CN115105603B - MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂在制备治疗实体肿瘤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种MCL‑1抑制剂和BCL‑xL抑制剂在制备治疗实体肿瘤药物中的应用，本发明首次揭示，将MCL‑1抑制剂和BCL‑xL抑制剂联合应用，对于实体肿瘤具有极其优异的抑制效果。通过联合用药，可以达到抑制更多实体肿瘤细胞的目的。

Description

MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂在制备治疗实体肿瘤药物中的 应用

技术领域

本发明涉及抗肿瘤技术领域，具体涉及一种MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂在制备治疗实体肿瘤药物中的应用。

背景技术

细胞凋亡调控：细胞凋亡(Apoptosis)是一种程序性细胞死亡过程。由于其关系到细胞的存活，细胞凋亡受到多基因多层面的精密调控。细胞凋亡主要分为内源和外源性细胞凋亡。其中，内源性细胞凋亡又称为线粒体凋亡通路，在肿瘤细胞死亡中扮演了极其重要的角色。线粒体凋亡主要受到B细胞淋巴瘤-2(B-cell Lyphoma-2，BCL-2)蛋白家族调控。该家族可分为三个亚族。第一亚族为凋亡的效应分子，包括BCL-2相关X蛋白(BCL-2associated X，BAX)，BCL-2同源拮抗杀伤分子(BCL-2homologous antagonist killer，BAK)以及新近发现的BCL-2相关卵巢杀伤分子(BCL-2related ovarian killer，BOK)。此族分子可在线粒体外膜聚集并激活，然后同源寡聚化在线粒体外膜形成孔状结构，导致线粒体外膜通透化(Mitochondrial outer membrane permeabilization，MOMP)而释放细胞色素C(cytochrome C)进而激活下游半胱氨酸蛋白酶级联通路而杀伤细胞。第二亚族是主要的调节蛋白，称为BH3单结构域蛋白(BH3 only proteins)，显然不同于其它两个亚族，此族分子因为只有一个BH3结构域而得名。该族的主要功能是在细胞受到应激或凋亡信号时上调表达或活化而诱导细胞凋亡。第三亚族为抗凋亡BCL-2分子(Anti-apoptotic BCL-2proteins)，主要包括BCL-2、BCL-xL、BCL-w以及MCL-1等等。顾名思义，此类分子通过阻断凋亡效应分子在线粒体外膜聚集以及活化而阻断MOMP，进而抑制凋亡的发生，是调控细胞凋亡阈值维持细胞存活的主要分子。近年来，大量研究表明，多种肿瘤细胞上调抗凋亡BCL-2分子的表达或活性而增加了其细胞凋亡的阈值，使得其更易存活，并使其对各种不利的应激因子或放化疗的耐受力大幅增加，而诱导肿瘤细胞对治疗的无应答。

显而易见，靶向抑制抗凋亡BCL-2分子具有特异性杀伤肿瘤细胞的作用，因此基于该理论而针对血液系统肿瘤开发的多种靶向抑制抗凋亡BCL-2分子的化合物，如BCL-2抑制剂Venetoclax以及多靶点BCL-2BCL-xL及BCL-w抑制剂Navotoclax在多种亚型的白血病和淋巴瘤中显示出较好的抗肿瘤活性，该类小分子抑制剂被称为BH3类似物。该类化合物主要在功能上模拟内源性BH3 only proteins，通过特异性阻断抗凋亡BCL-2分子而诱导肿瘤细胞凋亡。

然而相较于血液肿瘤，实体肿瘤对于抗凋亡BCL-2分子成员的依赖性不同。现有BH3类似物，主要单一抑制BCL-2，BCL-xL或MCL-1等某一个成员或几个不相关成员，从而导致其在实体肿瘤中的杀伤效率远低于血液肿瘤。此外，同样因为依赖性问题，大量临床及临床试验数据显示现有BH3类似物对一些正常细胞，如造血细胞，尤其是血小板，以及其他一些正常上皮细胞，也存在毒性，从而引起一些临床相关副反应，进而限制了此类药物的临床应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂在制备治疗实体肿瘤药物中的应用，以解决现有单一抑制剂对实体肿瘤中的杀伤效率远低于血液肿瘤的问题，同时避免抑制与正常细胞相关的成员，能极大程度的提高特异性针对实体肿瘤杀伤的效率，且同时降低毒副作用的发生。

第一方面，本发明提供一种MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂的用途，用于制备治疗实体肿瘤的混合物、药物组合物或药盒。

上述技术方案中，1.BCL-xL抑制剂和MCL-1抑制剂联合使用时不仅能够抑制实体肿瘤BCL-xL分子功能，而且还能够抑制实体肿瘤MCL-1分子功能，会阻断代偿保护机制，而更高效地诱导实体肿瘤细胞凋亡而杀伤肿瘤细胞。2.BCL-xL抑制剂和MCL-1抑制剂具有明显地协同作用，能够降低抑制剂的使用量，在达到相同效果的基础上还能降低治疗成本，值得临床推广使用。

作为一种可能的实施方式，所述MCL-1抑制剂包括特异性抑制MCL-1的小分子化合物；特异性干扰MCL-1基因表达的干扰分子；特异性敲除MCL-1基因的基因编辑试剂；或特异性与MCL-1基因编码的蛋白结合的抗体或配体；或特异性诱导MCL-1降解的蛋白降解诱导剂。

作为一种可能的优选实施方式，所述BCL-xL抑制剂包括特异性抑制BCL-xL的小分子化合物；特异性干扰BCL-xL基因表达的干扰分子；特异性敲除BCL-xL基因的基因编辑试剂；或特异性与BCL-xL基因编码的蛋白结合的抗体或配体；或特异性诱导BCL-xL降解的蛋白降解诱导剂。

作为一种可能的实施方式，所述实体肿瘤选自非小细胞肺癌、结直肠癌、乳腺癌、头颈肿瘤、胰腺癌、恶性黑色素瘤、淋巴瘤、宫颈癌或儿童实体恶性肿瘤。

第二方面，本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物中含有效量的MCL-1抑制剂和有效量的BCL-xL抑制剂，以及药学上可接受的载体；所述药物组合物用于治疗实体肿瘤。

作为一种可能的实施方式，所述MCL-1抑制剂包括特异性抑制MCL-1的小分子化合物；特异性干扰MCL-1基因表达的干扰分子；特异性敲除MCL-1基因的基因编辑试剂；或特异性与MCL-1基因编码的蛋白结合的抗体或配体；或特异性诱导MCL-1降解的蛋白降解诱导剂。

作为一种可能的优选实施方式，所述BCL-xL抑制剂包括特异性抑制BCL-xL的小分子化合物；特异性干扰BCL-xL基因表达的干扰分子；特异性敲除BCL-xL基因的基因编辑试剂；或特异性与BCL-xL基因编码的蛋白结合的抗体或配体；或特异性诱导BCL-xL降解的蛋白降解诱导剂。

作为一种可能的实施方式，所述的药物组合物的剂型为注射剂、输液剂、片剂、胶囊剂或丸剂。

第三方面，一种药盒，所述药盒中，含有：

MCL-1抑制剂；以及

BCL-xL抑制剂；

所述药盒用于治疗实体肿瘤。

作为一种可能的实施方式，所述的药盒中，所述MCL-1抑制剂包括特异性抑制MCL-1的小分子化合物；特异性干扰MCL-1基因表达的干扰分子；特异性敲除MCL-1基因的基因编辑试剂；或特异性与MCL-1基因编码的蛋白结合的抗体或配体；或特异性诱导MCL-1降解的蛋白降解诱导剂。

作为一种可能的实施方式，所述的药盒中，所述BCL-xL抑制剂包括特异性抑制BCL-xL的小分子化合物；特异性干扰BCL-xL基因表达的干扰分子；特异性敲除BCL-xL基因的基因编辑试剂；或特异性与BCL-xL基因编码的蛋白结合的抗体或配体；或特异性诱导BCL-xL降解的蛋白降解诱导剂。

附图说明

图1为联合使用MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂杀伤实体肿瘤的原理图；

图2为MCL-1抑制剂和/或BCL-xL抑制剂对非小细胞肺癌、结直肠癌、乳腺癌以及头颈肿瘤的体外毒副作用曲线图；

图3为MCL-1抑制剂和/或BCL-xL抑制剂对胰腺癌、恶性黑色素瘤、淋巴瘤、宫颈癌以及儿童实体恶性肿瘤的体外毒副作用曲线图；

图4为MCL-1抑制剂和/或BCL-xL抑制剂对不同种类实体肿瘤的体外诱导凋亡的曲线图；

图5为MCL-1抑制剂和/或BCL-xL抑制剂对不同种类实体肿瘤的体内抑制肿瘤长大的曲线图。

具体实施方式

为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

在本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有实施方式以及优选实施方式可以相互组合形成新的技术方案。

在本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有技术特征以及优选特征可以相互组合形成新的技术方案。

在本发明中，除非有其他说明，数值范围"a～b”表示a到b之间的任意实数组合的缩略表示，其中a和b都是实数。例如数值范围"0～5”表示本文中已经全部列出了“0～5”之间的全部实数，“0～5”只是这些数值组合的缩略表示。

BCL-xL抑制剂

如本文所用，所述“BCL-xL抑制剂”包括了BCL-xL的活性或功能抑制剂，也包括了BCL-xL的核酸抑制物、拮抗剂、抑制剂、阻滞剂、阻断剂等，只要它们能够下调BCL-xL的表达水平、抑制BCL-xL的活性或功能。它们可以是化合物、小分子化合物、生物分子。所述的生物分子可以是核酸水平(包括DNA、RNA)的，也可以是蛋白水平的。

本发明中，所述“BCL-xL抑制剂”可以是多种可降低BCL-xL的活性、降低BCL-xL的稳定性、下调BCL-xL的表达、减少BCL-xL有效作用时间的物质，这些物质均可用于本发明，作为对于下调BCL-xL有用的物质，从而可用于缓解或治疗肿瘤。例如，所述的BCL-xL抑制剂可以是：核酸抑制物、蛋白抑制剂、抗体、配体、化合物、核酸酶、核酸结合分子等，前提是其能够下调BCL-xL的表达、抑制其活性或功能。

本申请所述的BCL-xL抑制剂可通过市售渠道获得，也可通过现有技术获得。例如A-1155463、ABT-737、Navitoclax(ABT-263)、A-1331852、WEHI-539HCl等，所述BCL-xL抑制剂可根据BCL-xL分子结构通过生物、化学及计算机技术合成制备或从化合物库中筛选。蛋白降解诱导剂可根据BCL-xL分子结构通过生物、化学及计算机技术等结合泛素化蛋白降解系统链接子而合成制备。基因编辑相关药物可根据BCL-xL基因序列通过设计siRNA、shRNA或者gRNA-Cas9-CRISPR等技术手段实现。

作为本发明的可选方式，所述的BCL-xL抑制剂是特异性抑制BCL-xL的小分子化合物，包括但不限于：

在本发明中，所述的小分子化合物可以是纯净形式存在的化合物，或纯度大于85％(较佳地大于90％，例如大于95％，98％，99％)的化合物。

在得知其化学结构的情况下，所述的小分子化合物可通过化学合成的方式获得。本发明还包括化合物的前体，所述的“前体”指当用适当的方法服用后，该化合物的前体在病人体内进行代谢或化学反应而转变成具有活性的该化合物。

MCL-1抑制剂

如本文所用，所述“MCL-1抑制剂”包括MCL-1的活性或功能抑制剂，也包括了MCL-1的核酸抑制物、拮抗剂、抑制剂、阻滞剂、阻断剂等，只要它们能够下调MCL-1的表达水平、抑制MCL-1的活性或功能。它们可以是化合物、小分子化合物、生物分子。所述的生物分子可以是核酸水平(包括DNA、RNA)的，也可以是蛋白水平的。

本发明中，所述“MCL-1抑制剂”可以是多种可降低MCL-1的活性、降低MCL-1的稳定性、下调MCL-1的表达、减少MCL-1有效作用时间的物质，这些物质均可用于本发明，作为对于下调MCL-1有用的物质，从而可用于缓解或治疗肿瘤。例如，所述的MCL-1抑制剂可以是：核酸抑制物、蛋白抑制剂、抗体、配体、化合物、核酸酶、核酸结合分子等，前提是其能够下调MCL-1的表达、抑制其活性或功能。

本申请所述的MCL-1抑制剂可通过市售渠道获得，也可通过现有技术获得。例如AZD5991、S63845、S64315(MIK665)、VU661013、A-1210477等，所述MCL-1抑制剂可根据MCL-1分子结构通过生物、化学及计算机技术合成制备或筛选。蛋白降解诱导剂可根据MCL-1分子结构通过生物、化学及计算机技术等结合泛素化蛋白降解系统链接子而合成制备。基因编辑相关药物可根据MCL-1基因序列通过设计siRNA、shRNA或者gRNA-Cas9-CRISPR等技术手段实现。

作为本发明的可选方式，所述的MCL-1抑制剂是特异性抑制MCL-1的小分子化合物，包括但不限于：

在本发明中，所述的小分子化合物可以是纯净形式存在的化合物，或纯度大于85％(较佳地大于90％，例如大于95％，98％，99％)的化合物。

在得知其化学结构的情况下，所述的小分子化合物可通过化学合成的方式获得。本发明还包括化合物的前体，所述的“前体”指当用适当的方法服用后，该化合物的前体在病人体内进行代谢或化学反应而转变成具有活性的该化合物。

MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合应用

本发明提供一种联合用药的方法，包括利用靶向MCL-1的抑制剂联合靶向BCL-xL的抑制剂的用药方法。

本发明通过前期大量研究得出：与血液肿瘤不同的是，实体肿瘤表达更高BCL-xL分子，不或低表达BCL-2分子，然而在单独使用BCL-xL抑制剂抑制实体肿瘤细胞BCL-xL时，会诱导代偿反应而提高另一抗凋亡分子MCL-1的表达或抑制其降解，进而使得实体肿瘤细胞在BCL-xL抑制剂的作用下得以存活。

本发明通过联合使用MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂，不仅能够抑制实体肿瘤细胞BCL-xL分子的表达，而且还能够抑制MCL-1的表达或促进其降解，达到阻断代偿保护机制的目的，从而更高效地诱导实体肿瘤细胞凋亡而杀伤肿瘤细胞(如图1所示)。

在体外对实体肿瘤杀伤的IC50都在十到百微摩尔级别，而两者联合使用时，IC50可以降低到十至百纳摩尔级别，由此可知，MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂之间具有明显的协同作用和两者联合使用具有很强的诱导能力，并且单独使用BCL-xL抑制剂或者MCL-1抑制剂的抑瘤效果极为有限，而联合使用可以极大提高抑瘤效率。

本发明中，所述“IC50”是指一定浓度的某种药物诱导肿瘤细胞凋亡50％，该浓度称为50％抑制浓度，即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50％时所对应的浓度。另外，IC50值可以用来衡量药物诱导凋亡的能力，即诱导能力越强，该数值越低。

本发明中，将MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂能够避免抑制与正常细胞相关的成员，能极大程度的提高特异性针对实体肿瘤杀伤的效率，且同时降低毒副作用的发生。

基于上述效果，本发明提供了MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂的用途，用于制备治疗实体肿瘤的混合物、药物组合物或药盒。

在给药时，可以先利用MCL-1抑制剂下调MCL-1分子的表达或活性，再以Bcl-xL抑制剂抑制Bcl-xL分子的表达；或者也可同时进行。应理解，多种给药方式均被包含在本发明中，例如：所述MCL-1抑制剂和所述BCL-xL抑制剂混合在一起制备成单一制剂使用，或者物理上分离使用。

组合物或混合物

本发明提供一种组合物，所述组合物包括MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂。

本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物中含有效量的MCL-1抑制剂和有效量的BCL-xL抑制剂，以及药学上可接受的载体；所述药物组合物用于治疗实体肿瘤。

本发明中，术语“含有”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。

本发明中，“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。

本发明中，“药学上可接受的载体”是用于将本发明的活性组分传送给动物或人的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。“药学上可接受的载体”可以是液体或固体。

本发明的药物组合物或混合物可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式。剂型可以是多种多样的，只要是能够使活性成分有效地到达哺乳动物体内的剂型都是可以的。比如可选自：注射剂，输液剂，片剂，胶囊剂，丸剂。其中活性组分可以存在于适宜的固体或液体的载体或稀释液中。

所述MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂的有效剂量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。必要的时候，所述MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂还可与其它活性成分或药物联合给药。

药盒

本发明还提供一种用于治疗实体瘤的药盒，所述药盒中，含有MCL-1抑制剂；以及BCL-xL抑制剂；所述药盒用于治疗实体肿瘤。

MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂的具体选用和含量如前述。

本发明中，所述实体肿瘤选自但不限于选自非小细胞肺癌、结直肠癌、乳腺癌、头颈肿瘤、胰腺癌、恶性黑色素瘤、淋巴瘤、宫颈癌或儿童恶性实体肿瘤。

此外，所述的药盒中还可以还有一些辅助用药的材料，例如注射用针管等。

此外，所述的药盒中还可含有使用说明书，说明治疗肿瘤的耐药性的方法。

实施例

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1

本实施例针对体外抑制试验用于研究抑制剂的浓度与细胞活力的关系(即毒性作用)，一共设置9组不同种类的实体肿瘤，分别是非小细胞肺癌、结直肠癌、乳腺癌、头颈肿瘤、胰腺癌、恶性黑色素瘤、淋巴瘤、宫颈癌以及儿童实体恶性肿瘤。

针对上述不同种类的实体肿瘤，分别设置实验组和对照组，其中实验组采用摩尔比为1:1的MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用，具体为将两者混合形成混合物，待用。对照组：分别采用MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂单独使用。具体的实验步骤如下：

所有细胞系均按照相应培养需要培养，胰酶消化后计数。96孔板每孔铺肿瘤细胞2000个培养过夜。BCL-xL抑制剂A-1155463和MCL-1抑制剂AZD5991处理48小时单独和联合滴定，Cell Titer Blue测定细胞活力，相对细胞活力均相对于DMSO对照孔。

实验结果如图2和图3所示，图中的横坐标表示抑制剂的浓度，纵坐标表示细胞的存活能力；图2中，A图中的三幅图表示在不同的非小细胞肺癌中的应用情况；B图中4副图表示在不同的结直肠癌中的应用情况；C图中2副图表示在不同的乳腺癌中的应用情况；D图中2副图表示在不同的头颈肿瘤中的应用情况；图3中，E图中2副图表示在不同的胰腺癌中的应用情况；F图表示在恶性黑色素瘤中的应用情况；G图表示在淋巴瘤中的应用情况；H图中2副图表示在不同的宫颈癌中的应用情况；i图中3副图表示在不同的儿童实体恶性肿瘤中的应用情况。

由图2和图3可知，将MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用在体外治疗实体肿瘤的效果明显优于单独使用两者中一种的效果，并且在细胞活力为50％左右时，两者联合使用的用量明显小于两者单独使用的量，由此可知，将MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用具有明显抑制实体肿瘤的活力，从而达到治疗实体肿瘤相关疾病的效果，也可得知，联合使用的特异性更好，那么对正常细胞的杀伤能力就会减弱，因此联合使用还能降低对正常细胞的毒副作用。

实施例2

本实施例的目的在于研究MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用治疗不同种类的实体肿瘤时的协同作用情况。

本实施例中MCL-1抑制剂为AZD5991，BCL-xL抑制剂为A-1155463。

本实施例所使用的实体肿瘤的具体种类见表1，实验过程中联合使用时MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂的摩尔比为1:1，Cell Titer Blue测定细胞活力。相对细胞活力均相对于DMSO对照孔。实验过程与实施例1相同，此处不再赘述。

本实施例中的IC50由滴定曲线计算(单位纳摩尔nM)。BLISS评分由多药联用效应计算软件synergyfinder线上计算网站计算，其中评定标准中：BLISS评分大于10被认定为协同效应，0～10为叠加效应，小于0为拮抗效应。

表1

由表1可知，针对不同的实体肿瘤，采用MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用，BLISS评分均大于10，由此可知，采用MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用具有明显的协同效用，并且还能够明显可知，采用MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用的用量明显低于单独使用的用量(IC50)，由此也可以减小对正常细胞的毒副作用，降低了肿瘤相关疾病的治疗费用。

对比例

与实施例2不同的是，本对比例中采用BCL-2抑制剂和/或MCL-1抑制剂使用，治疗不同种类的实体肿瘤时的协同作用情况。

本对比例中MCL-1抑制剂为AZD5991，BCL-2抑制剂为Venetoclax(ABT-199)。

本对比例所使用的实体肿瘤的具体种类见表2，实验过程中联合使用时MCL-1抑制剂和BCL-2抑制剂的摩尔比为1:1，Cell Titer Blue测定细胞活力。相对细胞活力均相对于DMSO对照孔。实验过程与实施例2相同，此处不再赘述。

本对比例中的IC50由滴定曲线计算(单位纳摩尔nM)。BLISS评分由多药联用效应计算软件synergyfinder线上计算网站计算，其中评定标准中：BLISS评分大于10被认定为协同效应，0～10为叠加效应，小于0为拮抗效应。

表2

由表2此可知，当采用MCL-1抑制剂和BCL-2抑制剂联合使用体外治疗实体肿瘤时，除了对HUTU80有少些的协同作用以外，对其它已研究的实体肿瘤的抑制均没有协同作用，仅仅是效果的叠加。

由表1和表2对比可知，在实体肿瘤的抑制中，MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用具有明显的协同作用，即使对HUTU80的抑制作用也远远高于MCL-1抑制剂和BCL-2抑制剂联合使用的协同效应，由此可知，本发明采用MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用对实体肿瘤的抑制具有良好的应用前景。

实施例3

本实施例在于检测用MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用或两者单独使用，诱导细胞凋亡的能力测试。

本实施例中MCL-1抑制剂为AZD5991，BCL-xL抑制剂为A-1155463。

实验过程中联合使用时MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂的摩尔比为1:1，所使用的实体肿瘤的具体种类为：NCI-H1299、HT55以及C-33A。实验步骤与实施例1大致相同，此处不再赘述，仅有的区别点仅是在实验结束后采用活化的Caspase 3分子探针染色后，流式细胞术测定活化Caspase 3细胞比例，用活化Caspase 3作为凋亡诱导标记。

实验结果见图4，由图4中对三种实体肿瘤的诱导凋亡图可知，采用MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用诱导凋亡的效果远远大于单独使用的效果，由此可知，MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用在治疗实体肿瘤中具有实际的应用潜力。

实施例4

本实施例主要研究的是体内效果实验。

本实施例中MCL-1抑制剂为AZD5991，BCL-xL抑制剂为A-1155463。

本实施例的实验步骤包括：

裸鼠移植瘤测定。雌性裸鼠分组成8组，每组7只，每只裸鼠的体重为20克，其中4组裸鼠均接种NCl-H1299肿瘤细胞和另4组接种HT55肿瘤细胞，待肿瘤生长到100立方毫米开始腹腔给药。DMSO溶剂对照、10mpk MCL-1抑制剂或BCL-xL抑制剂单独以及联合给药。每周给药三次，共给药三周，给药时及给药后每三天测量肿瘤大小。肿瘤比例计算：实际肿瘤大小/第一次给药0天肿瘤大小。结果见图5。

由图5可知，采用MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用，在体内实验过程中，其效果也远远优于两者单独使用的效果，由此可知，MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂联合使用无论是在体内还是在体外对实体肿瘤均具有良好的抑制作用，具有临床应用的潜力。

以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种MCL-1抑制剂和BCL-xL抑制剂的用途，用于制备治疗实体肿瘤的混合物、药物组合物或药盒；

所述实体肿瘤选自非小细胞肺癌、乳腺癌、头颈肿瘤、胰腺癌、恶性黑色素瘤、淋巴瘤、宫颈癌、儿童SH-EP、儿童U-2OS或儿童SJCRH30；

所述MCL-1抑制剂和所述BCL-xL抑制剂的摩尔比为1:1；所述MCL-1抑制剂为AZD5991，所述BCL-xL抑制剂为A-1155463。

2.一种如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中含有效量的MCL-1抑制剂和有效量的BCL-xL抑制剂，以及药学上可接受的载体；所述药物组合物用于治疗实体肿瘤；

所述实体肿瘤选自非小细胞肺癌、乳腺癌、头颈肿瘤、胰腺癌、恶性黑色素瘤、淋巴瘤、宫颈癌、儿童SH-EP、儿童U-2OS或SJCRH30；

所述MCL-1抑制剂和所述BCL-xL抑制剂的摩尔比为1:1；所述MCL-1抑制剂为AZD5991，所述BCL-xL抑制剂为A-1155463。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物的剂型为注射剂、片剂、胶囊剂或丸剂。

4.一种如权利要求1所述的药盒，其特征在于，所述药盒中，含有：

MCL-1抑制剂；以及

BCL-xL抑制剂；

所述药盒用于治疗实体肿瘤；

所述实体肿瘤选自非小细胞肺癌、乳腺癌、头颈肿瘤、胰腺癌、恶性黑色素瘤、淋巴瘤、宫颈癌、儿童SH-EP、儿童U-2OS或SJCRH30；

所述MCL-1抑制剂和所述BCL-xL抑制剂的摩尔比为1:1；所述MCL-1抑制剂为AZD5991，所述BCL-xL抑制剂为A-1155463。