CN103936846A - 一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法 - Google Patents
一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法。该纯化方法包括下述步骤:(1)将硫酸鱼精蛋白粗提物溶解于水中得溶液,加入酸,调节溶液pH值为1~2;(2)加入吸附剂,搅拌,过滤,得到滤液;(3)加入碱,调节滤液pH值为10~12,再加入吸附剂,搅拌,过滤;(4)加入有机溶剂,离心除去上清液,将沉淀物真空干燥,即得;其中,步骤(2)与步骤(3)中所述的吸附剂为硅藻土、活性矾土、皂土、骨炭、活性炭和硅胶中的一种或多种。本发明采用吸附剂直接吸附纯化硫酸鱼精蛋白的精制方法,不仅操作简单,而且成本远低于色谱法,生产规模也远高于色谱法,产品纯度与色谱法得到的产品纯度相当,很适合进行工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及蛋白质精制技术领域,具体涉及一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法。
背景技术
鱼精蛋白是从鱼类精子细胞中提取的一种多聚阳离子肽的硫酸盐,在临床上,是唯一可以用来拮抗心脏手术中肝素过量的药物,同时硫酸鱼精蛋白还可以用于配制长效胰岛素和长效促皮质素。因为硫酸鱼精蛋白具有抗菌作用,在食品行业,硫酸鱼精蛋白也可用于制作食品防腐剂。
生产硫酸鱼精蛋白主要采用提取、分离及精制三个步骤。通常,经过提取和分离,能从鱼白中得到鱼精蛋白粗提物。但是不论采取何种提取方法,最后得到的鱼精蛋白粗提物都需要经过最后的精制步骤。
鱼精蛋白的提取一般是将成熟鱼类的鱼白绞碎,加入稀醋酸溶液,分离出凝聚的精子核,然后采用有机溶剂沉淀,之后加入无机酸搅拌一定时间,弃去废渣,提取液采用有机溶剂沉淀,得到鱼精蛋白无机酸盐粗品。在分离步骤,最常用的方法就是有机溶剂和硫酸反复沉淀溶解,逐步去除不同的杂质。也有采用蛋白沉淀剂如钨酸,偏磷酸,磺基水杨酸等进行沉淀分离的。
现有技术最常用的蛋白质精制方法是采用色谱柱进行纯化,结合鱼精蛋白本身的特性,纯化鱼精蛋白,主要是采用离子交换层析和肝素亲和层析。但是,不管是离子交换层析还是肝素亲和层析,需要投入的成本都很大,且单次纯化量有限,操作要求高,不适合大规模生产。
发明内容
本发明所解决的技术问题在于为了克服现有技术中采用离子交换层析法、或肝素亲和层析法纯化硫酸鱼精蛋白所存在的成本高、单次纯化量有限、操作要求高、不适合工业化生产的缺陷,提供一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法。本发明采用吸附剂直接吸附纯化硫酸鱼精蛋白的精制方法,不仅操作简单,而且成本远低于色谱法,生产规模也远高于色谱法,产品纯度与色谱法得到的产品纯度相当,很适合进行工业化生产。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的:
本发明提供了一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法,其包括下述步骤:
(1)将硫酸鱼精蛋白粗提物溶解于水中得溶液,加入酸,调节溶液pH值为1~2;
(2)加入吸附剂,搅拌,过滤,得到滤液;
(3)加入碱,调节滤液pH值为10~12,再加入吸附剂,搅拌,过滤;
(4)加入有机溶剂,离心除去上清液,将沉淀物真空干燥,即得;
其中,步骤(2)与步骤(3)中所述的吸附剂为硅藻土、活性矾土、皂土、骨炭、活性炭和硅胶中的一种或多种。
其中,所述的硫酸鱼精蛋白粗提物可为本领域的常规硫酸鱼精蛋白粗提物,本发明优选购于上海第一生化药业有限公司的硫酸鱼精蛋白粗提物。优选所述的硫酸鱼精蛋白粗提物通过下述方法制得:将鱼白与纯化水的混合物匀浆后,加入醋酸调节pH为3.5~4.5,沉淀物用硫酸溶解,离心后上清液用无水乙醇沉淀,沉淀物溶于纯化水,0~4℃静置,下层油状物溶于纯化水中,硫酸调节pH为1.5~2.5,加入无水乙醇沉淀,沉淀物干燥,即得硫酸鱼精蛋白粗提物。
步骤(1)中,所述的水较佳地为纯化水;所述的硫酸鱼精蛋白粗提物与所述的水的质量比较佳地为1:(10~30)。
步骤(1)中,所述的酸较佳地为硫酸。
步骤(2)中,所述的吸附剂与所述的溶液的质量比较佳地为5:(1000~100)。
步骤(2)中,所述的搅拌较佳地为在水浴条件下搅拌,所述的水浴的温度较佳地为30~50℃。所述的搅拌的时间较佳地为1~3小时。
步骤(3)中,所述的碱较佳地为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
步骤(3)中,所述的吸附剂与所述的溶液的质量比较佳地为5:(1000~100)。
步骤(3)中,所述的搅拌较佳地为在水浴条件下搅拌,所述的水浴的温度较佳地为60~85℃。所述的搅拌的时间较佳地为1~3小时。
其中,所述的有机溶剂可为本领域常规使用的各种有机溶剂,更佳地为乙醇、乙醚、丙酮和甲醇中的一种或多种,最佳地为0~4℃放置过夜的无水乙醇。所述的有机溶剂与所述的溶液的质量比较佳地为(1.0~3.5):1。
其中,所述的离心的转速较佳地为3000~5000rpm,所述的离心的时间较佳地为10~20min。
其中,所述的真空干燥的真空度较佳地为0.08~0.1MPa,所述的真空干燥的时间较佳地为24~30小时。
其中,所述的真空干燥较佳地在放入五氧化二磷的真空干燥箱中进行。
在符合本领域常识的基础上,上述各优选条件,可任意组合,即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于:本发明采用吸附剂结合特定的pH值来直接吸附纯化硫酸鱼精蛋白的精制方法,不仅操作简单,而且成本远低于色谱法,生产规模也远高于色谱法,产品纯度与色谱法得到的产品纯度相当,很适合进行工业化生产。
附图说明
图1为精制纯化前,硫酸鱼精蛋白粗提物的阳离子交换层析图谱图,其中,左侧纵坐标为220nm刻度,右侧纵坐标为260nm刻度,线条1为220nm检测线(代表多肽)。
图2为实施例1精制纯化后,硫酸鱼精蛋白精制品的阳离子交换层析图谱图,其中,左侧纵坐标为220nm刻度,右侧纵坐标为260nm刻度,线条1为220nm检测线(代表多肽)。
图3为硫酸鱼精蛋白进口原料药的阳离子交换层析图谱图,其中,左侧纵坐标为220nm刻度,右侧纵坐标为260nm刻度,线条1为220nm检测线(代表多肽)。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,按照常规方法和条件,或按照商品说明书选择。
下述实施例中采用的硫酸鱼精蛋白粗提物均由上海第一生化药业有限公司提供,其制备方法为:取冰冻的鱼白10kg,加40kg纯化水匀浆后,采用弱酸(醋酸)调节pH至4.0,静置5h,弃去上清液,沉淀用质量分数为5%的硫酸10L搅拌溶解,离心后上清液加入30kg无水乙醇沉淀蛋白,离心后,沉淀复溶于10L纯化水,0-4℃静置24h,下层油状物复溶于10L纯化水,用硫酸调节pH至2.0,加入30kg无水乙醇,沉淀在真空干燥箱,置入五氧化二磷,保真空状态48h,即可制得硫酸鱼精蛋白粗提物。
对照品(硫酸鱼精蛋白进口原料药)由日本Yuki Gosei Kogyo Co Ltd提供。
实施例1
硫酸鱼精蛋白粗提物精制
(1)硫酸鱼精蛋白粗提物溶解
准确称取硫酸鱼精蛋白粗提物(由上海第一生化药业有限公司提供)500g,加入到5L纯化水中,35℃水浴30min,待完全溶解后,用硫酸调节pH至1.8;
(2)第一次吸附
称取硅藻土150g,加入到上述硫酸鱼精蛋白溶液中,30℃水浴搅拌约2h,滤纸过滤,除去硅藻土,滤液用氢氧化钠调节pH至10.0;
(3)第二次吸附
称取硅藻土100g,加入到已经调节好pH的硫酸鱼精蛋白溶液中,80℃水浴,搅拌吸附3h,过滤除去硅藻土;
(4)有机溶剂沉淀
取滤液,加入6.0kg0-4℃放置过夜的无水乙醇,4000rpm离心10min,弃去上清液;
(5)干燥
取下层沉淀物,放入真空干燥箱,放入500g五氧化二磷,真空度保持0.08~0.1MPa,干燥24h。
(6)收率
将干燥后的硫酸鱼精蛋白精品称重,得到硫酸鱼精蛋白精制品256g,收率51.2%。
(7)质量控制
取精制后的硫酸鱼精蛋白通过阳离子交换色谱鉴定其纯度(方法见效果实施)。
对比实施例1
硫酸鱼精蛋白粗提物精制
(1)硫酸鱼精蛋白粗提物溶解
准确称取硫酸鱼精蛋白粗提物(由上海第一生化药业有限公司提供)500g,加入到5L纯化水中,35℃水浴30min,待完全溶解后,用硫酸调节pH至4.0;
(2)第一次吸附
称取硅藻土150g,加入到硫酸鱼精蛋白溶液中,30℃水浴搅拌约2h,滤纸过滤,除去硅藻土,滤液用氢氧化钠调节pH至10.0;
(3)第二次吸附
称取硅藻土100g,加入到已经调节好pH的硫酸鱼精蛋白溶液中,80℃水浴,搅拌吸附3h,过滤除去硅藻土;
(4)有机溶剂沉淀
取滤液,加入等量0-4℃放置过夜的无水乙醇,4000rpm,离心10min,弃去上清液;
(5)干燥
取下层沉淀物,放入真空干燥箱,放入500g五氧化二磷,真空度保持0.08~0.1MPa,干燥24h。
(6)收率
将干燥后的硫酸鱼精蛋白精品称重,得到硫酸鱼精蛋白精制品178g,收率35.6%。
(7)质量控制
取精制后的硫酸鱼精蛋白通过阳离子交换色谱鉴定其纯度(方法如效果实施例)。
对比实施例2
硫酸鱼精蛋白粗提物精制
(1)硫酸鱼精蛋白粗提物溶解
准确称取硫酸鱼精蛋白粗提物(由上海第一生化药业有限公司提供)500g,加入到5L纯化水中,35℃水浴30min,待完全溶解后,用硫酸调节pH至1.8;
(2)第一次吸附
称取硅藻土150g,加入到硫酸鱼精蛋白溶液中,30℃水浴搅拌约2h,滤纸过滤,除去硅藻土,滤液用氢氧化钠调节pH至9.0;
(3)第二次吸附
称取硅藻土100g,加入到已经调节好pH的硫酸鱼精蛋白溶液中,80℃水浴,搅拌吸附3h,过滤除去硅藻土;
(4)有机溶剂沉淀
取滤液,加入等量0-4℃放置过夜的无水乙醇,4000rpm,离心10min,弃去上清液;
(5)干燥
取下层沉淀物,放入真空干燥箱,放入500g五氧化二磷,真空度保持0.08~0.1MPa,干燥24h。
(6)收率
将干燥后的硫酸鱼精蛋白精品称重,得到硫酸鱼精蛋白精制品134g,收率26.8%。
(7)质量控制
取精制后的硫酸鱼精蛋白通过阳离子交换色谱鉴定其纯度(方法如效果实施例)。
对比实施例3
硫酸鱼精蛋白粗提物精制
(1)硫酸鱼精蛋白粗提物溶解
准确称取硫酸鱼精蛋白粗提物(由上海第一生化药业有限公司提供)500g,加入到5L纯化水中,35℃水浴30min,待完全溶解后,用2.5mol/L的硫酸调节pH至5.0;
(2)第一次吸附
称取硅藻土150g,加入到上述硫酸鱼精蛋白溶液中,40℃水浴搅拌约2h,滤纸过滤,除去硅藻土,滤液用2.5mol/L的氢氧化钠调节pH至7.5;
(3)第二次吸附
称取硅藻土100g,加入到已经调节好pH的硫酸鱼精蛋白溶液中,70℃水浴,搅拌吸附3h,过滤除去硅藻土;
(4)有机溶剂沉淀
取滤液,加入6.0kg0-4℃放置过夜的无水乙醇,4000rpm离心10min,弃去上清液;
(5)干燥
取下层沉淀物,放入真空干燥箱,放入500g五氧化二磷,真空度保持0.08~0.1MPa,干燥24h。
(6)收率
将干燥后的硫酸鱼精蛋白精品称重,得到硫酸鱼精蛋白精制品123g,收率24.6%。
(7)质量控制
取精制后的硫酸鱼精蛋白通过阳离子交换色谱鉴定其纯度(方法见效果实施例)。
实施例2
硫酸鱼精蛋白粗提物精制
(1)硫酸鱼精蛋白粗提物溶解
准确称取硫酸鱼精蛋白粗提物(由上海第一生化药业有限公司提供)500g,加入到10L纯化水中,30℃水浴30min,待完全溶解后,用硫酸调节pH至1.2。
(2)第一次吸附
称取皂土150g,加入到硫酸鱼精蛋白溶液中,30℃水浴搅拌约2h,滤纸过滤,除去皂土,滤液用氢氧化钠调节pH至11.0。
(3)第二次吸附
称取皂土100g,加入到已经调节好pH的硫酸鱼精蛋白溶液中,85℃水浴,搅拌吸附3h,过滤除去皂土。
(4)有机溶剂沉淀
取滤液,加入等量0-4℃放置过夜的无水乙醇,4000rpm,离心10min,弃去上清液。
(5)干燥
取下层沉淀物,放入真空干燥箱,放入500g五氧化二磷,真空度保持0.08~0.1MPa,干燥24h。
(6)收率
将干燥后的硫酸鱼精蛋白精品称重,得到硫酸鱼精蛋白精制品298g,收率59.6%。
(7)质量控制
取精制后的硫酸鱼精蛋白通过阳离子交换色谱鉴定其纯度(方法如效果实施例)。
对比实施例4
硫酸鱼精蛋白粗提物精制
(1)硫酸鱼精蛋白粗提物溶解
准确称取硫酸鱼精蛋白粗提物(由上海第一生化药业有限公司提供)500g,加入到10L纯化水中,30℃水浴30min,待完全溶解后,用硫酸调节pH至3.2。
(2)第一次吸附
称取皂土150g,加入到硫酸鱼精蛋白溶液中,30℃水浴搅拌约2h,滤纸过滤,除去皂土,滤液用氢氧化钠调节pH至8.5。
(3)第二次吸附
称取皂土100g,加入到已经调节好pH的硫酸鱼精蛋白溶液中,85℃水浴,搅拌吸附3h,过滤除去皂土。
(4)有机溶剂沉淀
取滤液,加入等量0-4℃放置过夜的无水乙醇,4000rpm,离心10min,弃去上清液。
(5)干燥
取下层沉淀物,放入真空干燥箱,放入500g五氧化二磷,真空度保持0.08~0.1MPa,干燥24h。
(6)收率
将干燥后的硫酸鱼精蛋白精品称重,得到硫酸鱼精蛋白精制品153g,收率30.6%。
(7)质量控制
取精制后的硫酸鱼精蛋白通过阳离子交换色谱鉴定其纯度(方法如效果实施例)。
实施例3
硫酸鱼精蛋白粗提物精制
(1)硫酸鱼精蛋白粗提物溶解
准确称取硫酸鱼精蛋白粗提物(由上海第一生化药业有限公司提供)500g,加入到10L纯化水中,35℃水浴30min,待完全溶解后,用硫酸调节pH至1.4。
(2)第一次吸附
称取活性炭100g,加入到硫酸鱼精蛋白溶液中,30℃水浴搅拌约2h,滤纸过滤,除去活性炭,滤液用氢氧化钠调节pH至12.0。
(3)第二次吸附
称取活性炭50g,加入到已经调节好pH的硫酸鱼精蛋白溶液中,85℃水浴,搅拌吸附3h,过滤除去活性炭。
(4)有机溶剂沉淀
取滤液,加入等量0-4℃放置过夜的无水乙醇,4000rpm,离心10min,弃去上清液。
(5)干燥
取下层沉淀物,放入真空干燥箱,放入500g五氧化二磷,真空度保持0.08~0.1MPa,干燥24h。
(6)收率
将干燥后的硫酸鱼精蛋白精品称重,得到硫酸鱼精蛋白精制品269g,收率53.8%。
(7)质量控制
取精制后的硫酸鱼精蛋白通过阳离子交换色谱鉴定其纯度(方法如效果实施例)。
对比实施例5
硫酸鱼精蛋白粗提物精制
(1)硫酸鱼精蛋白粗提物溶解
准确称取硫酸鱼精蛋白粗提物(由上海第一生化药业有限公司提供)500g,加入到10L纯化水中,35℃水浴30min,待完全溶解后,用硫酸调节pH至2.4。
(2)第一次吸附
称取活性炭100g,加入到硫酸鱼精蛋白溶液中,30℃水浴搅拌约2h,滤纸过滤,除去活性炭,滤液用氢氧化钠调节pH至9.0。
(3)第二次吸附
称取活性炭50g,加入到已经调节好pH的硫酸鱼精蛋白溶液中,85℃水浴,搅拌吸附3h,过滤除去活性炭。
(4)有机溶剂沉淀
取滤液,加入等量0-4℃放置过夜的无水乙醇,4000rpm,离心10min,弃去上清液。
(5)干燥
取下层沉淀物,放入真空干燥箱,放入500g五氧化二磷,真空度保持0.08~0.1MPa,干燥24h。
(6)收率
将干燥后的硫酸鱼精蛋白精品称重,得到硫酸鱼精蛋白精制品182g,收率36.4%。
(7)质量控制
取精制后的硫酸鱼精蛋白通过阳离子交换色谱鉴定其纯度(方法如效果实施例)。
实施例4
硫酸鱼精蛋白粗提物精制
(1)硫酸鱼精蛋白粗提物溶解
准确称取硫酸鱼精蛋白粗提物(由上海第一生化药业有限公司提供)500g,加入到10L纯化水中,40℃水浴30min,待完全溶解后,用2.5mol/L的硫酸调节pH至1.5。
(2)第一次吸附
称取骨炭100g,加入到硫酸鱼精蛋白溶液中,30℃水浴搅拌约2h,滤纸过滤,除去骨炭,滤液用2.5mol/L的氢氧化钠调节pH至11.0。
(3)第二次吸附
称取骨炭50g,加入到已经调节好pH的硫酸鱼精蛋白溶液中,65℃水浴,搅拌吸附3h,过滤除去骨炭。
(4)有机溶剂沉淀
取滤液,加入等量0-4℃放置过夜的无水乙醇,4000rpm,离心10min,弃去上清液。
(5)干燥
取下层沉淀物,放入真空干燥箱,放入500g五氧化二磷,真空度保持0.08~0.1MPa,干燥24h。
(6)收率
将干燥后的硫酸鱼精蛋白精品称重,得到硫酸鱼精蛋白精制品298g,收率59.8%。
(7)质量控制
取精制后的硫酸鱼精蛋白通过阳离子交换色谱鉴定其纯度(方法如效果实施例)。
实施例5
硫酸鱼精蛋白粗提物精制
(1)硫酸鱼精蛋白粗提物溶解
准确称取硫酸鱼精蛋白粗提物(由上海第一生化药业有限公司提供)500g,加入到10L纯化水中,45℃水浴30min,待完全溶解后,用2.5mol/L的硫酸调节pH至1.6。
(2)第一次吸附
称取活性矾土100g,加入到硫酸鱼精蛋白溶液中,45℃水浴搅拌约2h,滤纸过滤,除去活性矾土,滤液用2.5mol/L的氢氧化钠调节pH至10.0。
(3)第二次吸附
称取活性矾土50g,加入到已经调节好pH的硫酸鱼精蛋白溶液中,85℃水浴,搅拌吸附3h,过滤除去活性矾土。
(4)有机溶剂沉淀
取滤液,加入等量0-4℃放置过夜的无水乙醇,4000rpm,离心10min,弃去上清液。
(5)干燥
取下层沉淀物,放入真空干燥箱,放入500g五氧化二磷,真空度保持0.08~0.1MPa,干燥24h。
(6)收率
将干燥后的硫酸鱼精蛋白精品称重,得到硫酸鱼精蛋白精制品265g,收率53%。
(7)质量控制
取精制后的硫酸鱼精蛋白通过阳离子交换色谱鉴定其纯度(方法如效果实施例)。
实施例6
硫酸鱼精蛋白粗提物精制
(1)硫酸鱼精蛋白粗提物溶解
准确称取硫酸鱼精蛋白粗提物(由上海第一生化药业有限公司提供)500g,加入到10L纯化水中,50℃水浴30min,待完全溶解后,用2.5mol/L的硫酸调节pH至1.3。
(2)第一次吸附
称取硅胶100g,加入到硫酸鱼精蛋白溶液中,50℃水浴搅拌约2h,滤纸过滤,除去硅胶,滤液用2.5mol/L的氢氧化钠调节pH至10.0。
(3)第二次吸附
称取硅胶50g,加入到已经调节好pH的硫酸鱼精蛋白溶液中,75℃水浴,搅拌吸附3h,过滤除去硅胶。
(4)有机溶剂沉淀
取滤液,加入等量0-4℃放置过夜的无水乙醇,4000rpm,离心10min,弃去上清液。
(5)干燥
取下层沉淀物,放入真空干燥箱,放入500g五氧化二磷,真空度保持0.08~0.1MPa,干燥24h。
(6)收率
将干燥后的硫酸鱼精蛋白精品称重,得到硫酸鱼精蛋白精制品246g,收率49.2%。
(7)质量控制
取精制后的硫酸鱼精蛋白通过阳离子交换色谱鉴定其纯度(方法如效果实施例)。
效果实施例1
纯化前后硫酸鱼精蛋白纯度鉴定
采用离子交换层析鉴定纯化前后硫酸鱼精蛋白纯度,色谱条件如下:
色谱柱:HiTrap SP FF预装柱(5ml)(GE公司生产)
纯化系统:AKTA Explorer(GE公司生产)
上样量:0.5ml
样品浓度:10mg/ml
平衡液:50mmol/L Tris-HCl,pH8.0
洗脱液:pH8.0,50mmol/L Tris-HCl+2mol/L NaCl
检测波长:220nm,260nm
流速:5ml/min
检测方法:0min→3min:平衡液平衡
3.01min→10min:100%平衡液+0%洗脱液→0%平衡液+100%洗脱液线性梯度洗脱
10.01min→13min:洗脱液
所用填料为强阳离子,洗脱液的盐浓度为150-200mS/cm,洗脱8个柱体积。纯化前后及对照品(硫酸鱼精蛋白进口原料药,由日本Yuki GoseiKogyo Co Ltd提供)的实验结果统计如下表所示:
表中硫酸鱼精蛋白含量及杂质含量是根据色谱图积分计算得出的相对含量,其中杂质含量采用260nm检测峰的峰面积,硫酸鱼精蛋白含量采用220nm检测峰的峰面积。
效果实施例2
纯化前后硫酸鱼精蛋白活性比较
按2010版中国药典硫酸鱼精蛋白生物活性测定方法,对精制纯化前后的生物活性进行了检测,结果如下表所示:
Claims (10)
1.一种硫酸鱼精蛋白的纯化方法,其包括下述步骤:
(1)将硫酸鱼精蛋白粗提物溶解于水中得溶液,加入酸,调节溶液pH值为1~2;
(2)加入吸附剂,搅拌,过滤,得到滤液;
(3)加入碱,调节滤液pH值为10~12,再加入吸附剂,搅拌,过滤;
(4)加入有机溶剂,离心除去上清液,将沉淀物真空干燥,即得;
其中,步骤(2)与步骤(3)中所述的吸附剂为硅藻土、活性矾土、皂土、骨炭、活性炭和硅胶中的一种或多种。
2.如权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,步骤(1)中,所述的水为纯化水;所述的硫酸鱼精蛋白粗提物与所述的水的质量比为1:(10~30);
和/或,步骤(1)中,所述的酸为硫酸。
3.如权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,步骤(2)中,所述的吸附剂与所述的溶液的质量比为5:(1000~100);
和/或,步骤(2)中,所述的搅拌为在水浴条件下搅拌,所述的水浴的温度为30~50℃,所述的搅拌的时间为1~3小时。
4.如权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,步骤(3)中,所述的碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾;
和/或,步骤(3)中,所述的吸附剂与所述的溶液的质量比为5:(1000~100);
和/或,步骤(3)中,所述的搅拌为在水浴条件下搅拌,所述的水浴的温度为60~85℃,所述的搅拌的时间为1~3小时。
5.如权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述的有机溶剂为乙醇、乙醚、丙酮和甲醇中的一种或多种,所述的有机溶剂与所述的溶液的质量比为(1.0~3.5):1。
6.如权利要求5所述的纯化方法,其特征在于,所述的有机溶剂为0~4℃放置过夜的无水乙醇。
7.如权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述的离心的转速为3000~5000rpm,所述的离心的时间为10~20min。
8.如权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述的真空干燥的真空度为0.08~0.1MPa,所述的真空干燥的时间为24~30小时。
9.如权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述的真空干燥在放入五氧化二磷的真空干燥箱中进行。
10.如权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述的硫酸鱼精蛋白粗提物通过下述方法制得:将鱼白与纯化水的混合物匀浆后,加入醋酸调节pH为3.5~4.5,沉淀物用硫酸溶解,离心后上清液用无水乙醇沉淀,沉淀物溶于纯化水,0~4℃静置,下层油状物溶于纯化水中,硫酸调节pH为1.5~2.5,加入无水乙醇沉淀,沉淀物干燥,即得硫酸鱼精蛋白粗提物。
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