CN115160409A - 一种达巴万星中间体a40926及其分离纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抗生素生产技术领域，特别涉及一种达巴万星中间体A40926及其分离纯化方法，包括如下步骤：S1、将含有达巴万星中间体A40926的发酵液过滤，获得收集液；S2、将收集液经大孔吸附树脂吸附，用乙醇洗脱并收集A40926单位大于100mg/L的洗脱液a；S3、将洗脱液a超滤浓缩至A40926单位为15000～16000mg/L的浓缩液；S4、将浓缩液上层析交换树脂，纯水顶洗后以乙酸铵‑乙醇溶液进行梯度洗脱，收集A40926纯度大于95％的洗脱液b；S5、将洗脱液b调节pH至8.0±0.2，加入丙酮后调节料液温度为2～8℃，搅拌6～7h后进行析晶，抽滤烘干后获得达巴万星中间体A40926。
Description
技术领域
本发明涉及抗生素生产技术领域，特别涉及一种达巴万星中间体A40926及其分离纯化方法。
背景技术
现有的达巴万星中间体A40926的分离纯化方法，如专利CN112480214A所公开的一种达巴万星关键中间体A40926的制备方法，其公开了通过依次对达巴万星中间体A40926发酵液进行脱酰化、板框过滤、大孔树脂碱性吸附上样、酸性洗涤、聚合物微球填料吸附、浓缩、沉淀、干燥后获得达巴万星中间体A40926。该制备方法分离纯化过程复杂，在分离纯化过程中反复使用碱性溶液、酸性溶液，且洗脱液中含有大量的盐，对设备腐蚀大。并且由于达巴万星对氯化钠敏感，因此在使用低浓度氯化钠洗脱体系中易导致洗脱液浑浊。
发明内容
为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种达巴万星中间体A40926纯度可达97.45％以上的分离纯化方法，以及由该分离纯化方法所分离纯化得到的达巴万星中间体A40926。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：达巴万星中间体A40926的分离纯化方法，包括如下步骤：
S1、将含有达巴万星中间体A40926的发酵液过滤，获得收集液；
S2、将所述收集液经大孔吸附树脂吸附，水洗至漏出液接近无色后，用乙醇洗脱并收集达巴万星中间体A40926单位大于100mg/L的洗脱液a；
S3、将所述洗脱液a超滤浓缩至达巴万星中间体A40926单位为15000～16000mg/L的浓缩液；
S4、将所述浓缩液上层析交换树脂，纯水顶洗后以乙酸铵-乙醇溶液进行梯度洗脱，收集达巴万星中间体A40926纯度大于95％的洗脱液b；
S5、将所述洗脱液b调节pH至8.0±0.2，加入丙酮后调节料液温度为2～8℃，搅拌6～7h后进行析晶，抽滤烘干后获得达巴万星中间体A40926。
进一步提供达巴万星中间体A40926，由前述分离纯化方法分离纯化得到。
本发明的有益效果在于：本发明通过在分离纯化过程中使用乙酸铵-乙醇洗脱体系替换传统的氯化钠洗脱液体系，可有效避免洗脱液对设备腐蚀的同时，有效提高达巴万星中间体A40926的纯度，经检测，由本发明所提供的分离纯化方法所分离纯化的达巴万星中间体A40926纯度大于97.45％。
附图说明
图1所示为本发明为实施例1所分离纯化后达巴万星中间体A40926的图谱。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
达巴万星中间体A40926的分离纯化方法，包括如下步骤：
S1、将含有达巴万星中间体A40926的发酵液过滤，获得收集液；
S2、将所述收集液经大孔吸附树脂吸附，水洗至漏出液接近无色后，用乙醇洗脱并收集达巴万星中间体A40926单位大于100mg/L的洗脱液a；
S3、将所述洗脱液a超滤浓缩至达巴万星中间体A40926单位为15000～16000mg/L的浓缩液；
S4、将所述浓缩液上层析交换树脂，纯水顶洗后以乙酸铵-乙醇溶液进行梯度洗脱，收集达巴万星中间体A40926纯度大于95％的洗脱液b；
S5、将所述洗脱液b调节pH至8.0±0.2，加入丙酮后调节料液温度为2～8℃，搅拌6～7h后进行析晶，抽滤烘干后获得达巴万星中间体A40926。
其中，在S1中所述过滤采用陶瓷膜过滤。优选地，所述陶瓷膜的孔径为0.01μm。通过采用孔径0.01μm的陶瓷膜对发酵液进行过滤以去除发酵液中的水溶性蛋白、色素等大分子物质。
优选地，所述S1为：将含有达巴万星中间体A40926的发酵液进行陶瓷膜过滤，浓缩至其发酵液体积一半后，边加水顶洗边过滤，至滤液总体积为发酵液体积的2～5倍后，收集收集液。其中，所述边加水顶洗边过滤应保持加水量和过滤流量一致。在一种实施方式中，所述加水量为5～10L/h。
在一种实施方式中，所述S2为：将所述收集液以流速为0.8BV/h过大孔吸附树脂吸附，吸附后以纯化水顶洗至漏出液接近无色后，以20％(v/v)的乙醇顶洗，再用60％(v/v)的乙醇洗脱并收集达巴万星中间体A40926浓度大于100mg/L的洗脱液a。
在一种实施方式中，所述S3为：将所述洗脱液a用截留分子量为20000D的超滤膜进行超滤后进行纳滤浓缩，所述超滤和纳滤时液温为15～20℃，浓缩至达巴万星中间体A40926单位为15000～16000mg/L的浓缩液。所述纳滤所使用的纳滤膜为NF-4040。
在一种实施方式中，在S4中，所述梯度洗脱为：依次用100mmol/L乙酸铵-20％乙醇溶液，200mmol/L乙酸铵-50％乙醇溶液进行梯度洗脱。
优选地，所述梯度洗脱为：以10BV/h的流速先用100mmol/L乙酸铵-20％乙醇溶液冲洗10BV后，用200mmol/L乙酸铵-50％乙醇溶液以10BV/h的流速冲洗10BV。
在一种实施方式中，所述S5为：将所述洗脱液b浓缩至达巴万星中间体A40926单位为20000～80000mg/L后调节pH至8.0±0.2，加入丙酮并调节料液温度为2～8℃，搅拌6～7h后进行析晶，抽滤烘干后获得达巴万星中间体A40926。
优选地，所述大孔吸附树脂为HZ806，所述层析交换树脂为Unips40-500，购于纳微科技。
达巴万星中间体A40926，由前述分离纯化方法分离纯化得到。
需要说明的是，在本文中所述单位为浓度。
实施例1
达巴万星中间体A40926的分离纯化分发，包括如下步骤：
S1、将1L含有达巴万星中间体A40926的发酵液用孔径为0.01μm的陶瓷膜过滤，浓缩至其发酵液体积一半后，边加水(纯化水)顶洗边过滤，其中加水量和过滤流量均为5L/h，至滤液总体积为发酵液体积的3倍后，收集澄清透明的收集液；
S2、将所述收集液用盐酸调节pH至8.0后，以流速0.8BV/h过HZ806柱，用纯化水顶洗柱子至漏出液接近无色后，用pH为6.5的20％(v/v)的乙醇以5BV/h的流速预洗6BV，再用2BV 60％(v/v)乙醇以5BV/h的流速进行洗脱，收集达巴万星中间体A40926单位大于100mg/L的洗脱液a；
S3、取500mL所述洗脱液a用截留分子量为20000D的超滤膜进行超滤后再进行纳滤浓缩，在超滤和纳滤过程中控制液温在20℃，浓缩至达巴万星中间体A40926单位为15000mg/L，调节浓缩液pH为8并以5BV/h的流速上ps40-500柱，以纯化水顶洗1BV后，以10BV/h的流速先用100mmol/L乙酸铵-20％乙醇溶液冲洗10BV后，用200mmol/L乙酸铵-50％乙醇溶液以10BV/h的流速冲洗10BV，收集达巴万星中间体A40926纯度大于95％的洗脱液b；
S4、将所述洗脱液b浓缩至达巴万星中间体A40926单位为60000mg/L，用1mol/L氢氧化钠调节pH为8.0±0.2，加入2.0L丙酮，控制料液温度为6℃，搅拌6h至不再有晶体析出后，抽滤并烘干，获得达巴万星中间体A40926。
实施例2
达巴万星中间体A40926的分离纯化分发，包括如下步骤：
S1、将1L含有达巴万星中间体A40926的发酵液用孔径为0.01μm的陶瓷膜过滤，浓缩至其发酵液体积一半后，边加水(纯化水)顶洗边过滤，其中加水量和过滤流量均为5L/h，至滤液总体积为发酵液体积的3倍后，收集澄清透明的收集液；
S2、将所述收集液用盐酸调节pH至8.0后，以流速0.8BV/h过HZ806柱，用纯化水顶洗柱子至漏出液接近无色后，用pH为6.5的20％(v/v)的乙醇以5BV/h的流速预洗6BV，再用2BV 60％(v/v)乙醇以5BV/h的流速进行洗脱，收集达巴万星中间体A40926单位大于100mg/L的洗脱液a；
S3、取500mL所述洗脱液a用截留分子量为20000D的超滤膜进行超滤后再进行纳滤浓缩，在超滤和纳滤过程中控制液温在15℃，浓缩至达巴万星中间体A40926单位为15000mg/L，调节浓缩液pH为9并以5BV/h的流速上ps40-500柱，以纯化水顶洗1BV后，以10BV/h的流速先用100mmol/L乙酸铵-20％乙醇溶液冲洗10BV后，用200mmol/L乙酸铵-50％乙醇溶液以10BV/h的流速冲洗10BV，收集达巴万星中间体A40926纯度大于95％的洗脱液b；
S4、将所述洗脱液b浓缩至达巴万星中间体A40926单位为60000mg/L，用1mol/L调节pH为8.0±0.2，加入2.0L丙酮，控制料液温度为8℃，搅拌7h至不再有晶体析出后，抽滤并烘干，获得达巴万星中间体A40926。
检测例
将实施例1所分离纯化得到的达巴万星中间体A40926进行纯度检测。参见图1所示。其中，图1上方图表为达巴万星中间体A40926的色谱图，下方图表为色谱图所对应的图表。从图1中可以看出，实施例1所分离纯化得到的达巴万星中间体A40926纯度(A0+A1+B0+B1+B2)为97.45％。
综上所述，本发明通过在分离纯化过程中使用乙酸铵-乙醇洗脱体系替换传统的氯化钠洗脱液体系，可有效避免洗脱液对设备腐蚀的同时，有效提高达巴万星中间体A40926的纯度，经检测，由本发明所提供的分离纯化方法所分离纯化的达巴万星中间体A40926纯度大于97.45％。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (10)
1.达巴万星中间体A40926的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将含有达巴万星中间体A40926的发酵液过滤，获得收集液；
S2、将所述收集液经大孔吸附树脂吸附，水洗至漏出液接近无色后，用乙醇洗脱并收集达巴万星中间体A40926单位大于100mg/L的洗脱液a；
S3、将所述洗脱液a超滤浓缩至达巴万星中间体A40926单位为15000～16000mg/L的浓缩液；
S4、将所述浓缩液上层析交换树脂，纯水顶洗后以乙酸铵-乙醇溶液进行梯度洗脱，收集达巴万星中间体A40926纯度大于95％的洗脱液b；
S5、将所述洗脱液b调节pH至8.0±0.2，加入丙酮后调节料液温度为2～8℃，搅拌6～7h后进行析晶，抽滤烘干后获得达巴万星中间体A40926。
2.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，在S1中所述过滤采用陶瓷膜过滤。
3.根据权利要求2所述分离纯化方法，其特征在于，所述S1为：将含有达巴万星中间体A40926的发酵液进行陶瓷膜过滤，浓缩至其发酵液体积一半后，边加水顶洗边过滤，至滤液总体积为发酵液体积的2～5倍后，收集收集液。
4.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，所述S2为：将所述收集液以流速为0.8BV/h过大孔吸附树脂吸附，吸附后以纯化水顶洗至漏出液接近无色后，以20％(v/v)的乙醇顶洗，再用60％(v/v)的乙醇洗脱并收集达巴万星中间体A40926浓度大于100mg/L的洗脱液a。
5.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，所述S3为：将所述洗脱液a用截留分子量为20000D的超滤膜进行超滤后进行纳滤浓缩，所述超滤和纳滤时液温为15～20℃，浓缩至达巴万星中间体A40926单位为15000～16000mg/L的浓缩液。
6.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，在S4中，所述梯度洗脱为：依次用100mmol/L乙酸铵-20％乙醇溶液，200mmol/L乙酸铵-50％乙醇溶液进行梯度洗脱。
7.根据权利要求6所述分离纯化方法，其特征在于，所述梯度洗脱为：以10BV/h的流速先用100mmol/L乙酸铵-20％乙醇溶液冲洗10BV后，用200mmol/L乙酸铵-50％乙醇溶液以10BV/h的流速冲洗10BV。
8.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，所述S5为：将所述洗脱液b浓缩至达巴万星中间体A40926单位为20000～80000mg/L后调节pH至8.0±0.2，加入丙酮并调节料液温度为2～8℃，搅拌6～7h后进行析晶，抽滤烘干后获得达巴万星中间体A40926。
9.根据权利要求1所述分离纯化方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂为HZ806，所述层析交换树脂为ps40-500。
10.达巴万星中间体A40926，其特征在于，由权利要求1至9任一项所述分离纯化方法分离纯化得到。
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