CN115141280B - 一种Taq DNA聚合酶单克隆抗体及其应用 - Google Patents

一种Taq DNA聚合酶单克隆抗体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种Taq DNA聚合酶单克隆抗体及其应用；该单克隆抗体可以有效封闭taqDNA聚合酶外切活性位点，在维持PCR反应试剂的稳定性起到积极作用；特异性强，封闭效果好，有利于维持PCR反应试剂在扩增前的稳定性，实用价值高；而且提供了生产单克隆抗体的杂交瘤细胞株，可制备大量Taq DNA聚合酶的单克隆抗体。

Description

一种Taq DNA聚合酶单克隆抗体及其应用
技术领域
本发明属于抗体技术领域，具体涉及一种Taq DNA聚合酶单克隆抗体及其应用。
背景技术
Taq DNA聚合酶因其具有极高的热稳定性和5’-3’外切活性，广泛应用于taqMen探针的qPCR反应体系中。Taq DNA聚合酶的扩增速率约60nt/秒，在1分钟的退火和延伸条件下，经30-40个循环，1.5-2小时可获得大量的PCR产物。为缩短PCR的运行时间，大多数研究者将退火与延伸合并为一步，使PCR扩增程序由原来的三步转变为两步。虽缩短了将近一半的时间，但却降低了灵敏度。
随着快速PCR仪的开发，PCR仪的升降温速率大大提高，使PCR的运行时间再次缩短，但还是受限于Taq DNA聚合酶的扩增速率。《Compartmentalized self-replicationunder fast PCR cycling conditions yields Taq DNA polymerase mutants withincreased DNA-binding affifinity and blood resistance》文献研究，对Taq DNA聚合酶一个或多个位点的突变，可以显著提高Taq DNA聚合酶的扩增速率，同时增强Taq DNA聚合酶对血液的耐受性。
然而无论野生型Taq DNA聚合酶还是突变型Taq DNA聚合酶在低温条件下都是有活性的，就会导致基于Taq DNA聚合酶配制的PCR反应试剂在偏离正常保存条件下性能的不稳定性。热启动酶是利用Taq DNA聚合酶的抗体封闭其聚合活性位点以降低其低温条件下的非特异性扩增。那么对于其外切活性也可以通过用抗体进行封闭以维持其在低温条件下的稳定性。因此如何制备高效封闭Taq DNA聚合酶的单克隆抗体是本领域的研究重点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以有效封闭Taq DNA聚合酶的外切活性位点单克隆抗体及其应用。
本发明所采取的技术方案是：根据NCBI P19821.1 Taq DNA聚合酶的蛋白序列，突变其G59W/V155I/E507K三个氨基酸序列后，合成基因序列构建至pET28a载体中，诱导表达突变型Taq DNA聚合酶蛋白，纯化后，免疫小鼠。利用杂交瘤技术制备具有分泌抗体的杂交瘤细胞，筛选出阳性杂交瘤细胞并进行单克隆。制备腹水并进行抗体纯化。经对Taq DNA聚合酶5'-3'外切活性封闭测试，筛选出可以封闭Taq DNA聚合酶5'-3'外切活性的高灵敏度抗体。最终筛选出2株单克隆抗体，分别是杂交瘤细胞株F10-21(保藏编号：CCTCC NO:C202272)，杂交瘤细胞株F10-22(保藏编号：CCTCC NO:C202273)。
本发明的第一方面，提供一种Taq DNA聚合酶单克隆抗体，所述单克隆抗体为F10-21或F10-22；所述F10-21包含F10-21轻链可变区和F10-21重链可变区；所述F10-21轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
所述F10-21轻链可变区CDR1的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.1；或
b)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-21轻链可变区CDR2的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.2；或
b)SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-21轻链可变区CDR3的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.3；或
b)SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-21重链可变区CDR1的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.4；或
b)SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-21重链可变区CDR2的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.5；或
b)SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-21重链可变区CDR3的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.6；或
b)SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-22包含F10-22轻链可变区和F10-22重链可变区；所述F10-22轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
所述F10-22轻链可变区CDR1的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.7；或
b)SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-22轻链可变区CDR2的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.2；或
b)SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-22轻链可变区CDR3的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.3；或
b)SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-22重链可变区CDR1的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.8；或
b)SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-22重链可变区CDR2的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.9；或
b)SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-22重链可变区CDR3的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.10；或
b)SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
在本发明的一些实施方式中，
所述F10-21包含F10-21轻链可变区和F10-21重链可变区；
所述F10-21轻链可变区的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.11；或
b)SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-21重链可变区的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.12；或
b)SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-22包含轻链可变区和重链可变区；
所述F10-22轻链可变区的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.13；或
b)SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列；
所述F10-22重链可变区的氨基酸序列为：
a)SEQ ID NO.14；或
b)SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后且功能相同或相似的氨基酸序列。
在本发明的一些实施方式中，所述F10-21由保藏编号为CCTCC NO:C202272的杂交瘤细胞株F10-21产生，所述F10-22由保藏编号为CCTCC NO:C202273的杂交瘤细胞株F10-22产生。
本发明的第二方面，提供一种核酸分子，所述核酸分子包括本发明第一方面所述的单克隆抗体的编码基因。
本发明的第三方面，提供一种载体，所述核酸分子包含本发明第二方面所述的核酸分子。
本发明的第四方面，提供一种细胞，所述细胞包含本发明第三方面所述的载体。
本发明的第五方面，提供本发明第一方面所述单克隆抗体或本发明第二方面所述核酸分子或本发明第三方面所述载体或本发明第四方面所述细胞在(1)～(8)至少一项中的应用：
(1)降低Taq DNA聚合酶的非特异性扩增；
(2)制备降低Taq DNA聚合酶的非特异性扩增的产品；
(3)保证Taq DNA聚合酶的热稳定性；
(4)制备保证突变型Taq DNA聚合酶的热稳定性的产品；
(5)DNA扩增；
(6)制备DNA扩增相关产品；
(7)PCR反应；
(8)制备PCR相关产品。
本发明的第六方面，提供一种产品，所述产品包含本发明第一方面所述的单克隆抗体或本发明第二方面所述的核酸分子或本发明第三方面所述的载体或本发明第四方面所述的细胞。
在本发明的一些实施方式中，所述产品中还包含Taq DNA聚合酶。
在本发明的一些实施方式中，所述Taq DNA聚合酶和单克隆抗体的质量比为1:1.5～1:2。
在本发明的一些实施方式中，所述产品为试剂盒。
本发明的有益效果是：
本发明中提供了两种可高效封闭Taq DNA聚合酶5'-3'外切活性的高灵敏度抗体F10-21和F10-22，特异性强，封闭效果好，有利于维持PCR反应试剂在扩增前的稳定性，实用价值高；而且提供了生产F10-21和F10-22的杂交瘤细胞株，可制备大量高效封闭Taq DNA聚合酶的单克隆抗体。
附图说明
图1为抗体筛选初始荧光值与终点荧光值柱状图。
图2为实施例4中的PCR扩增曲线图。
图3为F10-21、F10-22抗体封闭野生型Taq DNA聚合酶外切活性测试图。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
实施例1单克隆抗体制备
根据NCBI P19821.1 Taq DNA聚合酶的蛋白序列：MRGMLPLFEPKGRVLLVDGHHLAYRTFHALKGLTTSRGEPVQAVYGFAKSLLKALKEDGDAVIVVFDAKAPSFRHEAYGGYKAGRAPTPEDFPRQLALIKELVDLLGLARLEVPGYEADDVLASLAKKAEKEGYEVRILTADKDLYQLLSDRIHVLHPEGYLITPAWLWEKYGLRPDQWADYRALTGDESDNLPGVKGIGEKTARKLLEEWGSLEALLKNLDRLKPAIREKILAHMDDLKLSWDLAKVRTDLPLEVDFAKRREPDRERLRAFLERLEFGSLLHEFGLLESPKALEEAPWPPPEGAFVGFVLSRKEPMWADLLALAAARGGRVHRAPEPYKALRDLKEARGLLAKDLSVLALREGLGLPPGDDPMLLAYLLDPSNTTPEGVARRYGGEWTEEAGERAALSERLFANLWGRLEGEERLLWLYREVERPLSAVLAHMEATGVRLDVAYLRALSLEVAEEIARLEAEVFRLAGHPFNLNSRDQLERVLFDELGLPAIGKTEKTGKRSTSAAVLEALREAHPIVEKILQYRELTKLKSTYIDPLPDLIHPRTGRLHTRFNQTATATGRLSSSDPNLQNIPVRTPLGQRIRRAFIAEEGWLLVALDYSQIELRVLAHLSGDENLIRVFQEGRDIHTETASWMFGVPREAVDPLMRRAAKTINFGVLYGMSAHRLSQELAIPYEEAQAFIERYFQSFPKVRAWIEKTLEEGRRRGYVETLFGRRRYVPDLEARVKSVREAAERMAFNMPVQGTAADLMKLAMVKLFPRLEEMGARMLLQVHDELVLEAPKERAEAVARLAKEVMEGVYPLAVPLEVEVGIGEDWLSAKE(SEQ ID NO.19)；
突变其G59W/V155I/E507K三个氨基酸序列后，合成基因序列构建至pET28a载体中。采用分子生物学方法表达突变型Taq DNA聚合酶蛋白。免疫8-10周龄，重约20g，健康的Balb/c的雌性小鼠。末次免疫第三天处死小鼠，并体外分离脾细胞。脾细胞与骨髓瘤细胞按5:1-10:1比例进行细胞融合并接种于96孔板中。用HTA培养基筛选出杂交瘤细胞。用ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞，并进行两轮单克隆培养。共筛选出30株单克隆。将30株单克隆扩大培养后，一部分进行冻存，一部分接种于小鼠腹腔内。接种10天后，采集腹水。用亲和层析法纯化腹水，获得30个单克隆抗体。
实施例2突变型Taq DNA聚合酶外切活性抗体筛选
以M13 taqMen探针的PCR试剂为例：
上游引物：gattctggcgtaccgttcct(SEQ ID NO.20)；
下游引物：aacgtgctttcctcgttgga(SEQ ID NO.21)；
探针：ROX-cggcctcctgtttagctcccg-BHQ2(SEQ ID NO.22)。
实施例1中，纯化出的30个抗体，分别调整浓度为1.6mg/ml。
按表1配制基础反应液：
表1反应体系
试剂名称 用量(μl)
10X PCR buffer 2
2.5mM dNTP 1.5
10umol/L上游引物 1
10umol/L下游引物 1
10umol/L探针 0.5
突变型Taq DNA聚合酶(0.4mg/ml) 3
M13 DNA 5
水 4.5
以上配制31份，其中1份加入1.5μl抗体储存液作为对照组(即无抗体组)，剩余30份分别加入1.5μl待检测的30个抗体。
按照下列程序收集实时荧光。
Figure BDA0003688093890000071
实验结果如表2与图1所示：
表2各实验组初始荧光值与终点荧光值汇总表
Figure BDA0003688093890000072
从表2与图1结果来看，对照组(即无抗体组)，经48℃孵育2H后，荧光值由860.24增长至1383.10，荧光增幅1.61倍。说明突变型Taq DNA聚合酶在此阶段发挥其外切酶活性切割探针释放荧光信号。而F10-21、F10-22组荧光值分别由881.31、869.73增长至914.90、916.85，荧光增幅分别增长1.04倍、1.05倍。说明F10-21、F10-22抗体封闭了突变型Taq DNA聚合酶的外切活性位点，有效地阻断了其外切活性。其他抗体荧光增幅1.11倍～1.39倍，说明有封闭突变型Taq DNA聚合酶的外切活性位点的功能，但不能完全封闭，效果不如F10-21、F10-22。
将产生F10-21、F10-22的杂交瘤细胞保藏于国家保藏中心，其中产生F10-21的杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C202272、保藏时间20220313、分类命名：杂交瘤细胞株F10-21；产生F10-22的杂交瘤细胞株的保藏编号为CCTCC NO:C202273、保藏时间20220313、分类命名：杂交瘤细胞株F10-22。
实施例3
对F10-21和F10-22进行序列分析：
其中F10-21包含F10-21轻链可变区和F10-21重链可变区；所述F10-21轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
所述F10-21轻链可变区CDR的氨基酸序列为：
CDR1 RASKDSTSGYSYMH(SEQ ID NO.1)；
CDR2 LVSNLES(SEQ ID NO.2)；
CDR3 QHIR(SEQ ID NO.3)；
所述F10-21重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
所述F10-21重链可变区CDR的氨基酸序列为：
CDR1 LLIE(SEQ ID NO.4)；
CDR2 KIFPERGRTICRENSRG(SEQ ID NO.5)；
CDR3 GGNGGFVY(SEQ ID NO.6)；
F10-21轻链氨基酸序列为：
PILLLSCISGAEGTISYRASKDSTSGYSYMHWNQQKPGQPPRLLIYLVSNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHIRELTRSEGGPSWK(SEQ ID NO.11)；
F10-21重链氨基酸序列为：
GPWPPPGKFLEGFWLHNQYLLIEGETQSPELALAGMEKIFPERGRTICRENSRGRAPFPANTPSNTPYLKLSTLTSEDSAVFYWEKGGGNGGFVYGAQGTRAPVSAPKTTPPSAPRARPRPGS(SEQ ID NO.12)；
F10-21核酸序列：
F10-21轻链核酸序列为：
CCGATACTGCTGCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCACCATCTCATACAGGGCCAGCAAAGACAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGAACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAGACTCCTCATCTATCTTGTATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCACATTAGGGAGCTTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATGAAATCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTTCCTCTAAAATCTTCCAAACC(SEQ IDNO.15)；
F10-21重链核酸序列为：
GAGGGACCCTGGCCACCCCCGGGAAAATTCCTGGAAGGGTTCTGGCTACATAATCAGTATTTATTGATAGAGGGGGAAACCCAGAGCCCGGAACTGGCCCTTGCGGGAATGGAAAAAATTTTCCCGGAAAGGGGAAGAACAATTTGCAGGGAAAATTCCAGGGGAAGGGCCCCTTTCCCGGCAAATACTCCCTCCAACACACCCTACTTGAAACTCAGCACCCTGACTTCGGAGGACTCTGCCGTCTTTTACTGGGAAAAAGGGGGTGGGAACGGGGGTTTTGTTTACGGGGCCCAGGGAACTCGGGCCCCTGTCTCTGCACCCAAAACAACCCCCCCTTCTGCCCCTAGGGCCCGGCCCCGGCCCGGGAGT(SEQ ID NO.16)。
F10-22包含F10-22轻链可变区和F10-22重链可变区；所述F10-22轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
所述F10-22轻链可变区CDR的氨基酸序列为：
CDR1 RASKSVSTSGYSYMH(SEQ ID NO.7)；
CDR2 LVSNLES(SEQ ID NO.2)；
CDR3 QHIR(SEQ ID NO.3)；
所述F10-22重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
所述F10-22重链可变区CDR的氨基酸序列为：
CDR1 DYPLH(SEQ ID NO.8)；
CDR2 VISTYFGDSILSQKFKD(SEQ ID NO.9)；
CDR3 RVGTT(SEQ ID NO.10)；
F10-22轻链氨基酸序列为：
DTCCLAVSLGQRATISYRASKSVSTSGYSYMHWNQQKPGQPPRLLIYLVSNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHIRELTRSEGGPSWK(SEQ ID NO.13)；
F10-22重链氨基酸序列为：
AFFSGGGSLRSSLEVQLQQSGAVLVRPGVSVKISCKGSGYTFTDYPLHWVKQSHAKSLEWVGVISTYFGDSILSQKFKDKASVTVDKSSTQPIWNFQTDSEDFAIYFWQERVGTTLLGTLYFGGKAPL(SEQ ID NO.14)。
F10-22核酸序列：
F10-22轻链核酸序列：
GATACCTGCTGCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATACAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGAACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAGACTCCTCATCTATCTTGTATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCACATTAGGGAGCTTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAA(SEQ ID NO.17)；
F10-22重链核酸序列：
GCGTTTTTCAGTGGTGGTGGTTCCCTTAGATCTTCCCTCGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCTGTGCTGGTGAGGCCTGGGGTCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAGGGTTCTGGCTACACATTCACTGATTATCCTCTGCACTGGGTGAAGCAGAGTCATGCAAAGAGTCTAGAGTGGGTTGGAGTTATTAGTACTTACTTTGGTGATTCTATCCTCAGCCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCTCAGTGACTGTAGACAAATCCTCCACCCAGCCTATCTGGAACTTCCAGACTGACTCTGAGGATTTCGCCATCTATTTCTGGCAAGAGAGGGTGGGAACTACCCTTTTGGGTACTCTTTACTTCGGGGGCAAGGCCCCTTTA(SEQ ID NO.18)。
实施例4 F10-21、F10-22对PCR反应试剂稳定性的作用
以M13 taqMen探针的PCR试剂为例，按照表3配制反应液。
上游引物:gattctggcgtaccgttcct(SEQ ID NO.20)；
下游引物：aacgtgctttcctcgttgga(SEQ ID NO.21)；
探针：ROX-cggcctcctgtttagctcccg-BHQ2(SEQ ID NO.22)。
表3反应液成分
Figure BDA0003688093890000101
以上3组反应试剂室温放置4H后按照下列程序进行PCR扩增。
Figure BDA0003688093890000102
实验结果如图2所示，无抗体组与含F10-21抗体组和含F10-22抗体组比较，无抗体组的荧光值明显偏低。说明无抗体组在室温放置4小时过程中，探针原料被消耗。进一步证明了F10-21、F10-22抗体有效封闭了突变型Taq DNA聚合酶的外切活性位点，阻止其消耗探针原料，维持了PCR反应试剂的稳定性。
实施例5 F10-21、F10-22对野生型Taq DNA聚合酶外切活性位点封闭测试
以M13 taqMen探针的PCR试剂为例：
上游引物:gattctggcgtaccgttcct(SEQ ID NO.20)；
下游引物：aacgtgctttcctcgttgga(SEQ ID NO.21)；
探针：ROX-cggcctcctgtttagctcccg-BHQ2(SEQ ID NO.22)。
F10-21、F10-22抗体，分别调整浓度为1.6mg/ml。按表4配制反应液：
表4反应体系
Figure BDA0003688093890000111
按照下列程序收集实时荧光。
Figure BDA0003688093890000112
实验结果如图3所示：各实验组在48℃孵育2H后，无抗体组，荧光值明显增高，而F10-21组与F10-22组荧光值基本无变化，说明无抗体组在48℃孵育过程中，野生型Taq DNA聚合酶的外切功能在发挥作用，而抗体组的野生型Taq DNA聚合酶的外切功能则被F10-21或F10-22抗体封闭。进一步说明F10-21、F10-22抗体有封闭野生型Taq DNA聚合酶的外切活性位点。
上述具体实施方式对本发明作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东和信健康科技有限公司
<120> 一种Taq DNA聚合酶单克隆抗体及其应用
<130>
<160> 22
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Arg Ala Ser Lys Asp Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His
1               5                   10
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Leu Val Ser Asn Leu Glu Ser
1               5
<210> 3
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Gln His Ile Arg
1
<210> 4
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Leu Leu Ile Glu
1
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Lys Ile Phe Pro Glu Arg Gly Arg Thr Ile Cys Arg Glu Asn Ser Arg
1               5                   10                  15
Gly
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
Gly Gly Asn Gly Gly Phe Val Tyr
1               5
<210> 7
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His
1               5                   10                  15
<210> 8
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 8
Asp Tyr Pro Leu His
1               5
<210> 9
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 9
Val Ile Ser Thr Tyr Phe Gly Asp Ser Ile Leu Ser Gln Lys Phe Lys
1               5                   10                  15
Asp
<210> 10
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Arg Val Gly Thr Thr
1               5
<210> 11
<211> 101
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 11
Pro Ile Leu Leu Leu Ser Cys Ile Ser Gly Ala Glu Gly Thr Ile Ser
1               5                   10                  15
Tyr Arg Ala Ser Lys Asp Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp
            20                  25                  30
Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Val
        35                  40                  45
Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
    50                  55                  60
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala
65                  70                  75                  80
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg Ser Glu Gly
                85                  90                  95
Gly Pro Ser Trp Lys
            100
<210> 12
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 12
Gly Pro Trp Pro Pro Pro Gly Lys Phe Leu Glu Gly Phe Trp Leu His
1               5                   10                  15
Asn Gln Tyr Leu Leu Ile Glu Gly Glu Thr Gln Ser Pro Glu Leu Ala
            20                  25                  30
Leu Ala Gly Met Glu Lys Ile Phe Pro Glu Arg Gly Arg Thr Ile Cys
        35                  40                  45
Arg Glu Asn Ser Arg Gly Arg Ala Pro Phe Pro Ala Asn Thr Pro Ser
    50                  55                  60
Asn Thr Pro Tyr Leu Lys Leu Ser Thr Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
65                  70                  75                  80
Val Phe Tyr Trp Glu Lys Gly Gly Gly Asn Gly Gly Phe Val Tyr Gly
                85                  90                  95
Ala Gln Gly Thr Arg Ala Pro Val Ser Ala Pro Lys Thr Thr Pro Pro
            100                 105                 110
Ser Ala Pro Arg Ala Arg Pro Arg Pro Gly Ser
        115                 120
<210> 13
<211> 102
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 13
Asp Thr Cys Cys Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser
1               5                   10                  15
Tyr Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His
            20                  25                  30
Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu
        35                  40                  45
Val Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp
65                  70                  75                  80
Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg Ser Glu
                85                  90                  95
Gly Gly Pro Ser Trp Lys
            100
<210> 14
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 14
Ala Phe Phe Ser Gly Gly Gly Ser Leu Arg Ser Ser Leu Glu Val Gln
1               5                   10                  15
Leu Gln Gln Ser Gly Ala Val Leu Val Arg Pro Gly Val Ser Val Lys
            20                  25                  30
Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Pro Leu His
        35                  40                  45
Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Val Gly Val Ile
    50                  55                  60
Ser Thr Tyr Phe Gly Asp Ser Ile Leu Ser Gln Lys Phe Lys Asp Lys
65                  70                  75                  80
Ala Ser Val Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Gln Pro Ile Trp Asn Phe
                85                  90                  95
Gln Thr Asp Ser Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Phe Trp Gln Glu Arg Val
            100                 105                 110
Gly Thr Thr Leu Leu Gly Thr Leu Tyr Phe Gly Gly Lys Ala Pro Leu
        115                 120                 125
<210> 15
<211> 359
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
ccgatactgc tgcttagctg tatctctggg gcagagggca ccatctcata cagggccagc 60
aaagacagta catctggcta tagttatatg cactggaacc aacagaaacc aggacagcca 120
cccagactcc tcatctatct tgtatccaac ctagaatctg gggtccctgc caggttcagt 180
ggcagtgggt ctgggacaga cttcaccctc aacatccatc ctgtggagga ggaggatgct 240
gcaacctatt actgtcagca cattagggag cttacacgtt cggagggggg accaagctgg 300
aaatgaaatc ctctggtggc ggtggctcgg gcggtggttc ctctaaaatc ttccaaacc 359
<210> 16
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
gagggaccct ggccaccccc gggaaaattc ctggaagggt tctggctaca taatcagtat 60
ttattgatag agggggaaac ccagagcccg gaactggccc ttgcgggaat ggaaaaaatt 120
ttcccggaaa ggggaagaac aatttgcagg gaaaattcca ggggaagggc ccctttcccg 180
gcaaatactc cctccaacac accctacttg aaactcagca ccctgacttc ggaggactct 240
gccgtctttt actgggaaaa agggggtggg aacgggggtt ttgtttacgg ggcccaggga 300
actcgggccc ctgtctctgc acccaaaaca accccccctt ctgcccctag ggcccggccc 360
cggcccggga gt 372
<210> 17
<211> 306
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
gatacctgct gcttagctgt atctctgggg cagagggcca ccatctcata cagggccagc 60
aaaagtgtca gtacatctgg ctatagttat atgcactgga accaacagaa accaggacag 120
ccacccagac tcctcatcta tcttgtatcc aacctagaat ctggggtccc tgccaggttc 180
agtggcagtg ggtctgggac agacttcacc ctcaacatcc atcctgtgga ggaggaggat 240
gctgcaacct attactgtca gcacattagg gagcttacac gttcggaggg gggaccaagc 300
tggaaa 306
<210> 18
<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
gcgtttttca gtggtggtgg ttcccttaga tcttccctcg aggtgcagct gcagcagtct 60
ggggctgtgc tggtgaggcc tggggtctca gtgaagattt cctgcaaggg ttctggctac 120
acattcactg attatcctct gcactgggtg aagcagagtc atgcaaagag tctagagtgg 180
gttggagtta ttagtactta ctttggtgat tctatcctca gccagaagtt caaggacaag 240
gcctcagtga ctgtagacaa atcctccacc cagcctatct ggaacttcca gactgactct 300
gaggatttcg ccatctattt ctggcaagag agggtgggaa ctaccctttt gggtactctt 360
tacttcgggg gcaaggcccc ttta 384
<210> 19
<211> 832
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 19
Met Arg Gly Met Leu Pro Leu Phe Glu Pro Lys Gly Arg Val Leu Leu
1               5                   10                  15
Val Asp Gly His His Leu Ala Tyr Arg Thr Phe His Ala Leu Lys Gly
            20                  25                  30
Leu Thr Thr Ser Arg Gly Glu Pro Val Gln Ala Val Tyr Gly Phe Ala
        35                  40                  45
Lys Ser Leu Leu Lys Ala Leu Lys Glu Asp Gly Asp Ala Val Ile Val
    50                  55                  60
Val Phe Asp Ala Lys Ala Pro Ser Phe Arg His Glu Ala Tyr Gly Gly
65                  70                  75                  80
Tyr Lys Ala Gly Arg Ala Pro Thr Pro Glu Asp Phe Pro Arg Gln Leu
                85                  90                  95
Ala Leu Ile Lys Glu Leu Val Asp Leu Leu Gly Leu Ala Arg Leu Glu
            100                 105                 110
Val Pro Gly Tyr Glu Ala Asp Asp Val Leu Ala Ser Leu Ala Lys Lys
        115                 120                 125
Ala Glu Lys Glu Gly Tyr Glu Val Arg Ile Leu Thr Ala Asp Lys Asp
    130                 135                 140
Leu Tyr Gln Leu Leu Ser Asp Arg Ile His Val Leu His Pro Glu Gly
145                 150                 155                 160
Tyr Leu Ile Thr Pro Ala Trp Leu Trp Glu Lys Tyr Gly Leu Arg Pro
                165                 170                 175
Asp Gln Trp Ala Asp Tyr Arg Ala Leu Thr Gly Asp Glu Ser Asp Asn
            180                 185                 190
Leu Pro Gly Val Lys Gly Ile Gly Glu Lys Thr Ala Arg Lys Leu Leu
        195                 200                 205
Glu Glu Trp Gly Ser Leu Glu Ala Leu Leu Lys Asn Leu Asp Arg Leu
    210                 215                 220
Lys Pro Ala Ile Arg Glu Lys Ile Leu Ala His Met Asp Asp Leu Lys
225                 230                 235                 240
Leu Ser Trp Asp Leu Ala Lys Val Arg Thr Asp Leu Pro Leu Glu Val
                245                 250                 255
Asp Phe Ala Lys Arg Arg Glu Pro Asp Arg Glu Arg Leu Arg Ala Phe
            260                 265                 270
Leu Glu Arg Leu Glu Phe Gly Ser Leu Leu His Glu Phe Gly Leu Leu
        275                 280                 285
Glu Ser Pro Lys Ala Leu Glu Glu Ala Pro Trp Pro Pro Pro Glu Gly
    290                 295                 300
Ala Phe Val Gly Phe Val Leu Ser Arg Lys Glu Pro Met Trp Ala Asp
305                 310                 315                 320
Leu Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Gly Arg Val His Arg Ala Pro
                325                 330                 335
Glu Pro Tyr Lys Ala Leu Arg Asp Leu Lys Glu Ala Arg Gly Leu Leu
            340                 345                 350
Ala Lys Asp Leu Ser Val Leu Ala Leu Arg Glu Gly Leu Gly Leu Pro
        355                 360                 365
Pro Gly Asp Asp Pro Met Leu Leu Ala Tyr Leu Leu Asp Pro Ser Asn
    370                 375                 380
Thr Thr Pro Glu Gly Val Ala Arg Arg Tyr Gly Gly Glu Trp Thr Glu
385                 390                 395                 400
Glu Ala Gly Glu Arg Ala Ala Leu Ser Glu Arg Leu Phe Ala Asn Leu
                405                 410                 415
Trp Gly Arg Leu Glu Gly Glu Glu Arg Leu Leu Trp Leu Tyr Arg Glu
            420                 425                 430
Val Glu Arg Pro Leu Ser Ala Val Leu Ala His Met Glu Ala Thr Gly
        435                 440                 445
Val Arg Leu Asp Val Ala Tyr Leu Arg Ala Leu Ser Leu Glu Val Ala
    450                 455                 460
Glu Glu Ile Ala Arg Leu Glu Ala Glu Val Phe Arg Leu Ala Gly His
465                 470                 475                 480
Pro Phe Asn Leu Asn Ser Arg Asp Gln Leu Glu Arg Val Leu Phe Asp
                485                 490                 495
Glu Leu Gly Leu Pro Ala Ile Gly Lys Thr Glu Lys Thr Gly Lys Arg
            500                 505                 510
Ser Thr Ser Ala Ala Val Leu Glu Ala Leu Arg Glu Ala His Pro Ile
        515                 520                 525
Val Glu Lys Ile Leu Gln Tyr Arg Glu Leu Thr Lys Leu Lys Ser Thr
    530                 535                 540
Tyr Ile Asp Pro Leu Pro Asp Leu Ile His Pro Arg Thr Gly Arg Leu
545                 550                 555                 560
His Thr Arg Phe Asn Gln Thr Ala Thr Ala Thr Gly Arg Leu Ser Ser
                565                 570                 575
Ser Asp Pro Asn Leu Gln Asn Ile Pro Val Arg Thr Pro Leu Gly Gln
            580                 585                 590
Arg Ile Arg Arg Ala Phe Ile Ala Glu Glu Gly Trp Leu Leu Val Ala
        595                 600                 605
Leu Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Leu Arg Val Leu Ala His Leu Ser Gly
    610                 615                 620
Asp Glu Asn Leu Ile Arg Val Phe Gln Glu Gly Arg Asp Ile His Thr
625                 630                 635                 640
Glu Thr Ala Ser Trp Met Phe Gly Val Pro Arg Glu Ala Val Asp Pro
                645                 650                 655
Leu Met Arg Arg Ala Ala Lys Thr Ile Asn Phe Gly Val Leu Tyr Gly
            660                 665                 670
Met Ser Ala His Arg Leu Ser Gln Glu Leu Ala Ile Pro Tyr Glu Glu
        675                 680                 685
Ala Gln Ala Phe Ile Glu Arg Tyr Phe Gln Ser Phe Pro Lys Val Arg
    690                 695                 700
Ala Trp Ile Glu Lys Thr Leu Glu Glu Gly Arg Arg Arg Gly Tyr Val
705                 710                 715                 720
Glu Thr Leu Phe Gly Arg Arg Arg Tyr Val Pro Asp Leu Glu Ala Arg
                725                 730                 735
Val Lys Ser Val Arg Glu Ala Ala Glu Arg Met Ala Phe Asn Met Pro
            740                 745                 750
Val Gln Gly Thr Ala Ala Asp Leu Met Lys Leu Ala Met Val Lys Leu
        755                 760                 765
Phe Pro Arg Leu Glu Glu Met Gly Ala Arg Met Leu Leu Gln Val His
    770                 775                 780
Asp Glu Leu Val Leu Glu Ala Pro Lys Glu Arg Ala Glu Ala Val Ala
785                 790                 795                 800
Arg Leu Ala Lys Glu Val Met Glu Gly Val Tyr Pro Leu Ala Val Pro
                805                 810                 815
Leu Glu Val Glu Val Gly Ile Gly Glu Asp Trp Leu Ser Ala Lys Glu
            820                 825                 830
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
gattctggcg taccgttcct 20
<210> 21
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
aacgtgcttt cctcgttgga 20
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
cggcctcctg tttagctccc g 21

Claims (10)

1.一种Taq DNA聚合酶单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为F10-21或F10-22；所述F10-21包含F10-21轻链可变区和F10-21重链可变区；所述F10-21轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
所述F10-21轻链可变区CDR1的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.1；
所述F10-21轻链可变区CDR2的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.2；
所述F10-21轻链可变区CDR3的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.3；
所述F10-21重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
所述F10-21重链可变区CDR1的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.4；
所述F10-21重链可变区CDR2的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.5；
所述F10-21重链可变区CDR3的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.6；
所述F10-22包含F10-22轻链可变区和F10-22重链可变区；所述F10-22轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
所述F10-22轻链可变区CDR1的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.7；
所述F10-22轻链可变区CDR2的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.2；
所述F10-22轻链可变区CDR3的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.3；
所述F10-22重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
所述F10-22重链可变区CDR1的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.8；
所述F10-22重链可变区CDR2的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.9；
所述F10-22重链可变区CDR3的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.10。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，
所述F10-21包含轻链可变区和重链可变区；
所述F10-21轻链可变区的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.11；
所述F10-21重链可变区的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.12；
所述F10-22包含F10-22轻链可变区和F10-22重链可变区；
所述F10-22轻链可变区的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.13；
所述F10-22重链可变区的氨基酸序列为：
SEQ ID NO.14。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述F10-21由保藏编号为CCTCC NO:C202272的杂交瘤细胞株F10-21产生，所述F10-22由保藏编号为CCTCC NO:C202273的杂交瘤细胞株F10-22产生。
4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括权利要求1～3任一项所述的单克隆抗体的编码基因。
5.一种载体，其特征在于，所述核酸分子包含权利要求4所述的核酸分子。
6.一种细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求5所述的载体。
7.权利要求1～3任一项所述单克隆抗体或权利要求4所述核酸分子或权利要求5所述载体或权利要求6所述细胞在(1)～(8)至少一项中的应用：
(1)降低Taq DNA聚合酶的非特异性扩增；
(2)制备降低Taq DNA聚合酶的非特异性扩增的产品；
(3)保证Taq DNA聚合酶的热稳定性；
(4)制备保证Taq DNA聚合酶的热稳定性的产品；
(5)DNA扩增；
(6)制备DNA扩增相关产品；
(7)PCR反应；
(8)制备PCR相关产品。
8.一种产品，其特征在于，包含权利要求1～3任一项所述的单克隆抗体或权利要求4所述核酸分子或权利要求5所述载体或权利要求6所述细胞。
9.根据权利要求8所述的产品，其特征在于，所述产品中还包含突变型Taq DNA聚合酶或野生型Taq DNA聚合酶。
10.根据权利要求9所述的产品，其特征在于，所述Taq DNA聚合酶和单克隆抗体的质量比为1:1.5～1:2。
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