CN115006515A - 用于预防或治疗脂肪性肝病的组合物 - Google Patents

用于预防或治疗脂肪性肝病的组合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种包含CPNE7蛋白质的用于预防或治疗脂肪性肝病的组合物，具体地，涉及一种包含调节SREBF1(SREBP1)基因的表达的CPNE7蛋白质或对其进行编码的基因的，用于预防或治疗脂肪性肝病的药学组合物、用于预防或缓解脂肪性肝病的医药外品组合物、用于预防或缓解脂肪性肝病的保健功能性食品组合物。

Description

用于预防或治疗脂肪性肝病的组合物
技术领域
本发明涉及一种用于预防或治疗脂肪性肝病的组合物，更为详细地，涉及一种相关于细胞内炎性细胞或脂滴的蓄积根据体内的CPNE7蛋白质或其基因的浓度而进行调节的用于预防或治疗脂肪性肝病的组合物。
背景技术
脂肪肝作为肝内脂肪堆积过多而引起的疾病，定义为因肝内脂肪沉积导致的重量占肝内重量的5％以上的情形。
酒精是脂肪肝的主要成因。据此分类为因饮酒导致的脂肪肝和并非如此的脂肪肝，而前者称为酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver)，后者则称为非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease(NAFLD)。
非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)指的是其脂肪肝的成因并非由酒精而引起的情形，包含从肝内单纯脂肪蓄积(simple steatosis)到脂肪性肝炎(Non-Alcoholic SteatoHepatitis，NASH)、肝硬化(cirrhosis)的所有一系列过程，且众所周知，作为慢性肝病中最常见的疾病，与二型糖尿病、肥胖与代谢综合征密切相关。
非酒精性脂肪肝发展严重会导致非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholicsteatohepatitis，NASH)。脂肪性肝炎相比于单纯的脂肪肝是危险的阶段，如果结合乙型肝炎或其他健康问题，有可能会发展成肝硬化或肝癌。
在单纯性脂肪肝阶段，虽不会出现特别的病理症状，但如果不好好进行管理，单纯性脂肪肝可能会发展成非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化及肝硬化，并诱发严重的并发症，也有极少部分患者发展为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)。
很多研究人员长期投入对于诱发慢性病的转录组的研究，其结果，到目前为止，作为在调节脂肪代谢相关酶的表达方面关键的转录因子，SREBP(Sterol regulatoryelement-binding protein，固醇调节元件结合蛋白)被广为人知。这种SREBPs(Sterolregulatory-element binding proteins，固醇调节元件结合蛋白)基因，也可命名为SREBF1(Sterol regulatory element-binding transcription factor 1，固醇调控元件结合转录因子1)，是初次报道为调节胆固醇生物合成相关基因的启动子和LDL受体(LDLR)途径的转录因子。
从酵母至人类均很好地保存着SREBPs，以控制调节脂质稳态的基因的表达。SREBP有1a、1c及2的3种异构体(isoforms)。众所周知，SREBP-1a与SREBP-1c主要相关于脂肪酸及中性脂肪的合成，SREBP-2相关于胆固醇代谢。尤其，SREBP1c在像肝一样的脂肪生物合成组织中调节脂肪酸和甘油三酯生物合成。相关于脂肪酸的合成的SREBP-1包括作为在核内为了转录而结合的DNA结合部位的胆固醇调节组件1(SRE-1)与E-盒模体(E-box motif)部分。
即便掌握了脂肪肝的成因和严重性，但是由于脂肪肝患者需要通过饮食调节和运动来改善症状，可未能实践的情形居多，为了怀疑有非酒精性脂肪性肝病或具有其的患者而已确立的缓解或治疗剂等实际上是缺失的。
尤其，一般而言，若为具有非酒精性脂肪性肝病的患者，减轻体重虽然是常规的处方，但对于肥胖患者来说，为了减轻体重而有意进行生活习惯的大力改善非常难，因此作为针对非酒精性脂肪性肝病的方案而仅提出减轻体重是不优选的。
因此，为了除了饮食调节和运动之外的实际的脂肪肝治疗，尤其为了非酒精性脂肪肝的治疗，有开发脂肪肝治疗药物的必要性。
在这样的背景下，为了开发出预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的方法，本发明人通过锐意研究努力，结果确认到，当使用CPNE7蛋白质或其基因时，通过调节肝内相关于脂肪酸合成的SREBP1活性，能够预防或治疗脂肪性肝病，从而完成了本发明。
【现有技术文献】
【专利文献】
(专利文献1)KR10-2019-0046705A
发明内容
解决的技术问题
根据本发明的实施例的组合物的目的在于，用于预防脂肪性肝病。
根据本发明的其他实施例的组合物的目的在于，用于治疗脂肪性肝病。
本发明的目的不限于以上提及的内容，本发明所属技术领域的普通技术人员可以从以下记载明确理解未提及的其它目的。
技术方案
为了解决上述的技术课题，根据本发明一实施方式，提供一种药学组合物，所述药学组合物包含CPNE7蛋白质或其基因，用于预防或治疗脂肪性肝病。
其中，药学组合物可调节SREBP1的表达。
其中，药学组合物可调节细胞内炎性细胞或脂滴蓄积。
其中，药学组合物可调节肝细胞中的SREBP1基因(SREBF1)表达。
其中，肝细胞可以为HepG2细胞。
其中，药学组合物可调节肝组织中的细胞质膨胀的肝细胞、炎性细胞或脂滴的蓄积。
其中，药学组合物可还包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
其中，药学组合物可调节肝组织中的选自由小分子代谢过程(small moleculemetabolic process)、脂质代谢过程(lipid metabolic process)、细胞脂质代谢过程(cellular lipid metabolic process)、有机酸代谢过程(organic acid metabolicprocess)、氧化-还原代谢过程(oxidation-reduction metabolic process)、羧酸代谢过程(carboxylic acid metabolic process)、含氧酸代谢过程(oxoacid metabolicprocess)、单羧酸代谢过程(monocarboxylic acid metabolic process)、脂质生物合成过程(lipid biosynthetic process)、脂肪酸代谢过程(fatty acid metabolic process)、类固醇代谢过程(steroid metabolic process)、类固醇生物合成过程(steroidbiosynthetic process)、固醇代谢过程(sterol metabolic process)、胆固醇代谢过程(cholesterol metabolic process)、仲醇代谢过程(secondary alcohol metabolicprocess)、固醇生物合成过程(sterol biosynthetic process)、嘌呤核苷二磷酸代谢过程(purine nucleoside bisphosphate metabolic process)、核苷二磷酸代谢过程(nucleoside bisphosphate metabolic process)、胆固醇生物合成过程(cholesterolbiosynthetic process)及仲醇生物合成过程(secondary alcohol biosyntheticprocess)形成的组中的一种以上的过程。
其中，脂肪性肝病可以为二型糖尿病、肥胖与代谢综合征、肝内脂肪沉积、非酒精性脂肪性肝炎、酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化或肝癌。
根据本发明的另一实施方式，提供一种包含将所述药学组合物给予到除了人类以外的个体的步骤的脂肪性肝病的预防或治疗方法。
根据本发明的再一实施方式，提供一种检测CPNE7蛋白质或其基因的方法，其为了提供诊断脂肪性肝病所需的信息，利用能够检测CPNE7蛋白质或其基因的表达的引物、探针或抗体。
根据本发明的又一实施方式，可提供一种包含CPNE7蛋白质或其基因的用于预防或缓解脂肪性肝病的医药外品组合物。
根据本发明的又一实施方式，可提供一种包含CPNE7蛋白质或其基因的用于预防或缓解脂肪性肝病的保健功能性食品组合物。
发明效果
根据本发明的实施例的组合物，可通过调节细胞内炎性细胞或脂滴蓄积，或者调节肝组织中的细胞质膨胀的肝细胞、炎性细胞或脂滴的蓄积，预防脂肪性肝病。
根据本发明的另一实施例的组合物，可通过抑制细胞内炎性细胞或脂滴蓄积，或者抑制肝组织中的细胞质膨胀的肝细胞、炎性细胞或脂滴的蓄积，以用于治疗脂肪性肝病。
本发明的效果不限于以上提及的内容，本发明所属技术领域的普通技术人员可以从以下记载明确理解未提及的其它效果。
附图说明
图1为通过苏木精-伊红染色分析对照组(WT)和实验组CPNE7基因缺失(CPNE7 KO)小鼠的肝组织的结果。图1A为对作为对照组的正常小鼠的肝组织进行染色的情形，A'为A的放大照片。在对照组中，未观察到像脂滴一样的任何脂肪性肝病的情况。图1B为对作为实验组的CPNE7基因缺失小鼠的肝组织进行染色的情形，B'为B的放大照片，相较于对照组，观察到部分脂滴生成。脂滴以箭头符号表示，图1B'的右侧照片是为了较为确切地显示出脂滴而放大图1B'的方框部分的结果。
图2为利用透射电子显微镜分析对照组(wild type)与实验组CPNE7基因缺失小鼠的肝组织的结果。图2A至图2B为对于对照组的肝细胞进行观察的情形，细胞质没有间隙且也未观察到脂滴。图2C至图2D为对于实验组(CPNE7基因缺失小鼠)的肝细胞进行观察的情形，由于细胞质膨胀而观察到很多间隙，细胞质之间观察到脂滴。箭头符号指脂滴。
图3为分析对照组(wild type)与作为实验组的CPNE7基因缺失小鼠的肝组织中表达的各种基因的RNA碱基序列的结果。图3A为将表达水平近似的群之间进行群集化并以热图(heat map)进行示出的情形。图3B的上图表作为RNA碱基序列分析结果，显示出相比于对照组，实验组中增加或减少2倍以上的基因数，下图表显示出增加或减少2倍以上的基因中的有统计显著性的(p<0.05)基因的数。图3C示出了当以这样的基因作为对象进行基因本体富集(gene ontology enrichment)分析时，生物过程(biological process)领域的前20个项目(top 20term)。红色画底线部分相应于作为脂肪相关处理(process)s的前20个项目(top 20term)中作为50％的10种。
图4为在对照组(wild type)与实验组的CPNE7基因缺失小鼠的肝组织中表达的各种基因的RNA碱基序列分析结果中，比较SREBP1的表达的结果。图4A示出根据RNA碱基序列分析结果，在CPNE7基因缺失小鼠的肝内，作为对于发生非酒精性脂肪性肝病有重要作用的转录因子的SREBP1增加约2倍。图4B示出为了验证RNA碱基序列分析结果，以进行RNA碱基序列分析的样品来进行技术重复(technical repeat)的结果与以其他新的样品来实施生物学重复(biological repeat)的结果。确认到相比于对照组，2种结果均为实验组中的SREBP1得到增加。
图5为在试管(In vitro)内实验中，为了确认CPNE7与SREBP1基因(SREBF1)的相关性，在作为肝细胞株的HepG2细胞转染CPNE7基因，观察SREBP1的基因表达谱的结果。图5A为在HepG2细胞株转染CPNE7基因的结果，确认到，相比于对照组，在转染CPNE7基因的群中CPNE7基因表达增加。图5B为在确认转染CPNE7基因的群中的SREBP1基因(SREBF1)表达时，示出相比于对照组减少的结果的图表。
图6为以苏木精-伊红染色对于对照组(wild type)与作为实验组的CPNE7基因进行过量表达(CPNE7 Tg)的小鼠或CPNE7基因缺失小鼠的肝组织进行分析的结果。图6A为将作为对照组的正常小鼠的肝组织进行染色的结果。图6B为将作为实验组的CPNE7基因过量表达的小鼠的肝组织进行染色的情形，无法确认病理性侧面。图6C为将作为实验组的CPNE7基因缺失小鼠的肝组织进行染色的情形，与对照组或CPNE7过量表达的小鼠的肝组织不同，部分观察到细胞质膨胀的肝细胞(hepatocellular ballooning)与大量的炎性细胞。
图7为在体内(In vivo)实验中以对照组与实验组小鼠的肝组织来分析CPNE7与SREBP1的相关性的结果。从对照组与CPNE7基因过量表达的小鼠或CPNE7基因缺失小鼠的肝组织提取RNA，并检测CPNE7与SREBP1基因(SREBF1)的表达。图7A为示出CPNE7基因表达的图表，图7B为示出SREBP1基因(SREBF1)表达的图表。
具体实施方式
如果参照后面与附图一同详细叙述的实施例，本发明的目的以及效果、用于达成其的技术构成将会明确。在说明本发明方面，当判断认为对公知功能或构成的具体说明可能不必要地混淆本发明要旨时，省略该详细说明。而且，后述的术语作为考虑在本发明中的功能而定义的术语，可根据使用者、运用者的意图或惯例等而有所不同。
但是，本发明并非局限于以下公开的实施例，可以以互不相同的多样形态体现，不过，本实施例是为了使本发明的公开更完整，为了向本发明所属技术领域的普通技术人员完整地告知发明的范畴而提供的，且本发明只由权利要求项的范畴所定义。因此应基于本说明书整体内容而进行该定义。
在本发明中，“脂肪肝”定义为因肝内脂肪沉积导致的重量占肝内重量的5％以上的情形。“非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease)”指的是其中脂肪肝的成因并非由酒精而引起的情形，可定义为包含从肝内单纯脂肪蓄积(simplesteatosis)到脂肪性肝炎、肝硬化的所有一系列过程的术语。
在本发明中，只要“脂肪性肝病”因本发明的CPNE7蛋白质或其基因而表现出治疗效果，将不做特别限制，作为一例，可以为二型糖尿病、肥胖与代谢综合征、肝内脂肪沉积、非酒精性脂肪性肝炎、酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化或肝癌等。
“CPNE7蛋白质”可定义为由CPNE7基因而编码的，作为钙依赖膜结合蛋白质的顶盖蛋白(copine)家族之一。所述蛋白质含有2个N-末端c2结构域及一个血管性血友病(vonwillebrand)因子A结构域。为了实现本发明的目的，只要能够达到本发明的效果，可以使用各种来源和/或形态的CPNE7基因和/或蛋白质。不论野生型序列，还是细胞内的表达或蛋白质的稳定性等特征，为了对其有利，包含碱基序列的一部分被人为变形的基因、及天然的被发现的碱基序列的部分变形的基因或这些全部的片段。
在本发明中，CPNE7蛋白质的基因碱基序列的变形可伴随或可不伴随相应的氨基酸的变形，当伴随氨基酸的变形时，诱发这种变形的基因对于蛋白质进行编码，其中所述蛋白质由因所述基因而编码的蛋白质中的一个以上的氨基酸被取代、缺失、附加和/或插入的氨基酸序列而形成，可包含突变体(mutants)、衍生物(derivatives)、等位基因(alleles)、变异体(variants)及同源物(homologues)。
当基因碱基序列的变异不伴随蛋白质中的氨基酸的变形时，例如可存在简并突变，这种简并突变体(degeneracy mutants)也可包含在本发明的所述基因。
人为的基因碱基序列的变形，可通过所述技术领域的普通技术人员所知的方法，例如，定点突变(sitedirected mutagenesis,Kramer et al,1987)、易错PCR(Cadwell,R.C.and G.F.Joyce.1992.PCR methods Appl.,2:28-33.)、点突变(萨姆布鲁克和拉塞尔，《分子克隆:实验室手册》，第3版，2001年，冷泉港实验室出版社(Sambrook and Russel,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,3rd Ed.2001,Cold Spring HarborLaboratory Press.))等而进行制备。
本发明的实施例中使用的蛋白质可用相应领域公知的方法进行制备。在一体现例中的蛋白质的制备方法利用了基因重组技术。
例如，可将包含对所述蛋白质进行编码的相应基因的载体向原核或真核细胞，例如昆虫细胞、哺乳类细胞传递并在表达之后进行清洗使用。所述质粒在例如像pET28b(Novagen)一样的表达载体上克隆相应基因，并转染细胞株后，清洗表达的蛋白质进行使用，但是并非局限于此。合成的蛋白质可以以柱层析进行分离清洗，其中所述柱层析包含沉淀、透析、离子交换层析、凝胶渗透层析、HPLC(高效液相层析)、反相HPLC、准备用SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)、利用筛选蛋白质抗体的亲和柱等。
在根据本发明的一实施例中，CPNE7基因及蛋白质来源于像类人猿、人类等的哺乳动物，尤其来源于人类。CPNE7基因及蛋白质只要能实现其全长或原本的效果，就可使用其片段，全长序列例如作为基因库(GenBank)接入号码，小鼠的情况下可参照NM170684(氨基酸)、NP733785(核酸)，人类的情况下可参照NM014427(氨基酸)、NP055242(核酸)，但并非局限于此。
在根据本发明的一实施例中，为了在所使用的细胞内能够使本发明的组合物进行表达，上述的基因能够以可操作连接于启动子的表达载体的形态提供。
本发明的术语"表达载体"是指，作为能够在目的宿主细胞中表达目的基因的重组载体，意指为了表达基因插入物，包含可操作地连接的必需调节元件的基因构建体。所述表达载体包含起始密码子、终止密码子、启动子、操纵子等的表达调节元件，但所述起始密码子及终止密码子通常被视为对多肽进行编码的核苷酸序列的一部分，并且当给予到基因构建体时必须在个体中呈现作用，并且需与编码序列位于框架中(in frame)。载体的启动子可以为组成型或诱导型启动子。
本发明的术语“可操作地连接(operably linked)”是指为了执行通常的功能使核酸表达调节序列和对目的蛋白质或RNA进行编码的核酸序列功能性地相连接(functionallinkage)的状态。例如，将启动子和对蛋白质或核糖核酸进行编码的核酸序列可操作地连接而可对编码序列的表达产生影响。与表达载体的可操作地连接可利用在本发明所属技术领域中公知的基因重组技术来制备，而位点-特异性DNA切割及连接可使用本发明所属技术领域中通常公知的酶等。
本发明的术语"预防"意指，通过包含本发明的CPNE7蛋白质或其基因的，用于预防或治疗脂肪性肝病的药学组合物的给予，来抑制或延迟脂肪性肝病的发生的所有的行为。
本发明的术语"治疗"是指，通过将作为有效成分包含本发明的CPNE7蛋白质或其基因的药学组合物，给予到需要脂肪性肝病治疗的个体，使得抑制肝中肝细胞的脂肪蓄积，由此执行脂肪性肝病的治疗的所有行为。
本发明的药学组合物可制备成用于治疗脂肪性肝病和/或脂肪肝的药学组合物的形式，所述药学组合物除了所述CPNE7蛋白质或其基因外，还包含在药学组合物的制备中通常所使用的适当的载体(天然的或非天然的载体)、赋形剂或稀释剂。具体地，所述药学组合物可分别按通常的方法以灭菌注射液的形式配制使用，该灭菌注射液可给予到诱发脂肪性肝病和/或脂肪肝的部位。在本发明中，作为可包含于所述药学组合物的载体、赋形剂及稀释剂可例举乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯橡胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油、胶原蛋白等。在制剂化的情况下，可使用通常使用的填充剂、增量剂、结合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂来制备。尤其可包含灭菌水溶液、非水性溶剂、悬浮剂、乳剂、冷冻干燥剂、栓剂、软膏剂(例如，牙髓衬底材料等)等。作为非水性溶剂、悬浮剂可使用植物性油，如丙二醇(propylene glycol)、聚乙二醇、橄榄油等；能够注射的酯，如油酸乙酯等。作为栓剂的基质可使用合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可脂、月桂酸甘油酯脂肪、甘油明胶等。
包含于本发明的药学组合物的所述CPNE7蛋白质或其基因的含量，基于最终组合物总重量，可包含0.0001至50wt％，更优选地可包含0.01至20wt％，但并不特别局限于此。
所述本发明的药学组合物能够以药剂学上有效的量给予，本发明的术语“药剂学上有效的量”是指以可适用于医学治疗或预防的合理的受益/风险比率，对于疾病的治疗或者预防充分的量，可根据包括疾病的严重程度、药物的活性、患者的年龄、体重、健康、性别、患者对药物的敏感度、所使用的本发明组合物的给药时间、给药途径及排出比率、疗程、与所使用的本发明的组合物配合或同时使用的药物的要素及其他在医药领域中公知的要素来确定有效用量水平。本发明的药学组合物可单独给予或可与公知的用于治疗脂肪性肝病和/或脂肪肝的药学组合物组合给予。最重要的是考虑全部所述要素，在无副作用的情况下以最少的量获得最大效果的量进行给药。
本发明所属技术领域的普通技术人员可考虑使用目的、疾病中毒程度、患者的年龄、体重、性别、病史或作为有效成分使用的物质的种类等来确定本发明的药学组合物的给药量。例如，本发明的药学组合物可以每一名成人给予约0.1ng至约100mg/kg，优选地，给予1ng至约10mg/kg，本发明的组合物的给药频率可以为1天给予一次或分剂量1天给予几次，但并不特别局限于此。所述给药量在任意方面都不限定本发明的范围。
作为另一实施方式，本发明提供一种脂肪性肝病的治疗方法，所述脂肪性肝病的治疗方法包括以药剂学上有效的量，将所述药学组合物给予到患有脂肪性肝病的个体的步骤。作为又一实施方式，提供一种脂肪性肝病的治疗方法，所述脂肪性肝病的治疗方法包括以药剂学上有效的量，将所述药学组合物给予到患有脂肪肝的除了人类以外的个体的步骤。
本发明的术语"个体"是指可无限制地包括，包括需要治疗脂肪性肝病和/或脂肪肝的人或除了人以外的小鼠、家畜等的哺乳动物等。
本发明的用于治疗脂肪性肝病和/或脂肪肝的药学组合物的给药途径只要是可达到目的组织，则可通过任意通常的途径来给药。本发明的药学组合物可根据目的通过口腔内给予或口腔内注射等的途径来给予，但不特别局限于此。
作为又一实施方式，本发明提供一种包含所述CPNE7蛋白质或其基因的用于预防或改善脂肪性肝病的医药外品组合物，或提供一种包含所述CPNE7蛋白质或其基因的用于预防或改善脂肪肝的医药外品组合物。
本发明的术语“改善”是指至少减少与所治疗的状态相关的参数，例如，症状的程度的全部行为。
在本发明中，所述改善可作如下解释：将本发明的CPNE7蛋白质或其基因作为有效成分包含的药学组合物给予到需要治疗脂肪性肝病的个体，来抑制肝中肝细胞的脂肪蓄积，从而使脂肪性肝病的症状好转或得到有利改变的全部行为，或者将本发明的CPNE7蛋白质或其基因作为有效成分包含的药学组合物给予到需要治疗脂肪肝的个体，由此抑制肝中的肝细胞的脂肪蓄积，使得脂肪肝的症状好转或得到有利改变的全部行为。
本发明的术语“医药外品”是指在以对人或动物的疾病进行诊断、治疗、改善、减轻、处置或预防的目的使用的物品中，与医药品相比作用轻微的物品，例如根据药事法，医药外品是指除了作为医药品的用途使用的物品以外的物品，包括用于治疗或预防人/动物的疾病的纤维/橡胶产品、对人体的作用轻微或不直接作用的并非为器具或机械的物品和与此类似的物品、用于防止传染病的杀菌/杀虫剂等。
在本发明中，并不特别限定包含所述CPNE7蛋白质或其基因的医药外品组合物的种类或剂型。
作为又一实施方式，本发明提供一种包含所述CPNE7蛋白质或其基因的用于预防或改善脂肪性肝病和/或脂肪肝的保健功能性食品组合物。
本发明的术语“食品”有肉类、香肠、面包、巧克力、糖果类、快餐类、饼干类、比萨、方便面、其他面类、口香糖类、包括冰淇淋类的奶制品、各种汤、饮料、茶、补液、酒精饮料、维生素复合剂、保健功能食品及保健食品等，包括常规意义上的所有食品。
所述保健功能(性)食品(functional food)作为和特定保健用食品(food forspecial health use,FoSHU)相同的术语，是指使之除了供给营养之外，还可以有效地呈现生物体调节功能而加工的医学、医疗效果高的食品。其中，所谓“功能(性)”是指调节营养素(对人体的结构及功能)或在保健用途(如生理学作用等)中取得有用的效果。可通过本发明所属技术领域中通常所使用的方法制备本发明的食品，进行所述制备时可添加通常所添加的原料及成分来制备。并且，作为所述食品的剂型而言，只要是认定为食品的剂型，就可无限制地进行制备。本发明的食品用组合物具有如下优点：能够制备成多种形式的剂型，与普通药品不同，可将食品作为原料，从而没有长期服用药品时可能发生的副作用等，并且便携性优秀，因此本发明的食品可作为用于增进脂肪性肝病和/或脂肪肝的预防或改善的效果的辅助剂来摄取。
所述保健食品(health food)是指与普通食品相比，具有积极的维持健康或增进健康的效果的食品，保健辅助食品(health supplement food)是指健康辅助目的的食品。根据情况，可混用保健功能食品、保健食品、保健辅助食品的术语。
具体地，所述保健功能食品是指将本发明的CPNE7蛋白质或其基因添加于饮料，茶类，香辛料、口香糖类、饼干类等食品材料或作为利用胶囊化、粉末化、悬浮液等制备的食品，在摄取上述食品的情况下，在健康方面带来特定的效果，但是与普通药品不同，将食品作为原料，具有在长期服用药品时不会产生副作用的优点。
本发明的食品组合物可日常摄取，因此可期望对于预防或改善脂肪性肝病和/或脂肪肝的良好效果，由此可非常有用地使用。
所述食品组合物还可包含在生理学上可接受的载体，载体的种类并不受特别限制，只要是在本发明所属技术领域中通常所使用的载体，就都可任意使用。
并且，所述食品组合物可包含可通常用于食品组合物以提高气味、味道、视觉等的添加成分。例如，可包含维生素A、C、D、E、B1、B2、B6、B12、烟酸(niacin)、生物素(biotin)、叶酸(folate)、泛酸(pantothenic acid)等。并且，可包含矿物质，如锌(Zn)、铁(Fe)、钙(Ca)、铬(Cr)、镁(Mg)、锰(Mn)、铜(Cu)、铬(Cr)等。并且，可包含氨基酸，如赖氨酸、色氨酸、半胱氨酸、缬氨酸等。
并且，所述食品组合物可包含食品添加剂(food additives)，如防腐剂(山梨酸钾、苯甲酸钠、水杨酸、脱氢醋酸钠等)、杀菌剂(漂白粉与高效漂白粉、次氯酸钠等)、抗氧化剂(丁基羟基苯甲醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)等)、着色剂(焦油色素等)、显色剂(亚硝酸钠、亚醋酸钠等)、漂白剂(亚硫酸钠)、调料(MSG谷氨酸钠等)、甜味剂(甘素、环己胺磺酸盐、糖精、钠等)、香料(香草醛、内酯类等)、膨胀剂(明矾、D-酒石酸氢钾等)、强化剂、乳化剂、增稠剂(糊料)、被膜剂、胶基础剂、泡沫抑制剂、溶剂、改良剂等。可根据食品的种类筛选并使用适当的量的所述添加物。
本发明的CPNE7蛋白质或其基因可直接添加或与其他食品或食品成分一同使用，并可按照通常方法适当地使用。可根据其使用目的(预防、健康或治疗性处理)适当地确定有效成分的混合量。通常，当制备食品或饮料时，相对于食品或饮料，本发明的食品组合物可添加50重量份以下，具体地，20重量份以下的量。但是，在以健康及卫生为目的长时间摄取的情况下，可包含所述范围以下的量，由于在安全性方面无任何问题，作为有效成分还可使用所述范围以上的量。
作为本发明的食品组合物的一例，可用作保健饮料组合物使用，在上述情况下，可与一般的饮料相同，含有多种香味剂或天然碳水化物等作为添加成分。所述天然碳水化合物可以为单糖，如葡萄糖、果糖；二糖，如麦芽糖、蔗糖；多糖，如糊精、环糊精；糖醇，如木糖醇、山梨醇、赤藓糖醇等。甜味剂可使用天然甜味剂，如奇异果甜蛋白、甜叶菊提取物；合成甜味剂，如糖精、阿斯巴甜等。所述天然碳水化合物的比率在每100mL的本发明的保健饮料组合物中通常可以为约0.01g至0.04g，具体地可以为约0.02g至0.03g。
除了上述之外，保健饮料组合物可包含多种营养剂、维生素、电解质、风味剂、着色剂、果胶酸、果胶酸盐、褐藻酸、褐藻酸盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、乙醇或碳酸化剂等。除此之外，还可包含用于制备天然果汁、果汁饮料或蔬菜饮料的果肉。这种成分可独立使用或混合使用。虽然这种添加剂的比率并不特别重要，但是通常每100重量份的本发明的保健饮料组合物中，在0.01至0.1重量份的范围内进行选择。
若本发明的食品组合物可呈现预防或改善脂肪性肝病和/或脂肪肝的效果，则可以以多种重量百分比包含本发明
Figure BDA0003359160540000121
CPNE7蛋白质或其基因，具体地，基于食品组合物的总重量，可包含0.00001至100wt％或0.01至80wt％的本发明
Figure BDA0003359160540000122
CPNE7蛋白质或其基因，但是并不限定于此。
作为本发明的另一实施方式，提供一种脂肪性肝病的预防或治疗方法，和/或脂肪肝的预防或治疗方法，其包括将包含所述的CPNE7蛋白质或其基因的组合物给予到个体的步骤。
作为又一实施方式，提供一种抑制肝中的肝细胞的脂肪蓄积的方法，和/或抑制SREBP1的表达的方法，其包括将包含所述的CPNE7蛋白质或其基因的组合物给予到个体的步骤。
作为本发明的另一实施方式，提供一种包含以下通式1的氨基酸序列的CPNE7蛋白质或其基因，或者包含所述CPNE7蛋白质或其基因的组合物的肝细胞内炎性细胞或脂滴蓄积的抑制用途及脂肪性肝病或脂肪肝的预防或治疗用途。
根据本发明的一实施例，验证了CPNE7基因的缺失在肝组织中对于脂滴的蓄积的影响。其结果，观察到，与作为对照组的正常小鼠的肝组织不同，CPNE7基因缺失(CPNE7 KO)小鼠的肝组织中生成脂滴。
图1为通过苏木精-伊红染色分析对照组(WT)和实验组CPNE7基因缺失(CPNE7 KO)小鼠的肝组织的结果。图1A为对作为对照组的正常小鼠的肝组织进行染色的情形，A'为A的放大照片。在对照组中，未观察到像脂滴一样的任何脂肪性肝病的情况。图1B为对作为实验组的CPNE7基因缺失小鼠的肝组织进行染色的情形，B'为B的放大照片，相较于对照组，观察到部分脂滴生成。脂滴以箭头符号表示，图1B'的右侧照片是为了较为确切地显示出脂滴而放大图1B'的方框部分的结果。
为了确认根据CPNE7基因缺失的肝细胞的差异，利用透射电子显微镜分析对照组(wild type)和实验组CPNE7基因缺失小鼠的肝组织。对照组(wild type)的肝细胞的细胞质没有间隙且也未观察到脂滴(参照图2A、图2B)。相反，实验组(CPNE7基因缺失小鼠)的肝细胞中，由于细胞质膨胀而观察到很多间隙，细胞质之间观察(箭头符号)到脂滴(参照图2C、图2D)。
根据本发明的实施例的药学组合物可相关于小分子代谢过程(small moleculemetabolic process)、脂质代谢过程(lipid metabolic process)、细胞脂质代谢过程(cellular lipid metabolic process)、有机酸代谢过程(organic acid metabolicprocess)、氧化-还原代谢过程(oxidation-reduction metabolic process)、羧酸代谢过程(carboxylic acid metabolic process)、含氧酸代谢过程(oxoacid metabolicprocess)、单羧酸代谢过程(monocarboxylic acid metabolic process)、脂质生物合成过程(lipid biosynthetic process)、脂肪酸代谢过程(fatty acid metabolic process)、类固醇代谢过程(steroid metabolic process)、类固醇生物合成过程(steroidbiosynthetic process)、固醇代谢过程(sterol metabolic process)、胆固醇代谢过程(cholesterol metabolic process)、仲醇代谢过程(secondary alcohol metabolicprocess、固醇生物合成过程(sterol biosynthetic process)、嘌呤核苷二磷酸代谢过程(purine nucleoside bisphosphate metabolic process)、核苷二磷酸代谢过程(nucleoside bisphosphate metabolic process)、胆固醇生物合成过程(cholesterolbiosynthetic process)、仲醇生物合成过程(secondary alcohol biosyntheticprocess)(参照图3)。
图3为分析对照组(wild type)与实验组的CPNE7基因缺失小鼠的肝组织中表达的各种基因的RNA碱基序列的结果。图3A为将表达水平近似的群之间进行群集化并以热图(heat map)进行示出的情形。图3B的上图表作为RNA碱基序列分析结果，显示出相比于对照组，实验组中增加或减少2倍以上的基因数，下图表显示出增加或减少2倍以上的基因中的有统计显著性的(p<0.05)基因的数。图3C示出了当以这样的基因作为对象进行基因本体富集(gene ontology enrichment)分析时，生物过程(biological process)领域的前20个项目(top 20term)。红色画底线部分相应于作为脂肪相关处理(process)的前20个项目(top20term)中作为50％的10种。
在对照组(wild type)与实验组的CPNE7基因缺失小鼠的肝组织中表达的各种基因的RNA碱基序列分析结果中，比较SREBP1的表达的结果，RNA碱基序列分析结果，可确认，在CPNE7基因缺失小鼠的肝内，作为对于发生非酒精性脂肪性肝病有重要作用的转录因子的SREBP1增加约2倍。为了验证RNA碱基序列分析结果，示出了以进行RNA碱基序列分析的样品来进行TR(Technical repeat,技术重复)的结果与以其他新的样品来实施BR(Biological repeat，生物学重复)的结果。确认到相比于对照组，2种结果均为实验组中的SREBP1得到增加(图4B)。
在试管(In vitro)内实验中，为了确认CPNE7与SREBP1基因(SREBF1)的相关性，在作为肝细胞株的HepG2细胞转染CPNE7基因，观察SREBP1的基因表达谱的结果，作为对HepG2细胞株转染CPNE7基因的结果，确认到，相比于对照组，在转染CPNE7基因的群中CPNE7基因表达增加了(图5A)。而且，在转染CPNE7基因的群中确认到SREBP1基因(SREBF1)的表达时，能够确认相比于对照组而言减少的结果(图5B)。
是以苏木精-伊红染色对于对照组(wild type)与对于实验组的CPNE7基因进行过量表达(CPNE7 Tg)的小鼠或CPNE7基因缺失小鼠的肝组织进行分析的结果(图6)。具体地，图6A为将作为对照组的正常小鼠的肝组织进行染色的结果。图6B为将作为实验组的CPNE7基因过量表达的小鼠的肝组织进行染色的情形，无法确认病理性侧面。图6C为将作为实验组的CPNE7基因缺失小鼠的肝组织进行染色的情形，与对照组或CPNE7过量表达的小鼠的肝组织不同，部分观察到细胞质膨胀的肝细胞(hepatocellular ballooning)与大量的炎性细胞。
图7为在体内(In vivo)实验中以对照组与实验组小鼠的肝组织来分析CPNE7与SREBP1的相关性的结果。从对照组与CPNE7基因过量表达的小鼠或CPNE7基因缺失小鼠的肝组织提取RNA，并检测CPNE7与SREBP1基因(SREBF1)的表达。图7A为示出CPNE7基因表达的图表，图7B为示出SREBP1基因(SREBF1)表达的图表。通过图7可知，就CPNE7基因过量表达小鼠而言，与对照组或CPNE7基因缺失小鼠的肝组织不同，观察到SREBP1基因(SREBF1)表达相对少。
下面，将对本发明的实施例进行具体说明。
实施例1:实验材料及方法
实施例1-1.实验动物的准备
在本实验中作为对照组使用的雄性C57BL/6J小鼠是从公司(DooYeol生物技术，首尔，韩国)购入的，作为实验组使用的CPNE7基因缺失小鼠(CPNE7 KO)以标准基因打靶法来产生。代替CPNE7基因外显子5至7碱基序列，克隆包含EGFP(增强型绿色荧光蛋白)编码区(EGFR)及新霉素抗性盒(NeoR)的载体。
克隆的载体是在来源于129/SVEV小鼠的CMTI-1ES细胞株中，利用电穿孔(electroporation)法来进行转化的。在电穿孔(Electroporation)后，筛选G418/更昔洛韦(ganciclovir)抗性集落并移植于代孕母鼠而生产后代。
对于CPNE7过量表达小鼠的制备而言，为了在上皮细胞进行特异性过量表达，使用上皮细胞标志基因角蛋白14(Keratin-14)(K14)启动子来制备载体后，利用了与制备CPNE7基因缺失小鼠的过程一样的方法。
实验中使用的所有小鼠在12:12小时的昼夜明/暗周期的笼中，在约20-25℃、约45-55％湿度条件下进行饲养。
对于正常小鼠与CPNE7基因缺失或过量表达小鼠，在饲养一个月、三个月、六个月之后，进行灌流后摘取肝组织进行了组织学分析或基因分析。所有实验均在首尔大学(首尔)设施内动物管理使用委员会认可后进行使用。
实施例1-2.苏木精-伊红染色
牺牲饲养三个月的小鼠来摘出肝组织，并固定在4％多聚甲醛溶液中24小时。之后在脱水后用石蜡包埋，以5μm厚度对组织进行薄切片(thin sectioning)。在用二甲苯去除组织切片的石蜡后进行浸泡，之后以苏木精与伊红进行染色。在脱水和透明过程后制作标本。
实施例1-3.透射电子显微镜分析
牺牲饲养六个月的小鼠来摘出肝组织，制成约1x1x1mm大小，在4％多聚甲醛溶液中预固定24小时，以1％四氧化锇进行后固定。经脱水过程后，以斯珀尔树脂(spurr'sresin)包埋并进行薄切片，之后用透射电子显微镜进行观察。
实施例1-4.提取RNA及RNA碱基序列分析
在牺牲饲养一个月的小鼠来摘出的肝组织中，利用试剂(TRI
Figure BDA0003359160540000151
TR 118，MRC，美国)提取RNA。将提取的RNA定量为约1μg，并委托Macrogen公司进行RNA碱基序列分析。
实施例1-5.培养及转染细胞株
HepG2细胞株(KCLB 88065)从韩国细胞株银行购入使用。HepG2细胞株在包含有5％CO2且37℃条件下，在添加有10％热灭活的牛血清的最低必需培养基中进行培养。对于全长人源CPNE7使用从傲锐基因(Origene，美国)购入的编码的表达载体、绿色荧光蛋白质(GFP)-CPNE7(NM_153636)及DDK(Flag)-标签的CPNE7(NM_153636)进行转染。
实施例1-6.实时基因增幅分析
利用试剂(TRI
Figure BDA0003359160540000162
TR 118，MRC，美国)在肝组织和HepG2细胞株(KCLB88065，韩国细胞株银行)中提取了总RNA。之后使用Maxime Rt预混合物试剂盒(premixkit)(25081，iNtRON)从所述RNA合成cDNA。在使用SYBR Green PCR Master Mix(宝生物公司(Takara Bio)，日本)的ABI PRISM 7500序列检测系统(应用生物系统公司(AppliedBiosystems)，美国)中按照使用手册进行实时PCR。
分别大约在95℃下，10分钟后，以在95℃下，15秒钟，在60℃下，1分钟的方式进行40循环的条件下执行了PCR。所有反应以三倍体进行，且PCR产物水平以持家基因GAPDH为基准进行归一化。基因表达中的相对变化利用比较循环阈值(CT)方法进行计算。所使用的引物(primer)如下。
【表1】
Figure BDA0003359160540000161
实施例2:实验结果
实施例2-1.CPNE7基因缺失对肝组织中的脂滴(lipid droplet)蓄积产生的影响的分析
为了比较作为一般对照组的正常小鼠和CPNE7基因缺失小鼠(CPNE7 KO)的肝组织中的脂滴蓄积，利用苏木精-伊红染色观察三个月大的小鼠的肝组织(图1)。
与对照组(图1A-A')比较，观察到，CPNE7基因缺失小鼠的肝组织中的脂滴(lipiddroplet)蓄积增加的情况(图1B-B')。
图2为利用透射电子显微镜分析正常小鼠(A-A')和CPNE7基因缺失小鼠(B-B')的肝组织的形态学特性及脂滴蓄积的结果。摘出六个月大的小鼠的肝组织，制备用于透射电子显微镜分析的试料。透射电子显微镜分析结果，相较于正常小鼠，CPNE7基因缺失小鼠的肝细胞由于细胞质膨胀(hepatocellular ballooning)使得不仅能够在细胞质观察到很多间隙，还观察到了脂滴。
实施例2-2.正常小鼠与CPNE7基因缺失(CPNE7 KO)小鼠的肝组织中相关于脂肪形成的基因表达的比较分析
为了分析图1至图2的组织学分析中的肝细胞的膨胀和脂滴的蓄积的原因，从一个月大的正常小鼠和CPNE7基因缺失小鼠的肝组织提取RNA，进行RNA碱基序列分析(图3)。碱基序列分析结果示出，当将图表中的WT作为对照组，将CPNE7 KO作为实验组分析具有2倍以上差异的基因的数时，在CPNE7基因缺失(CPNE7 KO)小鼠的肝组织中增加的基因为178个，减少的基因为171个(图3B)。其中，确认到统计显著性的基因的个数中增加的基因为135个、减少的基因为81个。如此地，将在对照组与实验组之间显著具有表达差异的基因作为对象进行了基因本体富集(Gene ontology enrichment)分析，查看生物处理分析中前20个项目(top 20term)，观察到大部分为脂肪相关过程(process)(图3C)。因此，通过图1、图2及图3的结果可确认CPNE7与脂肪性肝病具有关联性。
实施例2-3.CPNE7基因对诱发非酒精性脂肪肝发生的因子SREBP1的表达产生的影响
在对照组与实验组之间显著具有差异的脂肪相关基因中，确认包含有已知对非酒精性脂肪肝发生而言是重要的转录因子的SREBF1(Sterol regulatory element bindingtranscription factor 1)基因。作为由SREBF1而编码的蛋白质SREBP1(Sterolregulatory element binding protein1)是脂质稳态调节因子，具有增加脂肪合成相关的基因的转录活性的作用。在以往研究中，众所周知，当在小鼠的肝中过量表达SREBP1时，则形成脂肪肝，当使SREBP1在被相反诱导的脂肪肝小鼠模型中缺失，则脂肪肝得到改善。从图4中的RNA碱基序列分析结果，确认到，相比于对照组，CPNE7 KO肝组织中的SREBF1(SREBP1)得到增加，这种结果通过重复实验进行了验证。
实施例2-4.分析在作为肝细胞株的HepG2中，CPNE7的过量表达对SREBP1表达产生的影响
为了在肝细胞株中确认CPNE7的过量表达对SREBF1(SREBP1)基因表达产生的影响，使用肝细胞株HepG2来进行CPNE7基因的过量表达后，确认SREBF1(SREBP1)基因的表达。观察到相较于对照组，过量表达CPNE7基因的群中SREBF1(SREBP1)基因表达显著减少了(图5)。此结果示出了通过CPNE7对SREBF1(SREBP1)基因表达的调节，能够预防或治疗非酒精性脂肪肝的作为治疗剂的可能性。
实施例2-5.CPNE7过量表达(CPNE7 Tg)小鼠的肝组织的组织学分析
图6中利用苏木精-伊红染色分析了CPNE7的过量表达(CPNE7 Tg)小鼠、正常小鼠或CPNE7基因缺失(CPNE7 KO)小鼠的肝组织。相较于正常小鼠，在CPNE7基因缺失(CPNE7KO)小鼠的肝组织中能够确认细胞质膨胀的肝细胞(hepatocellular ballooning)与大量的炎性细胞。但是在CPNE7过量表达(CPNE7 Tg)小鼠的肝组织中未观察到像脂滴(lipiddroplet)及细胞质膨胀的肝细胞一样的脂肪肝病变。
实施例2-6.分析在CPNE7过量表达(CPNE7 Tg)小鼠的肝组织中，SREBP1的基因表达
从正常小鼠(WT)、CPNE7基因缺失(CP7 KO)小鼠、CPNE7过量表达(CP7 Tg)小鼠的肝组织中提取RNA，确认CPNE7与SREBF1(SREBP1)基因表达。CPNE7基因表达相较于正常小鼠的肝组织，在CPNE7基因缺失(CPNE7 KO)小鼠的肝组织中减少了，而在CPNE7过量表达(CPNE7Tg)小鼠的肝组织中则增加了(图7A)。且确认到SREBF1(SREBP1)基因表达虽然在CPNE7基因缺失(CPNE7 KO)小鼠的肝组织中增加了，但在CPNE7过量表达(CPNE7 Tg)小鼠的肝组织中减少了的情况(图7B)。
总结上述的结果可知，通过CPNE7对SREBF1(SREBP1)基因表达的调节能够预防或治疗非酒精性脂肪性肝病。
在本说明书和附图中公开了本发明的优选实施例，虽然使用了特定的术语，但这仅仅是为了容易地说明本发明的技术内容并有助于理解发明而以一般的含义进行了使用，而并非用于限定本发明的范围。除了在此公开的实施例之外，也可实施基于本发明的技术思想的其他变形例，这对于本发明所属技术领域的普通技术人员是显而易见的。
<110> 海森斯柏奥公司
<120> 用于预防或治疗脂肪性肝病的组合物
<130> GP200076KR
<160> 10
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> mSREBF1
<400> 1
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<211> 20
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> mSREBF1
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cctcctgtgt acttgcccat 20
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<212> DNA
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> hSREBF1
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<220>
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<220>
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<220>
<223> hGAPDH
<400> 10
ccccacttga ttttggaggg a 21

Claims (14)

1.一种药学组合物，其特征在于，所述药学组合物包含CPNE7蛋白质或其基因，用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病。
2.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于，
所述药学组合物用于调节SREBF1(SREBP1)的表达。
3.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于，
所述药学组合物用于调节细胞内炎性细胞或脂滴蓄积。
4.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于，
所述药学组合物用于调节肝细胞中的SREBF1(SREBP1)基因表达。
5.根据权利要求4所述的药学组合物，其特征在于，
所述肝细胞为HepG2细胞。
6.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于，
所述药学组合物用于调节肝组织中的细胞质膨胀的肝细胞、炎性细胞或脂滴的蓄积。
7.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于，
所述药学组合物还包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
8.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于，
所述药学组合物用于调节肝组织中的选自由小分子代谢过程(small moleculemetabolic process)、脂质代谢过程(lipid metabolic process)、细胞脂质代谢过程(cellularlipid metabolic process)、有机酸代谢过程(organic acid metabolicprocess)、氧化-还原代谢过程(oxidation-reduction metabolic process)、羧酸代谢过程(carboxylic acid metabolic process)、含氧酸代谢过程(oxoacid metabolicprocess)、单羧酸代谢过程(monocarboxylic acid metabolic process)、脂质生物合成过程(lipid biosynthetic process)、脂肪酸代谢过程(fatty acid metabolic process)、类固醇代谢过程(steroid metabolic process)、类固醇生物合成过程(steroidbiosynthetic process)、固醇代谢过程(sterol metabolic process)、胆固醇代谢过程(cholesterol metabolic process)、仲醇代谢过程(secondary alcohol metabolicprocess)、固醇生物合成过程(sterol biosynthetic process)、嘌呤核苷二磷酸代谢过程(purine nucleoside bisphosphate metabolic process)、核苷二磷酸代谢过程(nucleoside bisphosphate metabolic process)、胆固醇生物合成过程(cholesterolbiosynthetic process)及仲醇生物合成过程(secondary alcohol biosyntheticprocess)形成的组中的一种以上的过程。
9.根据权利要求1所述的药学组合物，其特征在于，
所述非酒精性脂肪性肝病为二型糖尿病、肥胖与代谢综合征、肝内脂肪沉积、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化或肝癌。
10.一种用于诊断脂肪性肝病的组合物，其包含用于检测CPNE7蛋白质或其基因的表达的能够互补结合于所述基因的探针或者能够与蛋白质结合的抗体。
11.一种包含将权利要求1所述的组合物给予到除了人类以外的个体的步骤的非酒精性脂肪性肝病的预防或治疗方法。
12.一种检测CPNE7蛋白质或其基因的方法，其为了提供诊断脂肪性肝病所需的信息，利用能够检测CPNE7蛋白质或其基因的表达的引物、探针或抗体。
13.一种包含CPNE7蛋白质或其基因的用于预防或缓解非酒精性脂肪性肝病的医药外品组合物。
14.一种包含CPNE7蛋白质或其基因的用于预防或缓解非酒精性脂肪性肝病的保健功能性食品组合物。
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