CN114796196B - 一种治疗血管源性眩晕的外用药物组合物及应用 - Google Patents

一种治疗血管源性眩晕的外用药物组合物及应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物研究开发领域，具体涉及一种治疗血管源性眩晕的外用药物组合物及应用。所述的药物组合物包括异鼠李素5.8～57.6份；山奈酚2.5～24.7份；川陈皮素3.4～33.6份；毛蕊异黄酮3.0～29.7份；金合欢素7.1～70.7份；芦荟大黄素3.1～31.3份；木犀草素7.4～74.1份；黄芩素4.6～45.6份；羟基芫花素6.3～62.9份；橙皮素4.0～39.7份。本发明药物组合物有效率可达到92.08%。艾油作为渗透促进剂，增加了药物的透皮吸收疗效，可避免药物的肝脏首过作用，提高了药物生物利用度，减轻药物吸收受到的干扰，增强了治疗效果，还可持续控制给药并随时中断给药等优点。

Description

一种治疗血管源性眩晕的外用药物组合物及应用
技术领域
本发明属于药物研究开发领域，具体涉及一种治疗血管源性眩晕的外用药物组合物及应用。
背景技术
血管源性眩晕是指主要由脑血管疾病引发的一类眩晕，占各种眩晕的50%以上。血管源性眩晕大多数来自于后循环即椎基底动脉系统。发生眩晕频率最高的为内听动脉、AICA、PICA。其发病过程是由于动脉粥样硬化、血液黏稠度增高、血压偏低等原因导致内听动脉或其他动脉血栓形成或短暂性脑缺血发作，进而导致脑干缺血和内耳缺血缺氧，血管壁渗透性增高，膜迷路积水，从而使神经元代谢受损, 包括氧化损伤和钙稳态失衡，突触效能下降，眩晕出现。也就是说该病往往伴随“微观血瘀”状态，而血管内皮细胞损伤为微观血瘀的病理。
血管病变是眩晕发作的常见病因之一。血管内皮细胞是位于血管内壁的一层多功能的细胞，是血液和血管平滑肌的屏障，具有多种生理功能，参与机体的凝血、免疫、物质转运和生物活性物质释放等重要的生命活动，对血管的舒缩功能与血液的流动性有重要调节作用。内皮细胞的损伤是血管病变的始动因素。一旦血管内皮细胞受损，各种调控机体血凝-纤溶及血管舒缩功能的活性物质的正常水平必然发生变化，从而使血行失度、血脉瘀阻，使血液处于高度凝聚和黏滞状态。
二术二陈汤，出自《古今医统大全》卷二十四，具有健中燥湿之功效。主治脾失健运，痰湿不化，呕吐清水，头痛，脉弦细。该方是在化痰祖方二陈汤的基础上加白术、苍术而成。方中苍术辛散苦燥，胜湿除痹；白术味苦而芳烈，补气健脾、燥湿消痰；半夏辛散温燥，燥湿化痰、消痞散结；陈皮味辛苦温，理气健脾、燥湿化痰；茯苓甘补淡渗，健脾补中、利水渗湿。全方合用共奏消痰散结、祛瘀通经之疗效。
现有治疗血管源性眩晕的方式是内服中药或西药治疗，外用药物很少。本发明根据中医传统理论观点，结合现代生物药剂学方法，筛选验证出最有效的药物组合物，应用目前药学领域的前沿学科-现代经皮给药技术研制工艺先进、疗效确切、使用方便安全的巴布膏剂，再以艾油作为渗透促进剂，提高了药物生物利用度，避免了透皮吸收化学促进剂的不良反应，增强了治疗效果。
发明内容
本发明提供了一种治疗血管源性眩晕的外用药物组合物及应用，该组合物包括异鼠李素、山奈酚、川陈皮素、毛蕊异黄酮、金合欢素、芦荟大黄素、木犀草素、黄芩素、羟基芫花素、橙皮素。药效学实验证明，以上成分组合在一起具有协同抗血管内皮细胞氧化损伤的作用，且增效显著。成型工艺参数合理可行，制备出的巴布剂有比较好的粘附性、赋形性，以艾油作渗透促进剂，渗透性优良，对血管性眩晕家兔模型血液流变学有明显的改善作用，降低血液黏度，增加脑血流量。
本发明的技术方案如下：
一种用于治疗血管性眩晕的药物组合物，包括以下重量配比的组分：异鼠李素5.8～57.6份；山奈酚2.5～24.7份；川陈皮素3.4～33.6份；毛蕊异黄酮3.0～29.7份；金合欢素7.1～70.7份；芦荟大黄素3.1～31.3份；木犀草素7.4～74.1份；黄芩素4.6～45.6份；羟基芫花素6.3～62.9份；橙皮素4.0～39.7份。
一种用于治疗血管性眩晕的外用药物组合物的制剂。
上述制剂在制备治疗血管性眩晕的外敷药物上的应用。
优先地，上述制剂中含有活性成分的药物组合物充分混合均匀，加入总重量2～5%的艾油，再以药学上可接受的外用制剂形式给予施用。
由所述药物组合物和艾油加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的外用制剂。
所述的外用制剂的剂型为巴布膏剂。
本发明还提供了上述巴布膏剂的制备方法，它包括如下步骤：所述的巴布膏剂的制备方法为：称取保湿剂甘油、丙二醇混合作为A相，聚丙烯酸钠、药物组合物与白陶土混匀作为B相，将溶解的聚乙烯醇1788型加入溶胀的卡波姆980型为C相，先将A相与C相混合均匀后，再加入B相和艾油混匀，均匀涂布于无纺布上，烘干，盖衬，剪裁，即得。
药效学实验及结果
1.活性成分筛选及验证：
1.1二术二陈汤化学成分分析
1.1.1供试品溶液 苍术（炒）3g，白术（炒）3g，半夏（姜制）3g，陈皮3g，茯苓3g，甘草（炙）1.5g，加10倍量水，煎煮（武火煮沸、文火慢煎）2次，每次0.5h，合并滤液。旋转蒸发仪浓缩至适宜浓度。
取二术二陈汤2mL，加甲醇定容至25mL，密闭，超声（250W，40 kHz）溶解30min，静置，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，经0.22μm滤膜滤过，即得。
1.1.2色谱条件
ThermoFisher QE Orbitrap超高分辨液相色谱质谱联用仪，ACQUITY UPLC HSST3（2.1×100mm，1.8µm）；流动相为0.1%乙腈（A）-0.1%甲酸水（B），梯度洗脱（0～10min），0%～10%A；10～45min，10%～100%A；45～60min，100%～100%A；60～61min，100%～0%A；61～70min，0%～0%A; 流速0.2mL·min-1；进样量5μL；柱温30℃。
1.1.3质谱条件
HESI离子源；正负离子扫描；毛细管喷雾电压3.5kV；毛细管温度350℃；辅助气流10psi；扫描范围m/z 50～1000；分辨率30000。
1.1.4成分鉴定
采用Compound discover3.1软件进行raw文件特征峰提取，并采用Mzcloud及本地中药化学成分数据库同时进行特征峰鉴定，筛选标准为Mzvault best match得分＞70分。
1.2活性成分研究
1.2.1活性成分筛选
利用中药系统药理数据库及分析平台（Traditional Chinese Medicine SystemsPharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP），以生物利用度（Bioavailability，BA）＞30%、类药性（drug-likeness，DL）＞0.18为条件对二术二陈汤的中药成分进行ADME属性值筛选。
1.2.2细胞培养及处理
待HUVEC细胞长满后调整细胞浓度为1×105cells/mL，接种于96孔培养板，每孔100μl，37℃，5%CO2培养箱内，培养24h。按照上述实验分组用RPMI-1640完全培养基（10%FBS）稀释后加入96孔板内，每个孔200µl。将细胞放置于5% CO2培养箱，培养24h。每孔加入10μl的MTT，37℃，5%CO2培养箱内避光孵育3-4 h。吸净孔内的液体，加入150μl的DMSO，于摇床室温震荡10min。酶标仪492nm波长测出同一时间点OD值，用测得的OD值进行细胞活力的分析。
1.2.3活性评价
筛选出的12种活性成分及组合物均具有显著调节血管内皮细胞功能作用，表明异鼠李素、山奈酚、川陈皮素、亚麻酸乙酯、金合欢素、芦荟大黄素、木犀草素、黄芩素、羟基芫花素、橙皮素是二术二陈汤调节血管源性眩晕的药效物质，且组合物效果更佳。
最后采用实施例5的造模的方法得到模型组，然后设置空白组、二术二陈汤组、药物组合物组，观察血管内皮细胞的增殖情况，结果见图1，证明本申请的组合物具有显著调节血管内皮细胞功能作用。
有益效果：
1.有效调节血管微环境，治疗血管性眩晕效果好
本发明基于LC-MS分析、生物利用度BA值数据挖掘结合活性筛选二术二陈汤的活性成分，实验验证发现筛选出的10种活性成分及药物组合物均具有显著调节血管内皮细胞功能作用且组合物效果更佳，见图1。
2. 直接外敷于颈椎部位靶向治疗椎基底动脉系统，避免药物的肝脏首过作用，且以中药艾草挥发油作为渗透促进剂，提高生物利用度，降低毒性。
本发明采用的巴布膏剂是以水溶性或亲水性高分子材料为基质，与药物混合而制成的贴膏剂。具有下列优点：（1）药物包容量大：巴布膏剂的药物基质层厚度可达2毫米，甚至更厚，载药量大，并且能兼容极性大和极性小的组份，非常适合中药多组分的用药特点。（2）透皮吸收更快、更强：采用艾油作为透皮吸收促进剂，相比传统的透皮吸收促进剂二甲基亚砜、氮酮等效果更佳，对皮肤无刺激性和致敏作用，更为安全有效。（3）使用方便，可反复揭扯和敷贴，不污染衣物、无残留、使用后揭扯无痛感，所以可随时使用或停止药物治疗。即高舒适性、高渗透性、高安全性。
附图说明
图1为血管内皮细胞增殖的保护作用图（A模型组；B空白组；C二术二陈汤组；D药物组合物组）。
具体实施方式
通过实施例进一步阐述本发明所述的药物组合物及其制剂制备方法，但本发明并不限于下列实施例包含的内容。
实施例1
一种用于治疗血管性眩晕的药物组合物，包括以下重量配比的组分：异鼠李素5.8份；山奈酚24.7份；川陈皮素33.6份；毛蕊异黄酮3.0份；金合欢素7.1份；芦荟大黄素31.3份；木犀草素74.1份；黄芩素45.6份；羟基芫花素62.9份；橙皮素39.7份。
实施例2
一种用于治疗血管性眩晕的药物组合物，包括以下重量配比的组分：异鼠李素57.6份；山奈酚24.7份；川陈皮素33.6份；毛蕊异黄酮29.7份；金合欢素70.7份；芦荟大黄素31.3份；木犀草素74.1份；黄芩素45.6份；羟基芫花素62.9份；橙皮素39.7份。
实施例3
一种用于治疗血管性眩晕的药物组合物，包括以下重量配比的组分：异鼠李素30份；山奈酚12份；川陈皮素16份；毛蕊异黄酮15份；金合欢素35份；芦荟大黄素16份；木犀草素37份；黄芩素22份；羟基芫花素32份；橙皮素20份。
实施例4 巴布剂制备工艺的研究
1 混合顺序及混合条件的确定
单帖含药量的确定：按照所确定工艺提取得单帖总药粉量为1.00g（药物组合物不足1g时以白陶土补足）。
根据预试验，混合保湿剂甘油-丙二醇（15：1）用量在2～4g，太多则膏体较稀，难以聚合；太少对药物分散性差。物料的混合方法为：先将甘油、丙二醇研磨混合均匀，再依次加入聚丙烯酸钠（PAAS）、药粉与白陶土混匀，再将溶解的聚乙烯醇1788加入溶胀的卡波姆980，于60℃将上述基质混匀，较易混合与涂布。
2 基质处方优化
以剥离强度（粘着力）为指标，结合膏体的涂展性和巴布膏表面的平整度作为辅助的观察指标，采用正交试验法优化巴布膏的基质处方组成。在保证能制成具有较好外观形态巴布膏和可生产性的前提下，剥离强度越大，则效果越好。考察的因素及水平见表1。
表1 基质处方优化因素水平表
Figure 287548DEST_PATH_IMAGE002
根据因素水平表，按L16（45）正交表试验组合进行试验。制备的基质样品室温放置48小时后，测定各试验组样品的剥离强度。
剥离强度的测定：将样品（面积3cm×5cm）粘贴于酚醛树脂板上，在样品的一端用夹子夹住，用指针式推拉力计测定膏体与酚醛树脂板断开时的拉力，测定时拉力计与酚醛树脂板成90°，测定五次取均值。测试结果见表2、3。
表2 基质处方优化正交试验表
Figure 673530DEST_PATH_IMAGE003
表3 剥离强度方差分析表
Figure 922109DEST_PATH_IMAGE005
注：F0.05（3，3）=9.28
从上表可以看出：
（1）以剥离强度为指标，对结果影响最大的因素为卡波姆980的用量；
（2）以剥离强度为指标，其他因素对粘性影响较小，但聚乙烯醇1788加多了也不利于涂布，上述除试验7、10、11、13难于涂布外，其它均能涂布或易涂布，聚乙烯醇1788的加入量多，膏体内聚力增加，因而难于涂布，可根据实际情况调整加聚乙烯醇1788量0.04～0.06g。
通过数据分析和制膏的实际情况确定巴布剂基质的最佳配比为：A3B4C2D2E1。即聚丙烯酸钠：卡波姆980：聚乙烯醇1788：保湿剂：水为0.20：0.55：0.04：2.5：2。
验证试验：正交试验时均加入0.2g艾油（艾草鲜叶中所含挥发油），一方面其为效果较好的增塑剂，有利于膏体的涂布；另一方面可以较好的溶解如白术内酯等易挥发的成分，防止其挥发损失；第三就是艾油具有温经散寒功能，是良好的透皮吸收促进剂；另外，艾油加入还可以防止涂布时膏体的粘辊。为此通过以上筛选的成型工艺参数试验了以加入艾油分别为0.1g、0.2g、0.3g制备三批样品，测定其剥离强度并观察其物理性状，主要检查涂布的难易程度，是否粘辊，膏体是否均匀，裱背材料背面有无渗出，与皮肤的粘着力是否合适等。结果见表4。
表4 验证试验结果表
Figure 786160DEST_PATH_IMAGE007
试验结果表明，综合剥离强度、涂布指标和感官指标，按以上筛选的成型工艺参数制备，加入艾油0.2g时效果最佳，制备出的巴布剂有比较好的赋形性。该工艺合理可行。
实施例5 对兔血管性眩晕模型血液流变学的影响
1造模
选取清洁级健康成年日本大耳白兔60只, 体量（2.0±0.3）kg, 雌雄各半,采用高脂饲料+颈椎旁注射硬化剂复合方法造模，以血液流变为评价指标，第30天对造模家兔复查血液流变学，得出结果后对家兔进行系统评分筛选造模成功家兔。
2动物分组及给药方法
采用完全随机设计方法分为正常组、模型组、西药对照组、实施例1-3制备的巴布膏（含艾油）组、巴布膏（无艾油）组7组，雌雄各半。各组恢复正常喂养；西药对照组予以天麻素注射液2g/（kg·d）；分别予以巴布膏（含艾油）组、巴布膏（无艾油），1天1贴，连续给药20天。第21天比较干预前后血液流变学的改变情况。
3血液流变学指标的测定及分析方法
动物空腹禁食、禁水8h后，抽取耳缘静脉血2mL（加1.25万u/mL肝素0.2mL），经循环水浴（37℃），通过DV-Ⅲ锥板式血液黏度计测定全血粘度，每次样本量为0.5mL，每个样本测量3次，取其均值，黏度计转速范围为100s-1（低切）、1000s-1（高切），测得数据由计算机自动记录。
4统计学分析
多组样本均数间比较采用方差分析，两两比较用Q检验，使用SPSS18.0统计软件。
5血液流变学改变比较
具体结果见表5。
表5 对家兔血液流变学全血黏度的影响(
Figure DEST_PATH_IMAGE008
±s，n=8)
Figure 7057DEST_PATH_IMAGE010
注：正常组与模型组比较，1) P<0.01；治疗组与模型组比较，2) P<0.01，3) P<0.05。
模型组与正常组有显著统计学意义（P<0.01），提示模型组血黏度明显高于正常组；天麻素注射液组、实施例1-3制备的巴布膏（含艾油）组与正常组比较差异无统计学意义（P>0.05），提示二者干预模型家兔后血黏度基本恢复至正常水平，巴布膏（无艾油）组与模型组比较差异无统计学意义（P>0.05），提示巴布膏（无艾油）组可降低血黏度作用，但作用不显著。

Claims (7)

1.一种用于治疗血管性眩晕的外用药物组合物，其特征在于，由以下重量配比的组分组成：异鼠李素5.8～57.6份；山奈酚2.5～24.7份；川陈皮素3.4～33.6份；毛蕊异黄酮3.0～29.7份；金合欢素7.1～70.7份；芦荟大黄素3.1～31.3份；木犀草素7.4～74.1份；黄芩素4.6～45.6份；羟基芫花素6.3～62.9份；橙皮素4.0～39.7份。
2.根据权利要求1所述的用于治疗血管性眩晕的外用药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物，由以下重量配比的组分：异鼠李素57.6份；山奈酚24.7份；川陈皮素33.6份；毛蕊异黄酮29.7份；金合欢素70.7份；芦荟大黄素31.3份；木犀草素74.1份；黄芩素45.6份；羟基芫花素62.9份；橙皮素39.7份。
3.权利要求1或2所述的用于治疗血管性眩晕的外用药物组合物的制剂。
4.根据权利要求3所述的用于治疗血管性眩晕的外用药物组合物的制剂，其特征在于，在制备治疗血管性眩晕的外敷药物上的应用。
5.根据权利要求3或4所述的用于治疗血管性眩晕药物组合物的外用制剂，其特征在于，含有活性成分的药物组合物充分混合均匀，加入艾油，再以药学上可接受的外用制剂形式给予施用。
6.根据权利要求5所述的用于治疗血管性眩晕药物组合物的外用制剂，其特征在于，所述的外用制剂的剂型为巴布膏剂。
7.根据权利要求6所述的用于治疗血管性眩晕药物组合物的外用制剂，其特征在于，所述的巴布膏剂的制备方法为：称取保湿剂甘油、丙二醇混合作为A相，聚丙烯酸钠、药物组合物与白陶土混匀作为B相，将溶解的聚乙烯醇1788型加入溶胀的卡波姆980型为C相，先将A相与C相混合均匀后，再加入B相和艾油混匀，均匀涂布于无纺布上，烘干，盖衬，剪裁，即得。
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