西地平和坎地沙坦酯在食品非法添加中的检测，未涉及其它3种药物。托拉塞米、坎地沙坦酯、拉西地平、美托拉宗和阿齐沙坦都是常用的化学降压药，在食品中非法添加降压类化合物，并且添加的种类和剂量更是存在随意性和不确定性，患者在不知情的情况下长期服用此类产品会对自身健康带来严重危害，必须引起高度重视。因此需要建立其食品补充检验方法，对食品(保健食品)安全进行有效监管。
现有的药典方法、论文、相关标准主要有化学鉴别、紫外分光光度法、高效液相色谱法。紫外分光光度法只适用于单一成分，5种成分不能同时检测，效率低、灵敏度不高；化学鉴别、液相色谱法检测专属性不高，常出现假阳(阴)性的情况；液相色谱串联质谱联用技术准确、高效和灵敏度高，专属性强，符合目前食品安全检测快速、高效、精准的要求。
该5种化合物为药品，均有药典方法。现实中受利益驱动，一些不法商家为了突显产品疗效，迎合患者急于见效这一需求，在食品(保健食品)中非法添加该5种降压类药物，药典方法不适用于食品(保健食品)的检测。其中美托拉宗为美国药典方法，国内食品、药品均不适用。且化学药品检测方法大多为单一成分检测，但在食品(保健食品)中的非法添加多为几种成分混合添加，需同时检测多种成分。所以目前还没有方法对食品(保健食品)中该5种降压类药物进行检测。
发明内容
为了克服现有技术中存在的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中5种化学降血压药物的方法。
所述5种化学降血压药物具体为托拉塞米、坎地沙坦酯、拉西地平、美托拉宗和阿齐沙坦。
所述食品(保健食品)包括压片糖果、固体饮料、口服液、代用茶等，其他类似基质可参照本方法检测。
本发明的方法具体包括如下步骤：
(1)试样经乙腈超声提取，得到供试品溶液；
(2)制备基质混合标准系列工作溶液；
(3)采用超高效液相色谱-串联质谱法对供试品溶液和基质混合标准系列工作溶液进行分析；
(4)定性，外标法定量。
步骤(1)中，供试品溶液的制备方法包括如下步骤：
对于固态、半固态试样，取适量混匀，研细，精密称取，采用乙腈超声提取，放冷至室温，用乙腈定容，转移至离心管中，离心，上清液经微孔滤膜过滤，取续滤液，根据实际浓度用乙腈水溶液(1+1)适当稀释至线性范围内，备用。
对于液态试样：取适量摇匀，精密称取，采用乙腈超声提取，放冷至室温，用乙腈定容，转移至离心管中，离心，上清液经微孔滤膜过滤，取续滤液，根据实际浓度用乙腈水溶液(1+1)适当稀释至线性范围内，备用。
进一步地，前处理步骤全程避光，样品经处理后在48h内尽快测定。
进一步地，超声处理时间为30min；离心速度为4000r/min；离心时间为5min。
具体的前处理过程如下：
(避光)取固态、半固态试样适量混匀，研细，精密称取1g(精确至0.001g)置于50mL棕色容量瓶中，加乙腈适量，超声提取30min，放冷至室温，用乙腈定容，转移至50mL离心管中，4000r/min离心5min，上清液经微孔滤膜(0.22μm有机系)过滤，取续滤液，根据实际浓度用乙腈水溶液(1+1，将乙腈与水等体积混合)适当稀释至线性范围内，备用，样品经处理后在48h内尽快测定。
(避光)取液态试样取适量摇匀，称取液体1g(精确至0.001g)于50mL棕色容量瓶中，加乙腈适量，超声提取30min，放冷至室温，用乙腈定容，经微孔滤膜(0.22μm有机系)过滤，取续滤液，根据实际浓度用乙腈水溶液(1+1，将乙腈与水等体积混合)适当稀释至线性范围内，备用。
步骤(2)中，包括如下步骤：精密称取阴性样品，加入混合标准溶液，按样品制备操作，作为基质混合标准系列工作溶液。所述混合标准溶液的配制过程如下：先制备500μg/mL的标准储备液，再稀释得到5μg/mL的标准中间液，再混合稀释得到混合标准溶液。
具体配制过程如下：
标准储备液(500μg/mL)：分别精密称取(避光)托拉塞米、坎地沙坦酯、拉西地平、美托拉宗和阿齐沙坦标准品10mg，用乙腈溶解并转移至20mL棕色容量瓶中，定容至刻度，制成浓度为500μg/mL的标准储备液。
标准中间液(5μg/mL)：分别准确吸取各标准储备液(500μg/mL)各0.1mL，用乙腈定容至10mL棕色容量瓶中，制成5μg/mL的标准中间溶液。临用新制。
混合标准溶液：分别准确吸取拉西地平、托拉塞米、阿齐沙坦标准中间工作溶液1.0mL，美托拉宗、坎地沙坦酯标准中间工作溶液0.5mL，于10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度。临用新制。
基质混合标准系列工作溶液：精密称取1.0g阴性样品，分别准确吸取混合标准中间液0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、1.0mL，按样品制备操作，作为基质混合标准系列工作溶液，拉西地平、托拉塞米、阿齐沙坦浓度均依次为1.0ng/mL、2.0ng/mL、3.0ng/mL、4.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL，美托拉宗、坎地沙坦酯浓度均依次为0.5ng/mL、1.0ng/mL、1.5ng/mL、2.0ng/mL、2.5ng/mL、5.0ng/mL。临用新制，或依仪器响应情况配制适当浓度的基质混合标准工作溶液。
步骤(3)中，色谱条件包括：C18柱；流动相：A为0.1％甲酸20mmol/L乙酸铵溶液(精密量取甲酸1mL，称取乙酸铵1.54g，用水溶解并定容至1000mL)，B为0.1％甲酸乙腈溶液(精密量取甲酸1mL，用乙腈稀释至1000mL)；梯度洗脱。
所述C18柱为ACQUITY UPLC CSH C18，规格为100*2.1mm,1.7μm。
梯度洗脱程序如下：
时间/min 流动相A％ 流动相B/％
0 90 10
16.5 5 95
19 5 95
19.5 90 10
22 90 10
流速为0.2mL/min。柱温为35℃。进样量为5μL。
步骤(3)中，质谱条件包括：
a)离子源：电喷雾离子源(ESI)；
b)检测方式：多反应监测(MRM)；
c)扫描方式：正离子模式；
d)毛细管电压：正离子模式：3.0KV；
e)离子源温度：160℃；
f)脱溶剂气温度：450℃；
g)脱溶剂气流量：550L/Hr；
h)尾吹气流量：30L/Hr。
进一步地，化合物定性、定量离子和质谱分析参数如下：
Figure BDA0003739020960000071
*为定量离子；方法提供的质谱条件、监测离子对等测定条件为推荐条件，各实验室可根据所配置仪器的具体情况作适当调整；在样品基质有测定干扰的情况下，可根据实际情况，选择响应信号强且无干扰的离子对进行检测；质谱参数亦可根据实际可达到最优灵敏度的条件进行设定。
步骤(4)中，定性方法包括如下步骤：
按照液相色谱-串联质谱条件测定试样和标准工作溶液，记录试样和基质标准溶液中各化合物的色谱保留时间，当试样中检出与某标准品质量色谱峰保留时间一致的色谱峰(变化范围在±2.5％之内)，并且试样色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过下表规定的范围，可以确定试样中检出相应化合物。
相对离子丰度(k) k>50％ 50％≥k>20％ 20％≥k>10％ k≤10％
允许的最大偏差 ±20％ ±25％ ±30％ ±50％
步骤(4)中，定量方法包括如下步骤：
将基质混合标准系列工作溶液进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积。以混合标准工作溶液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
将供试品溶液进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积。根据标准曲线得到供试品溶液中组分的浓度。平行测定不少于两次。
分析结果的表述
将液相色谱-串联质谱仪测得浓度代入下式计算含量：
Figure BDA0003739020960000081
式中：
X—试样中各待测物的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
c—从标准曲线中读出的供试品溶液中各待测物的浓度，单位为微克每升(μg/L)；
V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；
m—试样溶液所代表的质量，单位为克(g)；
f—稀释倍数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
进一步地，该方法还包括空白试验。不加试样按试样同法处理，制得空白溶液，备用。称取与试样等量的空白基质试样，按试样同法处理，制得空白基质试样溶液，备用。
本发明与现有技术相比具有以下优势或创新：
1、通过液相色谱-串联质谱建立的方法对食品(保健食品)中托拉塞米、坎地沙坦酯、拉西地平、美托拉宗和阿齐沙坦这5种成分同时检测，填补目前已有方法不能同时检测的空白。
2、与药典方法互补，为食品、药品的有效监管提供依据，打击食品(保健食品)中非法添加药物成分的行为，保障人民的饮食用药安全。方法适用于食品(保健食品)，该方法以压片糖果、固体饮料、口服液和代用茶为基质研究制定而成。
附图说明
图1为本发明的技术路线图。
图2为不同溶剂配制混标对比图。
图3为不同提取时间阿齐沙坦峰面积对比图。
图4为不同色谱柱混标对比图。
图5为不同色谱柱美托拉宗干扰对比图。
图6为不同流动相混标对比图。
图7为不同浓度乙酸铵流动相美托拉宗干扰对比图。
图8为阿齐沙坦二级质谱图。
图9为坎地沙坦酯二级质谱图。
图10为拉西地平二级质谱图。
图11为美托拉宗二级质谱图。
图12为托拉塞米二级质谱图。
图13为5种化合物MRM图。
图14为代用茶基质中阿齐沙坦浓度1.0ng/ml、0.5ng/ml MRM对比图。
图15为代用茶基质中坎地沙坦酯浓度0.5ng/ml、0.25ng/ml MRM对比图。
图16为代用茶基质中拉西地平浓度1.0ng/ml、0.5ng/ml MRM对比图。
图17为代用茶基质中美托拉宗浓度0.5ng/ml、0.25ng/ml MRM对比图。
图18为代用茶基质中托拉塞米浓度1.0ng/ml、0.5ng/ml MRM对比图。
图19为口服液、压片糖果、固体饮料、代用茶基质中五种化合物总离子流图。
图20为口服液、压片糖果、固体饮料、代用茶基质阿齐沙坦干扰MRM对比图。
图21为5种化学降血压药物标准物质多反应检测(MRM)色谱图。
图22为无基质标准曲线。
图23为口服液基质标准曲线。
图24为压片糖果基质标准曲线。
图25为固体饮料基质标准曲线。
图26为代用茶基质标准曲线。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步地说明。
基质选择
经市场调研目前市面上降压类食品(保健食品)不可枚举，究其主要类别有四种：口服液、压片糖果、固体饮料、代用茶。故选择该四种类别作为样品基质，建立检测方法。
实施例1
溶剂选择
分别选择甲醇、乙腈作为溶剂配制混标，如图2：5种化合物经甲醇或乙腈溶解，稀释，定容至同浓度后进样均有响应，b1-2(甲醇作溶剂)、b1-4(乙腈作溶剂)总离子流图，其中b1-4的响应强度明显高于b1-2，以托拉塞米349.16/264.17为例，MRM扫描图中，b1-4中托拉塞米349.16/264.17峰面积为43166，b1-2中托拉塞米349.16/264.17峰面积为12565，响应强度对比明显。故选择乙腈为溶剂，进一步试验发现乙腈:水(1:1)效果更优。
实施例2
提取时间选择
用乙腈：水(1:1)处理含阿齐沙坦的阳性样品，分别超声5min、10min、20min、30min,如图3：阿齐沙坦457.2/233.1峰面积分别为643、882、1045、1209，提取时间＞20min才能充分提取目标化合物，故提取时间定为30min。
实施例3
前处理步骤如下：
(避光)取固态、半固态试样适量混匀，研细，精密称取1g(精确至0.001g)置于50mL棕色容量瓶中，加乙腈适量，超声提取30min，放冷至室温，用乙腈定容，转移至50mL离心管中，4000r/min离心5min，上清液经微孔滤膜过滤，取续滤液，根据实际浓度用乙腈水溶液(1+1)适当稀释至线性范围内，备用，样品经处理后在48h内尽快测定。
(避光)取液态试样适量摇匀，称取液体1g(精确至0.001g)于50mL棕色容量瓶中，加乙腈适量，超声提取30min，放冷至室温，用乙腈定容，经微孔滤膜过滤，取续滤液，根据实际浓度用乙腈水溶液(1+1)适当稀释至线性范围内，备用。
实施例4
色谱柱选择
如图4：b-9-7、b-9-5、b-9-2分别为ACQUITY UPLC CSH C18(100mm*2.1mm,1.7μm)、CORTECS UPLC C18(100mm*2.1mm,1.6μm)、ACQUITY UPLC BEH C18(100mm*2.1mm,1.7μm)为5种化合物总离子流图，b-9-2明显除阿齐沙坦，其他四个组分响应强度低、且美托拉宗峰形差；同时由图5看出，使用CORTECS UPLC C18(100mm*2.1mm,1.6μm)色谱柱的0-9-5的溶剂空白中美托拉宗366.03/259.07的干扰峰面积明显高于使用ACQUITY UPLC CSH C18(100mm*2.1mm,1.7μm)色谱柱的0-9-7的溶剂空白中美托拉宗366.03/259.07的干扰，故选择ACQUITY UPLC CSH C18(100mm*2.1mm,1.7μm)色谱柱为效果最佳。
实施例5
流动相选择
如图6：比较b-5、b-6、b-7分别为乙腈-乙酸铵、甲醇-乙酸铵、乙腈-水(均含有0.1％甲酸)三个流动相系统中混标总离子流图，b-5响应强度、分离度、峰形、化合物时间均优于另外两个进样；如图7：0-9-4、0-9-8分别为乙腈-10mmol乙酸铵、乙腈-20mmol乙酸铵流动相系统中美托拉宗366.03/259.07干扰MRM扫描图，其中0-9-4中干扰明显。故选择乙腈-20mmol乙酸铵(均含有0.1％甲酸)为流动相。
实施例6
优化后的色谱条件：
ACQUITY UPLC CSH C18，规格为100*2.1mm,1.7μm；流动相：A为0.1％甲酸20mmol/L乙酸铵溶液，B为0.1％甲酸乙腈溶液；梯度洗脱。
梯度洗脱程序如下：
时间/min 流动相A％ 流动相B/％
0 90 10
16.5 5 95
19 5 95
19.5 90 10
22 90 10
流速为0.2mL/min；柱温35℃；进样量5μL。
实施例7
质谱条件优化
使用的仪器为Waters XEVO TQ-S超高效液色谱串联四级杆质谱仪。在正离子模式下，采用直接进样的方式，进行全扫，得到5种化合物的母离子，再通过对去簇电压和碰撞能量的摸索，确定最优条件，选择合适的定量离子与定性离子。5种化合物的质谱参数如表1所示，二级质谱图见图8-图12。图13为5种化合物MRM图。
表1 5种化合物质谱参数
Figure BDA0003739020960000141
注：*为定量离子。
具体的质谱条件还包括：
a)离子源：电喷雾离子源(ESI)；
b)检测方式：多反应监测(MRM)；
c)扫描方式：正离子模式；
d)毛细管电压：正离子模式：3.0KV；
e)离子源温度：160℃；
f)脱溶剂气温度：450℃；
g)脱溶剂气流量：550L/Hr；
h)尾吹气流量：30L/Hr。
实施例8
检出限、定量限
以代用茶基质为例，在空白基质中加标并不断对其稀释后进样，考虑所选离子均有响应、信噪比大于3，将此添加量定为最低检出限，信噪比大于10，将此添加量定为最低定量限，摸索发现当拉西地平、托拉塞米、阿齐沙坦稀释至0.5ng/ml、美托拉宗、坎地沙坦酯稀释至0.25ng/ml，进样量为5.0μl，为该五种化合物最低检出浓度。如进一步稀释，则拉西地平456.26/400.27、美托拉宗366.03/179.02、托拉塞米349.16/290.19、坎地沙坦酯611.28/349.47、阿齐沙坦457.17/207.2均无明显响应，其他三种基质情况相近。故拉西地平、托拉塞米、阿齐沙坦最低检出浓度为0.5ng/ml、美托拉宗、坎地沙坦酯最低检出浓度为0.25ng/ml；拉西地平、托拉塞米、阿齐沙坦定量浓度为1.0ng/ml、美托拉宗、坎地沙坦酯定量浓度为0.5ng/ml。表2给出5种化学降血压药物在4种基质中的检出限及定量限。
表2 5种化学降血压药物在4种基质中的检出限及定量限
Figure BDA0003739020960000151
Figure BDA0003739020960000161
实施例9
基质效应
比较5种化合物在基质中与溶剂中标准曲线的斜率来评价化合物的基质效应。基质斜率/溶剂斜率＜1，表明基质对其有电离抑制作用；基质斜率/溶剂斜率＞1，表明基质对其有电离增强作用。由表3可以看出托拉塞米在各基质中为电离增强作用，其他化合物在基质中均为电离抑制作用。因此需要采用空白基质加标来弥补处理过程中基质效应对定量检测的影响，提高方法的准确度。
表3 5种化合物的基质效应
化合物基质 口服液 压片糖果 固体饮料 代用茶
拉西地平 0.88 0.78 0.75 0.80
美托拉宗 0.99 0.99 0.94 0.97
托拉塞米 1.03 1.09 1.13 1.11
坎地沙坦酯 0.89 0.81 0.86 0.88
阿齐沙坦 0.96 0.94 0.93 0.94
实施例10
标准曲线线性范围
(1)标准储备液配制
分别称取(避光)各标准品10mg于棕色容量瓶，用乙腈配成500μg/ml的标准储备液，在-20℃避光保存，有效期3个月。
(2)标准中间液配制
分别准确吸取各标准储备液(500μg/mL)各0.1mL，用乙腈定容至10ml棕色容量瓶中，摇匀，制成5μg/mL的标准工作溶液。临用新制。
(3)混合标准工作溶液
分别准确吸取拉西地平、托拉塞米、阿齐沙坦标准中间工作溶液1.0mL，美托拉宗、坎地沙坦酯标准中间工作溶液0.5mL，于10mL棕色容量瓶中，用乙腈：水(1:1)定容至刻度，摇匀。准确称取1.0g阴性样品(精确至0.01g)，分别加入上一步混标0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、1.0mL，按样品制备操作，作为基质混合标准系列工作溶液，拉西地平、托拉塞米、阿齐沙坦浓度均依次为1.0ng/mL、2.0ng/mL、3.0ng/mL、4.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL，美托拉宗、坎地沙坦酯浓度均依次为0.5ng/mL、1.0ng/mL、1.5ng/mL、2.0ng/mL、2.5ng/mL、5.0ng/mL。临用新制或依仪器响应情况配制基质混合标准工作溶液。不同基质中5种化合物的标准曲线线性范围见表4-8，图21-图25。
表4无基质标准曲线线性
化合物 线性方程 相关系数r 线性范围(ng/ml)
拉西地平 Y＝4247.1x-33.9263 0.9997 1.0-10
美托拉宗 Y＝3337.95x+74.1397 0.9992 0.5-5
托拉塞米 Y＝3111.49x-18.3912 0.9998 1.0-10
坎地沙坦酯 Y＝11194.3x+167.198 0.9998 0.5-5
阿齐沙坦 Y＝1444.59x+272.071 0.9997 1.0-10
表5口服液基质标准曲线线性
化合物 线性方程 相关系数r 线性范围(ng/ml)
拉西地平 Y＝3717.59x+67.2144 0.9997 1.0-10
美托拉宗 Y＝3305.66x-52.3239 0.9997 0.5-5
托拉塞米 Y＝3196.47x-327.77 0.9989 1.0-10
坎地沙坦酯 Y＝10009.7x+65.9623 0.9997 0.5-5
阿齐沙坦 Y＝1385.54x+133.691 0.9992 1.0-10
表6压片糖果基质标准曲线线性
化合物 线性方程 相关系数r 线性范围(ng/ml)
拉西地平 Y＝3302.28x+603.243 0.9956 1.0-10
美托拉宗 Y＝3299.71x-20.2486 0.9998 0.5-5
托拉塞米 Y＝3403.23x-329.643 0.9984 1.0-10
坎地沙坦酯 Y＝9116.16x+519.848 0.9985 0.5-5
阿齐沙坦 Y＝1350.98x+272.397 0.9990 1.0-10
表7固体饮料基质标准曲线线性
化合物 线性方程 相关系数r 线性范围(ng/ml)
拉西地平 Y＝3175.69x+833.258 0.9974 1.0-10
美托拉宗 Y＝3152.24x-56.5538 0.9991 0.5-5
托拉塞米 Y＝3506.47x-412.663 0.9973 1.0-10
坎地沙坦酯 Y＝9636.52x+197.493 0.9990 0.5-5
阿齐沙坦 Y＝1339.59x+303.607 0.9984 1.0-10
表8代用茶基质标准曲线线性
化合物 线性方程 相关系数r 线性范围(ng/ml)
拉西地平 Y＝3382.08x+335.907 0.9984 1.0-10
美托拉宗 Y＝3223.63x-28.7346 0.9988 0.5-5
托拉塞米 Y＝3449.68x-528.976 0.9960 1.0-10
坎地沙坦酯 Y＝9864.49x+127.637 0.9989 0.5-5
阿齐沙坦 Y＝1356.38x+216.673 0.9995 1.0-10
实施例11
精密度
日内精密度
用阴性基质提取液稀释标准储备液，配制拉西地平、托拉塞米、阿齐沙坦、美托拉宗、坎地沙坦酯1倍定量限、2倍定量限、10倍定量限的混合标准溶液。在同一日内重复进样6次，结果见表9-11，满足方法要求。
表9 5种化合物1倍定量限日内精密度
Figure BDA0003739020960000191
表10 5种化合物2倍定量限日内精密度
Figure BDA0003739020960000192
表11 5种化合物10倍定量限日内精密度
Figure BDA0003739020960000193
日间精密度
将日内精密度中2倍定量限混合标准溶液于2-8℃避光存放，在不同日内进行测定，由表12看出美托拉宗3天内基本稳定；拉西地平、托拉塞米、坎地沙坦酯、阿齐沙坦在2天内稳定，之后峰面积明显降低，其他三个基质情况相近，因此其在48h后日间稳定性不高，日间精密度RSD较大，建议样品经处理后在48h内尽快测定。
表12口服液基质5种化合物2倍定量限日间精密度
Figure BDA0003739020960000201
实施例12
准确度(回收率)
在各基质中加标，按样品处理后测定回收率并计算RSD，每个添加水平共测定6组。拉西地平、托拉塞米、阿齐沙坦的添加水平为50μg、100μg、500μg；美托拉宗、坎地沙坦酯的添加水平为25μg、50μg、250μg，结果见表13-16。
表13 5种化合物口服液基质回收率
Figure BDA0003739020960000202
Figure BDA0003739020960000211
Figure BDA0003739020960000212
Figure BDA0003739020960000221
表14 5种化合物压片糖果基质回收率
Figure BDA0003739020960000222
Figure BDA0003739020960000231
Figure BDA0003739020960000241
表15 5种化合物固体饮料基质回收率
Figure BDA0003739020960000242
Figure BDA0003739020960000251
Figure BDA0003739020960000252
Figure BDA0003739020960000261
表16 5种化合物代用茶基质回收率
Figure BDA0003739020960000262
Figure BDA0003739020960000271
Figure BDA0003739020960000281
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中5种化学降血压药物的方法，其特征在于，上述方法包括如下步骤：
（1）试样经乙腈超声提取，得到供试品溶液；
（2）制备基质混合标准系列工作溶液；
（3）采用超高效液相色谱-串联质谱法对供试品溶液和基质混合标准系列工作溶液进行分析；
（4）定性，外标法定量；
色谱条件包括：C18柱；流动相：A为甲酸乙酸铵溶液，B为甲酸乙腈溶液；梯度洗脱；
梯度洗脱程序如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
所述5种化学降血压药物为托拉塞米、坎地沙坦酯、拉西地平、美托拉宗和阿齐沙坦。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，供试品溶液的制备方法包括如下步骤：
对于固态、半固态试样，适量混匀，研细，精密称取，采用乙腈超声提取，放冷至室温，用乙腈定容，转移至离心管中，离心，上清液经微孔滤膜过滤，取续滤液，根据实际浓度用乙腈水溶液（1+1）适当稀释至线性范围内，备用；
对于液态试样：取适量摇匀，精密称取，采用乙腈超声提取，放冷至室温，用乙腈定容，转移至离心管中，离心，上清液经微孔滤膜过滤，取续滤液，根据实际浓度用乙腈水溶液（1+1）适当稀释至线性范围内，备用。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，超声处理时间为30 min；离心速度为4000r/min；离心时间为5 min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，包括如下步骤：精密称取阴性样品，加入混合标准溶液，按样品制备操作，作为基质混合标准系列工作溶液。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述C18柱为ACQUITY UPLC CSH C18，规格为100 *2.1 mm, 1.7 μm。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相中，A为0.1%甲酸 20 mmol/L乙酸铵溶液（精密量取甲酸1 mL，称取乙酸铵1.54 g，用水溶解并定容至 1000 mL），B为0.1%甲酸乙腈溶液（精密量取甲酸1 mL，用乙腈稀释至1000 mL）。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流速为0.2 mL/min；柱温为35℃；进样量为5μL。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，质谱条件包括：
a）离子源：电喷雾离子源(ESI)；
b）检测方式：多反应监测 (MRM)；
c）扫描方式：正离子模式；
d）毛细管电压：正离子模式： 3.0 KV；
e）离子源温度：160 ℃；
f）脱溶剂气温度：450 ℃；
g）脱溶剂气流量： 550 L/Hr；
h）尾吹气流量：30 L/Hr。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，化合物定性、定量离子和质谱分析参数如下：
Figure 856106DEST_PATH_IMAGE002
* 为定量离子。
10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，所述食品包括压片糖果、固体饮料、口服液或代用茶。
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