CN114796301B - 一种用于治疗新冠病毒SARSCoV-2感染的药物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了天露柿肺清在制备治疗新冠病毒SARSCoV‑2药物中的应用。本发明首次发现天露柿肺清与新冠病毒SARSCoV‑2分别作用5min和10min后，通过测试作用后病毒的TCID50，发现抗新冠病毒的杀灭率均为99.99％，可将其用于新型冠状病毒感染性疾病的预防和治疗，为新冠肺炎患者提供了用药选择，对当前的疫情防控具有重要作用和意义。

Description

一种用于治疗新冠病毒SARSCoV-2感染的药物的制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种果汁的新用途，具体为天露柿肺清在制备治疗新冠病毒SARSCoV-2药物中的应用。
背景技术
2019年12月以来，新型冠状病毒（SARS-CoV-2）引起的急性肺炎（COVID-19）疾病在中国和其他国家大流行，给全世界带来巨大的危害和生存挑战。全世界都在尽力寻找和开发能预防和治疗该传染病的药物或食品。中国医疗界普遍认为，传统医药中草药对该病毒有较好的预防和治疗作用，已被多个国家借鉴和使用。基于此，卫生健康委员会及国家中医药管理局在《关于印发新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第六版）的通知》中要求加强中西医结合，并推荐了多个中成药在诊治过程中使用。现已报道藿香、姜黄、厚朴、板蓝根等一些中草药对新型冠状病毒均有一定的抑菌作用。
涩柿是一种富含涩味物质单宁的水果，在中国普遍种植，资源广泛。柿果单宁是一种多羟基的酚类聚合物，属原花青素类的物质。柿果单宁因果实的成熟度不同，其聚合度不同，果实中存在着不同分子量大小的单宁物质。据报道植物原花青素、柿果单宁有很好的抗氧化、抑菌功能。日本学者研究发现，葡萄皮中的原花青素能显著抑制前列腺肿瘤细胞的分化。葡萄皮提取物通过抑制金属蛋白酶-2和金属蛋白酶-9的活性，对于人类结肠癌细胞(Caco-2)起到明显的抗增殖作用；诺如病毒能引起人体感染性肠胃炎，研究发现涩柿单宁对患者粪便中的诺如病毒抗性作用最强。
陕西天路通生物科技有限公司采用涩柿的野生种君迁子，通过提取榨取汁液，通过高渗酵母菌发酵除糖，弱碱水解柿单宁，制备成一种天露柿肺清果汁，该果汁的成分为纯净水、涩柿浓缩汁、柠檬酸、苹果酸等，富含柿单宁、苹果酸、黄酮、多酚，口感甜涩，开盖即饮，具有润肺宁咳、健脾养胃等功效，老少皆益。
发明内容
本发明的目的是提供一种天露柿肺清在制备治疗新冠病毒SARSCoV-2药物中的应用，为新冠肺炎病毒感染性疾病的预防和治疗提供一种新的方向。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：天露柿肺清在制备治疗新冠病毒SARSCoV-2药物中的应用。
本发明采用的天露柿肺清的制备方法如下：
1、涩柿浊汁制备
采摘生长时期为7月至8月的涩柿野生种君迁子，果实迅速破碎后，用夹层锅加热至90℃以上，保温5min，迅速冷却至常温，用螺旋压榨机压榨取汁，过滤除去果籽及不溶性的大颗粒物质，获得涩柿浊汁。
2、涩柿浊汁发酵除糖
将鲁氏结合酵母菌（Zygosaccharomyces rouxii）活化后，稀释至菌细胞浓度为1×108～1×109个/mL，获得酵母菌菌悬液；向涩柿浊汁中添加其重量3%～4%的酵母菌菌悬液，在20～30℃发酵24～36h。
3、真空减压浓缩
将发酵后的涩柿浊汁用真空浓缩锅在温度为50～60℃、真空度低于0.09MPa的气压下浓缩，除去大量的发酵酒精和部分水后，测定浓缩汁中的柿单宁为4%～4.5%（福林酚法），浓缩结束，获得涩柿浓缩汁。
4、弱碱水解
向涩柿浓缩汁中加入食品级碳酸钠，加入量为涩柿浓缩汁重量的2.5%～3.5%，在95～100℃下搅拌加热20～30min，再用食品级柠檬酸调节涩柿浓缩汁的pH至6.5～7.0。
5、柿浓缩汁无菌处理
将浓缩汁包装至玻璃瓶，密封，用100℃沸水加热20～25min，获得天露柿肺清。
本发明的有益效果如下：
本发明通过测试天露柿肺清对新冠病毒SARSCoV-2的作用，结果显示其分别作用病毒5 min和10 min后，通过测试作用后病毒的TCID50，发现抗新冠病毒的杀灭率均为99.99%，可将其用于新型冠状病毒感染性疾病的预防和治疗，为新冠肺炎患者提供了用药选择，对当前的疫情防控具有重要作用和意义。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围不限于实施例。
实施例1
委托中国武汉的中国科学院武汉病毒研究所对天露柿肺清抗新冠病毒SARSCoV-2作用进行检测，具体情况如下：
一、样品信息
Figure SMS_1
检测周期：2021 年07 月20 日至2021 年08 月2 日
二、检测项目：“天露柿肺清”口服液抗新型冠状病毒SARS-CoV-2效果评估
三、抗新冠病毒检测方法
“天露柿肺清”口服液抗新型冠状病毒SARS-CoV-2方法如下：
1. 使用Vero E6细胞培养病毒，得到滴度大于106 TCID50/mL的新型冠状病毒的细胞培养上清。
2. 开始抗新型冠状病毒试验前24 h，接种104个Vero E6细胞于96 孔板的每个孔中。
3. 在无菌螺口管中，加入10 μL上述步骤1 中新冠病毒细胞培养上清，再加入90μL“天露柿肺清”口服液，设置加入90 μL细胞维持液（含2% FBS 的DMEM 溶液）作为对照。“天露柿肺清”口服液与病毒作用5 min 和10 min 后，采用GE 公司的MicroSpinTM S-400columns去除“天露柿肺清”口服液，操作方法参照产品说明。去除“天露柿肺清”口服液的病毒取10 μL至190 μL含2% FBS 的DMEM 溶液，接着按10倍梯度稀释，然后接入96孔板VeroE6细胞中，每个梯度8个孔。实验组与对照组各设置三个重复。
4. 将96孔板置于37℃、5%的CO2培养箱中培养4～5天，观察孔中细胞的病变，得到每个梯度下的病变孔数，从而计算出“天露柿肺清”口服液或对照作用后的新冠病毒的TCID50。
四、抗新冠病毒检测结果
通过计数得到实验组与对照组在每个稀释度下病变数，采用Reed-Muench法得到各个实验组和对照组的TCID50，数据如下表所示：
Figure SMS_2
五、结论
陕西天路通生物科技有限公司送检的含涩柿浓缩汁的“天露柿肺清”口服液，经按本报告中的上述具体步骤测试抗新冠病毒SARS-CoV-2，新冠病毒与“天露柿肺清”口服液分别作用5 min和10 min后，通过测试作用后病毒的TCID50，得到“天露柿肺清” 口服液抗新冠病毒的杀灭率均为99.99%。

Claims (1)

1. 一种用于治疗新冠病毒SARSCoV-2感染的药物的制备方法，其特征在于包括下述步骤：
（1）涩柿浊汁制备
采摘生长时期为7月至8月的涩柿野生种君迁子，果实破碎后，用夹层锅加热至90℃以上，保温5min，迅速冷却至常温，用螺旋压榨机压榨取汁，过滤除去果籽及不溶性的大颗粒物质，获得涩柿浊汁；
（2）涩柿浊汁发酵除糖
将鲁氏结合酵母菌（Zygosaccharomyces rouxii）活化后，稀释至菌细胞浓度为1×108～1×109个/mL，获得酵母菌菌悬液；向涩柿浊汁中添加其重量3%～4%的酵母菌菌悬液，在20～30℃发酵24～36h；
（3）真空减压浓缩
将发酵后的涩柿浊汁用真空浓缩锅在温度为50～60℃、真空度低于0.09MPa的气压下浓缩，除去大量的发酵酒精和部分水后，采用福林酚法测定浓缩汁中的柿单宁为4%～4.5%，浓缩结束，获得涩柿浓缩汁；
（4）弱碱水解
向涩柿浓缩汁中加入食品级碳酸钠，加入量为涩柿浓缩汁重量的2.5%～3.5%，在95～100℃下搅拌加热20～30min，再用食品级柠檬酸调节涩柿浓缩汁的pH至6.5～7.0；
（5）柿浓缩汁无菌处理
将浓缩汁包装至玻璃瓶，密封，用100℃沸水加热20～25min，获得用于治疗新冠病毒SARSCoV-2感染的药物。
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