CN114891080B

CN114891080B - Mbw复合体及其在调控杨絮发育中的应用

Info

Publication number: CN114891080B
Application number: CN202210489873.8A
Authority: CN
Inventors: 周芳伟; 吴怀通; 尹佟明
Original assignee: Nanjing Forestry University
Current assignee: Nanjing Forestry University
Priority date: 2022-05-07
Filing date: 2022-05-07
Publication date: 2023-01-31
Anticipated expiration: 2042-05-07
Also published as: CN114891080A

Abstract

本发明首次公开了MBW复合体(PdeMIXTA‑PdeMYC‑PdeWD40)，调控杨絮起始发育，属于植物基因工程技术领域。本发明以杨树的PdeMIXTA基因为诱饵蛋白，对杨絮起始发育时期的的雌花芽的酵母文库进行筛选，得到两个互作蛋白PdeMYC和PdeWD40,通过酵母双杂交实验，双分子萤光互补实验和荧光素酶互补实验，验证了在杨树中PdeMIXTA‑PdeMYC‑PdeWD40形成MBW复合体行使功能，把杨树PdeMIXTA基因在拟南芥无毛突变体gl1中过量表达，可以恢复其野生型毛状体表型，表明该基因可以促进拟南芥表皮细胞凸起分化为表皮毛。以上证实MBW复合体是调控絮的起始发育的关键复合物，为通过基因编辑技术创制无絮杨新品种，提供可靠的靶基因和重要的理论支持。

Description

MBW复合体及其在调控杨絮发育中的应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及杨树中的MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)调控杨絮发育及其应用。

背景技术

杨树(Populus spp.)是世界上分布最广、适应性最强的树种。我国杨树栽培主要集中在华北、华中、东北和西北等地区。杨树不仅是重要的速生丰产用材林树种，而且是环境绿化的重要树种；由于其极快的生长速度和良好的细胞壁化学性质，也是第二代生物燃料生产的合适原料；其栖息地适应性强，还可广泛用于生态防护林、三北防护林、农林防护林。其自身的经济价值、生态价值和社会价值体现出的优越性，是其他树种无法具备和取代的。

杨树飘絮造成季节性环境污染的问题，成为当前制约杨树产业发展的重要因素。杨树在生殖特征上是雌雄异株，以往选育推广的杨树优良无性系以雌株为主，然而雌株杨树的蒴果生长成熟后，果实开裂产生很多杨絮四处飞扬，而且飞絮持续的时间也很长，通常能达到半个月之久。杨絮的到处散播不仅会造成环境污染，还能让人呼吸道不畅，而且由于其易燃，很容易造成火灾。因此，如何既能发挥杨树强大的生态效益和较高的经济效益，同时又能控制杨树季节性飘絮污染，是当今社会亟待解决的问题。

随着杨树的大面积种植，杨絮对环境的污染和社会的危害也日益严重。但是目前杨絮产生的分子机制尚未得到很好的了解。因此，通过研究杨絮的起始发育调控机理，发掘调控其起始发育的关键基因，对于获得不飘絮的杨树新品种具有重要意义。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题在于提供一种调控杨絮发育的MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)。本发明所要解决的另一技术问题在于提供杨絮起始发育的MBW复合体在培育不飞絮杨树新品种中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

本发明第一方面，提供了一种MBW复合体蛋白，所述MBW复合体蛋白由蛋白PdeMIXTA、PdeMYC、PdeWD40相互作用形成。所述的参与杨絮起始发育MBW复合体的蛋白可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

进一步地，所述蛋白PdeMIXTA的氨基酸序列为SEQ IDNO.1。

进一步地，所述蛋白PdeMYC的氨基酸序列为SEQ IDNO.2。

进一步地，所述蛋白PdeWD40的氨基酸序列为SEQ IDNO.3。

进一步地，所述MBW复合体蛋白的氨基酸末端连接有标签序列。

另一方面，本发明提供了一种与所述MBW复合体蛋白相关的生物材料，为下述A1)至A8)中的任一种：

A1)编码所述MBW复合体蛋白的核酸分子；

A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；

A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；

A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；

A5)含有A1)所述核酸分子的重组微生物；

A6)含有A2)所述表达盒的重组微生物；

A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；

A8)含有A4)所述重组载体的重组微生物。

上述生物材料中，所述载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。如pCAMBIA1301、pGBKT7/pGADT7、pCAMBIA1300-35S-YFPc155、pCAMBIA1300-35S-nYFP173、pCAMBIA-NLuc、pCAMBIA-CLuc。同时，还包括为了验证MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)三个蛋白之间的相互作用，酵母双杂交实验的重组载体：pGBKT7-PdeMIXTA、pGBKT7-PdeMYC、pGADT7-PdeMYC、pGADT7-PdeWD40,进行双分子萤光互补实验的重组载体：YFPc155-PdeMIXTA、YFPc155-PdeMYC、nYFP173-PdeMYC、nYFP173-PdeWD40，进行荧光素酶互补实验的重组载体：NLuc-PdeMIXTA、NLuc-PdeMYC、CLuc-PdeMYC、CLuc-PdeWD40；为了验证MBW复合体功能，转化拟南芥的重组载体pCAMBIA1301-PdeMIXTA。

上述生物材料中，所述重组微生物可为酵母、细菌、藻或真菌，如农杆菌。在本发明的实施例中，采用的农杆菌为GV3101。

另一方面，本发明还提供了所述MBW复合体蛋白或所述的生物材料在调控杨絮发育或在培育不飘絮杨树新品种中的应用，包括以下步骤：

(1)制备MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)的反义载体、RNAi载体或CRISPR载体；

(2)利用杨树的遗传转化体系，对杨树中MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)进行基因表达沉默或基因编辑，使MBW复合体功能丧失；

(3)培育筛选MBW复合体失活的转基因材料，获得雌株不飞絮的转基因杨树新品种。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

本发明首次鉴定MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)对杨絮起始发育的调控作用，为通过基因编辑技术减缓杨絮对环境的影响，提供可靠的靶基因和理论依据。首先是以杨树PdeMIXTA蛋白为诱饵载体，在杨絮起始发育时期的的雌花芽的酵母文库进行筛选，得到两个互作蛋白PdeMYC和PdeWD40，三者能够协同互作形成MBW复合体；其次通过酵母双杂体系，双分子萤光互补实验及荧光素酶互补实验验证了三者之间的互作结果；最后把PdeMIXTA基因在拟南芥无毛突变体gl1中过量表达，可以恢复其野生型表型，表明该基因可以促进拟南芥表皮细胞凸起分化为表皮毛。综上，证实了由PdeMIXTA基因驱动的MBW复合体是杨絮起始发育调控的关键复合物，为无絮杨新品种的创制提供了条件和基础支持。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为酵母双杂交(Y2H)实验以检查MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)蛋白之间的相互作用。PdeMIXTA和PdeMYC与GAL4 DNA结合域融合，并与激活域(AD)融合的PdeWD40和PdeMYC蛋白，以不同组合共转化酵母菌株测试它们之间的相互作用。之前报道的一对PGBKT7-53和PGADT7-T作为阳性对照，PGBKT7-Lam和PGADT7-T作为阴性对照，酵母细胞在不含色氨酸、亮氨酸、组氨酸和腺嘌呤(SD/-TLHA)的培养基上生长的能力被评分为正相互作用。

图2为双分子荧光互补(BiFC)实验以确定MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)蛋白之间的相互作用。全长PdeMIXTA和PdeWD40与黄色蛋白(YFP)的N端片段融合，将PdeMYC和PdeWD40与黄色蛋白的C端融合，构建体在本氏烟草叶片中共表达，然后使用共聚焦显微镜观察YFP信号进行拍照并融合。

图3为荧光素酶互补实验测定本氏烟草叶表皮细胞中MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)蛋白之间的相互作用。全长PdeMIXTA和PdeWD40与荧光素酶的N端片段融合，将PdeMYC和PdeWD40与荧光素酶的C端融合，在左侧显示的四个位置用构建体组合进行农杆菌浸润。

图4为MBW复合体核心蛋白PdeMIXTA转化拟南芥功能验证的结果。无毛突变体gl1叶片光滑无表皮毛分布(a，c，e-g)，PdeMIXTA在gl1中过表达，转基因植株叶片表皮毛恢复(b，d，h-j)。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只是作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。

实施例1、MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)蛋白之间的相互作用

(1)酵母双杂交体系验证MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)蛋白之间的相互作用

为了验证MBW复合体调控杨絮起始发育，通过Gateway技术(Invitrog en)分别将PdeMIXTA和PdeMYC基因克隆到pGBKT7载体中，构成pGB KT7-PdeMIXTA和pGBKT7-PdeMYC重组载体，将PdeMYC和PdeWD40基因克隆到pGADT7载体中，构成pGADT7-PdeMYC和pGADT7-PdeWD40重组载体。根据酵母方案手册(Invitrogen)转化到MaV203酵母菌株中并分别将含有重组质粒的酵母涂布代在SD-Trp-Leu-或SD-Trp-Leu-His-Ura+30mM3AT+x-α-gal培养基平板上生长并观察酵母生长情况。其中pGBKT7-p53/pGADT7-T为阳性对照，pGBKT7-Lam/pGADT7-T为阴性对照，每组实验重复3次。实验结果表明当PdeMIXTA和PdeMYC、PdeMIXTA和PdeWD40、PdeMYC和PdeWD40同时存在的情况下酵母菌斑呈蓝色为阳性菌落(图1)，表明PdeMIXTA、PdeMYC和PdeWD40三者互作形成MBW复合体。

(2)双分子萤光互补实验验证MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-Pde WD40)蛋白之间的相互作用

为了验证MBW复合体调控杨絮起始发育，用BamHI和SalI酶切pCA MBIA1300-35S-YFPc155载体。将PdeMIXTA和PdeMYC(不包括终止密码子)的cDNA序列融合到黄色荧光蛋白(YFP)的C末端，生成cYFP-PdeMIXTA和cYFP-PdeMYC。用BamHI和SalI酶切pCAMBIA1300-35S-nYFP173载体，将PdeMYC和PdeWD40(不包括终止密码子)的cDNA序列融合到YFP的N末端，生成PdeMYC-nYFP和PdeWD40-nYFP。将重组载体转入到GV3101农杆菌菌株，将农杆菌细胞重新悬浮在渗透缓冲液(10mM MgCl2，10mM MES，pH＝5.6，200μM乙酰丁香酮)中，最终浓度为OD600＝0.6-0.8，然后在室温下培养2h。将缓冲液注射到烟草叶片细胞中，对烟草进行瞬时转化。注射后烟草植株在23℃下培养48-72小时，使用蔡司LSM 710共聚焦显微镜(蔡司，Oberkochen，德国)观察叶片中的YFP荧光信号。在分别同时注射了PdeMIXTA和PdeMYC、PdeMIXTA和Pde WD40、PdeMYC和PdeWD40的烟草叶片细胞中可以检测到YFP信号(图2)，表明PdeMIXTA、PdeMYC和PdeWD40三者互作形成MBW复合体。

(3)荧光素酶互补实验验证MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeW D40)蛋白之间的相互作用

为了验证MBW复合体调控杨絮起始发育，通过Gateway技术(Invitrog en)分别将PdeMIXTA和PdeMYC基因克隆到pCAMBIA-NLuc(N端荧光素酶)，构成NLuc-PdeMIXTA和NLuc-PdeMYC，将PdeMYC和PdeWD40基因克隆到pCAMBIA-CLuc(N端荧光素酶)，构成CLuc-PdeMYC和CLuc-Pd eWD40。将重组载体转入到GV3101农杆菌菌株，注射到烟草叶片细胞中，对烟草进行瞬时转化。25℃黑暗处理72h后，将荧光素酶底物D-荧光素(10μM，IL0230，Solarbio，USA)喷洒在烟叶表面，反应在黑暗中培养10分钟。使用双荧光素酶报告分析系统(GloMax 20/20Luminometer；Prome ga，USA)获得荧光素酶生物发光图像。在分别同时注射了PdeMIXTA和PdeMYC、PdeMIXTA和PdeWD40、PdeMYC和PdeWD40的烟草叶片细胞中可以检测到荧光素酶的表达(图3)，表明PdeMIXTA、PdeMYC和Pde WD40三者互作形成MBW复合体。

实施例2、MBW复合体核心蛋白PdeMIXTA转拟南芥进行功能研究

用于植物转化的拟南芥无毛突变体(gl1)由实验室保存。将拟南芥种子在75％乙醇中表面灭菌30秒，然后在无菌水中洗涤3次，然后在10％NaClO(v/v)中表面灭菌10分钟，然后再次用无菌水清洗6次，然后均匀播种在含有3％蔗糖和0.8％琼脂，pH为5.8的1/2MS培养基中。种子首先在黑暗中于4℃培养3天，以进行春化处理，然后将其移至生长室(22-23℃，16h光照/8h黑暗)中进行发芽，将生长约两周的拟南芥幼苗移植到营养钵中，营养土：黑土：珍珠岩：蛭石＝3：3：1：1，在相同条件下(22-23℃，16h光照/8h黑暗)生长。

把构建完成的过表达载体pCAMBIA1301-PdeMIXTA转化到根癌农杆菌GV3101中。进行农杆菌的扩大培养，收集菌体后，用悬浮液(1/2MS+0.5％蔗糖)调整浓度到OD＝0.8，用于拟南芥的转化实验。拟南芥转化采用花器官浸染法。在突变体gl1的盛花期(生长4周左右)，用配置好的农杆菌悬浮液浸泡花序30s，在生长室暗培养24h，再恢复正常生长条件直至成熟后分株收获种子(T1)。使用含30mg/L潮霉素的MS培养基进行T1代转基因阳性植株筛选，筛选获得阳性植株移栽到土壤中，放置在生长室(22-23℃，16h光照/8h黑暗)中进行正常的管理。待幼苗在土壤中生长10天时，在显微镜下观察第一片真叶的表皮毛数量。转基因植株的表皮毛恢复正常。使用QUANTA 200FEG扫描电子显微镜(FEI，Hillsboro，USA)观察表皮毛分支，PdeMIXTA在gl1突变体中过表达，转基因植株的表皮毛分支和WT一致，均为3个分支。

上述结果证实了MBW复合体(PdeMIXTA-PdeMYC-PdeWD40)对杨絮起始发育的调控作用。可以通过遗传转化技术，用于培育不飘絮杨树新品种。

除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的数值并不限制本发明的范围。在这里示出和描述的所有示例中，除非另有规定，任何具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制，因此，示例性实施例的其他示例可以具有不同的值。

序列表

<110> 南京林业大学

<120> MBW复合体及其在调控杨絮发育中的应用

<130> 202205

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 382

<212> PRT

<213> Populus spp.(杨树)

<400> 1

Met Val Arg Ser Gln Cys Cys Asp Lys Val Gly Leu Lys Lys Gly Pro

1 5 10 15

Trp Thr Pro Glu Glu Asp Gln Lys Leu Leu Ala Tyr Val Glu Glu His

20 25 30

Gly His Gly Ser Trp Arg Ala Leu Pro Ala Lys Ala Gly Leu Gln Arg

35 40 45

Cys Gly Lys Ser Cys Arg Leu Arg Trp Thr Asn Tyr Leu Arg Pro Asp

50 55 60

Ile Lys Arg Gly Lys Phe Ser Leu Gln Glu Glu Gln Thr Ile Ile Gln

65 70 75 80

Leu His Ala Leu Leu Gly Asn Arg Trp Ser Val Ile Ala Thr His Leu

85 90 95

Pro Lys Arg Thr Asp Asn Glu Ile Lys Asn Tyr Trp Asn Thr His Leu

100 105 110

Lys Lys Arg Leu Asp Lys Met Gly Ile Asp Pro Val Thr His Lys Pro

115 120 125

Lys Ala Asp Ser Phe Gly Ser Gly Ser Gly His Ser Lys Gly Ala Ala

130 135 140

His Leu Ser His Met Ala Gln Trp Glu Ser Ala Arg Leu Glu Ala Glu

145 150 155 160

Ala Arg Leu Val Arg Glu Ser Lys Val Ile Ile Pro Asn Pro Pro Pro

165 170 175

Asn Arg Leu Gly Ser Asn Ala Ser Ala Gln Val Ser Asp Lys Arg Ser

180 185 190

Ala Ala Pro Pro Ala Arg Pro Gln Cys Leu Asp Val Leu Lys Ala Trp

195 200 205

Gln Gly Val Val Phe Ser Met Leu Ser Ala Gly Cys Ser Asp Ser Leu

210 215 220

Glu Ser Pro Thr Ser Thr Leu Asn Phe Ser Glu Asn Glu Leu Ala Ile

225 230 235 240

Pro Leu Val Gly Val Gln Lys Asn Ser Ala Thr Thr Leu Ala Phe Ala

245 250 255

Thr Asn Asn Ala Pro Cys Asn Gly Gly Thr Thr Ala Thr Glu Phe Asn

260 265 270

Ser Gly Asn Gln Phe Glu Cys Phe Glu Lys Leu Asn Glu Ala Ala Gln

275 280 285

Val Gln Gln Asn Leu Asp Ser Ser Val Ala Leu His Asp Ile Ser Pro

290 295 300

Asp Ala Ser Asn His Asn Ala Trp Phe Asp Ser Ala Thr Asn Glu Asn

305 310 315 320

Ala Pro Met Gly Ile Ile Glu Gly Leu Ser Glu Ile Leu Val Cys Thr

325 330 335

Ser Gln Asp His Asn Ala Ser Phe Ala Gly Glu Asn Ile Asn Asp Ser

340 345 350

Cys Gly Gly Asn Leu Glu Glu Asn Gly Asn Tyr Trp Asn Ser Leu Leu

355 360 365

Asn Leu Val Asp Ala Ser Pro Thr Gly Thr Ser Pro Val Phe

370 375 380

<210> 2

<211> 587

<212> PRT

<213> 杨树(Populus spp.)

<400> 2

Met Arg Tyr Pro Tyr Gln Pro Gly Asn Ile Met Asn Val Val Gln Asn

1 5 10 15

Leu Met Glu Arg Leu Arg Pro Leu Val Gly Val Lys Ser Trp Asp Tyr

20 25 30

Cys Val Leu Trp Lys Leu Ser Glu Asp Arg Arg Tyr Ile Glu Leu Met

35 40 45

Asp Cys Cys Cys Ala Gly Thr Glu Pro Thr Gln Asn Gly Gly Glu Asp

50 55 60

Leu Gln Phe Pro Val Ser Ala Val Leu Pro Cys Arg Asp Val Met Phe

65 70 75 80

Gln His Pro Arg Thr Lys Ser Cys Glu Leu Leu Ala Gln Leu Pro Ser

85 90 95

Ser Met Pro Leu Asn Ser Gly Phe His Ala Gln Ala Leu Ser Ser Asn

100 105 110

Leu Pro Arg Trp Leu Asn Phe Ser Ser Ser Ser Asp Ser Asn Val Leu

115 120 125

Glu Glu Thr Val Gly Thr Arg Ala Leu Ile Pro Val Pro Gly Gly Leu

130 135 140

Met Glu Leu Phe Ile Ala Lys Gln Val Pro Glu Asp Gln His Val Ile

145 150 155 160

Asp Val Val Thr Ser Gln Cys Asn Phe Leu Met Glu Gln Glu Ala Met

165 170 175

Ile Asn Ser Thr Asn Met Asp Ser Ser Leu Ser Asn Ile Asp Val Asn

180 185 190

Val Met Ser Glu Asn Gln Ser Lys Pro Phe Leu Ala Asn Asp Asn Glu

195 200 205

Gln Glu Asp His His Asn Leu Asn Ile Pro Tyr Asp Ser Ser Leu Asp

210 215 220

Arg Leu His Met Ser Ser Ser Pro Met Asn Asn Phe Met His Gln Phe

225 230 235 240

Asn Tyr Cys Thr Asp Glu Thr Lys Thr Lys Gly Asp Leu Phe Gln Gly

245 250 255

Val Glu Ser Gly Leu Gln Asp Met Asp Asp Leu Gln Lys Ser Met Met

260 265 270

Ala Asn Ala Glu Ser Thr Gln Met Gln Tyr Met Glu Ser Gly Leu Thr

275 280 285

Thr Lys Asp Gln His Gly Asn Asp Lys Glu Ser Ile Lys Leu Glu Asn

290 295 300

Gly Pro Ser Ala Glu Tyr Ser His Ser Asp Cys Asn Asp Asp Glu Asp

305 310 315 320

Asp Ala Lys Tyr Arg Arg Arg Thr Gly Lys Gly Pro Gln Ser Lys Asn

325 330 335

Leu Val Ala Glu Arg Lys Arg Arg Lys Lys Leu Asn Asp Arg Leu Tyr

340 345 350

Ala Leu Arg Ser Leu Val Pro Asn Ile Ser Lys Leu Asp Arg Ala Ser

355 360 365

Ile Leu Gly Asp Ala Ile Glu Phe Val Lys Glu Leu Gln Lys Glu Ala

370 375 380

Lys Glu Leu Gln Asp Glu Leu Glu Glu Asn Ser Asp Asp Glu Gly Ala

385 390 395 400

Lys Asn Gly Asn Asn Asn Asn Met Pro Pro Glu Ile Leu Asn Gln Asn

405 410 415

Gly Val Asn Leu Gly Ala Tyr Arg Ser Asp Tyr Ala Val Asn Gly Phe

420 425 430

His Val Glu Ala Ser Gly Ile Ser Thr Val Ser Lys Gln Asn Gln Asp

435 440 445

Ser Glu Asn Ser His Asp Lys Gly His Gln Met Glu Ala Gln Val Glu

450 455 460

Val Ala Gln Ile Asp Gly Asn Glu Phe Phe Val Lys Val Phe Cys Glu

465 470 475 480

His Lys Pro Gly Gly Phe Val Arg Leu Met Glu Ala Leu Asp Ser Leu

485 490 495

Gly Leu Glu Val Thr Asn Ala Asn Val Thr Ser Asn Arg Gly Leu Val

500 505 510

Ser Asn Val Leu Lys Val Glu Gln Lys Asp Ser Glu Met Val Gln Ala

515 520 525

Asp Tyr Val Arg Asp Ser Leu Leu Glu Leu Thr Arg Asp Pro Pro Arg

530 535 540

Ala Trp Pro Glu Met Pro Lys Ala Ser Glu Ile Cys Cys Ser Gly Met

545 550 555 560

Asp Tyr Pro His His Asp His His Gln His His Leu Gln Asn Gly His

565 570 575

Met Asn Tyr Asn His His His Pro His His Leu

580 585

<210> 3

<211> 910

<212> PRT

<213> 杨树(Populus spp.)

<400> 3

Met Ser Arg Asn Asp Thr Thr Thr Asp Lys Asn Asp Gly Glu Glu Glu

1 5 10 15

Gln Val Val Val Val Val Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu His Phe Tyr

20 25 30

Glu Ser Leu Asp Arg Ile Ala Ser Ser Ser Cys Ser Thr Ser Asn Ser

35 40 45

Asp Ser Asp Pro Asp Gln Thr Arg Ser Asn Ser Pro Arg Leu Asn Ser

50 55 60

Lys Leu His Val Ser Asn Tyr Asp Val Trp Ile Ser Gln Pro Glu Ser

65 70 75 80

Ile Ser Glu Arg Arg Gln Arg Leu Leu His Asn Met Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Asp Pro Ser Leu Ser Arg Ser Lys Pro Glu Thr Thr His Gly Asp Phe

100 105 110

Tyr Phe Asn Arg Ser Val Ser Ser Asp Arg Leu Ile Ala Glu Lys Leu

115 120 125

Ser Gly Ser Val Ser Ser Cys Ser Ser Ala Ile His Arg Ser Lys Ser

130 135 140

Asp Gly Gly Gly Gly Arg Ser Val Asp His Asp Asn Asp Phe Asn Ser

145 150 155 160

Cys Cys Ser Ser Ser Ser Val Tyr Cys Ser Pro Ser Ser Ile Leu Leu

165 170 175

Gln Asp Ser Ile Asn Val Asn Ser Asp Asp Ser Asn Tyr Asn Ser Asn

180 185 190

Pro Asn Asn Asn Ile Asn Asn Ser Lys Leu Ser Asn Asn Glu Phe Gly

195 200 205

Val Val Gly Cys Gly Lys Lys Ser Lys Ser Lys Asn Gly Ala Ser Pro

210 215 220

Lys Asp Gly Ser Ser Ser Gly Ser Val Asn Val Val Val Ser Pro Asn

225 230 235 240

Lys Pro Pro Cys Gly Lys Gln His Cys Ser Asn Ser Ala Asn Ser Asn

245 250 255

Glu Asn Phe Asn Gly Ser Leu Ser Val Gly Ser Ser Val Glu Phe Ala

260 265 270

Glu Glu Leu Glu Cys Ser Gly Ser Ala Asp Ala Asp Gly Ala Val Ala

275 280 285

Ala Glu Glu Glu Val Glu Val Cys Thr Ile Lys Asn Leu Asp Asn Gly

290 295 300

Lys Glu Phe Val Val Asn Glu Ile Arg Glu Asp Gly Met Trp Asn Lys

305 310 315 320

Leu Lys Glu Val Gly Thr Gly Arg Gln Leu Thr Met Glu Glu Phe Glu

325 330 335

Met Ser Val Gly His Ser Pro Ile Val Gln Glu Leu Met Arg Arg Gln

340 345 350

Asn Val Glu Asp Gly Thr Arg Gly Asn Leu Asp Ser Asn Ala Asn Gly

355 360 365

Gly Ile Gly Gly Gly Val Thr Lys Phe Lys Lys Lys Gly Gly Trp Phe

370 375 380

Gly Ser Ile Arg Ser Val Ala Asn Ser Val Thr Arg His Lys Glu Arg

385 390 395 400

Arg Ser Ser Asp Glu Arg Asp Thr Gly Ser Glu Arg Gly Gly Arg Arg

405 410 415

Ser Ser Ser Ala Thr Asp Asp Ser Gln Asp Val Ser Phe His Gly Pro

420 425 430

Glu Arg Val Arg Val Arg Gln Tyr Gly Arg Ser Ser Lys Glu Leu Ser

435 440 445

Ala Leu Phe Lys Ser Gln Glu Ile Gln Ala His Asn Gly Ser Ile Trp

450 455 460

Ser Ile Lys Phe Ser Leu Asp Gly Arg Tyr Leu Ala Ser Ala Gly Glu

465 470 475 480

Asp Cys Val Ile His Ile Trp Gln Val Lys Gln Ser Glu Arg Lys Gly

485 490 495

Glu Phe His Leu Glu Lys Lys Arg Arg Gly Arg Ser Ser Ile Ser Arg

500 505 510

Lys Ser Leu Ser Leu Asp His Ile Phe Val Pro Glu Thr Val Phe Ser

515 520 525

Leu Thr Asp Lys Pro Ile Cys Ser Phe Gln Gly His Leu Asp Asp Val

530 535 540

Leu Asp Leu Ser Trp Ser Lys Ser Gln His Leu Leu Ser Ser Ser Met

545 550 555 560

Asp Lys Thr Val Arg Leu Trp His Met Ser Ser Lys Thr Cys Leu Lys

565 570 575

Val Phe Ser His Ser Asp Tyr Val Thr Cys Ile Gln Phe Asn Pro Val

580 585 590

Asp Asp Arg Tyr Phe Ile Ser Gly Ser Leu Asp Ala Lys Val Arg Ile

595 600 605

Trp Ser Ile Pro Asp Arg Gln Val Val Asp Trp Asn Asp Leu His Glu

610 615 620

Met Val Thr Ala Ala Cys Tyr Thr Pro Asp Gly Gln Gly Ala Leu Val

625 630 635 640

Gly Ser His Lys Gly Ser Cys Arg Leu Tyr Asn Thr Ser Glu Asn Lys

645 650 655

Leu Gln Lys Lys Cys Gln Ile Asn Leu Gln Asn Lys Lys Lys Lys Ala

660 665 670

His Leu Lys Lys Ile Thr Gly Phe Gln Phe Ala Pro Gly Ser Ser Ser

675 680 685

Glu Val Leu Ile Thr Ser Ala Asp Ser Arg Ile Arg Phe Ile Asp Gly

690 695 700

Phe Asp Leu Val His Lys Phe Lys Gly Phe Arg Asn Thr Asn Ser Gln

705 710 715 720

Ile Ser Ala Ser Leu Thr Thr Asn Gly Lys Tyr Val Val Ser Ala Ser

725 730 735

Glu Asp Ser Tyr Val Tyr Val Trp Lys His Glu Ala Asp Ser Arg Leu

740 745 750

Ser Arg Ser Lys Ser Val Ala Ile Thr Arg Ser Tyr Glu His Phe Leu

755 760 765

Cys Gln Asp Val Ser Val Ala Ile Pro Trp Pro Gly Met Ala Asp Thr

770 775 780

Trp Gly Leu Gln Asp Thr Leu Ser Gly Glu Gln Asn Gly Leu Asp Asn

785 790 795 800

His Leu Asp Glu Val Ser Ile Val Asn His Pro Pro Thr Pro Val Glu

805 810 815

Glu Ala Ser Asn Glu Gly Ser Gln Ser Leu Thr Gly Cys Thr Asn Ser

820 825 830

Pro Met Asn Gly Ile Ile Ser Ser Ala Thr Asn Gly Tyr Phe Phe Asp

835 840 845

Arg Ile Ser Ala Thr Trp Pro Glu Glu Lys Leu Asp Leu Ala Thr Arg

850 855 860

Thr Arg Ser His His Ala Ser Val Asp Ile Ser Asn Gly Leu Ser Gln

865 870 875 880

Asn Ala Ser Ala Tyr Gly Met Val Ile Val Thr Ala Gly Leu Arg Gly

885 890 895

Glu Ile Arg Thr Phe Gln Asn Phe Gly Leu Pro Val Arg Ile

900 905 910

<210> 4

<211> 1146

<212> DNA

<213> 杨树(Populus spp.)

<400> 4

atggtaaggt ctcagtgctg tgataaggtg ggattgaaga aagggccatg gacgcctgaa 60

gaagaccaga agctcttggc ttatgttgaa gagcatggcc atggaagctg gcgagccttg 120

cctgccaaag ctgggcttca aagatgcggg aagagctgta gactcaggtg gactaactac 180

ctccggccag atatcaagag aggaaagttc agtttgcagg aagaacaaac aatcattcag 240

ctgcatgctc ttcttggaaa caggtggtca gtcatagcta ctcacctgcc gaaaagaact 300

gataatgaga tcaagaatta ctggaacaca catcttaaga aaagattaga caaaatgggc 360

attgatcctg tgacccataa gccaaaagct gattctttcg gctcaggaag tggccattct 420

aagggtgctg cccatttaag ccacatggct caatgggaga gtgctcggct tgaagccgaa 480

gccagattgg tccgcgagtc gaaggtgatt atacctaacc ctcccccaaa ccgactcggg 540

tccaatgctt cagctcaagt ctccgacaaa aggagtgcag ctccaccagc tagaccacag 600

tgtcttgatg tactcaaagc atggcaaggg gtggttttca gcatgttgtc ggccggctgc 660

agtgactctc tcgaatctcc aacatcaacg ttgaatttct cagaaaatga attagctatc 720

ccacttgttg gagttcagaa aaattcagcc actacactag cttttgccac aaataatgct 780

ccatgcaacg gagggacaac ggccactgaa tttaatagcg gaaatcagtt cgagtgcttt 840

gaaaaactga atgaagcagc acaggtgcaa caaaatttgg acagttcagt ggcgttgcat 900

gacataagcc cggatgctag taaccataat gcgtggtttg attctgcaac gaatgaaaac 960

gcacctatgg ggatcattga aggactttcg gaaattttgg tctgtacttc tcaggaccac 1020

aatgcgtcat ttgctggaga gaatattaac gatagctgtg gtgggaatct tgaagagaac 1080

gggaattatt ggaatagctt actcaatctg gtggatgctt ctccaactgg gacgtcacct 1140

gtgttt 1146

<210> 5

<211> 1761

<212> DNA

<213> 杨树(Populus spp.)

<400> 5

atgaggtacc cttatcagcc aggtaacatc atgaatgtgg tacaaaacct catggagaga 60

ctgaggcctc ttgtgggtgt aaaaagctgg gattattgtg ttctttggaa actgagtgag 120

gatcgaaggt atattgaatt gatggattgt tgttgcgctg ggactgagcc cactcaaaat 180

ggtggagaag accttcagtt tcctgtttct gcagtccttc cttgcaggga tgtcatgttt 240

cagcacccaa gaactaaatc ttgtgaactt cttgctcaac ttccttcttc aatgccccta 300

aactcagggt ttcatgcaca ggccctgagc tcaaacctgc ctaggtggtt aaacttctct 360

agtagctcag attcaaatgt tcttgaggaa acggttggaa ctagggccct gattccagtg 420

ccaggaggac taatggaact gttcattgct aaacaagtac ctgaagatca acatgtcata 480

gatgttgtaa catctcaatg caacttccta atggaacagg aagccatgat caactcaacc 540

aacatggatt caagtttatc aaatattgat gtgaatgtta tgagcgaaaa ccaatcaaag 600

ccatttcttg ctaatgacaa tgaacaagag gatcatcaca atttgaatat tccatatgat 660

agctcccttg atagactcca catgtctagt tctccaatga acaacttcat gcaccagttc 720

aattactgca ccgacgaaac caaaacaaaa ggcgatctct ttcaaggagt agagagtggg 780

ctacaagata tggatgattt gcagaagtcc atgatggcta atgcagaaag cacgcagatg 840

caatatatgg agtcaggttt aacaaccaag gatcaacatg gaaatgacaa agaatcaata 900

aaactagaga atgggccatc agcagaatat tcacactcgg attgcaacga tgatgaggat 960

gatgcaaagt atcggaggag gactgggaaa ggacctcaat caaaaaacct tgttgctgag 1020

aggaaaagga ggaagaagct taatgatagg ctctatgctc tccggtcctt ggttcccaac 1080

atttcaaagc tggatagggc ttccatactt ggagatgcta tcgaatttgt gaaagagctt 1140

caaaaggaag cgaaagaact ccaggatgag cttgaagaga attcagatga tgagggtgct 1200

aaaaacggga acaacaacaa tatgccacca gaaattctga accaaaatgg agttaatctt 1260

ggtgcataca ggtctgatta tgctgtgaat ggatttcatg tggaagcatc aggcattagt 1320

actgtttcaa aacaaaacca agactcggaa aattctcacg ataagggaca tcaaatggag 1380

gcgcaagtgg aagttgctca aatagatggg aatgagttct ttgttaaggt attctgtgag 1440

cacaagcctg gagggtttgt gagattaatg gaggctttgg attctcttgg cttagaagtt 1500

acaaatgcta atgtgaccag caatagaggc ctggtttcta atgtcttaaa agtagagcag 1560

aaggacagtg aaatggttca agcagactat gtaagggact ctttgctgga gttaacaaga 1620

gacccaccaa gagcgtggcc tgaaatgcct aaagcatcag agatttgctg tagtgggatg 1680

gactatcctc accatgatca ccaccagcac cacctgcaga atggccacat gaattacaac 1740

caccatcacc cccaccacct t 1761

<210> 6

<211> 2730

<212> DNA

<213> 杨树(Populus spp.)

<400> 6

atgagcagaa acgacaccac tactgacaaa aacgacggtg aagaagaaca agtagtagta 60

gtagtagaag aagaagaaga agaagaacat ttttacgagt cattggatcg cattgcttcc 120

tcttcttgtt ctacttccaa ctccgactcc gatcctgacc agacccgttc caattcccct 180

cgtcttaaca gcaaacttca tgtcagtaat tacgatgtct ggatctctca acccgaatcc 240

atctccgaac gccgccaacg ccttcttcac aacatgggtc tcagctccga cccctctctt 300

tcccgctcca aacccgaaac tacccacggt gatttttact ttaaccgctc tgtctcatcg 360

gatcgtttga ttgcagaaaa actgagtggc tcggtttcca gttgttcttc tgctatccac 420

cgatcgaaat cagacggtgg tggtggtcgt tctgtagatc atgataatga ttttaattcg 480

tgttgttctt cgtcttctgt ttattgttcg ccttcttcca ttcttttgca agattcaatt 540

aatgtaaata gtgatgacag taattataat agtaatccta ataataatat taacaacagc 600

aaactcagca ataatgaatt tggtgttgtt ggttgtggta aaaaaagcaa aagcaaaaat 660

ggggcttctc cgaaagatgg tagtagtagt ggtagtgtta atgttgttgt ttcgccgaat 720

aagccgcctt gtgggaaaca acattgtagt aactccgcga attctaatga gaattttaat 780

gggagcttgt cagttgggag ttctgtggag ttcgcggagg agttggagtg tagtgggtcg 840

gcggatgcgg atggggcagt ggcggccgag gaagaggtgg aggtttgtac tattaagaat 900

cttgataacg ggaaagagtt tgttgttaat gagataagag aggatgggat gtggaataag 960

ttgaaggaag ttgggaccgg gaggcaattg acaatggagg agttcgaaat gtctgttggg 1020

cattcgccca tcgtgcaaga attgatgagg aggcaaaatg tggaggatgg gacgagagga 1080

aatcttgatt ccaatgctaa tggaggaatt ggaggtgggg ttacaaagtt taaaaagaag 1140

ggtggttggt ttgggagtat aaggagtgtg gcgaatagtg tgacaaggca taaggagagg 1200

agaagtagtg atgagaggga tactggatcg gagaggggag ggaggaggtc aagttctgct 1260

acggatgata gccaggatgt gtcatttcat ggaccagaga gagtgagggt gagacaatat 1320

gggaggtcgt ctaaagagtt gagtgcactt tttaagagtc aggagataca ggctcataat 1380

gggtctatct ggagtatcaa gttcagtttg gatgggaggt atctagcaag cgcaggtgag 1440

gattgtgtaa ttcacatttg gcaggttaag cagtcagaga ggaaaggaga gtttcatctg 1500

gagaagaaga ggagagggag gtcatctata agcagaaaat ctctgagctt ggaccacatc 1560

ttcgtgccag agacagtgtt ttctctcacg gataaaccca tttgttcatt ccaaggacat 1620

cttgatgacg tgcttgacct ttcatggtcc aagtctcagc acctgctttc ttcttctatg 1680

gacaaaacag tgcgactgtg gcacatgtct agcaaaactt gtttgaaagt cttttctcac 1740

agtgattatg taacatgcat ccagtttaat cctgtggatg atagatactt cattagtggg 1800

tcattagatg caaaagttcg catttggagc attcctgatc gtcaagttgt tgattggaat 1860

gatctgcatg agatggtcac tgctgcttgc tatactccag atggtcaggg tgcacttgtt 1920

ggttcacaca agggaagctg tcgtttatac aacacatctg agaataagtt gcaaaaaaaa 1980

tgtcaaatta atctgcagaa taagaagaag aaagctcatc taaaaaaaat cactggattc 2040

cagtttgccc ctggaagttc atcagaagtg ctaatcacat cagcagattc tcgaattcga 2100

ttcattgatg gctttgatct ggttcacaag ttcaaagggt ttcgtaacac caacagccaa 2160

atctcagcat ccctcacaac aaatggaaaa tacgtggtct ctgctagtga ggattcatat 2220

gtttatgtgt ggaagcatga agctgattcc cgacttagca gaagcaaaag tgttgctatc 2280

acacgctcat atgagcattt cctttgtcaa gatgtatcag tggccatccc atggcctggc 2340

atggcagaca cttggggact acaagatact ttatcaggag aacagaatgg ccttgataac 2400

catcttgatg aagtttccat tgtcaatcac cctccaactc ctgttgagga agcaagtaat 2460

gagggttcac aatctttaac tgggtgcacc aatagtccca tgaatggaat tatttctagt 2520

gcaaccaatg gttacttttt tgacagaata tcagcaacat ggccggagga aaagcttgat 2580

ttagcgacaa gaacaaggag tcatcatgcc agtgtggata tctccaatgg gttaagccaa 2640

aatgcgtctg cctatggtat ggtgattgta actgccggcc ttagagggga aatcagaact 2700

ttccaaaatt tcggattgcc agttcgaatt 2730

Claims

1.一种MBW复合体蛋白，其特征在于，所述MBW复合体蛋白由蛋白PdeMIXTA、蛋白PdeMYC、蛋白PdeWD40相互作用形成，所述蛋白PdeMIXTA的氨基酸序列为SEQ IDNO.1，所述蛋白PdeMYC的氨基酸序列为SEQ IDNO.2，所述蛋白PdeWD40的氨基酸序列为SEQ IDNO.3。

2.根据权利要求1所述的MBW复合体蛋白，其特征在于，所述蛋白PdeMIXTA的编码核苷酸序列为SEQ IDNO.4，所述蛋白PdeMYC的编码核苷酸序列为SEQ IDNO.5，所述蛋白PdeWD40的编码核苷酸序列为SEQ IDNO.6。

3.根据权利要求1所述的MBW复合体蛋白，其特征在于，所述MBW复合体蛋白的氨基酸末端连接有标签序列。

4.一种与权利要求1所述MBW复合体蛋白相关的生物材料，其特征在于，为下述A1)至A8)中的任一种：

A1) 编码权利要求1-3任一所述MBW复合体蛋白的核酸分子；

A2) 含有A1)所述核酸分子的表达盒；

A3) 含有A1)所述核酸分子的重组载体；

A4) 含有A2)所述表达盒的重组载体；

A5) 含有A1)所述核酸分子的重组微生物；

A6) 含有A2)所述表达盒的重组微生物；

A7) 含有A3)所述重组载体的重组微生物；

A8) 含有A4)所述重组载体的重组微生物。

5.权利要求1-3任一所述的MBW复合体蛋白或权利要求4所述的生物材料在正向调控杨絮生长发育中的应用。