CN115015431A - 一种中药制剂中罂粟壳成分的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本公开涉及一种中药制剂中罂粟壳成分的质量控制方法。具体而言，本公开涉及罂粟壳成分的鉴别和含量测定方法，其联合应用固相萃取法和高效液相色谱法，以混合型阳离子交换固相萃取柱吸附待测成分后洗脱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇‑磷酸为流动相，检测波长210nm处的信号。该方法干扰物少，能够准确地测定中药制剂中的吗啡含量。薄层鉴别以环己烷‑丙酮‑乙醇‑浓氨试液展开，以稀碘化必钾试液和过氧化氢试液显色后分别检视，供试品溶液在对照色谱的相应位置显特征斑点。该方法用于罂粟壳成分的鉴别，具有特异性。
Description
技术领域
本公开属于中药质量标准领域，涉及一种中药制剂中罂粟壳成分的鉴别及含量测定方法，具体涉及中药复方制剂湿润烧伤膏中罂粟壳成分的质量控制方法。
背景技术
中药复方软膏制剂，以湿润烧伤膏为例，其由黄连、黄柏、黄芩、地龙、罂粟壳组成。该制剂具有清热解毒、止痛、生肌之功效，用于各种烧、烫、灼伤。湿润烧伤膏为汕头市美宝制药有限公司的独家生产品种，批准文号为国药准字Z20000004。现行标准为国家药品监督管理局国家药品标准(新药试行标准转正式标准)(2002)国药标字Z-169号，标准编号为WS3-043(Z-005)-2002(Z)。
湿润烧伤膏的质量控制项目及检验方法包括：
-性状(目视)；
-鉴别(1)黄连、黄柏(薄层色谱鉴别，比对黄连、黄柏对照药材及盐酸小檗碱对照品)；
-鉴别(2)黄芩(薄层色谱鉴别，比对黄芩对照药材及黄芩素对照品)；
-鉴别(3)罂粟壳(薄层色谱鉴别，比对罂粟壳对照药材及盐酸罂粟碱对照品)；
-检查(熔点、酸值、皂化值、无菌等项目)；
-含量测定(1)黄连、黄柏(高效液相色谱法，测定盐酸小檗碱)；
-含量测定(2)黄芩(高效液相色谱法，测定黄芩素)。
湿润烧伤膏处方中含有罂粟壳，具有收敛止痛的功效，但由于罂粟壳中含有成瘾性成分吗啡，根据国家食品药品监督管理局《关于公布含有兴奋剂目录所列物质药品名单的通知(国食药监办[2008]85号)》湿润烧伤膏为含兴奋剂目录所列物质的中药品种，标签或说明书中标注“运动员慎用”字样。
目前，国家药品标准中没有制定对吗啡的控制指标和含量测定方法。由于湿润烧伤膏为复方中成药，成分复杂，中成药有效成分的分离提取繁琐。以吗啡作为目标物质进行含量测定，吗啡成分含量低，干扰大，一直是药品检验的技术难点。
《中国药典》中罂粟壳品种【含量测定】吗啡项；以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-0.01mol/L磷酸氢二钾溶液-0.005mol/L庚烷磺酸钠溶液(20:40:40)为流动相。该方法存在检测灵敏度低、对色谱柱损坏严重的情况。因此，本领域需要对供试品溶液预处理方法和液相色谱分析条件进行探索研究，以确保药品的安全性。
对罂粟壳的薄层色谱鉴别方法也存在溶液预处理不合适、干扰性大的问题。本领域需要优化薄层色谱展开条件和显色条件，确保药品的安全性。
发明内容
本公开所要解决的技术问题包括：提供一种中药制剂中罂粟壳成分的质量控制方法。
一方面，SPE-HPLC
根据本公开的一方面，提供一种对中药制剂中的罂粟壳成分进行表征的方法。
在本公开中，表征可以是对待测物的定量或定性的描述、鉴定、测量。
在一些实施方案中，一种对中药制剂中的罂粟壳成分进行表征的方法包括步骤：
1)提供中药制剂；
2)使所述中药制剂和第一溶剂接触，得到混合物；
3)使混合物和第二溶剂充分接触并离心，获得上层溶液和下层溶液；
4)使步骤3)所得上层溶液和第二溶剂充分接触并离心，获得上层溶液和下层溶液；
5)合并步骤3)和步骤4)所得下层溶液，并将其上样至固相萃取柱；
6)用盐酸溶液和/或甲醇冲洗所述固相萃取柱；
7)用甲醇-氨水溶液洗脱所述固相萃取柱，收集洗脱液；
8)通过HPLC对所述洗脱液进行检测并定量。
中药制剂是指，为了供临床使用而制成适合于治疗或预防应用的中药形式。对于不同用途，制剂的要求不同，如急症用药时，多采用注射剂、舌下片/丸剂、气雾剂等；缓症用药时，常采用丸、膏、缓释片等；皮肤用药时，多采用软膏等；对于腔道用药时，可用栓剂、线剂或钉剂等。根据药物性质，也需制成不同制剂，如处方中含有毒性和刺激性药物时，宜制成糊丸、蜡丸、缓释片等；某些药物制成液体制剂不稳定时，可制成散剂、片剂、粉针剂或油溶液等。
应当理解，本公开的方法可用确定中药制剂中是否包含罂粟壳或其成分，因为中药制剂涵盖：不含、潜在含有、疑似含有、含有罂粟壳或其成分的中药制剂。在本公开中，中药制剂优选是指包含罂粟壳或其成分的中药制剂。
在具体的实施方案中，所述中药制剂选自以下的任一项：丸剂、散剂、糊剂、酒剂、浸膏剂、油剂、糖浆剂、洗剂、软膏剂；优选软膏剂。
在具体的实施方案中，所述中药制剂是国药准字Z20000004或其更新文号的湿润烧伤膏。
技术人员应当理解，Z20000004是药监管理部门发放的行政许可编号，此号码会随着证件的更新、法律、编号规则的调整而变化。然而，号码变化后所代表的产品标准、产品参数、生产工艺、质量要求是不变的。因此，本公开中Z20000004应理解为Z20000004及其更新文号。
第一溶剂用于溶解中药制剂中的脂溶性成分。
在一些实施方案中，第一溶剂选自以下的任一项或其组合：石油醚、正己烷、环己烷、苯、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇。
在一些具体的实施方案中，第一溶剂是正己烷。
第二溶剂用于溶解中药制剂中的罂粟壳成分。
在一些实施方案中，第二溶剂选自以下的任一项或其组合：丙酮、乙醇、甲醇、或其水溶液。
在一些具体的实施方案中，第二溶剂是甲醇的水溶液。
在一些实施方案中，所述罂粟壳成分选自以下的任一项或其组合：吗啡、罂粟碱、可待因、蒂巴因、那可汀。
在一些具体的实施方案中，所述罂粟壳成分选自以下的任一项或其组合：吗啡、可待因、罂粟碱。
在一些实施方案中，所述固相萃取柱是混合型阳离子交换反相吸附柱。
在一些具体的实施方案中，提供一种对中药制剂中的罂粟壳成分进行表征的方法，包括步骤：
1)提供湿润烧伤膏；
2)在60℃至70℃，按质量体积比1：2至1：4，使湿润烧伤膏和第一溶剂接触，得到混合物；
3)按体积比1：2，使混合物和第二溶剂充分接触并离心(优选4000rpm离心5分钟)，获得上层溶液和下层溶液；
4)按体积比1：2，使步骤3)所得上层溶液和第二溶剂充分接触并离心(优选4000rpm离心5分钟)，获得上层溶液和下层溶液；
5)合并步骤3)和步骤4)所得下层溶液，将其上样至混合型阳离子交换反相吸附柱；
6)用0.1mol/L盐酸溶液、甲醇先后冲洗所述柱；
7)用25:75体积比的甲醇：5％氨水溶液洗脱所述柱，收集洗脱液；
8)通过HPLC对所述洗脱液进行检测并定量，色谱条件为：
-填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；
-吗啡峰洗出前的第一流动相：体积比为2：98的甲醇：0.1％磷酸；
-吗啡峰洗出后的第二流动相：体积比为3：7的第一流动相：乙腈；
-检测波长为210nm。
在一些实施方案中，本公开的方法还包括步骤：在相同的色谱条件下，用HPLC检测对照品。
在一些实施方案中，所述对照品选自以下任一项或组合：吗啡、可待因、罂粟碱。
在一些实施方案中，对照品是有证标准物质。
标准物质是一种已经确定了具有一个或多个足够均匀的特性值的物质或材料，作为分析测量行业中的标尺；在校准测量仪器和装置、评价测量分析方法、测量物质或材料特性值、以及在生产过程中质量控制等领域起作用。
“有证标准物质”是指由权威机构认证的、使用有效程序获得的具有不确定度和溯源性的一个或多个特性值的标准物质。
在一些实施方案中，与对照品的色谱图相比，当中药制剂的色谱图在吗啡对应位置检测到峰时，指示所述中药制剂包含吗啡。
另一方面，质量控制方法
根据本公开的另一方面，提供一种对中药制剂中的罂粟壳成分进行质量控制的方法。
在一些实施方案中，本公开的质量控制方法包括：通过本公开的表征方法对罂粟壳成分进行定量。
在一些实施方案中，通过本公开的表征方法对湿润烧伤膏中的罂粟壳成分进行定量。在一些实施方案中，湿润烧伤膏是国药准字Z20000004或其更新文号的软膏。
在一些实施方案中，湿润烧伤膏中吗啡的含量限制在1.5μg/g至20μg/g之间；优选2μg/g至18μg/g之间。
根据本公开的又一方面，提供一种对中药制剂中的罂粟壳成分进行表征的方法，包括步骤：
1)提供中药制剂；
2)使所述中药制剂和第一溶剂接触，得到混合物；
3)使混合物和第二溶剂充分接触并离心，获得上层溶液和下层溶液；
4)使步骤3)所得上层溶液和第二溶剂充分接触并离心，获得上层溶液和下层溶液；
5)合并步骤3)和步骤4)所得下层溶液，并将其上样至固相萃取柱；
6)用盐酸溶液和/或甲醇冲洗所述固相萃取柱；
7)用甲醇-氨水溶液洗脱所述固相萃取柱，收集洗脱液；
8)用浓氨-甲醇溶液(优选5％浓氨-甲醇溶液)洗脱步骤7)的固相萃取柱，收集洗脱液；
9)将步骤7)的洗脱液和步骤8)的洗脱液合并，得到合并的洗脱液；
10)将所述合并的洗脱液蒸干，用甲醇(优选0.5ml甲醇)复溶得到供试液；
11)将所述供试液上样至硅胶G薄层色谱板，通过环己烷-丙酮-乙醇-浓氨试液(优选体积比为20：20：3：1)展开；先后施加碘化铋钾和30％过氧化氢显色。
在一些实施方案中，本公开的方法还包括步骤：在相同的色谱条件下，用硅胶G薄层色谱板检测对照品；所述对照品选自以下任一项或组合：吗啡、可待因、罂粟碱。
在一些实施方案中，与对照品的薄层色谱条带相比，当中药制剂的薄层色谱条带在吗啡、可待因、或罂粟碱对应位置检测到斑点时，指示所述中药制剂包含吗啡、可待因、或罂粟碱。
附图说明
图1.SPE-HPLC法测试的吗啡对照品溶液的色谱图。
图2.SPE-HPLC法测试的供试品溶液(A)的色谱图。
图3.SPE-HPLC法测试的阴性供试品溶液(A)的色谱图。
图4.湿润烧伤膏的薄层鉴别方法色谱图(喷以稀碘化必钾试液显色)。1：混合对照品溶液(5μl)(自上而下分别为：盐酸罂粟碱、磷酸可待因、吗啡)、2-9：供试品溶液(I)(30μl)、10：阴性供试品溶液(I)(30μl)、11：罂粟壳对照药材溶液(5μl)、12：盐酸罂粟碱对照品溶液(5μl)。
图5.湿润烧伤膏的薄层鉴别方法色谱图(喷以30％过氧化氢溶液显色)。1：混合对照品溶液(5μl)(自上而下分别为：盐酸罂粟碱、磷酸可待因、吗啡)、2-9：供试品溶液(I)(30μl)、10：阴性供试品溶液(I)(30μl)、11：罂粟壳对照药材溶液(5μl)、12：盐酸罂粟碱对照品溶液(5μl)。
具体实施方式
实施例1.仪器与材料
1.仪器：高效液相色谱仪(Agilent 1100，DAD检测器)，高效液相色谱仪(Agilent1260，VWD检测器)，色谱柱(Synergi 4μHydro-RP80A 250×4.6mm)，色谱柱(
LP-C18 4.6×250mm，5μm)，电子分析天平(BP211D，赛多利斯)，台式低速离心机(TDZ4-WS，湘仪)，固相萃取柱(安捷伦Bond Elut Plexa PCX，40μm，200mg，6ml；沃特世Oasis MCX 6cc，150mg，Extraction Cartridges，30μm；浙江月旭Welchrom P-SCX 150mg/6ml，40至60μm)，电热鼓风干燥箱(CS101-3ABN，重庆永生)，暗箱式紫外可见透射反射仪(WFH-201BJ)。
2.对照品：罂粟壳对照药材：(批号120957-201507)；盐酸罂粟碱对照品：(批号171214-201906)；吗啡对照品：(批号171201-201825，标示含量93.6％)；磷酸可待因对照品：(批号171203-201808)，以上均购自中国食品药品检定研究院。
3.试剂试药：甲醇、乙腈(均为色谱纯，Merck)；甲醇、正己烷、盐酸、磷酸、氨水、环己烷、丙酮、乙醇、次硝酸铋、碘化钾、冰醋酸、30％过氧化氢(以上均为分析纯)。
4.供试品：湿润烧伤膏，批号：1800103A等30批次。
5.阴性供试品：实验室自制，按处方分别取除罂粟壳外的其他中药饮片和辅料，按湿润烧伤膏生产工艺制成不含有罂粟壳的阴性供试品，批号：20130704。
实施例2.固相萃取法-高效液相色谱法联用技术(SPE-HPLC法)测定湿润烧伤膏中罂粟壳成分吗啡的含量
1.色谱条件：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸(2：98)为流动相，待吗啡峰洗出后，流动相改为甲醇-0.1％磷酸(2：98)与乙腈(30:70)；检测波长为210nm。
2.供试品溶液(A)的制备：
取湿润烧伤膏4g，精密称定，置具塞螺口离心管中，加入正己烷10ml，65℃水浴加热至膏体溶解，放冷。加入85％甲醇20ml，剧烈振摇2分钟，静置4分钟后离心5分钟(4000转/分钟)，分取下层溶液，上层溶液加入85％甲醇20ml同法萃取一次，合并下层溶液。加载在固相萃取柱(以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，分别用甲醇、水各6ml预洗)上。依次用0.1mol/L盐酸溶液、甲醇各6ml洗脱，弃去洗脱液，继用新制的甲醇：5％氨水溶液(25:75)10ml洗脱，收集洗脱液置10ml量瓶中，加洗脱液至刻度，摇匀，过滤，作为供试品溶液(A)。保留供试品溶液(A)与洗脱后的固相萃取柱供实施例3之用。
3.吗啡对照品溶液的制备：
取吗啡对照品适量，精密称定，加85％甲醇制成每1mL含10μg的溶液，即得。
4.阴性供试品溶液(A)的制备：
照供试品溶液(A)的制备方法，制备阴性供试品溶液(A)。保留阴性供试品溶液(A)与洗脱后的固相萃取柱供实施例3之用。
5.测定法：
分别精密吸取吗啡对照品溶液2μl、供试品溶液(A)、阴性供试品溶液(A)各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
6.特异性：
在阴性供试品溶液(A)的色谱图中无吗啡的色谱峰(图3)。
供试品溶液(A)色谱图(图1)中在与对照品溶液的色谱图(图2)中吗啡色谱峰的相应位置，有吗啡的色谱峰且无杂质峰干扰，说明该方法特异性良好，符合要求。
7.准确度：
(1)测定方法：
制备高、中、低3种不同浓度的供试品溶液，每种浓度分别制备3份供试品溶液进行测定。计算加入吗啡对照品的回收率(％)和RSD。取阴性供试品4g共9份，分别加入5μg/ml，10μg/ml，15μg/ml的吗啡对照品溶液2ml，氮吹至干，按供试品溶液制备方法制备阴性供试品加标溶液，依法测定。
(2)接受标准：
湿润烧伤膏中罂粟壳含量按吗啡(C17H19NO3)计，含量测定的回收率(％)应在80至115％之间，相对标准偏差(RSD％)应小于6％。
(3)测定结果：
经测定，高、中、低3种不同浓度的阴性供试品加标溶液中加入吗啡对照品的回收率分别为85.2％、85.3％、85.7％，RSD分别为1.36％、0.29％、0.28％，说明该方法的准确度良好，符合要求。
8.重复性：
(1)测定方法：
制备3种不同浓度的供试品溶液，采用阴性供试品加入对照品溶液制备，每种浓度分别制备3份供试品溶液进行测定，用9份测定结果进行评价。计算加入吗啡对照品的回收率(％)和RSD。
(2)接受标准：
3种不同浓度供试品溶液测定结果的重复性RSD应小于6％。
(3)测定结果：
阴性供试品溶液中吗啡含量测定的回收率在84.32％至86.48％之间，9份测定结果回收率的RSD为0.76％，说明该方法的重复性良好，符合要求。
相较于药典的对照方法，测量同批次湿润烧伤膏，本公开的方法具有显著提高的重复性(数据未显示)。
9.线性：
依次吸取吗啡浓度分别为1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml的系列对照品溶液各2μl，注入高效液相色谱仪，进行测定，每个溶液各平行进样2针。以对照品浓度(μg/ml)为横坐标，对照品吗啡色谱峰面积的平均值为纵坐标，绘制标准曲线图，计算回归方程及相关系数。
测定结果回归方程为A＝9.37723C+0.53746，相关系数r为0.99998，这表明吗啡在1.12507μg/ml至56.25360μg/ml的浓度范围内线性关系良好。A表示吗啡色谱峰面积；C表示：对照品溶液浓度(μg/ml)。
10.线性范围：
取阴性供试品4g共12份，分别加入高、低2种不同浓度106.8912μg/ml、2.1378μg/ml的吗啡对照品溶液1ml，氮吹至干，按供试品溶液制备方法制备高、低2种不同浓度的阴性供试品加标溶液10ml(待测液中吗啡浓度分别为10.68912μg/ml、0.21378μg/ml，相当于湿润烧伤膏中吗啡含量26.72μg/g、0.53μg/g)，每种浓度分别制备6份供试品溶液进行测定。
经测定，高、低2种不同浓度的阴性供试品加标溶液中吗啡的平均回收率分别为80.8％、85.0％，RSD分别为1.47％、0.79％，因此在供试品溶液中吗啡浓度为0.21378μg/ml至10.68912μg/ml(相当于湿润烧伤膏中吗啡含量测定0.53μg/g至26.72μg/g)的范围内满足方法的精密度、准确度和线性的要求。
11.不同固相萃取柱的影响：
采用三个不同厂家不同规格填料的固相萃取柱(安捷伦Bond Elut Plexa PCX，40μm，200mg，6ml；沃特世Oasis MCX 6cc，150mg，Extraction Cartridges，30μm；浙江月旭Welchrom P-SCX 150mg/6ml，40至60μm)，测定同一批号的供试品含量，计算测定结果的相对标准偏差(RSD)。
经测定，同一批供试品中吗啡含量测定结果分别为4.25μg/g、4.22μg/g、4.24μg/g，平均含量为4.24μg/g，相对标准偏差RSD为0.37％。
12.不同色谱柱的影响：
取同一批供试品溶液，分别用两根不同型号的色谱柱(色谱柱1Synergi 4μHydro-RP 80A 250×4.6mm；色谱柱2
LP-C184.6×250mm，5μm)，进行测定，供试品中吗啡含量分别为4.08μg/g、4.25μg/g，比值为96％，样品峰及分离度均良好，这表明不同色谱柱对测定结果无影响。
13.对照品溶液、供试品溶液稳定性：
取同一份对照品溶液、供试品溶液分别于0h，6h，12h，18h，23h，35h，50h进样测定，待测成分吗啡色谱峰的峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.88％，说明对照品溶液、供试品溶液在50小时内保持稳定。
14.供试品含量测定：
取湿润烧伤膏30批，制备供试品溶液进行测定。经测定，供试品中吗啡含量测定结果在2.54μg/g至16.72μg/g。
实施例3.罂粟壳成分的薄层色谱鉴别
1.供试品溶液(I)的制备：
取实施例2第2中洗脱后的固相萃取柱，加5％浓氨甲醇溶液10ml洗脱，洗脱液与供试品溶液(A)8ml合并，蒸干，滴加1mol/L盐酸1滴使残渣浸润，蒸干，加甲醇溶解至0.5ml，作为供试品溶液(I)。
2.阴性供试品溶液(I)的制备：
取实施例2第4中洗脱后的色谱柱与阴性供试品溶液(A)8ml按上法制备阴性供试品溶液(I)。
3.对照药材溶液的制备：
取罂粟壳对照药材1g，加甲醇20ml，置水浴上加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液分别浓缩至约1ml，作为对照药材溶液。
4.盐酸罂粟碱对照品溶液的制备：
另取盐酸罂粟碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作为盐酸罂粟碱对照品溶液。
5.混合对照品溶液制备(仅作为罂粟壳成分定位用)：
取吗啡、磷酸可待因、盐酸罂粟碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作为混合对照品溶液。
6.薄层鉴别方法特异性：
吸取供试品溶液(I)、阴性供试品溶液(I)各20至30μl，对照药材溶液、对照品溶液和混合对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以环己烷-丙酮-乙醇-浓氨试液(20:20:3:1)为展开剂，展开，取出，晾干；分别喷以稀碘化铋钾试液和30％过氧化氢溶液，检视。
经试验，罂粟壳阴性供试品的薄层色谱相应位置上，未检出罂粟壳对照药材、混合对照品溶液和盐酸罂粟碱的特征斑点；供试品的薄层色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与对照药材色谱、、混合对照品溶液色谱的相应位置上，显三个相同颜色的斑点(图4和图5)。
7.薄层鉴别方法的重复性：
吸取供试品溶液(I)、阴性供试品溶液(I)各20至30μl，对照药材溶液、对照品溶液和混合对照品溶液各5μl，分别点于三个不同厂家的生产的硅胶G薄层板上，使成条状，以环己烷-丙酮-乙醇-浓氨试液(20:20:3:1)为展开剂，展开，取出，晾干；分别喷以稀碘化铋钾试液和30％过氧化氢溶液，检视。
供试品的薄层色谱中，在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与对照药材色谱、混合对照品溶液色谱的相应位置上，显三个相同颜色的斑点。
试验结果，湿润烧伤膏供试品的薄层色谱相应位置上，检出罂粟壳对照药材和盐酸罂粟碱的特征斑点；不同的薄层板无明显影响。
实施例4.对比方法
湿润烧伤膏为复方中成药，成分复杂，中成药有效成分的分离提取繁琐，目标物质成分含量低，干扰大，是药品检验的技术难点。《中国药典》中罂粟壳品种【含量测定】吗啡项下(对照方法)，以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-0.01mol/L磷酸氢二钾溶液-0.005mol/L庚烷磺酸钠溶液(20:40:40)为流动相，该方法检测灵敏度低于本申请实施例2的方法(数据未显示，有统计学显著性)、对色谱柱损坏严重的情况(数据未显示，色谱柱寿命有统计学显著性)。
讨论：
本公开针对被测量物质吗啡等生物碱的理化性质，提供了针对湿润烧伤膏中罂粟壳成分的质量控制方法，优化鉴别和含量测定的供试品溶液的制备方法。该方法简单、快速、高效，集提取、净化、浓缩和预分离为一体，探索合适的液相色谱分析条件进行色谱分离测定，并且会减少了对色谱柱的污染和损坏，提高检测器的灵敏度、提高对待测成分测定结果的准确度和重复性。同时，优化薄层色谱展开条件和显色条件，提高鉴别的特异性。
本公开的质量控制方法采用固相萃取法-高效液相色谱法的联合应用技术，通过改善供试品溶液的制备方法，纯化供试品溶液，富集目标成分，能增加检测器的灵敏度和检测限，保护色谱柱，提高后的质量标准能更好地控制药品的质量，能够有效测定中药制剂中罂粟壳成分吗啡的含量，具有较强的特异性和良好的重复性，有效保证检验结果的准确性。
Claims (9)
1.一种对中药制剂中的罂粟壳成分进行表征的方法，包括步骤：
1)提供中药制剂；
2)使所述中药制剂和第一溶剂接触，得到混合物；
3)使混合物和第二溶剂充分接触并离心，获得上层溶液和下层溶液；
4)使步骤3)所得上层溶液和第二溶剂充分接触并离心，获得上层溶液和下层溶液；
5)合并步骤3)和步骤4)所得下层溶液，并将其上样至固相萃取柱；
6)用盐酸溶液和/或甲醇冲洗所述固相萃取柱；
7)用甲醇-氨水溶液洗脱所述固相萃取柱，收集洗脱液；
8)通过HPLC对所述洗脱液进行检测并定量；
所述第一溶剂选自以下的任一项或其组合：石油醚、正己烷、环己烷、苯、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇；
所述第二溶剂选自以下的任一项或其组合：丙酮、乙醇、甲醇、或其水溶液；
所述罂粟壳成分选自以下的任一项或其组合：吗啡、罂粟碱、可待因、蒂巴因、那可汀；优选地，吗啡、可待因、罂粟碱；
优选地，所述固相萃取柱是混合型阳离子交换反相吸附柱；
优选地，所述中药制剂是选自以下任一项的剂型：软膏剂、丸剂、散剂、糊剂、酒剂、浸膏剂、油剂、糖浆剂、洗剂；优选软膏剂；
优选地，所述中药制剂是湿润烧伤膏。
2.根据权利要求1所述的方法，其包括步骤：
1)提供湿润烧伤膏；
2)在60℃至70℃，按质量体积比1：2至1：4，使湿润烧伤膏和第一溶剂(优选正己烷)接触，得到混合物；
3)按体积比1：2，使混合物和第二溶剂(优选80％甲醇)充分接触并离心(优选4000rpm离心5分钟)，获得上层溶液和下层溶液；
4)按体积比1：2，使步骤3)所得上层溶液和第二溶剂(优选80％甲醇)充分接触并离心(优选4000rpm离心5分钟)，获得上层溶液和下层溶液；
5)合并步骤3)和步骤4)所得下层溶液，将其上样至混合型阳离子交换反相吸附柱；
6)用0.1mol/L盐酸溶液、甲醇先后冲洗所述柱；
7)用25:75体积比的甲醇：5％氨水溶液洗脱所述柱，收集洗脱液；
8)通过HPLC对所述洗脱液进行检测并定量，色谱条件为：
填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；
吗啡峰洗出前的第一流动相：体积比为2：98的甲醇：0.1％磷酸；
吗啡峰洗出后的第二流动相：体积比为3：7的第一流动相：乙腈；
检测波长为210nm。
3.根据权利要求1或2所述的方法，还包括步骤：
在相同的色谱条件下，用HPLC检测对照品；
优选地，所述对照品选自以下任一项或组合：吗啡、可待因、罂粟碱；
优选地，所述对照品是有证标准物质。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中：
与对照品的色谱图相比，当中药制剂的色谱图在吗啡对应位置检测到峰时，指示所述中药制剂包含吗啡。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中：
所述中药制剂是国药准字Z20000004或其更新文号的湿润烧伤膏；
吗啡的含量限制在1.5μg/g至20μg/g之间；优选2μg/g至18μg/g之间。
6.一种对中药制剂中的罂粟壳成分进行表征的方法，包括步骤：
a)提供权利要求1步骤7)中洗脱后所得固相萃取柱；
b)用浓氨-甲醇溶液(优选5％浓氨-甲醇溶液)洗脱所述固相萃取柱，收集洗脱液；
c)将步骤b)的洗脱液和权利要求1步骤7)的洗脱液合并，得到合并的洗脱液；
d)将所述合并的洗脱液蒸干，用甲醇(优选0.5ml甲醇)复溶，得到供试液；
e)将所述供试液上样至硅胶G薄层色谱板，通过环己烷-丙酮-乙醇-浓氨试液(优选体积比为20：20：3：1)展开；先后施加碘化铋钾和30％过氧化氢显色。
7.根据权利要求6所述的方法，还包括步骤：
在相同的色谱条件下，用硅胶G薄层色谱板检测对照品；
优选地，所述对照品选自以下任一项或组合：吗啡、可待因、罂粟碱；
优选地，所述对照品是有证标准物质。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其中：
与对照品的薄层色谱条带相比，当中药制剂的薄层色谱条带在吗啡、可待因、或罂粟碱对应位置检测到斑点时，指示所述中药制剂包含吗啡、可待因、或罂粟碱。
9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其中：
所述中药制剂是国药准字Z20000004或其更新文号的湿润烧伤膏。
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