CN114929708A - 4-[[(7-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基]甲基]哌啶-3-醇化合物以及它们的治疗用途 - Google Patents

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Abstract

本发明总体上涉及治疗性化合物的领域。更具体来说，本发明涉及尤其抑制周期蛋白依赖性蛋白质激酶(CDK)尤其是CDK12和/或CDK13，并且例如相较于对于CDK7，对于CDK12和/或CDK13具有选择性的某些H‑APPAMP化合物(在本文中被称为“H‑APPAMP化合物”)。除选择性抑制CDK12和/或CDK13之外，所述化合物还充当选择性周期蛋白K降解剂，由此移除为CDK12和/或CDK13活化所需的关键信号传导机制；这赋予额外细胞效能和选择性。本发明还涉及包含此类化合物的药物组合物，以及此类化合物和组合物在体外和在体内用以抑制CDK尤其是CDK12和/或CDK13；以及用以治疗病症的用途，所述病症包括：与CDK尤其是CDK12和/或CDK13相关的病症；由CDK尤其是CDK12和/或CDK13的不当活性所致的病症；与CDK突变尤其是CDK12和/或CDK13突变相关的病症；与CDK过度表达尤其是CDK12和/或CDK13过度表达相关的病症；与CDK尤其是CDK12和/或CDK13的上游通路活化相关的病症；通过抑制CDK尤其是CDK12和/或CDK13而得到改善的病症；增生性病症；癌症；病毒性感染(包括HIV)；神经变性病症(包括阿尔茨海默氏病和帕金森氏病)；缺血；肾病；心血管病症(包括动脉粥样硬化)；自身免疫性病症(包括类风湿性关节炎)；以及由细胞中翻译功能异常引起的病症(包括肌营养不良)。任选地，治疗还包括用是例如芳香酶抑制剂、抗雌激素剂、抗雄激素剂、Her2阻断剂、细胞毒性化学治疗剂、刺激免疫系统的剂、检查点抑制剂、DNA修复抑制剂等的其他活性剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。

Description

4-[[(7-氨基吡唑并[1,5-A]嘧啶-5-基)氨基]甲基]哌啶-3- 醇化合物以及它们的治疗用途
相关申请
本申请与2019年12月16日提交的英国(GB)专利申请第1918541.2号相关，所述英国专利申请的内容通过引用以它们的整体并入本文。
技术领域
本发明总体上涉及治疗性化合物的领域。更具体来说，本发明涉及尤其抑制周期蛋白(cyclin)依赖性蛋白质激酶(CDK)尤其是CDK12和/或CDK13，并且例如相较于对于CDK7，对于CDK12和/或CDK13具有选择性的某些H-APPAMP化合物(在本文中被称为“H-APPAMP化合物”)。除选择性抑制CDK12和/或CDK13之外，所述化合物还充当选择性周期蛋白K降解剂，由此移除为CDK12和/或CDK13活化所需的关键信号传导机制；这赋予额外细胞效能和选择性。本发明还涉及包含此类化合物的药物组合物，以及此类化合物和组合物在体外和在体内用以抑制CDK尤其是CDK12和/或CDK13；以及用以治疗病症的用途，所述病症包括：与CDK尤其是CDK12和/或CDK13相关的病症；由CDK尤其是CDK12和/或CDK13的不当活性所致的病症；与CDK突变尤其是CDK12和/或CDK13突变相关的病症；与CDK过度表达尤其是CDK12和/或CDK13过度表达相关的病症；与CDK尤其是CDK12和/或CDK13的上游通路活化相关的病症；通过抑制CDK尤其是CDK12和/或CDK13而得到改善的病症；增生性病症；癌症；病毒性感染(包括HIV)；神经变性病症(包括阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease)和帕金森氏病(Parkinson’s disease))；缺血；肾病；心血管病症(包括动脉粥样硬化)；自身免疫性病症(包括类风湿性关节炎)；以及由细胞中翻译功能异常引起的病症(包括肌营养不良)。任选地，治疗还包括用是例如芳香酶抑制剂、抗雌激素剂、抗雄激素剂、Her2阻断剂、细胞毒性化学治疗剂、刺激免疫系统的剂、检查点抑制剂、DNA修复抑制剂等的其他活性剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。
背景技术
本文引用许多出版物以更充分描述和公开本发明以及本发明所属领域的状态。这些参考文献中的每一者在本文中通过引用以它的整体并入至本公开中，所述引用的程度就好像已具体地和单独地指出将每个单独的参考文献通过引用并入一样。
在包括随后权利要求的整篇本说明书中，除非上下文另外要求，否则词语“包含(comprise)”和变化形式(诸如“comprises”和“comprising”)应被理解为意指包括一个所陈述整数或步骤或一组整数或步骤，而非排除任何其他整数或步骤或任何其他组整数或步骤。
必须注意，除非上下文另外明确规定，否则如说明书和随附权利要求中所用，单数形式“一个(种)(a/an)”和“这个(种)(the)”包括复数个(种)指示物。因此，举例来说，提及“一种药物载体”包括两种或更多种此类载体的混合物等。
范围在本文中经常表示为从“约”一个特定值和/或至“约”另一特定值。当表示此种范围时，另一实施方案包括从所述一个特定值和/或至所述另一特定值。类似地，当值通过使用先行词“约”表示为近似值时，应了解特定值形成另一实施方案。
本公开包括可用于理解本发明的信息。并不承认本文提供的任何信息是先前技术或与当前要求保护的本发明相关，或具体地或隐含地引用的任何出版物是先前技术。
周期蛋白依赖性蛋白质激酶(CDK)
周期蛋白依赖性蛋白质激酶(CDK)是一个家族的21种丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶的催化亚单位(参见例如Malumbres等人,2009)，所述21种丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶中的一些控制细胞通过生长、DNA复制和有丝分裂阶段达成的进展(参见例如Pines,1995；Morgan,1995)。特定CDK的活化为通过细胞周期的不同阶段达成的适当进展以及进入细胞周期的下一阶段所需。
周期蛋白依赖性激酶12(CDK12)和它的直系同源物13(CDK13)属于周期蛋白依赖性激酶(CDK)家族的丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶，所述丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶调控转录和转录后过程，由此调节多种细胞功能。研究已将CDK12和CDK13表征为与周期蛋白K复合以通过使RNA聚合酶II磷酸化来介导基因转录的转录CDK(参见例如Li等人,2016；Greifenberg等人,2016)。CDK12/周期蛋白K和CDK13/周期蛋白K复合物在Ser2处使RNA PolII磷酸化(Ser2p-RNA Pol II)，此被认为是从转录起始向延伸的转变中的关键步骤。另外，CDK12可与周期蛋白L1和L2形成复合物以调控mRNA转录物的选择性剪接(参见例如Chen等人,2016)。已证明CDK12特异性上调对DNA损伤、应激和热激的响应中涉及的基因的表达(参见例如Blazek等人,2011；Lord等人,2016)。相对于CDK12，CDK13调控一组不同基因，其中CDK3活性主要涉及于包括酪氨酸激酶信号传导的生长信号传导通路中(Greifenberg等人,2016)。研究还已表明CDK12牵涉于调控mRNA剪接、3’末端加工、前复制复合物组装和基因组稳定性。已在食管癌、胃癌、乳腺癌、子宫内膜癌、子宫癌、卵巢癌、膀胱癌、结肠直肠癌和胰腺癌中检测到CDK12中的基因组改变(参见例如Gyl等人,2018)。许多研究指出CDK12抑制是一种有效抑制肿瘤生长的策略，并且已描述与就癌存活和进展来说相关的许多通路的合成致死相互作用(参见例如Johnson等人,2016；Choi等人,2019)。
周期蛋白K降解是CDK 12的一些而非所有抑制剂的性质(参见例如
Figure BDA0003693597550000031
等人,2020)。在具有降解剂活性的抑制剂的结合后，CDK12充当CUL4-DDB1泛素连接酶复合物的替代底物受体，从而呈现周期蛋白K以达成通过CRL4进行的泛素化，并且导致蛋白酶体降解。CDK12与DDB1之间的相互作用部分地由于抑制剂与DDB1的相互作用而驱动。因此，只有同时占据激酶活性位点并且填充DDB1的疏水性口袋的CDK12抑制剂可促进周期蛋白K降解。举例来说，发现全CDK抑制剂CR8通过这个机制导致周期蛋白K降解，而CDK12选择性共价抑制剂THZ-531不导致周期蛋白K降解。
周期蛋白K降解可对细胞中CDK12和/或CDK13的直接抑制进行补充。这由于许多原因而是有利的。首先，降解可导致相比于单独激酶抑制得到增强的效能，如通过分子在细胞杀灭测定中增加的效能所显示。增强的细胞效能可导致抑制剂与不同于CDK12和/或CDK13的激酶之间的脱靶相互作用和影响降低。其次，周期蛋白K是CDK12与CDK13两者的专性伴侣，并且为达成它们的活性所需。因此，周期蛋白K降解剂将导致两种激酶的活性受损，即使化合物显示CDK12与CDK13之间的差异性选择性。最后，已显示周期蛋白K在细胞中具有超过12小时的半衰期(参见例如Lei等人,2018)。因此，降解剂可在细胞和肿瘤中具有可延长超出暴露于化合物的持续期的作用。
已知化合物
Bondke等人(2015)描述作为CDK抑制剂的某些吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-二胺化合物，包括例如以下化合物(在其中被称为PPDA-001)：
Figure BDA0003693597550000041
Hazel等人(2017)描述包括ICEC0942(以下显示)的CDK7抑制剂的选择性的研究。Patel等人(2018)描述CDK7抑制剂ICEC0942治疗癌症的研究。
Figure BDA0003693597550000051
Johannes等人(2018)描述用于鉴定一类选择性CDK12抑制剂的研究，所述一类选择性CDK12抑制剂包括以下显示的在其中表示为“化合物7”的先导化合物。
Figure BDA0003693597550000052
Bahl等人(2019)描述作为CDK抑制剂的四种具体吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-二胺化合物，包括例如以下化合物(在其中被称为APPAMP-001)：
Figure BDA0003693597550000053
Kugel(2019)描述CDK7一般来说在胰腺癌的某些亚型的治疗中的用途。一系列已知CDK7抑制剂在其中第26-30页上显示。
Kwiatkowski等人(2019)描述CDK7一般来说在结节性硬化复合征的治疗中的用途。一系列已知CDK7抑制剂在其中第25-55页上显示。
Roush等人(2019)描述CDK12/CDK13的某些小分子抑制剂，其据说可用于治疗癌症，诸如乳腺癌、脑癌和卵巢癌。化合物具有下式，其中R1是芳基或杂芳基。其中的实例包括以下显示的化合物6和7。
Figure BDA0003693597550000061
效能/选择性
本文所述的H-APPAMP化合物是强力CDK12和/或CDK13抑制剂，例如相较于对于CDK7，所述抑制剂还对于CDK12和/或CDK13具有高度选择性。
除选择性抑制CDK12和/或CDK13之外，本文所述的H-APPAMP化合物还可充当选择性周期蛋白K降解剂，由此移除为CDK12和/或CDK13活化所需的关键信号传导机制；这赋予额外细胞效能和选择性。
发明内容
本发明的一个方面涉及如本文所述的某些4-[[(7-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基]甲基]哌啶-3-醇化合物(在本文中被称为“H-APPAMP化合物”)。
本发明的另一方面涉及一种包含如本文所述的H-APPAMP化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的组合物(例如药物组合物)。
本发明的另一方面涉及一种制备组合物(例如药物组合物)的方法，所述方法包括混合如本文所述的H-APPAMP化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的步骤。
本发明的另一方面涉及一种在体外或在体内抑制CDK12和/或CDK13功能(例如细胞中)的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的如本文所述的H-APPAMP化合物接触。
本发明的另一方面涉及一种在体外或在体内调控(例如抑制)细胞增殖(例如细胞的增殖)，抑制细胞周期进展，促进凋亡，或达成这些中的一者或多者的组合的方法，所述方法包括使细胞与有效量的如本文所述的H-APPAMP化合物接触。
本发明的另一方面涉及一种如本文所述的H-APPAMP化合物，所述H-APPAMP化合物用于通过疗法治疗人体或动物体的方法中，例如用于治疗如本文所述的病症(例如疾病)的方法中。
本发明的另一方面涉及如本文所述的H-APPAMP化合物在例如用于治疗方法中，例如用于治疗如本文所述的病症(例如疾病)的方法中的药物的制造中的用途。
本发明的另一方面涉及一种治疗方法，例如一种治疗如本文所述的病症(例如疾病)的方法，所述治疗方法包括向需要治疗的个体施用治疗有效量的优选地呈药物组合物形式的如本文所述的H-APPAMP化合物。
在一个实施方案中，治疗还包括用如本文所述的是例如芳香酶抑制剂、抗雌激素剂、抗雄激素剂、Her2阻断剂、细胞毒性化学治疗剂、刺激免疫系统的剂、检查点抑制剂、DNA修复抑制剂等的其他活性剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。
本发明的另一方面涉及一种药盒，所述药盒包括(a)如本文所述的H-APPAMP化合物，优选地以药物组合物形式并且于适合容器中以及/或者以适合包装提供；和(b)使用说明书，例如关于如何施用所述化合物的书面说明书。
本发明的另一方面涉及一种可通过如本文所述的合成方法或包括如本文所述的合成方法的方法获得的H-APPAMP化合物。
本发明的另一方面涉及一种通过如本文所述的合成方法或包括如本文所述的合成方法的方法获得的H-APPAMP化合物。
本发明的另一方面涉及适用于本文所述的合成方法中的如本文所述的新型中间体。
本发明的另一方面涉及如本文所述的此类新型中间体在本文所述的合成方法中的用途。
如将由本领域技术人员所了解，本发明的一个方面的特征和优选实施方案还将涉及本发明的其他方面。
具体实施方式
化合物
本发明的一个方面涉及与吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-二胺(“PPDA”)相关的某些化合物：
Figure BDA0003693597550000081
更具体来说，化合物与(3R,4R)-4-[[(7-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基]甲基]哌啶-3-醇(“APPAMP”)相关：
Figure BDA0003693597550000091
此外，所有本发明化合物都具有：
(a)在7位的经取代氨基(在本文中表示为-NH-L7-R7)；和
(b)在3位的烷基或环烷基(在本文中表示为-R3)。
更具体来说，基团-R7是具有正好1、2或3个环杂原子的稠合双环C8-10杂芳基，其中每个环杂原子是N、S或O。
为避免疑问，稠合双环C8-10杂芳基具有6/6、6/5、5/6或5/5稠环结构；也就是说，分别是6元芳族环稠合于6元芳族环；6元芳族环稠合于5元芳族环；5元芳族环稠合于6元芳族环；或5元芳族环稠合于5元芳族环。
因此，本发明的一个方面是一种下式化合物或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其中-R7、-L7-和-R3如本文所定义(为方便起见，在本文中总称为“H-APPAMP化合物”)：
Figure BDA0003693597550000092
一些实施方案包括以下：
(1)一种下式化合物：
Figure BDA0003693597550000101
或其药学上可接受的盐或溶剂化物；
其中：
-R7是具有正好1、2或3个环杂原子的稠合双环C8-10杂芳基，其中每个环杂原子是N、S或O；
并且其中-R7：
任选地在碳上被一个或多个基团-RSC取代；并且
任选地在如果存在的仲氮上被基团-RSN取代；
其中：
每个-RSC独立地是：
-RTT，
-F、-Cl、-Br、-I，
-OH、-ORTT，
-LT-OH、-LT-ORTT，
-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2，
-NH2、-NHRTT、-NRTT 2、-RTM，
-LT-NH2、-LT-NHRTT、-LT-NRTT 2、-LT-RTM，
-C(＝O)OH、-C(＝O)ORTT，
-OC(＝O)RTT，
-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHRTT、-C(＝O)NRTT 2、-C(＝O)RTM，
-NHC(＝O)RTT、-NRTNC(＝O)RTT，
-NHC(＝O)NH2、-NHC(＝O)NHRTT、-NHC(＝O)NRTT 2、-NHC(＝O)RTM，
-NRTNC(＝O)NH2、-NRTNC(＝O)NHRTT、-NRTNC(＝O)NRTT 2、-NRTNC(＝O)RTM，
-NHC(＝O)ORTT、-NRTNC(＝O)ORTT，
-OC(＝O)NH2、-OC(＝O)NHRTT、-OC(＝O)NRTT 2、-OC(＝O)RTM，
-C(＝O)RTT，
-SRTT、-S(＝O)RTT、-S(＝O)2RTT，
-S(＝O)NH2、-S(＝O)NHRTT、-S(＝O)NRTT 2、-S(＝O)RTM，
-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NHRTT、-S(＝O)2NRTT 2、-S(＝O)2RTM，
-NHS(＝O)2RTT、-NRTNS(＝O)2RTT，
-CN或-NO2；
每个-RSN独立地是：
-RTT，
-LT-OH、-LT-ORTT，
-LT-NH2、-LT-NHRTT、-LT-NRTT 2、-LT-RTM，
-C(＝O)RTT，
-C(＝O)ORTT，
-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHRTT、-C(＝O)NRTT 2、-C(＝O)RTM，或
-S(＝O)2RTT；
其中：
每个-LT-独立地是直链或支链饱和C1-4亚烷基；
每个-RTT独立地是-RTT1、-RTT2、-LTT-RTT2、-RTT3或-LTT-RTT3；
每个-RTT1独立地是直链或支链饱和C1-6烷基，并且任选地被一个或多个选自-F、-OH和-ORTTT的基团取代；
每个-RTT2是饱和C3-6环烷基，并且任选地被一个或多个选自-F、-RTTT、-OH和-ORTTT的基团取代；
每个-RTT3独立地是苯基或萘基，并且任选地被一个或多个选自-F、-Cl、-Br、-I、-RTTT、OH、-ORTTT、-OCF3、-NH2、-NHRTTT和-NRTTT 2的基团取代；
每个-LTT-独立地是直链或支链饱和C1-4亚烷基；
每个-RTN是直链或支链饱和C1-4烷基、苯基或苯甲基；
每个-RTM独立地是氮杂环丁烷子基、吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、吗啉代基、氮杂环庚烷子基或二氮杂环庚烷子基，并且：
任选地在碳上被一个或多个选自以下的基团取代：-RTMM、-C(＝O)RTMM、-S(＝O)2RTMM、-F、-NH2、-NHRTMM、-NRTMM 2、-OH和-ORTMM；并且
任选地在如果存在的仲氮上被选自以下的基团取代：-RTMM、-C(＝O)RTMM、-C(＝O)ORTMM和-S(＝O)2RTMM；
每个-RTTT独立地是直链或支链饱和C1-4烷基、苯基或苯甲基；并且
每个-RTMM独立地是直链或支链饱和C1-4烷基、苯基或苯甲基；
并且其中：
-L7-独立地是直链或支链饱和C1-3亚烷基，并且任选地被一个或多个选自-F、-OH和-OMe的基团取代；
-R3独立地是-R3A或-R3B；
-R3A独立地是直链或支链饱和C1-6烷基，并且任选地被一个或多个选自-F、-OH和-OMe的基团取代；并且
-R3B独立地是饱和C3-7环烷基，并且任选地被一个或多个选自-F、-OH和-OMe的基团取代。
为避免疑问：
诸如“C9-10杂芳基”、“C3-7杂环基”等的术语中的标记“Cx-y”是指可为碳原子或杂原子(例如N、O、S，视情况而定)的环原子的数目。举例来说，吡啶基是C6杂芳基的一实例，并且哌啶子基是C6杂环基的一实例。
术语“杂芳基”是指通过是芳族环的一部分的原子连接于分子的其余部分的基团，其中所述芳族环是芳族环系统的一部分，并且所述芳族环系统具有一个或多个杂原子(例如N、O、S，视情况而定)。举例来说，吡啶基是C6杂芳基的一实例，并且喹啉基是C10杂芳基的一实例。
短语“在碳上的取代基”意指连接于碳环原子的取代基。类似地，短语“在仲氮上的取代基”意指连接于氮环原子的取代基，在不存在所述取代基下，所述氮环原子将是仲氮环原子(即-NH-)。因此，吡啶基仅可具有“在碳上的取代基”，而1H-吡咯可具有“在碳上的取代基”与“在仲氮上的取代基”两者，如以下所说明。
Figure BDA0003693597550000141
类似地，哌啶子基仅可具有“在碳上的取代基”，而哌嗪子基可具有“在碳上的取代基”与“在仲氮上的取代基”两者，如以下所说明。
Figure BDA0003693597550000142
除非另外指示，否则当显示或描述具有一个或多个手性中心的化合物，并且两种或更多种立体异构体是可能的时，单独地(例如如与一种或多种其他立体异构体进行分离)以及以混合物形式(例如以两种或更多种立体异构体的等摩尔或非等摩尔混合物形式)公开和涵盖所有此类立体异构体。举例来说，除非另外指示，否则当化合物具有一个手性中心时，单独地(例如如与另一对映异构体进行分离)以及以混合物形式(例如以两种对映异构体的等摩尔或非等摩尔混合物形式)公开和涵盖(R)对映异构体和(S)对映异构体中的每一者。举例来说，侧挂仲丁基-CH(CH3)CH2CH3的初始碳原子通常是手性的，因此产生立体异构体，例如(R)对映异构体和(S)对映异构体(如果它是唯一手性中心)，公开和涵盖所述立体异构体中的每一者。
基团-R7
(2)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好1、2或3个环杂原子的稠合双环C9-10杂芳基，其中每个环杂原子是N。
C9杂芳基：
(3)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好1、2或3个环杂原子的稠合双环C9杂芳基，其中每个环杂原子是N。
(4)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好2或3个环杂原子的稠合双环C9杂芳基，其中每个环杂原子是N。
(5)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好1个环杂原子的稠合双环C9杂芳基，其中所述环杂原子是N。
(6)根据(1)所述的化合物，其中-R7独立地是：
吲哚基；吲哚嗪基；2H-异吲哚基；2H-环戊二烯并[c]吡啶基；或1H-环戊二烯并[b]吡啶基。
Figure BDA0003693597550000151
(7)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好2个环杂原子的稠合双环C9杂芳基，其中每个环杂原子是N。
(8)根据(1)所述的化合物，其中-R7独立地是：
1H-吲唑基、苯并咪唑基；1H-吡咯并[3,2-b]吡啶基；1H-吡咯并[3,2-c]吡啶基；1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基；1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基；吡唑并[1,5-a]吡啶基；咪唑并[1,5-a]吡啶基；咪唑并[1,2-a]吡啶基；吡咯并[1,2-a]嘧啶基；吡咯并[1,2-a]吡嗪基；吡咯并[1,2-c]嘧啶基；吡咯并[1,2-b]哒嗪基；2H-吡咯并[3,4-c]吡啶基；或6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基。
Figure BDA0003693597550000161
(9)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好3个环杂原子的稠合双环C9杂芳基，其中每个环杂原子是N。
(10)根据(1)所述的化合物，其中-R7独立地是：
1H-吡唑并[4,3-b]吡啶基；1H-吡唑并[4,3-c]吡啶基；1H-吡唑并[3,4-c]吡啶基；1H-吡唑并[3,4-b]吡啶基；1H-咪唑并[4,5-b]吡啶基；1H-咪唑并[4,5-c]吡啶基；3H-咪唑并[4,5-c]吡啶基；3H-咪唑并[4,5-b]吡啶基；5H-吡咯并[3,2-c]哒嗪基；5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶基；5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪基；1H-吡咯并[2,3-d]哒嗪基；7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶基；7H-吡咯并[2,3-c]哒嗪基；6H-吡咯并[3,4-d]哒嗪基；6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶基；6H-吡咯并[3,4-c]哒嗪基；6H-吡咯并[3,4-b]吡嗪基；三唑并[1,5-a]吡啶基；[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基；吡唑并[1,5-a]嘧啶基；吡唑并[1,5-a]吡嗪基；吡唑并[1,5-c]嘧啶基；吡唑并[1,5-b]哒嗪基；[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶基；咪唑并[1,5-a]嘧啶基；咪唑并[1,5-a]吡嗪基；咪唑并[1,5-c]嘧啶基；咪唑并[1,5-b]哒嗪基；咪唑并[1,2-a]嘧啶基；咪唑并[1,2-a]吡嗪基；咪唑并[1,2-c]嘧啶基；咪唑并[1,2-b]哒嗪基；吡咯并[2,1-c][1,2,4]三嗪基；吡咯并[1,2-a][1,3,5]三嗪基；吡咯并[1,2-b][1,2,4]三嗪基；吡咯并[1,2-d][1,2,4]三嗪基；吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪基；或吡咯并[1,2-c]三嗪基。
Figure BDA0003693597550000171
Figure BDA0003693597550000181
Figure BDA0003693597550000191
(11)根据(1)所述的化合物，其中-R7独立地是：咪唑并[1,2-a]吡啶基；咪唑并[1,2-a]嘧啶基；苯并咪唑基；咪唑并[1,2-b]哒嗪基；或[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基。
(12)根据(1)所述的化合物，其中-R7独立地是：咪唑并[1,2-a]吡啶基；咪唑并[1,2-a]嘧啶基；或苯并咪唑基。
(13)根据(1)所述的化合物，其中-R7是咪唑并[1,2-a]吡啶基。
(14)根据(1)所述的化合物，其中-R7独立地是：2-咪唑并[1,2-a]吡啶基；或3-咪唑并[1,2-a]吡啶基。
(15)根据(1)所述的化合物，其中-R7是2-咪唑并[1,2-a]吡啶基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000192
(16)根据(1)所述的化合物，其中-R7是3-咪唑并[1,2-a]吡啶基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000201
(17)根据(1)所述的化合物，其中-R7是咪唑并[1,2-a]嘧啶基。
(18)根据(1)所述的化合物，其中-R7是2-咪唑并[1,2-a]嘧啶基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000202
(19)根据(1)所述的化合物，其中-R7是咪唑并[1,2-b]哒嗪基。
(20)根据(1)所述的化合物，其中-R7是2-咪唑并[1,2-b]哒嗪基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000203
(21)根据(1)所述的化合物，其中-R7是[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基。
(22)根据(1)所述的化合物，其中-R7是2-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000204
(23)根据(1)所述的化合物，其中-R7是苯并咪唑基。
(24)根据(1)所述的化合物，其中-R7独立地是：2-苯并咪唑基或5-苯并咪唑基。
(25)根据(1)所述的化合物，其中-R7是2-苯并咪唑基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000211
(26)根据(1)所述的化合物，其中-R7是5-苯并咪唑基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000212
(27)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好1或2个环杂原子的稠合双环C9杂芳基，其中每个环杂原子独立地是N或O。
(28)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好1个环杂原子的稠合双环C9杂芳基，其中所述环杂原子是O。
(29)根据(1)所述的化合物，其中-R7是苯并呋喃基。
(30)根据(1)所述的化合物，其中-R7独立地是：2-苯并呋喃基或3-苯并呋喃基。
(31)根据(1)所述的化合物，其中-R7是2-苯并呋喃基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000221
(32)根据(1)所述的化合物，其中-R7是3-苯并呋喃基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000222
C8杂芳基：
(33)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好1、2或3个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中每个环杂原子是N、S或O。
(34)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好1、2或3个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中每个环杂原子是N或S。
(35)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好2或3个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中每个环杂原子是N、S或O。
(36)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好2或3个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中每个环杂原子是N或S。
(37)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好2个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中每个环杂原子是N、S或O。
(38)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好2个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中每个环杂原子是N或S。
(39)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好2个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中所述环杂原子中的1者是N，并且所述环杂原子中的1者是S或O。
(40)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好2个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中所述环杂原子中的1者是N，并且所述环杂原子中的1者是S。
(41)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好3个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中每个环杂原子是N、S或O。
(42)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好3个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中每个环杂原子是N或S。
(43)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好3个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中所述环杂原子中的2者是N，并且所述环杂原子中的1者是S或O。
(44)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好3个环杂原子的稠合双环C8杂芳基，其中所述环杂原子中的2者是N，并且所述环杂原子中的1者是S。
(45)根据(1)所述的化合物，其中-R7独立地是：咪唑并[2,1-b]噻唑基或咪唑并[2,1-b]噻唑基或咪唑并[2,1-b]噁唑基。
Figure BDA0003693597550000231
(46)根据(1)所述的化合物，其中-R7是咪唑并[2,1-b]噻唑基。
(47)根据(1)所述的化合物，其中-R7是6-咪唑并[2,1-b]噻唑基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000241
C10杂芳基：
(48)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好1、2或3个环杂原子的稠合双环C10杂芳基，其中每个环杂原子是N。
(49)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好1或2个环杂原子的稠合双环C10杂芳基，其中每个环杂原子是N。
(50)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好1个环杂原子的稠合双环C10杂芳基，其中所述环杂原子是N。
(51)根据(1)所述的化合物，其中-R7独立地是：喹啉基或异喹啉基。
Figure BDA0003693597550000242
(52)根据(1)所述的化合物，其中-R7是喹啉基。
(53)根据(1)所述的化合物，其中-R7是2-喹啉基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000243
(54)根据(1)所述的化合物，其中-R7是3-喹啉基(以下显示)。
Figure BDA0003693597550000251
(55)根据(1)所述的化合物，其中-R7是异喹啉基。
(56)根据(1)所述的化合物，其中-R7是具有正好2个环杂原子的稠合双环C10杂芳基，其中每个环杂原子是N。
(57)根据(1)所述的化合物，其中-R7独立地是：噌啉基；喹唑啉基；喹喔啉基；1,5-萘啶基；1,6-萘啶基；1,7-萘啶基；1,8-萘啶基；酞嗪基；2,6-萘啶基；或2,7-萘啶基。
Figure BDA0003693597550000252
基团-R7：连接点
(58)根据(1)至(57)中的任一者所述的化合物，其中-R7通过-R7的环碳原子(例如-R7的非桥接环碳原子)连接于-L7-。
(59)根据(1)至(57)中的任一者所述的化合物，其中-R7通过-R7的环氮原子(例如-R7的非桥接环氮原子)连接于-L7-。
以下显示通过非桥接环碳原子连接的苯并咪唑基的一实例。
Figure BDA0003693597550000261
类似地，以下显示通过非桥接环氮原子连接的苯并咪唑基的一实例。
Figure BDA0003693597550000262
取代基-RSC
(60)根据(1)至(59)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSC独立地是：
-RTT，
-F、-Cl、-Br、-I，
-OH、-ORTT，
-LT-OH、-LT-ORTT，
-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2，
-NH2、-NHRTT、-NRTT 2、-RTM，
-LT-NH2、-LT-NHRTT、-LT-NRTT 2、-LT-RTM，
-C(＝O)OH、-C(＝O)ORTT，
-OC(＝O)RTT，
-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHRTT、-C(＝O)NRTT 2、-C(＝O)RTM，
-NHC(＝O)RTT，
-NHC(＝O)NH2、-NHC(＝O)NHRTT、-NHC(＝O)NRTT 2、-NHC(＝O)RTM，
-NHC(＝O)ORTT，
-OC(＝O)NH2、-OC(＝O)NHRTT、-OC(＝O)NRTT 2、-OC(＝O)RTM，
-C(＝O)RTT，
-S(＝O)2RTT，
-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NHRTT、-S(＝O)2NRTT 2、-S(＝O)2RTM，
-NHS(＝O)2RTT，
-CN或-NO2。
(61)根据(1)至(59)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSC独立地是：
-RTT，
-F、-Cl、-Br、-I，
-OH、-ORTT，
-LT-OH、-LT-ORTT，
-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2，
-NH2、-NHRTT、-NRTT 2、-RTM，
-LT-NH2、-LT-NHRTT、-LT-NRTT 2、-LT-RTM，
-C(＝O)OH、-C(＝O)ORTT，
-OC(＝O)RTT，
-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHRTT、-C(＝O)NRTT 2、-C(＝O)RTM，
-NHC(＝O)RTT，
-C(＝O)RTT，
-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NHRTT、-S(＝O)2NRTT 2、-S(＝O)2RTM，
-NHS(＝O)2RTT，
-CN或-NO2。
(62)根据(1)至(59)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSC独立地是：
-RTT，
-F、-Cl、-Br、-I，
-OH、-ORTT，
-LT-OH、-LT-ORTT，
-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2，
-NH2、-NHRTT、-NRTT 2、-RTM，
-LT-NH2、-LT-NHRTT、-LT-NRTT 2、-LT-RTM，
-C(＝O)OH、-C(＝O)ORTT，
-OC(＝O)RTT，
-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHRTT、-C(＝O)NRTT 2、-C(＝O)RTM，
-NHC(＝O)RTT，
-C(＝O)RTT，
-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NHRTT、-S(＝O)2NRTT 2、-S(＝O)2RTM，
-NHS(＝O)2RTT，
-CN或-NO2。
(63)根据(1)至(59)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSC独立地是：
-RTT，
-F、-Cl、-Br、-I，
-OH、-ORTT，
-LT-OH、-LT-ORTT，
-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2，
-NH2、-NHRTT、-NRTT 2、-RTM，
-LT-NH2、-LT-NHRTT、-LT-NRTT 2或-LT-RTM。
(64)根据(1)至(59)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSC独立地是：
-RTT，
-F、-Cl、-Br、-I，
-OH、-ORTT，
-LT-OH、-LT-ORTT，
-CF3、-CHF2、-OCF3或-OCHF2。
(65)根据(1)至(59)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSC独立地是：
-RTT，
-F、-Cl、-Br、-I，
-OH、-ORTT，
-CF3、-CHF2、-OCF3或-OCHF2。
(66)根据(1)至(59)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSC独立地是：
-RTT，
-F、-Cl、-Br或-I。
(67)根据(1)至(59)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSC独立地是：
-RTT。
取代基-RSN
(68)根据(1)至(67)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSN独立地是：
-RTT，
-C(＝O)RTT，
-C(＝O)ORTT，
-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHRTT、-C(＝O)NRTT 2、-C(＝O)RTM，或
-S(＝O)2RTT。
(69)根据(1)至(67)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSN独立地是：
-RTT，
-C(＝O)RTT，或
-C(＝O)ORTT。
(70)根据(1)至(67)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSN是：
-RTT。
基团-LT-
(71)根据(1)至(70)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-LT-独立地是直链或支链饱和C1-3亚烷基。
(72)根据(1)至(70)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-LT-独立地是-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-、-CH(CH2CH3)-、-CH(CH3)CH2-或-CH2CH(CH3)-。
(73)根据(1)至(70)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-LT-独立地是-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-。
(74)根据(1)至(70)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-LT-是-CH2-。
基团-RTT
(75)根据(1)至(74)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT独立地是-RTT1、-RTT2、-RTT3或-LTT-RTT3。
(76)根据(1)至(74)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT独立地是-RTT1、-RTT3或-LTT-RTT3。
(77)根据(1)至(74)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT是-RTT1。
基团-RTT1
(78)根据(1)至(77)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT1独立地是直链或支链饱和C1-6烷基。
(79)根据(1)至(77)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT1独立地是直链或支链饱和C1-4烷基，并且任选地被一个或多个选自-F、-OH和-ORTTT的基团取代。
(80)根据(1)至(77)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT1独立地是直链或支链饱和C1-4烷基。
(81)根据(1)至(77)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT1独立地是-Me、-Et、-nPr、-iPr、-nBu、-sBu、-iBu或-tBu。
(82)根据(1)至(77)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT1独立地是-Me、-Et、-nPr或-iPr。
(83)根据(1)至(77)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT1是-Me。
基团-RTT2
(84)根据(1)至(83)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT2是饱和C3-6环烷基，并且任选地被一个或多个选自-F、-OH和-ORTTT的基团取代。
(85)根据(1)至(83)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT2是饱和C3-6环烷基。
(86)根据(1)至(83)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT2独立地是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
(87)根据(1)至(83)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT2是环丙基。
基团-RTT3
(88)根据(1)至(87)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT3是苯基，并且任选地被一个或多个选自-F、-Cl、-Br、-I、-RTTT、OH、-ORTTT、-OCF3、-NH2、-NHRTTT和-NRTTT 2的基团取代；
(89)根据(1)至(87)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT3是苯基，并且任选地被一个或多个选自-F、-Cl、-Br、-I、-RTTT、OH、-ORTTT和-OCF3的基团取代。
(90)根据(1)至(87)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT3是苯基，并且任选地被一个或多个选自-F、-Cl、-Br、-I和-RTTT的基团取代。
(91)根据(1)至(87)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT3是苯基。
基团-LTT-
(92)根据(1)至(91)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-LTT-独立地是直链或支链饱和C1-3亚烷基。
(93)根据(1)至(91)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-LTT-独立地是-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-、-CH(CH2CH3)-、-CH(CH3)CH2-或-CH2CH(CH3)-。
(94)根据(1)至(91)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-LTT-独立地是-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-。
(95)根据(1)至(91)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-LTT-是-CH2-。
基团-RTN
(96)根据(1)至(95)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTN独立地是直链或支链饱和C1-4烷基。
(97)根据(1)至(95)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTN是-Me。
基团-RTM
(98)根据(1)至(97)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTM独立地是氮杂环丁烷子基、吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、吗啉代基、氮杂环庚烷子基或二氮杂环庚烷子基，并且：
任选地在碳上被一个或多个选自以下的基团取代：-RTMM、-F、-OH和-ORTMM；并且
任选地在如果存在的仲氮上被选自以下的基团取代：-RTMM、-C(＝O)RTMM和-C(＝O)ORTMM。
(99)根据(1)至(97)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTM独立地是吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基或吗啉代基，并且：
任选地在碳上被一个或多个选自以下的基团取代：-RTMM、-F、-OH和-ORTMM；并且
任选地在如果存在的仲氮上被选自以下的基团取代：-RTMM、-C(＝O)RTMM和-C(＝O)ORTMM。
(100)根据(1)至(97)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTM独立地是吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基或吗啉代基，并且：
任选地在碳上被一个或多个选自以下的基团取代：-RTMM；并且
任选地在如果存在的仲氮上被选自以下的基团取代：-RTMM、-C(＝O)RTMM和-C(＝O)ORTMM。
(101)根据(1)至(97)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTM独立地是吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基或吗啉代基，并且：
任选地在碳上被一个或多个选自以下的基团取代：-RTMM；并且
任选地在如果存在的仲氮上被选自以下的基团取代：-RTMM。
基团-RTTT
(102)根据(1)至(101)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTTT独立地是直链或支链饱和C1-4烷基。
(103)根据(1)至(101)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTTT是-Me。
基团-RTMM
(104)根据(1)至(103)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTMM独立地是直链或支链饱和C1-4烷基。
(105)根据(1)至(103)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTMM是-Me。
基团-L7-
(106)根据(1)至(105)中的任一者所述的化合物，其中-L7-独立地是直链或支链饱和C1-3亚烷基。
(107)根据(1)至(105)中的任一者所述的化合物，其中-L7-独立地是-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-、-CH(CH2CH3)-、-CH(CH3)CH2-或-CH2CH(CH3)-。
(108)根据(1)至(105)中的任一者所述的化合物，其中-L7-独立地是-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-。
(109)根据(1)至(105)中的任一者所述的化合物，其中-L7-独立地是-CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-或-CH(CH2CH3)-。
(110)根据(1)至(105)中的任一者所述的化合物，其中-L7-独立地是-CH2-或-CH(CH3)-。
(111)根据(1)至(105)中的任一者所述的化合物，其中-L7-是-CH2-。
(112)根据(1)至(105)中的任一者所述的化合物，其中-L7-是-CH2-，并且进一步地，其中-L7-是-CD2-。
基团-R3
(113)根据(1)至(112)中的任一者所述的化合物，其中-R3是-R3A。
(114)根据(1)至(112)中的任一者所述的化合物，其中-R3是-R3B。
基团-R3A
(115)根据(1)至(114)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3A独立地是直链或支链饱和C1-6烷基。
(116)根据(1)至(114)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3A独立地是-Me、-Et、-nPr、-iPr、-nBu、-iBu、-sBu或-tBu、正戊基、叔戊基、新戊基、异戊基、仲戊基、3-戊基、1-己基、2-己基、3-己基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、4-甲基-2-戊基、4-甲基-3-戊基、2-甲基-2-戊基、2-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3,3-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-2-丁基、3-甲基-1-戊基、3-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、2,3-二甲基-1-丁基或2,3-二甲基-2-丁基。
(117)根据(1)至(114)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3A独立地是直链或支链饱和C1-4烷基。
(118)根据(1)至(114)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3A独立地是-Me、-Et、-nPr、-iPr、-nBu、-iBu、-sBu或-tBu。
(119)根据(1)至(114)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3A独立地是-Me、-Et、-nPr或-iPr。
(120)根据(1)至(114)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3A独立地是-Et、-nPr或-iPr。
(121)根据(1)至(114)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3A是-iPr。
基团-R3B
(122)根据(1)至(121)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3B是饱和C3-7环烷基。
(123)根据(1)至(121)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3B独立地是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
(124)根据(1)至(121)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3B独立地是环丙基或环丁基。
(125)根据(1)至(121)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3B是环丙基。
(126)根据(1)至(121)中的任一者所述的化合物，其中如果存在，那么-R3B是环丁基。
一些优选组合
(127)根据(1)所述的化合物，其中：
-R7独立地是：
咪唑并[1,2-a]吡啶基；
咪唑并[1,2-a]嘧啶基；
苯并咪唑基；
咪唑并[2,1-b]噻唑基；
咪唑并[1,2-b]哒嗪基；
[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基；
喹啉基；或
苯并呋喃基；
并且任选地如本文所述被取代；
-L7-是-CH2-或-CH(CH3)-；
-R3是-R3A或-R3B；
-R3A是-iPr；并且
-R3B是环丙基。
(128)根据(1)所述的化合物，其中：
-R7独立地是：
2-咪唑并[1,2-a]吡啶基；
3-咪唑并[1,2-a]吡啶基；
2-咪唑并[1,2-a]嘧啶基；
2-苯并咪唑基；
5-苯并咪唑基；
6-咪唑并[2,1-b]噻唑基；
2-咪唑并[1,2-b]哒嗪基；
2-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基；
2-喹啉基；
3-喹啉基；或
2-苯并呋喃基；
并且任选地如本文所述被取代；
-L7-是-CH2-或-CH(CH3)-；
-R3是-R3A或-R3B；
-R3A是-iPr；并且
-R3B是环丙基。
(129)根据(1)所述的化合物，其中：
-R7独立地是：
咪唑并[1,2-a]吡啶基；或
咪唑并[1,2-a]嘧啶基；
并且任选地如本文所述被取代；
-L7-是-CH2-或-CH(CH3)-；
-R3是-R3A或-R3B；
-R3A是-iPr；并且
-R3B是环丙基。
(130)根据(1)所述的化合物，其中：
-R7独立地是：
2-咪唑并[1,2-a]吡啶基；
2-咪唑并[1,2-a]嘧啶基；
并且任选地如本文所述被取代；
-L7-是-CH2-或-CH(CH3)-；
-R3是-R3A或-R3B；
-R3A是-iPr；并且
-R3B是环丙基。
(131)根据(1)所述的化合物，其中：
-R7独立地是：
咪唑并[1,2-a]吡啶基；
咪唑并[1,2-a]嘧啶基；
苯并咪唑基；或
咪唑并[2,1-b]噻唑基；
并且任选地如本文所述被取代；
-L7-是-CH2-；
-R3是-R3A；并且
-R3A是-iPr。
(132)根据(1)所述的化合物，其中：
-R7独立地是：
咪唑并[1,2-a]吡啶基；
咪唑并[1,2-a]嘧啶基；或
苯并咪唑基；
并且任选地如本文所述被取代；
-L7-是-CH2-；
-R3是-R3A；并且
-R3A是-iPr。
(133)根据(1)所述的化合物，其中：
-R7独立地是：
3-咪唑并[1,2-a]吡啶基；
2-咪唑并[1,2-a]吡啶基；
2-咪唑并[1,2-a]嘧啶基；
2-苯并咪唑基；
5-苯并咪唑基；或
咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基；
并且任选地如本文所述被取代；
-L7-是-CH2-；
-R3是-R3A；并且
-R3A是-iPr。
(134)根据(1)所述的化合物，其中：
-R7独立地是：
3-咪唑并[1,2-a]吡啶基；
2-咪唑并[1,2-a]吡啶基；
2-咪唑并[1,2-a]嘧啶基；
2-苯并咪唑基；或
5-苯并咪唑基；
并且任选地如本文所述被取代；
-L7-是-CH2-；
-R3是-R3A；并且
-R3A是-iPr。
具体化合物
(135)根据(1)所述的化合物，所述化合物选自下式化合物及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物：
Figure BDA0003693597550000431
Figure BDA0003693597550000441
Figure BDA0003693597550000451
Figure BDA0003693597550000461
Figure BDA0003693597550000471
Figure BDA0003693597550000481
Figure BDA0003693597550000491
Figure BDA0003693597550000501
Figure BDA0003693597550000511
Figure BDA0003693597550000521
Figure BDA0003693597550000531
Figure BDA0003693597550000541
组合
应了解，为明晰起见在单独实施方案的情形下描述的本发明的某些特征还可在单一实施方案中组合地提供。相反，为简洁起见在单一实施方案的情形下描述的本发明的各种特征还可单独或以任何适合子组合提供。涉及由变量(例如-R7、-L3-、-R3等)表示的化学基团的实施方案的所有组合都由本发明具体地包括，并且在本文中公开，就好像单独地和明确地公开每一个组合一样，只要是此类组合包括是稳定化合物(即可被分离、表征和测试生物活性的化合物)的化合物即可。在这个情形下，熟练人士将易于了解，基团(例如取代基)的某些组合可能产生可不易于合成，并且/或者在化学方面不稳定的化合物。此外，描述此类变量的实施方案中所列的化学基团的所有子组合也都由本发明具体地包括，并且在本文中公开，就好像单独地和明确地在本文中公开化学基团的每一个这种组合一样。
大体上纯化形式
本发明的一个方面涉及呈大体上纯化形式和/或呈大体上不含污染物的形式的如本文所述的H-APPAMP化合物。
在一个实施方案中，大体上纯化形式是至少50重量％，例如至少60重量％，例如至少70重量％，例如至少80重量％，例如至少90重量％，例如至少95重量％，例如至少97重量％，例如至少98重量％，例如至少99重量％。
除非另外指定，否则大体上纯化形式是指呈任何立体异构或对映异构形式的化合物。举例来说，在一个实施方案中，大体上纯化形式是指立体异构体的混合物，即相对于其他化合物被纯化。在一个实施方案中，大体上纯化形式是指一种立体异构体，例如光学纯立体异构体。在一个实施方案中，大体上纯化形式是指对映异构体的混合物。在一个实施方案中，大体上纯化形式是指对映异构体的等摩尔混合物(即外消旋混合物、外消旋物)。在一个实施方案中，大体上纯化形式是指一种对映异构体，例如光学纯对映异构体。
在一个实施方案中，污染物占至多50重量％，例如至多40重量％，例如至多30重量％，例如至多20重量％，例如至多10重量％，例如至多5重量％，例如至多3重量％，例如至多2重量％，例如至多1重量％。
除非指定，否则污染物是指其他化合物，即除立体异构体或对映异构体以外的化合物。在一个实施方案中，污染物是指其他化合物和其他立体异构体。在一个实施方案中，污染物是指其他化合物和其他对映异构体。
在一个实施方案中，大体上纯化形式是至少60％光学纯的(即基于摩尔数，60％的化合物是所需立体异构体或对映异构体，并且40％是非所需立体异构体或对映异构体)，例如至少70％光学纯的，例如至少80％光学纯的，例如至少90％光学纯的，例如至少95％光学纯的，例如至少97％光学纯的，例如至少98％光学纯的，例如至少99％光学纯的。
异构体
某些化合物可以一种或多种特定几何、光学、对映异构、非对映异构、差向异构、阻转、立体异构、互变异构、构象或端基异构形式存在，包括但不限于顺式和反式形式；E和Z形式；c、t和r形式；内型和外型形式；R、S和内消旋形式；D和L形式；d和l形式；(+)和(-)形式；酮、烯醇和烯醇化物形式；顺和反形式；顺错和反错形式；α和β形式；直立和平伏形式；船、椅、扭曲、信封和半椅形式；以及它们的组合，在下文中总称为“异构体”(或“异构形式”)。
提及一类结构可肯定地包括落在那个类别内的结构异构形式(例如C1-7烷基包括正丙基和异丙基；丁基包括正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基；甲氧基苯基包括邻甲氧基苯基、间甲氧基苯基和对甲氧基苯基)。然而，提及具体基团或取代样式不意图包括关于原子之间的连接而非根据在空间中的位置有差异的其他结构(或组成异构体)。举例来说，提及甲氧基-OCH3不应解释为提及它的结构异构体羟甲基-CH2OH。类似地，具体提及邻氯苯基不应解释为提及它的结构异构体间氯苯基。
以上排除不涉及互变异构形式，例如酮、烯醇和烯醇化物形式，如呈例如以下互变异构对形式：酮/烯醇(以下说明)、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇、N-亚硝基/羟基偶氮基、以及硝基/酸式硝基。在本文中提及一种互变异构体意图涵盖两种互变异构体。
Figure BDA0003693597550000561
举例来说，1H-吡啶-2-酮-5-基和2-羟基-吡啶-5-基(以下显示)是彼此的互变异构体。在本文中提及一者意图涵盖两者。
Figure BDA0003693597550000571
注意术语“异构体”中具体包括具有一个或多个同位素取代的化合物。举例来说，H可呈任何同位素形式，包括1H、2H(D)和3H(T)；C可呈任何同位素形式，包括12C、13C和14C；O可呈任何同位素形式，包括16O和18O；等。
除非另外指定，否则提及特定化合物包括所有此类异构形式，包括其混合物(例如外消旋混合物)。用于制备(例如不对称合成)和分离(例如分步结晶和色谱手段)此类异构形式的方法在本领域中是已知的，或易于通过以已知方式修改本文教导的方法或已知方法获得。
盐
可适宜或合乎需要的是制备、纯化和/或处理化合物的相应盐，例如药学上可接受的盐。药学上可接受的盐的实例在Berge等人，1977,“Pharmaceutically AcceptableSalts,”J.Pharm.Sci.，第66卷，第1-19页中讨论。
举例来说，如果化合物是阴离子性的，或具有可为阴离子的官能团(例如-COOH可为-COO-)，那么盐可用适合阳离子形成。适合无机阳离子的实例包括但不限于碱金属离子诸如Na+和K+、碱土金属阳离子诸如Ca2+和Mg2+、以及其他阳离子诸如Al3+以及铵离子(即NH4 +)。适合有机阳离子的实例包括但不限于经取代铵离子(例如NH3R+、NH2R2 +、NHR3 +、NR4 +)，例如其中每个R独立地是直链或支链饱和C1-18烷基、C3-8环烷基、C3-8环烷基-C1-6烷基和苯基-C1-6烷基，其中所述苯基任选地被取代。一些适合的经取代铵离子的实例是源于以下的那些：乙胺、二乙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苯甲基胺、苯基苯甲基胺、胆碱(choline)、葡甲胺(meglumine)和缓血酸胺(tromethamine)以及氨基酸诸如赖氨酸和精氨酸。常见季铵离子的一实例是N(CH3)4 +。
如果化合物是阳离子性的，或具有在质子化后可变为阳离子的官能团(例如-NH2可变为-NH3 +)，那么盐可用适合阴离子形成。
举例来说，如果母体结构含有阳离子基团(例如-NMe2 +)或具有在质子化后可变为阳离子的官能团(例如-NH2可变为-NH3 +)，那么盐可用适合阴离子形成。在季铵化合物的情况下，反阴离子通常始终存在以平衡正电荷。如果除阳离子基团(例如-NMe2 +、-NH3 +)之外，化合物还含有能够形成阴离子的基团(例如-COOH)，那么可形成内盐(也被称为两性离子)。
适合无机阴离子的实例包括但不限于源于以下无机酸的那些：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸和亚磷酸。
适合有机阴离子的实例包括但不限于源于以下有机酸的那些：2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、三氟乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、依地酸(edetic)、1,2-乙烷二磺酸、乙烷磺酸、反丁烯二酸、葡萄庚酸、葡萄糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基顺丁烯二酸、羟基萘甲酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、顺丁烯二酸、苹果酸、甲烷磺酸、粘液酸、油酸、草酸、棕榈酸、帕莫酸(pamoic)、泛酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、丁二酸、磺胺酸、酒石酸、甲苯磺酸和戊酸。适合聚合有机阴离子的实例包括但不限于源于以下聚合酸的那些：丹宁酸、羧甲基纤维素。
尤其适于季铵化合物(例如具有-NMe2 +基团的那些)的适合反离子的实例包括1-金刚烷磺酸根、苯磺酸根、硫酸氢根、溴离子、氯离子、碘离子、甲烷磺酸根、甲基硫酸根、1,5-萘-双磺酸根、4-硝基苯磺酸根、甲酸根、酒石酸根、甲苯磺酸根、三氟乙酸根、三氟甲基磺酸根、硫酸根。同样，如果化合物还含有能够形成阴离子的基团(例如-COOH)，那么可形成内盐。
除非另外指定，否则提及特定化合物还包括其盐形式。
溶剂化物和水合物
可适宜或合乎需要的是制备、纯化和/或处理化合物的相应溶剂化物。术语“溶剂化物”在本文中以常规意义用于指代溶质(例如化合物、化合物的盐)和溶剂的复合物。如果溶剂是水，那么溶剂化物可适宜地称为水合物，例如单水合物、二水合物、三水合物等。
除非另外指定，否则提及特定化合物还包括其溶剂化物和水合物形式。
化学保护形式
可适宜或合乎需要的是制备、纯化和/或处理呈化学保护形式的化合物。术语“化学保护形式”在本文中以常规化学意义使用，并且涉及其中一个或多个反应性官能团被保护以免遭在指定条件(例如pH、温度、辐射、溶剂等)下不合需要的化学反应的化合物。在实践中，熟知化学方法用于可逆地致使否则将是反应性的官能团在指定条件下不起反应。在化学保护形式中，一个或多个反应性官能团呈被保护或保护基团形式(或者呈被掩蔽或掩蔽基团或被封阻或封阻基团形式)。通过保护反应性官能团，可进行涉及其他未保护反应性官能团的反应，而不影响被保护基团；通常在后续步骤中，保护基可被移除或掩蔽基团可被转化，而不实质上影响分子的其余部分。参见例如Protective Groups in Organic Synthesis(T.Green和P.Wuts；第4版；John Wiley and Sons,2006)。
在有机合成中，广泛多种此类“保护”、“封阻”或“掩蔽”方法被广泛使用，并且是熟知的。举例来说，可使具有两个非等效反应性官能团(其两者在指定条件下均将是反应性的)的化合物衍生以致使一个官能团“被保护”，因此在指定条件下不起反应；在如此保护的情况下，所述化合物可用作实际上仅具有一个反应性官能团的反应物。在所需反应(涉及另一官能团)完成之后，可将被保护基团“脱保护”以使它恢复它的原始官能性。
举例来说，羟基可被保护成醚(-OR)或酯(-OC(＝O)R)，例如保护成：叔丁基醚；苯甲基醚、二苯甲基(二苯基甲基)醚、或三苯甲基(三苯基甲基)醚；三甲基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基醚；或乙酰基酯(-OC(＝O)CH3、-OAc)。
举例来说，醛或酮基团可分别被保护成缩醛(R-CH(OR)2)或缩酮(R2C(OR)2)，其中羰基(>C＝O)通过与例如伯醇在酸存在下反应而转化成1,1-二醚(>C(OR)2)。醛或酮基团易于再生，例如通过在酸存在下使用水进行水解。
举例来说，胺基团可例如被保护成酰胺(-NRCO-R)或氨基甲酸酯(-NRCO-OR)，例如保护成：乙酰胺(-NHCO-CH3)；苯甲基氧基酰胺(-NHCO-OCH2C6H5，-NH-Cbz)；叔丁氧基酰胺(-NHCO-OC(CH3)3，-NH-Boc)；2-联苯-2-丙氧基酰胺(-NHCO-OC(CH3)2C6H4C6H5，-NH-Bpoc)、9-芴基甲氧基酰胺(-NH-Fmoc)、6-硝基藜芦基氧基酰胺(-NH-Nvoc)、2-三甲基甲硅烷基乙基氧基酰胺(-NH-Teoc)、2,2,2-三氯乙基氧基酰胺(-NH-Troc)、烯丙基氧基酰胺(-NH-Alloc)、2(-苯基磺酰基)乙基氧基酰胺(-NH-Psec)；或在适合情况(例如环胺)下，氮氧自由基(>N-O●)。
举例来说，羧酸基团可被保护成酯，例如保护成：C1-7烷基酯(例如甲酯；叔丁酯)；C1-7卤代烷基酯(例如2,2,2-三卤代乙酯)；2-三(C1-7烷基)甲硅烷基-乙酯；或C5-20芳基-C1-7烷基酯(例如苯甲酯；硝基苯甲酯)；或酰胺或酰肼，例如乙酰胺或N,N,N’-三甲基酰肼。
举例来说，硫醇基团可被保护成硫醚(-SR)，例如保护成：苯甲基硫醚；乙酰胺基甲基醚(-S-CH2NHC(＝O)CH3)。
前药
可适宜或合乎需要的是制备、纯化和/或处理呈前药形式的化合物。如本文所用的术语“前药”涉及在体内产生所需活性化合物的化合物。通常，前药是非活性的，或活性小于所需活性化合物，但可提供有利的处理、施用或代谢性质。
举例来说，一些前药是活性化合物的酯(例如生理上可接受的代谢不稳定酯)。在代谢期间，酯基团(-C(＝O)OR)被裂解以产生活性药物。此类酯可通过例如对母体化合物中的任何羧酸基团(-C(＝O)OH)进行酯化来形成，其中当适当时，先前对母体化合物中存在的任何其他反应性基团进行保护，随后如果需要，那么脱保护。
此外，一些前药被酶促活化以产生活性化合物，或在进一步化学反应后产生活性化合物的化合物(例如如在抗体引导的酶前药疗法(ADEPT)、基因引导的酶前药疗法(GDEPT)、脂质引导的酶前药疗法(LIDEPT)等中)。举例来说，前药可为糖衍生物或其他糖苷缀合物，或可为氨基酸酯衍生物。
组合物
本发明的一个方面涉及一种包含如本文所述的H-APPAMP化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的组合物(例如药物组合物)。
本发明的另一方面涉及一种制备组合物(例如药物组合物)的方法，所述方法包括混合如本文所述的H-APPAMP化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
用途
本文所述的H-APPAMP化合物可用于治疗例如增生性病症(作为“抗增生剂”)、癌症(作为“抗癌剂”)、病毒性感染(作为“抗病毒剂”)、神经变性疾病(作为“抗神经变性剂”)等。
在抑制CDK的方法中的用途
本发明的一个方面涉及一种在体外或在体内抑制CDK(例如CDK12和/或CDK13)功能(例如细胞中)的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的如本文所述的H-APPAMP化合物接触。
本领域普通技术人员能够容易地确定候选化合物是否抑制CDK(例如CDK12和/或CDK13)。举例来说，适合测定在本文中加以描述或在本领域中是已知的。
在一个实施方案中，方法在体外进行。
在一个实施方案中，方法在体内进行。
在一个实施方案中，H-APPAMP化合物以药学上可接受的组合物形式提供。
可处理任何细胞类型，包括脂肪、肺、胃肠(包括例如肠、结肠)、乳房(乳腺)、卵巢、前列腺、肝脏(肝)、肾脏(肾)、膀胱、胰腺、脑和皮肤。
举例来说，可使细胞的样品在体外生长，并且使化合物与所述细胞接触，并且观察所述化合物对这些细胞的作用。作为“作用”的一实例，可确定细胞的形态学状况(例如活着或死亡等)。当发现化合物对细胞施加影响时，这可用作化合物在治疗携带相同细胞类型的细胞的患者的方法中的功效的预后或诊断标志。
在抑制细胞增殖等的方法中的用途
本文所述的H-APPAMP化合物例如(a)调控(例如抑制)细胞增殖；(b)抑制细胞周期进展；(c)促进凋亡；或(d)达成这些中的一者或多者的组合。
本发明的一个方面涉及一种在体外或在体内调控(例如抑制)细胞增殖(例如细胞的增殖)，抑制细胞周期进展，促进凋亡，或达成这些中的一者或多者的组合的方法，所述方法包括使细胞与有效量的如本文所述的H-APPAMP化合物接触。
在一个实施方案中，方法是在体外或在体内调控(例如抑制)细胞增殖(例如细胞的增殖)的方法，所述方法包括使细胞与有效量的如本文所述的H-APPAMP化合物接触。
在一个实施方案中，方法在体外进行。
在一个实施方案中，方法在体内进行。
在一个实施方案中，H-APPAMP化合物以药学上可接受的组合物形式提供。
可处理任何细胞类型，包括肺、胃肠(包括例如肠、结肠)、乳房(乳腺)、卵巢、前列腺、肝脏(肝)、肾脏(肾)、膀胱、胰腺、脑和皮肤。
本领域普通技术人员能够容易地确定候选化合物是否调控(例如抑制)细胞增殖等。举例来说，本文描述可适宜地用于评估由特定化合物提供的活性的测定。
举例来说，可使细胞的样品(例如来自肿瘤)在体外生长，并且使化合物与所述细胞接触，并且观察所述化合物对这些细胞的作用。作为“作用”的一实例，可确定细胞的形态学状况(例如活着或死亡等)。当发现化合物对细胞施加影响时，这可用作化合物在治疗携带相同细胞类型的细胞的患者的方法中的功效的预后或诊断标志。
在治疗方法中的用途
本发明的另一方面涉及一种如本文所述的H-APPAMP化合物，所述H-APPAMP化合物用于通过疗法治疗人体或动物体的方法中，例如用于治疗如本文所述的病症(例如疾病)的方法中。
在药物的制造中的用途
本发明的另一方面涉及如本文所述的H-APPAMP化合物在例如用于治疗方法中，例如用于治疗如本文所述的病症(例如疾病)的方法中的药物的制造中的用途。
在一个实施方案中，药物包含H-APPAMP化合物。
治疗方法
本发明的另一方面涉及一种治疗方法，例如一种治疗如本文所述的病症(例如疾病)的方法，所述治疗方法包括向需要治疗的个体施用治疗有效量的优选地呈药物组合物形式的如本文所述的H-APPAMP化合物。
治疗的病症-与CDK相关的病症
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对以下的治疗：与CDK尤其是CDK12和/或CDK13相关的病症(例如疾病)；由CDK尤其是CDK12和/或CDK13的不当活性所致的病症(例如疾病)；与CDK突变尤其是CDK12和/或CDK13突变相关的病症(例如疾病)；与CDK过度表达尤其是CDK12和/或CDK13过度表达相关的病症(例如疾病)；与CDK尤其是CDK12和/或CDK13的上游通路活化相关的病症(例如疾病)；通过抑制(例如选择性抑制)CDK尤其是CDK12和/或CDK13而得到改善的病症(例如疾病)。
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对与CDK尤其是CDK12和/或CDK13相关的病症(例如疾病)的治疗。
在一个实施方案中，治疗是对以下的治疗：由CDK尤其是CDK12和/或CDK13的不当活性所致的病症(例如疾病)。
在一个实施方案中，治疗是对以下的治疗：与CDK突变尤其是CDK12突变；CDK过度表达尤其是CDK12和/或CDK13过度表达(例如相较于相应正常细胞；例如其中过度表达是1.5、2、3、5、10、20或50倍)；或CDK尤其是CDK12和/或CDK13的上游通路活化相关的病症(例如疾病)。
在一个实施方案中，治疗是对通过抑制(例如选择性抑制)CDK尤其是CDK12和/或CDK13而得到改善的病症(例如疾病)的治疗。
治疗的病症
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对以下的治疗：增生性病症；癌症；病毒性感染(例如HIV)；神经变性病症(例如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病)；缺血；肾病；心血管病症(例如动脉粥样硬化)；或自身免疫性病症(例如类风湿性关节炎)。
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对以下的治疗：由细胞中翻译功能异常引起的病症(例如疾病)，例如肌营养不良、肌萎缩性侧索硬化、脊髓性肌萎缩和脆性X染色体综合征。
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对以下的治疗：已接受先前治疗性治疗，但收到少许或未收到来自这些治疗的进一步临床益处的患者中的病症(例如疾病)。这包括例如已接受用PARP抑制剂、CDK抑制剂和/或HER2定向疗法进行的先前治疗性治疗的患者(参见例如Johnson等人,2016；Choi等人,2019)。
治疗的病症-增生性病症
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对增生性病症的治疗。
如本文所用的术语“增生性病症”涉及过量或异常细胞的非所要或不受控制的细胞增殖，此是非所需的，诸如赘生性或增生性生长。
在一个实施方案中，治疗是对以下的治疗：特征在于良性、恶化前或恶性细胞增殖的增生性病症。
在一个实施方案中，治疗是对以下的治疗：增生；赘瘤；肿瘤(例如组织细胞瘤、胶质瘤、星形细胞瘤、骨瘤)；癌症；牛皮癣；骨病；纤维增生性病症(例如结缔组织纤维增生性病症)；肺纤维化；动脉粥样硬化；或血管中的平滑肌细胞增殖(例如狭窄或在血管成形术之后的再狭窄)。
治疗的病症-癌症
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对癌症的治疗。
在一个实施方案中，治疗是对癌转移的治疗。
包括在癌症之中的是：
(1)上皮癌，包括源于复层鳞状上皮的肿瘤(鳞状细胞癌)和在器官或腺体内产生的肿瘤(腺癌)。实例包括乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌。
(2)肉瘤，包括：骨肉瘤和骨源性肉瘤(骨)；软骨肉瘤(软骨)；平滑肌肉瘤(平滑肌)；横纹肌肉瘤(骨骼肌)；间皮肉瘤和间皮瘤(体腔的膜性内衬)；纤维肉瘤(纤维组织)；血管肉瘤和血管内皮瘤(血管)；脂肉瘤(脂肪组织)；胶质瘤和星形细胞瘤(见于脑中的神经源性结缔组织)；粘液肉瘤(原始胚性结缔组织)；间质和混合中胚层肿瘤(混合结缔组织类型)。
(3)骨髓瘤。
(4)造血系统肿瘤，包括：髓源性和粒细胞性白血病(髓样和粒细胞性白血细胞系列的恶性肿瘤)，例如慢性髓样白血病(CML)、急性髓样白血病(AML)；淋巴性、淋巴细胞性和淋巴母细胞性白血病(淋巴样和淋巴细胞性血细胞系列的恶性肿瘤)，例如急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；真性红细胞增多症(各种血细胞产物，但其中红细胞占优势的恶性肿瘤)。
(5)淋巴瘤，包括：霍奇金(Hodgkin)和非霍奇金淋巴瘤。
(6)混合类型，包括例如腺鳞癌；混合中胚层肿瘤；癌肉瘤；畸胎癌。
举例来说，在一个实施方案中，治疗是对乳腺癌的治疗。
在一个实施方案中，癌症与CDK尤其是CDK12和/或CDK13相关。
在一个实施方案中，癌症的特征在于或特征还在于CDK尤其是CDK12和/或CDK13的不当活性。
在一个实施方案中，癌症的特征在于或特征还在于CDK尤其是CDK12和/或CDK13的过度表达。
在一个实施方案中，癌症的特征在于或特征还在于CDK12和/或CDK13基因的扩增，包括例如过度表达蛋白HER2的癌症，其中17q12-q21基因座被扩增(参见例如Choi等人,2019)。
在一个实施方案中，癌症的特征在于或特征还在于导致癌症出现的基因的融合，包括例如具有EWS-FLI(参见例如Inigues等人,2018)、BCR-ABL、EML4-ALK、FGFR3-TACC3、KIF5B-RET、ETV6-RUNX1或TMPRSS2-ERG的基因融合的癌症。
抗癌作用可通过一种或多种机制来产生，所述机制包括但不限于调控细胞增殖、抑制细胞周期进展、抑制血管生成(新血管的形成)、抑制转移(肿瘤从它的起源扩散)、抑制细胞迁移(癌细胞扩散至身体的其他部分)、抑制侵袭(肿瘤细胞扩散至相邻正常结构中)、促进凋亡(程序化细胞死亡)、通过坏死来达成死亡、或诱导通过自体吞噬达成的死亡。本文所述的化合物可用于独立于本文讨论的机制来治疗本文所述的癌症。
治疗的病症-DNA修复
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对具有涉及于DNA修复中的蛋白质的基因的表达不足、缺陷和/或突变的患者中的病症(例如疾病)的治疗，所述基因包括例如BRCA1、BRCA2、ATM、ATR、BAP1、CDK12、CDK13、CHK1、CHK2、FANCA、FANCC、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCI、PALB2、NBS1、WRN、RAD51B、RAD51C、RAD51D、MRE11A、BLM、BRIP1。这包括例如肿瘤显示“BRCA状态(BRCAness)”的癌症患者(参见例如Lord等人,2019)。
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对具有涉及于非同源DNA修复中的蛋白质的基因的表达不足、缺陷和/或突变的患者中的病症(例如疾病)的治疗，所述基因包括例如XLF、RAD50、NBS1、MRE11、LIG4、XRCC4、POLL、POLM。
治疗的病症-病毒性感染
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对病毒性感染的治疗。
在一个实施方案中，治疗是对由以下所致的病毒性感染的治疗：
(第I组：)dsDNA病毒，例如腺病毒、疱疹病毒、痘病毒；
(第II组：)ssDNA病毒，例如细小病毒；
(第III组：)dsRNA病毒，例如呼肠孤病毒；
(第IV组：)(+)ssRNA病毒，例如微小RNA病毒、外衣病毒；
(第V组：)(-)ssRNA病毒，例如正粘病毒、弹状病毒；
(第VI组：)ssRNA-RT病毒，例如逆转录病毒；或
(第VII组：)dsDNA-RT病毒，例如嗜肝DNA病毒。
如上所用：ds：双链；ss：+链；(+)ssRNA：+链RNA；(-)ssRNA：-链RNA；ssRNA-RT：在生命周期中伴有DNA中间体的(+链)RNA。
在一个实施方案中，治疗是对以下的治疗：人免疫缺陷病毒(HIV)；乙型肝炎病毒(HBV)；丙型肝炎病毒(HCV)；人乳头状瘤病毒(HPV)；巨细胞病毒(CMV)；或艾伯斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)(EBV)；与卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma)相关的人疱疹病毒8(HHV)；柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3)；博纳病毒(Borna virus)；流感病毒。
治疗的病症-自身免疫性病症
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对自身免疫性病症的治疗。
在一个实施方案中，治疗是对以下的治疗：与结缔组织、关节、皮肤或眼相关的自身免疫性病症。
在一个实施方案中，治疗是对以下的治疗：类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、牛皮癣或舍格伦氏综合征(Sjogren’s syndrome)。
治疗的病症-由细胞中翻译功能异常引起的病症
在一个实施方案(例如在治疗方法中的用途的实施方案、在药物的制造中的用途的实施方案、治疗方法的实施方案)中，治疗是对由细胞中翻译功能异常引起的病症的治疗。
在一个实施方案中，治疗是对以下的治疗：肌营养不良、强直性肌营养不良、肌萎缩性侧索硬化、脊髓性肌萎缩或脆性X染色体综合征。
治疗
如本文在治疗病症的情形下所用的术语“治疗”通常涉及治疗人或动物(例如在兽医学应用中)，其中实现一些所需治疗作用，例如抑制所述病症的进展，并且包括降低进展速率、使进展速率停止、减轻所述病症的症状、改善所述病症以及治愈所述病症。还包括作为预防措施的治疗(即预防)。举例来说，术语“治疗”涵盖在患者尚未显现病症，但处于显现病症的风险下的情况下使用。
举例来说，治疗包括预防癌症、减少癌症的发生、减轻癌症的症状等。
如本文所用的术语“治疗有效量”涉及化合物或包含化合物的材料、组合物或剂型的在根据所需治疗方案施用时有效产生某一所需治疗作用，与合理益处/风险比相称的那个量。
组合疗法
术语“治疗”包括组合治疗和疗法，其中例如依序或同时组合两种或更多种治疗或疗法。举例来说，本文所述的化合物还可例如与其他剂联合用于组合疗法中。治疗和疗法的实例包括化学疗法(施用活性剂，包括例如药物、抗体(例如如在免疫疗法中)、前药(包括例如如在光动力疗法、GDEPT、ADEPT等中))；手术；放射疗法；光动力疗法；基因疗法；和控制膳食。
本发明的一个方面涉及一种与一种或多种(例如1、2、3、4种等)如下所述的额外治疗剂组合的如本文所述的化合物。
特定组合将由医师酌情决定，所述医师将使用他的公知常识和为熟练从业者所知的给药方案来选择剂量。
各种剂(即本文所述的化合物加上一种或多种其他剂)可同时或依序施用，并且可以各自不同的剂量时程以及通过不同途径施用。举例来说，当依序施用时，各种剂可在紧密间隔下(例如在5-10分钟的时期内)或在较长间隔下(例如相隔1、2、3、4小时或更久，或当需要时相隔甚至更长时期)施用，其中确切剂量方案与一种或多种治疗剂的性质相称。
各种剂(即此处所述的化合物加上一种或多种其他剂)可以单一剂型配制在一起，或者，单种剂可单独配制并以药盒形式一起提供，所述药盒任选地具有关于它们的使用的说明书。
可与用本文所述的H-APPAMP化合物进行的治疗共同施用/组合的额外剂/疗法的实例包括以下：
芳香酶抑制剂，例如依西美坦(exemestane)(也被称为阿诺新(Aromasin))、来曲唑(letrozole)(也被称为弗隆(Femara))、阿那曲唑(anastrozole)(也被称为瑞宁得(Arimidex))等；
抗雌激素剂，例如芙仕得(faslodex)(也被称为氟维司群(Fulvestrant)和ICI182780)、他莫昔芬(tamoxifen)(也被称为诺瓦得士(Nolvadex))、羟基他莫昔芬(hydroxytamoxifen)等；
抗雄激素剂，例如用于治疗前列腺癌的抗雄激素剂，例如氟他胺(flutamide)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、阿帕鲁胺(apalutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、尼鲁米特(nilutamide)等；
Her2阻断剂，例如赫赛汀(herceptin)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、拉帕替尼(lapatinib)等；
细胞毒性化学治疗剂，例如紫杉烷(taxane)(例如紫杉醇(paclitaxel)，也被称为泰素(Taxol)；多西他赛(docetaxel)，也被称为泰索帝(Taxotere))、环磷酰胺(cyclophosphamide)、抗代谢物(antimetabolite)(例如卡铂(carboplatin)、卡培他滨(capecitabine)、吉西他滨(gemcitabine)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、5-氟尿嘧啶等)，
刺激免疫系统的剂，例如Toll样受体(TLR1-13)激动剂、干扰素基因刺激因子(STING)激动剂等；
检查点抑制剂，例如PD1、PD1L、CTLA4等的抑制剂，例如帕博利珠单抗(pembrolizumab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)、伊匹木单抗(ipilimumab)等；
DNA修复抑制剂，例如PARP抑制剂，例如奥拉帕尼(Olaparib)、尼拉帕尼(Niraparib)等。
因此，在一个实施方案中，治疗还包括用是例如芳香酶抑制剂、抗雌激素剂、抗雄激素剂、Her2阻断剂、细胞毒性化学治疗剂、刺激免疫系统的剂、检查点抑制剂、DNA修复抑制剂等的其他活性剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。
其他用途
本文所述的H-APPAMP化合物还可作为细胞培养添加剂用于抑制CDK(例如CDK12和/或CDK13)。
本文所述的H-APPAMP化合物还可用作体外测定的一部分，例如以确定候选宿主是否可能受益于用所讨论的化合物进行的治疗。
本文所述的H-APPAMP化合物还可例如在测定中用作标准物以鉴定其他活性化合物、其他CDK12和/或CDK13抑制剂等。
药盒
本发明的一个方面涉及一种药盒，所述药盒包括(a)如本文所述的H-APPAMP化合物或包含如本文所述的H-APPAMP化合物的组合物，例如优选地于适合容器中以及/或者以适合包装提供；和(b)使用说明书，例如关于如何施用所述化合物或组合物的书面说明书。
书面说明书还可包括活性成分针对其是适合治疗剂的适应症的清单。
施用途径
H-APPAMP化合物或包含H-APPAMP化合物的药物组合物可通过任何适宜的施用途径施用至个体，无论是全身地/外周地还是表面地(即在所需作用部位处)施用。
施用途径的实例包括口服(例如通过摄取)；经颊；舌下；经皮(包括例如通过贴片、膏药等)；经粘膜(包括例如通过贴片、膏药等)；鼻内(例如通过鼻腔喷雾剂)；经眼(例如通过滴眼剂)；经肺(例如通过使用例如通过气雾剂，例如通过口或鼻进行的吸入或吹入疗法)；经直肠(例如通过栓剂或灌肠剂)；经阴道(例如通过阴道栓剂)；胃肠外，例如通过注射，包括皮下、真皮内、肌肉内、静脉内、动脉内、心内、鞘内、脊柱内、囊内、囊下、眶内、腹膜内、气管内、表皮下、关节内、蛛网膜下和胸骨内注射；通过例如皮下或肌肉内植入储库或贮库。
个体/患者
个体/患者可为脊索动物、脊椎动物、哺乳动物、有胎盘的哺乳动物、有袋动物(例如袋鼠、袋熊)、啮齿动物(例如豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠(例如小鼠)、兔类动物(例如兔)、鸟类(例如鸟)、犬科动物(例如狗)、猫科动物(例如猫)、马科动物(例如马)、猪科动物(例如猪)、羊科动物(例如绵羊)、牛科动物(例如母牛)、灵长类动物、猿猴(例如猴或猿)、猴(例如狨猴、狒狒)、猿(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)或人。
此外，个体/患者可为它的任何发育形式，例如胎儿。
在一个优选实施方案中，个体/患者是人。
制剂
尽管有可能单独施用H-APPAMP化合物，但优选的是将它提供为包含至少一种如本文所述的H-APPAMP化合物以及一种或多种为本领域技术人员熟知的其他药学上可接受的成分的药物制剂(例如组合物、制剂、药物)，所述药学上可接受的成分包括药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂、佐剂、填充剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂(例如湿润剂)、掩蔽剂、着色剂、调味剂和甜味剂。制剂还可包含其他活性剂，例如其他治疗剂或预防剂。
因此，本发明还提供了如上定义的药物组合物和制备药物组合物的方法，所述方法包括混合至少一种如本文所述的H-APPAMP化合物以及一种或多种为本领域技术人员熟知的其他药学上可接受的成分，例如载体、稀释剂、赋形剂等。如果配制成离散单元(例如片剂等)，那么每个单元含有预定量(剂量)的化合物。
如本文所用的术语“药学上可接受”涉及在合理医学判断的范围内适用于与所讨论的个体(例如人)的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏应答或其他问题或并发症，与合理益处/风险比相称的化合物、成分、材料、组合物、剂型等。每种载体、稀释剂、赋形剂等在可与制剂的其他成分相容的意义上也必须是“可接受的”。
适合载体、稀释剂、赋形剂等可见于标准药物教科书中，例如Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版,Mack Publishing Com pany,Easton,Pa.,1990；以及Handbook of Pharmaceutical Excipients，第5版,2005。
制剂可通过制药领域中熟知的任何方法制备。此类方法包括使化合物与构成一种或多种辅助成分的载体缔合的步骤。一般来说，通过均一地和紧密地使化合物与载体(例如液体载体、精细分散的固体载体等)缔合，接着如果必要，那么使产物成形来制备制剂。
可制备制剂以提供快速或缓慢释放；立刻、延迟、定时或持续释放；或它们的组合。
制剂可适合地呈液体、溶液(例如水性、非水性)、混悬剂(例如水性、非水性)、乳剂(例如水包油，油包水)、酏剂、糖浆、药糖剂、嗽口剂、滴剂、片剂(包括例如包衣片剂)、颗粒剂、粉剂、糖锭、软锭剂、胶囊(包括例如硬质和软质明胶胶囊)、扁囊剂、丸剂、安瓿剂、大丸剂、栓剂、阴道栓剂、酊剂、凝胶剂、糊剂、软膏剂、乳膏剂、洗剂、油剂、泡沫剂、喷雾剂、烟雾剂或气雾剂形式。
制剂可适合地提供为贴片、粘着性膏药、绷带、敷料等，其用一种或多种化合物以及任选的一种或多种其他药学上可接受的成分浸渍，所述成分包括例如穿透、渗透和吸收增强剂。制剂还可适合地以储库或贮库形式提供。
可将化合物溶解于、悬浮于一种或多种其他药学上可接受的成分中，或与所述成分混合。化合物可提供在被设计来使化合物例如靶向至血液组分或一种或多种器官的脂质体或其他微粒中。
适于口服施用(例如通过摄取)的制剂包括液体、溶液(例如水性、非水性)、混悬剂(例如水性、非水性)、乳剂(例如水包油、油包水)、酏剂、糖浆、药糖剂、片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊、扁囊剂、丸剂、安瓿剂、大丸剂。
适于经颊施用的制剂包括嗽口剂、糖锭、软锭剂以及贴片、粘着性膏药、储库和贮库。糖锭通常包含处于通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶的调味基质中的化合物。软锭剂通常包含处于惰性基质诸如明胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯胶中的化合物。嗽口剂通常包含处于适合液体载体中的化合物。
适于舌下施用的制剂包括片剂、糖锭、软锭剂、胶囊和丸剂。
适于口服经粘膜施用的制剂包括液体、溶液(例如水性、非水性)、混悬剂(例如水性、非水性)、乳剂(例如水包油、油包水)、嗽口剂、糖锭、软锭剂以及贴片、粘着性膏药、储库和贮库。
适于非口服经粘膜施用的制剂包括液体、溶液(例如水性、非水性)、混悬剂(例如水性、非水性)、乳剂(例如水包油、油包水)、栓剂、阴道栓剂、凝胶剂、糊剂、软膏剂、乳膏剂、洗剂、油剂以及贴片、粘着性膏药、储库和贮库。
适于经皮施用的制剂包括凝胶剂、糊剂、软膏剂、乳膏剂、洗剂和油剂以及贴片、粘着性膏药、绷带、敷料、储库和贮库。
片剂可通过常规手段，例如任选地与一种或多种辅助成分一起压制或模制来制备。压制片剂可通过以下方式制备：在适合机器中压制呈自由流动形式(诸如粉末或颗粒)，任选地与一种或多种粘合剂(例如聚维酮、明胶、阿拉伯胶、山梨糖醇、黄蓍胶、羟丙基甲基纤维素)；填充剂或稀释剂(例如乳糖、微晶纤维素、磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石、二氧化硅)；崩解剂(例如淀粉乙醇酸钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)；表面活性剂或分散剂或湿润剂(例如月桂基硫酸钠)；防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、山梨酸)；调味剂、增味剂和甜味剂混合的化合物。片剂可通过在适合机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉状化合物的混合物来制备。片剂可任选地进行包衣或刻痕，并且可以不同比例使用例如羟丙基甲基纤维素以提供所需释放概况加以配制以便提供其中化合物的缓慢或控制释放。片剂可任选地具有例如用以影响释放的包衣，例如用以提供在消化道的除胃以外的部分中释放的肠溶包衣。
软膏剂通常由化合物和石蜡或水混溶性软膏基质制备。
乳膏剂通常由化合物和水包油乳膏基质制备。如果需要，那么乳膏基质的水相可包括例如至少约30％w/w的多元醇，即具有两个或更多个羟基的醇，诸如丙二醇、丁烷-1,3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇以及它们的混合物。表面制剂可合乎需要地包括增强化合物通过皮肤或其他受影响区域进行吸收或穿透的化合物。此类皮肤穿透增强剂的实例包括二甲亚砜和相关类似物。
乳剂通常由化合物和油相制备，所述油相可任选地仅包含乳化剂(emulsifier)(也称为乳化剂(emulgent))，或它可包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。优选地，亲水性乳化剂连同充当稳定剂的亲脂性乳化剂一起加以包括。还优选的是包括油与脂肪两者。总之，一种或多种乳化剂与或不与一种或多种稳定剂一起构成所谓乳化蜡，并且所述蜡连同油和/或脂肪一起构成所谓乳化软膏基质，所述乳化软膏基质形成乳膏制剂的油性分散相。
适合乳化剂和乳液稳定剂包括吐温60(Tween 60)、斯潘80(Span80)、鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。对适于制剂的油或脂肪的选择基于实现所需美容性质，因为化合物在可能用于药物乳液制剂中的大多数油中的溶解性可为极低的。因此，乳膏剂应优选地是非油腻、非着色和可洗涤产品，具有适合稠度以避免从管或其他容器渗漏。可使用直链或支链单烷基酯或二元烷基酯，诸如二异己二酸酯、硬脂酸异鲸蜡酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己酯或支链酯的掺合物(被称为Crodamol CAP)，其中后三者是优选酯。视所需性质而定，这些可单独或组合使用。或者，可使用高熔点脂质，诸如白色软石蜡和/或液体石蜡或其他矿物油。
适于鼻内施用，其中载体是液体的制剂包括例如鼻腔喷雾剂、滴鼻剂、或通过用雾化器进行的气雾剂施用，包括化合物的水性或油性溶液。
适于鼻内施用，其中载体是固体的制剂包括例如提供为具有例如在约20至约500微米的范围内的粒度，以其中采用闻嗅的方式施用(即通过鼻部通道从靠近鼻子固持的具有粉末的容器快速吸入)的粗糙粉末的那些。
适于经肺施用(例如通过吸入或吹入疗法)的制剂包括提供为借助于适合推进剂(诸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯-四氟乙烷、二氧化碳或其他适合气体)，来自加压包装的气雾喷雾剂的那些。
适于经眼施用的制剂包括滴眼剂，其中化合物溶解或悬浮于适合载体，尤其是用于化合物的水性溶剂中。
适于经直肠施用的制剂可提供为具有适合基质的栓剂，所述适合基质包括例如天然或硬化油、蜡、脂肪、半液体或液体多元醇，例如可可脂或水杨酸酯；或提供为用于通过灌肠进行的治疗的溶液或混悬剂。
适于经阴道施用的制剂可提供为除化合物之外还含有诸如本领域中已知是适当的载体的阴道栓剂、棉塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂。
适于胃肠外施用(例如通过注射)的制剂包括水性或非水性等张无热原无菌液体(例如溶液、混悬剂)，其中化合物被溶解、悬浮或以其他方式提供(例如在脂质体或其他微粒中)。此类液体可另外含有其他药学上可接受的成分，诸如抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、制菌剂、助悬剂、增稠剂和致使制剂与预定接受者的血液(或其他相关体液)等张的溶质。赋形剂的实例包括例如水、醇、多元醇、甘油、植物油等。适用于此类制剂中的等张载体的实例包括氯化钠注射液、林格氏溶液(Ringer's Solution)或乳酸林格氏注射液。通常，液体中化合物的浓度是约1ng/mL至约10μg/mL，例如约10ng/mL至约1μg/mL。制剂可提供在单剂量或多剂量密封容器例如安瓿和小瓶中，并且可以冷冻干燥(冻干)状态储存，仅需要在使用之前即刻添加无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和混悬剂可从无菌粉末、颗粒剂和片剂制备。
剂量
本领域技术人员应了解H-APPAMP化合物和包含H-APPAMP化合物的组合物的适当剂量可在患者与患者之间变化。确定最优剂量将通常涉及使治疗益处的水平与任何风险或有害副作用平衡。所选剂量水平将取决于多种因素，包括特定H-APPAMP化合物的活性；施用途径；施用时间；H-APPAMP化合物的排泄速率；治疗的持续期；组合中使用的其他药物、化合物和/或材料；病症的严重性；以及患者的物种、性别、年龄、重量、状况、总体健康状况和先前医学史。H-APPAMP化合物的量和施用途径将最终由医师、兽医或临床医师酌情决定，但通常将选择剂量以实现在作用部位处的达成所需作用而不导致实质性的不良或有害副作用的局部浓度。
在整个治疗过程期间，施用可以一剂连续地或间歇地(例如在适当间隔下以分次剂量)实现。确定最有效施用手段和剂量的方法为本领域技术人员所熟知，并且将随用于疗法的制剂、疗法的目的、所处理的一种或多种靶标细胞和所治疗的个体而变化。可以由治疗医师、兽医或临床医师选择的剂量水平和样式进行单次或多次施用。
一般来说，H-APPAMP化合物的适合剂量在每天每千克个体体重约10μg至约250mg(更通常是约100μg至约25mg)的范围内。当化合物是盐、酯、酰胺、前药等时，施用量是基于母体化合物加以计算，因此待使用的实际重量成比例增加。
化学合成
缩写
aq：水性；
Boc：叔丁氧基羰基；
Boc2O：二碳酸二叔丁酯；
br：宽峰；
ca.：约；
d：双重峰；
tBuXPhos-Pd-G3：[(2-二叔丁基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)-2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]甲烷磺酸钯(II)；
DCM：二氯甲烷；
DCE：1,2-二氯乙烷；
二噁烷：1,4-二噁烷；
DIPEA：二异丙基乙胺；
DMAP：4-(二甲基氨基)吡啶；
EtOAc：乙酸乙酯；
EtOH：乙醇；
h：小时；
HPLC：高效液相色谱法；
IPA：异丙醇；
LCMS：液相色谱法–质谱测定法；
LiHMDS：六甲基二硅氨基锂
m：多重峰；
M：体积摩尔浓度、分子离子；
mCPBA：3-氯过苯甲酸；
MeCN：乙腈；
MeOH：甲醇；
min：分钟；
MS：质谱测定法；
NCS：N-氯丁二酰亚胺；
NIS：N-碘丁二酰亚胺；
NMR：核磁共振；
PdCl2(dppf)·DCM：[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物；
q：四重峰；
RT：室温(约20℃)；
RT：保留时间；
s：单峰、固体；
SCX：强阳离子交换；
t：三重峰；
TBME：叔丁基甲基醚；
TFA：三氟乙酸；
THF：四氢呋喃；
UPLC/MS：超高效液相色谱法–质谱测定法。
其他缩写意图传达它们的普遍接受的含义。
结构的命名使用来自
Figure BDA0003693597550000821
Professional 17(PerkinElmer)的‘Structure to Name’转换来产生。
一般性合成方法
本文描述用于化学合成H-APPAMP化合物的方法。这些和/或其他熟知方法可以已知方式修改和/或改适以提供H-APPAMP化合物的替代性或改善的合成方法。
在第一方法中，合成以5,7-二氯-3-吡唑并[1,5-a]嘧啶衍生物I-1起始。用胺进行的亲核芳香取代提供相应5-氨基-吡唑并嘧啶I-2。氨基的Boc保护提供中间体I-3。后者在布赫瓦尔德-哈特维希(Buchwald-Hartwig)交叉偶联中用于产生中间体I-4。最终整体Boc脱保护产生目标化合物。
这个方法在以下化学方案中说明。在一个实施方案中，R’是异丙基。
方案1
Figure BDA0003693597550000831
以上方案的代表性反应条件如下：(a)RNH2，DIPEA，EtOH，50℃至90℃；(b)Boc2O，DMAP，THF，RT至60℃；(c)tBuXPhos-Pd-G3，LiHMDS，THF，60℃；(d)TFA，DCM，RT；或HCl，二噁烷，RT至40℃；例如：(a)RNH2，DIPEA，EtOH，90℃；(b)Boc2O，DMAP，THF，RT；(c)tBuXPhos-Pd-G3，LiHMDS，THF，60℃；(d)HCl，二噁烷，RT。
在第二方法中，合成以5,7-二氯-3-吡唑并[1,5-a]嘧啶衍生物I-1起始。用硫代甲醇钠进行的亲核芳香取代提供硫醚中间体I-6。布赫瓦尔德-哈特维希交叉偶联导致形成中间体I-7，其可通过硫醚的氧化来转化成亚砜中间体I-8。亲核芳香取代产生5-氨基-吡唑并嘧啶中间体I-9。最终Boc脱保护产生目标化合物。
这个方法在以下化学方案中说明。在一个实施方案中，R’是异丙基。
方案2
Figure BDA0003693597550000841
以上方案的代表性反应条件如下：(a)MeSNa，THF，RT；(b)tBuXPhos-Pd-G3，LiHMDS，THF，60℃；(c)mCPBA，DCM，RT；(d)RNH2，DIPEA，二噁烷，110℃；(e)TFA，DCM，RT；或HCl，二噁烷，RT至40℃；例如：(a)MeSNa，THF，RT；(b)tBuXPhos-Pd-G3，LiHMDS，THF，60℃；(c)mCPBA，DCM，RT；(d)RNH2，DIPEA，二噁烷，110℃；(e)TFA，DCM，RT；或HCl，二噁烷，RT。
在第三方法中，合成以5,7-二氯-3-吡唑并[1,5-a]嘧啶衍生物I-1起始。用氢氧化铵进行的亲核芳香取代提供相应5-氨基-吡唑并嘧啶I-10。氨基的Boc保护提供中间体I-11。用卤代烷RX进行的取代提供中间体I-3。后者在布赫瓦尔德-哈特维希交叉偶联中用于产生中间体I-4。最终整体Boc脱保护产生目标化合物。
这个方法在以下化学方案中说明。在一个实施方案中，R’是异丙基。
方案3
Figure BDA0003693597550000851
以上方案的代表性反应条件如下：(a)NH4OH，85℃；(b)Boc2O，DMAP，THF，RT至60℃；(c)RCl，K2CO3 DMF，70℃；(d)tBuXPhos-Pd-G3，LiHMDS，THF，60℃；(e)TFA，DCM，RT；或HCl，二噁烷，RT至40℃。
在第四方法中，合成以5,7-二氯-3-吡唑并[1,5-a]嘧啶衍生物I-1起始。用胺进行的亲核芳香取代提供相应5-氨基-吡唑并嘧啶I-2。在此之后用胺进行第二亲核芳香取代以提供中间体I-4。最终Boc脱保护产生目标化合物。
这个方法在以下化学方案中说明。在一个实施方案中，R’是异丙基。
方案4
Figure BDA0003693597550000861
以上方案的代表性反应条件如下：(a)RNH2，DIPEA，EtOH，50℃；(b)DIPEA，NMP，150℃，微波；(c)tBuXPhos-Pd-G3，LiHMDS，THF，60℃；(d)HCl，二噁烷，35℃。
化学合成实施例
提供以下实施例仅为说明本发明，并且不意图限制如本文所述的本发明的范围。
一般性实验条件
所有起始物料和溶剂都从商业来源获得或根据文献引文制备。除非另外指示，否则磁力搅拌反应混合物。
除非另外指示，否则使用GraceTM GraceResolvTM预填充二氧化硅(40μm)柱筒，在自动快速色谱系统诸如CombiFlash Rf系统上进行柱色谱法。
使用Bruker Avance III波谱仪(400MHz)或Bruker(500MHz)记录1H NMR波谱。化学位移以百万分率表示，使用残余质子溶剂的中心峰或内部四甲基硅烷标准物作为参考。除非另外陈述，否则波谱在环境温度下记录。
使用运行以下描述的方法1或方法2的与Agilent 6110或6120系列单四极杆质谱仪联用的Agilent 1200系列HPLC系统进行用以测定保留时间和相关质量离子的分析型LCMS实验。
使用Waters X-Bridge BEH C18，5μm，19×50mm柱，利用MeCN和10mM碳酸氢铵(水溶液)的梯度进行制备型HPLC纯化。在通过可变波长检测器测量的单一波长下通过UV来检测之后收集级分。
SCX树脂购自Sigma Aldrich或Silicycle，并且在使用之前用MeOH洗涤。
分析方法
方法1–LCMS酸性4分钟方法：
柱：Waters X-Select CSH C18，2.5μm，4.6×30mm
检测：除非另外指示，否则在254nm下UV
MS离子化：电喷雾
溶剂A：水/0.1％甲酸
溶剂B：MeCN/0.1％甲酸
Figure BDA0003693597550000871
方法2-LCMS碱性4分钟方法：
柱：Waters X-Bridge BEH C18，2.5μm，4.6×30mm
溶剂A：水/10mM碳酸氢铵
溶剂B：MeCN
(其他参数与方法1相同)
方法3-UPLC/MS酸性3分钟方法：
柱：Waters Acquity CSH C18(2.1×30mm)
检测：Waters Acquity PDA检测器，在210与400nm之间
MS离子化：电喷雾
溶剂A：水/0.1％甲酸
溶剂B：MeCN/0.1％甲酸
柱维持在40℃的温度下，并且用在3分钟内从95.0％A至5.0％B的线性乙腈梯度以及在0.77mL/min的恒定流速下洗脱。
方法4-UPLC/MS碱性3分钟方法：
柱：Waters Acquity BEH C18柱(2.1×30mm)
检测：Waters Acquity PDA检测器，在210与400nm之间
MS离子化：电喷雾
溶剂A：水/10mM碳酸氢铵
溶剂B：MeCN
(其他参数与方法3相同)
方法5-UPLC/MS碱性3分钟方法：
柱：Waters Acquity BEH C18柱(2.1×30mm)
检测：Waters Acquity PDA检测器，在210与400nm之间
MS离子化：电喷雾
溶剂A：水/10mM氢氧化铵
溶剂B：MeCN
(其他参数与方法3相同)
方法6-UPLC/MS碱性1分钟方法：
柱：Waters Acquity BEH C18柱(2.1×30mm)
检测：Waters Acquity PDA检测器，在210与400nm之间
MS离子化：电喷雾
溶剂A：水/10mM碳酸氢铵
溶剂B：MeCN
柱维持在40℃的温度下，并且用在1分钟内从95.0％A至5.0％B的线性乙腈梯度以及在0.77mL/min的恒定流速下洗脱。
合成1
(3R,4R)-4-(((7-((咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-003)
Figure BDA0003693597550000901
步骤1：
5-氯-N-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲胺二盐酸盐(0.175g,0.80mmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(0.122g,0.53mmol)和DIPEA(0.74ml,4.24mmol)于EtOH(10mL)中的溶液中。在90℃下将反应混合物加热6小时。将反应混合物在真空中浓缩，并且将残余物分配于EtOAc(50mL)与水(50mL)之间。将水层用EtOAc(3×50mL)萃取，并且将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(0.160g,0.42mmol,80％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 341(M+H)+,RT 1.38分钟。
步骤2：
(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(0.14mL,0.61mmol)添加至5-氯-N-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(0.160g,0.47mmol)和DMAP(0.011g,0.09mmol)于THF(10mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物分配于DCM(20mL)与水(30mL)之间。将水层用DCM(2×10mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法(80g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈奶油色固体状的标题化合物(0.170g,0.37mmol,78％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 441(M+H)+,RT 1.73分钟。
步骤3：
(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.150g,0.34mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.094g,0.41mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(0.029g,0.03mmol)于THF(3mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.51ml,0.51mmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续1小时。将反应用水(5mL)淬灭，并且用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(0.075g,0.12mmol,34％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 635(M+H)+,RT 1.65分钟。
步骤4：
(3R,4R)-4-(((7-((咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(0.44mL,1.77mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.075g,0.12mmol)于DCM(10mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌16小时，并且在真空中浓缩。将残余物在MeOH(5mL)中稀释，并且上样至SCX柱筒上，用MeOH(约5mL)洗涤并用0.7M的氨MeOH溶液(约5mL)洗脱。将氨甲醇溶液在减压下浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-10％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行的纯化产生了呈透明玻璃状固体状的标题化合物(0.030g,0.07mmol,57％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 435(M+H)+,RT 0.96分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.50–8.46(m,1H),7.78(s,1H),7.65(t,J＝6.3Hz,1H),7.63(s,1H),7.50(d,J＝9.1Hz,1H),7.24–7.16(m,1H),6.85(td,J＝6.8,1.2Hz,1H),6.76–6.70(m,1H),5.35–5.30(m,1H),5.28(s,1H),4.56(d,J＝5.9Hz,2H),4.12–4.05(m,1H),3.60–3.48(m,1H),3.17(d,J＝4.2Hz,1H),3.06–2.99(m,1H),2.98–2.92(m,1H),2.92(dd,J＝11.6,4.8Hz,1H),2.81–2.74(m,1H),2.30(td,J＝12.2,2.7Hz,1H),2.16(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.58–1.51(m,1H),1.38–1.28(m,1H),1.23(t,J＝6.5Hz,6H),1.19–1.10(m,1H)。
合成2
(3R,4R)-4-(((7-((咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-002)
Figure BDA0003693597550000931
步骤1：
5-氯-N-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基甲胺二盐酸盐(5.04g,22.82mmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(3.50g,15.21mmol)和DIPEA(21.3ml,122.0mmol)于EtOH(80mL)中的溶液中。在90℃下将反应混合物加热5小时。将反应混合物在真空中浓缩，并且将残余物分配于EtOAc(50mL)与水(50mL)之间。将水层用EtOAc(3×50mL)萃取，并且将合并的有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(5.10g,14.62mmol,96％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 342(M+H)+,RT 1.06分钟
步骤2：
(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(3.2ml,13.69mmol)添加至5-氯-N-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(3.60g,10.53mmol)和DMAP(0.26g,2.11mmol)于THF(10mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物分配于DCM(20mL)与水(30mL)之间。将水层用DCM(2×30mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法(80g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈奶油色固体状的标题化合物(4g,8.60mmol,82％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 442(M+H)+,RT 1.44分钟。
步骤3：
(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(3.19,7.22mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.75g,7.58mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(0.62g,0.72mmol)于THF(30mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(10.8ml,10.8mmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续1小时。将反应用水(50mL)淬灭，并且用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(80g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈橙色固体状的标题化合物(2.10g,3.24mmol,44％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 636(M+H)+,RT 1.50分钟。
步骤4：
(3R,4R)-4-(((7-((咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(12.4mL,49.5mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.10g,3.30mmol)于DCM(10mL)中的悬浮液中。在室温下将反应混合物搅拌1小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的氨MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生黄色固体。通过柱色谱法(24g柱筒，0-20％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行的进一步纯化产生了黄色固体。将固体溶解于DCM(20mL)和MeOH(约1mL)中。添加乙醚(100mL)。形成褐色固体，并且通过过滤收集以产生标题化合物(0.700g,1.56mmol,47％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 436(M+H)+,RT 0.85分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.89(dd,J＝6.8,2.1Hz,1H),8.49(dd,J＝4.1,2.0Hz,1H),7.78–7.72(m,2H),7.64(s,1H),7.02(dd,J＝6.7,4.1Hz,1H),6.76(d,J＝5.0Hz,1H),5.47(s,1H),5.27(s,1H),4.60(d,J＝6.0Hz,2H),3.58–3.48(m,1H),3.45–3.25(m,2H),3.25–3.19(m,1H),3.14–3.07(m,1H),3.00–2.95(m,1H),2.85(d,J＝12.2Hz,1H),2.39(td,J＝12.3,2.9Hz,1H),2.25(d,J＝11.0Hz,1H),1.63–1.57(m,1H),1.37(d,J＝11.7Hz,1H),1.24(t,J＝6.5Hz,6H),1.21–1.17(m,1H)。
合成3
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-006)
Figure BDA0003693597550000961
步骤1：
5-氯-3-异丙基-7-(甲基硫基)吡唑并[1,5-a]嘧啶
使5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(8.00g,34.8mmol)于THF(100mL)中的溶液冷却至-5℃，并且添加硫代甲醇钠(2.44g,34.8mmol)。使反应混合物升温至室温，并且搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc(400ml)稀释，并且用饱和NaHCO3水溶液(500mL)洗涤。将水层用EtOAc(260mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(160mL)洗涤，经MgSO4干燥并在真空中浓缩。通过柱色谱法(40g柱筒，0-20％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈浅黄色油状的标题化合物(6.00g,24.6mmol,71％产率，99％纯度)，其在静置时固化。
LCMS(方法1)：m/z 242(M+H)+,RT 2.40分钟。
步骤2：
(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基硫基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将5-氯-3-异丙基-7-(甲基硫基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(1.70g,7.03mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.62g,7.03mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(300mg,0.35mmol)于THF(10mL)中的溶液脱气5分钟。添加LiHMDS(1M，于THF中)(7.8mL,7.74mmol)，并且将混合物再脱气5分钟。将反应混合物加热至60℃，并且搅拌0.5小时。使溶剂蒸发，并且将残余物再溶解于EtOAc中，用1:1水/盐水(50mL)洗涤并将水层用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且使溶剂蒸发。通过柱色谱法(80g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(2.30g,5.12mmol,66％产率，97％纯度)。
LCMS(方法1)：m/z 436(M+H)+,RT 2.25分钟。
步骤3：
(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基硫基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.70g,3.90mmol)溶解于DCM(30mL)中。使溶液冷却至0℃，并且一次性添加mCPBA(1.35g,5.85mmol)。在0℃下将反应混合物搅拌1小时。通过添加DCM(30mL)对反应混合物进行后处理，并且用饱和NaHCO3水溶液(2×30mL)洗涤。将水层用DCM(3×20mL)萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并且使溶剂蒸发以提供标题化合物(1.50g,3.16mmol,81％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 452(M+H)+,RT 1.43分钟。
步骤4：
(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将含(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(90mg,0.149mmol)的二噁烷(0.5mL)添加至(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲胺(72mg,0.448mmol)和DIPEA(0.25mL,1.431mmol)于二噁烷(0.5mL)中的溶液中。在100℃下将所得混合物加热3天。使反应混合物冷却至室温，并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷，接着0至5％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈浅黄色玻璃状的标题化合物(28mg,0.046mmol,31％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 549(M+H)+,RT 1.44分钟。
步骤5：
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(28mg,0.051mmol)用TFA(50μL,0.649mmol)于DCM(0.5mL)中的混合物处理。将所得混合物搅拌3小时。将混合物浓缩，接着分配于EtOAc(5mL)与饱和NaHCO3水溶液(3mL)之间，并且分离各相。将有机相用水(2mL)和盐水(2mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩以产生呈白色粉末状的标题化合物(10mg,0.021mmol,41％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 449(M+H)+,RT 0.97分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.14(s,1H),7.88(t,J＝6.5Hz,1H),7.65–7.62(m,2H),7.51(d,J＝8.3Hz,1H),7.31(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),6.73–6.66(m,1H),5.35–5.29(m,1H),5.22(s,1H),4.53(d,J＝6.4Hz,2H),3.81(s,3H),3.57–3.47(m,1H),3.19–3.12(m,1H),3.05–2.96(m,1H),2.96–2.91(m,1H),2.89(dd,J＝12.0,4.3Hz,1H),2.79–2.73(m,1H),2.34–2.25(m,1H),2.15(dd,J＝11.6,10.0Hz,1H),1.55–1.49(m,1H),1.34–1.27(m,1H),1.22(t,J＝7.0Hz,6H),1.15–1.07(m,1H),1H在水下。
合成4
(3R,4R)-4-(((7-(((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-005)
Figure BDA0003693597550000991
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-(((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将含(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80％纯度)(0.467g,0.827mmol)和(1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲胺(0.146g,0.993mmol)的二噁烷(1mL)加热至105℃，持续16小时。使反应混合物冷却至室温，并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-20％MeOH(含有0.7MNH3)/DCM)进行的纯化产生了呈棕色固体状的标题化合物(26mg,0.041mmol,5％产率，85％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 535(M+H)+,RT 1.45分钟。
步骤5：
(3R,4R)-4-(((7-(((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(0.15mL,0.61mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-(((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(30mg,0.040mmol)于DCM(10mL)中的溶液中。将反应搅拌16小时，并且在真空中浓缩。将残余物在MeOH(5mL)中稀释，并且上样至SCX柱筒上，用MeOH(3×柱体积)洗涤并用0.7M的氨MeOH溶液(3×柱体积)洗脱。将氨甲醇溶液在减压下浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-20％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(5mg,10.9μmol,27％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(与方法4相同的方法，但运行时长是10分钟)：m/z 435(M+H)+,RT 3.87分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.30(s,1H),7.71(t,J＝6.2Hz,1H),7.66(s,1H),7.55(s,1H),7.44(s,1H),7.14(dd,J＝6.1,3.0Hz,2H),6.81–6.71(m,1H),5.29(s,1H),5.22(s,1H),4.69(d,J＝5.8Hz,2H),3.59–3.44(m,1H),3.23–3.14(m,2H),3.06–2.99(m,1H),2.96(p,J＝6.9Hz,1H),2.89(dd,J＝11.7,4.6Hz,1H),2.79–2.73(m,1H),2.32–2.24(m,1H),2.15(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.53(dd,J＝13.0,3.4Hz,1H),1.32(s,1H),1.24(t,J＝6.5Hz,6H),1.18–1.07(m,1H)。
合成5
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-004)
Figure BDA0003693597550001001
步骤4：
(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将含(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.100g,0.221mmol)和(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(0.107g,0.666mmol)的二噁烷(0.5mL)加热至105℃，持续4天。使反应混合物冷却至室温，并且浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈橙色玻璃状固体状的标题化合物(48mg,0.041mmol,38％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法1)：m/z 549(M+H)+,RT 1.32分钟。
步骤5：
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(0.40mL,1.51mmol)添加至(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(48mg,0.083mmol)于二噁烷(3mL)中的悬浮液中。在40℃下将反应混合物搅拌4小时。在真空中移除溶剂。将残余物在MeOH(1mL)中稀释，并且上样至SCX柱筒上，用MeOH(约5mL)洗涤并用0.7M的氨MeOH溶液(约5mL)洗脱。将氨甲醇溶液在减压下浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-10％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行的纯化产生了呈褐色玻璃状固体状的标题化合物(24mg,0.052mmol,63％产率，98％纯度)。
LCMS(方法2)：m/z 449(M+H)+,RT 1.67分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(dt,J＝6.8,1.1Hz,1H),7.74(s,1H),7.66(t,J＝6.2Hz,1H),7.63(s,1H),7.01(dt,J＝6.8,1.2Hz,1H),6.75(t,J＝6.8Hz,1H),6.72–6.68(m,1H),5.35–5.29(m,1H),5.27(s,1H),4.57(d,J＝6.1Hz,2H),3.59–3.46(m,1H),3.24–3.14(m,1H),3.08–2.99(m,1H),2.96(p,J＝6.8Hz,1H),2.90(dd,J＝11.9,4.3Hz,1H),2.82–2.73(m,1H),2.47(s,3H),2.35–2.26(m,1H),2.16(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.59–1.51(m,1H),1.39–1.28(m,1H),1.23(dd,J＝6.9,4.8Hz,6H),1.20–1.08(m,1H),1H在水下。
合成6
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-001)
Figure BDA0003693597550001021
步骤4和5：
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
步骤4：将含(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.100g,0.221mmol)和(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(0.107g,0.666mmol)的二噁烷(0.5mL)加热至105℃，持续4天。使反应混合物冷却至室温，并且浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH(含有0.7MNH3)/DCM)进行的纯化产生了相应Boc中间体(40mg)。
步骤5：在室温下将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(40mg,0.073mmol)和HCl(4M，于二噁烷中)(505μL,16.6mmol)的溶液搅拌16小时。使溶剂蒸发。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行的纯化产生了呈棕色固体状的标题化合物(15mg,45％产率，95％纯度)。
LCMS(方法2)：m/z 449(M+H)+,RT 1.64分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.61(s,1H),7.58(t,J＝5.3Hz,1H),7.51(s,1H),7.40(d,J＝9.0Hz,1H),7.13(dd,J＝9.0,6.8Hz,1H),6.81–6.74(m,1H),6.68(d,J＝6.9Hz,1H),5.42(s,1H),5.31(s,1H),4.96(d,J＝5.0Hz,2H),3.60–3.49(m,1H),3.28–3.21(m,1H),3.11–3.03(m,1H),2.98–2.91(m,2H),2.89(s,3H),2.84–2.79(m,1H),2.38–2.31(m,1H),2.23–2.16(m,1H),1.64–1.57(m,1H),1.42–1.32(m,1H),1.23(dd,J＝6.9,5.2Hz,6H),1.20–1.13(m,1H),1H在水下。
合成7
(3R,4R)-4-[[[3-异丙基-7-[(3-甲基咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)甲基氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]氨基]甲基]哌啶-3-醇
(H-APPAMP-007)
Figure BDA0003693597550001031
步骤4：(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((3-甲基咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
在微波照射下在140℃下将含(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80.0mg,0.145mmol)、(3-甲基咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)甲胺二盐酸盐水合物(74.9mg,0.290mmol)和DIPEA(0.228mL,1.305mmol)的乙醇(2mL)加热4小时。使反应混合物冷却至室温，并且浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-10％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行纯化，继之以通过反相C18色谱法(4g柱筒，15-75％MeCN/10mM碳酸氢铵)进行纯化，产生了呈褐色固体状的标题化合物(40mg,0.071mmol,49％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 555(M+H)+,RT 0.52分钟。
步骤5：(3R,4R)-4-[[[3-异丙基-7-[(3-甲基咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)甲基氨基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基]氨基]甲基]哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(0.169ml,0.676mmol)添加至(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((3-甲基咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(25mg,0.045mmol)于二噁烷(2mL)中的溶液中。在35℃下将反应混合物搅拌1小时。使溶剂蒸发。将残余物在MeOH(1mL)中稀释，并且上样至SCX柱筒上，用MeOH(约5mL)洗涤并用0.7M的氨MeOH溶液(约5mL)洗脱。将氨甲醇溶液在减压下浓缩以在于Et2O中湿磨，接着在50℃下在真空下干燥过夜之后提供呈褐色固体状的标题化合物(18mg,0.038mmol,84％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 455(M+H)+,RT 1.03分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.62(s,1H),7.59(s,1H),7.49(t,J＝6.1Hz,1H),6.85(q,J＝1.3Hz,1H),6.79-6.73(m,1H),5.38-5.35(m,1H),5.35(s,1H),4.47-4.43(m,2H),3.25-3.19(m,1H),3.10-3.02(m,1H),2.98-2.90(m,2H),2.85-2.79(m,2H),2.36(d,J＝1.3Hz,3H),2.35-2.30(m,1H),2.23-2.16(m,1H),1.63-1.56(m,1H),1.40-1.32(m,1H),1.23(dd,J＝6.9,6.0Hz,6H),1.21-1.13(m,1H),1H在水下。
合成8
(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
(H-APPAMP-008)
Figure BDA0003693597550001051
步骤4：(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80mg,0.145mmol)添加至(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺二盐酸盐(102mg,0.435mmol)和DIPEA(0.23mL,1.305mmoRPl)于EtOH(2.0mL)中的溶液中。在微波照射下在140℃下将所得混合物加热4小时。使反应混合物冷却至室温，并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-10％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(67mg,0.112mmol,77％产率，92％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 549(M+H)+,RT 0.84分钟。
步骤5：(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(67mg,0.122mmol)于1,4-二噁烷(2.0mL)中的溶液用HCl(4M，于1,4-二噁烷中)(458μL,1.832mmol)处理。在室温下将反应混合物搅拌过夜，并且浓缩至干燥。通过柱色谱法(4g柱筒，0-15％MeOH(含有0.7MNH3)/DCM)进行纯化，在50℃下在真空下干燥过夜之后产生了呈灰白色固体状的标题化合物(32mg,0.068mmol,55％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 449(M+H)+,RT 1.08分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.93–8.82(m,1H),8.65–8.52(m,1H),8.32(s,1H),7.73(s,1H),7.67(s,1H),7.44(d,J＝9.2Hz,1H),7.13(d,J＝9.3Hz,1H),6.99–6.86(m,1H),6.12–6.03(m,1H),5.27(s,1H),4.56(d,J＝6.0Hz,2H),3.60–3.50(m,1H),3.47–3.39(m,1H),3.25–3.13(m,2H),3.01–2.92(m,1H),2.84–2.72(m,1H),2.66–2.59(m,1H),2.53–2.52(m,1H),2.26(s,3H),1.85–1.76(m,1H),1.68–1.56(m,1H),1.52–1.41(m,1H),1.24(t,J＝6.6Hz,6H)。
合成9
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-009)
Figure BDA0003693597550001071
步骤4：(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80mg,0.145mmol)添加至(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺二盐酸盐(102mg,0.435mmol)和DIPEA(0.228mL,1.305mmol)于EtOH(2.0mL)中的溶液中。在微波照射下在140℃下将所得混合物加热3.5小时。使反应混合物冷却至室温，并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-10％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(60mg,0.093mmol,64％产率，85％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 549(M+H)+,RT 0.83分钟。
步骤5：(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(60mg,0.104mmol)于1,4-二噁烷(2.0mL)中的溶液用HCl(4M，于1,4-二噁烷中)(0.390mL,1.558mmol)处理。在室温下将反应混合物搅拌过夜，并且浓缩至干燥。通过柱色谱法(4g柱筒，0-15％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行纯化，在50℃下在真空下干燥过夜之后产生了呈灰白色固体状的标题化合物(33mg,0.070mmol,67％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 449(M+H)+,RT 1.07分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.36(d,J＝6.9Hz,1H),7.68(s,1H),7.67-7.65(m,1H),7.64(s,1H),7.30-7.25(m,1H),6.82-6.76(m,1H),6.70(dd,J＝7.0,1.7Hz,1H),5.61–5.55(m,1H),5.27(s,1H),4.53(d,J＝5.9Hz,2H),3.62–3.51(m,1H),3.25-3.20(m,1H),3.19–3.12(m,1H),3.01(dd,J＝11.6,4.4Hz,1H),2.99–2.93(m,1H),2.92-2.87(m,1H),2.47-2.42(m,1H),2.33(s,3H),2.32-2.26(m,1H),1.67-1.61(m,1H),1.46-1.38(m,1H),1.30-1.26(m,1H),1.24(t,J＝6.6Hz,6H)。1H在水下。
合成10
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-010)
Figure BDA0003693597550001081
步骤4：(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80mg,0.145mmol)添加至(5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺二盐酸盐(102mg,0.435mmol)和DIPEA(0.228ml,1.305mmol)于EtOH(2.0mL)中的溶液中。在微波照射下在140℃下将所得混合物加热4小时。使反应混合物冷却至室温，并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-10％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(85mg,0.116mmol,80％产率，75％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 549(M+H)+,RT 1.50分钟。
步骤5：(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(85mg,0.116mmol)于1,4-二噁烷(2.0mL)中的溶液用HCl(4M，于1,4-二噁烷中)(0.436mL,1.743mmol)处理。在室温下将反应混合物搅拌过夜，并且浓缩至干燥。通过RP快速C18柱色谱法(4g柱筒，15-50％MeCN/10mM碳酸氢铵)进行纯化，在50℃下在真空下干燥过夜之后产生了呈灰白色固体状的标题化合物(12mg,0.025mmol,21％产率，93％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 449(M+H)+,RT 1.07分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.67(s,1H),7.63(s,1H),7.58(t,J＝6.1Hz,1H),7.43(dd,J＝8.9,1.2Hz,1H),7.21(dd,J＝9.0,6.8Hz,1H),6.79–6.75(m,2H),5.44–5.37(m,1H),5.33(s,1H),4.59(d,J＝5.9Hz,2H),3.61-3.49(m,1H),3.25-3.19(m,1H),3.11-3.05(m,1H),2.99-2.92(m,2H),2.87-2.81(m,1H),2.56(s,3H),2.40-2.33(m,1H),2.26-2.20(m,1H),1.64-1.57(m,1H),1.42-1.34(m,1H),1.24(dd,J＝6.9,6.0Hz,6H),1.21-1.15(m,1H)。1H在水下。
合成11
(3R,4R)-4-(((7-(((6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-011)
Figure BDA0003693597550001101
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-(((6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(60mg,0.109mmol)添加至(6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(53.9mg,0.326mmol)和DIPEA(0.171mL,0.979mmol)于EtOH(4.0mL)中的溶液中。在微波照射下在140℃下将所得混合物加热4小时，浓缩至干燥，并且再溶解于NMP(3.0mL)中。在微波照射下在160℃下将所得混合物加热4小时。将粗制油状物经SCX(2g-用MeOH(15mL)洗涤，用含有0.7M NH3的MeOH(15mL)洗脱)过滤，产生了棕色油状物。通过柱(4g柱筒(干法上样)，0-10％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM，接着100％MeOH(含有0.7M NH3))进行纯化，继之以通过RP快速C18柱色谱法(4g柱筒，15-75％MeCN/10mM碳酸氢铵)进行纯化，在从Et2O沉淀之后产生了呈褐色固体状的标题化合物(5mg,9.94μmol,9％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 453(M+H)+,RT 1.01分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.69(dd,J＝4.7,2.5Hz,1H),7.79(s,1H),7.68(t,J＝6.2Hz,1H),7.63(s,1H),7.57(dd,J＝10.0,5.3Hz,1H),7.30(ddd,J＝10.2,8.4,2.5Hz,1H),6.75-6.68(m,1H),5.30-5.27(m,1H),5.26(s,1H),4.56(d,J＝6.1Hz,2H),3.60-3.47(m,1H),3.23-3.15(m,1H),3.07-2.99(m,1H),2.98-2.92(m,1H),2.89(dd,J＝11.4,4.5Hz,1H),2.82-2.73(m,1H),2.33-2.23(m,1H),2.14(dd,J＝11.7,9.9Hz,1H),1.58-1.51(m,1H),1.37-1.27(m,1H),1.23(t,J＝6.5Hz,6H),1.19-1.11(m,1H)。1H在水下。
合成12
(3R,4R)-4-(((7-(((6-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-012)
Figure BDA0003693597550001111
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-(((6-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(60mg,0.109mmol)添加至(6-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(59.3mg,0.326mmol)和DIPEA(0.171mL,0.979mmol)于EtOH(4mL)中的溶液中。在微波照射下在140℃下将所得混合物加热4小时，浓缩至干燥，并且再溶解于NMP(3mL)中。在微波照射下在160℃下将所得混合物加热4小时。将粗制油状物经SCX(2g-用MeOH(15mL)洗涤，用含有0.7M NH3的MeOH(15mL)洗脱)过滤，产生了棕色油状物。通过RP快速C18柱色谱法(4g柱筒，35-100％MeCN/10mM碳酸氢铵)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(32mg,42μmol,38％产率，75％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 569(M+H)+,RT 1.55分钟。
步骤5：(3R,4R)-4-(((7-(((6-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将(3R,4R)-4-(((7-(((6-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(32mg,0.045mmol)于1,4-二噁烷(2mL)中的溶液用HCl(4M，于1,4-二噁烷中)(0.169mL,0.675mmol)处理。在室温下将反应混合物搅拌过夜，并且浓缩至干燥。将粗制油状物经SCX(2g-用MeOH(15mL)洗涤，用含有0.7M NH3的MeOH(15mL)洗脱)过滤以产生棕色油状物。通过柱(4g柱筒(干法上样)，0-20％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行纯化，继之以通过RP快速C18柱色谱法(4g柱筒，35-100％MeCN/10mM碳酸氢铵)进行纯化，在从Et2O沉淀，接着在50℃下在真空下干燥过夜之后产生了呈褐色固体状的标题化合物(10mg,0.020mmol,44％产率，92％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 469(M+H)+,RT 1.08分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.76(d,J＝2.1Hz,1H),7.77(s,1H),7.69(t,J＝6.3Hz,1H),7.63(s,1H),7.55(d,J＝9.6Hz,1H),7.26(dd,J＝9.6,2.1Hz,1H),6.76-6.68(m,1H),5.32-5.27(m,1H),5.25(s,1H),4.56(d,J＝6.1Hz,2H),3.60-3.47(m,1H),3.24-3.16(m,1H),3.05-2.98(m,1H),2.98-2.91(m,1H),2.91-2.87(m,1H),2.80-2.73(m,1H),2.33-2.24(m,1H),2.18–2.11(m,1H),1.58-1.50(m,1H),1.39-1.27(m,1H),1.26–1.21(m,6H),1.18-1.09(m,1H)。1H在水下。
合成13
(3R,4R)-4-(((7-(((8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-013)
Figure BDA0003693597550001131
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-(((8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(3R,4R)-3-羟基-4-(((3-异丙基-7-(甲基亚磺酰基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(120mg,99Wt％,0.22mmol)添加至(8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺乙酸盐(0.11g,0.43mmol)和DIPEA(0.19mL,1.1mmol)于NMP(2mL)中的溶液中。在微波照射下在140℃下将所得混合物加热4小时，接着在160℃下加热4小时。将粗制油状物经SCX(4g-用MeOH(30mL)洗涤，用含有0.7M NH3的MeOH(30mL)洗脱)过滤，产生了棕色油状物。通过柱(4g柱筒(干法上样)，0-15％MeOH(含有0.7M NH3)/DCM)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(42mg,67μmol,31％产率，92％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 575(M+H)+,RT 1.58分钟。
步骤5：(3R,4R)-4-(((7-(((8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将含(3R,4R)-4-(((7-(((8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(23mg,37μmol)的1,4-二噁烷(0.25mL)用HCl(4M，于1,4-二噁烷中)(0.14mL,0.55mmol)处理。在35℃下将反应混合物搅拌1小时，并且浓缩至干燥。将粗制油状物经SCX(4g-用MeOH(30mL)洗涤，用含有0.7M NH3的MeOH(30mL)洗脱)纯化，在从Et2O沉淀，接着在50℃下在真空下干燥过夜之后产生了呈棕色固体状的标题化合物(17mg,34μmol,92％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 475(M+H)+,RT 1.14分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.30–8.23(m,1H),7.74(s,1H),7.67(t,J＝6.2Hz,1H),7.64(s,1H),6.74–6.69(m,3H),5.36–5.30(m,1H),5.28(s,1H),4.58(d,J＝5.9Hz,2H),3.59–3.49(m,1H),3.23–3.16(m,1H),3.08–3.00(m,1H),2.99–2.92(m,1H),2.91(dd,J＝11.8,4.9Hz,1H),2.81–2.75(m,1H),2.48–2.43(m,1H),2.35–2.26(m,1H),2.16(dd,J＝11.7,9.9Hz,1H),1.59–1.52(m,1H),1.39–1.29(m,1H),1.24(dd,J＝6.9,5.9Hz,6H),1.20–1.11(m,1H),1.04–0.98(m,2H),0.98–0.92(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A1
(8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺乙酸盐
Figure BDA0003693597550001141
步骤A：8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛
将磷酸三钾(755mg,3.55mmol)于水(2.5mL)中的溶液添加至8-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛(200mg,0.889mmol)和环丙基硼酸(229mg,2.67mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中。持续10分钟将N2鼓泡通过反应混合物，接着添加PdCl2(dppf)(65.0mg,0.089mmol)。再持续5分钟将N2鼓泡通过反应混合物，随后在100℃下加热3小时。在室温下，添加水(20mL)和EtOAc(40mL)。分离各层，并且将水层用EtOAc(3×15mL)萃取。将合并的有机层经相分离器过滤，并且浓缩。通过柱(12g柱筒(干法上样)，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(141mg,0.750mmol,71％产率，99％纯度)。
步骤B/C：8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛肟/(8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺乙酸盐
在80℃下将8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛(130mg,698μmol)、盐酸羟胺(121mg,1.75mmol)和吡啶(0.14mL,1.75mmol)于EtOH(3.5mL)中的溶液搅拌2小时。在室温下，通过过滤收集沉淀，用EtOH(2×2mL)冲洗。进一步在真空下干燥固体以提供呈褐色固体状的8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛肟(135mg)，将其溶解于AcOH(3mL)中。在0℃下冷却溶液，接着添加乙酸钠(11.0mg,134μmol)和锌粉(658mg,10.1mmol)。在室温下将反应混合物搅拌过夜，随后经硅藻土过滤，用DCM(20mL)和MeOH(20mL)冲洗。将滤液浓缩至干燥以提供油状物。经SCX(10g-用MeOH(50mL)洗涤，用含有0.7M NH3的MeOH(50mL)洗脱)的过滤产生了呈微黄色油状的标题化合物(164mg,663μmol,99％产率，95％纯度)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)与产物结构一致。
合成14
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-((喹啉-2-基甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-014)
Figure BDA0003693597550001161
步骤1：5-氯-3-异丙基-N-(喹啉-2-基甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将喹啉-2-基甲胺(165mg,1.04mmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(200mg,0.869mmol)和DIPEA(908μL,5.21mmol)于EtOH(3.3mL)中的溶液中。将反应混合物加热至回流，过夜。将反应混合物在真空中浓缩以产生橙色固体。
通过柱(12g柱筒，DCM)进行的纯化产生了呈橙色固体状的标题化合物(240mg,0.67mmol,78％产率，99％纯度)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)与产物结构一致。
步骤2：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(喹啉-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(193mg,886.1μmol)添加至5-氯-3-异丙基-N-(喹啉-2-基甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(240mg,681.6μmol)和DMAP(17mg,136.3μmol)于THF(13.6mL)中的溶液中。在60℃下将反应混合物搅拌1.5小时。将反应混合物在减压下浓缩，接着在DCM(15mL)中稀释，并且用盐水(3×10mL)洗涤。将合并的有机层经相分离器过滤，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-2.5％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈橙色油状的标题化合物(317mg,0.67mmol,98％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法6)：m/z 453(M+H)+,RT 0.92分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(喹啉-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(喹啉-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(115mg,0.25mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(63mg,0.27mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(21mg,25μmol)于THF(2.1mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.37mL,0.37mmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续1小时。将反应用水(5mL)淬灭，并且用EtOAc(3×5mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(130mg,0.19mmol,77％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 646(M+H)+,RT 1.85分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-((喹啉-2-基甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于1,4-二噁烷中)(0.88mL,3.5mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(喹啉-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(120mg,0.18mmol)于1,4-二噁烷(1mL)中的悬浮液中。在35℃下将反应混合物搅拌1小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O沉淀，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈灰白色固体状的标题化合物(66mg,0.14mmol,81％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 446(M+H)+,RT 1.18分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.35(d,J＝8.5Hz,1H),8.04–7.99(m,2H),7.97(dd,J＝8.2,1.4Hz,1H),7.81–7.74(m,1H),7.68(s,1H),7.62–7.57(m,1H),7.53(d,J＝8.5Hz,1H),6.75–6.68(m,1H),5.29–5.23(m,1H),5.19(s,1H),4.73(d,J＝6.0Hz,2H),3.56–3.44(m,1H),3.21–3.14(m,1H),3.05–2.98(m,1H),2.99–2.92(m,1H),2.88(dd,J＝11.5,4.5Hz,1H),2.78–2.72(m,1H),2.31–2.23(m,1H),2.17–2.11(m,1H),1.55–1.49(m,1H),1.36–1.27(m,1H),1.27–1.22(m,6H),1.16–1.11(m,1H)。1H在水下。
合成15
(3R,4R)-4-(((7-(((2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-015)
Figure BDA0003693597550001181
步骤1：5-氯-N-((2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲胺(171mg,0.976mmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(187mg,0.813mmol)和DIPEA(0.85mL,4.874mmol)于EtOH(3.2mL)中的溶液中。将反应混合物加热至回流，过夜。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈灰白色固体状的标题化合物(233mg,0.57mmol,70％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法6)：m/z 369(M+H)+,RT 0.73分钟
步骤2：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(179mg,819μmol)添加至5-氯-N-((2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(233mg,0.63mmol)和DMAP(15.4mg,126μmol)于THF(12.6mL)中的溶液中。在60℃下将反应混合物搅拌16分钟。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物分配于DCM(15mL)与水(10mL)之间。将有机层用盐水(2×10mL)洗涤，经相分离器过滤，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-4％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈浅黄色固体状的标题化合物(249mg,0.50mmol,79％产率，94％纯度)。
UPLC/MS(方法6)：m/z 469(M+H)+,RT 0.84分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(120mg,0.256mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(64.9mg,0.282mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(21.9mg,0.0256mmol)于THF(2.5mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.33mL,333μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续4.5小时。在室温下，将反应混合物经硅藻土过滤，用EtOAc(15mL)冲洗。将滤液用水稀释，并且将水层用EtOAc(3×20mL)萃取将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-80％(1:3EtOH/EtOAc)/异己烷)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(89mg,0.10mmol,39％产率，75％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 663(M+H)+,RT 1.75分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-((咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于1,4-二噁烷中)(0.66mL,2.62mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(87mg,0.131mmol)于1,4-二噁烷(1.0mL)中的悬浮液中。在35℃下将反应混合物搅拌2.5小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(60mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O沉淀，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈浅黄色固体状的标题化合物(40mg,83mmol,63％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 463(M+H)+,RT 1.05分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.51(d,J＝7.0Hz,1H),7.80(t,J＝5.4Hz,1H),7.59(s,1H),7.21(s,1H),6.85–6.79(m,1H),6.75(dd,J＝7.0,1.7Hz,1H),5.33–5.28(m,1H),5.17(s,1H),4.73(d,J＝5.1Hz,2H),3.61–3.48(m,1H),3.23–3.16(m,1H),3.06–2.98(m,1H),2.95–2.86(m,2H),2.84–2.76(m,1H),2.48(s,3H),2.33–2.30(m,4H),2.19–2.12(m,1H),1.61–1.53(m,1H),1.39–1.32(m,1H),1.22–1.18(m,6H),1.19–1.12(m,1H)。1H在水下。
中间体合成A2
(2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲胺
Figure BDA0003693597550001201
步骤A/B：2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲醛肟/(2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲胺
在80℃下将2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲醛(0.525g,3.01mmol)、盐酸羟胺(0.524g,7.54mmol)和吡啶(0.61mL,7.54mmol)于EtOH(14.8mL)中的溶液搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，接着再溶解于AcOH(10.5mL)中。在0℃下冷却溶液，接着添加乙酸钠(50mg,604μmol)和锌粉(2.96g,45.3mmol)。在室温下将反应混合物搅拌过夜，随后经硅藻土过滤，用DCM(100mL)冲洗。将滤液浓缩至干燥以提供油状物。经SCX(14g-用MeOH(100mL)洗涤，用含有0.7M NH3的MeOH(100mL)洗脱)的过滤产生了呈白色固体状的标题化合物(2,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲胺(0.259g,1.33mmol,44％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法6)：m/z 176(M+H)+,RT 0.42分钟。
合成16
(3R,4R)-4-(((7-((咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-016)
Figure BDA0003693597550001211
步骤1：5-氯-N-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基甲胺二盐酸盐(115mg,522μmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(100mg,435μmol)和DIPEA(0.38mL,2.17mmol)于EtOH(1.5mL)中的溶液中。在回流下将反应混合物加热过夜。将反应混合物在真空中浓缩。
通过柱色谱法(24g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物5-氯-N-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(137mg,0.38mmol,88％产率，95％纯度)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)与产物结构一致。
步骤2：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(97mg,442μmol)添加至5-氯-N-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(137mg,402μmol)和DMAP(5mg,40.2μmol)于THF(2mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩。
通过柱色谱法(24g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(169mg,0.36mmol,91％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 441(M+H)+,RT 1.71分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(167mg,379μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(96.0mg,417μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(32.4mg,37.9μmol)于THF(3.3mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(492μl,492μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2小时。将反应用水(15mL)淬灭，并且用EtOAc(3×15mL)萃取。将合并的有机层经相分离器过滤，并且在减压下浓缩。
通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷，接着0-5％(含有0.7M NH3的MeOH)/DCM)进行的纯化产生了油状物。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％(含有0.7M NH3的MeOH)/DCM)进行的进一步纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(112mg,0.17mmol,46％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 635(M+H)+,RT 1.64分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-((咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于1,4-二噁烷中)(0.88mL,3.53mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(112mg,176μmol)于1,4-二噁烷(0.5mL)中的溶液中。在35下将反应混合物搅拌1小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(40mL)洗涤，并且用含有0.7M NH3的MeOH(40mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O沉淀之后产生呈白色固体状的标题化合物(57mg,0.13mmol,73％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 435(M+H)+,RT 0.97分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.48(dd,J＝6.8,1.2Hz,1H),7.78(s,1H),7.65(t,J＝6.1Hz,1H),7.63(s,1H),7.50(d,J＝9.1Hz,1H),7.24–7.18(m,1H),6.85(td,J＝6.7,1.2Hz,1H),6.75–6.69(m,1H),5.33–5.29(m,1H),5.28(s,1H),4.56(d,J＝6.0Hz,2H),3.60–3.47(m,1H),3.22–3.15(m,1H),3.06–2.99(m,1H),2.99–2.92(m,1H),2.90(dd,J＝11.6,4.5Hz,1H),2.81–2.74(m,1H),2.33–2.25(m,1H),2.15(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.57–1.51(m,1H),1.38–1.28(m,1H),1.23(t,J＝6.5Hz,6H),1.19–1.10(m,1H)。1H在水下。
合成17
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-017)
Figure BDA0003693597550001241
步骤1：5-氯-3-异丙基-N-((3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(105mg,652μmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(150mg,652μmol)和DIPEA(0.85mL,4.89)于EtOH(3.2mL)中的溶液中。在80℃下将反应混合物加热过夜。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(130mg,0.31mmol,48％产率，85％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 355(M+H)+,RT 1.48分钟
步骤2：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(32mg,0.15mmol)添加至5-氯-3-异丙基-N-((3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(44mg,0.12mmol)和DMAP(3mg,25μmol)于THF(1.2mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化N2产生了呈白色固体状的标题化合物(51mg,0.11mmol,89％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 455(M+H)+,RT 1.80分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(88mg,0.19mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(49mg,0.21mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(17mg,19μmol)于THF(1.9mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.25mL,0.25mmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续1.5小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷，接着0-100％(1:3EtOH/EtOAc)/异己烷)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(140mg,0.18mmol,95％产率，85％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 649(M+H)+,RT 1.69分钟。
步骤4：((3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(1.02mL,4.10mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(140mg,205μmol)于二噁烷(1.0mL)中的悬浮液中。在35℃下将反应混合物搅拌1.5小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(50mL)洗涤，并且用0.7M的NH3MeOH溶液(50mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O沉淀，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈奶油色固体状的标题化合物(30mg,60μmol,32％,95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 449(M+H)+,RT 1.02分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(d,J＝6.9Hz,1H),7.61(s,1H),7.53–7.49(m,1H),7.44(t,J＝5.8Hz,1H),7.26–7.17(m,1H),6.93(td,J＝6.8,1.2Hz,1H),6.80–6.74(m,1H),5.39(s,1H),5.35–5.31(m,1H),4.55(d,J＝5.7Hz,2H),3.61–3.47(m,1H),3.24–3.15(m,1H),3.08–2.99(m,1H),2.99–2.86(m,2H),2.82–2.74(m,1H),2.35–2.24(m,1H),2.16(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.61–1.52(m,1H),1.40–1.29(m,1H),1.22(dd,J＝6.9,5.0Hz,6H),1.19–1.13(m,1H)。4H不可见。
中间体合成A3
3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550001261
步骤A/B：3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛肟/(3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
在80℃下将3-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛(500mg,3.12mmol)、盐酸羟胺(542mg,7.80mmol)和吡啶(0.63mL,7.80mmol)于EtOH(5.0mL)中的悬浮液搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，接着再溶解于AcOH(5.0mL)中。在0℃下冷却溶液，接着添加乙酸钠(51mg,616μmol)和锌粉(2.02g,30.8mmol)。在室温下将反应混合物搅拌过夜，随后经硅藻土过滤，用DCM(50mL)和MeOH(50mL)冲洗。将滤液浓缩至干燥以提供油状物。经SCX(14g-用MeOH(50mL)洗涤，用含有0.7M NH3的MeOH(50mL)洗脱)的过滤产生了呈白色固体状的标题化合物(371mg,2.2mmol,71％产率，95％纯度)。
1H NMR(在DMSO-d6中)与产物结构一致。
合成18
(3R,4R)-4-(((7-((咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基-d2)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-018)
Figure BDA0003693597550001271
步骤1：5-氯-N-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基-d2)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲-d2-胺(102mg,684μmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(157mg,684μmol)和DIPEA(0.89mL,893μmol)于EtOH(7.0mL)中的溶液中。在80℃下将反应混合物加热过夜。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(180mg,0.50mmol,73％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 345(M+H)+,RT 1.36分钟。
步骤2：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基-d2)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(131mg,599μmol)添加至5-氯-N-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基-d2)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(180mg,499μmol)和DMAP(12mg,99.8μmol)于THF(5.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(184mg,0.36mmol,72％产率，87％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 445(M+H)+,RT 1.72分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基-d2)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基-d2)氨基甲酸叔丁酯(184mg,415μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(105mg,457μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(35.5mg,41.5μmol)于THF(1.9mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(540μL,540μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续1.5小时。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(236mg,0.33mmol,80％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 637(M+H)+,RT 1.64分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-((咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基-d2)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(0.79mL,3.14mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲基-d2)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(100mg,157μmol)于二噁烷(1.0mL)中的悬浮液中。在35℃下将反应混合物搅拌4小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(50mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(50mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O沉淀，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈白色固体状的标题化合物(61mg,0.13mmol,85％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 437(M+H)+,RT 1.03分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(dt,J＝6.8,1.3Hz,1H),7.78(s,1H),7.63(s,2H),7.50(d,J＝9.1Hz,1H),7.20(m,1H),6.85(td,J＝6.8,1.2Hz,1H),6.76–6.68(m,1H),5.29(m,2H),3.60–3.48(m,1H),3.23–3.13(m,1H),3.07–2.85(m,3H),2.80–2.72(m,1H),2.34–2.23(m,1H),2.14(dd,J＝11.5,10.0Hz,1H),1.58–1.49(m,1H),1.37–1.27(m,1H),1.23(dd,J＝6.9,4.9Hz,6H),1.19–1.11(m,1H)。1H在水下。
中间体合成A4
咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲-d2-胺
Figure BDA0003693597550001291
步骤A：咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲-d2-醇
在0℃下将氘化铝锂(88mg,2.10mmol)添加至咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯(400mg,2.10mmol)于THF(21mL)中的溶液中。在0℃下将混合物搅拌15分钟，接着添加水(0.1mL)，随后添加2M NaOH水溶液(0.1mL)，接着添加水(0.3mL)。使溶液升温至室温，搅拌15分钟，接着添加无水MgSO4，并且将混合物再搅拌15分钟。将混合物在减压下浓缩。
通过色谱法(12g柱筒，0-100％(3:1EtOAc/EtOH)/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(211mg,1.4mmol,65％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 151(M+H)+,RT 0.47分钟。
步骤B：2-(氯甲基-d2)咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐
在0℃下将亚硫酰氯(205μL,2.81mmol)逐滴添加至咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲-d2-醇(211mg,1.40mmol)于DCM(14mL)中的溶液中。在0℃下将混合物搅拌2小时，接着在减压下浓缩至干燥以产生呈奶油色固体状的标题化合物(278mg,1.3mmol,92％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 169(M+H)+,RT 0.16分钟。
步骤C：2-(叠氮基甲基-d2)咪唑并[1,2-a]吡啶
将2-(氯甲基-d2)咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐(278mg,1.36mmol)和DIPEA(708μL,4.07mmol)于DMF(14mL)中的溶液用叠氮化钠(132mg,2.03mmol)处理。将混合物加热至60℃，并且搅拌2小时。使混合物冷却至室温，用水(100mL)稀释。用TBME(3×25mL)进行萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，并且在减压下浓缩。通过色谱法(12g柱筒，0-100％(3:1EtOAc/EtOH)/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(150mg,0.66mmol,49％产率，77％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 176(M+H)+,RT 0.77分钟。
步骤D：咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基甲-d2-胺
将2-(叠氮基甲基-d2)咪唑并[1,2-a]吡啶(150mg,659μmol)和三苯基膦(208mg,791μmol)溶解于THF(8.0mL)和水(0.8mL)中。将混合物加热至50℃，并且搅拌1小时，随后在真空中移除溶剂。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(102mg,0.65mmol,99％产率，95％纯度)。
1H NMR(在DMSO-d6中)与产物结构一致。
合成19
(3R,4R)-4-(((7-((1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-019)
Figure BDA0003693597550001311
步骤1：5-氯-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙-1-胺(133mg,782μmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(100mg,435μmol)和DIPEA(0.38mL,2.17mmol)于EtOH(3.0mL)中的溶液中。在90℃下将反应混合物加热1小时。将反应混合物在真空中浓缩。
通过色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(158mg,0.42mmol,97％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 355(M+H)+,RT 1.47分钟。
步骤2：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(136mg,623μmol)添加至5-氯-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(158mg,445μmol)和DMAP(5.4mg,44.5μmol)于THF(2.5mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物搅拌过夜。再添加BOC酸酐(136mg,623μmol)，并且在50℃下将反应混合物搅拌3小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(171mg,0.36mmol,80％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 455(M+H)+,RT 1.79分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(171mg,376μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(95mg,413μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(32mg,37.6μmol)于THF(3.2mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.49mL,489μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2小时。在室温下，添加水(15mL)和EtOAc(25mL)。分离各层，并且将水层用EtOAc(2×15mL)萃取。将合并的有机层经相分离器过滤，并且浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(168mg,0.24mmol,64％产率，93％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 649(M+H)+,RT 1.68分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-((1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(1.17mL,4.69mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(160mg,234μmol)于二噁烷(1.2mL)中的溶液中。在35℃下将反应混合物搅拌1小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(40mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(40mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈灰白色固体状的标题化合物(70mg,0.15mmol,63％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 449(M+H)+,RT 1.02分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝6.8Hz,1H),7.80(d,J＝4.9Hz,1H),7.62(s,1H),7.52(d,J＝9.1Hz,1H),7.26–7.18(m,1H),7.13(d,J＝7.8Hz,1H),6.85(t,J＝6.7Hz,1H),6.76–6.68(m,1H),5.32(d,J＝2.0Hz,1H),5.31–5.23(m,1H),4.87–4.81(m,1H),3.60–3.43(m,1H),3.27–3.17(m,1H),3.08–2.98(m,1H),2.99–2.86(m,2H),2.82–2.73(m,1H),2.35–2.25(m,1H),2.16(td,J＝10.8,4.3Hz,1H),1.66(d,J＝6.6Hz,3H),1.60–1.51(m,1H),1.40–1.28(m,1H),1.26–1.20(m,6H),1.18–1.12(m,1H)。1H在水下。
中间体合成A5
1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙-1-胺
Figure BDA0003693597550001331
步骤A：1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙-1-醇
在-10℃下将甲基溴化镁(3M，于Et2O中)(1.71mL,5.13mmol)添加至咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛(0.500g,3.42mmol)于THF(10mL)中的溶液中。使混合物缓慢升温至室温，并且搅拌过夜。添加水(50mL)，并且将水层用EtOAc(3×50mL)萃取。收集合并的有机层，经硫酸钠干燥，过滤，并且在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题物(350mg,2.1mmol,61％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 163(M+H)+,RT 0.15分钟。
步骤B：2-(1-氯乙基)咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐
在室温下将亚硫酰氯(675μL,9.25mmol)逐滴添加至1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙-1-醇(300mg,1.85mmol)于DCE(5.0mL)中的溶液中。在45℃下将混合物搅拌3小时，接着在减压下浓缩至干燥以产生呈无色油状的标题化合物(300mg,1.4mmol,74％产率，82％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 181(M+H)+,RT 0.15分钟。
步骤C：2-(1-叠氮基乙基)咪唑并[1,2-a]吡啶
将2-(1-氯乙基)咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐(200mg,921μmol)和DIPEA(390μL,2.76mmol)于DMF(14mL)中的溶液用叠氮化钠(90mg,1.38mmol)处理。将混合物加热至60℃，并且搅拌6小时。使混合物冷却至室温，用水(40mL)和盐水(60mL)稀释。用TBME(3×50mL)和EtOAc(50mL)进行萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(190mg,0.81mmol,88％产率，80％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 188(M+H)+,RT 0.90分钟。
步骤D：1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)乙-1-胺
将2-(1-叠氮基乙基)咪唑并[1,2-a]吡啶(190mg,913μmol)和三苯基膦(287mg,1.10mmol)溶解于THF(4.5mL)和水(0.5mL)中。在室温下将混合物搅拌1小时，接着在50℃下并且搅拌1小时，随后在真空中移除溶剂。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈黄色油状的标题化合物(144mg,0.85mmol,93％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 162(M+H)+,RT 0.48分钟。
合成20
(3R,4R)-4-(((7-((苯并呋喃-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-020)
Figure BDA0003693597550001351
步骤1：N-(苯并呋喃-2-基甲基)-5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将苯并呋喃-2-基甲胺盐酸盐(100mg,0.547mmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(105mg,0.456mmol)和DIPEA(0.48mL,2.74mmol)于EtOH(1.9mL)中的溶液中。在90℃下将反应混合物加热过夜。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-30％EtOAc/庚烷)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(157mg,0.42mmol,91％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 341(M+H)+,RT 1.82分钟
步骤2：(苯并呋喃-2-基甲基)(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(109mg,0.498mmol)添加至N-(苯并呋喃-2-基甲基)-5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(157g,0.415mmol)和DMAP(10mg,83μmol)于THF(8.0mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物分配于DCM(15mL)与水(30mL)之间。将水层用DCM(2×30mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经相分离器过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-20％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈奶油色固体状的标题化合物(164mg,0.37mmol,89％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 385(M+H-tBu)+,RT 2.10分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((苯并呋喃-2-基甲基)(叔丁氧基羰基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(苯并呋喃-2-基甲基)(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氨基甲酸叔丁酯(164mg,0.372mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(94mg,0.409mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(31.8mg,37.2μmol)于THF(3.6mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.48mL,0.48mmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2小时。在室温下，将混合物经硅藻土过滤，用EtOAc(15mL)冲洗。将滤液用水(15mL)洗涤，并且将水层用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈橙色固体状的标题化合物(235mg,0.33mmol,89产率,90％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 635(M+H)+,RT 1.96分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-((苯并呋喃-2-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(2.0mL,8.0mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((苯并呋喃-2-基甲基)(叔丁氧基羰基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(233mg,0.367mmol)于二噁烷(2.5mL)中的悬浮液中。在35℃下将反应混合物搅拌2小时，接着再添加氯化氢(4M，于二噁烷中)(0.92mL,3.67mmol)。在35℃下将反应混合物搅拌2.5小时，接着在真空中浓缩。
将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(20mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(20mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈米色固体状的标题化合物(88mg,0.20mmol,54％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 435(M+H)+,RT 1.37分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.81(t,J＝6.3Hz,1H),7.63(s,1H),7.58(dd,J＝7.5,1.6Hz,1H),7.53(d,J＝8.0Hz,1H),7.30–7.17(m,2H),6.78(s,1H),6.74(t,J＝6.1Hz,1H),5.37(s,1H),5.28–5.20(m,1H),4.62(d,J＝6.1Hz,2H),3.56–3.45(m,1H),3.27–3.17(m,1H),3.08–2.98(m,1H),2.98–2.87(m,2H),2.82–2.72(m,1H),2.36–2.23(m,1H),2.15(dd,J＝11.5,10.0Hz,1H),1.62–1.52(m,1H),1.39–1.29(m,1H),1.23(dd,J＝6.9,4.7Hz,6H),1.18–1.09(m,1H)。1H在水下。
合成21
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-((喹啉-3-基甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-021)
Figure BDA0003693597550001381
步骤1：5-氯-3-异丙基-N-(喹啉-3-基甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将喹啉-3-基甲胺二盐酸盐(121mg,0.522mmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(100mg,0.435mmol)和DIPEA(0.68mL,3.92mmol)于EtOH(2.0mL)中的溶液中。在90℃下将反应混合物加热过夜。将反应混合物在真空中浓缩，并且将残余物分配于DCM(20mL)与饱和NaHCO3水溶液(10mL)之间。将有机层用饱和NaHCO3水溶液(3×10mL)洗涤，经相分离器过滤，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(80g柱筒，0-30％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(109mg,0.29mmol,66％产率，93％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 352(M+H)+,RT 1.56分钟
步骤2：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(喹啉-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(80mg,0.368mmol)添加至5-氯-3-异丙基-N-(喹啉-3-基甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(108mg,0.307mmol)和DMAP(7.5mg,61.4μmol)于THF(6.0mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物搅拌2.5小时。再添加BOC酸酐(34mg,0.154mmol)，并且在65℃下将反应混合物搅拌1.5小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物分配于DCM(15mL)与水(30mL)之间。将水层用DCM(2×30mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经相分离器过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(143mg,0.29mmol,94％产率，91％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 452(M+H)+,RT 1.91分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(喹啉-3-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)(喹啉-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(139mg,0.308mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(78mg,0.339mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(26.3mg,30.8μmol)于THF(3.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(399μl,0.399mmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续1.5小时。
在室温下，将混合物经硅藻土过滤，用EtOAc(15mL)冲洗。将滤液用水(15mL)洗涤，并且将水层用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(146mg,0.18mmol,67％产率，80％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 646(M+H)+,RT 1.80分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-((喹啉-3-基甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(0.90mL,3.60mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)(喹啉-3-基甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(116mg,0.18mmol)于二噁烷(2.6mL)中的悬浮液中。在35℃下将反应混合物搅拌3小时。再添加氯化氢(4M，于二噁烷中)(0.23mL,0.90mmol)，并且在35℃下将反应混合物搅拌1小时，接着在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(20mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(60mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈灰白色固体状的标题化合物(51mg,0.11mmol,71％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 446(M+H)+,RT 0.67分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96(d,J＝2.2Hz,1H),8.24(s,1H),8.07–7.99(m,2H),7.99–7.95(m,1H),7.80–7.71(m,1H),7.66(s,1H),7.60(ddd,J＝1.2,6.8,8.1Hz,1H),6.66(t,J＝6.1Hz,1H),5.23(s,2H),4.68(d,J＝6.2Hz,2H),3.59–3.41(m,1H),3.22–3.13(m,1H),3.05–2.84(m,3H),2.79–2.70(m,1H),2.30–2.21(m,1H),2.18–2.05(m,1H),1.59–1.46(m,1H),1.37–1.26(m,1H),1.23(dd,J＝5.3,6.9Hz,6H),1.17–1.04(m,1H)。1H在水下。
合成22
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-022)
Figure BDA0003693597550001401
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺二盐酸盐(101mg,0.432mmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(83.0mg,0.364mmol)和DIPEA(0.57mL,3.28mmol)于EtOH(2.0mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物加热1小时。将反应混合物在真空中浓缩，并且将残余物用DCM(20mL)稀释，接着将溶液依次用饱和NaHCO3水溶液(20mL)和盐水(20mL)洗涤。将有机层经相分离器过滤，并且在减压下浓缩以产生呈灰白色固体状的标题化合物(129mg,0.36mmol,99％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 353(M+H)+,RT 1.37分钟
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(94.50mg,0.433mmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(128.6mg,0.361mmol)和DMAP(8.8mg,0.072mmol)于THF(10mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物搅拌3小时，接着再添加BOC酸酐(94.50mg,0.433mmol)。在65℃下将反应混合物搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物用DCM(20mL)稀释。将溶液依次用水(15mL)和盐水(15mL)洗涤。将有机层经相分离器过滤，接着在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/庚烷)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(150mg,0.33mmol,91％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 452(M+H)+,RT 1.73分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(150.2mg,0.332mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(84.02mg,0.3645mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(28.33mg,0.033mmol)于THF(3.2mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.37g,0.431mL,431.1μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续1.5小时。在室温下，将反应混合物经硅藻土过滤，并且用EtOAc(15mL)洗涤。将滤液用水稀释，并且将水层用EtOAc(3×20mL)萃取，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％(3:1EtOAc/EtOH)/异己烷)进行的纯化产生了呈米色固体状的标题化合物(221mg,0.30mmol,92％产率，89％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 647(M+H)+,RT 1.62分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.6mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(77mg,0.115mmol)于DCM(2.4mL)中的悬浮液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(50mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(50mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈白色固体状的标题化合物(42mg,90μmol,78％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 447(M+H)+,RT 1.09分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(d,J＝6.7Hz,1H),7.73(s,1H),7.64(t,J＝6.1Hz,1H),7.52(s,1H),7.01(dt,J＝6.9,1.3Hz,1H),6.78–6.69(m,2H),5.36–5.30(m,1H),5.27(s,1H),4.56(d,J＝5.8Hz,2H),3.57–3.46(m,1H),3.25–3.15(m,1H),3.10–2.97(m,1H),2.91(dd,J＝11.6,4.5Hz,1H),2.83–2.73(m,1H),2.47(s,3H),2.35–2.24(m,1H),2.20–2.12(m,1H),1.78–1.67(m,1H),1.61–1.51(m,1H),1.40–1.26(m,1H),1.22–1.11(m,1H),0.79–0.73(m,2H),0.70–0.59(m,2H)。1H在水下。
合成23
(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-023)
Figure BDA0003693597550001431
步骤1：5-氯-3-异丙基-N-((3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(139mg,646μmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(149mg,646μmol)和DIPEA(0.84mL,4.84mmol)于EtOH(6.0mL)中的溶液中。在60℃下将反应混合物加热3小时。将反应混合物在真空中浓缩。在室温下，添加水(50mL)，并且将混合物用DCM(3×25mL)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，并且在减压下浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(246mg,487μmol,76％产率，81％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 409(M+H)+,RT 0.83分钟
步骤2：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(158mg,166μL,722μmol)添加至5-氯-3-异丙基-N-((3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(246mg,602μmol)和DMAP(14.7mg,120μmol)于THF(6.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌3小时。
将混合物用水(100mL)稀释，接着用DCM(3×30mL)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，并且在真空中浓缩。
通过柱色谱法(12g柱筒，0-70％EtOAc/环己烷)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(226mg,400μmol,66％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 509(M+H)+,RT 1.99分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,196μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(45.3mg,196μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(16.8mg,19.6μmol)于THF(2.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(255μL,255μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续3小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行纯化，接着通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行纯化，然后在RP快速C18(12g柱筒，5-100％MeCN/10mM碳酸氢铵)上进一步纯化，产生了呈白色固体状的标题化合物(68mg,92μmol,47％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 704(M+H)+,RT 0.85分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-异丙基-7-(((3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.6mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(68mg,96.8μmol)于DCM(2.4mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌6小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(20mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(20mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈白色固体状的标题化合物(20mg,39μmol,40％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 504(M+H)+,RT 0.78分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝6.9Hz,1H),7.83–7.78(m,1H),7.64(s,1H),7.55(m,1H),7.49(t,J＝5.7Hz,1H),7.20(m,1H),6.78–6.70(m,1H),5.31(s,1H),5.29–5.20(m,1H),4.72(d,J＝5.3Hz,2H),3.59–3.47(m,1H),3.25–3.19(m,1H),3.08–2.87(m,3H),2.81–2.74(m,1H),2.34–2.25(m,1H),2.15(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.60–1.53(m,1H),1.40–1.29(m,1H),1.24(dd,J＝6.9,4.3Hz,6H),1.21–1.12(m,1H)。1H在水下。
中间体合成A6
(3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550001461
步骤A：3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯
在N2下，将三氟甲基三甲基硅烷(1.50g,1.6mL,10.5mmol)添加至咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯(500mg,2.63mmol)、二乙酸碘苯(1.69g,5.26mmol)和氟化铯(1.60g,10.5mmol)于MeCN(15mL)中的混合物中。将反应混合物加热至30℃，持续3小时，接着在减压下浓缩至干燥。通过柱(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(203mg,680μmol,26％产率，87％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 259(M+H)+,RT 1.17分钟。
步骤B：(3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇
在0℃下将LiAlH4(2M，于THF中)(0.393mL,786μmol)添加至3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯(203mg,786μmol)于THF(8.0mL)中的溶液中。使反应混合物升温至室温，并且搅拌1小时。在0℃下，添加饱和NH4Cl水溶液(10mL)和水(10mL)。将水层用DCM(3×20mL)萃取，并且将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱(12g柱筒，0-100％(3:1EtOAc/EtOH)/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(102mg,0.45mmol,58％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 217(M+H)+,RT 0.81分钟。
步骤C：2-(氯甲基)-3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐
在0℃下将亚硫酰氯(203μL,2.78mmol)逐滴添加至(3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇(250mg,1.11mmol)于DCM(5.0mL)中的溶液中。
在0℃下将混合物搅拌2小时。在减压下浓缩至干燥产生了呈黄色固体状的标题化合物(250mg,0.89mmol,80％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 235(M-OH)+,RT 1.19分钟。
步骤D：2-(叠氮基甲基)-3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶
将氯化2-(氯甲基)-3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-1-鎓(250mg,922μmol)和DIPEA(0.48mL,2.77mmol)于DMF(4.0mL)中的溶液用叠氮化钠(90mg,1.38mmol)处理。将混合物加热至50℃，并且搅拌2小时。使混合物冷却至室温，用水(10mL)和盐水(10mL)稀释。用DCM(3×20mL)进行萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱(12g柱筒，0-100％EtOAc/环己烷)进行的纯化产生了呈无色油状的标题化合物(209mg,0.75mmol,81％产率，86％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 242(M+H)+,RT 1.20分钟。
步骤E：(3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
将2-(叠氮基甲基)-3-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶(209mg,780μmol)和三苯基膦(245mg,936μmol)溶解于二噁烷(4.0mL)和水(0.4mL)中。在50℃下将混合物搅拌过夜，随后在真空中移除溶剂。
将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(60mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(40mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(139mg,588μmol,77％产率，91％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 216(M+H)+,RT 0.82分钟。
合成24
(3R,4R)-4-(((7-(((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-024)
Figure BDA0003693597550001481
步骤1：5-氯-N-((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(52mg,0.22mmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(61mg,0.27mmol)和DIPEA(0.29mL,1.70mmol)于EtOH(2.2mL)中的溶液中。在60℃下将反应混合物加热18小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-50％(3:1EtOAc/EtOH)/异己烷)进行的纯化产生了呈粉红色固体状的标题化合物(74mg,155μmol,70％产率，80％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 381(M+H)+,RT 1.63分钟。
步骤2：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(51mg,0.23mmol)添加至5-氯-N-((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(74mg,155μmol)和DMAP(5mg,40μmol)于THF(1.9mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(74mg,154μmol,99％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 783(M+H)+,RT 1.89分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(74.0mg,0.154mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(40.0mg,0.170mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(13.9mh,0.015mmol)于THF(3.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.200mL,0.200mmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续16小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行纯化，继之以在RP快速C18(4g柱筒，15-100％MeCN/10mM碳酸氢铵)上进一步纯化，产生了呈白色固体状的标题化合物(60mg,89μmol,58％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 675(M+H)+,RT 1.77分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-(((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.3mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(60mg,89μmol)于DCM(1.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时，并且在真空中浓缩。
将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(20mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(20mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生标题化合物(13mg,27μmol,30％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 475(M+H)+,RT 1.25分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43(d,J＝6.8Hz,1H),7.61(s,1H),7.54(d,J＝9.1,1H),7.26(m,2H),6.98(td,J＝6.8,1.2Hz,1H),6.85–6.76(m,1H),5.43-5.36(m,2H),4.58(d,J＝5.1Hz,2H),3.61–3.51(m,1H),3.27–3.20(m,1H),3.14-3.06(m,1H),3.00–2.90(m,2H),2.88–2.79(m,1H),2.41–2.31(m,1H),2.26–2.17(m,1H),1.96–1.87(m,1H),1.65–1.57(m,1H),1.44-1.34(m,1H),1.28-1.17(m,7H),1.15–1.08(m,2H),0.74–0.67(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A7
(3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺合成
Figure BDA0003693597550001501
步骤A：3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛
将磷酸三钾(1.56g,7.35mmol)于水(4.0mL)中的溶液添加至3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛(500mg,1.84mmol)、环丙烷硼酸(474mg,5.51mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(300mg,368μmol)于二噁烷(20mL)中的溶液中。持续10分钟将N2鼓泡通过反应混合物，接着在80℃下将反应混合物加热20小时。在室温下，将混合物经硅藻土过滤，用DCM(25mL)冲洗。将水(50mL)添加至滤液中，分离各层，并且将水层用DCM(2×25mL)萃取。将合并的有机级分经MgSO4干燥，并且在真空中浓缩。通过柱(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(111mg,513μmol,28％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 187(M+H)+,RT 0.80分钟。
步骤B：(S,E)-N-((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在0℃下依次将(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(86.7mg,715μmol)和丙-2-醇钛(IV)(0.53mL,1.79mmol)添加至3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛(111mg,596μmol)于DCM(6.0mL)中的溶液中。在40℃下将反应混合物搅拌18小时。在搅拌下将盐水(50mL)和硅藻土添加至反应混合物中。将混合物经硅藻土垫过滤，并且用DCM(100mL)洗涤。从滤液收集有机层，并且将水层用DCM(2×25mL)进一步萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，接着在减压下浓缩。通过柱(12g柱筒，0-100％(3:1EtOAc/EtOH)/环己烷)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(139mg,0.39mmol,65％产率，81％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 290(M+H)+,RT 1.08分钟。
步骤C：(S)-N-((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在0℃下将硼氢化钠(18mg,476μmol)添加至S,E)-N-((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(139mg,389μmol)于MeOH(2.4mL)中的溶液中。使反应升温至室温，并且搅拌1小时。添加水(30mL)和DCM(25mL)。分离各层，并且将水层用DCM(2×25mL)进一步萃取。将合并的有机层经相分离器过滤，并且在减压下浓缩以产生呈粉红色固体状的标题化合物(139mg,382μmol,98％产率，80％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 292(M-OH)+,RT 1.05分钟。
步骤D：(3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
将氯化氢(1.25M，于MeOH中)(0.9mL,1.14mmol)添加至(S)-N-((3-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(139mg,382μmol)于MeOH(1.0mL)中的溶液中。在室温下将反应搅拌2小时，接着再添加氯化氢(1.25M，于MeOH中)(0.9mL,1.14mmol)，并且将混合物搅拌1小时，随后在减压下浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(50mL)洗涤，并且用0.7M的NH3MeOH溶液(20mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈黄色油状的标题化合物(53mg,226μmol,59％产率，80％纯度)。
1H NMR(在DMSO-d6中)与产物结构一致。
合成25
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-025)
Figure BDA0003693597550001521
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺二盐酸盐(111mg,0.474mmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(90mg,0.395mmol)和DIPEA(0.62mL,3.55mmol)于EtOH(1.5mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物加热1.5小时。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物在DCM(15mL)中稀释，并且用饱和NaHCO3水溶液(15mL)和盐水(15mL)洗涤。将有机层经相分离器过滤，并且在减压下浓缩以产生呈灰色固体状的标题化合物(118mg,0.33mmol,83％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 353(M+H)+,RT 1.36分钟
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(87mg,0.398mmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(117.0mg,331.6mmol)和DMAP(8.1mg,66μmol)于THF(6.5mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物搅拌1小时，接着再装以BOC酸酐(87mg,0.398mmol)和DMAP(8.1mg,66μmol)，并且在65℃下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物在DCM(15mL)中稀释。将有机层用盐水(3×10mL)洗涤，经相分离器过滤，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈绿色固体状的标题化合物(135mg,0.29mmol,87％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 453(M+H)+,RT 1.71分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(136mg,0.30mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(83mg,360μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(26mg,30μmol)于THF(2.9mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.39mL,390μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2小时。在室温下，将混合物经硅藻土过滤，用EtOAc(15mL)洗涤。将滤液用水(10mL)进行分配，并且将水层用EtOAc(3×20mL)再萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(163mg,0.22mmol,74％产率，88％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 647(M+H)+,RT 1.22分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.5mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(163mg,252μmol)于DCM(2.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(50mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(60mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈米色固体状的标题化合物(81mg,0.18mmol,71％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 447(M+H)+,RT 1.42分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.66(s,1H),7.56(t,J＝6.0Hz,1H),7.51(s,1H),7.42(d,J＝9.0Hz,1H),7.21(dd,J＝9.1,6.8Hz,1H),6.79–6.73(m,2H),5.44–5.37(m,1H),5.32(s,1H),4.57(d,J＝5.9Hz,2H),3.58–3.46(m,1H),3.26–3.17(m,1H),3.12–3.03(m,1H),2.94(dd,J＝11.5,4.5Hz,1H),2.87–2.78(m,1H),2.55(s,3H),2.40–2.31(m,1H),2.27–2.16(m,1H),1.76–1.67(m,1H),1.63–1.55(m,1H),1.42–1.32(m,1H),1.25–1.11(m,1H),0.80–0.71(m,2H),0.69–0.58(m,2H)。1H在水下。
合成26
(3R,4R)-4-(((3-乙基-7-(((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-026)
Figure BDA0003693597550001551
步骤1：5-氯-3-乙基-N-((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺盐酸盐(96.1mg,486μmol)添加至5,7-二氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(100mg,463μmol)和DIPEA(0.56ml,3.24mmol)于EtOH(2.0mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物加热18小时。将反应混合物在真空中浓缩。
通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(128mg,0.36mmol,77％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 341(M+H)+,RT 1.22分钟。
步骤2：(5-氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(98mg,451μmol)添加至5-氯-3-乙基-N-((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(128mg,376μmol)和DMAP(9mg,75μmol)于THF(4.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％(3:1EtOAc/EtOH)/异己烷)进行的纯化产生了呈褐色固体状的标题化合物(138mg,0.30mmol,80％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 441(M+H)+,RT 1.61分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(138mg,300μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(83mg,361μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(0.62g,0.72mmol)于THF(2.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(391μL,391μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续18小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-10％(0.7MNH3/MeOH)/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(141mg,222μmol,74％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 635(M+H)+,RT 1.62分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-乙基-7-(((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.5mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(140mg,221μmol)于二噁烷(2.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(50mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(50mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生标题化合物(71mg,160μmol,73％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 435(M+H)+,RT 1.02分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(d,J＝6.5Hz,1H),7.74(s,1H),7.69-7.63(m,2H),7.01(dt,J＝6.9,1.3Hz,1H),6.71-6.79(m,2H),5.46–5.37(m,1H),5.27(s,1H),4.57(d,J＝6.0Hz,2H),3.49-3.60(m,1H),3.11-3.20(m,1H),3.06–2.95(m,1H),2.89(dd,J＝11.5,4.6Hz,1H),2.81–2.73(m,1H),2.47(s,3H),2.24–2.34(m,1H),2.19–2.10(m,1H),1.57–1.48(m,1H),1.36–1.25(m,1H),1.11-1.20(m,4H)。1CH2在DMSO下。1H在水下。
合成27
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-027)
Figure BDA0003693597550001571
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(64mg,0.34mmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(86mg,0.38mmol)和DIPEA(0.42mL,2.4mmol)于EtOH(3.0mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物加热20小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈褐色固体状的标题化合物(105mg,0.27mmol,78％产率，94％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 369(M+H)+,RT 1.35分钟。
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(70mg,321μmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(105mg,268μmol)和DMAP(6.5mg,54μmol)于THF(3.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(120mg,256μmol,95％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 469(M+H)+,RT 0.81分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(140mg,299μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(83mg,358μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(25mg,29.9μmol)于THF(2.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(388μL,388μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续18小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(167mg,0.21mmol,69％产率，82％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 663(M+H)+,RT 1.61分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(1.04mL,4.16mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(168mg,208μmol)于二噁烷(2.0mL)中的溶液中。在35℃下将反应混合物搅拌1小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生标题化合物(62mg,0.13mmol,61％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 463(M+H)+,RT 1.04分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61(t,J＝6.1Hz,1H),7.56(s,1H),7.52(s,1H),7.29(dd,J＝9.0,7.5Hz,1H),7.15(d,J＝9.0Hz,1H),6.77–6.71(m,1H),6.34(d,J＝7.4Hz,1H),5.36–5.32(m,1H),5.30(s,1H),4.55(d,J＝5.9Hz,2H),4.06(s,3H),3.57–3.49(m,1H),3.26–3.15(m,1H),3.09–2.99(m,1H),2.92(dd,J＝11.5,4.6Hz,1H),2.83–2.76(m,1H),2.36–2.26(m,1H),2.17(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.78–1.66(m,1H),1.61–1.53(m,1H),1.36–1.29(m,1H),1.22–1.11(m,1H),0.82–0.72(m,2H),0.76–0.59(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A8
(5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550001591
步骤A：5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯
在微波照射下在80℃下将含6-甲氧基吡啶-2-胺(400mg,3.22mmol)和3-溴-2-氧代丙酸乙酯(0.81mL,6.44mmol)的IPA(2.0ml)和水(2.0ml)加热1小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，并且用DCM(3×25mL)萃取。将合并的有机级分经MgSO4干燥，过滤，接着在真空下浓缩。通过柱色谱法(40g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(280mg,1.3mmol,39％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 221(M+H)+,RT 0.93分钟。
步骤B：(5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇
在0℃下将硼氢化锂(2M，于THF中)(0.63mL,1.26mmol)添加至5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯(280mg,1.26mmol)于THF(6.0mL)中的溶液中。使反应混合物升温至室温，过夜。在0℃下，添加水(5mL)和饱和NH4Cl水溶液(10mL)。将水层用DCM(3×20mL)萃取，并且将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过柱(24g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(120mg,0.61mmol,49％产率，91％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 179(M+H)+,RT 0.62分钟。
步骤C：2-(氯甲基)-5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐
在0℃下将亚硫酰氯(112μL,1.53mmol)逐滴添加至(5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇(120mg,613μmol)于DCM(7.0mL)中的溶液中。
在0℃下将混合物搅拌2小时。在减压下浓缩至干燥产生了呈灰白色固体状的标题化合物(142mg,0.60mmol,98％产率，99％纯度)。
1H NMR(在DMSO-d6中)与产物结构一致。
步骤D：2-(叠氮基甲基)-5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶
将2-(氯甲基)-5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐(142mg,597μmol)和DIPEA(0.31mL,1.79mmol)于DMF(3.0mL)中的溶液用叠氮化钠(58mg,0.90mmol)处理。将混合物加热至50℃，并且搅拌2小时。使混合物冷却至室温，用水(10mL)和盐水(10mL)稀释，随后依次用TBME(3×20mL)和EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(4×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(91mg,0.37mmol,62％产率，83％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 205(M+H)+,RT 0.94分钟。
步骤E：(5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
将2-(叠氮基甲基)-5-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶(91mg,0.45mmol)和三苯基膦(0.14g,0.54mmol)溶解于THF(1.8mL)和水(0.2mL)中。在室温下将混合物搅拌过夜，随后在真空中移除溶剂。
将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(50mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(50mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(64mg,0.34mmol,77％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 178(M+H)+,RT 0.64分钟。
合成28
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-028)
Figure BDA0003693597550001621
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲胺(130mg,691μmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(158mg,691μmol)和DIPEA(0.84mL,4.83mmol)于EtOH(3.0mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物加热2小时。将反应混合物在真空中浓缩以产生呈棕色固体状的标题化合物(449mg,0.69mmol,99％产率，58％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 380(M+H)+,RT 1.45分钟
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(129mg,592μmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(206mg,494μmol)和DMAP(12.1mg,99μmol)于THF(5.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈棕色固体状的标题化合物(231mg,0.46mmol,93％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 480(M+H)+,RT 1.83分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(254mg,529μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(146mg,635μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(45mg,52.9μmol)于THF(5.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(688μL,688μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续72小时。将反应在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈棕色固体状的标题化合物(230mg,0.32mmol,61％产率，94％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 674(M+H)+,RT 1.72分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(1.71mL,6.83mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(230mg,341μmol)于二噁烷(2.0mL)中的溶液中。在35℃下将反应混合物搅拌4小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(40mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(10mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生标题化合物(145mg,0.30mmol,87％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 475(M+H)+,RT 1.14分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.98(s,1H),7.92(d,J＝9.4Hz,1H),7.61(t,J＝6.1Hz,1H),7.51(s,1H),7.08(d,J＝9.4Hz,1H),6.77(t,J＝6.0Hz,1H),5.47–5.42(m,1H),5.30(s,1H),4.55(d,J＝5.9Hz,2H),3.59–3.47(m,1H),3.28–3.20(m,1H),3.20–3.05(m,1H),2.97(dd,J＝11.6,4.5Hz,1H),2.90–2.82(m,1H),2.44–2.34(m,1H),2.25(dd,J＝11.6,10.0Hz,1H),2.21–2.11(m,1H),1.77–1.66(m,1H),1.65–1.57(m,1H),1.48–1.30(m,1H),1.49–1.11(m,1H),1.11–1.01(m,2H),1.01–0.92(m,2H),0.81–0.72(m,2H),0.72–0.59(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A9
(6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550001641
步骤A：6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-甲酸乙酯
将6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-甲酸乙酯(400mg,1.77mmol)、氟化铯(1.21g,7.98mmol)、PdCl2(dtbpf)(116mg,177μmol)、环丙基硼酸(685mg,7.98mmol)于二噁烷(10mL)中的混合物用N2脱气10分钟。接着将混合物加热至60℃，持续5.5小时，随后在减压下浓缩至干燥。通过柱色谱法(24g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(400mg,1.6mmol,93％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 232(M+H)+,RT 1.13分钟。
步骤B：(6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲醇
在-10℃下将二异丁基氢化铝(1M，于DCM中)(4.32mL,4.32mmol)添加至6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-甲酸乙酯(400mg,1.73mmol)于THF(20mL)中的溶液中。使反应混合物升温至室温，并且搅拌2小时。在0℃下，添加MeOH(10mL)，随后添加水(10mL)和1M HCl水溶液(10mL)。将混合物剧烈搅拌30分钟，并且用乙酸乙酯(3×35mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经相分离器过滤，并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(220mg,1.10mmol,66％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 190(M+H)+,RT 0.44分钟。
步骤C：2-(氯甲基)-6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪盐酸盐
将亚硫酰氯(434μL,5.95mmol)添加至(6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲醇(225mg,1.19mmol)于DCE(5.0mL)中的溶液中。在45℃下将反应混合物搅拌1小时。在减压下浓缩至干燥产生了呈绿色固体状的标题化合物(290mg,1.1mmol,95％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 209(M+H)+,RT 1.00分钟。
步骤D：2-(叠氮基甲基)-6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪
将2-(氯甲基)-6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪盐酸盐(290mg,1.19mmol)和DIPEA(0.62mL,3.56mmol)于DMF(5.0mL)中的溶液用叠氮化钠(116mg,1.78mmol)处理。将混合物加热至50℃，并且搅拌2小时。使混合物冷却至室温，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈无色油状的标题化合物(155mg,0.67mmol,57％产率，93％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 216(M+H)+,RT 1.10分钟。
步骤E：(6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基)甲胺
将2-(叠氮基甲基)-6-环丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪(155mg,673μmol)和三苯基膦(212mg,807μmol)溶解于THF(3.6mL)和水(0.4mL)中。在室温下将混合物搅拌过夜，随后在真空中移除溶剂。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(50mL)洗涤，并且用0.7M的NH3MeOH溶液(50mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(130mg,0.66mmol,98％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 189(M+H)+,RT 0.76分钟。
合成29
(3R,4R)-4-(((3-环丁基-7-(((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-029)
Figure BDA0003693597550001661
步骤1：5-氯-3-碘-N-((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺二盐酸盐(1.98g,8.47mmol)添加至5,7-二氯-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶(2.80g,8.47mmol)和DIPEA(4.4mL,25.4mmol)于EtOH(38mL)中的溶液中。在85℃下将反应混合物加热过夜。在室温下，通过过滤收集沉淀的固体，并且用EtOH(100mL)冲洗以产生呈米色固体状的标题化合物(3.57g,8.03mmol,94％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 439(M+H)+,RT 1.77分钟
步骤2：(5-氯-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(1.74g,7.99mmol)添加至5-氯-3-碘-N-((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(2.92g,6.66mmol)和DMAP(81mg,0.66mmol)于THF(23mL)和DMF(23mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物搅拌1.5小时。在室温下，添加水(20mL)，并且通过过滤收集所得固体，随后用水(25mL)和TBME(25mL)冲洗以在40℃下在真空下干燥过夜之后提供呈灰白色固体状的标题化合物(3.1g,5.68mmol,85％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 539(M+H)+,RT 2.24分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g,1.86mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.71g,7.42mmol)和DIPEA(1.29mL,7.42mmol))于无水NMP(11mL)中的溶液用N2脱气，接着在110℃下加热2小时。在0℃下冷却反应混合物，添加水(30mL)。通过过滤收集固体，用更多的水(10mL)冲洗，接着在40℃下在减压下干燥以产生呈淡白色固体状的标题化合物(1.28g,1.6mmol,87％产率，92％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 733(M+H)+,RT 2.06分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丁基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
在N2下，将环丁基溴化锌(II)(0.38M，于THF中)(根据文献程序制备)(3.59mL,1.37mmol)逐滴添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(200mg,273μmol)、XPhos Pd G3(8mg,9.28μmol)于THF(2.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时，接着用水(10mL)淬灭，并且用DCM(3×10mL)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，接着在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行纯化，继之以通过RP制备型HPLC(25-100％MeCN/0.1％NH3水溶液)进行进一步纯化，产生了呈白色固体状的标题化合物(19mg,29μmol,11％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 662(M+H)+,RT 1.34分钟。
步骤5：(3R,4R)-4-(((3-环丁基-7-(((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.10mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丁基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(19mg,29μmol)于DCM(0.4mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌16小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生标题化合物(10mg,21μmol,72％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 461(M+H)+,RT 1.82分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(d,J＝6.7Hz,1H),7.75(d,J＝4.9Hz,2H),7.66(t,J＝6.2Hz,1H),7.02(dt,J＝6.8,1.2Hz,1H),6.78-6.69(m,2H),5.32-5.25(m,2H),4.58(d,J＝6.0Hz,2H),3.59-3.42(m,2H),3.24–3.14(m,1H),3.07–2.96(m,1H),2.90(dd,J＝11.5,4.5Hz,1H),2.82–2.72(m,1H),2.48(s,3H),2.34–2.11(m,6H),1.97–1.78(m,2H),1.59–1.50(m,1H),1.38-1.28(m,1H),1.21–1.07(m,1H)。1H在水下。
合成30
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-030)
Figure BDA0003693597550001691
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(90mg,481μmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(110mg,481μmol)和DIPEA(0.59ml,3.36mmol)于EtOH(3.0mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物加热5小时。将反应混合物在真空中浓缩以产生呈黄色液体状的标题化合物(325mg,0.48mmol,99％产率，56％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 379(M+H)+,RT 1.48分钟
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(126mg,0.58mmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(325mg,0.48mmol)和DMAP(12mg,96μmol)于THF(5.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌72小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈棕色固体状的标题化合物(145mg,0.29mmol,60％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 479(M+H)+,RT 1.80分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯,0.3甲酸盐
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(145mg,303μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(83.7mg,363μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(25.9mg,30.3μmol)于THF(2.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.39ml,394μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续18小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行纯化，继之以在RP快速C18(24g柱筒，10-100％(0.1％甲酸MeCN溶液)/(0.1％甲酸水溶液))上进一步纯化，产生了呈白色固体状的标题化合物(83mg,0.12mmol,39％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 673(M+H)+,RT 1.70分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.5mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(83mg,0.12mmol)于DCM(2.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(50mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(50mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生标题化合物(49mg,0.10mmol,81％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 473(M+H)+,RT 1.16分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.91(s,1H),7.57(t,J＝6.0Hz,1H),7.52(s,1H),7.43(d,J＝9.0Hz,1H),7.20(dd,J＝9.0,7.0Hz,1H),6.79-6.74(m,1H),6.69–6.64(m,1H),5.36(s,1H),5.34–5.29(m,1H),4.60(d,J＝5.8Hz,2H),3.59-3.47(m,1H),3.26–3.19(m,1H),3.10–3.00(m,1H),2.91(dd,J＝11.5,4.5Hz,1H),2.84–2.75(m,1H),2.36–2.26(m,1H),2.22-2.12(m,2H),1.77–1.68(m,1H),1.63–1.53(m,1H),1.40-1.29(m,1H),1.22–1.10(m,1H),1.10–1.03(m,2H),0.82–0.73(m,4H),0.71–0.61(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A10
(5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550001711
步骤A：5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯
将5-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯(500mg,1.86mmol)、氟化铯(564mg,3.72mmol)、PdCl2(dtbpf)(121mg,186μmol)、环丙基硼酸(319mg,3.72mmol)于二噁烷(10.0mL)中的混合物用N2脱气10分钟。接着将混合物加热至90℃，过夜。在室温下，将反应混合物经短硅藻土垫过滤，用20％MeOH/DCM(20mL)冲洗，并且将滤液在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-10％(0.7MNH3/MeOH)/DCM)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(440mg,1.7mmol,93％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 231(M+H)+,RT 0.86分钟。
步骤B/C：(5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇/2-(氯甲基)-5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐
在0℃下将硼氢化锂(2M，于THF中)(860μL,1.72mmol)添加至5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯(440mg,1.72mmol)于THF(8.0mL)中的溶液中。使反应混合物升温至室温，接着搅拌20小时。在0℃下，添加MeOH(5mL)，随后添加水(5mL)和1M HCl水溶液(5mL)。将混合物剧烈搅拌30分钟，并且用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，并且在真空中浓缩以产生粗醇中间体(5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇(235mg,1.25mmol)，将其再溶解于无水DCE(5.0mL)中。添加亚硫酰氯(455μL,6.24mmol)，并且在45℃下将反应混合物搅拌1小时。在减压下浓缩至干燥产生了呈黄色液体状的标题化合物(260mg,1.00mmol,55％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 207(M+H)+,RT 0.52分钟。
步骤D：2-(叠氮基甲基)-5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶
将2-(氯甲基)-5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐(260mg,1.21mmol)和DIPEA(0.63mL,3.62mmol)于DMF(6.0mL)中的溶液用叠氮化钠(118mg,1.81mmol)处理。将混合物加热至50℃，并且搅拌3小时。使混合物冷却至室温，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈无色油状的标题化合物(218mg,0.97mmol,80％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法6)：m/z 214(M+H)+,RT 0.63分钟。
步骤E：(5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
将2-(叠氮基甲基)-5-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶(218mg,971μmol)和三苯基膦(255mg,971μmol)溶解于THF(3.6mL)和水(0.4mL)中。在室温下将混合物搅拌过夜，随后在真空中移除溶剂。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(90mg,0.46mmol,48％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 188(M+H)+,RT 0.83分钟。
合成31
(3R,4R)-4-(((3-乙基-7-(((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-031)
Figure BDA0003693597550001731
步骤1：5-氯-3-乙基-N-((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(100mg,620μmol)添加至5,7-二氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(122mg,564μmol)和DIPEA(0.69ml,3.95mmol)于EtOH(3.0mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物加热2.5小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(70mg,0.20mmol,35％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 341(M+H)+,RT 1.33分钟。
步骤2：(5-氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(52mg,0.24mmol)添加至5-氯-3-乙基-N-((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(70mg,0.20mmol)和DMAP(4.9mg,40μmol)于THF(2.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈褐色固体状的标题化合物(83mg,0.16mmol,82％产率，87％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 441(M+H)+,RT 1.69分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(166mg,376μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(83.0mg,314μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(26.8mg,31.4μmol)于THF(3.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(408μl,408μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2.5小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(61mg,91μmol,29％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 635(M+H)+,RT 1.63分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-乙基-7-(((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.4mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(61mg,91μmol)于DCM(1.6mL)中的悬浮液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈灰白色固体状的标题化合物(26mg,57μmol,62％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 435(M+H)+,RT 1.03分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.67(s,1H),7.64(s,1H),7.58(t,J＝6.0Hz,1H),7.43(d,J＝9.1Hz,1H),7.21(dd,J＝9.1,6.8Hz,1H),6.80-6.73(m,2H),5.49–5.42(m,1H),5.34(s,1H),4.59(d,J＝5.7Hz,2H),3.62-3.50(m,1H),3.22–3.13(m,1H),3.08–2.98(m,1H),2.91(dd,J＝11.7,4.5Hz,1H),2.84–2.75(m,1H),2.56(s,3H),2.51–2.44(m,2H),2.36–2.26(m,1H),2.17(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.61–1.52(m,1H),1.38-1.28(m,1H),1.21-1.13(m,4H)。1H在水下。
合成32
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-032)
Figure BDA0003693597550001761
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(66mg,0.38mmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(86mg,0.38mmol)和DIPEA(0.46mL,2.6mmol)于EtOH(2.0mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物加热16小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(108mg,0.28mmol,74％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 367(M+H)+,RT 1.44分钟。
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(82.0mg,376μmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(106mg,289μmol)和DMAP(1.9mg,57.8μmol)于THF(2.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌3小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(148mg,0.29mmol,99％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 467(M+H)+,RT 1.78分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(130mg,278μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(76.9mg,334μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(35.7mg,41.8μmol)于THF(2.3mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(418μL,418μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-10％(0.7M NH3/MeOH)/DCM)进行纯化，继之以通过柱色谱法(4g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷，接着0-5％(0.7M NH3/MeOH)/DCM)进行进一步纯化，产生了呈棕色固体状的标题化合物(140mg,0.19mmol,68％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 661(M+H)+,RT 1.68分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(953μL,3.81mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(140mg,191μmol)于二噁烷(1.0mL)中的悬浮液中。在35℃下将反应混合物搅拌1小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(40mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(40mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在50℃下在真空下干燥过夜之后产生呈米色固体状的标题化合物(67mg,0.14mmol,72％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 461(M+H)+,RT 1.17分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.56(s,1H),7.53–7.47(m,2H),7.19(s,1H),6.74(t,J＝6.1Hz,1H),6.61(s,1H),5.35–5.29(m,2H),4.54(d,J＝5.8Hz,2H),3.61–3.46(m,1H),3.25–3.17(m,1H),3.08–2.99(m,1H),2.90(dd,J＝11.7,4.5Hz,1H),2.81–2.74(m,1H),2.36–2.31(m,3H),2.30–2.25(m,1H),2.15(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.79–1.66(m,1H),1.60–1.53(m,1H),1.32(s,1H),1.11–1.15(m,1H),0.80–0.71(m,2H),0.69–0.58(m,2H)。3H在DMSO下。1H在水下。
中间体合成A11
(5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550001781
步骤A：(5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇
在0℃下将二异丁基氢化铝(1M，于己烷中)(3.44mL,3.44mmol)添加至5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯(300mg,1.37mmol)于THF(8.0mL)中的溶液中。使反应混合物升温至室温，并且搅拌18小时，接着添加MeOH(10mL)，随后添加水(10mL)和1MHCl水溶液(10mL)。将混合物剧烈搅拌30分钟，并且用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈棕色固体状的标题化合物(93mg,0.51mmol,37％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 177(M+H)+,RT 0.77分钟。
步骤B：2-(氯甲基)-5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐
在0℃下将亚硫酰氯(96μL,1.32mmol)逐滴添加至(5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇(93.0mg,528μmol)于DCM(2.5mL)中的溶液中。在室温下将混合物搅拌1小时。在减压下浓缩至干燥产生了呈黄色固体状的标题化合物(132mg,0.52mmol,98％产率，91％纯度)。
1H NMR(在DMSO-d6中)与产物结构一致。
步骤C：2-(叠氮基甲基)-5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶
将2-(氯甲基)-5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(132mg,617μmol)和DIPEA(322μL,1.85mmol)于DMF(3.0mL)中的溶液用叠氮化钠(40mg,617μmol)处理。将混合物加热至50℃，并且搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈无色油状的标题化合物(117mg,0.38mmol,61％产率，65％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 202(M+H)+,RT 0.46分钟。
步骤D：(5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
将2-(叠氮基甲基)-5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(117mg,378μmol)和三苯基膦(119mg,454μmol)溶解于THF(1.8mL)和水(0.2mL)中。在50℃下将混合物搅拌16小时，随后在真空中移除溶剂。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈褐色固体状的标题化合物(66mg,377μmol,99％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 176(M+H)+,RT 0.79分钟。
合成33
(3R,4R)-4-(((7-(((8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-033)
Figure BDA0003693597550001801
步骤1：5-氯-N-((8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(175mg,701μmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(145mg,637μmol)和DIPEA(666μl,3.82mmol)于EtOH(10mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物加热5小时。将反应混合物在真空中浓缩以产生呈黄色固体状的标题化合物(290mg,0.58mmol,91％产率，88％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 441(M+H)+,RT 1.61分钟
步骤2：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
在微波照射下在150℃下将5-氯-N-((8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(130mg,295μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(271mg,1.18mmol)和DIPEA(232μL,1.33mmol)于NMP(1.5mL)中的溶液加热5小时。在室温下，添加水。通过过滤收集所得固体以产生呈黄色固体状的标题化合物(175mg,0.19mmol,65％,69％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 535(M-Boc)+,RT 1.09分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-(((8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(1.29mL,5.16mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(164mg,258μmol)于二噁烷(2.0mL)中的悬浮液中。在35℃下将反应混合物搅拌1小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(40mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(10mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩。通过RP制备型HPLC(25-100％MeCN/0.1％甲酸水溶液)进行的进一步纯化产生了呈灰白色固体状的标题化合物(84mg,0.15mmol,60％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 535(M+H)+,RT 1.27分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.18(t,J＝1.5Hz,1H),8.00(s,1H),7.85–7.77(m,2H),7.54(s,1H),6.72(t,J＝5.9Hz,1H),5.34–5.28(m,1H),5.25(s,1H),4.63(d,J＝6.1Hz,2H),3.59–3.47(m,1H),3.27–3.18(m,1H),3.11–3.01(m,1H),2.93(dd,J＝11.6,4.5Hz,1H),2.84–2.77(m,1H),2.36–2.26(m,1H),2.18(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.79–1.67(m,1H),1.62–1.53(m,1H),1.38–1.29(m,1H),1.26–1.07(m,1H),0.83–0.73(m,2H),0.77–0.60(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A12
(8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550001821
步骤A：(8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇
在-40℃下将二异丁基氢化铝(1M，于己烷中)(18.8mL,18.8mmol)添加至8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯(2.20g,7.52mmol)于THF(40mL)中的溶液中。使反应混合物升温至0℃，并且在0℃下搅拌2小时，接着添加MeOH(10mL)，随后添加水(10mL)和1M HCl水溶液(10mL)。将混合物剧烈搅拌30分钟，并且用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，并且在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(1.80g,6.9mmol,92％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 251(M+H)+,RT 0.94分钟。
步骤B：8-氯-2-(氯甲基)-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶
将亚硫酰氯(2.6mL,36mmol)逐滴添加至(8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇(1.8g,7.2mmol)于DCE(20mL)中的溶液中。
在45℃下将混合物搅拌3小时。在减压下浓缩至干燥产生了呈黄色固体状的标题化合物(2.0g,6.7mmol,93％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 269(M+H)+,RT 1.25分钟。
步骤C：2-(叠氮基甲基)-8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶
将8-氯-2-(氯甲基)-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶(2.00g,6.69mmol)和DIPEA(3.5mL,20.1mmol)于DMF(30mL)中的溶液用叠氮化钠(652mg,10.0mmol)处理。将混合物加热至60℃，并且搅拌6小时。使混合物冷却至室温，用水(40mL)和盐水(60mL)稀释，随后依次用TBME(4×50mL)和EtOAc(50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(4×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％TBME/异己烷)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(1.80g,6.2mmol,93％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 276(M+H)+,RT 1.27分钟。
步骤D：(8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
将2-(叠氮基甲基)-8-氯-6-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶(1.8g,6.5mmol)、三苯基膦(2.1g,7.8mmol)溶解于THF(36mL)和水(4.0mL)中。在室温下将混合物搅拌过夜，随后在真空中移除溶剂。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(150mL)洗涤，并且用0.7M的NH3MeOH溶液(100mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(1.32g,5.0mmol,77％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 250(M+H)+,RT 0.92分钟。
合成34
(3R,4R)-4-(((3-乙基-7-(((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-034)
Figure BDA0003693597550001841
步骤1：5-氯-3-乙基-N-((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(106mg,444μmol)添加至5,7-二氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(80mg,370μmol)和DIPEA(387μL,2.22mmol)于EtOH(1.6mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物加热5小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈橙色固体状的标题化合物(136mg,0.34mmol,91％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 395(M+H)+,RT 1.51分钟。
步骤2：(5-氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(36.8mg,169μmol)添加至5-氯-3-乙基-N-((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(136mg,338μmol)和DMAP(8.3mg,67.5μmol)于THF(6.8mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物分配于DCM(20mL)与水(10mL)之间。将水层用DCM(2×10mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(159mg,0.29mmol,86％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 495(M+H)+,RT 1.88分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(159mg,0.321mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(91.0mg,0.395mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(28mg,32.9μmol)于THF(3.2mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(395μl,395μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2小时。将反应用水(20mL)淬灭，并且用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-5％MeOH/DCM)进行纯化，继之以在RP快速C18(24g柱筒，30-100％MeCN/10mM碳酸氢铵)上进一步纯化，产生了呈黄色固体状的标题化合物(153mg,0.18mmol,55％产率，80％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 689(M+H)+,RT 1.77分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-乙基-7-(((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(900μL,3.6mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(155mg,0.180mmol)于二噁烷(2.3mL)中的悬浮液中。在40℃室温下将反应混合物搅拌2小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(80mL)洗涤，并且用0.7M的NH3MeOH溶液(100mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生标题化合物(89mg,0.18mmol,99％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 489(M+H)+,RT 0.70分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.95–7.87(m,2H),7.68–7.60(m,2H),7.57(d,J＝7.1Hz,1H),7.41(dd,J＝7.1,9.2Hz,1H),6.77(t,J＝5.9Hz,1H),5.41–5.36(m,1H),5.35(s,1H),4.62(d,J＝6.3Hz,2H),3.60–3.47(m,1H),3.23–3.14(m,1H),3.06–2.96(m,1H),2.90(dd,J＝4.5,11.4Hz,1H),2.82–2.73(m,1H),2.48–2.44(m,2H),2.36–2.26(m,1H),2.15(dd,J＝9.9,11.6Hz,1H),1.60–1.50(m,1H),1.42–1.27(m,1H),1.17(t,J＝7.5Hz,3H),1.16–1.09(m,1H)。1H在水下。
合成35
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-035)
Figure BDA0003693597550001861
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(90mg,0.30mmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(95mg,0.42mmol)和DIPEA(0.69mL,3.9mmol)于EtOH(2.0mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物加热2小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈米色固体状的标题化合物(79mg,0.16mmol,54％产率，84％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 407(M+H)+,RT 1.51分钟。
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(35mg,0.16mmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(55mg,0.14mmol)和DMAP(3.3mg,27μmol)于THF(2.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色胶状的标题化合物(57mg,0.10mmol,74％产率，89％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 507(M+H)+,RT 1.84分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(55mg,0.11mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(27mg,0.12mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(9.3mg,11.3μmol)于THF(1.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.14mL,0.14mmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续3小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(53mg,73μmol,67％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 701(M+H)+,RT 1.72分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.20mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(50mg,71μmol)于DCM(0.80mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(20mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(20mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后获得呈灰白色固体状的标题化合物(23mg,44μmol,61％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 501(M+H)+,RT 1.21分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(d,J＝7.1Hz,1H),7.99(s,2H),7.73(t,J＝6.2Hz,1H),7.52(s,1H),7.15(dd,J＝7.2,1.9Hz,1H),6.73-6.68(m,1H),5.33–5.27(m,1H),5.25(s,1H),4.62(d,J＝6.1Hz,2H),3.56-3.44(m,1H),3.25–3.15(m,1H),3.08–2.97(m,1H),2.90(dd,J＝11.7,4.5Hz,1H),2.82–2.73(m,1H),2 2.34–2.25(m,1H),2.21–2.09(m,1H),1.78–1.66(m,1H),1.59–1.51(m,1H),1.37-1.27(m,1H),1.19–1.05(m,1H),0.79-0.74(m,2H),0.70–0.60(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A13
(7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550001881
步骤A：2-((7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮
将含4-(三氟甲基)吡啶-2-胺(200mg,1.23mmol)、2-(3-溴-2-氧代丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(366mg,1.23mmol)和碳酸氢钠(104mg,1.23mmol)的乙醇(0.60mL)在微波照射下加热至80℃，持续1小时。接着将混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(348mg,0.80mmol,65％产率，79％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 364(M+H)+,RT 1.02分钟。
步骤B：(7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
将肼(35wt％，于水中)(250μL,2.79mmol)添加至2-(((7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酰基)苯甲酸(348mg,105μmol)于EtOH(4.0mL)中的悬浮液中。在65℃下将悬浮液搅拌3小时。将混合物在真空中浓缩，接着用1M HCl水溶液(20mL)稀释，滤除白色固体，并且用1M HCl水溶液(2×20mL)洗涤，接着将合并的水层用固体NaHCO3碱化，并且用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，接着在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以获得呈棕色油状的标题化合物(90mg,0.31mmol,38％产率，73％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 216(M+H)+,RT 0.82分钟合成36
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-036)
Figure BDA0003693597550001901
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲胺(155mg,786μmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(163mg,715μmol)和DIPEA(0.12mL,715μmol)于EtOH(10mL)中的溶液中。在90℃下将反应混合物加热3小时。将反应混合物在真空中浓缩，并且将残余物在MeCN中湿磨以产生呈白色固体状的标题化合物(170mg,0.43mmol,61％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 389(M+H)+,RT 1.52分钟
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(180mg,823μmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(160mg,412μmol)和DMAP(10.1mg,82.3μmol)于DMF(5.0mL)中的溶液中。在60℃下将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物分配于EtOAc(20mL)与水(20mL)之间。将水层用EtOAc(2×20mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-10％(0.7M NH3/MeOH)/DCM)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(190mg,0.25mmol,60％产率，64％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 488(M+H)+,RT 1.83分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(190mg,249μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(68.7mg,298μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(21.3mg,24.9μmol)于THF(2.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(323μL,323μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续18小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(103mg,0.13mmol,50％产率，83％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 684(M+H)+,RT 1.73分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(626μL,2.50mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(103mg,125μmol)于二噁烷(2.0mL)中的溶液中。在35℃下将反应混合物搅拌4小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(40mL)洗涤，并且用0.7M的NH3MeOH溶液(10mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生标题化合物(28mg,54μmol,43％产率，93％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 484(M+H)+,RT 0.72分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79–7.70(m,2H),7.66(dd,J＝11.1,7.4Hz,1H),7.53(s,1H),6.84–6.73(m,1H),5.38(s,1H),5.28–5.20(m,1H),4.73(d,J＝5.5Hz,2H),3.83(s,3H),3.55–3.44(m,1H),3.27–3.16(m,1H),3.08–3.00(m,1H),2.95–2.86(m,1H),2.81–2.74(m,1H),2.33–2.23(m,1H),2.19–2.09(m,1H),2.03–1.83(m,1H),1.77–1.66(m,1H),1.61–1.53(m,1H),1.20–1.10(m,1H),0.79–0.73(m,2H),0.67–0.63(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A14
(5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550001921
步骤A：N-(2-氨基-4,5-二氟苯基)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酰胺
将1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU)(3.96g,10.4mmol)添加至4,5-二氟苯-1,2-二胺(2.00g,13.9mmol)、2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酸(1.42g,6.94mmol)和DIPEA(3.6mL,20.8mmol)于THF(25mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物搅拌72小时。在室温下，添加EtOAc(25mL)和水(10mL)。通过过滤收集所得固体，接着在MeCN中湿磨以产生呈灰白色固体状的标题化合物(1.81g,5.4mmol,78％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 332(M+H)+,RT 1.46分钟。
步骤B：2-((5,6-二氟-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮
在60℃下将N-(2-氨基-4,5-二氟苯基)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酰胺(1.81g,5.46mmol)于AcOH(15mL)中的溶液搅拌3小时。将反应混合物浓缩至干燥，并且与甲苯(2×10mL)共蒸发两次，接着用MeCN湿磨以产生呈灰白色固体状的标题化合物(1.56g,4.9mmol,90％产率，99％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 314(M+H)+,RT 1.47分钟。
步骤C：2-((5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮
在0℃下将2-((5,6-二氟-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(600mg,1.92mmol)添加至碘代甲烷(179μL,2.87mmol)和K2CO3(529mg,3.83mmol)于DMF(15mL)中的溶液中。在0℃下将反应混合物搅拌5分钟，接着在室温下搅拌过夜，随后通过过滤收集所得固体，依次用水(2.0mL)和MeCN(2.0mL)洗涤以产生呈灰色固体状的标题化合物(610mg,1.7mmol,88％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 328(M+H)+,RT 1.21分钟。
步骤D：(5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲胺
将水合肼(259μL,5.33mmol)添加至2-((5,6-二氟-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(600mg,1.52mmol)于EtOH(10mL)中的溶液中。在65℃下将悬浮液搅拌过夜。在室温下，过滤悬浮液，并且将固体用IPA(5.0mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(40mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(10mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(300mg,1.40mmol,89％产率，89％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 199(M+H)+,RT 0.78分钟。
合成37
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-037)
Figure BDA0003693597550001941
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(106mg,0.443mmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(86mg,0.377mmol)和DIPEA(390μL,2.24mmol)于EtOH(1.6mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物加热2小时，接着在真空中浓缩。
通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈米色固体状的标题化合物(185mg,0.37mmol,99％产率，82％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 407(M+H)+,RT 1.54分钟。
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(97.8mg,0.448mmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(185mg,0.373mmol)和DMAP(9.1mg,74.6μmol)于THF(7.5mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物分配于DCM(20mL)与水(30mL)之间。将水层用DCM(2×30mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈橙色油状的标题化合物(167mg,0.32mmol,87％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 507(M+H)+,RT 1.87分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(167mg,0.329mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(91mg,0.395mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(28mg,0.0329mmol)于THF(3.2mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(395μL,0.395mmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2小时。将反应用水(10mL)淬灭，并且用EtOAc(3×10mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(80g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈橙色固体状的标题化合物(177mg,0.16mmol,49％产率，64％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 701(M+H)+,RT 1.76分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(0.80mL,3.20mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(175mg,160μmol)于二噁烷(2.2mL)中的悬浮液中。在40℃下将反应混合物搅拌3小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生黄色固体。通过制备型HPLC(20-100％MeCN/0.1％NH3水溶液)进行进一步纯化以产生呈白色固体状的标题化合物(41mg,79μmol,50％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 501(M+H)+,RT 1.20分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.91(d,J＝9.3Hz,2H),7.61(t,J＝6.2Hz,1H),7.57(d,J＝7.1Hz,1H),7.51(s,1H),7.44–7.35(m,1H),6.74(t,J＝6.1Hz,1H),5.35(s,1H),5.26(s,1H),4.61(d,J＝6.0Hz,2H),3.50(s,1H),3.27–3.18(m,1H),3.10–2.95(m,1H),2.90(dd,J＝11.6,4.5Hz,1H),2.82–2.74(m,2H),2.36–2.23(m,1H),2.20–2.10(m,1H),1.77–1.65(m,1H),1.60–1.51(m,1H),1.40–1.24(m,1H),1.19–1.07(m,1H),0.80–0.71(m,2H),0.71–0.53(m,2H)。
中间体合成A15
(5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550001961
步骤A：5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯
在微波照射下在80℃下将含6-(三氟甲基)吡啶-2-胺(1.00g,6.17mmol)和3-溴-2-氧代丙酸乙酯(1.6mL,12.3mmol)的IPA(5.8mL)和水(5.8mL)加热1小时。将反应混合物在真空下浓缩。通过柱(80g柱筒，0-5％(0.7M NH3/MeOH)/DCM)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(1.24g,4.32mmol,67％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 259(M+H)+,RT 1.13分钟。
步骤B：(5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇
在-40℃下将二异丁基氢化铝(1M，于己烷中)(11mL,11.0mmol)添加至5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯(860mg,2.99mmol)于THF(9.0mL)中的溶液中。使反应混合物升温至室温，过夜。在0℃下，添加MeOH(5.0mL)，随后添加水(5.0mL)和1M HCl水溶液(5.0mL)。将混合物剧烈搅拌30分钟，并且用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，并且在真空中浓缩以产生呈棕色油状的标题化合物(453mg,2.0mmol,57％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 217(M+H)+,RT 0.82分钟。
步骤C：2-(氯甲基)-5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐
在0℃下将亚硫酰氯(363μL,4.98mmol)逐滴添加至(5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇(453mg,1.99mmol)于DCM(8.5mL)中的溶液中。
在0℃下将混合物搅拌2小时，接着在室温下搅拌1小时。在减压下浓缩至干燥产生了呈棕色油状的标题化合物(494mg,1.7mmol,87％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 271(M+H)+,RT 1.14分钟。
步骤D：2-(叠氮基甲基)-5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶
将2-(氯甲基)-5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶盐酸盐(494mg,1.73mmol)和DIPEA(1.9mL,11mmol)于DMF(8.0mL)中的溶液用叠氮化钠(176mg,2.71mmol)处理。将混合物加热至60℃，并且搅拌2.5小时。使混合物冷却至室温，用水(10mL)和盐水(10mL)稀释。依次用TBME(3×20mL)和EtOAc(3×20mL)进行萃取。将合并的有机层用盐水(4×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩以产生呈棕色油状的标题化合物(383mg,1.5mmol,89％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 242(M+H)+,RT 1.12分钟。
步骤E：(5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
将2-(叠氮基甲基)-5-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶(383.5mg,1.54mmol)、三苯基膦(486mg,1.85mmol)溶解于THF(8.0mL)和水(0.90mL)中。在室温下将混合物搅拌过夜，随后在真空中移除溶剂。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(150mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(100mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈棕色油状的标题化合物(336mg,1.4mmol,91％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 216(M+H)+,RT 0.82分钟。
合成38
(3R,4R)-4-(((7-(((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-038)
Figure BDA0003693597550001991
步骤1：5-氯-N-((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(125mg,0.333mmol)添加至5,7-二氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(60.1mg,0.278mmol)和DIPEA(291μL,1.67mmol)于EtOH(1.1mL)中的溶液中。在80℃下将反应混合物加热3小时，接着在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈浅米色固体状的标题化合物(103.6mg,0.23mmol,82％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 435(M+H)+,RT 1.67分钟
步骤2：(5-氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(60.8mg,279μmol)添加至5-氯-N-((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(103mg,232μmol)和DMAP(5.6mg,46.4μmol)于THF(4.6mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物搅拌2.5小时。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物分配于DCM(20mL)与水(30mL)之间。将水层用DCM(2×30mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈橙色油状的标题化合物(116mg,0.20mmol,88％产率，94％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 535(M+H)+,RT 2.01分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(115mg,202μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(60.5mg,263μmol)和tBuBrettPhos Pd G3((25.9mg,30.3μmol)于THF(2.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.26mL,263μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2小时。将反应用水(50mL)淬灭，并且用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈米色固体状的标题化合物(53mg,71μmol,35％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 729(M+H)+,RT 1.84分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-(((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.40mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(53mg,73μmol)于DCM(1.6mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌过夜，接着在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈米色固体状的标题化合物(30mg,54μmol,75％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 529(M+H)+,RT 1.34分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),7.78(s,1H),7.76(t,J＝6.4Hz,1H),7.66(s,1H),7.46(s,1H),6.74(t,J＝5.7Hz,1H),5.53–5.40(m,1H),5.24(s,1H),4.59(d,J＝6.0Hz,2H),3.60–3.48(m,1H),3.22–3.12(m,1H),3.10–2.97(m,1H),2.92(dd,J＝4.5,11.7Hz,1H),2.84–2.76(m,1H),2.48–2.44(m,2H),2.39–2.28(m,1H),2.24–2.13(m,1H),2.04–1.96(m,1H),1.62–1.50(m,1H),1.38–1.28(m,1H),1.18(t,J＝7.5Hz,3H),1.25–1.12(m,1H),0.98–0.89(m,2H),0.78–0.67(m,2H)。1H在水下。
合成39
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-039)
Figure BDA0003693597550002011
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(60mg,0.26mmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(50mg,0.22mmol)和DIPEA(0.19mL 1.1mmol)于EtOH(1.0mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物加热1小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％(0.7M NH3/MeOH)/DCM)进行的纯化产生了呈米色固体状的标题化合物(90mg,0.20mmol,93％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 421(M+H)+,RT 1.59分钟。
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(70mg,0.32mmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(90mg,0.21mmol)和DMAP(1.4mg,43μmol)于THF(2.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌16小时，接着在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％(0.7M NH3/MeOH)/DCM)进行的纯化产生了呈黄色泡沫状的标题化合物(105mg,0.19mmol,90％产率，95％纯度)。
1H NMR(在DMSO-d6中)与产物结构一致。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,192μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(53mg,230μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(24.6mg,28.8μmol)于THF(1.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(230μL,230μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2小时。将反应混合物在减压下浓缩。
通过柱色谱法(4g柱筒，0-10％(0.7M NH3/MeOH)/DCM)进行纯化，接着通过柱色谱法(4g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷，接着0-5％(0.7M NH3/MeOH)/DCM)进行进一步纯化，产生了呈棕色固体状的标题化合物(140mg,0.18mmol,92％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 715(M+H)+,RT 1.79分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.2mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(77mg,0.11mmol)于DCM(0.80mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌16小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(20mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(20mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈灰白色固体状的标题化合物(30mg,57μmol,52％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 515(M+H)+,RT 1.27分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.90(s,1H),7.88(s,1H),7.64(t,J＝6.0Hz,1H),7.51(s,1H),7.10(s,1H),6.71(t,J＝5.8Hz,1H),5.31–5.27(m,2H),4.63(d,J＝5.9Hz,2H),3.56-3.45(m,1H),3.25–3.16(m,1H),3.08–2.97(m,1H),2.90(dd,J＝11.5,4.5Hz,1H),2.81–2.73(m,1H),2.65(s,3H),2.34–2.24(m,1H),2.15(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.77–1.67(m,1H),1.59–1.50(m,1H),1.38-1.27(m,1H),1.20–1.11(m,1H),0.80-0.72(m,2H),0.70–0.59(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A16
(5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550002041
步骤A：6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将Cs2CO3(2.50g,7.63mmol)于水(3.0mL)中的溶液添加至6-氯-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺(500mg,2.54mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(1.4mL,10.2mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(208mg,254μmol)于1,4-二噁烷(7.0mL)中的溶液中。持续10分钟将N2鼓泡通过反应混合物，接着在100℃下将反应混合物加热1小时。将混合物在真空中浓缩。通过柱(24g柱筒，0-10％(0.7MNH3/MeOH)/DCM)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(352mg,1.8mmol,69％,88％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 177(M+H)+,RT 1.06分钟。
步骤B：2-((5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮
在微波照射下在80℃下将含6-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺(238mg,1.28mmol)和2-(3-溴-2-氧代丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(471mg,1.67mmol)的乙醇(6.4mL)加热2小时。使混合物冷却至0℃，添加MeOH(3.0mL)，并且通过过滤收集固体，用MeOH(2×1.0mL)冲洗以产生呈白色固体状的标题化合物(301mg,0.82mmol,64％产率，98％纯度)。
1H NMR(在DMSO-d6中)与产物结构一致。
步骤C：(5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
将水合肼(78μL,1.61mmol)添加至2-((5-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(381mg,1.01mmol)于EtOH(4.0mL)中的悬浮液中。在65℃下将悬浮液搅拌1小时。在室温下，过滤悬浮液，并且将固体用IPA(5.0mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(10mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(10mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(128mg,0.53mmol,53％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 230(M+H)+,RT 0.93分钟。
合成40
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-040)
Figure BDA0003693597550002051
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(80mg,0.35mmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(72mg,0.31mmol)和DIPEA(0.36mL,2.1mmol)于EtOH(10mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物加热5小时。将反应混合物在真空中浓缩以产生呈黄色固体状的标题化合物(65mg,0.15mmol,43％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 421(M+H)+,RT 1.61分钟
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(51mg,0.23mmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(65mg,0.15mmol)和DMAP(1.9mg,15.0μmol)于THF(5.0mL)中的溶液中。在35℃下将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈米色固体状的标题化合物(70mg,0.13mmol,83％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 521(M+H)+,RT 1.92分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(70mg,0.13mmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(37mg,0.16mmol)和tBuBrettPhos Pd G3(11mg,13μmol)于THF(2.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(0.17mL,0.17mmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续18小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(4g柱筒，0-10％(0.7M NH3/MeOH)/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(65mg,86μmol,64％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 715(M+H)+,RT 1.79分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.20mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(46mg,64μmol)于DCM(0.80mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌16小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(20mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(20mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈黄色固体状的标题化合物(24mg,46μmol,71％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 515(M+H)+,RT 1.28分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),7.93(s,1H),7.88(s,1H),7.70(t,J＝6.2Hz,1H),7.52(s,1H),6.71(t,J＝6.4Hz,1H),5.31(s,1H),5.24(s,1H),4.59(d,J＝6.0Hz,2H),3.56-3.44(m,1H),3.24–3.15(m,1H),3.08–2.97(m,1H),2.90(dd,J＝11.6,4.5Hz,1H),2.81–2.73(m,1H),2.36–2.23(m,4H),2.15(dd,J＝11.6,9.9Hz,1H),1.76–1.65(m,1H),1.59–1.50(m,1H),1.37-1.26(m,1H),1.19–1.11(m,1H),0.80–0.73(m,2H),0.70–0.59(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A17
(5-甲基-6-(三氟甲基)-3aH-吲哚-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550002071
步骤A：5-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将磷酸三钾(2.64g,12.45mmol)于水(3.0mL)中的溶液添加至5-溴-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺(1.00g,4.15mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(1.03g,8.30mmol)和(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]甲烷磺酸钯(II)(291mg,332μmol)于二噁烷(30mL)中的溶液中。持续10分钟将N2鼓泡通过反应混合物，接着在60℃下将反应混合物加热4小时。将混合物在真空中浓缩。通过柱(80g柱筒，0-10％(0.7M NH3/MeOH)/DCM)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(800mg,3.9mmol,93％产率，85％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 177(M+H)+,RT 1.05分钟。
步骤B：6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯
在80℃下将含5-甲基-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺(800mg,4.54mmol)、3-溴-2-氧代丙酸乙酯(1.1mL,9.08mmol)和碳酸氢钠(382mg,4.54mmol)的乙醇(20mL)加热过夜。将反应在真空下浓缩。通过柱(40g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色胶状的标题化合物(535mg,1.7mmol,37％产率，85％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 273(M+H)+,RT 1.22分钟。
步骤C：(6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇
在-40℃下将二异丁基氢化铝(1M，于己烷中)(4.0mL,4.03mmol)添加至6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸乙酯(530mg,1.75mmol)于THF(10mL)中的溶液中。在2小时的时期内使反应混合物升温至0℃，并且在这个温度下搅拌2小时。在0℃下，添加MeOH(10mL)，随后添加水(10mL)和1M HCl水溶液(10mL)。将混合物剧烈搅拌20分钟，并且用乙酸乙酯(3×35mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，穿过相分离器，并且在真空中浓缩。通过柱(24g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(200mg,0.83mmol,48％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 231(M+H)+,RT 0.94分钟。
步骤D：2-(氯甲基)-6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶
在室温下将亚硫酰氯(317μL,4.34mmol)逐滴添加至(6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲醇(200mg,869μmol)于DCE(5.0mL)中的溶液中。在45℃下将混合物搅拌2小时，接着在减压下浓缩至干燥以产生呈黄色油状的标题化合物(215mg,0.80mmol,92％产率，92％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 249(M+H)+,RT 1.24分钟。
步骤E：2-(叠氮基甲基)-6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶
将2-(氯甲基)-6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶(215mg,865μmol)和DIPEA(452μL,2.59mmol)于DMF(5.0mL)中的溶液用叠氮化钠(84mg,1.30mmol)处理。将混合物加热至60℃，并且搅拌6小时。使混合物冷却至室温，用水(100mL)稀释。用TBME(3×25mL)进行萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，并且在减压下浓缩。通过色谱法(12g柱筒，0-100％TBME/异己烷)进行的纯化产生了呈棕色油状的标题化合物(200mg,0.76mmol,88％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 256(M+H)+,RT 1.26分钟。
步骤F：(5-甲基-6-(三氟甲基)-3aH-吲哚-2-基)甲胺
将2-(叠氮基甲基)-6-甲基-7-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶(200mg,784μmol)、三苯基膦(247mg,940μmol)溶解于THF(4.5mL)和水(0.50mL)中。在室温下将混合物搅拌20小时，随后在真空中移除溶剂。
将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(150mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(100mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(170mg,0.73mmol,93％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 230(M+H)+,RT 0.94分钟。
合成41
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-041)
Figure BDA0003693597550002101
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(92.0mg,448μmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(102mg,448μmol)和DIPEA(547μL,3.14mmol)于EtOH(4.0mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物加热72小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(115mg,0.28mmol,63％产率，97％纯度)。
1H NMR与产物结构一致。
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(74mg,337μmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(115mg,281μmol)和DMAP(6.9mg,56.2μmol)于THF(3.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩。
通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈绿色油状的标题化合物(139mg,0.25mmol,88％产率，88％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 497(M+H)+,RT 1.85分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(115mg,231μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(64mg,278μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(19.8mg,23.1μmol)于THF(2.5mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(301μL,1体积摩尔浓度，301μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续3小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行纯化，继之以在RP快速C18(24g柱筒，20-80％MeCN/10mM碳酸氢铵)上进一步纯化，产生了呈白色固体状的标题化合物(120mg,0.16mmol,68％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 692(M+H)+,RT 1.75分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.50mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(120mg,174μmol)于DCM(2.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌16小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从MeCN湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈灰白色固体状的标题化合物(38mg,77μmol,45％产率，100％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 492(M+H)+,RT 1.23分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(t,J＝6.1Hz,1H),7.53(s,1H),7.51(s,1H).,7.26(dd,J＝9.0,7.5Hz,1H),7.11(d,J＝8.9Hz,1H),6.75(t,J＝6.0Hz,1H),6.37(d,J＝7.5Hz,1H),5.33-5.27(m,2H),4.92(hept,J＝6.1Hz,1H),4.53(d,J＝6.0Hz,2H),3.56-3.46(m,1H),3.25–3.18(m,1H),3.08–2.97(m,1H),2.91(dd,J＝11.6,4.5Hz,1H),2.81–2.73(m,1H),2.36–2.23(m,1H),2.16(dd,J＝11.5,9.9Hz,1H),1.76–1.66(m,1H),1.60–1.52(m,1H),1.39(d,J＝6.0Hz,6H),1.36–1.27(m,1H),1.21–1.06(m,1H),0.80-0.71(m,2H),0.71–0.59(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A18
(5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550002121
步骤A：6-异丙氧基吡啶-2-胺
在微波照射下在150℃下将6-氟吡啶-2-胺(500mg,4.46mmol)、氢氧化钠(446mg,11.1mmol)和IPA(3.4mL,44mmol)加热5分钟。将混合物用水(100mL)稀释，并且用DCM(3×30mL)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩以产生呈无色油状的标题化合物(510mg,3.2mmol,71％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 153(M+H)+,RT 0.80分钟。
步骤B：2-((5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮
在微波照射下在80℃下将含6-异丙氧基吡啶-2-胺(300mg,1.97mmol)、2-(3-溴-2-氧代丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(556mg,1.97mmol)、碳酸氢钠(166mg,1.97mmol)的乙醇(10mL)加热1小时。
将混合物用水(100mL)稀释，并且将水溶液用DCM(3×30mL)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈灰白色固体状的标题化合物(150mg,0.42mmol,21％产率，94％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 336(M+H)+,RT 1.30分钟。
步骤C：(5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
在65℃下将2-((5-异丙氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(190mg,567μmol)、肼(35wt％，于水中)(178μL,1.98mmol)和乙醇(4.0mL)搅拌2小时。将反应用2N NaOH水溶液(15mL)、水(15mL)和DCM(15mL)稀释。分离各层，并且将水层用DCM(2×15mL)萃取，接着在真空中浓缩以提供呈黄色固体状的标题化合物(94mg,0.41mmol,73％产率，90％纯度)。
1H NMR(在DMSO-d6中)与产物结构一致。
合成42
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-042)
Figure BDA0003693597550002141
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(127mg,479μmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(91.0mg,399μmol)和DIPEA(417μl,2.39mmol)于EtOH(1.6mL)中的溶液中。在60℃下将反应混合物加热过夜。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈灰白色固体状的标题化合物(170mg,0.37mmol,92％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 447(M+H)+,RT 1.63分钟。
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(124mg,568μmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(170mg,369μmol)和DMAP(9.3mg,75.9μmol)于THF(7.5mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物搅拌1小时。
将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物分配于DCM(15mL)与水(30mL)之间。将水层用DCM(2×30mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经相分离器过滤并在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(193mg,0.33mmol,90％产率，94％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 547(M+H)+,RT 1.98分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(192mg,330μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(91mg,396μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(28.2mg,33.0μmol)于THF(3.3mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(396μL,396μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续1小时。将反应用水(50mL)淬灭，并且用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了固体，将其在RP快速C18(24g柱筒，30-100％MeCN/10mM碳酸氢铵)上进一步纯化以产生呈黄色固体状的标题化合物(136mg,0.18mmol,54％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 741(M+H)+,RT 1.84分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(884μL,3.54mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(135mg,177μmol)于二噁烷(2.2mL)中的悬浮液中。在35℃下将反应混合物搅拌1小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(30mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(30mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈白色固体状的标题化合物(65mg,0.12mmol,67％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 541(M+H)+,RT 1.32分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(s,1H),7.77(s,1H),7.72(t,J＝6.3Hz,1H),7.53(s,1H),7.46(s,1H),6.70(t,J＝6.1Hz,1H),5.32–5.26(m,1H),5.25(s,1H),4.59(d,J＝6.2Hz,2H),3.56–3.46(m,1H),3.25–3.15(m,1H),3.08–2.98(m,1H),2.90(dd,J＝4.5,11.7Hz,1H),2.82–2.73(m,1H),2.35–2.28(m,1H),2.21–2.09(m,1H),2.06–1.95(m,1H),1.76–1.68(m,1H),1.59–1.50(m,1H),1.37–1.26(m,1H),1.21–1.04(m,1H),0.99–0.90(m,2H),0.80–0.69(m,4H),0.71–0.58(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A19
(6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550002161
步骤A：5-环丙基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将磷酸三钾(3.96g,18.7mmol)于水(3.8mL)中的溶液添加至5-溴-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(1.50g,6.22mmol)、环丙基硼酸(1.60g,18.7mmol)、乙酸钯(II)(210mg,934μmol)和三环己基磷烷(524mg,1.87mmol)于二噁烷(15mL)中的溶液中。持续10分钟将N2鼓泡通过反应混合物，接着在100℃下将反应混合物加热，并且搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc(10mL)稀释，经硅藻土过滤，用EtOAc(100mL)冲洗。将滤液在减压下浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(50mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(50mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩。通过柱(40g柱筒，0-10％(0.7MNH3/MeOH)/DCM)进行的进一步纯化产生了呈橙色固体状的标题化合物(1.015g,4.9mmol,78％产率，97％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 203(M+H)+,RT 0.94分钟。
步骤B：2-((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮
在微波照射下在80℃下将含5-环丙基-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺(204mg,1.01mmol)和2-(3-溴-2-氧代丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(285mg,1.01mmol)的乙醇(5.0mL)加热2.5小时。添加碳酸氢钠(42mg,505μmol)，并且在微波照射下在80℃下将反应混合物加热1小时。添加2-(3-溴-2-氧代丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(85mg,303μmol)，并且在微波照射下在80℃下将反应混合物加热1小时。通过过滤收集所得固体，用水(2×3.0mL)冲洗。将湿固体溶解于DCM(10mL)中，并且将混合物经相分离器过滤。将滤液浓缩以产生呈棕色固体状的标题化合物(256mg,0.63mmol,63％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 386(M+H)+,RT 1.47分钟。
步骤C：(6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
将水合肼(50μL,1.01mmol)添加至2-((6-环丙基-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(255mg,0.629mmol)于EtOH(3.0mL)中的悬浮液中。在65℃下将悬浮液搅拌4小时。
在室温下，过滤悬浮液，并且将固体用IPA(5.0mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩。在冷(0℃)Et2O(5.0mL)中湿磨产生了呈黄色固体状的标题化合物(126mg,0.33mmol,53％产率，68％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 256(M+H)+,RT 1.01分钟。
合成43
(3R,4R)-4-(((7-(((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-043)
Figure BDA0003693597550002181
步骤1：5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
在85℃下将5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(1.0g,4.35mmol)于氢氧化铵(28％水溶液)(10ml,71.9mmol)中的混合物搅拌过夜。在室温下，通过过滤收集所得固体，用水(3×5mL)冲洗。将固体溶解于TBME(20mL)中，并且经相分离器过滤。将滤液在真空中浓缩以产生呈灰白色固体状的标题化合物(900mg,4.06mmol,93％产率，95％纯度)。
1H NMR(在DMSO-d6中)与产物结构一致。
步骤2：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(570mg,2.61mmol)添加至5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(500mg,2.37mmol)和DMAP(29mg,0.24mmol)于DCM(12mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物分配于DCM(20mL)与水(20mL)之间。将水层用DCM(2×15mL)萃取，并且将合并的有机层经相分离器过滤，接着在减压下浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(600mg,1.8mmol,77％产率，95％纯度)。
步骤3：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
在70℃下将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg,0.64mmol)、2-(氯甲基)-5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶(164mg,0.84mmol)和K2CO3(178mg,1.29mmol)于无水DMF(3.5mL)中的混合物搅拌过夜。在室温下，添加EtOAc(20mL)、水(20mL)和盐水(20mL)。分离各层，接着将水层用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。
通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(186mg,0.38mmol,58％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法6)：m/z 470(M+H)+,RT 0.80分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(96mg,200μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(52mg,220μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(17mg,28.1μmol)于THF(1.7mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(270μL,270μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2小时。在室温下，添加水(15mL)和EtOAc(25mL)。分离各层，并且将水层用EtOAc(2×15mL)萃取。将合并的有机层经相分离器过滤，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％(3:1EtOAc/EtOH)/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(92mg,140μmol,66％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 664(M+H)+,RT 1.61分钟。
步骤5：(3R,4R)-4-(((7-(((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将氯化氢(4M，于二噁烷中)(0.69mL,2.8mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((5,7-二甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(92mg,0.14mmol)于二噁烷(0.5mL)中的溶液中。在35℃下将反应混合物搅拌1小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(40mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(40mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈灰白色固体状的标题化合物(58mg,120μmol,86％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 464(M+H)+,RT 0.94分钟。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.63(s,1H),7.62–7.57(m,2H),6.84(d,J＝1.1Hz,1H),6.77–6.71(m,1H),5.37(s,1H),5.31(s,1H),4.57(d,J＝5.7Hz,2H),3.58–3.49(m,1H),3.23–3.17(m,1H),3.09–3.01(m,1H),2.98–2.90(m,2H),2.83–2.77(m,1H),2.57(s,3H),2.48(s,3H),2.36–2.29(m,1H),2.19(t,J＝10.8Hz,1H),1.60–1.54(m,1H),1.39–1.31(m,1H),1.25–1.21(m,6H),1.20–1.13(m,1H)。1H在水下。
合成44
(3R,4R)-4-(((7-(((7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-044)
Figure BDA0003693597550002211
步骤1：5-氯-N-((7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲胺(95mg,0.45mmol)添加至5,7-二氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(130mg,0.55mmol)和DIPEA(0.55mL,3.2mmol)于EtOH(4.0mL)中的溶液中。在50℃下将反应混合物加热16小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(138mg,0.29mmol,64％产率，81％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 382(M+H)+,RT 1.57分钟。
步骤2：(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(77mg,351μmol)添加至5-氯-N-((7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(138mg,293μmol)和DMAP(7.2mg,59μmol)于THF(3.0mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色油状的标题化合物(154mg,281μmol,96％产率，88％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 482(M+H)+,RT 1.87分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(154mg,281μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(71.2mg,309μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(24.0mg,28.1μmol)于THF(3.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(366μL,366μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续2小时。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(139mg,187μmol,67％产率，91％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 676(M+H)+,RT 2.23分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-(((7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将TFA(0.5mL)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(139mg,187μmol)于DCM(1.5mL)中的溶液中。在室温下将反应混合物搅拌18小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(50mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(50mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈褐色固体状的标题化合物(75mg,150μmol,80％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 476(M+H)+,RT 0.73分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(d,J＝7.1Hz,1H),7.67–7.58(m,2H),7.47(d,J＝1.8Hz,1H),6.87(dd,J＝7.1,1.9Hz,1H),6.74(t,J＝6.0Hz,1H),5.35–5.27(m,1H),5.25(s,1H),4.66(d,J＝6.2Hz,2H),3.58-3.46(m,1H),3.24–3.16(m,1H),3.09-3.00(m,1H),3.00–2.89(m,2H),2.82–2.74(m,1H),2.37–2.27(m,1H),2.17(dd,J＝11.7,9.9Hz,1H),2.13-2.05(m,1H),1.61–1.51(m,1H),1.40-1.29(m,1H),1.24(dd,J＝6.9,4.8Hz,6H),1.21-1.12(m,1H),1.11–1.02(m,2H),0.88–0.82(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A20
(7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550002231
步骤A：7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-甲酸乙酯
将7-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-甲酸乙酯(400mg,1.48mmol)、氟化铯(675mg,4.44mmol)和环丙基硼酸(382mg,4.44mmol)于二噁烷(15mL)中的混合物用N2鼓泡10分钟。添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(242mg,296μmol)，并且再持续10分钟将N2鼓泡通过反应混合物，随后在50℃下加热16小时。将混合物经硅藻土过滤，并且将滤液用水(100mL)稀释，接着用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(274mg,1.1mmol,75％产率，94％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 232(M+H)+,RT 1.00分钟。
步骤B：(7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲醇
将7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-甲酸乙酯(274mg,1.11mmol)和NaBH4(42.1mg,1.11mmol)于THF(5.0mL)中的混合物加热至50℃，并且搅拌17小时。将混合物用MeOH(5mL)淬灭，并且搅拌10分钟。添加水性饱和NH4Cl(水溶液)(5mL)，接着将混合物用饱和NaHCO3水溶液(20mL)和水(20mL)稀释。将水溶液用DCM(3×20mL)萃取，接着将合并的有机层经MgSO4干燥，并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈白色固体状的标题化合物(134mg,0.67mmol,60％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 190(M+H)+,RT 0.70分钟。
步骤C：2-(氯甲基)-7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶盐酸盐
将亚硫酰氯(129μL,1.77mmol)逐滴添加至(7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲醇(134mg,0.71mmol)于DCM(7.0mL)中的溶液中。
在0℃下将混合物搅拌2小时。在减压下浓缩至干燥产生了呈白色固体状的标题化合物(172mg,0.63mmol,90％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 208(M+H)+,RT 0.60分钟。
步骤D：2-(叠氮基甲基)-7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶
将氯化2-(氯甲基)-7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-1-鎓(174mg,641μmol)和DIPEA(335μL,1.92mmol)于DMF(3.5mL)中的溶液用叠氮化钠(63mg,962mmol)处理。将混合物加热至50℃，并且搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈无色油状的标题化合物(122mg,540μmol,84％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 215(M+H)+,RT 1.01分钟。
步骤E：(7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲胺
将2-(叠氮基甲基)-7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(122mg,569μmol)和三苯基膦(179mg,683μmol)溶解于THF(5.0mL)和水(0.6mL)中。在40℃下将混合物搅拌2小时，随后在真空中移除溶剂。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(40mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(40mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以产生呈白色固体状的标题化合物(95mg,0.45mmol,80％产率，90％纯度)。
UPLC/MS(方法4)：m/z 189(M+H)+,RT 0.71分钟。
合成45
(3R,4R)-4-(((3-环丙基-7-(((7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
(H-APPAMP-045)
Figure BDA0003693597550002261
步骤1：5-氯-3-环丙基-N-((7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺
将(7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺(371mg,332μmol)添加至5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(75mg,329μmol)和DIPEA(0.46mL,2.63mmol)于EtOH(2.7mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物加热1.5小时。再添加5,7-二氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶(25mg,110μmol)，并且在65℃下再搅拌1.5小时。将反应混合物在真空中浓缩。通过柱色谱法(24g柱筒，0-100％EtOAc/异己烷)进行的纯化产生了呈橙色胶状的标题化合物(155mg,0.36mmol,82％产率，96％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 415(M+H)+,RT 1.58分钟。
步骤2：(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯
将BOC酸酐(144mg,660μmol)添加至5-氯-3-环丙基-N-((7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(155mg,362μmol)和DMAP(11mg,90μmol)于THF(8.6mL)中的溶液中。在65℃下将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％MeOH/DCM)进行的纯化产生了呈黄色固体状的标题化合物(157mg,301μmol,82％产率，98％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 515(M+H)+,RT 1.88分钟。
步骤3：(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
将(5-氯-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)((7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(156mg,303μmol)、(3R,4R)-4-(氨基甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(91mg,394μmol)和tBuBrettPhos Pd G3(52mg,61μmol)于THF(3.0mL)中的溶液用N2脱气10分钟。在鼓泡N2下一次性添加LiHMDS(1M，于THF中)(370μL,370μmol)。停止鼓泡，并且将反应混合物加热至60℃，持续1.5小时。
在室温下，将反应混合物经硅藻土过滤，用EtOAc(15mL)冲洗。将滤液用水(10mL)稀释，分离各层，并且将水层用EtOAc(3×20mL)进一步萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并且在减压下浓缩。通过柱色谱法(12g柱筒，0-10％(0.7MNH3/MeOH)/DCM)进行纯化，继之以通过RP快速C18(12g柱筒，15-75％MeCN/10mM碳酸氢铵)进行进一步纯化，产生了呈无色油状的标题化合物(108mg,0.14mmol,48％产率，85％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 709(M+H)+,RT 1.75分钟。
步骤4：(3R,4R)-4-(((7-(((7-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-异丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)哌啶-3-醇
将HCl(4M，于二噁烷中)(0.58mL,2.31mmol)添加至(3R,4R)-4-(((7-((叔丁氧基羰基)((7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)氨基)-3-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)甲基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(109mg,154μmol)于二噁烷(1.0mL)中的溶液中。在35℃下将反应混合物搅拌2小时，并且在真空中浓缩。将残余物上样至SCX柱上。将柱用MeOH(20mL)洗涤，并且用0.7M的NH3 MeOH溶液(20mL)洗脱产物。将氨甲醇溶液在真空中浓缩以在从Et2O湿磨，并且在40℃下在真空下干燥过夜之后产生呈灰白色固体状的标题化合物(61mg,110μmol,74％产率，95％纯度)。
UPLC/MS(方法5)：m/z 509(M+H)+,RT 1.29分钟。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(dd,J＝7.2,0.9Hz,1H),7.83–7.76(m,4H),7.65(t,J＝6.2Hz,1H),7.52(s,1H),7.52–7.47(m,2H),7.43–7.38(m,1H),7.26(dd,J＝7.1,1.9Hz,1H),6.77–6.71(m,2H),5.37–5.31(m,1H),5.29(s,1H),4.58(d,J＝6.0Hz,2H),3.58–3.47(m,1H),3.24–3.16(m,1H),3.09–2.99(m,1H),2.91(dd,J＝11.6,4.5Hz,1H),2.82–2.74(m,1H),2.35–2.25(m,1H),2.16(dd,J＝11.6,10.0Hz,1H),1.78–1.68(m,1H),1.60–1.51(m,1H),1.37–1.28(m,1H),1.21–1.11(m,1H),0.81–0.72(m,2H),0.71–0.60(m,2H)。1H在水下。
中间体合成A21
(7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
Figure BDA0003693597550002281
步骤A：2-((7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮
在微波照射下在80℃下将4-苯基-2-吡啶胺(300μL,2.00mmol)、2-(3-溴-2-氧代丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(564mg,2.00mmol)和碳酸钠(212mg,2.00mmol)于乙醇(15mL)中的混合物加热2小时。再添加2-(3-溴-2-氧代丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(226mg,800μmol)和碳酸钠(85mg,800μmol)，并且在微波照射下在80℃下将反应混合物加热1小时。在0℃下，添加水(20mL)。通过过滤收集所得固体，用水(5mL)冲洗。将固体溶解于DCM(50mL)中，接着将溶液经相分离器过滤，并且将滤液在减压下浓缩以产生固体。在Et2O(5×5mL)中湿磨产生了呈绿色固体状的标题化合物(470mg,1.1mmol,53％产率，79％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 354(M+H)+,RT 0.90分钟。
步骤B：(7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲胺
将水合肼(85μL,1.7mmol)添加至2-((7-苯基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(470mg,1.05mmol)于EtOH(5.2mL)中的悬浮液中。在65℃下将悬浮液搅拌过夜。再添加水合肼(26μL,525μmol)，并且在65℃下将混合物搅拌2小时。过滤悬浮液，并且将固体用EtOH(15mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩。在冷(0℃)TBME(2×5ml)中湿磨产生了呈棕色固体状的标题化合物(371mg,0.33mmol,32％产率，20％纯度)。
UPLC/MS(方法3)：m/z 224(M+H)+,RT 0.47分钟。
生物学方法
IC50测定
材料和溶液：
-HEPES-NaOH(Sigma，H-3375)
-原钒酸钠(Sigma，S-6508)
-DTT(Sigma，D-0632)
-MgCl2(M-3634)
-MnCl2(VWR，1.05927.1000)
-PEG-20000(SERVA，33138)
-ATP(Sigma，A-7699)
-[γ-33P]-ATP(Hartmann Analytic，FF301T)
-H3PO4(VWR，1.00563.1000)
-NaCl(Merck，1.06404)
-人CDK12 wt/CycK(ProQinase，1483-1484-1–批次2)
-RBER-IRStide(ProQinase，0863-0000-1–批次036)
-96孔FlashPlatesTM(PerkinElmer，SMP200)
另外，对于CDK12测定：
-人CDK12 wt/CycK(ProQinase，1483-1484-1–批次2)
-RBER-IRStide(ProQinase，0863-0000-1–批次036)
另外，对于CDK7测定：
-人CDK7/CycH/MAT1(ProQinase，0366-0360-4–批次2)。
-RBER-CHKtide(ProQinase，0581-0000-5–批次106)。
测定程序：
放射性测量蛋白质激酶测定(
Figure BDA0003693597550002301
活性测定)用于测量两种蛋白质激酶(CDK12/CDK7)的激酶活性。所有激酶测定都在来自PerkinElmer(Boston,MA,USA)的96孔FlashPlatesTM中以50μL反应体积进行。
按以下顺序以四个步骤吸移反应混合物：
-20μL的测定缓冲液(标准缓冲液)
-5μL的ATP溶液(在H2O中)
-5μL的测试化合物(在10％DMSO中)
-10μL的底物/10μL的酶溶液(预混合)
对于CDK7测定，制备含有以下组分的反应混合物(50μL)：
-70mM HEPES-NaOH(pH 7.5)；
-原钒酸钠(3μM)；
-PEG-20000(50μg/mL)；
-DTT(1.2mM)；
-MgCl2(3mM)；
-MnCl2(3mM)；
-纯化人CDK7/CycH/MAT1(3.3nM–批次02)；
-RBER-CHKtide底物(40μg/mL–批次106)；
-ATP(3μM)；
-[γ-33P]-ATP(约8×105cpm/孔)；和
-在适当浓度下以致DMSO的最终浓度是10％w/w的测试化合物。
对于CDK7测定，制备含有以下组分的反应混合物(50μL)：
-70mM HEPES-NaOH(pH 7.5)；
-原钒酸钠(3μM)；
-PEG-20000(50μg/mL)；
-DTT(1.2mM)；
-MgCl2(3mM)；
-MnCl2(3mM)；
-纯化人CDK12 wt/CycK(14.7nM–批次02)；
-RBER-IRStide底物(40μg/mL–批次036)；
-ATP(0.3μM)；
-[γ-33P]-ATP(约8×105cpm/孔)；和
-在适当浓度下以致DMSO的最终浓度是10％w/w的测试化合物。
在30℃下将反应混合物孵育60分钟，接着通过添加2％(v/v)H3PO4来终止。对板进行抽吸，并且用200μL 0.9％(w/v)NaCl洗涤两次。用微板闪烁计数器(Microbeta,Wallac)测定33Pi的掺入。
使用Quattro Workflow V3.1.1(Quattro Research GmbH,Munich,Germany)计算每种浓度的残余活性和化合物IC50值。用于IC50测定的拟合模型是“S形响应(可变斜率)”，其中参数“上部”定为100％，并且“下部”定为0％。所用拟合方法是最小二乘拟合。
细胞培养中周期蛋白K消减的Western印迹分析
将A673细胞与1μM化合物一起在存在或不存在10μM蛋白酶体抑制剂MG132(SigmaAldrich)或NAE(NEDD8活化酶)抑制剂MLN4942(Cell Signalling Technologies)下孵育2小时。将细胞用冷磷酸盐缓冲盐水(PBS，Sigma Aldrich)洗涤2次，继之以在冰上添加溶解缓冲液，持续15分钟，随后收集和离心。
通过BCA测定(Thermo Fisher)评估细胞溶解产物中的蛋白质含量。接着用4×Laemmlli缓冲液(Bio-Rad)制备样品，并且加热至95℃，持续5分钟。将每个样品以50μg蛋白质/孔上样至Mini-PROTEAN TGX免染胶凝(Bio-Rad)上。进行SDS-PAGE，接着使用
Figure BDA0003693597550002332
TurboTM Midi PVDF转移包(Bio-Rad)将蛋白质转移至PVDF膜上。在4℃下将膜在TBS-T(Invitrogen)、5％(w/v)奶粉(Marvel)中封闭过夜。
将膜与抗CCNK抗体(兔)初级抗体(Abcam)和抗GAPDH抗体(兔)一起在TBS-T中孵育2小时。接着将膜用TBS-T洗涤三次，随后进行二级山羊抗兔HRP抗体(Cell SignallingTechnologies)孵育，继之以在TBS-T中洗涤3次。使用Chemidoc成像仪(Bio-Rad)使印迹成像。周期蛋白K消减测量为相对于蛋白酶体抑制剂处理的样品，化合物处理的样品中条带强度的可观察下降，此通过密度测定法(Image Lab)测量。
生物学数据
使用以上所述的生物学方法评估H-APPAMP化合物。
出于比较目的，还评估了以下参考化合物。
Figure BDA0003693597550002331
Figure BDA0003693597550002341
所得数据概述于下表中。CDK7/CDK12的比率大于1指示对CDK12具有选择性。
Figure BDA0003693597550002342
Figure BDA0003693597550002351
数据证明H-APPAMP化合物是CDK12的高度强力抑制剂，并且此外，相较于对于CDK7，一些H-APPAMP化合物还对于CDK12具有实质性的选择性。
许多化合物的特征还在于不仅能够抑制CDK12，而且还能够导致周期蛋白K降解。如上所述在A673细胞中评估周期蛋白K降解。数据概述于下表中。对于THZ-531报告的值源于HeLa和A549细胞中的公开数据；参见例如Zhang等人,2016；
Figure BDA0003693597550002352
等人,2020；Lu Lv等人,2020。
Figure BDA0003693597550002361
图例：
(-)：无周期蛋白K降解。
(+)：弱周期蛋白K降解。
(++)：中度周期蛋白K降解。
(+++)：强周期蛋白K降解。
数据证明当A673细胞中的细胞效能大于生物化学效能时，那么这与周期蛋白K降解相关联。已知的CDK12/13抑制剂化合物诸如迪那昔利布和THZ-531尽管在CDK12生物化学测定中是强力的，但不是周期蛋白K降解剂。
下表概述许多例示化合物的数据。当生物化学效能与细胞效能的比率>0.9时，这是化合物能够达成周期蛋白K降解的指示。
Figure BDA0003693597550002371
Figure BDA0003693597550002381
前述内容已描述本发明的原理、优选实施方案和操作模式。然而，本发明不应解释为限于所讨论的特定实施方案。相反，上述实施方案应被视为是说明性的而非限制性的。应了解，可由本领域中熟练的工作人员在不脱离本发明的范围的情况下在那些实施方案中进行变化。
参考文献
本文引用许多出版物以更充分描述和公开本发明以及本发明所属领域的状态。以下提供这些参考文献的完整引用。
这些参考文献中的每一者在本文中通过引用以它的整体并入至本公开中，所述引用的程度就好像已具体地和单独地指出将每个单独的参考文献通过引用并入一样。
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Claims (64)

1.下式化合物：
Figure FDA0003693597540000011
或其药学上可接受的盐或溶剂化物；
其中：
-R7是具有正好1、2或3个环杂原子的稠合双环C8-10杂芳基，其中每个环杂原子是N、S或O；
并且其中-R7：
在碳上被一个或多个基团-RSC任选地取代；并且
在如果存在的仲氮上被基团-RSN任选地取代；
其中：
每个-RSC独立地是：
-RTT，
-F、-Cl、-Br、-I，
-OH、-ORTT，
-LT-OH、-LT-ORTT，
-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2，
-NH2、-NHRTT、-NRTT 2、-RTM，
-LT-NH2、-LT-NHRTT、-LT-NRTT 2、-LT-RTM，
-C(＝O)OH、-C(＝O)ORTT，
-OC(＝O)RTT，
-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHRTT、-C(＝O)NRTT 2、-C(＝O)RTM，
-NHC(＝O)RTT、-NRTNC(＝O)RTT，
-NHC(＝O)NH2、-NHC(＝O)NHRTT、-NHC(＝O)NRTT 2、-NHC(＝O)RTM，
-NRTNC(＝O)NH2、-NRTNC(＝O)NHRTT、-NRTNC(＝O)NRTT 2、-NRTNC(＝O)RTM，
-NHC(＝O)ORTT、-NRTNC(＝O)ORTT，
-OC(＝O)NH2、-OC(＝O)NHRTT、-OC(＝O)NRTT 2、-OC(＝O)RTM，
-C(＝O)RTT，
-SRTT、-S(＝O)RTT、-S(＝O)2RTT，
-S(＝O)NH2、-S(＝O)NHRTT、-S(＝O)NRTT 2、-S(＝O)RTM，
-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NHRTT、-S(＝O)2NRTT 2、-S(＝O)2RTM，
-NHS(＝O)2RTT、-NRTNS(＝O)2RTT，
-CN或-NO2；
每个-RSN独立地是：
-RTT，
-LT-OH、-LT-ORTT，
-LT-NH2、-LT-NHRTT、-LT-NRTT 2、-LT-RTM，
-C(＝O)RTT，
-C(＝O)ORTT，
-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHRTT、-C(＝O)NRTT 2、-C(＝O)RTM，或
-S(＝O)2RTT；
其中：
每个-LT-独立地是直链或支链饱和C1-4亚烷基；
每个-RTT独立地是-RTT1、-RTT2、-LTT-RTT2、-RTT3或-LTT-RTT3；
每个-RTT1独立地是直链或支链饱和C1-6烷基，并且被一个或多个选自-F、-OH和-ORTTT的基团任选地取代；
每个-RTT2是饱和C3-6环烷基，并且被一个或多个选自-F、-RTTT、-OH和-ORTTT的基团任选地取代；
每个-RTT3独立地是苯基或萘基，并且被一个或多个选自-F、-Cl、-Br、-I、-RTTT、OH、-ORTTT、-OCF3、-NH2、-NHRTTT和-NRTTT 2的基团任选地取代；
每个-LTT-独立地是直链或支链饱和C1-4亚烷基；
每个-RTN是直链或支链饱和C1-4烷基、苯基或苯甲基；
每个-RTM独立地是氮杂环丁烷子基、吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、吗啉代基、氮杂环庚烷子基或二氮杂环庚烷子基，并且：
在碳上被一个或多个选自以下的基团任选地取代：-RTMM、-C(＝O)RTMM、-S(＝O)2RTMM、-F、-NH2、-NHRTMM、-NRTMM 2、-OH和-ORTMM；并且
在如果存在的仲氮上被选自以下的基团任选地取代：-RTMM、-C(＝O)RTMM、-C(＝O)ORTMM和-S(＝O)2RTMM；
每个-RTTT独立地是直链或支链饱和C1-4烷基、苯基或苯甲基；并且
每个-RTMM独立地是直链或支链饱和C1-4烷基、苯基或苯甲基；
并且其中：
-L7-独立地是直链或支链饱和C1-3亚烷基，并且被一个或多个选自-F、-OH和-OMe的基团任选地取代；
-R3独立地是-R3A或-R3B；
-R3A独立地是直链或支链饱和C1-6烷基，并且被一个或多个选自-F、-OH和-OMe的基团任选地取代；并且
-R3B独立地是饱和C3-7环烷基，并且被一个或多个选自-F、-OH和-OMe的基团任选地取代。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中-R7是具有正好1、2或3个环杂原子的稠合双环C9-10杂芳基，其中每个环杂原子是N。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中-R7是具有正好1、2或3个环杂原子的稠合双环C9杂芳基，其中每个环杂原子是N。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中-R7独立地是：咪唑并[1,2-a]吡啶基；咪唑并[1,2-a]嘧啶基；苯并咪唑基；咪唑并[1,2-b]哒嗪基；或[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中-R7是咪唑并[1,2-a]吡啶基。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中-R7独立地是：2-咪唑并[1,2-a]吡啶基；或3-咪唑并[1,2-a]吡啶基。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中-R7是2-咪唑并[1,2-a]吡啶基。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中-R7是咪唑并[1,2-a]嘧啶基。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中-R7是2-咪唑并[1,2-a]嘧啶基。
10.根据权利要求1所述的化合物，其中-R7是苯并呋喃基。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中-R7是咪唑并[2,1-b]噻唑基。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中-R7是喹啉基。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSC独立地是：
-RTT，
-F、-Cl、-Br、-I，
-OH、-ORTT，
-LT-OH、-LT-ORTT，
-CF3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2，
-NH2、-NHRTT、-NRTT 2、-RTM，
-LT-NH2、-LT-NHRTT、-LT-NRTT 2、-LT-RTM，
-C(＝O)OH、-C(＝O)ORTT，
-OC(＝O)RTT，
-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHRTT、-C(＝O)NRTT 2、-C(＝O)RTM，
-NHC(＝O)RTT，
-C(＝O)RTT，
-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NHRTT、-S(＝O)2NRTT 2、-S(＝O)2RTM，
-NHS(＝O)2RTT，
-CN或-NO2。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSC独立地是：
-RTT，
-F、-Cl、-Br、-I，
-OH、-ORTT，
-CF3、-CHF2、-OCF3或-OCHF2。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSN独立地是：
-RTT，
-C(＝O)RTT，或
-C(＝O)ORTT。
16.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RSN是-RTT。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-LT-是-CH2-。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT是-RTT1。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT1独立地是-Me、-Et、-nPr、-iPr、-nBu、-sBu、-iBu或-tBu。
20.根据权利要求1至18中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT1是-Me。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT2独立地是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
22.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT2是环丙基。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTT3是苯基，并且被一个或多个选自-F、-Cl、-Br、-I、-RTTT、OH、-ORTTT和-OCF3的基团任选地取代。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-LTT-独立地是-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTN是-Me。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTM独立地是吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基或吗啉代基，并且：
在碳上被一个或多个选自-RTMM的基团任选地取代；并且
在如果存在的仲氮上被选自-RTMM、-C(＝O)RTMM和-C(＝O)ORTMM的基团任选地取代。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTTT是-Me。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么每个-RTMM是-Me。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的化合物，其中-L7-独立地是-CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-或-CH(CH2CH3)-。
30.根据权利要求1至28中任一项所述的化合物，其中-L7-是-CH2-。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的化合物，其中-R3是-R3A。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的化合物，其中-R3是-R3B。
33.根据权利要求1至32中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么-R3A独立地是-Me、-Et、-nPr或-iPr。
34.根据权利要求1至32中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么-R3A是-iPr。
35.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么-R3B独立地是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
36.根据权利要求1至34中任一项所述的化合物，其中如果存在，那么-R3B独立地是环丙基或环丁基。
37.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自下式化合物及其药学上可接受的盐、水合物和溶剂化物：
H-APPAMP-001至H-APPAMP-045。
38.组合物，所述组合物包含权利要求1至37中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
39.制备组合物的方法，所述方法包括混合权利要求1至37中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的步骤。
40.在体外或在体内抑制细胞中的周期蛋白依赖性蛋白质激酶(CDK)(例如CDK12和/或CDK13)功能的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的权利要求1至37中任一项所述的化合物接触。
41.在体外或在体内调控(例如抑制)细胞增殖(例如细胞的增殖)，抑制细胞周期进展，促进凋亡，或达成这些中的一者或多者的组合的方法，所述方法包括使细胞与有效量的权利要求1至37中任一项所述的化合物接触。
42.用于通过疗法治疗人体或动物体的方法中的权利要求1至37中任一项所述的化合物。
43.用于治疗病症的方法中的权利要求1至37中任一项所述的化合物。
44.权利要求1至37中任一项所述的化合物在制造用于治疗病症的方法中的药物中的用途。
45.治疗病症的方法，所述方法包括向需要治疗的个体施用治疗有效量的权利要求1至37中任一项所述的化合物。
46.根据权利要求43所述使用的化合物、根据权利要求44所述的用途、或根据权利要求45所述的方法，
其中所述病症是：与周期蛋白依赖性蛋白质激酶(CDK)(例如CDK12和/或CDK13)相关的病症；由CDK(例如CDK12和/或CDK13)的不当活性所致的病症；与CDK(例如CDK12和/或CDK13)突变相关的病症；与CDK(例如CDK12和/或CDK13)过度表达相关的病症；与CDK(例如CDK12和/或CDK13)的上游通路活化相关的病症；或通过抑制CDK(例如CDK12和/或CDK13)而得到改善的病症。
47.根据权利要求43所述使用的化合物、根据权利要求44所述的用途、或根据权利要求45所述的方法，
其中所述病症是：增生性病症；癌症；病毒性感染(例如HIV)；神经变性病症(例如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病)；缺血；肾病；心血管病症(例如动脉粥样硬化)；自身免疫性病症(例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、牛皮癣、舍格伦氏综合征)；或由细胞中翻译功能异常引起的病症(例如肌营养不良、强直性肌营养不良、肌萎缩性侧索硬化、脊髓性肌萎缩、脆性X染色体综合征)。
48.根据权利要求43所述使用的化合物、根据权利要求44所述的用途、或根据权利要求45所述的方法，
其中所述病症是：增生性病症。
49.根据权利要求43所述使用的化合物、根据权利要求44所述的用途、或根据权利要求45所述的方法，
其中所述病症是：癌症。
50.根据权利要求43和47至49中任一项所述使用的化合物、根据权利要求44和47至49中任一项所述的用途、或根据权利要求45至49中任一项所述的方法，
其中所述治疗还包括用为芳香酶抑制剂的其他活性剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。
51.根据权利要求50所述使用的化合物、根据权利要求50所述的用途、或根据权利要求50所述的方法，
其中所述芳香酶抑制剂是依西美坦(也被称为阿诺新)、来曲唑(也被称为弗隆)或阿那曲唑(也被称为瑞宁得)。
52.根据权利要求50或51所述使用的化合物、根据50或51所述的用途、或根据权利要求50或51所述的方法，
其中所述病症是乳腺癌(例如对所述芳香酶抑制剂耐药的乳腺癌)。
53.根据权利要求43和47至49中任一项所述使用的化合物、根据权利要求44和47至49中任一项所述的用途、或根据权利要求45至49中任一项所述的方法，
其中所述治疗还包括用为抗雌激素剂的其他活性剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。
54.根据权利要求53所述使用的化合物、根据权利要求53所述的用途、或根据权利要求53所述的方法，
其中所述抗雌激素剂是芙仕得(也被称为氟维司群和ICI182780)、他莫昔芬(也被称为诺瓦得士)或羟基他莫昔芬。
55.根据权利要求53或54所述使用的化合物、根据53或54所述的用途、或根据53或54所述的方法，
其中所述病症是乳腺癌(例如对所述抗雌激素剂耐药的乳腺癌)。
56.根据权利要求43和47至49中任一项所述使用的化合物、根据权利要求44和47至49中任一项所述的用途、或根据权利要求45至49中任一项所述的方法，
其中所述治疗还包括用为抗雄激素剂的其他活性剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。
57.根据权利要求56所述使用的化合物、根据56所述的用途、或根据56所述的方法，
其中所述抗雄激素剂是氟他胺、恩杂鲁胺、阿帕鲁胺、比卡鲁胺或尼鲁米特。
58.根据权利要求43和47至49中任一项所述使用的化合物、根据权利要求44和47至49中任一项所述的用途、或根据权利要求45至49中任一项所述的方法，
其中所述治疗还包括用为Her2阻断剂的其他活性剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。
59.根据权利要求58所述使用的化合物、根据权利要求58所述的用途、或根据权利要求58所述的方法，
其中所述Her2阻断剂是赫赛汀、帕妥珠单抗或拉帕替尼。
60.根据权利要求43和47至49中任一项所述使用的化合物、根据权利要求44和47至49中任一项所述的用途、或根据权利要求45至49中任一项所述的方法，
其中所述治疗还包括用其他细胞毒性化学治疗剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。
61.根据权利要求60所述使用的化合物、根据权利要求60所述的用途、或根据权利要求60所述的方法，
其中所述细胞毒性化学治疗剂是紫杉烷(例如紫杉醇，也被称为泰素；多西他赛，也被称为泰索帝)、环磷酰胺或抗代谢物(例如卡铂、卡培他滨、吉西他滨、多柔比星、表柔比星、5-氟尿嘧啶等)。
62.根据权利要求43和47至49中任一项所述使用的化合物、根据权利要求44和47至49中任一项所述的用途、或根据权利要求45至49中任一项所述的方法，
其中所述治疗还包括用刺激免疫系统的药剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。
63.根据权利要求43和47至49中任一项所述使用的化合物、根据权利要求44和47至49中任一项所述的用途、或根据权利要求45至49中任一项所述的方法，
其中所述治疗还包括用检查点抑制剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。
64.根据权利要求43和47至49中任一项所述使用的化合物、根据权利要求44和47至49中任一项所述的用途、或根据权利要求45至49中任一项所述的方法，
其中所述治疗还包括用DNA修复抑制剂进行治疗(例如同时或依序治疗)。
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