CN115124414A - 一种高光学纯度3-羟基丁酮的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种高光学纯度3‑羟基丁酮的制备方法及其应用，属于手性化合物制备技术领域。所述制备方法包括从含有3‑羟基丁酮的发酵液或水溶液或其他介质中分离提纯3‑羟基丁酮，制备过程中保持物料pH为弱酸性、中性或弱碱性，同时避免高温环境；其中，所述含有3‑羟基丁酮的发酵液或水溶液或其他介质中的3‑羟基丁酮为高光学纯度AC。本发明首次对生物发酵3‑羟基丁酮提取精制过程中产物旋光特性变化进行研究，通过跟踪分析提取过程中3‑羟基丁酮旋光异构体组成变化，找出(R)‑AC转化成(S)‑AC的规律和原因，通过提取工艺优化调整，减少或避免转化反应的发生，获得高光学纯度的3‑羟基丁酮产品，非常有利于其工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于手性化合物制备技术领域，具体涉及一种高光学纯度3-羟基丁酮的制备方法及其应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
3-羟基丁酮(Acetoin，AC)，又称乙偶姻，高度稀释条件下具有令人愉悦的奶油香味，被广泛用作食品风味增强剂，除此之外，AC还在化工、医药等领域有着重要的用途。AC分子内含有一个手性碳，有R型与S型两种旋光异构体(又称对应异构体、手性异构体、光学异构体)(图1)。光学纯3-羟基丁酮因其具有独特的立体结构，在不对称合成方面具有突出优势，在合成高附加值手性药物中间体、化学中间体、液晶材料等方面具有特殊的应用价值。当前，AC主要由化学法生产，产物为R型与S型的混合物，为外消旋型产品，限制了其在不对称合成方面的应用。AC是多种生物体糖代谢中间产物，通过微生物发酵可以生产AC，因此，人们寄希望于通过生物技术生产具有高光学纯度的AC。然而，研究发现微生物发酵所生产的AC也多是R型与S型混合物。为了获得单一光学纯的AC，研究人员做了多方面的尝试，如筛选合成高光学纯AC的天然菌株，构建单一构型的工程菌株，结果证明这些策略都是有效的，产物中AC的光学纯度(R 型或S型)最高可提高至98％以上。
相比于研究活跃的菌种代谢机制和发酵工艺的优化，有关生物技术生产AC的下游提取工艺研究还很欠缺。目前从发酵液中提取AC为数不多的方法有盐析法和双水相萃取法等，但这些研究只关注了AC从发酵液中的分离过程，并没有得到高纯度的AC的产品，更未见有关于高光学纯AC 产品下游提取技术的研究工作。
在之前的工作中，发明人等研究了枯草芽孢杆菌168和其丁二醇脱氢酶(BDH)基因缺失菌株168D的AC发酵行为，发现菌株168D发酵产物中(R)-AC含量可达98％(J.J.Zhang,X.Y.Zhao,J.X.Zhang,C.Zhao,J.J.Liu, Y.J.Tian,L.P.Yang,Effect of deletion of 2,3-butanediol dehydrogenase gene (bdhA)on acetoin production of Bacillussubtilis,Preparative Biochemistry& Biotechnology 47(8)(2017)761-767.)，然后采用发明人开发的一种从发酵液中高效回收AC的工艺技术[CN103524315A]，从168D发酵液中提取AC，最终得到了纯度为99％的AC固体产品，但出人意料的是固体产品中的 (R)-AC的含量只有50％，另外一半则为(S)-AC，即固体产品也是一种外消旋产品。这说明在提取过程中有部分(R)-AC转变成了(S)-AC，这一结果可能使人们试图通过生物发酵获得高光学纯AC的努力化为泡影。
发明内容
针对上述现有技术中存在的问题，本发明目的在于提供一种高光学纯度3-羟基丁酮(AC)的制备方法及其应用。本发明通过跟踪分析提取过程中AC两种旋光异构体的组成变化，通过提取工艺优化调整，减少或避免转化反应的发生，最终获得高光学纯度的AC产品。
为了实现上述技术目的，本发明提供的技术方案如下：
本发明的第一个方面，提供一种高光学纯度AC的制备方法，所述制备方法包括从含有AC的发酵液或水溶液或其他介质中分离提纯AC，制备过程中保持物料pH为弱酸性、中性或弱碱性，同时避免高温环境；其中，所述含有AC的发酵液或水溶液或其他介质中的AC为高光学纯度的AC ((R)-AC或(S)-AC)。
所述制备过程温度控制不高于80℃，物料pH3-9，本发明通过研究发现，在pH3-9范围内，高温是导致AC两种光学异构体((R)-AC和(S)-AC) 互相转化的主要原因，因此通过控制AC分离纯化过程的温度，进而获得高光学纯度的AC。
本发明的第二个方面，提供上述制备方法在高光学纯度AC工业化生产中的应用。
上述一个或多个技术方案的有益技术效果：
上述技术方案首次对生物发酵生产AC提取精制过程中产物旋光性变化进行研究，通过跟踪分析提取过程中AC两种旋光异构体的组成变化，找出了(R)-AC转化成(S)-AC的规律和原因，然后通过提取工艺优化调整，减少或避免转化反应的发生，最终获得高光学纯度的AC产品，因此具有良好的实际应用之价值。
说明书附图
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为3-羟基丁酮的两种旋光异构体构型；
图2为本发明实施例1中萃取液常压精馏过程；图中CEA：釜底物料乙酸乙酯含量；REA：乙酸乙酯的回收率；R/S：釜底物料中(R)-AC与(S)-AC 含量比值；
图3为本发明实施例1中温度对物料中(R)-AC和(S)-AC两种旋光异构体转化的影响。其中，A发酵液，B粗馏液，C萃取液；
图4为本发明实施例1中pH对(R)-AC和(S)-AC转化的影响；
图5为本发明实施例中80℃减压精馏过程；图中CAC：AC含量；CEA：釜底物料中乙酸乙酯含量；REA：乙酸乙酯的回收率；R/S：釜底物料(R)-AC 与(S)-AC含量比值；
图6为本发明实施例1中直接减压精馏过程；图中CAC：釜底物料中 AC含量；CEA：釜底物料中乙酸乙酯含量；REA：乙酸乙酯的回收率；R/S：釜底物料中(R)-AC与(S)-AC含量比值。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
如前所述，目前通过微生物发酵生产AC研究主要集中在上游技术，可以通过菌种选育或通过基因工程手段构建产高光学纯度单一异构体 ((R)-AC或(S)-AC)的生产菌株，但有关生物技术生产3-羟基丁酮的下游提取工艺研究还很欠缺，更未见有关于从发酵液或水溶液或其他介质中制备单一旋光异构体AC的报道。
有鉴于此，本发明的一个具体实施方式中，提供一种高光学纯度AC 的制备方法，所述制备方法是指从含有AC的发酵液或水溶液或其他介质中分离提纯AC，制备过程中保持物料为弱酸性、中性或弱碱性，同时避免高温环境；其中，所述含有AC的发酵液或水溶液或其他介质中的AC为高光学纯度的AC((R)-AC或(S)-AC)。
所述温度控制为整个制备过程温度不高于80℃，本发明通过研究发现，在适宜的pH条件(pH为3-9)下高温(高于80℃)是导致(R)-AC和(S)-AC 互相转化的主要原因，因此通过控制过程温度可有效阻止(R)-AC和(S)-AC 的相互转化，进而可以获得高光学纯度的AC。同时，强酸强碱环境同样会加速这一转化过程。因此，本发明高光学纯度AC的制备实际是控制在分离提纯AC过程中的(R)-AC和(S)-AC的相互转化。
上述含有高光学纯度的AC的发酵液或水溶液或其他介质可以是通过微生物发酵方法、酶法或者其他任何已知的方法获得；在本发明的一个具体实施方式中，产AC的微生物可以是未经过或经过基因改造的枯草芽孢杆菌。但是需要说明的是，本申请中显然不需要对产AC的微生物进行具体限定，只要是能够产AC的微生物即可，当然为方便后续获得高光学纯度的AC产品，所述微生物的发酵产物应为高光学纯度的AC。
本发明的又一具体实施方式中，所述高光学纯度AC的制备方法包括：将含有AC的发酵液经过滤得除菌体发酵液；将所述除菌体AC发酵液经减压蒸馏，收集粗馏液，然后加入乙酸乙酯进行萃取，收集萃取液，通过精馏的步骤回收萃取液中的乙酸乙酯，即得高光学纯度3-羟基丁酮；其中，控制制备方法各步骤中温度均不高于80℃。
本发明的又一具体实施方式中，控制各步骤中的料液pH为3-9，进一步优选为3.5-6.5。
本发明的又一具体实施方式中，将除菌体后的AC发酵液经减压蒸馏的具体方法为：在不高于80℃(如60-70℃)、100-150mbar条件下减压蒸馏，收集粗馏液(AC水溶液)；
本发明的又一具体实施方式中，所述加入乙酸乙酯进行萃取的具体方法包括：向粗馏液中加入20-30％(优选为25％，w/v)的硫酸钠至完全溶解，然后加入2-3倍体积量的乙酸乙酯进行3-羟基丁酮萃取，收集萃取液 (AC乙酸乙酯溶液)。
本发明的又一具体实施方式中，通过精馏的步骤回收萃取液中的乙酸乙酯具体方法包括：采用减压精馏方式或常压精馏和减压精馏相结合的方法从萃取液中回收乙酸乙酯。采用常压精馏当料液温度升至80℃，乙酸乙酯不再馏出时开始降低系统压力，维持釜底料液温度80℃，乙酸乙酯可以持续馏出，当系统压力降至100mbar时，乙酸乙酯可回收完全，釜底料液 AC浓度可达98％以上，仍维持较高光学纯度(R/S比值稍有降低)。直接采用减压精馏，将系统压力降至100mbar，室温状态下乙酸乙酯就开始馏出，当料液温度升至40℃时，乙酸乙酯回收率已接近90％，当料温升至80℃时，可以实现乙酸乙酯完全回收。釜底液中AC的浓度达97％，R/S比值和萃取液相比基本没有变化。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述制备方法在高光学纯度3-羟基丁酮工业化生产中的应用。
下面结合实施例对本发明进一步说明。下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围中。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性前提下，任何对本发明的变化都归属本发明的保护范围。同时，在本发明实施例中，若无特殊说明，所有制备原料均为本领域技术人员熟知的市售产品。
实施例1
1.材料及方法
1.1实验用菌种
枯草芽孢杆菌168D菌株由山东省食品发酵发酵工业研究设计院选育保藏。
1.2AC发酵液制备
种子培养基：葡萄糖50g/L，酵母提取物10g/L，NaCl5g/L，用20％的氢氧化钠溶液调整pH7.0-7.2。发酵培养基：葡萄糖180g/L，酵母提取物5g/L，玉米浆1g/L，NaCl5g/L，脲5g/L，用20％的氢氧化钠溶液调整pH6.5-7.0，50L发酵罐装液35L，接种量5％，搅拌转速350rpm，37℃培养至葡萄糖浓度为0g/L结束发酵，发酵液陶瓷膜过滤除菌体制备无菌体 AC发酵液。[J.J.Zhang,X.Y.Zhao,J.X.Zhang,C.Zhao,J.J.Liu,Y.J.Tian,L.P. Yang,Effectof deletion of 2,3-butanediol dehydrogenase gene(bdhA)on acetoin productionof Bacillus subtilis,Preparative Biochemistry& Biotechnology 47(8)(2017)761-767.]
1.3AC粗馏液和萃取液得制备
取无细胞发酵液在70℃、150mbar减压蒸馏，收集馏出液即为粗馏液。在粗馏液中加入25％(w/v)的Na2SO4至完全溶解，分三次加入总计2倍体乙酸乙酯，充分混合进行AC萃取，静置分层后，分离乙酸乙酯部分即得 AC乙酸乙酯萃取液。
1.4乙酸乙酯回收
采用常规精馏装置通过精馏得方法从AC萃取液中回收乙酸乙酯。
常压精馏，5L蒸馏烧瓶中加入3.5L3-羟基丁酮萃取液，开启加热装置进行精馏直至乙酸乙酯不再馏出。精馏过程中分阶段记录烧瓶中的料液温度并对冷凝回收得乙酸乙酯和釜底液进行取样分析。
减压精馏：5L蒸馏烧瓶中加入3.5L3-羟基丁酮萃取液，常压加热至料液沸腾，随着乙酸乙酯的馏出，料液温度升高，当烧瓶中料液温度升至80℃时，开启真空装置，通过调节真空度一直维持料液温度80℃直至无乙酸乙酯馏出。精馏过程中分阶段对冷凝液和釜底液进行取样分析。
1.5 3-羟基丁酮结晶
收集萃取液经常压精馏回收乙酸乙酯后得釜底液(液态AC)，置4℃放置至有结晶析出，抽滤，结晶用低温乙酸乙酯洗涤，低温干燥即得AC 结晶。
上述方法1.3-1.5描述得方法在发明人专利[CN103524315A]基础上进行了改进。
1.6分析测定方法
样品均用无水甲醇稀释，正丁醇作为内标，采用AgilentGC7890B气相色谱测定，该系统配备有火焰离子化检测器，色谱柱CYCLODEX-B(30 m×0.32mm×0.25μm，AgilentTechnologies，USA)，该色谱柱为手性色谱柱，能将(R)-AC和(S)-AC有效分离。操作条件如下：进样量为1μL，氮气，氢气和空气的气体流速分别为1.5mL/min，30mL/min和300mL/min。注射器和检测器温度均为220℃，柱温箱保持在50℃，5min，30℃/min的速率程序升温至220℃，并在220℃下保持3min。
2实验结果
2.1提取过程中AC两种光学异构体比例变化
实验对菌株168D发酵液，粗馏液、萃取液，釜底液和AC结晶样品进行取样，分析每个提取阶段物料中(R)-AC、(S)-AC含量并计算二者比例R/S， AC浓度为(R)-AC和(S)-AC含量之和。结果见表1。
表1.AC各分离阶段(R)-AC与(S)-AC比例
结果显示，168D发酵液AC两种旋光异构体比值R/S在28以上，AC 中(R)-AC可以占到96.5％。在后续分离提取过程中，从粗馏液到萃取液中 (R)-AC和(S)-AC比值(R/S)没有明显差别(p>0.05)。而经精馏分离乙酸乙酯后的釜底液中R/S值几乎达到1:1(1.01:1.00)(P<0.05)，AC结晶样品中 R/S值为1:1。这说明(R)-AC转化为(S)-AC发生在精馏过程中。因此，实施例对精馏过程中AC两种光学异构体含量变化进行了进一步考查。
2.2精馏过程中(R)-AC和(S)-AC的比例变化
采用常压精馏的方法分离AC萃取液中的乙酸乙酯，实验发现在批次精馏过程中随着乙酸乙酯不断被馏出，釜底料液温度逐渐升高，从最初乙酸乙酯开始馏出的70℃，到乙酸乙酯不再馏出时可达140℃。试验在不同的温度节点取样，分析釜底料液中(R)-AC、(S)-AC两种光学异构体的比例，结果发现，随着釜底料液温度的升高R/S值逐步降低，料液温度在70-100℃之间R/S变化相对较小，100-140℃之间R/S值迅速下降，R/S值接近1： 1时变化趋缓(图3)。通过以上结果分析高温可能是造成(R)-AC转化为 (S)-AC主要原因。
2.3温度对(R)-AC和(S)-AC转化的影响
分别取发酵液，粗馏液和萃取液分别置于60℃，80℃，90℃，100℃， 120℃下进行保温，进一步考察温度对AC两种旋光异构体转化的影响，结果如图4所示。可以看出在80℃以下保温8小时料液中R/S未发生明显变化。温度高于90℃，R/S比值下降明显，温度越高越显著。三种料液之中 R/S比值受温度得影响变化无明显区别(p<0.05)，说明介质对(R)-AC和(S)-AC之间的转化没有影响。实验结果进一步确认温度是促进(R)-AC和 (S)-AC发生转化的关键因素，温度越高转化速度越快。在低温条件下(R)-AC 和(S)-AC之间的转化速度显著降低。
2.4pH对(R)-AC和(S)-AC之间转化的影响
实验将AC粗馏液用盐酸和氢氧化钠调整至不同的pH，分别放置40℃、 60℃、80℃保温4小时，然后测定料液中(R)-AC和(S)-AC含量，计算R/S 比值，考察pH对两种AC光学异构体转化的影响，结果如图4所示。当体系pH低于3.0或高于9.0时，料液中R/S值下降明显，特别是碱性条件下 R/S下降迅速，同时R/S比值下降也和温度呈一定程度的正相关性。这表明，强酸和强碱可加速(R)-AC向(S)-AC的转化，在碱性环境中转化速度更快。在pH3-9范围内，R/S比值变化相对较小，特别是在偏酸性范围内变化更小。在本实施例得AC提取分离的各个阶段，料液pH始终处于3.5-4.5范围内(表2)，所以料液pH应不是引起R/S比值变化的关键因素。
虽然pH不是引起本实施例料液R/S比值变化的关键因素，但强酸和强碱环境都会促使(R)-AC和(S)-AC之间得转化，因此，在高光学纯度AC得分离提取过程中应维持物料得pH在适当得范围内(3.5-6.5)，否则也会加速变旋现象。
表2.AC提取过程中物料pH变化
2.5高光学纯AC得制备
从上述实验结果可知，低温有利于保留AC光学纯度。实验采取3种方式对萃取液种得乙酸乙酯进行分离：(1)用旋转蒸发仪80℃(水浴温度) 进行减压蒸馏；(2)100mbar减压精馏；(3)先在常压下进行精馏，当料液温度升至80℃时，常压下乙酸乙酯已经不能馏出，然后维持料温在80℃对开始逐步降低系统压力。三种分离方式采用同一物料，相同体积。结果见附图6和表3。结果显示，采用减压蒸馏，不能将乙酸乙酯完全分离，当系统压力持续降低时，AC会和乙酸乙酯一起馏出。采用减压精馏时，将系统压力降至100mbar，室温状态下乙酸乙酯就开始馏出，当料液温度升至 40℃时，乙酸乙酯回收率已接近90％，当料温升至80℃时，可以实现乙酸乙酯完全回收。釜底液中AC的浓度可达97％以上，R/S比值仍保持在28 以上，与萃取液中相当。采用常压精馏时，当料液温度升至77-78℃时，乙酸乙酯开始馏出，随着料液中乙酸乙酯含量的降低，料液温度会逐渐升高，当料温升至80℃时，常压下乙酸乙酯已经不能馏出，此时开始降低系统压力，维持釜底料液温度80℃，乙酸乙酯可以持续馏出，当系统压力降至 100mbar时，乙酸乙酯可回收完全，釜底料液AC浓度可达98％以上，仍维持较高光学纯度(R/S比值与萃取液稍有降低)。通过对三种乙酸乙酯回收方式得比较，采用减压蒸馏虽然操作时间较短，但乙酸乙酯不能完全分离，AC的回收率也比较低，不适合乙酸乙酯回收。直接减压精馏和常压+ 减压精馏工艺相比，R/S比值略高，回收率和AC纯度略低，用时略长。生产中可根据实际情况和运行成本进行优化选择合适工艺。
表3三种蒸馏方式结果比较
AC是最简单的手性α-羟基酮，存在R型与S型两种旋光异构体。光学纯AC因其独特的立体结构而在合成高附加值手性药物中间体、化学中间体等方面应用前景广阔。化学法生产AC为(R)-AC与(S)-AC混合的外消旋产品。通过生物技术可以实现高纯度(R)-AC或(S)-AC的合成，发酵液中 AC的光学纯度可达98％以上。在前期工作中，发明人发现含有较高光学纯度的AC发酵液，经一系列分离提纯获得的AC固体为外消旋产物，本发明发现是提取过程的高温过程促使了(R)-AC相(S)-AC的转化，并最终达到平衡。通过控制提取过程温度可以有效抑制(R)-AC和(S)-AC之间的转化，制得高光学纯度的AC产品。
实施例2(S)-AC转化(R)-AC实验
从sigma试剂公司购买(S)-AC标准试剂，用0.005mol/L的pH4.0的醋酸缓冲液配制成20g/L的溶液，然后置120℃保温，定时分析溶液中(S)-AC 和(R)-AC含量，计算二者浓度比值S/R。结果见表4。可以看出，高温也会使(S)-AC转化为(R)-AC，说明在高温条件下(R)-AC和(S)-AC会相互转化，这种转化是相互的、动态的。
表4(S)-AC转化(R)-AC实验
应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种高光学纯度3-羟基丁酮的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括从含有3-羟基丁酮的发酵液或水溶液或其他介质中分离提纯3-羟基丁酮，制备过程中保持物料pH为弱酸性、中性或弱碱性，同时避免高温环境；其中，所述含有3-羟基丁酮的发酵液或水溶液或其他介质中的3-羟基丁酮为高光学纯度的AC((R)-AC或(S)-AC)。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述pH为3-9，温度控制为整个制备过程温度不高于80℃。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，含有高光学纯度的AC的发酵液或水溶液或其他介质通过微生物发酵法、酶法或者其他任何已知方法获得。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，包括：所述高光学纯度3-羟基丁酮的制备方法包括：将含有3-羟基丁酮的发酵液经过滤得除菌体发酵液；将所述除菌体3-羟基丁酮发酵液经减压蒸馏，收集粗馏液，然后加入乙酸乙酯进行萃取，收集萃取液，通过精馏的步骤回收萃取液中的乙酸乙酯，即得高光学纯度3-羟基丁酮；其中，控制制备方法各步骤中温度均不高于80℃。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，控制各步骤中的料液pH为3-9；优选为3.5-6.5。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，将除菌体后的3-羟基丁酮发酵液经减压蒸馏的具体方法为：在不高于80℃(如60-70℃)、100-150mbar条件下减压蒸馏，收集粗馏液(3-羟基丁酮的水溶液)。
7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述加入乙酸乙酯进行萃取的具体方法包括：向粗馏液中加入20-30％(优选为25％，w/v)的硫酸钠至完全溶解，然后加入2-3倍体积量的乙酸乙酯进行3-羟基丁酮萃取，收集萃取液。
8.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，通过精馏的步骤回收萃取液中的乙酸乙酯具体方法包括：采用常压精馏和/或减压精馏方式从萃取液中回收乙酸乙酯，并收集精馏液。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，采用常压精馏当料液温度升至80℃，乙酸乙酯不再馏出时开始降低系统压力，维持釜底料液温度80℃，乙酸乙酯持续馏出，当系统压力降至100mbar时，乙酸乙酯可回收完全；直接采用减压精馏，将系统压力降至100mbar，室温状态下乙酸乙酯开始馏出，当料温升至80℃时，实现乙酸乙酯完全回收，并维持3-羟基丁酮的高光学纯度。
10.权利要求1-9任一项所述制备方法在高光学纯度3-羟基丁酮工业化生产中的应用。
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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