CN114806923A - 一种β-胡萝卜素菌粉及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及菌粉的制备技术领域，尤其涉及一种β‑胡萝卜素菌粉及其制备方法，针对当前现有的菌粉自身含有的营养元素较少，且由于菌粉的制备过程复杂导致菌粉产量较低的问题，现提出如下方案，其中一种β‑胡萝卜素菌粉的制备方法包括以下步骤：S1：原料准备，S2:进行活化，S3：诱导处理,S4：复筛及发酵处理，S5：制成菌粉，本发明的目的是通过对诱导发酵过程进行实时监控，提高了诱导发酵的成功率，同时将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，提高了菌粉的成品率。
Description
技术领域
本发明涉及菌粉的制备技术领域，尤其涉及一种β-胡萝卜素菌粉及其制备方法。
背景技术
β-胡萝卜素具有防止衰老和增强免疫力等作用，也是重要的色素，是联合国粮农组织和世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会认定的A类优秀有营养的食品添加剂。全世界已有52个国家、地区批准使用，国际上需求量在1000吨以上，年增长率达10～15％。同时菌粉含有对人体健康有益的微生物，能维持人体健康。
但是目前现有的菌粉自身含有的营养元素较少，且由于菌粉的制备过程复杂导致菌粉产量较低的问题，因此，我们提出一种β-胡萝卜素菌粉及其制备方法用于解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前现有的菌粉自身含有的营养元素较少，且由于菌粉的制备过程复杂导致菌粉产量较低等问题，而提出的一种β-胡萝卜素菌粉及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种β-胡萝卜素菌粉，包括以下重量份的原料：野生型水生黄杆菌80-100份、无菌磷酸缓冲液20-40份、葡萄糖20-30份、酵母浸粉10-20份、硫酸镁20-30份；
优选的，包括以下重量份的原料：野生型水生黄杆菌90-100份、无菌磷酸缓冲液20-30份、葡萄糖20-25份、酵母浸粉15-20份、硫酸镁20-25份；
本发明还提出一种β-胡萝卜素菌粉的制备方法，包括以下步骤：
S1：原料准备：选取符合要求的初始菌株，并对初始菌株进行培养；
S2：进行活化：将培养后的菌株转接至豆饼斜面培养基中进行活化；
S3：诱导处理：将活化后的菌株进行通过紫外线照射处理进行菌株诱导处理，并对菌株进行初筛；
S4：复筛及发酵处理：将初筛后的菌株进行复筛获得二次优良菌株，并将获得的二次优良菌株进行发酵处理；
S5：制成菌粉：将获得的二次优良菌株进行扩大生产，并将生产出的菌株进行处理制成菌粉；
优选的，所述S1中，从自然界分离到的野生型水生黄杆菌，由专业人员选取符合要求的水生黄杆菌作为初始菌株，其中选取要求为选取的菌落呈半透明、光滑且有光泽、全缘、圆形的直径在1-2nm，且菌落表面存在隆起，并将获取的水生黄杆菌放在血琼脂平板上，在30℃温度下进行培养48h；
优选的，所述S2中，取出培养后的菌株转接至豆饼斜面培养基中，在30℃环境中培养3-5天进行活化，活化完成后将菌株放至装有1mL 0.lmol/L的无菌磷酸缓冲液的三角瓶中，其中所述无菌磷酸缓冲液pH为6.0，所述三角瓶瓶底铺满玻璃珠，在30℃环境中振荡30min，振荡完成后用垫有脱脂棉的灭菌漏斗进行过滤，制成菌悬液，并将其浓度调为106-108个/mL，冷冻保藏备用；
优选的，所述S3中，通过紫外线照射处理进行菌株诱导处理，进行菌株诱导处理前先打开紫外灯预热20min，预热完成后取5mL菌悬液放在无菌的培养皿中，同时制作5份相同培养皿进行逐一相同操作，将培养皿平放在离紫外灯垂直距离为30cm处的磁力搅拌器上，用紫外线照射培养皿表面lmin后打开培养皿盖进行紫外线照射处理，且进行紫外线照射处理的同时打开磁力搅拌器进行搅拌，将制备得5份相同培养皿分别照射15s、30s、lmin、2min、5min，照射完成后，将诱变菌液在黑暗冷冻中保存1-2h，保存完成后有专业人员进行稀释涂布法进行初筛，所述初筛是通过观察在菌落周围出现的透明圈大小，并测量其菌落直径与透明圈直径之比，选择比值大且菌落直径大的菌落40-50个作为复筛菌株；
优选的，所述S4中，进行复筛时将稀释菌悬液按10倍稀释至106进行平板复筛，所述平半复筛是从105和106中各取出0.lmL加入到酪素培养基平板中，其中每个稀释度均做3个重复，进行涂菌并静置，并在每个平板皿的背面用红笔划线分区，从圆心划线至周边分成8等份，1-7份中点种初筛菌株，第8份点种原始菌株作为对照，待菌液渗入培养基后进行倒置，同时放置于30℃恒温环境中培养2-3天，其中培养完成后由专业人员进行观察，观察时出现透明圈则按初筛方法进行检测获得数株二次优良菌株，将获得的二次优良菌株采用液体深层发酵技术，并加入葡萄糖、酵母浸粉和硫酸镁进行发酵处理，观察时未出现透明圈则进行菌株检测并判断，观察时未出现透明圈则进行菌株检测，所述菌株检测是将平板复筛后的菌株与氧化酶进行接触试验，试验结果呈阳性则判定为菌株未污染，试验结果呈阴性则判定为菌株污染，判定为菌株未污染则由专业人员对菌株进行处理，判定为菌株污染则由专业人员对菌株进行处理并重新进行初始菌株选取，选取后进行相同菌株诱导、发酵处理以及菌株筛选，所述诱导发酵过程采用在线监控技术进行诱导发酵环境的实时监控，通过温度传感器对发酵环境的温度进行实时监控，并通过计算机进行温度数据进行收集，计算机收集到温度数据后，将温度数据与设定的温度数据范围进行对比，对比结果显示在数据范围内则进行继续诱导发酵过程，对比结果显示不在数据范围内则由计算机发布命令控制无菌冷热气流进入诱导发酵环境；
优选的，所述S5中，将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，将生产出的菌株进行采摘，并用清水进行冲洗，冲洗完成后进行自然晾晒，并由专业人员进行定期检验水含量，水含量低于5％停止晾晒，将晾晒后的菌株进行研磨制成菌粉。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、通过对诱导发酵过程进行实时监控，提高了诱导发酵的成功率。
2、将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，提高了菌粉的成品率。
本发明的目的是通过对诱导发酵过程进行实时监控，提高了诱导发酵的成功率，同时将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，提高了菌粉的成品率。
附图说明
图1为本发明提出的一种β-胡萝卜素菌粉及其制备方法的流程图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例一
参照图1，一种β-胡萝卜素菌粉，包括以下重量份的原料：野生型水生黄杆菌95份、无菌磷酸缓冲液25份、葡萄糖23份、酵母浸粉18份、硫酸镁23份；
其制备方法包括以下步骤：
S1：原料准备：从自然界分离到的野生型水生黄杆菌，由专业人员选取符合要求的水生黄杆菌作为初始菌株，其中选取要求为选取的菌落呈半透明、光滑且有光泽、全缘、圆形的直径在1-2nm，且菌落表面存在隆起，并将获取的水生黄杆菌放在血琼脂平板上，在30℃温度下进行培养48h；
S2：进行活化：取出培养后的菌株转接至豆饼斜面培养基中，在30℃环境中培养3-5天进行活化，活化完成后将菌株放至装有1mL0.lmol/L的无菌磷酸缓冲液的三角瓶中，其中所述无菌磷酸缓冲液pH为6.0，所述三角瓶瓶底铺满玻璃珠，在30℃环境中振荡30min，振荡完成后用垫有脱脂棉的灭菌漏斗进行过滤，制成菌悬液，并将其浓度调为106-108个/mL，冷冻保藏备用；
S3：诱导处理：通过紫外线照射处理进行菌株诱导处理，进行菌株诱导处理前先打开紫外灯预热20min，预热完成后取5mL菌悬液放在无菌的培养皿中，同时制作5份相同培养皿进行逐一相同操作，将培养皿平放在离紫外灯垂直距离为30cm处的磁力搅拌器上，用紫外线照射培养皿表面lmin后打开培养皿盖进行紫外线照射处理，且进行紫外线照射处理的同时打开磁力搅拌器进行搅拌，将制备得5份相同培养皿分别照射15s、30s、lmin、2min、5min，照射完成后，将诱变菌液在黑暗冷冻中保存1-2h，保存完成后有专业人员进行稀释涂布法进行初筛，所述初筛是通过观察在菌落周围出现的透明圈大小，并测量其菌落直径与透明圈直径之比，选择比值大且菌落直径大的菌落40-50个作为复筛菌株；
S4：复筛及发酵处理：进行复筛时将稀释菌悬液按10倍稀释至106进行平板复筛，所述平半复筛是从105和106中各取出0.lmL加入到酪素培养基平板中，其中每个稀释度均做3个重复，进行涂菌并静置，并在每个平板皿的背面用红笔划线分区，从圆心划线至周边分成8等份，1-7份中点种初筛菌株，第8份点种原始菌株作为对照，待菌液渗入培养基后进行倒置，同时放置于30℃恒温环境中培养2-3天，其中培养完成后由专业人员进行观察，观察时出现透明圈则按初筛方法进行检测获得数株二次优良菌株，将获得的二次优良菌株采用液体深层发酵技术，并加入葡萄糖、酵母浸粉和硫酸镁进行发酵处理，观察时未出现透明圈则进行菌株检测并判断，观察时未出现透明圈则进行菌株检测，所述菌株检测是将平板复筛后的菌株与氧化酶进行接触试验，试验结果呈阳性则判定为菌株未污染，试验结果呈阴性则判定为菌株污染，判定为菌株未污染则由专业人员对菌株进行处理，判定为菌株污染则由专业人员对菌株进行处理并重新进行初始菌株选取，选取后进行相同菌株诱导、发酵处理以及菌株筛选，所述诱导发酵过程采用在线监控技术进行诱导发酵环境的实时监控，通过温度传感器对发酵环境的温度进行实时监控，并通过计算机进行温度数据进行收集，计算机收集到温度数据后，将温度数据与设定的温度数据范围进行对比，对比结果显示在数据范围内则进行继续诱导发酵过程，对比结果显示不在数据范围内则由计算机发布命令控制无菌冷热气流进入诱导发酵环境；
S5：制成菌粉：将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，将生产出的菌株进行采摘，并用清水进行冲洗，冲洗完成后进行自然晾晒，并由专业人员进行定期检验水含量，水含量低于5％停止晾晒，将晾晒后的菌株进行研磨制成菌粉。
实施例二
参照图1，一种β-胡萝卜素菌粉，包括以下重量份的原料：野生型水生黄杆菌90份、无菌磷酸缓冲液20份、葡萄糖20份、酵母浸粉15份、硫酸镁20份；
其制备方法包括以下步骤：
S1：原料准备：从自然界分离到的野生型水生黄杆菌，由专业人员选取符合要求的水生黄杆菌作为初始菌株，其中选取要求为选取的菌落呈半透明、光滑且有光泽、全缘、圆形的直径在1-2nm，且菌落表面存在隆起，并将获取的水生黄杆菌放在血琼脂平板上，在30℃温度下进行培养48h；
S2：进行活化：取出培养后的菌株转接至豆饼斜面培养基中，在30℃环境中培养3-5天进行活化，活化完成后将菌株放至装有1mL0.lmol/L的无菌磷酸缓冲液的三角瓶中，其中所述无菌磷酸缓冲液pH为6.0，所述三角瓶瓶底铺满玻璃珠，在30℃环境中振荡30min，振荡完成后用垫有脱脂棉的灭菌漏斗进行过滤，制成菌悬液，并将其浓度调为106-108个/mL，冷冻保藏备用；
S3：诱导处理：通过紫外线照射处理进行菌株诱导处理，进行菌株诱导处理前先打开紫外灯预热20min，预热完成后取5mL菌悬液放在无菌的培养皿中，同时制作5份相同培养皿进行逐一相同操作，将培养皿平放在离紫外灯垂直距离为30cm处的磁力搅拌器上，用紫外线照射培养皿表面lmin后打开培养皿盖进行紫外线照射处理，且进行紫外线照射处理的同时打开磁力搅拌器进行搅拌，将制备得5份相同培养皿分别照射15s、30s、lmin、2min、5min，照射完成后，将诱变菌液在黑暗冷冻中保存1-2h，保存完成后有专业人员进行稀释涂布法进行初筛，所述初筛是通过观察在菌落周围出现的透明圈大小，并测量其菌落直径与透明圈直径之比，选择比值大且菌落直径大的菌落40-50个作为复筛菌株；
S4：复筛及发酵处理：进行复筛时将稀释菌悬液按10倍稀释至106进行平板复筛，所述平半复筛是从105和106中各取出0.lmL加入到酪素培养基平板中，其中每个稀释度均做3个重复，进行涂菌并静置，并在每个平板皿的背面用红笔划线分区，从圆心划线至周边分成8等份，1-7份中点种初筛菌株，第8份点种原始菌株作为对照，待菌液渗入培养基后进行倒置，同时放置于30℃恒温环境中培养2-3天，其中培养完成后由专业人员进行观察，观察时出现透明圈则按初筛方法进行检测获得数株二次优良菌株，将获得的二次优良菌株采用液体深层发酵技术，并加入葡萄糖、酵母浸粉和硫酸镁进行发酵处理，观察时未出现透明圈则进行菌株检测并判断，观察时未出现透明圈则进行菌株检测，所述菌株检测是将平板复筛后的菌株与氧化酶进行接触试验，试验结果呈阳性则判定为菌株未污染，试验结果呈阴性则判定为菌株污染，判定为菌株未污染则由专业人员对菌株进行处理，判定为菌株污染则由专业人员对菌株进行处理并重新进行初始菌株选取，选取后进行相同菌株诱导、发酵处理以及菌株筛选，所述诱导发酵过程采用在线监控技术进行诱导发酵环境的实时监控，通过温度传感器对发酵环境的温度进行实时监控，并通过计算机进行温度数据进行收集，计算机收集到温度数据后，将温度数据与设定的温度数据范围进行对比，对比结果显示在数据范围内则进行继续诱导发酵过程，对比结果显示不在数据范围内则由计算机发布命令控制无菌冷热气流进入诱导发酵环境；
S5：制成菌粉：将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，将生产出的菌株进行采摘，并用清水进行冲洗，冲洗完成后进行自然晾晒，并由专业人员进行定期检验水含量，水含量低于5％停止晾晒，将晾晒后的菌株进行研磨制成菌粉。
实施例三
参照图1，一种β-胡萝卜素菌粉，包括以下重量份的原料：野生型水生黄杆菌100份、无菌磷酸缓冲液30份、葡萄糖25份、酵母浸粉20份、硫酸镁25份；
其制备方法包括以下步骤：
S1：原料准备：从自然界分离到的野生型水生黄杆菌，由专业人员选取符合要求的水生黄杆菌作为初始菌株，其中选取要求为选取的菌落呈半透明、光滑且有光泽、全缘、圆形的直径在1-2nm，且菌落表面存在隆起，并将获取的水生黄杆菌放在血琼脂平板上，在30℃温度下进行培养48h；
S2：进行活化：取出培养后的菌株转接至豆饼斜面培养基中，在30℃环境中培养3-5天进行活化，活化完成后将菌株放至装有1mL0.lmol/L的无菌磷酸缓冲液的三角瓶中，其中所述无菌磷酸缓冲液pH为6.0，所述三角瓶瓶底铺满玻璃珠，在30℃环境中振荡30min，振荡完成后用垫有脱脂棉的灭菌漏斗进行过滤，制成菌悬液，并将其浓度调为106-108个/mL，冷冻保藏备用；
S3：诱导处理：通过紫外线照射处理进行菌株诱导处理，进行菌株诱导处理前先打开紫外灯预热20min，预热完成后取5mL菌悬液放在无菌的培养皿中，同时制作5份相同培养皿进行逐一相同操作，将培养皿平放在离紫外灯垂直距离为30cm处的磁力搅拌器上，用紫外线照射培养皿表面lmin后打开培养皿盖进行紫外线照射处理，且进行紫外线照射处理的同时打开磁力搅拌器进行搅拌，将制备得5份相同培养皿分别照射15s、30s、lmin、2min、5min，照射完成后，将诱变菌液在黑暗冷冻中保存1-2h，保存完成后有专业人员进行稀释涂布法进行初筛，所述初筛是通过观察在菌落周围出现的透明圈大小，并测量其菌落直径与透明圈直径之比，选择比值大且菌落直径大的菌落40-50个作为复筛菌株；
S4：复筛及发酵处理：进行复筛时将稀释菌悬液按10倍稀释至106进行平板复筛，所述平半复筛是从105和106中各取出0.lmL加入到酪素培养基平板中，其中每个稀释度均做3个重复，进行涂菌并静置，并在每个平板皿的背面用红笔划线分区，从圆心划线至周边分成8等份，1-7份中点种初筛菌株，第8份点种原始菌株作为对照，待菌液渗入培养基后进行倒置，同时放置于30℃恒温环境中培养2-3天，其中培养完成后由专业人员进行观察，观察时出现透明圈则按初筛方法进行检测获得数株二次优良菌株，将获得的二次优良菌株采用液体深层发酵技术，并加入葡萄糖、酵母浸粉和硫酸镁进行发酵处理，观察时未出现透明圈则进行菌株检测并判断，观察时未出现透明圈则进行菌株检测，所述菌株检测是将平板复筛后的菌株与氧化酶进行接触试验，试验结果呈阳性则判定为菌株未污染，试验结果呈阴性则判定为菌株污染，判定为菌株未污染则由专业人员对菌株进行处理，判定为菌株污染则由专业人员对菌株进行处理并重新进行初始菌株选取，选取后进行相同菌株诱导、发酵处理以及菌株筛选，所述诱导发酵过程采用在线监控技术进行诱导发酵环境的实时监控，通过温度传感器对发酵环境的温度进行实时监控，并通过计算机进行温度数据进行收集，计算机收集到温度数据后，将温度数据与设定的温度数据范围进行对比，对比结果显示在数据范围内则进行继续诱导发酵过程，对比结果显示不在数据范围内则由计算机发布命令控制无菌冷热气流进入诱导发酵环境；
S5：制成菌粉：将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，将生产出的菌株进行采摘，并用清水进行冲洗，冲洗完成后进行自然晾晒，并由专业人员进行定期检验水含量，水含量低于5％停止晾晒，将晾晒后的菌株进行研磨制成菌粉。
实施例四
参照图1，一种β-胡萝卜素菌粉，包括以下重量份的原料：野生型水生黄杆菌92份、无菌磷酸缓冲液22份、葡萄糖25份、酵母浸粉19份、硫酸镁25份；
其制备方法包括以下步骤：
S1：原料准备：从自然界分离到的野生型水生黄杆菌，由专业人员选取符合要求的水生黄杆菌作为初始菌株，其中选取要求为选取的菌落呈半透明、光滑且有光泽、全缘、圆形的直径在1-2nm，且菌落表面存在隆起，并将获取的水生黄杆菌放在血琼脂平板上，在30℃温度下进行培养48h；
S2：进行活化：取出培养后的菌株转接至豆饼斜面培养基中，在30℃环境中培养3-5天进行活化，活化完成后将菌株放至装有1mL0.lmol/L的无菌磷酸缓冲液的三角瓶中，其中所述无菌磷酸缓冲液pH为6.0，所述三角瓶瓶底铺满玻璃珠，在30℃环境中振荡30min，振荡完成后用垫有脱脂棉的灭菌漏斗进行过滤，制成菌悬液，并将其浓度调为106-108个/mL，冷冻保藏备用；
S3：诱导处理：通过紫外线照射处理进行菌株诱导处理，进行菌株诱导处理前先打开紫外灯预热20min，预热完成后取5mL菌悬液放在无菌的培养皿中，同时制作5份相同培养皿进行逐一相同操作，将培养皿平放在离紫外灯垂直距离为30cm处的磁力搅拌器上，用紫外线照射培养皿表面lmin后打开培养皿盖进行紫外线照射处理，且进行紫外线照射处理的同时打开磁力搅拌器进行搅拌，将制备得5份相同培养皿分别照射15s、30s、lmin、2min、5min，照射完成后，将诱变菌液在黑暗冷冻中保存1-2h，保存完成后有专业人员进行稀释涂布法进行初筛，所述初筛是通过观察在菌落周围出现的透明圈大小，并测量其菌落直径与透明圈直径之比，选择比值大且菌落直径大的菌落40-50个作为复筛菌株；
S4：复筛及发酵处理：进行复筛时将稀释菌悬液按10倍稀释至106进行平板复筛，所述平半复筛是从105和106中各取出0.lmL加入到酪素培养基平板中，其中每个稀释度均做3个重复，进行涂菌并静置，并在每个平板皿的背面用红笔划线分区，从圆心划线至周边分成8等份，1-7份中点种初筛菌株，第8份点种原始菌株作为对照，待菌液渗入培养基后进行倒置，同时放置于30℃恒温环境中培养2-3天，其中培养完成后由专业人员进行观察，观察时出现透明圈则按初筛方法进行检测获得数株二次优良菌株，将获得的二次优良菌株采用液体深层发酵技术，并加入葡萄糖、酵母浸粉和硫酸镁进行发酵处理，观察时未出现透明圈则进行菌株检测并判断，观察时未出现透明圈则进行菌株检测，所述菌株检测是将平板复筛后的菌株与氧化酶进行接触试验，试验结果呈阳性则判定为菌株未污染，试验结果呈阴性则判定为菌株污染，判定为菌株未污染则由专业人员对菌株进行处理，判定为菌株污染则由专业人员对菌株进行处理并重新进行初始菌株选取，选取后进行相同菌株诱导、发酵处理以及菌株筛选，所述诱导发酵过程采用在线监控技术进行诱导发酵环境的实时监控，通过温度传感器对发酵环境的温度进行实时监控，并通过计算机进行温度数据进行收集，计算机收集到温度数据后，将温度数据与设定的温度数据范围进行对比，对比结果显示在数据范围内则进行继续诱导发酵过程，对比结果显示不在数据范围内则由计算机发布命令控制无菌冷热气流进入诱导发酵环境；
S5：制成菌粉：将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，将生产出的菌株进行采摘，并用清水进行冲洗，冲洗完成后进行自然晾晒，并由专业人员进行定期检验水含量，水含量低于5％停止晾晒，将晾晒后的菌株进行研磨制成菌粉。
实施例五
参照图1，一种β-胡萝卜素菌粉，包括以下重量份的原料：野生型水生黄杆菌90份、无菌磷酸缓冲液28份、葡萄糖24份、酵母浸粉18份、硫酸镁23份；
其制备方法包括以下步骤：
S1：原料准备：从自然界分离到的野生型水生黄杆菌，由专业人员选取符合要求的水生黄杆菌作为初始菌株，其中选取要求为选取的菌落呈半透明、光滑且有光泽、全缘、圆形的直径在1-2nm，且菌落表面存在隆起，并将获取的水生黄杆菌放在血琼脂平板上，在30℃温度下进行培养48h；
S2：进行活化：取出培养后的菌株转接至豆饼斜面培养基中，在30℃环境中培养3-5天进行活化，活化完成后将菌株放至装有1mL0.lmol/L的无菌磷酸缓冲液的三角瓶中，其中所述无菌磷酸缓冲液pH为6.0，所述三角瓶瓶底铺满玻璃珠，在30℃环境中振荡30min，振荡完成后用垫有脱脂棉的灭菌漏斗进行过滤，制成菌悬液，并将其浓度调为106-108个/mL，冷冻保藏备用；
S3：诱导处理：通过紫外线照射处理进行菌株诱导处理，进行菌株诱导处理前先打开紫外灯预热20min，预热完成后取5mL菌悬液放在无菌的培养皿中，同时制作5份相同培养皿进行逐一相同操作，将培养皿平放在离紫外灯垂直距离为30cm处的磁力搅拌器上，用紫外线照射培养皿表面lmin后打开培养皿盖进行紫外线照射处理，且进行紫外线照射处理的同时打开磁力搅拌器进行搅拌，将制备得5份相同培养皿分别照射15s、30s、lmin、2min、5min，照射完成后，将诱变菌液在黑暗冷冻中保存1-2h，保存完成后有专业人员进行稀释涂布法进行初筛，所述初筛是通过观察在菌落周围出现的透明圈大小，并测量其菌落直径与透明圈直径之比，选择比值大且菌落直径大的菌落40-50个作为复筛菌株；
S4：复筛及发酵处理：进行复筛时将稀释菌悬液按10倍稀释至106进行平板复筛，所述平半复筛是从105和106中各取出0.lmL加入到酪素培养基平板中，其中每个稀释度均做3个重复，进行涂菌并静置，并在每个平板皿的背面用红笔划线分区，从圆心划线至周边分成8等份，1-7份中点种初筛菌株，第8份点种原始菌株作为对照，待菌液渗入培养基后进行倒置，同时放置于30℃恒温环境中培养2-3天，其中培养完成后由专业人员进行观察，观察时出现透明圈则按初筛方法进行检测获得数株二次优良菌株，将获得的二次优良菌株采用液体深层发酵技术，并加入葡萄糖、酵母浸粉和硫酸镁进行发酵处理，观察时未出现透明圈则进行菌株检测并判断，观察时未出现透明圈则进行菌株检测，所述菌株检测是将平板复筛后的菌株与氧化酶进行接触试验，试验结果呈阳性则判定为菌株未污染，试验结果呈阴性则判定为菌株污染，判定为菌株未污染则由专业人员对菌株进行处理，判定为菌株污染则由专业人员对菌株进行处理并重新进行初始菌株选取，选取后进行相同菌株诱导、发酵处理以及菌株筛选，所述诱导发酵过程采用在线监控技术进行诱导发酵环境的实时监控，通过温度传感器对发酵环境的温度进行实时监控，并通过计算机进行温度数据进行收集，计算机收集到温度数据后，将温度数据与设定的温度数据范围进行对比，对比结果显示在数据范围内则进行继续诱导发酵过程，对比结果显示不在数据范围内则由计算机发布命令控制无菌冷热气流进入诱导发酵环境；
S5：制成菌粉：将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，将生产出的菌株进行采摘，并用清水进行冲洗，冲洗完成后进行自然晾晒，并由专业人员进行定期检验水含量，水含量低于5％停止晾晒，将晾晒后的菌株进行研磨制成菌粉。
对比例一
与实施利一不同之处在于，S1：原料准备：从自然界分离到的野生型水生黄杆菌，由专业人员选取符合要求的水生黄杆菌作为初始菌株，其余与实施利一相同。
对比例二
与实施利一不同之处在于，S2：进行活化：取出培养后的菌株转接至豆饼斜面培养基中，在30℃环境中培养3-5天进行活化，活化完成后将菌株放至装有1mL 0.lmol/L的无菌磷酸缓冲液的三角瓶中，其余与实施利一相同。
对比例三
与实施利一不同之处在于，S5：制成菌粉：将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，将生产出的菌株进行采摘，并用清水进行冲洗，冲洗完成后进行自然晾晒，将晾晒后的菌株进行研磨制成菌粉，其余与实施利一相同。
实验例
将实施例一、实施例二、实施例三、实施例四实施例五中一种β-胡萝卜素菌粉的制备方法进行试验，得出结果如下：
实施例一、实施例二、实施例三、实施例四和实施例五制得的β-胡萝卜素菌粉及其制备方法对比现有方法成品率有了显著提高，且实施例一为最佳实施例。
检测报告
本发明的目的是为了解决目前目前现有的菌粉自身含有的营养元素较少，且由于菌粉的制备过程复杂导致菌粉产量较低等问题，而提出的一种β-胡萝卜素菌粉及其制备方法，本发明的实施例提供一种β-胡萝卜素菌粉的制备方法，通过对诱导发酵过程进行实时监控，提高了诱导发酵的成功率，同时将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，提高了菌粉的成品率。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种β-胡萝卜素菌粉，其特征在于，包括以下重量份的原料：野生型水生黄杆菌80-100份、无菌磷酸缓冲液20-40份、葡萄糖20-30份、酵母浸粉10-20份、硫酸镁20-30份。
2.根据权利要求1所述的一种β-胡萝卜素菌粉，其特征在于，包括以下重量份的原料：野生型水生黄杆菌90-100份、无菌磷酸缓冲液20-30份、葡萄糖20-25份、酵母浸粉15-20份、硫酸镁20-25份。
3.一种β-胡萝卜素菌粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：原料准备：选取符合要求的初始菌株，并对初始菌株进行培养；
S2：进行活化：将培养后的菌株转接至豆饼斜面培养基中进行活化；
S3：诱导处理：将活化后的菌株进行通过紫外线照射处理进行菌株诱导处理，并对菌株进行初筛；
S4：复筛及发酵处理：将初筛后的菌株进行复筛获得二次优良菌株，并将获得的二次优良菌株进行发酵处理；
S5：制成菌粉：将获得的二次优良菌株进行扩大生产，并将生产出的菌株进行处理制成菌粉。
4.根据权利要求3所述的一种β-胡萝卜素菌粉的制备方法，其特征在于，所述S1中，从自然界分离到的野生型水生黄杆菌，由专业人员选取符合要求的水生黄杆菌作为初始菌株，其中选取要求为选取的菌落呈半透明、光滑且有光泽、全缘、圆形的直径在1-2nm，且菌落表面存在隆起，并将获取的水生黄杆菌放在血琼脂平板上，在30℃温度下进行培养48h。
5.根据权利要求3所述的一种β-胡萝卜素菌粉的制备方法，其特征在于，所述S2中，取出培养后的菌株转接至豆饼斜面培养基中，在30℃环境中培养3-5天进行活化，活化完成后将菌株放至装有1mL0.lmol/L的无菌磷酸缓冲液的三角瓶中，其中所述无菌磷酸缓冲液pH为6.0，所述三角瓶瓶底铺满玻璃珠，在30℃环境中振荡30min，振荡完成后用垫有脱脂棉的灭菌漏斗进行过滤，制成菌悬液，并将其浓度调为106-108个/mL，冷冻保藏备用。
6.根据权利要求3所述的一种β-胡萝卜素菌粉的制备方法，其特征在于，所述S3中，通过紫外线照射处理进行菌株诱导处理，进行菌株诱导处理前先打开紫外灯预热20min，预热完成后取5mL菌悬液放在无菌的培养皿中，同时制作5份相同培养皿进行逐一相同操作，将培养皿平放在离紫外灯垂直距离为30cm处的磁力搅拌器上，用紫外线照射培养皿表面lmin后打开培养皿盖进行紫外线照射处理，且进行紫外线照射处理的同时打开磁力搅拌器进行搅拌，将制备得5份相同培养皿分别照射15s、30s、lmin、2min、5min，照射完成后，将诱变菌液在黑暗冷冻中保存1-2h，保存完成后有专业人员进行稀释涂布法进行初筛，所述初筛是通过观察在菌落周围出现的透明圈大小，并测量其菌落直径与透明圈直径之比，选择比值大且菌落直径大的菌落40-50个作为复筛菌株。
7.根据权利要求3所述的一种β-胡萝卜素菌粉的制备方法，其特征在于，所述S4中，进行复筛时将稀释菌悬液按10倍稀释至106进行平板复筛，所述平半复筛是从105和106中各取出0.lmL加入到酪素培养基平板中，其中每个稀释度均做3个重复，进行涂菌并静置，并在每个平板皿的背面用红笔划线分区，从圆心划线至周边分成8等份，1-7份中点种初筛菌株，第8份点种原始菌株作为对照，待菌液渗入培养基后进行倒置，同时放置于30℃恒温环境中培养2-3天，其中培养完成后由专业人员进行观察，观察时出现透明圈则按初筛方法进行检测获得数株二次优良菌株，将获得的二次优良菌株采用液体深层发酵技术，并加入葡萄糖、酵母浸粉和硫酸镁进行发酵处理，观察时未出现透明圈则进行菌株检测并判断。
8.根据权利要求7所述的一种β-胡萝卜素菌粉的制备方法，其特征在于，观察时未出现透明圈则进行菌株检测，所述菌株检测是将平板复筛后的菌株与氧化酶进行接触试验，试验结果呈阳性则判定为菌株未污染，试验结果呈阴性则判定为菌株污染，判定为菌株未污染则由专业人员对菌株进行处理，判定为菌株污染则由专业人员对菌株进行处理并重新进行初始菌株选取，选取后进行相同菌株诱导、发酵处理以及菌株筛选。
9.根据权利要求3所述的一种β-胡萝卜素菌粉的制备方法，其特征在于，所述S4中，所述诱导发酵过程采用在线监控技术进行诱导发酵环境的实时监控，通过温度传感器对发酵环境的温度进行实时监控，并通过计算机进行温度数据进行收集，计算机收集到温度数据后，将温度数据与设定的温度数据范围进行对比，对比结果显示在数据范围内则进行继续诱导发酵过程，对比结果显示不在数据范围内则由计算机发布命令控制无菌冷热气流进入诱导发酵环境。
10.根据权利要求3所述的一种β-胡萝卜素菌粉的制备方法，其特征在于，所述S5中，将进行筛选后获得的二次优良菌株进行扩大生产获得高产菌株，将生产出的菌株进行采摘，并用清水进行冲洗，冲洗完成后进行自然晾晒，并由专业人员进行定期检验水含量，水含量低于5％停止晾晒，将晾晒后的菌株进行研磨制成菌粉。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1687446A (zh) * | 2005-03-28 | 2005-10-26 | 浙江省农业科学院 | 一种β－胡萝卜素的生产方法 |
| CN101407805A (zh) * | 2008-11-25 | 2009-04-15 | 西北农林科技大学 | 瑞拉菌素产生菌的复合诱变选育高产菌株方法 |
-
2022
- 2022-03-08 CN CN202210219679.8A patent/CN114806923A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1687446A (zh) * | 2005-03-28 | 2005-10-26 | 浙江省农业科学院 | 一种β－胡萝卜素的生产方法 |
| CN101407805A (zh) * | 2008-11-25 | 2009-04-15 | 西北农林科技大学 | 瑞拉菌素产生菌的复合诱变选育高产菌株方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 李学如等: "《发酵工艺原理与技术》", 31 August 2014 * |
| 王小波: "类胡萝卜素高产菌的选育及发酵条件的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 * |
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