CN114807247A - 路比利丝孢酵母在催化柠檬醛生成右旋香茅醛中的应用及制备左旋异胡薄荷醇的方法 - Google Patents

路比利丝孢酵母在催化柠檬醛生成右旋香茅醛中的应用及制备左旋异胡薄荷醇的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了路比利丝孢酵母(Trichosporon loubierii)在选择性催化柠檬醛生成右旋香茅醛中的应用，所述路比利丝孢酵母的保藏号为CGMCC 1292。并公开了制备左旋异胡薄荷醇的方法。本发明的来源于路比利丝孢酵母CGMCC 1292的柠檬醛烯键还原酶催化剂对顺/反式柠檬醛均具有高度的立体选择性，产物右旋香茅醛的光学纯度优于现有报道。在此基础上，将柠檬醛烯键还原酶反应步骤与其产物右旋香茅醛的金属催化环化反应步骤进行有机串联耦合在一起，减少了有机溶剂的消耗，工艺更加简单，产品光学纯度好，具有较好的工业应用前景。

Description

路比利丝孢酵母在催化柠檬醛生成右旋香茅醛中的应用及制 备左旋异胡薄荷醇的方法
技术领域
本发明属于生物与化学工程技术领域，更具体的涉及路比利丝孢酵母在选择性催化柠檬醛生成右旋香茅醛中的应用，以及利用该路比利丝孢酵母耦联化学环化催化剂制备左旋异胡薄荷醇的方法。
背景技术
L-薄荷醇俗称薄荷脑，作为一种天然来源的香精、香料，具有显著的清凉特性，广泛应用于日化、烟草、食品以及医药卫生领域，全球年需求量多达4万吨。然而，天然提取的L-薄荷醇需要占用大量耕地，其产量受气候影响波动很大，无法满足市场需求，因此目前市场上供应的薄荷醇中有大约30％是通过化学合成法生产的。
巴斯夫、高砂和德之馨公司独立开发了各自的L-薄荷醇化学合成工艺。其中巴斯夫公司和高砂公司采用不对称合成法，分别以潜手性的柠檬醛和月桂烯为原料，通过贵金属手性配体催化剂以及系列化学转化合成单一构型的右旋香茅醛，然后通过溴化锌催化的环化反应得到(-)-异胡薄荷醇，最后催化加氢得到L-薄荷醇。而德之馨公司则采用对映体结晶拆分的工艺，以廉价的间甲酚为原料，通过化学转化得到薄荷醇的八种异构体，精馏分离获得消旋的薄荷醇，然后酰化生成薄荷醇苯甲酸酯，加入单一构型的L-薄荷醇苯甲酸酯诱导结晶，最后水解或醇解获得高纯度的L-薄荷醇。结晶拆分工艺复杂繁琐，并且无用的D-薄荷醇需要进行消旋化后循环套用，相对效率较低；与之相比，不对称合成工艺具有更高的效率和成本优势。
从现有的工业化L-薄荷醇不对称合成路线可以看出，单一构型的右旋香茅醛是L-薄荷醇合成的关键中间体。化学不对称合成法需要使用昂贵的贵金属手性配体催化剂，并且由于催化剂的局限性，需要对原料进行衍生化之后才能获得催化反应的底物，而反应产物也需要通过额外的化学转化步骤才能得到所需的右旋香茅醛，工艺相对比较复杂。
柠檬醛具有顺反异构体，其中顺式柠檬醛又称橙花醛，反式薄荷醛又称香叶醛。有一些烯还原酶可以催化柠檬醛的共轭烯键还原生成右旋香茅醛，但其立体选择性不高。例如，应向贤等以顺/反-柠檬醛混合物为底物，使用面包酵母烯醇还原酶催化柠檬醛转化，产物右旋香茅醛的光学纯度仅16.7％；通过耦联氨基酸催化的顺反异构化反应，产物的光学纯度可提高到65.4％(CN 106086089 B)。林金萍等以顺/反-柠檬醛为底物，以纯化的面包酵母烯还原酶催化柠檬烯转化，其中由橙花醛转化生成的右旋香茅醛光学纯度仅26.5％；经过反应优化后，200mM顺/反-柠檬醛混合物能实现完全转化，产物右旋香茅醛光学纯度提升至88.8％ee(Bioresour.Bioprocess.,2018,5:9)。
迄今报道的烯还原酶对香叶醛具有较高的立体选择性，而对橙花醛的立体选择性普遍不高，导致以顺/反柠檬醛的混合物为反应底物时，产物的光学纯度不高。
发明内容
1、发明目的。
本发明提出了路比利丝孢酵母(Trichosporon loubierii)在选择性催化柠檬醛生成右旋香茅醛中的应用。
2、本发明所采用的技术方案。
本发明公开了路比利丝孢酵母(Trichosporon loubierii)在选择性催化柠檬醛生成右旋香茅醛中的应用，所述路比利丝孢酵母菌株目前已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号CGMCC 1292，保藏日为2005年1月17日，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
本发明还公开了一种制备左旋异胡薄荷醇的方法，其特征在于其步骤包括：
(1)使用来源于权利要求1所述的路比利丝孢酵母的柠檬醛还原酶催化剂不对称还原柠檬醛的共轭烯键，生成右旋香茅醛，反应式如下
Figure BDA0003623896150000031
(2)使用疏水性有机溶剂对步骤(1)的反应液进行萃取，分离收集萃取液并干燥，得到右旋香茅醛的有机溶液；
(3)将金属氧化物催化剂加入如步骤(2)所述含右旋香茅醛的有机溶液中，催化右旋香茅醛发生环化反应，制得左旋异胡薄荷醇。
其中所述的使用柠檬醛还原酶催化剂催化柠檬醛共轭烯键不对称还原的具体步骤为：酶促不对称还原反应在pH为7～9的缓冲体系中，25～40℃条件下进行，底物柠檬醛浓度为1～200mM。反应过程中NADPH的氢离子转移到柠檬醛上生成右旋香茅醛，NADPH可以直接添加，也可以添加葡萄糖、NADP+和葡萄糖脱氢酶，葡萄糖脱氢酶催化葡萄糖与NADP+反应，反应过程中葡萄糖氧化，而NADP+还原转化为NADPH，所述葡萄糖脱氢酶可参考文献：Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology 2011,38,633-641。鉴于整细胞或其破碎液内自身通常含有少量NADP+/NADPH和葡萄糖脱氢酶，因此反应可以在添加葡萄糖后直接进行。如果需要加快反应，可以采用外加NADPH的方式，或者外加葡萄糖、NADP+和葡萄糖脱氢酶的方式。葡萄糖的摩尔浓度是柠檬醛的1.05～2倍，外加NADP+的浓度为0～1mM，柠檬醛烯键还原酶催化剂的上载量为1～10kU/L，葡萄糖脱氢酶的上载量为0～10kU/L。反应时间为1～12h，间歇取样，进行气相色谱分析，直至产物浓度不再持续上升时终止反应，按常规方法提取回收反应生成的光学活性香茅醛。其中底物柠檬醛可以预先溶解于水溶性有机溶剂，如甲醇、乙醇、异丙醇或二甲基亚砜中，水溶性有机溶剂在反应体系中的体积比为1～10％(v/v)。
优选的，所述柠檬醛还原酶催化剂为如下任意一种形式：
A、权利要求1所述的路比利丝孢酵母的培养物。
B、从如A所述培养物中分离所得的细胞；
所述细胞可以采用如下方法制备得到：
将路比利丝孢酵母CGMCC 1292在灭菌(121℃，20min)的丰富培养基(葡萄糖1％，蛋白胨0.5％，牛肉膏0.8％，pH 7.0，琼脂1.5％)斜面上划线，于30℃静置培养1-2天。
取一环斜面菌种，接入适量种子培养基(葡萄糖1％，蛋白胨0.5％，牛肉膏0.8％，pH 7.0)中，25～37℃培养24～48小时。再以该培养液作为种子接种至发酵培养基中，基于发酵培养基体积的接种量为1～10％(v/v)，在25～37℃、150～250rpm摇床上培养24～48小时，培养结束后离心得到静息湿细胞。
所述的发酵培养基可采用常规的培养基，只要所述菌株路比利丝孢酵母CGMCC1292生长良好，并且有效表达所述柠檬烯还原酶即可，较优的，各组分及含量如下：葡萄糖10～50g/L，牛肉膏1～20g/L，蛋白胨1～20g/L，KH2PO4 1～10g/L，Na2HPO4 1～10g/L，NaCl0.1～2g/L，MgSO4 0.1～2g/L，pH 5-8。
C、对如B所述的细胞进行破碎，分离所得的无细胞提取物；
无细胞提取物可以采用如下方法制备：
称取收获的湿细胞，悬浮于5～20倍体积质量比(v/w)的Tris-HCl缓冲液(100mM,pH 7.0)中，对细胞进行破碎处理。所述细胞破碎方法是本领域常用方法，较优的，使用高压匀浆处理的方法进行细胞破碎，将细胞悬浮液冰水浴冷却，使用高压匀浆机进行破碎，破碎压力为1800bar，第一次破碎液在冰水浴冷却状态下再进行第二次破碎，总共破碎两次。将破碎液在4℃，10000rpm高速离心，获得的上清液即为无细胞提取物。
无细胞提取物中的柠檬醛还原酶活力测定：
将含2mmol/L橙花醛和0.1mmol/L NADPH的1mL反应体系(100mmol/L Tris-HCl缓冲液，pH 8.0)预热至30℃，然后加入适量的无细胞提取物，30℃保温反应，在分光光度计上检测340nm处NADPH的吸光度变化，记录1分钟内吸光度的变化值。
按上述方法测定所述柠檬烯还原酶的活力时，可用下式计算得到酶活力：
酶活力(U)＝EW×V×103/(6220×l)
式中，EW为1分钟内340nm处吸光度的变化；V为反应液的体积，单位为mL；6220为NADPH的摩尔消光系数，单位为L/(mol·cm)；l为光程距离，单位为cm。1个单位(U)对应于上述条件下每分钟氧化1μmol NADPH所需的酶量。
D、对如C所述的无细胞提取物进行干燥，制备所得的粗酶粉。
粗酶粉的制备方法：
将制备的无细胞提取物置于-80℃冰箱中快速冷冻，然后在冷冻干燥机中，在低温下进行冷冻干燥，获得粗酶粉制剂，可以方便地保存和应用。
优选的，所述柠檬醛具有顺式和/或反式的结构，分别如结构式1和2所示：
Figure BDA0003623896150000061
所述柠檬醛是如结构式1和2所示化合物中的任意一种，或是如结构式1和2所示化合物的任意比例混合物。
优选的，步骤(2)中所述的疏水性有机溶剂是环己烷、甲苯、氯苯、异辛烷、二氯甲烷中的一种或数种的混合物。
优选的，步骤(3)中所述金属氧化物催化剂的制备方法为：将金属盐溶液与无机载体混合，其中所述无机载体与溶液的质量体积比为1:3～1:10(w/v)，金属盐与无机载体的质量比为1:10～1:100(w/w)。混合物在室温下充分搅拌1～12h，抽滤，滤饼用纯水洗涤，然后悬浮于3～10倍体积质量比的硼酸溶液中，金属盐与硼酸的质量比为1:1～1:10。混合物在室温下充分搅拌1～12h，抽滤，滤饼用纯水洗涤，然后置于马弗炉中高温灼烧，灼烧温度为400～700℃，灼烧时间为1～10h，灼烧产物研磨粉碎，即得所述金属氧化物催化剂。其中所述无机载体为沸石粉或硅藻土。所述金属盐溶液中的金属为铝、钴、镍、铜、锌、锡、锑中的一种，金属盐为氯化盐、溴化盐、硝酸盐或硫酸盐。
将所述金属氧化物催化剂加入获得的右旋香茅醛有机溶液中，搅拌反应，所述金属氧化物催化剂与右旋香茅醛的质量为10:1～1:20(w/w)，反应温度为40～100℃，反应时间以底物完全转化或底物转化率不再继续上升为准。反应结束后，将反应悬浮液抽滤，滤饼用与反应介质相同的有机溶剂洗涤2～3次，回收所得的金属氧化物催化剂粉末可以重复使用。合并滤液，采用常规方法蒸发除去有机溶剂，得到(-)-异胡薄荷醇的粗产品，进一步通过减压蒸馏、精馏或重结晶等方法，即可得到高纯度的(-)-异胡薄荷醇。
3、本发明所产生的技术效果。
与现有技术相比，本发明的来源于路比利丝孢酵母CGMCC 1292的柠檬醛烯键还原酶催化剂对顺/反式柠檬醛均具有高度的立体选择性，产物右旋香茅醛的光学纯度优于现有报道。在此基础上，将柠檬醛烯键还原酶反应步骤与其产物右旋香茅醛的金属催化环化反应步骤进行有机串联耦合在一起，减少了有机溶剂的消耗，工艺更加简单，产品光学纯度好，具有较好的工业应用前景。
具体实施方式
实施例1路比利丝孢酵母CGMCC 1292湿细胞的制备
种子液培养基配方：葡萄糖1％，蛋白胨0.5％，牛肉膏0.8％，pH7.0。121℃高温灭菌20min。
发酵培养基配方：葡萄糖15g/L，牛肉膏8g/L，蛋白胨5g/L，KH2PO4 2.0g/L，Na2HPO42.0g/L，NaCl 0.5g/L，MgSO4 0.5g/L，pH 7.0。121℃高温灭菌20min。
取4℃保藏的路比利丝孢酵母CGMCC 1292的斜面，挑取一环接种至装有50mL种子液培养基的250mL的摇瓶中。在30℃下，200rpm摇床培养24h，按5％(v/v)的接种量转接至装有300mL发酵培养基的1L摇瓶中，于30℃、200rpm继续培养36h，离心收获湿细胞。
实施例2路比利丝孢酵母CGMCC 1292粗酶粉的制备
称取100g实施例1收获的细胞，悬浮于1L的Tris-HCl缓冲液(100mM,pH 8.0)中，冰水浴冷却。细胞悬浮液使用高压匀浆机进行细胞破碎，压力为1800bar，破碎两次。破碎液于4℃、15000rpm离心10min，获得澄清离心上清液，即为无细胞提取液。将无细胞提取液置于-80℃冰箱中快速冷冻，然后使用冷冻干燥机进行冷冻干燥，获得冻干粗酶粉。
实施例3路比利丝孢酵母柠檬醛烯键还原酶催化立体选择性的测定
在2mL Eppendorf管中加入100μL如实施例2所述的无细胞提取液，10μL橙花醛或香叶醛的甲醇溶液(100mM)，20μL NADPH水溶液(100mM)以及870μL的Tris-HCl缓冲液(100mM,pH 8.0)，置于振荡混匀仪上，30℃、1000rpm振荡反应2h。用等体积乙酸乙酯萃取三次，萃取液中加入无水硫酸钠干燥，通过带有手性色谱柱的气相色谱仪检测产物香茅醛的立体构型以及光学纯度。
所用气相色谱柱为BGB-174手性色谱柱，30m×0.25mm×0.25μm，进样器和检测器温度为250℃，初始柱温为40℃，以4℃/min的速率升温至120℃，维持1min，再以20℃/min的速率升温至180℃，维持3min。左旋香茅醛、右旋香茅醛、橙花醛和香叶醛的出峰时间分别为22.2、22.3、24.5和25.1min。检测结果表明，橙花醛和香叶醛都能转化生成右旋香茅醛，ee值分别为98.7％和99.5％。
实施例4利用路比利丝孢酵母整细胞催化柠檬醛共轭烯键的不对称还原
反应在2-L机械搅拌反应釜中进行，取100g如实施例1所述的湿细胞，悬浮于950mL的Tris-HCl缓冲液(100mM，pH 8.0)中，加入50mL顺/反柠檬醛的甲醇溶液(其中：顺/反-柠檬醛的比例为1:1，总浓度为1M)，加入18g葡萄糖。30℃，200rpm搅拌反应，反应过程中滴加2M碳酸钠溶液维持pH为8.0。反应24h，转化率为97.1％，产物右旋香茅醛的ee值为99.2％。
实施例5路比利丝孢酵母柠檬醛烯键还原酶催化的柠檬醛不对称还原
反应在2-L机械搅拌式反应釜中进行，取50g如实施例2所述的粗酶粉以及10kU葡萄糖脱氢酶，溶解于900mL Tris-HCl缓冲液(100mM，pH 8.0)中，加入100mL顺/反柠檬醛的甲醇溶液(顺/反柠檬醛的比例为1:1，总浓度为2M)，加入37.8g葡萄糖，1mmol辅酶NADP+，于25℃和200rpm搅拌反应，反应过程中自动滴加2M碳酸钠溶液维持pH为8.0。反应12h，转化率>99％，产物右旋香茅醛的ee值为99.1％。反应结束后，加入500mL甲苯进行产物萃取，分离收集有机相萃取液，在残余水相中再次加入500mL甲苯萃取，合并有机相萃取液，加入无水硫酸钠干燥过夜，得到右旋香茅醛的甲苯溶液。
实施例6金属氧化物催化剂的制备及催化右旋香茅醛转化生成左旋异胡薄荷醇
如表1所示，将1g相应的金属盐溶解于50mL纯净水中，加入10g沸石粉，混合物200rpm，室温搅拌2h，抽滤，滤饼用纯水洗涤。收集滤饼，悬浮于50mL硼酸溶液(10％,w/v)中，在200rpm、室温搅拌2h，抽滤，滤饼用纯水洗涤，置于马弗炉中600℃灼烧5h，灼烧产物研磨粉碎，得到金属盐分散于沸石粉的金属氧化物催化剂。
称取1g如上所述的金属氧化物催化剂，加入100mL如实施例5获得的右旋香茅醛的甲苯溶液，80℃、200rpm搅拌反应6h，检测反应产物中异胡薄荷醇的浓度。
气相分析色谱柱为BGB-174手性色谱柱，30m×0.25mm×0.25μm，进样器和检测器温度为250℃，初始柱温为40℃，以4℃/min的速率升温至120℃，维持3min，再以20℃/min的速率升温至180℃，维持5min。左旋异胡薄荷醇出峰时间为28.3min。结果如表1所示：
表1金属氧化物催化剂的金属盐组分与催化效果
Figure BDA0003623896150000111
实施例7金属氧化物催化剂的制备及催化香茅醛转化生成左旋异胡薄荷醇
将0.1g的硫酸锡溶解于50mL纯净水中，加入10g沸石粉，混合物在200rpm、室温搅拌吸附2h，抽滤，滤饼用纯水洗涤。收集滤饼，悬浮于50mL硼酸溶液(2％,w/v)中，在200rpm、室温搅拌反应2h，抽滤，滤饼用纯水洗涤，置于马弗炉中400℃灼烧5h，灼烧产物研磨粉碎。
称取30g如上所述的金属氧化物催化剂，加入100mL如实施例5获得的右旋香茅醛的甲苯溶液，于60℃、200rpm搅拌反应5h，反应产物中左旋异胡薄荷醇的浓度为176mM，光学纯度>99％ee。
实施例8金属氧化物催化剂的制备及催化香茅醛转化制备左旋异胡薄荷醇
将1g硝酸锡溶解于50mL纯净水中，加入10g沸石粉，混合物在200rpm、室温搅拌吸附2h，抽滤，滤饼用纯水洗涤。收集滤饼，悬浮于50mL硼酸溶液(20％,w/v)中，于200rpm、室温再次搅拌反应2h，抽滤，滤饼用纯水洗涤，置于马弗炉中700℃灼烧5h，灼烧产物研磨粉碎。
称取0.15g如上所述的金属氧化物催化剂，加入100mL如实施例5获得的右旋香茅醛的甲苯溶液，于100℃、200rpm搅拌反应6h，反应产物中左旋异胡薄荷醇的浓度为183mM，光学纯度>99％ee。
实施例9金属氧化物催化剂的制备及催化右旋香茅醛转化制备左旋异胡薄荷醇
将1g硝酸锡溶解于50mL纯净水中，加入10g硅藻土，混合物在200rpm、室温搅拌吸附2h，抽滤，滤饼用纯水洗涤。收集滤饼，悬浮于50mL硼酸溶液(20％,w/v)中，再次在200rpm、室温搅拌反应2h，抽滤，滤饼用纯水洗涤，置于马弗炉中600℃灼烧5h，灼烧产物研磨粉碎。
称取1g如上所述的金属氧化物催化剂，加入100mL如实施例5获得的右旋香茅醛的甲苯溶液，80℃、200rpm搅拌反应6h，反应产物中左旋异胡薄荷醇的浓度为138mM，光学纯度98.7％ee。
实施例10-12化学-酶法合成左旋异胡薄荷醇
反应在2L机械搅拌反应釜中进行，取50g如实施例2所述的粗酶粉以及10kU葡萄糖脱氢酶，溶解于900mL Tris-HCl缓冲液(100mM，pH 8.0)中，加入100mL顺/反-柠檬醛的甲醇溶液(顺/反柠檬醛的比例为1:1，总浓度为2M)，加入37.8g葡萄糖，1mmol辅酶NADP+，于25℃、200rpm搅拌反应，反应过程中自动滴加2M碳酸钠溶液维持pH为8.0，反应共持续12h。反应结束后，分别用等体积的环己烷、氯苯或异辛烷进行萃取，萃取液中加入无水硫酸钠干燥过夜，得到右旋香茅醛的有机溶液。
称取1g如实施例6获得的的金属氧化物催化剂Sn-S，加入100mL不同有机溶剂的右旋香茅醛溶液中，80℃、200rpm搅拌反应2h，反应产物中左旋异胡薄荷醇的浓度如表2所示。
表2不同有机溶剂对金属氧化物催化剂催化环化反应效果的影响
Figure BDA0003623896150000131
Figure BDA0003623896150000141
实施例13化学-酶法合成左旋异胡薄荷醇
反应在2L机械搅拌反应釜中进行，取50g如实施例2所述的粗酶粉以及10kU葡萄糖脱氢酶，溶解于900mL的Tris-HCl缓冲液(100mM，pH 8.0)中，加入100mL顺/反-柠檬醛的甲醇溶液(顺/反柠檬醛的比例为1:1，浓度为2M)，加入37.8g葡萄糖，1mmol的辅酶NADP+，25℃，200rpm搅拌反应，反应过程中自动滴加2M碳酸钠溶液维持pH为8.0。反应持续12h，然后取反应液用等体积二氯甲烷进行萃取，萃取液中加入无水硫酸钠干燥过夜，得到右旋香茅醛的二氯甲烷。
称取1g如实施例6获得的金属氧化物催化剂Sn-S，加入100mL右旋香茅醛的二氯甲烷中，40℃、200rpm搅拌反应10h，反应产物中左旋异胡薄荷醇的浓度为118mM。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (11)

1.路比利丝孢酵母(Trichosporon loubierii)在选择性催化柠檬醛生成右旋香茅醛中的应用，其特征在于：所述路比利丝孢酵母的保藏号为CGMCC 1292。
2.一种制备左旋异胡薄荷醇的方法，其特征在于其步骤包括：
(1)使用来源于权利要求1所述的路比利丝孢酵母的柠檬醛还原酶催化剂不对称还原柠檬醛的共轭烯键，生成右旋香茅醛；
(2)使用疏水性有机溶剂对步骤(1)的反应液进行萃取，分离收集萃取液并干燥，得到右旋香茅醛的有机溶液；
(3)将金属氧化物催化剂加入如步骤(2)所述含右旋香茅醛的有机溶液中，催化右旋香茅醛发生环化反应，制得左旋异胡薄荷醇。
3.根据权利要求2所述的制备左旋异胡薄荷醇的方法，其特征在于：所述柠檬醛还原酶催化剂为如下任意一种形式：
A、权利要求1所述的路比利丝孢酵母的培养物；
B、从如A所述培养物中分离所得的细胞；
C、对如B所述的细胞进行破碎，分离所得的无细胞提取物；
D、对如C所述的无细胞提取物进行干燥，制备所得的粗酶粉。
4.根据权利要求2所述的制备左旋异胡薄荷醇的方法，其特征在于：所述柠檬醛具有顺式和/或反式的结构，分别如结构式1和2所示：
Figure FDA0003623896140000011
所述柠檬醛是如结构式1和2所示化合物中的任意一种，或是如结构式1和2所示化合物的任意比例混合物。
5.根据权利要求2所述的制备左旋异胡薄荷醇的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的疏水性有机溶剂是环己烷、甲苯、氯苯、异辛烷、二氯甲烷中的一种或数种的混合物。
6.根据权利要求2所述的制备左旋异胡薄荷醇的方法，其特征在于：步骤(3)中所述金属氧化物催化剂的制备方法为：将金属盐溶液与无机载体混合，搅拌、抽滤，将滤饼悬浮于硼酸溶液中，充分搅拌后抽滤，所得滤饼置于马弗炉中灼烧反应之后，研磨成粉。
7.根据权利要求7所述的，其特征在于：金属盐与无机载体的质量比为1:10～1:100，金属盐与硼酸的质量比为1:1～1:10，高温灼烧温度为400～700℃。
8.根据权利要求7所述的，其特征在于：所述金属盐溶液中的金属为铝、钴、镍、铜、锌、锡、锑中的一种，金属盐为氯化盐、溴化盐、硝酸盐或硫酸盐，所述无机载体为沸石粉或硅藻土。
9.根据权利要求2所述的制备左旋异胡薄荷醇的方法，其特征在于：所述金属氧化物催化剂与右旋香茅醛的质量比为10:1～1:20。
10.根据权利要求2所述的制备左旋异胡薄荷醇的方法，其特征在于：步骤(1)中在柠檬醛还原生成右旋香茅醛的过程中，添加NADPH。
11.根据权利要求2所述的制备左旋异胡薄荷醇的方法，其特征在于：步骤(1)中在柠檬醛还原生成右旋香茅醛的过程中，添加葡萄糖、NADP+和葡萄糖脱氢酶。
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