CN114794490A - 一种具有抗皮肤光老化及辅助减脂功能的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有抗皮肤光老化及辅助减脂功能的组合物，属于食品生产技术领域。所述组合物至少包括胶原蛋白肽、天然抗氧化剂和非胶原皮肤基质物质，能够协同促进皮肤胶原蛋白合成、提升抗氧化能力、缓解炎症反应、增加水分、提高弹性，全面改善皮肤光老化，同时辅助改善肥胖问题。本发明还通过共包埋处理来提高组合物兼容性、稳定性、生物利用度和功效。

Description

一种具有抗皮肤光老化及辅助减脂功能的组合物
技术领域
本发明涉及一种具有抗皮肤光老化及辅助减脂功能的组合物，属于食品生产技术领域。
背景技术
皮肤是人体最大的器官，具有保护机体免受外界伤害，阻止体内营养物质和水分流失，维持皮肤微环境和机体免疫稳定等作用。皮肤老化受到内源性和外源性因素的共同调控，内源性因素主要指的是由基因决定的、随年龄增长无法避免的因素；外源性因素包括紫外辐照、极度寒冷、熬夜、抽烟等，其中紫外辐照是主要的影响因素，占皮肤老化原因的约80％。
紫外辐照中对皮肤有害的波段主要为UVA和UVB，其中UVB为中频中波，可以直接作用于皮肤表层，在较短时间内即可使皮肤出现发红、起皮等炎症损伤；UVA为低频长波，可以直接达到皮肤的真皮层，两种紫外波段共同作用使机体产生大量自由基，造成氧化应激，使促炎因子剧增，进而导致胶原蛋白、透明质酸、神经酰胺等皮肤基质物质降解，细胞外基质平衡被破坏，皮肤失去支撑结构，大量锁水成分减少，宏观表现为水分流失、弹性下降等。
皮肤组织包括会受紫外线影响的表皮、真皮，还包括皮下脂肪层，其由松散结缔组织和脂肪小叶组成。肥胖是指在一定程度上脂肪层过厚、体内脂肪堆积的一种状态，也是目前困扰女性的一大问题。肥胖不仅会影响人们对外貌体型的自信心，更严重的是会对健康带来极大的危害，因此适当控制体重、降低体脂率是十分必要的。
经市场调研，发现一款胶原蛋白肽产品，该产品主要成分包括胶原蛋白肽、透明质酸、维生素C、神经酰胺、维生素E，具有补水锁水、淡斑美白、防止肌肤老化、增加皮肤弹性、减少皮肤皱纹的作用。CN200410040731.5公开了一种具有减肥作用的食品，含有魔芋精粉、低聚糖、粮食粉等，具有减肥作用。
总体而言，目前护肤产品多以胶原蛋白肽复配抗氧化剂和/或非胶原皮肤基质物质，但抗氧化剂、非胶原皮肤基质物质种类繁多，改善效果未知或不够，且未基于光老化复杂的机理，不能全面改善紫外线导致的皮肤老化。同时，肥胖作为困扰人们外貌的共同问题，现有产品尚未兼具解决皮肤光老化和肥胖的功能。组合物中涉及的成分多样，各组分溶解度、性质各不相同，复配之后的稳定性及生物利用度与功效也受到限制。因此，为高效、全面的改善皮肤光老化及肥胖问题，选择效果优异的原料，确定其有效剂量及协同促进作用，并提高其稳定性、生物利用度和功效都十分必要。
发明内容
【技术问题】
现有抗皮肤光老化产品的配方多以胶原蛋白肽复配抗氧化剂或非胶原皮肤基质物质，抗氧化剂、非胶原皮肤基质物质种类繁多，效果未知或不够，且未基于光老化复杂的发生机制，不能全面改善紫外线导致的皮肤老化。另外，现有产品未能同时针对皮肤光老化和肥胖两个共同困扰人们的外貌问题。此外，组合物成分多样，溶解度各不相同，复配兼容性和稳定性及生物利用度和功效受到限制。
【技术方案】
本发明提供一种具有抗皮肤光老化及辅助减脂功能的组合物，所述组合物能够协同促进皮肤胶原蛋白合成、提升抗氧化能力、缓解炎症反应、增加水分、提高弹性，全面改善皮肤光老化，同时辅助改善肥胖问题，并通过共包埋处理来提高组合物兼容性、稳定性、生物利用度和功效。
所述具有抗皮肤光老化及辅助减脂功能的组合物，包括胶原蛋白肽、天然抗氧化剂和非胶原皮肤基质物质，或，胶原蛋白肽、天然抗氧化剂、非胶原皮肤基质物质和低聚糖。所述组合物中的脂溶性和水溶性的低稳组分还可以由采用磷脂和乳化剂制备的脂质体进行共包埋，提高组合物的兼容性、稳定性、生物利用度和功效。
所述组合物包括胶原蛋白肽、天然抗氧化剂和非胶原皮肤基质物质时，按质量份数计，胶原蛋白肽600-1800份，天然抗氧化剂1-703份，非胶原皮肤基质物20-90份。
所述组合物包括胶原蛋白肽、天然抗氧化剂、非胶原皮肤基质物质和低聚糖时，按质量份数计，胶原蛋白肽600-1800份，天然抗氧化剂1-703份，非胶原皮肤基质物20-90份，低聚糖60-100份。
所述组合物中的低稳组分用脂质体进行包埋时，各原料按质量份数计，胶原蛋白肽600-1800份，天然抗氧化剂1-703份，非胶原皮肤基质物20-90份，低聚糖60-100份，磷脂120-1400份，乳化剂250-1300份。
本发明的一种实施方式中，所述胶原蛋白肽分子量在500-3000道尔顿之间。胶原蛋白肽添加量为600-1800份，优选地，胶原蛋白肽添加量为1200份。
本发明的一种实施方式中，所述天然抗氧化剂包括雨生红球藻提取物、石榴提取物、针叶樱桃提取物、维生素E粉中的任意一种或几种。优选为，90-120份雨生红球藻提取物，或250-310份石榴提取物与1-3份维生素E粉，或，450-580份针叶樱桃提取物与1-3份维生素E粉，或，90-120份雨生红球藻提取物、450-580份针叶樱桃提取物与1-3份维生素E粉。
本发明的一种实施方式中，所述非胶原皮肤基质物质为透明质酸钠、弹性蛋白肽、神经酰胺提取物中的任意一种或几种。本发明的一种实施方式中，优选为20-30份透明质酸钠、20-30份弹性蛋白肽与20-30份神经酰胺提取物的混合物。本发明的一种实施方式中，优选地，透明质酸钠分子量为110-300kDa。
本发明的一种实施方式中，所述低聚糖为壳寡糖、菊粉中的任意一种或两种。优选为2.2kDa分子量的壳寡糖，添加量为60-100份。
本发明的一种实施方式中，采用磷脂和乳化剂制备的脂质体进行共包埋时，磷脂用量为120-1400份。优选地，磷脂添加量为896份，其中，大豆磷脂和乳脂肪球膜(MFGM)磷脂的质量比优选为1.33:1-2.5:1。
本发明的一种实施方式中，采用磷脂和乳化剂制备的脂质体进行共包埋时，乳化剂用量为250-1300份。所述乳化剂包括乙酰化单双甘油脂肪酸酯、吐温类乳化剂、聚甘油类乳化剂中的任意一种或几种。
本发明的一种实施方式中，所述共包埋的低稳组分包括脂溶性的雨生红球藻提取物、神经酰胺提取物、维生素E粉中的任意一种或几种，以及水溶性的针叶樱桃提取物、石榴提取物中的任意一种或两种。
在本发明的一种实施方式中，所述组合物，按质量份数计，包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂103份、非胶原皮肤基质物质68份。所述天然抗氧化剂为雨生红球藻提取物；所述非胶原皮肤基质物质为包含透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％。
在本发明的一种实施方式中，所述组合物，按质量份数计，包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂558.66份、非胶原皮肤基质物质68份。所述天然抗氧化剂为针叶樱桃提取物和维生素E粉的混合物，其中，针叶樱桃提取物占99.52％，维生素E粉占0.48％；所述非胶原皮肤基质物质为包含透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中，透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％。
在本发明的一种实施方式中，所述组合物，按质量份数计，包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂661.66份、非胶原皮肤基质物质68份。所述天然抗氧化剂为雨生红球藻提取物、针叶樱桃提取物和维生素E粉的混合物，其中，雨生红球藻提取物占15.57％，针叶樱桃提取物占84.03％，维生素E粉占0.40％；所述非胶原皮肤基质物质为透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中，透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％。
在本发明一种实施方式中，所述组合物，按质量份数计，包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂294.66份、非胶原皮肤基质物质68份。所述天然抗氧化剂为石榴提取物和维生素E粉的混合物，其中，石榴提取物占99.10％，维生素E占0.90％；所述非胶原皮肤基质物质为透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中，透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％。
在本发明一种实施方式中，所述组合物，按质量份数计，包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂292份、非胶原皮肤基质物质68份和低聚糖80份。所述天然抗氧化剂为石榴提取物；所述非胶原皮肤基质物质为透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中，透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％；所述低聚糖为壳寡糖。
在本发明一种实施方式中，所述组合物，按质量份数计，包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂294.66份、非胶原皮肤基质物质68份和低聚糖80份。所述天然抗氧化剂为石榴提取物和维生素E粉的混合物，其中，石榴提取物占99.10％，维生素E占0.90％；所述非胶原皮肤基质物质为透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中，透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％；所述低聚糖为壳寡糖。
本发明所述组合物可用于制备具有护肤、减脂功能的食品。所述食品包括但不限于固体剂型(如固体饮料、粉剂、胶囊、压片等)和液体剂型(如口服液、饮料等)等。
【有益效果】
本发明组合物中的胶原蛋白肽和天然抗氧化剂，在促进胶原蛋白合成、提高抗氧化能力、缓解炎症反应方面具有协同作用。
本发明组合物中的胶原蛋白肽、非胶原皮肤基质物质和天然抗氧化剂，三者在促进胶原蛋白合成、提高抗氧化能力、缓解炎症反应、维持水分方面具有协同作用，能协同抵抗皮肤的光老化。
本发明所述组合物中的石榴提取物和壳寡糖，两者在辅助减脂方面具有协同作用。
本发明组合物所采用的天然抗氧化剂：维生素C是水溶性的抗氧化剂，可作用于细胞质；维生素E是脂溶性的抗氧化剂，可作用于皮下脂肪；虾青素是两亲性的抗氧化剂，可穿插并作用于细胞膜；三种作用部位和作用效果不同的抗氧化剂搭配，可较好地与胶原蛋白共同提高皮肤抗氧化能力、缓解炎症反应。
本发明组合物所采用的非胶原皮肤基质物质：透明质酸主要存在于真皮层，能维持细胞外基质的含水量；弹性蛋白也主要存在于真皮层，与胶原蛋白共同维持皮肤的弹性；神经酰胺主要存在于表皮层，能形成网络结构状的皮肤屏障，阻止皮肤水分流失；三种作用部位和作用效果不同的非胶原皮肤基质物质搭配，可较好地与胶原蛋白共同维持皮肤的水分和弹性。
本发明组合物兼具抗皮肤光老化和辅助减脂功能，得益于所采用的石榴提取物：石榴提取物中的安石榴甙和鞣花酸在体内被肠道菌群降解为尿石素，兼具抗氧化和减脂功效；石榴提取物与维生素E搭配，产生较强的抗氧化功效；石榴提取物与壳寡糖搭配，产生协同减脂功效。
本发明采用脂质体对组合物中脂溶性和水溶性的低稳组分进行共包埋，提高了组合物的兼容性、稳定性、生物利用度和功效。
附图说明
图1为实施例1中小鼠背部皮肤形态。
具体实施方式
实验方法
1、长期紫外照射致光老化动物模型建立
采用长期紫外照射建立光老化模型。具体实验方法如下：BALB/c Nude裸鼠入驻后适应性喂养1周，后按体重随机分组，每组10只。其中，除空白组外，均需进行紫外造模。紫外装置由两支UVA灯管和一支UVB灯管组成，灯管距离小鼠背部为30cm，小鼠背部UVA、UVB辐照强度分别为1.44mW/cm2、0.14mW/cm2。采用5×9×4cm的透明盒子固定小鼠，盒子顶部用1×1cm铁丝网封口。除空白组外，其它组从第2周起每天灌胃样品并持续至实验结束，第3周紫外辐照剂量为700mJ/cm2，第4周为1400mJ/cm2，第5周为2100mJ/cm2，第6-9周为2800mJ/cm2，每周照射3次，每周对小鼠进行称重，根据体重调整灌胃体积，灌胃体积为10mL/kg体重。
2、短期紫外照射致光老化动物模型建立
除长期紫外照射造模方式，短期、高辐照剂量紫外造模方式也可导致急性皮肤损伤。具体实验方法如下：BALB/c Nude裸鼠入驻后适应性喂养1周，后按体重随机分组，每组10只，每天灌胃样品，每次辐照剂量为5600mJ/cm2，每周照射3次，连续2周。其余实验步骤与上述长期紫外造模方法相同。
3、肥胖动物模型建立
C57BL/6J小鼠入驻后适应性喂养1周，后按体重随机分组，除空白组均连续饲喂高脂饲料13周，并每天灌胃样品，每周对小鼠进行称重，根据体重调整灌胃体积，灌胃体积为10mL/kg。试验结束后称量小鼠体重。
高脂饲料配方为：66.5％普通维持饲料、20％蔗糖、10％猪油、2.5％胆固醇、1％胆酸钠。
4、指标测定方法
4.1基质金属蛋白酶(MMP)及其抑制剂(TIMP)含量测定
实验结束后，禁食不禁水12h，异氟烷麻醉，取背部皮肤约0.1g加入0.9mL预冷的生理盐水，研磨制成10％组织匀浆，在3000r/min、4℃条件下离心15min，取上清液根据试剂盒说明书测定MMP和TIMP的含量。
4.2总抗氧化能力(T-AOC)测定
样品处理同4.1，根据试剂盒说明书测定T-AOC。
4.3白细胞介素-8(IL-8)含量测定
小鼠麻醉后，摘眼球取血，在3500r/min、4℃条件下离心15min，取上层血清，根据试剂盒说明书测定IL-8的含量。
4.4水分和弹性测定
在温度为20-26℃、湿度为40-60％环境下，利用皮肤分析仪测定小鼠背部皮肤水分和弹性。
4.5羟脯氨酸(Hyp)含量测定
样品处理同4.1，根据试剂盒说明书测定Hyp的含量，结果表示为nmol/mg prot，其中prot代表蛋白质。
实验原料
本发明中，所述胶原蛋白肽中蛋白质含量为96.6％，石榴提取物中安石榴甙含量为33.2％、鞣花酸含量为1.1％，雨生红球藻提取物中虾青素含量为2.4％，针叶樱桃提取物中维生素C含量为18％，维生素E粉中维生素E含量为30.96％，透明质酸钠中透明质酸钠含量为96.2％，弹性蛋白肽中蛋白质含量为99.9％，神经酰胺提取物中神经酰胺含量为3.1％。上述物质均可通过购买获得。
对比例1：单独给与胶原蛋白肽，比较不同剂量胶原蛋白肽在抗皮肤光老化中的差异
采用长期紫外照射致光老化动物模型，比较不同剂量胶原蛋白肽对小鼠光老化的改善效果。实验步骤参见上文的实验方法，具体分组和剂量见下表1。
表1不同剂量胶原蛋白肽抗皮肤光老化动物实验分组与剂量
Figure BDA0003662320800000061
Figure BDA0003662320800000071
实验结束后测定MMP-12、TIMP-1指标，结果见下表2。
MMP-12是基质金属蛋白酶，会降解胶原蛋白；TIMP-1是MMP的抑制剂，能抑制胶原蛋白的降解。表2数据显示，较空白组，模型组皮肤中MMP-12显著增加，TIMP-1显著降低，表明紫外照射导致了小鼠皮肤中胶原蛋白的降解。给与胶原蛋白肽后，MMP-12在中、高剂量组中呈现为极显著下降；TIMP-1在中剂量组中呈现为显著增加。综合考虑，说明灌胃中剂量胶原蛋白肽促进体内胶原蛋白净合成的效果较优，并结合考虑后期小鼠灌胃剂量，优选中剂量胶原蛋白肽，用于后续复配干预实验。
表2不同剂量胶原蛋白肽对小鼠皮肤MMP-12和TIM-1含量的影响
Figure BDA0003662320800000072
注：较空白组，*表示差异显著(P＜0.05)，**表示差异极显著(P＜0.01)；较模型组，#表示差异显著(P＜0.05)，##表示差异极显著(P＜0.01)；下同。
对比例2：单独给与抗氧化剂，比较不同抗氧化剂在抗皮肤光老化中的差异
采用短期紫外照射模型，比较不同抗氧化剂抗皮肤光老化的差异。综合考虑后续复方动物实验设计中小鼠的灌胃承受能力等因素，确定了蓝莓提取物、石榴提取物、针叶樱桃提取物、百香果提取物的添加剂量；雨生红球藻添加剂量受限于《关于批准雨生红球藻等新资源食品的公告(卫生部第17号公告)》，其中成人允许的摄入量为少于0.8g/天；维生素E摄入量受限于GB 2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》，允许的最大使用量为0.2g/kg产品。实验步骤同具体实施方式2，具体分组和剂量见下表3。
表3不同抗氧化剂抗皮肤光老化动物实验分组与剂量
Figure BDA0003662320800000073
Figure BDA0003662320800000081
实验结束后测定T-AOC、IL-8指标，结果见下表4。
T-AOC是反应总抗氧化能力的指标，体现机体内清除自由基、维持氧化还原平衡的能力。紫外线照射导致的体内自由基过剩，还会诱导炎症因子如IL-8的增加。如表4所示，较空白组，模型组皮肤中T-AOC表达量显著性下调，说明紫外线照射消耗了机体的内源性抗氧化物质；较模型组，干预组皮肤中T-AOC表达量均呈现出上升趋势，其中雨生红球藻、石榴+维生素E、针叶樱桃+维生素E可显著提高T-AOC表达量。较空白组，模型组IL-8显著增加；较模型组，干预组IL-8均呈现出下降趋势，其中雨生红球藻、石榴+维生素E、针叶樱桃+维生素E使IL-8显著减少。因此，优选雨生红球藻提取物、石榴提取物+维生素E粉、针叶樱桃提取物+维生素E粉作为抗氧化剂，用于后续复配干预实验。
雨生红球藻是一种新型的食品原料，是获取天然虾青素的优质原料，虾青素分子结构中具有亲水和疏水基团，使其兼具在亲水区和疏水区捕获自由基的能力，从而体现出较高的抗氧化效果。石榴提取物富含水溶性的安石榴甙、鞣花酸，后者能在体内被肠道菌群降解为尿石素，呈现出清除羟自由基、超氧自由基的能力。针叶樱桃提取物富含多种维生素，主要为水溶性的维生素C，可中和过氧化产物，维持氧化还原平衡，还可作为脯氨酸羟化酶的辅助因子，促进胶原蛋白合成。维生素E是脂溶性的抗氧剂。表4数据显示，水溶性和脂溶性抗氧化剂搭配可呈现出较高的抗氧化能力，进而产生较好的抗炎效果。
表4不同抗氧化剂对小鼠T-AOC表达量和IL-8含量的影响
Figure BDA0003662320800000082
Figure BDA0003662320800000091
对比例3：单独给与低聚糖，或，给与低聚糖和抗氧化剂，比较不同减脂类物质在辅助减脂中的差异
在对比不同抗氧化剂在抗皮肤光老化作用差异的实验中发现，灌胃石榴提取物使小鼠体重下降，但并未使小鼠呈现出不良反应，这说明石榴提取物可能具有减脂的功效。采用肥胖动物模型，进一步评估其减脂功效，并与菊粉、壳寡糖进行复配，探究是否产生协同增效。实验步骤同具体实施方式3，具体分组和剂量见下表5。
表5石榴提取物和不同低聚糖辅助减脂动物实验分组与剂量
Figure BDA0003662320800000092
实验前后称量小鼠体重，结果见下表6。
实验前，各实验组小鼠的体重均无显著差异。实验后，较模型组，干预组小鼠体重均呈现出下降趋势，其中石榴+壳寡糖组小鼠体重呈现为极显著下降。较模型组，石榴组小鼠体重下降1.41g，壳寡糖组小鼠体重下降0.97，石榴+壳寡糖组小鼠体重下降3.16g，大于单独石榴组和壳寡糖组小鼠体重下降之和，即2.38g，这说明石榴提取物和壳寡糖在减脂方面具有协同作用，因此结合考虑石榴提取物兼具抗氧化和减脂的功效，优选石榴提取物和壳寡糖复配，用于后续组合干预实验。
石榴提取物中的安石榴甙和鞣花酸在体内被肠道菌群降解为尿石素，后者可促进脂肪分解和代谢；壳寡糖能抑制肠道对脂肪酸和胆固醇的吸收；因而石榴提取物和壳寡糖的组合物能产生协同作用，抑制脂肪在内体的积累，实现减脂功效。
表6石榴提取物和不同低聚糖对肥胖小鼠体重的影响
Figure BDA0003662320800000101
对比例4：单独给与非胶原皮肤基质物质，比较不同非胶原皮肤基质物质在抗皮肤光老化中的差异
采用短期紫外照射模型，比较不同非胶原皮肤基质物质在抗皮肤光老化中的差异。综合考虑后续复方动物实验设计中小鼠的灌胃承受能力、复方稳定性等因素，确定了N-乙酰氨基葡萄糖、硫酸软骨素提取物、弹性蛋白肽、神经酰胺提取物的添加剂量；透明质酸钠添加剂量受限于《关于蝉花子实体(人工培植)等15种“三新食品”的公告(2020年第9号)》，摄入量≤200mg/天。实验步骤同具体实施方式2，具体分组和剂量见下表7。
表7不同非胶原皮肤基质物质抗皮肤光老化动物实验分组与剂量
Figure BDA0003662320800000102
Figure BDA0003662320800000111
实验结束后测定水分和弹性指标，结果见下表8。
较空白组，模型组水分和弹性显著降低；较模型组，干预组水分和弹性均呈现出增加趋势，其中透明质酸钠和神经酰胺组水分增加更明显，弹性蛋白肽组弹性增加更明显，因此优选透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物作为非胶原皮肤基质物质，用于后续复配干预实验。
透明质酸、弹性蛋白、神经酰胺都是皮肤中除胶原蛋白之外的重要基质成分，前两者主要位于真皮层，后者主要位于表皮层，三者与胶原蛋白共同维持皮肤水分和弹性。弹性蛋白肽与弹性蛋白酶具有高度亲和力，能竞争性抑制内源性弹性蛋白的降解，维持真皮的抗拉性和弹性。透明质酸是真皮中的粘多糖成分，具有高效“锁水”能力，使皮肤水润光泽。神经酰胺是表皮角质层细胞间脂质的主要成分，参与形成角质层中的网状结构，可抑制皮肤水分流失、降低外界刺激。
表8不同非胶原皮肤基质物质对小鼠皮肤水分和弹性的影响
Figure BDA0003662320800000112
对比例5：单独给与透明质酸钠，比较不同分子量透明质酸钠在抗皮肤光老化中的差异
采用短期紫外照射模型，比较不同分子量透明质酸钠在抗皮肤光老化中的差异。实验步骤同具体实施方式2，具体分组和剂量见下表9。
表9不同分子量透明质酸钠抗皮肤光老化动物实验分组与剂量
Figure BDA0003662320800000113
Figure BDA0003662320800000121
实验结束后测定水分指标，结果见下表10。
较模型组，不同分子量透明质酸钠组水分均呈现出增加趋势，其中110和300kDa透明质酸钠组水分增加更明显，因此优选分子量为110-300kDa的透明质酸钠，用于后续复配干预实验。
透明质酸属于粘多糖类物质，过高的分子量使其难以被吸收利用，过低的分子量使其难以阻止皮肤水分流失。
表10不同分子量透明质酸钠对小鼠皮肤水分的影响
Figure BDA0003662320800000122
对比例6：给与胶原蛋白肽与抗氧化剂，比较胶原蛋白肽与不同抗氧化剂的复配在抗皮肤光老化中的差异
采用长期紫外照射致光老化动物模型，比较胶原蛋白肽与不同抗氧剂的复配在抗皮肤光老化中的差异。实验步骤同具体实施方式1，具体分组和剂量见下表11。
表11胶原蛋白肽与不同抗氧化剂复配抗皮肤光老化动物实验分组与剂量
Figure BDA0003662320800000123
Figure BDA0003662320800000131
实验结束后测定Hyp、T-AOC、IL-8指标，结果见下表12。
Hyp是胶原蛋白的特征性氨基酸，可表征胶原蛋白的含量。较空白组，模型组Hyp含量显著减少；较模型组，复配组3和4Hyp含量均呈现出增加趋势，其中复配组4Hyp含量显著增加，说明复配组3和4可促进小鼠皮肤中胶原蛋白的合成。较空白组，模型组T-AOC表达量显著下调，且IL-8显著增加；较模型组，各复配组T-AOC表达量均极显著上调，且IL-8均极显著减少，说明各复配组均可提高小鼠的抗氧化能力，并缓解炎症反应。
较模型组，中剂量胶原蛋白肽组Hyp增加12.76nmol/mg prot、T-AOC增加2.22U/gprot、IL-8降低12.05pg/mL，雨生红球藻+针叶樱桃+维生素E组Hyp增加3.37nmol/mg prot、T-AOC增加3.10U/g prot、IL-8降低15.65pg/mL，复配组4Hyp增加23.07nmol/mg prot、T-AOC增加5.93U/g prot、IL-8降低36.83pg/mL，大于单独中剂量胶原蛋白肽组和雨生红球藻+针叶樱桃+维生素E组效果之后，即Hyp增加16.13nmol/mg prot、T-AOC增加5.32U/g prot、IL-8降低27.70pg/mL，这说明胶原蛋白肽和抗氧化剂(雨生红球藻+针叶樱桃+维生素E)在促进胶原蛋白合成、提高抗氧化能力、缓解炎症反应方面具有协同作用。
维生素C是水溶性的抗氧化剂，可作用于细胞质；维生素E是脂溶性的抗氧化剂，可作用于皮下脂肪；虾青素是两亲性的抗氧化剂，可穿插并作用于细胞膜。三种作用部位和作用效果不同的抗氧化剂搭配，可较好地与胶原蛋白肽共同抵抗皮肤的光老化。
表12胶原蛋白肽与不同抗氧化剂复配对小鼠Hyp含量、T-AOC表达量和IL-8含量的影响
Figure BDA0003662320800000132
Figure BDA0003662320800000141
对比例7：给与胶原蛋白肽与非胶原皮肤基质物质，比较胶原蛋白肽与不同非胶原皮肤基质物质的复配在抗皮肤光老化中的差异
采用长期紫外照射致光老化动物模型，比较胶原蛋白肽与不同非胶原皮肤基质物质的复配在抗皮肤光老化中的差异。实验步骤同具体实施方式1，具体分组和剂量见下表13。
表13胶原蛋白肽与不同非胶原皮肤基质物质复配抗皮肤光老化动物实验分组与剂量
Figure BDA0003662320800000142
实验结束后测定TIMP-1、水分和弹性指标，结果见下表14。
较空白组，模型组TIMP-1含量显著降低；较模型组，各复配组TIMP-1含量均呈现出增加趋势，其中复配组8TIMP-1含量极显著增加。较空白组，模型组水分和弹性显著降低；较模型组，各复配组水分和弹性均呈现出增加趋势，其中复配组8水分和弹性增加更明显。综合考虑，说明复配组8能较好地抑制胶原蛋白降解，维持皮肤水分和弹性，因此优选胶原蛋白肽和透明质酸钠+弹性蛋白肽+神经酰胺提取物复配，用于后续组合干预实验。
透明质酸主要存在于真皮层，能维持细胞外基质的含水量；弹性蛋白也主要存在于真皮层，与胶原蛋白共同维持皮肤的弹性；神经酰胺主要存在于表皮层，能形成网络结构状的皮肤屏障，阻止皮肤水分流失。表14数据显示，透明质酸钠、弹性蛋白肽、神经酰胺三种作用部位和作用效果不同的非胶原皮肤基质物质搭配，可较好地与胶原蛋白肽共同维持皮肤的水分和弹性。
表14胶原蛋白肽与不同非胶原皮肤基质物质复配对小鼠皮肤TIMP-1含量、水分和弹性的影响
Figure BDA0003662320800000143
Figure BDA0003662320800000151
实施例1：含胶原蛋白肽组合物在抗皮肤光老化中的效果
采用长期紫外照射致光老化动物模型，评价含胶原蛋白肽的组合物(不含低聚糖)对小鼠皮肤光老化的改善效果。实验步骤同具体实施方式1，具体分组和剂量见下表15。
表15含胶原蛋白肽组合物抗皮肤光老化动物实验分组与剂量
Figure BDA0003662320800000152
实验结束后测定Hyp、TIMP-1、T-AOC、IL-8、水分和弹性指标，结果见下表16。
较空白组，模型组Hyp含量显著减少；较模型组，各组合物组Hyp含量均呈现出增加趋势，其中组合物3组Hyp含量显著增加。较空白组，模型组TIMP-1含量显著降低；较模型组，组合物1、2和3组TIMP-1含量均极显著增加，组合物4组TIMP-1含量显著增加。较空白组，模型组T-AOC表达量显著下调，且IL-8显著增加；较模型组，各组合物组T-AOC表达量均极显著上调，且IL-8均极显著减少。较空白组，模型组水分和弹性显著降低；较模型组，各组合物组水分和弹性均呈现出增加趋势，其中组合物3组水分含量显著增加，组合物3组弹性增加更明显。较模型组，各组合物组中老鼠皮肤的粗糙度、皱纹都有明显改善(图1)。综合考虑，说明各组合物组均能较好地促进胶原蛋白净合成，提高抗氧化能力，缓解炎症反应，维持水分和弹性，改善粗糙和皱纹，从而较好地抵抗皮肤光老化。
较模型组，中剂量胶原蛋白肽组Hyp增加12.76nmol/mg prot、T-AOC增加2.22U/gprot、IL-8降低12.05pg/mL、水分增加3.24AU，非胶原皮肤基质物质组Hyp增加3.17nmol/mgprot、T-AOC增加0.87U/g prot、IL-8降低7.15pg/mL、水分增加2.01AU，雨生红球藻+针叶樱桃+维生素E组Hyp增加3.37nmol/mg prot、T-AOC增加3.10U/g prot、IL-8降低15.65pg/mL、水分增加0.78AU，组合物3组Hyp增加19.53nmol/mg prot、T-AOC增加7.62U/g prot、IL-8降低51.69pg/mL、水分增加6.12AU，大于单独中剂量胶原蛋白肽组、非胶原皮肤基质物质组和雨生红球藻+针叶樱桃+维生素E组效果之后，即Hyp增加19.30nmol/mg prot、T-AOC增加6.19U/g prot、IL-8降低34.85pg/mL、水分增加6.03AU，这说明胶原蛋白肽、非胶原皮肤基质物质(透明质酸钠+弹性蛋白肽+神经酰胺提取物)和抗氧化剂(雨生红球藻+针叶樱桃+维生素E)在促进胶原蛋白净合成、提高抗氧化能力、缓解炎症反应、维持水分方面具有协同作用，能协同抵抗皮肤的光老化。
表16含胶原蛋白肽组合物对小鼠Hyp含量、TIMP-1含量、T-AOC表达量、IL-8含量、水分和弹性的影响
Figure BDA0003662320800000161
对比例8：市售胶原蛋白肽产品在抗皮肤光老化中的效果
经市场调研，发现一款胶原蛋白肽产品，包括胶原蛋白肽、透明质酸钠、刺梨提取物(含维生素C)、米糠油粉(含神经酰胺)、小麦胚粉(含维生素E)。
采用长期紫外照射致光老化动物模型，对比市售胶原蛋白肽产品对小鼠皮肤光老化的改善效果。实验步骤同具体实施方式1，具体分组和剂量见下表17。
表17市售胶原蛋白肽产品和本发明组合物抗皮肤光老化动物实验分组和剂量
Figure BDA0003662320800000171
实验结束后测定Hyp、TIMP-1、T-AOC、IL-8、水分和弹性指标，结果见下表18。
较市售胶原蛋白肽产品组，组合物2和3组在Hyp含量、TIMP-1含量、T-AOC表达量、IL-8含量、水分和弹性方面的改善效果均更加明显，表明组合物2和3具有更优的抗皮肤光老化功效。
较市售胶原蛋白肽产品组，组合物2和3中非胶原皮肤基质物质和抗氧化剂的组成，能更全面地针对皮肤光老化复杂的发生机制，其中皮肤基质物质涉及真皮层的弹性蛋白、真皮层的透明质酸、表皮层的神经酰胺三种作用部位和作用效果不同的组分，抗氧化剂涉及两亲性的虾青素、水溶性的维生素C、脂溶性的维生素E三种作用部位和作用效果不同的组分，能与胶原蛋白肽产生协同增效作用，更好地抵抗皮肤的光老化。
表18市售胶原蛋白肽产品和本发明组合物对小鼠Hyp含量、TIMP-1含量、T-AOC表达量、IL-8含量、水分和弹性的影响
Figure BDA0003662320800000172
实施例2：脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物在抗皮肤光老化中的效果：脂质体制备中总磷脂添加量的影响
脂质体可实现不同溶解性组分的共包埋，提高复杂体系的稳定性和兼容性。采用脂质体对含胶原蛋白肽组合物中的脂溶性和水溶性的低稳组分进行共包埋，从包埋率、生物利用度和抗皮肤光老化功效三方面，确定脂质体制备中总磷脂的添加量，其中大豆卵磷脂和MFGM磷脂的比例为2.5:1。
选取组合物3进行包埋，其低稳组分包括脂溶性的神经酰胺提取物、雨生红球藻提取物、维生素E粉，以及水溶性的针叶樱桃提取物，共计682.66mg/kg，占组合物3总量的35.38％。采用脂质体对组合物3中的低稳组分进行包埋，再与组合物3中的胶原蛋白肽、弹性蛋白肽、透明质酸等其它组分混合，得到脂质体包埋的组合物3。脂质体包埋的实验步骤如下：取大豆卵磷脂和MFGM磷脂分散于超纯水中，加入水溶性针叶樱桃提取物，混合均匀，得到水相；取乙酰化单双甘油脂肪酸酯、吐温80、聚甘油脂肪酸酯，加热溶解之后加入脂溶性雨生红球藻提取物、神经酰胺提取物、维生素E粉，混合均匀，得到油相；将上述油相加入水相中，搅拌之后进行微射流均质，循环3次。脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物的具体分组与剂量见下表19，其中乳化剂含乙酰化单双甘油脂肪酸酯、吐温80、聚甘油脂肪酸酯，添加量依次为643、257.2、385.8mg/kg。
表19脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物分组与剂量
Figure BDA0003662320800000181
测定脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物3中低稳组分的包埋率，以雨生红球藻提取物所含的虾青素为脂溶性标志物、针叶樱桃粉提取物所含的维生素C为水溶性标志物。对脂质体包埋的组合物3进行离心处理，分离得到游离部分。根据GB/T 31520.2015《红球藻中虾青素的测定液相色谱法》，对游离和总的虾青素进行测定，并计算其包埋率；根据GB5009.86-2016《食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定》中的第一法高效液相色谱法，对游离和总的维生素C进行测定，并计算其包埋率。结果见下表20所示：包埋组J2、J3中虾青素和维生素C的包埋率更大。
表20脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物中低稳组分的包埋率
Figure BDA0003662320800000191
测定脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物3中低稳组分的生物利用度，以雨生红球藻提取物所含的虾青素为标志物。以大鼠为动物模型，实验步骤如下：
Wistar大鼠入驻后适应性喂养1周，之后按体重随机分组，每组10只，以普通饲料喂养一周，之后禁食12h，以脂质体包埋的组合物3进行灌胃，在之后的0、0.5、1、2、4、8、10、12、16、24h时间点，尾尖采血，分离血清，测定标志物浓度，标志物的生物利用度以AUC值表示。
AUC(曲线下方的面积)：血清中标志物浓度-时间曲线下方的面积。
脂质体包埋的组合物3灌胃剂量换算：大鼠剂量(mg/kg)＝小鼠剂量(mg/kg)×0.5。具体分组和剂量见下表21。
表21脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物中低稳组分生物利用度动物实验分组和剂量
Figure BDA0003662320800000192
如表22所示，较组合物3组，各包埋组中虾青素的AUC均有极显著提高，其中包埋组J2中虾青素的AUC最大，说明其虾青素的生物利用度最高。
表22脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物中低稳组分的生物利用度
Figure BDA0003662320800000193
Figure BDA0003662320800000201
采用长期紫外照射致光老化动物模型，评价脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物3对小鼠皮肤光老化的改善效果。实验步骤同具体实施方式1，具体分组和剂量见下表23。
表23脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物抗皮肤光老化动物实验分组与剂量
Figure BDA0003662320800000202
实验结束后测定Hyp、T-AOC、IL-8、水分和弹性指标，结果见下表24。
较组合物3组，各包埋组在Hyp含量、T-AOC表达量、IL-8含量、水分和弹性方面的改善效果均更加明显，其中包埋组J2的改善效果最明显，说明包埋组J2抗皮肤光老化的功效最强。
表24脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物对小鼠Hyp含量、T-AOC表达量、IL-8含量、水分和弹性的影响
Figure BDA0003662320800000203
Figure BDA0003662320800000211
综上所述，脂质体共包埋可提高含胶原蛋白肽组合物的兼容性、稳定性、生物利用度和抗皮肤光老化功效，其中包埋组J2的提高效果最大，因此优选脂质体制备中总磷脂的添加量为896mg/kg，其中大豆卵磷脂和MFGM磷脂的添加量分别为640和256mg/kg。
对比例9：脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物在抗皮肤光老化中的效果：脂质体制备中大豆卵磷脂和MFGM磷脂配比的影响
采用脂质体对含胶原蛋白肽组合物中的脂溶性和水溶性的低稳组分进行共包埋，通过包埋率，确定脂质体制备中大豆卵磷脂和MFGM磷脂的比例，其中总磷脂的添加量为896mg/kg。脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物的具体分组与剂量见下表25所示。
表25脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物分组与剂量
Figure BDA0003662320800000212
如表26所示，包埋组P2、P3中虾青素和维生素C的包埋率更大，因此优选脂质体制备中大豆卵磷脂与MFGM磷脂的质量比为1.33:1-2.5:1，其中总磷脂的添加量为896mg/kg。
表26脂质体包埋的含胶原蛋白肽组合物中低稳组分的包埋率
Figure BDA0003662320800000213
实施例3含胶原蛋白肽组合物在辅助减脂中的效果
采用肥胖动物模型，评价含胶原蛋白肽组合物辅助减脂的效果。实验步骤同具体实施方式3，具体分组和剂量见下表27。
表27含胶原蛋白肽组合物辅助减脂动物实验分组与剂量
Figure BDA0003662320800000221
实验前后称量小鼠体重，结果见下表28。
实验前，各实验组小鼠的体重均无显著差异见下表。实验后，较模型组，各组合物组小鼠体重均呈现出下降趋势，其中组合物5、6组小鼠体重呈现为极显著下降。
组合物4中含有胶原蛋白肽、非胶原皮肤基质物质(透明质酸钠+弹性蛋白肽+神经酰胺提取物)和抗氧化剂(石榴提取物+维生素E)，具有较好地抗皮肤光老化的功效。组合物4进一步和壳寡糖搭配，则兼具了辅助减脂的功效，这得益于石榴提取物，其与VE搭配具有较好的抗氧化效果，其与壳寡糖搭配具有较好的协同减脂功效。
表28含胶原蛋白肽组合物对肥胖小鼠体重的影响
Figure BDA0003662320800000222
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.具有抗皮肤光老化及辅助减脂功能的组合物，其特征在于，包括：
胶原蛋白肽、天然抗氧化剂和非胶原皮肤基质物质；或，
胶原蛋白肽、天然抗氧化剂、非胶原皮肤基质物质和低聚糖；或，
所述组合物中的脂溶性和水溶性的低稳组分由采用磷脂和乳化剂制备的脂质体进行共包埋。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，包括胶原蛋白肽、天然抗氧化剂和非胶原皮肤基质物质时，按质量份数计，胶原蛋白肽600-1800份，天然抗氧化剂1-703份，非胶原皮肤基质物20-90份；或，
包括胶原蛋白肽、天然抗氧化剂、非胶原皮肤基质物质和低聚糖时，按质量份数计，胶原蛋白肽600-1800份，天然抗氧化剂1-703份，非胶原皮肤基质物20-90份，低聚糖60-100份；或，
所述组合物中的低稳组分用脂质体进行包埋时，各原料按质量份数计，胶原蛋白肽600-1800份，天然抗氧化剂1-703份，非胶原皮肤基质物20-90份，低聚糖60-100份，磷脂120-1400份，乳化剂250-1300份。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述胶原蛋白肽分子量在500-3000道尔顿之间；优选地，胶原蛋白肽添加量为1200份。
4.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述天然抗氧化剂包括雨生红球藻提取物、石榴提取物、针叶樱桃提取物、维生素E粉中的任意一种或几种；优选为，90-120份雨生红球藻提取物，或250-310份石榴提取物与1-3份维生素E粉，或，450-580份针叶樱桃提取物与1-3份维生素E粉，或，90-120份雨生红球藻提取物、450-580份针叶樱桃提取物与1-3份维生素E粉。
5.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述非胶原皮肤基质物质为透明质酸钠、弹性蛋白肽、神经酰胺提取物中的任意一种或几种；优选为，20-30份透明质酸钠、20-30份弹性蛋白肽与20-30份神经酰胺提取物的混合物。
6.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述低聚糖为壳寡糖、菊粉中的任意一种或两种。
7.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，采用磷脂和乳化剂制备的脂质体进行共包埋时，磷脂用量为120-1400份，乳化剂用量为250-1300份，磷脂由大豆磷脂和乳脂肪球膜磷脂按质量比1.33:1-2.5:1混合得到；优选地，磷脂用量为896份。
8.根据权利要求1～7任一项所述的组合物，其特征在于，按质量份数计，
包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂103份、非胶原皮肤基质物质68份，所述天然抗氧化剂为雨生红球藻提取物，所述非胶原皮肤基质物质为包含透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中，透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％；或，
包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂558.66份、非胶原皮肤基质物质68份，所述天然抗氧化剂为针叶樱桃提取物和维生素E粉的混合物，其中，针叶樱桃提取物占99.52％，维生素E粉占0.48％；所述非胶原皮肤基质物质为包含透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中，透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％；或，
包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂661.66份、非胶原皮肤基质物质68份，所述天然抗氧化剂为雨生红球藻提取物、针叶樱桃提取物和维生素E粉的混合物，其中，雨生红球藻提取物占15.57％，针叶樱桃提取物占84.03％，维生素E粉占0.40％；所述非胶原皮肤基质物质为透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中，透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％；或，
包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂294.66份、非胶原皮肤基质物质68份，所述天然抗氧化剂为石榴提取物和维生素E粉的混合物，其中，石榴提取物占99.10％，维生素E占0.90％；所述非胶原皮肤基质物质为透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中，透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％；或，
包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂292份、非胶原皮肤基质物质68份和低聚糖80份，所述天然抗氧化剂为石榴提取物；所述非胶原皮肤基质物质为透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中，透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％；所述低聚糖为壳寡糖；或，
包括胶原蛋白肽1200份、天然抗氧化剂294.66份、非胶原皮肤基质物质68份和低聚糖80份，所述天然抗氧化剂为石榴提取物和维生素E粉的混合物，其中，石榴提取物占99.10％，维生素E占0.90％；所述非胶原皮肤基质物质为透明质酸钠、弹性蛋白肽和神经酰胺提取物的混合物，其中，透明质酸钠占38.24％，弹性蛋白肽占30.88％，神经酰胺提取物占30.88％；所述低聚糖为壳寡糖。
9.权利要求1-8任一项所述组合物在制备具有护肤、减脂功能的食品中的应用。
10.含义权利要求1-8任一项所述组合物的具有护肤、减脂功能的食品。
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