CN114920804A - 一种可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，a）、通过固相合成法在树脂载体上依次偶联得到端氨基游离的九肽树脂；b）、往步骤a）制得的九肽树脂中加入溶解后的Ac‑D‑2‑Nal‑OAt/OSu/OBt，滴加催化剂，偶联得到全保护十肽树脂；c）、裂解、沉淀、洗涤干燥得到西曲瑞克粗品。本发明采用自制的Ac‑D‑2‑Nal‑OAt/OSu/OBt为最后一位氨基酸的原料有效避免了反应过程消旋杂质的产生，且末端氨基不再需要使用乙酸酐、冰醋酸等试剂进行乙酰化修饰，同步避免了毒性杂质[D‑Cit(Ac)]‑西曲瑞克的产生；本发明在3.4mmol规模的小试过程中粗品纯度达93%以上，经放大至100mmol规模时，纯度仍达93％以上，工艺放大过程中相对稳定，可直接应用于工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于多肽药物制备技术领域，具体涉及一种一种可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺。
背景技术
西曲瑞克(商品名cetrotide)是一种有效的黄体酮释放激素抑制素(lh-rh)受体拮抗剂，它能控制卵巢的刺激作用，预防不成熟卵泡过早排出，帮助受孕。并可用于治疗乳腺癌和妇科癌，子宫内膜异位症，性早熟，子宫肌瘤，卵巢雄激素过多和经前综合症。
西曲瑞克肽序列：Ac-D-2-Nal-D-Phe(4-Cl)-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D- Ala-NH2，结构式如下：
目前国内外关于西曲瑞克制备的报道很多，除个别方法外，大部分的合成工艺均未能有效避免毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的产生或末端氨基酸Ac-D-2-Nal-OH偶联过程中消旋杂质的产生，这些工艺若直接用于中试放大，则可行性有待验证。
专利CN101284863B公开的方法是以linker-MBHA-Resin为起始物料，依次偶联Fmoc-氨基酸，脱除末端Fmoc保护基后进行乙酰化修饰，然后裂解得到西曲瑞克；而专利CN112159461A则在末端乙酰化过程中选用低投料比的冰醋酸为原料。该类方法均需对整条肽链进行乙酰化封闭，将导致D-Cit侧链的胍基发生乙酰化，从而产生毒性杂质[D- Cit(Ac)]-西曲瑞克，在5mmol以下规模的合成过程，杂质占比均可＜5％，但当合成规模放大至100mmol以上时，杂质占比已高达20％以上。
另外，专利CN101863960A以Boc-氨基酸为原料完成固相合成的方法，除难以避免[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克杂质的产生外，在脱Boc保护基时，低浓度的TFA/DCM溶液极易使部分肽树脂断裂，导致低收率，其部分脱保护使用H2/Pd的还原反应，除反应时间过长外，金属pd的后处理也存在一定的难度，对设备要求较高，工艺放大后大量H2的使用也存在一定危险性。
专利CN104892732A的固相合成中，末端氨基酸采用Ac-D-2-Nal-OH为原料，则免去乙酰化修饰的步骤，虽然其有效的避免了杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的产生，但该方法在5mmol以下的小试过程中即发现产生大量的消旋杂质，即使将反应温度控制在5℃～10℃，仍存在大量的消旋化杂质，后续纯化难度极大，且收率同样不高。
专利CN104086632A公开了一种使用Fmoc-D-Orn(Dde)-OH代替侧基无保护的Fmoc-D-Cit-OH的固相合成法，完成固相合成及乙酰化修饰后再脱除Dde保护基，使用异氰酸叔丁酯将氨基修饰成胍基，此合成方法可以控制毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克含量在0.1％以下，也是目前仅有的几种可直接用于中试放大的合成工艺之一。另外也有报道一些通过液相合成两个五肽片段再对接偶联得到西曲瑞克的方法，也较容易完成工艺放大，但相对于传统的固相合成，反应步骤均较繁琐。
发明内容
本发明的发明目的是：避免毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的产生及原料Ac-D-2- Nal-OH偶联过程中发生的消旋反应，为西曲瑞克的工业化生产提供一种新的参考思路。
本发明的反应机理：从下可看出，羧基组分与DIC首先生成活泼中间体，其活性很高，可与氨基组分直接发生氨解反应生产肽键产物，此为路径一。如果有过量的羧基组分存在，活泼中间体还可以与另一分子的羧基反应生产对称酸酐，后者很容易与氨基组分反应生成产物肽，此为路径二。如果在缩合试剂中加入HoAt/Hosu/HoBt，活泼中间体还可衍生成-OAt/-OSu/-OBt型活泼酯，后者经氨基组分氨解也生成产物肽，此为路径三。
在上述三种路径中，第一种路径的活泼中间体成分容易部分被攫取一个质子，质子再通过SN1机理重新亲核进攻的过程中发生外消旋反应，此为多肽合成过程产生消旋杂质的反应机理，但通过路径二、三形成的酰胺键并不存在发生外消旋反应。
固相合成过程中，Ac-D-2-Nal-OH可能在氨基端缺少Fmoc或Boc等较大分子基团的干扰下，位阻变小，导致以路径一完成肽键缩合的概率大大增加，进而引入大量消旋杂质，这点在九肽树脂与直接使用Ac-D-2-Nal-OH偶联前后的纯度对比(如图1-2所示)中可以得到很好的证明。
本发明的解决思路：为使反应过程中，从理论上杜绝Ac-D-2-Nal-OH引起的消旋杂质的产生，使氨解反应仅可通过路径三完成，即可达到最终目的。且因原料Ac-D-2-Nal-OAt/OSu/OBt的使用而不再需要使用乙酸酐、冰醋酸等对末端氨基进行乙酰化反应，故而同步避免了毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的产生。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案是：
一种可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，其特征在于，具体包括如下步骤：
a)、通过固相合成法在树脂载体上依次偶联西曲瑞克序列中从C端到N端的氨基酸，得到端氨基游离的全保护九肽树脂H2N-D-Phe(4-Cl)-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu- Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-树脂；
b)、往步骤a)制得的全保护九肽树脂中加入溶解后的Ac-D-2-Nal-OAt、Ac-D-2-Nal- OSu或Ac-D-2-Nal-Obt，滴加催化剂，偶联得到全保护十肽树脂Ac-D-2-Nal-D-Phe(4-Cl)- D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-树脂；
c)、将步骤b)的全保护十肽树脂进行裂解、沉淀、洗涤干燥，得到西曲瑞克粗品。
优选地，所述树脂载体为取代度范围0.35mmol/～0.90mmol/g的氨基树脂。
优选地，所述氨基树脂为Rink Amide Resin、Rink Amide-AM Resin和SieberAmide Resin中的一种。
优选地，所述步骤a)采用Fmoc固相合成策略，在缩合试剂A条件下依次偶联Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Cit-OH、Fmoc- Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-Pal-OH、Fmoc-D-Phe(4-Cl)-OH，合成过程中依次采用脱保护液脱除Fmoc保护基。
优选地，所述脱保护液为哌嗪/无水乙醇/DMF溶液或哌啶/DMF混合溶液。优选地，哌嗪/无水乙醇/DMF混合溶液当中的哌嗪质量、无水乙醇体积、DMF体积的比值为1∶1∶9，哌啶/DMF混合溶液当中的哌啶/DMF的体积比为1∶4。
优选地，所述缩合试剂A由第一试剂和第二试剂配制而成，所述第一试剂为HoBt、Oxyma Pure、Hosu、TBTU、HATU和Pybop中的一种或多种，所述第二试剂为DIEA或DIC。优选地，所述第一试剂与第二试剂的摩尔比为1:1.0～1.5。
优选地，所述步骤c)中的裂解所采用的裂解液由三氟乙酸、苯甲醚、苯甲硫醚、二硫苏糖醇、三异丙基硅烷、水配制而成。优选地，三氟乙酸：苯甲醚：苯甲硫醚：二硫苏糖醇：三异丙基硅烷：水＝80:5:5:5:1:4。
优选地，所述步骤b)中的Ac-D-2-Nal-OAt的合成方法是以Ac-D-2-Nal-OH为起始物料，以DIC、DCC和EDCI中的一种以及HoAt为缩合剂，反应溶剂DCM或EA，完成活化反应；反应液加入等体积稀盐酸水溶液搅拌洗涤副产物及过量缩合剂，静置分层后排出水层，重复萃取0-3次，有机层浓缩并重结晶得高纯度产物Ac-D-2-Nal-OAt；
所述步骤b)中的Ac-D-2-Nal-OSu的合成方法是以Ac-D-2-Nal-OH为起始物料，以DIC、DCC和EDCI中的一种以及HoSu为缩合剂，反应溶剂DCM或EA，完成活化反应；反应液加入等体积稀盐酸水溶液搅拌洗涤副产物及过量缩合剂，静置分层后排出水层，重复萃取 0-3次，有机层浓缩并重结晶得高纯度产物Ac-D-2-Nal-OSu；
所述步骤b)中的Ac-D-2-Nal-Obt的合成方法是以Ac-D-2-Nal-OH为起始物料，以DIC、DCC和EDCI中的一种以及HoBt为缩合剂，反应溶剂DCM或EA，完成活化反应；反应液加入稀盐酸水溶液搅拌洗涤副产物及过量缩合剂，静置分层后排出水层，重复萃取0-3 次；有机层浓缩并重结晶得高纯度产物Ac-D-2-Nal-OBt。
优选地，所述活化反应的反应温度为25±5℃，反应时间为30min-120min。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、本发明采用自制的Ac-D-2-Nal-OAt/OSu/OBt为最后一位氨基酸的原料有效避免了反应过程消旋杂质的产生，且末端氨基不再需要使用乙酸酐、冰醋酸等试剂进行乙酰化修饰，同步避免了毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的产生，为西曲瑞克的工业化生产提供一种新的参考思路。
2、本发明在3.4mmol规模的小试过程中粗品纯度达93％以上，经放大至100mmol规模时，纯度仍达93％以上，工艺放大过程中相对稳定，可直接应用于工业化生产。
附图说明
图1为现有技术中西曲瑞克九肽在偶联Ac-D-2-Nal-OH前的HPLC图谱。
图2为现有技术中西曲瑞克九肽在偶联Ac-D-2-Nal-OH后的HPLC图谱。
图3为本发明实施例1合成规模3.4mmol的西曲瑞克粗品HPLC图谱。
图4为本发明实施例1合成规模100mmol的西曲瑞克粗品HPLC图谱。
具体实施方式
本发明中一些常用的英文缩写具体含义如下：
Fmoc-D-Ala-OH：N-芴甲氧羰酰基-D-丙氨酸
Fmoc-Pro-OH：N-(9-芴甲氧羰基)-L-脯氨酸
Fmoc-Arg(Pbf)-OH：N-芴甲氧羰酰基-2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰-L-精氨酸
Fmoc-Leu-OH：N-芴甲氧羰基-L-亮氨酸
Fmoc-D-Cit-OH：N-芴甲氧羰基-D-瓜氨酸
Fmoc-Tyr(tBu)-OH：N-(9-芴甲氧羰基)-O-叔丁基-L-酪氨酸
Fmoc-Ser(tBu)-OH：N-(9-芴甲氧羰基)-O-叔丁基-L-丝氨酸
Fmoc-D-Pal-OH：N-(9-芴甲氧羰基)-3-吡啶基-D-丙氨酸
Fmoc-D-Phe(4-Cl)-OH：N-芴甲氧羰基-4-氯-D-苯丙氨酸
Ac-D-2-Nal-OH：乙酰基-3-(2-萘基)-D-丙氨酸
Ac-D-2-2Nal-OSu：乙酰基-3-(2-萘基)-D-丙氨酰琥珀酰亚胺酯
HoBt：1-羟基苯并三唑
HoSu:：N-羟基丁二酰亚胺
Oxyma Pure：2-肟氰乙酸乙酯
DIC：N,N'-二异丙基碳二亚胺
DCC：N,N'-二环己基碳二亚胺
DIEA：N,N-二异丙基乙胺
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
DCM：二氯甲烷
EA：乙酸乙酯
EDCI：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
HoAt：N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑
TBTU：O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯
HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
PyBop：1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐
实施例1
本实施例提供一种西曲瑞克合成规模3.4mmol，该合成方法详细步骤如下：
脱保护液的配制：称取50g哌嗪，加入50mL无水乙醇、450mLDMF，摇匀后置于超声波清洗机超声至完全溶解，再次摇匀备用。
步骤S1、Fmoc-D-Ala-Rink Amide-AMResin的制备：称取5g取代度为0.68mmol/g的Rink Amide-AM Resin置于玻璃层析合成柱，合成规模3.4mmol，加入50mL二氯甲烷溶胀树脂15min，抽干溶剂。往溶胀后的树脂中加入50mL脱保护液反应5min，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取5.29g Fmoc-D- Ala-OH、2.42g Oxyma Pure于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.63mL DIC，摇匀后加入合成柱反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM 洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-D-Ala-Resin Amide-AM Resin。
该步骤在反应及洗涤过程中均使用99.99％氮气吹拂搅拌，以下步骤反应过程的搅拌方式与该步骤相同。
步骤S2、Fmoc-Pro-D-Ala-Rink Amide-AMResin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取5.74g Fmoc-Pro-OH、2.42g Oxyma Pure于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.63mLDIC，摇匀后加入合成柱反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF 洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-Pro-D-Ala-Resin Amide-AM Resin。
步骤S3、Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-AMResin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取11.03g Fmoc-Arg(Pbf)-OH、2.42g Oxyma Pure于试剂瓶中，加入 50mLDMF溶解后加入2.63mL DIC，摇匀后加入合成柱反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc- Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-AM Resin。
步骤S4、Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-AMResin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取6.01g Fmoc-Leu-OH、2.42g Oxyma Pure于试剂瓶中，加入 50mL DMF溶解后加入2.63mL DIC，摇匀后加入合成柱反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-Leu- Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-AM Resin。
步骤S5、Fmoc-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-AMResin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取6.76g Fmoc-D-Cit-OH、2.42g Oxyma Pure于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.63mL DIC，摇匀后加入合成柱反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc- D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-AM Resin。
步骤S6、Fmoc-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-AMResin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5 次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取7.18g Fmoc-Tyr(tBu)-OH、2.42g Oxyma Pure于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.63mL DIC，摇匀后加入合成柱反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-AM Resin。
步骤S7、Fmoc-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-RinkAmide- AMResin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取6.52g Fmoc-Ser(tBu)-OH、2.42gOxyma Pure于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.63mL DIC，摇匀后加入合成柱反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-AMResin。
步骤S8、Fmoc-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-AMResin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min，抽干溶剂。分别使用50mLDMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取6.60g Fmoc-D-3-Pal-OH、 2.42gOxyma Pure于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.63mL DIC，摇匀后加入合成柱反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala- ResinAmide-AM Resin。
步骤S9、Fmoc-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-AMResin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取7.17g Fmoc- D-Phe(4-Cl)-OH、2.42g Oxyma Pure于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.63mL DIC，摇匀后加入合成柱反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次， 50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D- Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-AM Resin。
步骤S10、Ac-D-2-Nal-OSu的制备：分别称取5.14gAc-D-2-Nal-OH、2.76gHoSu，加入50mLDCM溶解，滴加3.72mLDIC，继续搅拌反应120min，反应温度为25℃，反应结束往反应液中加入等体积稀盐酸水溶液，搅拌30min，静置后排出水层，重复一次萃取。有机层蒸干浓缩后滴加至甲基叔丁基醚析晶，离心干燥，得6.57gAc-D-2-Nal-OSu，收率 92.70％，HPLC纯度98.11％。
步骤S11、Ac-D-2-Nal-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-AMResin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取 6.02gAc-D-2-Nal-OSu于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入合成柱，滴加2.81mLDIEA 反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Ac-D-2-Nal-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu- Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-AM Resin，加入甲醇洗涤树脂2次，置于烘箱干燥。
步骤S12、裂解：配制100mL裂解液，所述裂解液比例为三氟乙酸：苯甲醚：苯甲硫醚：二硫苏糖醇：三异丙基硅烷：水＝80mL：5mL：5mL：5g：1mL：4mL。将上步骤所得肽树脂加入裂解液搅拌反应120min，滤除树脂，滤液加入500mL冰甲基叔丁基醚(≤0℃)沉淀析出，重悬洗涤2次，常温减压干燥，得到西曲瑞克粗品。
利用安捷伦1260InfinityⅡ高效液相色谱，Kromasil 100-5-C18-4.6*250,5um，面积归一法计算得到粗品纯度94.57％。经放大至100mmol规模时，纯度仍达93％以上。
实施例2
本实施例提供另一种西曲瑞克合成规模2.7mmol，该合成方法详细步骤如下：
脱保护液的配制：依次量取100mL哌啶、400mLDMF溶液，搅拌至均匀后备用。
步骤S1、Fmoc-D-Ala-Rink Amide-Resin的制备：称取5g取代度为0.54mmol/g 的Rink Amide-Resin置于玻璃层析合成柱，合成规模2.7mmol，加入50mL二氯甲烷溶胀树脂15min，抽干溶剂。往溶胀后的树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取2.52g Fmoc-D- Ala-OH、2.60gTBTU于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入1.35mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应45min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-D-Ala-Resin Amide-Resin。
该步骤在反应及洗涤过程中均使用99.99％氮气吹拂搅拌，以下步骤反应过程的搅拌方式与该步骤相同。
步骤S2、Fmoc-Pro-D-Ala-Rink Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取2.73g Fmoc-Pro-OH、2.60gTBTU于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入 1.35mLDIEA，摇匀后加入合成柱反应45min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-Pro-D-Ala-Resin Amide- Resin。
步骤S3、Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取5.26g Fmoc-Arg(Pbf)-OH、2.60gTBTU于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入1.35mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应45min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-Arg(Pbf)- Pro-D-Ala-ResinAmide-Resin。
步骤S4、Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取2.86g Fmoc-Leu-OH、2.60gTBTU于试剂瓶中，加入50mL DMF 溶解后加入1.35mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应45min，反应结束抽干反应液，分别使用 50mLDMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro- D-Ala-Resin Amide-Resin。
步骤S5、Fmoc-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取3.22g Fmoc-D-Cit-OH、2.60gTBTU于试剂瓶中，加入 50mLDMF溶解后加入1.35mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应45min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-D-Cit- Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-Resin。
步骤S6、Fmoc-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取3.72g Fmoc-Tyr(tBu)-OH、2.60gTBTU于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入1.35mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应45min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得 Fmoc-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-Resin。
步骤S7、Fmoc-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-RinkAmide- Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。分别使用50mLDMF 洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取3.11g Fmoc-Ser(tBu)-OH、2.60gTBTU于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入1.35mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应45min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-Resin。
步骤S8、Fmoc-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取3.15g Fmoc-D-3-Pal-OH、2.60gTBTU于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入1.35mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应45min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala- ResinAmide-Resin。
步骤S9、Fmoc-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取3.42g Fmoc-D-Phe(4-Cl)-OH、2.60gTBTU于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入1.35mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应45min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次， 50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Fmoc-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D- Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-Resin。
步骤S10、Ac-D-2-Nal-OBt的制备：分别称取2.57gAc-D-2-Nal-OH、1.62gHoBt，加入50mLDCM溶解，滴加1.86mL DIC，继续搅拌反应120min，反应温度为25℃，反应结束往反应液中加入等体积稀盐酸水溶液，搅拌30min，静置后排出水层，重复一次萃取。有机层蒸干浓缩后滴加至甲基叔丁基醚析晶，离心干燥，得3.18g Ac-D-2-Nal-OBt，收率 85.03％，HPLC纯度97.56％。
步骤S11、Ac-D-2-Nal-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Rink Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂。称取3.03g Ac-D-2-Nal-OBt于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入合成柱，滴加1.35mL DIEA反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Ac-D-2-Nal-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit- Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Resin Amide-Resin，加入甲醇洗涤树脂2次，置于烘箱干燥。
步骤S12、裂解：配制100mL裂解液，所述裂解液比例为三氟乙酸：苯甲醚：苯甲硫醚：二硫苏糖醇：三异丙基硅烷：水＝80mL：5mL：5mL：5g：1mL：4mL。将上步骤所得肽树脂加入裂解液搅拌反应120min，滤除树脂，滤液加入500mL冰甲基叔丁基醚(≤0℃)沉淀析出，重悬洗涤2次，常温减压干燥，得到西曲瑞克粗品。
利用安捷伦1260InfinityⅡ高效液相色谱，Kromasil 100-5-C18-4.6*250,5um，面积归一法计算得到粗品纯度93.19％。经放大至100mmol规模时，纯度仍达93％以上。
实施例3
本实施例提供一种西曲瑞克合成规模1.75mmol，该合成方法详细步骤如下：
脱保护液的配制：依次量取100mL哌啶、400mLDMF溶液，搅拌至均匀后备用。
步骤S1、Fmoc-D-Ala-Sieber Amide-Resin的制备：称取5g取代度为0.35mmol/g的Sieber Amide-Resin置于玻璃层析合成柱，合成规模2.7mmol，加入50mLDMF溶胀树脂30min，抽干溶剂。往溶胀后的树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂。称取2.72g Fmoc-D-Ala-OH、4.55g PyBop于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.17mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应30min，反应结束抽干反应液，使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂，得Fmoc-D-Ala-Sieber Amide-Resin。
该步骤在反应及洗涤过程中均使用99.99％氮气吹拂搅拌，以下步骤反应过程的搅拌方式与该步骤相同。
步骤S2、Fmoc-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂。称取2.95g Fmoc- Pro-OH、4.55g PyBop于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.17mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应30min，反应结束抽干反应液，使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂，得 Fmoc-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin。
步骤S3、Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂。称取 5.68gFmoc-Arg(Pbf)-OH、4.55g PyBop于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.17mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应30min，反应结束抽干反应液，使用50mL DMF洗涤树脂6 次，抽干溶剂，得Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin。
步骤S4、Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂。称取3.09g Fmoc-Leu-OH、4.55g PyBop于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.17mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应30min，反应结束抽干反应液，使用50mL DMF洗涤树脂6 次，抽干溶剂，得Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin。
步骤S5、Fmoc-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂。称取3.48g Fmoc-D-Cit-OH、4.55g PyBop于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入 2.17mLDIEA，摇匀后加入合成柱反应30min，反应结束抽干反应液，使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂，得Fmoc-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin。
步骤S6、Fmoc-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。使用50mL DMF洗涤树脂6 次，抽干溶剂。称取4.02g Fmoc-Tyr(tBu)-OH、4.55g Pybop于试剂瓶中，加入50mL DMF 溶解后加入2.17mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应30min，反应结束抽干反应液，使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂，得Fmoc-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin。
步骤S7、Fmoc-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-SieberAmide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。使用50mL DMF 洗涤树脂6次，抽干溶剂。称取3.36g Fmoc-Ser(tBu)-OH、4.55g PyBop于试剂瓶中，加入 50mLDMF溶解后加入2.17mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应30min，反应结束抽干反应液，使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂，得Fmoc-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu- Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin。
步骤S8、Fmoc-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂。称取3.40g Fmoc-D-3-Pal-OH、4.55g PyBop于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.17mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应30min，反应结束抽干反应液，使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂，得Fmoc-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)- D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin。
步骤S9、Fmoc-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂。称取3.69g Fmoc-D-Phe(4-Cl)-OH、4.55g Pybop于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入2.17mL DIEA，摇匀后加入合成柱反应 30min，反应结束抽干反应液，使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂，得Fmoc-D-Phe(4- Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin。
步骤S10、Ac-D-2-Nal-OAt的制备：分别称取2.83gAc-D-2-Nal-OH、1.79gHoAt，加入50mLDCM溶解，滴加2.04mL DIC，继续搅拌反应120min，反应温度为25℃，反应结束往反应液中加入等体积稀盐酸水溶液，搅拌30min，静置后排出水层，重复一次萃取。有机层蒸干浓缩后滴加至甲基叔丁基醚析晶，离心干燥，得3.76g Ac-D-2-Nal-OAt，收率 91.06％，HPLC纯度97.85％。
步骤S11、Ac-D-2-Nal-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin的制备：树脂中加入50mL脱保护液反应5min*2次，抽干溶剂。使用50mL DMF洗涤树脂6次，抽干溶剂。称取3.28g Ac-D-2-Nal-OAt于试剂瓶中，加入50mL DMF溶解后加入合成柱，滴加2.17mL DIEA反应60min，反应结束抽干反应液，分别使用50mL DMF洗涤树脂5次，50mL DCM洗涤树脂两次，抽干溶剂，得Ac-D- 2-Nal-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-Sieber Amide-Resin，加入甲醇洗涤树脂2次，置于烘箱干燥。
步骤S12、裂解：配制100mL裂解液，所述裂解液比例为三氟乙酸：苯甲醚：苯甲硫醚：二硫苏糖醇：三异丙基硅烷：水＝80mL：5mL：5mL：5g：1mL：4mL。将上步骤所得肽树脂加入裂解液搅拌反应120min，滤除树脂，滤液加入500mL冰甲基叔丁基醚(≤0℃)沉淀析出，重悬洗涤2次，常温减压干燥，得到西曲瑞克粗品。
利用安捷伦1260InfinityⅡ高效液相色谱，Kromasil 100-5-C18-4.6*250,5um，面积归一法计算得到粗品纯度94.01％。经放大至100mmol规模时，纯度仍达93％以上。
以上显示和描述了本发明创造的基本原理和主要特征及本发明的优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明创造精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内，本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (10)
1.一种可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，其特征在于，具体包括如下步骤：
a）、通过固相合成法在树脂载体上依次偶联西曲瑞克序列中从C端到N端的氨基酸，得到端氨基游离的全保护九肽树脂H2N-D-Phe(4-Cl)-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-树脂；
b）、往步骤a）制得的全保护九肽树脂中加入溶解后的Ac-D-2-Nal-OAt、Ac-D-2-Nal-OSu或Ac-D-2-Nal-Obt，滴加催化剂，偶联得到全保护十肽树脂Ac-D-2-Nal-D-Phe(4-Cl)-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-树脂；
c）、将步骤b）的全保护十肽树脂进行裂解、沉淀、洗涤干燥，得到西曲瑞克粗品。
2.根据权利要求1所述的可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，其特征在于：所述树脂载体为取代度范围0.35mmol/～0.90mmol/g的氨基树脂。
3.根据权利要求2所述的可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，其特征在于：所述氨基树脂为Rink Amide Resin、Rink Amide-AM Resin和Sieber Amide Resin中的一种。
4.根据权利要求1所述的可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，其特征在于：所述步骤a）采用Fmoc固相合成策略，在缩合试剂A条件下依次偶联Fmoc-D-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Cit-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-Pal-OH、Fmoc-D-Phe(4-Cl)-OH，合成过程中依次采用脱保护液脱除Fmoc保护基。
5.根据权利要求4所述的可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，其特征在于：所述脱保护液为哌嗪/无水乙醇/DMF溶液或哌啶/DMF混合溶液。
6.根据权利要求4所述的可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，其特征在于：所述缩合试剂A由第一试剂和第二试剂配制而成，所述第一试剂为HoBt、Oxyma Pure、Hosu、TBTU、HATU和Pybop中的一种或多种，所述第二试剂为DIEA或DIC。
7.根据权利要求6所述的可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，其特征在于：所述第一试剂与第二试剂的摩尔比为1:1.0～1.5。
8.根据权利要求1所述的可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，其特征在于：所述步骤c）中的裂解所采用的裂解液由三氟乙酸、苯甲醚、苯甲硫醚、二硫苏糖醇、三异丙基硅烷、水配制而成。
9.根据权利要求1所述的可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，其特征在于：所述步骤b）中的Ac-D-2-Nal-OAt的合成方法是以Ac-D-2-Nal-OH为起始物料，以DIC、DCC和EDCI中的一种以及HoAt为缩合剂，反应溶剂DCM或EA，完成活化反应；反应液加入等体积稀盐酸水溶液搅拌洗涤副产物及过量缩合剂，静置分层后排出水层，重复萃取0-3次，有机层浓缩并重结晶得高纯度产物Ac-D-2-Nal-OAt；
所述步骤b）中的Ac-D-2-Nal-OSu的合成方法是以Ac-D-2-Nal-OH为起始物料，以DIC、DCC和EDCI中的一种以及HoSu为缩合剂，反应溶剂DCM或EA，完成活化反应；反应液加入等体积稀盐酸水溶液搅拌洗涤副产物及过量缩合剂，静置分层后排出水层，重复萃取0-3次，有机层浓缩并重结晶得高纯度产物Ac-D-2-Nal-OSu；
所述步骤b）中的Ac-D-2-Nal-Obt的合成方法是以Ac-D-2-Nal-OH为起始物料，以DIC、DCC和EDCI中的一种以及HoBt为缩合剂，反应溶剂DCM或EA，完成活化反应；反应液加入稀盐酸水溶液搅拌洗涤副产物及过量缩合剂，静置分层后排出水层，重复萃取0-3次；有机层浓缩并重结晶得高纯度产物Ac-D-2-Nal-OBt。
10.根据权利要求9所述的可直接用于中试放大的西曲瑞克合成工艺，其特征在于：所述活化反应的反应温度为25±5℃，反应时间为30min-120min。
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Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104086632A (zh) * | 2014-08-05 | 2014-10-08 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备西曲瑞克的方法 |
| CN104610433A (zh) * | 2015-02-13 | 2015-05-13 | 泰州施美康多肽药物技术有限公司 | 一种西曲瑞克的制备方法 |
| CN104892732A (zh) * | 2015-06-16 | 2015-09-09 | 中肽生化有限公司 | 一种西曲瑞克的制备方法 |
| CN108264540A (zh) * | 2016-12-30 | 2018-07-10 | 江苏金斯瑞生物科技有限公司 | 一种西曲瑞克的制备方法 |
| US20190382447A1 (en) * | 2018-06-16 | 2019-12-19 | Biophore India Pharmaceuticals Private Limited | Process for the preparation of cetrorelix acetate |
| CN110903352A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-03-24 | 中肽生化有限公司 | 一种西曲瑞克的制备方法 |
-
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104086632A (zh) * | 2014-08-05 | 2014-10-08 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备西曲瑞克的方法 |
| CN104610433A (zh) * | 2015-02-13 | 2015-05-13 | 泰州施美康多肽药物技术有限公司 | 一种西曲瑞克的制备方法 |
| CN104892732A (zh) * | 2015-06-16 | 2015-09-09 | 中肽生化有限公司 | 一种西曲瑞克的制备方法 |
| CN108264540A (zh) * | 2016-12-30 | 2018-07-10 | 江苏金斯瑞生物科技有限公司 | 一种西曲瑞克的制备方法 |
| US20190382447A1 (en) * | 2018-06-16 | 2019-12-19 | Biophore India Pharmaceuticals Private Limited | Process for the preparation of cetrorelix acetate |
| CN110903352A (zh) * | 2019-12-27 | 2020-03-24 | 中肽生化有限公司 | 一种西曲瑞克的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 汪世龙等编著: "蛋白质化学", 同济大学出版社, pages: 100 - 101 * |
Also Published As
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Legal Events
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| GR01 | Patent grant | ||
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