CN114786718A

CN114786718A - 癌性腹膜炎的治疗药

Info

Publication number: CN114786718A
Application number: CN202080082359.1A
Authority: CN
Inventors: 野村富美子; 松浦正; 张黎临; 蓝川洋一; 浅尾高行; 横堀武彦
Original assignee: Gunma University NUC; Perseus Proteomics Inc
Current assignee: Gunma University NUC; Perseus Proteomics Inc
Priority date: 2019-11-27
Filing date: 2020-11-27
Publication date: 2022-07-22
Also published as: JPWO2021107082A1; EP4066858A4; EP4066858A1; WO2021107082A1; US20230250180A1

Abstract

本发明的课题在于提供一种癌性腹膜炎的治疗药。根据本发明，能够提供一种含有识别转铁蛋白受体的抗体的癌性腹膜炎的治疗药。

Description

癌性腹膜炎的治疗药

技术领域

本发明涉及含有抗转铁蛋白受体抗体的癌性腹膜炎的治疗药。

背景技术

转铁蛋白受体(Transferrin receptor；TfR)首次在网织红细胞上被鉴定为用于将与转铁蛋白(Tf)结合的铁摄入细胞内的细胞膜结构。随后，TfR被发现在胎盘的滋养层细胞、活化的淋巴细胞以及各种肿瘤细胞等中表达。例如，有报道TfR在乳腺癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌、大肠癌、胃癌、膀胱癌、肝癌、宫颈癌、脑肿瘤、慢性淋巴性白血病、非霍奇金淋巴瘤、成人T细胞白血病中高表达。由于TfR在各种癌细胞表面高表达，而在正常细胞中的表达低，因此被认为是癌治疗的分子靶标。例如，在专利文献1中，记载了能够特异性识别转铁蛋白受体的抗体和使用了上述抗体抗癌剂。

癌性腹膜炎是癌转移到腹膜的病症。癌性腹膜炎可能合并有所有癌症种类，但在腹腔内的消化器官癌(胃癌、胰腺癌、大肠癌等)、卵巢癌中合并率高。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开WO2014/073641号公报

发明内容

发明所要解决的课题

已知腹膜转移的癌细胞是获得了在低氧状态下的生存能力的特殊细胞。预测腹膜转移的癌细胞对于以通常的细胞增殖机制为靶标的抗癌剂获得了耐性。根据大量的临床经验和临床试验的结果，也可知将通常的抗癌剂腹腔内给药对于癌性腹膜炎的治疗是无效的。作为癌性腹膜炎的治疗方法，除了化学疗法以外，还可以列举免疫疗法、温热疗法等，但是治疗效果不充分、预后差，因而期望新的治疗方法。本发明要解决的课题是提供一种治疗癌症腹膜炎的药剂。

用于解决课题的方法

本发明的发明人为了解决上述课题进行了研究，结果发现，对癌性腹膜炎的模型小鼠投予识别TfR中的规定的位置的氨基酸序列的抗体，结果能够治疗癌性腹膜炎，从而完成了本发明。

即，根据本发明，提供以下的发明。

(1)一种癌性腹膜炎的治疗药，其含有识别转铁蛋白受体的抗体。

(2)如(1)所述的癌性腹膜炎治疗药，其中，识别转铁蛋白受体的抗体是识别人转铁蛋白受体的抗体。

(3)如(2)所述的癌性腹膜炎的治疗药，其中，识别人转铁蛋白受体的抗体是识别人转铁蛋白受体的第629个～第633个氨基酸的抗体。

(4)如(1)～(3)中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其中，所述抗体是重链第一互补决定区(VH CDR1)、重链第二互补决定区(VH CDR2)、重链第三互补决定区(VH CDR3)分别为序列编号1、2、3且轻链第一互补决定区(VL CDR1)、轻链第二互补决定区(VL CDR2)、轻链第三互补决定区(VL CDR3)分别为序列编号4、5、6的抗体。

(5)如(1)～(4)中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其中，所述抗体是重链具有序列编号7且轻链具有序列编号8的抗体。

(6)如(1)～(5)中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其中，抗体为人抗体或人源化抗体。

(7)如(1)～(6)中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其中，抗体为选自Fab、Fab'、F(ab')₂、单链抗体(scFv)、双特异性抗体、二硫键稳定性Fv抗体(dsFv)和包含CDR的肽的抗体片段。

(8)如(1)～(7)中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其中，癌性腹膜炎合并有作为癌性腹膜炎起因的癌。

(9)如(1)～(8)中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其中，癌性腹膜炎合并有胃癌、胰腺癌、大肠癌、卵巢癌、胆道癌、肝癌、消化道间质肿瘤(GIST)或小肠癌。

(10)如(1)～(9)中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其为腹腔内给药的治疗药。

(A)提供一种治疗癌性腹膜炎的方法，其包括向对象投予识别转铁蛋白受体的抗体的步骤。

(B)用于在癌性腹膜炎的治疗中使用的、识别转铁蛋白受体的抗体。

(C)识别转铁蛋白受体的抗体在制造癌性腹膜炎的治疗药中的应用。

发明的效果

本发明的癌性腹膜炎的治疗药对治疗癌性腹膜炎很有用。本发明的癌性腹膜炎的治疗药是以攻击细胞代谢所必需的营养素的补给通路的新机制为靶标的分子靶向药。本发明的癌性腹膜炎的治疗药是针对在低氧、低营养环境中生存的且对现有抗癌剂具有耐性的腹膜种植细胞的最佳方法，引领了一种前所未有的独创的新医疗。

附图说明

图1表示各个TfR突变片段的进行点突变的部位。

图2表示TfR436和可溶性野生型TfR(sTfR)以及TfR突变片段的反应性。

图3表示TfR436的Tf-TfR结合抑制活性。

图4表示患者肿瘤组织中的TfR表达。

图5表示生存时间的分析结果。

图6表示TfR436抗体给药组小鼠腹腔肿瘤的HE标本。

图7表示腹水重量的测定结果。

图8表示胰腺癌细胞株SUIT2腹膜种植模型的生存率的分析结果。

图9表示患者样本中的TfR表达。

具体实施方式

接着，对本发明进行更详细的说明。

定义和一般技术

在本说明书中，只要没有特别定义，本发明所使用的科学技术用语包括本领域技术人员所通常理解的含义。通常而言，本说明书所述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学、蛋白质和核酸化学以及杂交所使用的命名法及其技术为本技术领域公知的技术而通常使用。

通常而言，本发明的方法和技术只要没有特别定义，根据本技术领域所公知的方法，能够如本说明书整体所引用论述的各种一般性参照文献和更具体的参照文献所记载的方式实施。

TfR

在人的情况下，转铁蛋白受体(TfR)是由人的第三号染色体编码的760个氨基酸所构成的一次跨膜型蛋白(序列编号9)。该蛋白已知作为CD71抗原，据认为其参与细胞对铁的摄入，参与细胞的增殖。本发明的TfR在结构上没有特别限定，包括单体、多聚体、细胞膜上表达的完整型(intact form)、细胞外区域构成的可溶型、截短型(truncted form)，还包括基因的突变、缺失等引起的突变型(mutation form)、接受了磷酸化等翻译后修饰的型(form)等，全部是指TfR。

进行反应和反应性

在本说明书中，“进行反应”和“反应性”只要没有特别限定，就是指相同的意思。即，抗体识别抗原。该抗原可以为细胞膜上表达的完整TfR，也可以为截短型或可溶型。另外，可以为保持立体结构的TfR，还可以为改性的TfR。作为研究反应性的方法，可以列举流式细胞分析法(FACS)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、蛋白免疫印迹法(western-blot)、荧光微量测定技术(FMAT)、表面等离子共振(BIAcore)、免疫染色、免疫沉降等。

作为流式细胞分析法中所使用的抗体，可以为由FITC等的荧光物质、生物素等标记的抗体，也可以为未被标记的抗体。根据所使用的抗体有无标记及标记种类，使用荧光标记亲和素、荧光标记抗人免疫球蛋白抗体等。反应性能够通过如下的方法进行评价，即，在样本中加入充分量的抗TfR抗体(通常最终浓度为0.01～10μg/mL)，与阴性对照抗体、阳性对照抗体的反应性进行比较。

抗体

在本说明书中，根据需要，按照习惯使用以下的缩略词(括号内)。

重链(H链)、轻链(L链)、重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)、互补决定区(CDR)、第一互补决定区(CDR1)、第二互补决定区(CDR2)、第三互补决定区(CDR3)、重链的第一互补决定区(VH CDR1)、重链的第二互补决定区(VH CDR2)、重链的第三互补决定区(VH CDR3)、轻链的第一互补决定区(VL CDR1)、轻链的第二互补决定区(VL CDR2)、轻链的第三互补决定区(VL CDR3)。

在本说明书中，“抗体”这一术语与免疫球蛋白同义，能够按照本技术领域中通常已知的那样理解。具体而言，抗体这一术语不受制作抗体的任意的特定方法限定。例如，抗体这一术语有重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体，但不限定于这些抗体。

在本说明书中，“人抗体”这一术语是指可变区和恒定区的序列为人源序列的任意的抗体。该术语也包括具有人基因来源的序列，但例如考虑到免疫原性的降低、亲和性的增大而进行了以除去可能引起不希望的折叠的半胱氨酸等方式改变了的抗体。该术语还包括能够实施不是人细胞所特有的糖基化的、通过在非人细胞中重组制得的那样的抗体。这些抗体能够以各种方式制备。

在本说明书中，“人源化抗体”这一术语是指非人来源的抗体，非人种的抗体序列中特征性的氨基酸残基替换为在人抗体的对应位置识别的残基。认为该“人源化”的工序使其结果得到的抗体在人体内的免疫原性降低。可以理解为能够使用本技术领域中周知的技术使非人来源的抗体人源化。例如，可以参照Winter等，Immunol.Today14：43～46(1993)。作为对象的抗体能够通过重组DNA技术替换为对应CH1、CH2、CH3、铰链区和/或框架区的人序列，以工程学技术制作。例如，能够参照WO92/02190以及美国专利第5,530,101号、第5,585,089号、第5,693,761号、第5,693,792号、第5,714,350号和第5,777,085号。在本说明书中，“人源化抗体”这一术语在其含义的范围内包含嵌合人抗体和CDR移植抗体。

在抗体的可变区中框架区(FR)的序列只要是相对于对应的抗原的特异性结合性没有实质性影响，就没有特别限定。优选使用人抗体的FR区域，也能够使用人以外的动物(例如小鼠、大鼠)的FR区域。

在抗体的一个方式中，除了可变区还包含恒定区(例如IgG型抗体)。恒定区的序列没有特别限定。例如，能够使用公知的人抗体的恒定区。作为人抗体的重链恒定区(CH)，只要是属于人免疫球蛋白(以下记为hIgG)的重链恒定区即可，优选hIgG簇的重链恒定区，也能够使用属于hIgG簇的hIgG1、hIgG2、hIgG3、hIgG4这样的亚簇中的任一种。另外，作为轻链恒定区(CL)，只要是属于hIg的即可，能够使用κ簇或λ簇的轻链恒定区。另外，也能够使用人以外的动物(例如小鼠、大鼠)的恒定区。

在本说明书中，“突变体”或“突变抗体”是指在亲本抗体的可变区(CDR序列和/或FR序列)的氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入1个或多个氨基酸。

在本发明中，“亲本抗体”是指VH具有序列编号7、VL具有序列编号8所示的氨基酸序列的TfR436抗体。在氨基酸序列中，缺失、添加、取代和/或插入1或数个(例如，1～8个、优选1～5个、更优选1～3个、特别优选1或2个)的氨基酸。作为用于制备对TfR具有结合活性的抗体的氨基酸序列的本领域技术人员所周知的方法，已知有对蛋白质导入突变的方法。例如，本领域技术人员能够使用定点诱变(Hashimoto-Gotoh,T,Mizuno,T,Ogasahara,Y,andNakagawa,M.(1995)An oligodeoxyribonucleotide-directed dual amber method forsite-directed mutagenesis.Gene 152,271-275、Zoller,MJ,and Smith,M.(1983)Oligonucleotide-directed mutagenesis ofDNAfragments cloned intoM13vectors.Methods Enzymol.100,468-500、Kramer,W,Drutsa,V,Jansen,HW,Kramer,B,Pflugfelder,M,and Fritz,HJ(1984)The gapped duplex DNAapproach tooligonucleotide-directed mutation construction.Nucleic Acids Res.12,9441-9456、Kramer W,and Fritz HJ(1987)Oligonucleotide-directed construction ofmutations via gapped duplex DNA Methods.Enzymol.154,350-367、Kunkel,TA(1985)Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypicselection.Proc Natl Acad Sci U S A.82,488-492)等，在对TfR具有结合活性的抗体的氨基酸序列中导入适当的突变，由此来制备与对TfR具有结合活性的抗体功能同等的突变抗体。这样，也能够使用在抗体的可变区或恒定区中1个或数个氨基酸突变且对TfR具有结合活性的抗体。

在本说明书中，“活性与亲本抗体同等”是指对TfR的结合活性同等。“同等”不需要一定是同等程度的活性，活性也可以被增强，或者，只要具有活性，活性也可以减少。作为活性减少的抗体，例如，能够列举与原来的抗体相比具有30％以上的活性、优选50％以上的活性、更优选80％以上的活性、更加优选90％以上的活性、特别优选95％以上的活性的抗体。

作为结合活性，是指识别抗原。该抗原可以是在细胞膜上表达的完整型TfR，也可以为截短型、可溶型。另外，可以为保持立体结构的TfR，也可以为改性的TfR。另外，作为研究结合活性的方法，可以列举流式细胞分析法(FACS)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、蛋白免疫印迹法(western-blot)、荧光微量测定技术(FMAT)、表面等离子共振(BIAcore)等。

抗体的Tf-TfR结合抑制活性能够根据后述的“实施例2(2)Tf-TfR结合抑制中的TfR436抗体与其他公司抗体的比较”中记载的方法进行测定。将TfR溶液分注到基板(96孔板等)中静置并固相化，进行封闭。接着，将HRP标记的Tf溶液分注，接着添加抗体，在室温使其反应。此后，对基板进行清洗，添加显色试剂(TMB等)，使其反应，用分光光度计测定吸光度。通过上述操作，该抗体能够评价Tf-TfR结合抑制活性。

抗体不限定其来源，可以为人抗体、小鼠抗体、大鼠抗体等来自任何动物的抗体。另外，也可以为嵌合化抗体、人源化抗体等。作为本发明中的抗体的优选方式的一种，为人抗体。

抗体根据后述的产生抗体的细胞、宿主或精制方法而在氨基酸序列、分子量、等电点或有无糖链、形态等可以不同。例如，也包括本发明中记载的氨基酸序列在翻译后受到修饰的情况。还包括对于已知的翻译后修饰以外的部位的翻译后修饰。另外，使抗体在原核细胞、例如大肠杆菌中表达时，在本来的抗体的氨基酸序列的N末端添加蛋氨酸残基。在本发明中，也可以使用这样的抗体。还包括对于已知的翻译后修饰以外的部位的翻译后修饰。

抗体的制作

(1)利用噬菌体展示文库与抗原反应的scFv

抗体的获得能够按照本技术领域中已知的各种方法进行制备。例如，能够使用噬菌体展示技术，提供包括对TfR的亲和性各异的抗体库的文库。接着，对这些文库进行筛选，能够鉴定并分离针对TfR的抗体。优选噬菌体文库为使用由从人B细胞分离的mRNA制备的人VL和VHcDNA生成的scFv噬菌体展示文库。制备这样的文库并进行筛选的方法在本技术领域是已知的。将TfR作为抗原，从筛选得到的显示反应性的噬菌体克隆回收遗传物质。对所选择的噬菌体的基因进行分析，能够确定编码与抗原结合的人抗体的可变区的VH和VL的DNA序列。使用该scFv的序列，将scFv IgG化，则能够获得人抗体。(2)scFv的IgG化(人抗体的制作)

制作H链或L链的表达载体，使其在宿主细胞中表达，通过回收和精制所分泌的上清而获得人抗体。另外，也能够使VH和VL在同一载体中表达(串联型)来获得人抗体。这些方法是周知的，能够参考WO92/01047、WO92/20791、WO93/06213、WO93/11236、W093/19172、WO95/01438、WO95/15388、WO97/10354等。

具体而言，通过将编码VH的DNA与编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的其它DNA分子连结，能够获得完全长度重链基因。人重链恒定区基因的序列是本技术领域已知的(例如，Kabat,E A.等,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242)，包含这些区域的DNA片段能够通过标准的PCR扩增来获得。重链恒定区可以为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD的恒定区，最优选为IgG1或IgG2的恒定区。IgG1恒定区序列可以为Gm(1)、Gm(2)、Gm(3)、Gm(17)等已知在不同个人之间产生的任意的各种等位基因或异型。这些异型相当于IgG1恒定区中的天然存在的氨基酸取代。

通过将编码VL的DNA与编码轻链恒定区CL的其它DNA分子连结，能够获得完全长度L链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本技术领域已知的(例如，Kabat,E.A.等,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242)，包含这些区域的DNA片段能够通过标准的PCR扩增来获得。轻链恒定区可以为κ或λ的恒定区。κ恒定区可以为Inv(1)、Inv

(2)、Inv(3)等已知在不同个人间产生的任意的各种等位基因。λ恒定区可以来自3个λ基因中的任一个。

通过将如上所述得到的编码H链或L链的DNA插入表达载体中，制作表达载体，在宿主细胞中表达，通过回收和精制所分泌的上清而获得人抗体。在表达载体中，可以列举质粒、逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒(AAV)、花椰菜花叶病毒、烟草花叶病毒等植物病毒、粘粒、YAC、来自EBV的附加体等。表达载体和表达调节序列选择为与所使用的表达用宿主细胞匹配。抗体轻链基因和抗体重链基因能够插入不同的载体中，或者也能够将二者的基因插入相同的表达载体中。将抗体基因通过标准的方法(例如，抗体基因片段上的互补性限制部位与载体的连结，或不存在限制部位时为平滑末端连结)插入表达载体中。

适当的载体是如上所述能够使任意的VH或VL序列容易地插入并表达的、以工程学方法制作的具有适当的限制部位的编码功能完全的人CH或CL免疫球蛋白序列的载体。这样的载体通常在插入的J区域中的剪接供给部位和人C区域中先行的剪接接受部位之间、或者在存在于人CH外显子内的剪接区域发生剪接。多腺苷酸化和转录结束在位于编码区域的下游的天然的染色体部位发生。重组表达载体还能够编码宿主细胞来源的抗体链分泌的信号肽。抗体链基因能够以使信号肽在框内与免疫球蛋白链的氨基末端连结的方式在载体中克隆化。信号肽可以为免疫球蛋白信号肽，或者也可以为异种性信号肽(即非免疫球蛋白的蛋白质来源的信号肽)。

抗体的表达载体除了抗体基因和控制序列以外，还可以具有控制宿主细胞中的载体复制的序列(例如复制起点)、选择标记基因等另外的序列。选择标记基因促进导入载体的宿主细胞的选择。例如，通常，选择标记基因对导入载体的宿主细胞赋予G418、潮霉素、甲胺嘌呤等药物的耐性。优选的选择标记基因有二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(dhfr-宿主细胞中甲氨蝶呤选择/扩增同时使用)、新霉素磷酸转移酶基因(用于G418选择)和谷氨酸合成酶基因。

用通过以上的方法制作的抗体基因表达载体对宿主细胞进行转化。作为宿主细胞，可以为细菌、酵母、动物细胞、昆虫细胞、植物细胞等，只要能够产生抗体即可，可以为任意细胞，优选为动物细胞。作为动物细胞，可以列举中国仓鼠卵巢细胞CHO/dhfr(-)细胞CHO/DG44细胞、来自猴的细胞COS细胞(A.Wright&S.L.Morrison,J.Immunol.160,3393-3402(1998))、SP2/O(小鼠骨髓瘤)(K.Motmans et al.,Eur.J.Cancer Prev.5,512-5199(1996),R.P.Junghans et al.,Cancer Res.50,1495-1502(1990))等。另外，转化能够适当地使用脂质体法(R.W.Malone et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86,6007(1989),P.L.Felgner et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84,7413(1987)、电穿孔法、磷酸钙法(F.L.Graham&A.J.van der Eb,Virology 52,456-467(1973))、DEAE-Dextran法等。

培养转化体之后，从转化体的细胞内或培养液分离人抗体。抗体的分离、精制能够适当地组合利用离心分离、硫酸铵分级分离、盐析、超滤、亲和色谱法、离子交换色谱法、凝胶过滤色谱法等方法。

抗体片段

能够基于抗体或基于编码抗体的基因的序列信息制作抗体片段。作为抗体片段，可以列举Fab、Fab'、F(ab')₂、scFv、dsFv抗体。

Fab是将IgG在半胱氨酸的存在下由木瓜蛋白酶消化得到的、由L链和包括H链可变区、CH1区域和铰链部的一部分的H链片段构成的分子量约5万的片段。本发明中，能够通过将上述抗体用木瓜蛋白酶消化得到。另外，也能够将编码上述抗体的H链的一部分和L链的DNA重组到适当的载体，由使用该载体转化得到的转化体来制备Fab。

Fab'是通过切断后述的F(ab')₂的H链间的二硫键而得到的分子量为约5万的片段。本发明中，通过将上述抗体用胃蛋白酶消化，使用还原剂切断二硫键而得到。另外，与Fab同样，也能够使用编码Fab'的DNA通过基因工程学来制备。

F(ab')₂是通过将IgG用胃蛋白酶消化得到的、由L链和包括H链可变区、CH1区域和铰链部的一部分的H链片段构成的片段(Fab')以二硫键结合得到的分子量约10万的片段。本发明中，通过将上述抗体用胃蛋白酶消化得到。另外，与Fab同样，也能够使用编码F(ab')₂的DNA通过基因工程学来制备。

scFv为将包括H链可变区和L链可变区的Fv用适当的肽接头连结另一个链的C末端和另一个链的N末端的单链化的抗体片段。作为肽接头，例如能够使用柔软性高的(GGGGS)₃等。例如，能够使用编码上述抗体的H链可变区和L链可变区的DNA和编码肽接头的DNA构建编码scFv抗体的DNA，将其重组到适当的载体，由使用该载体进行了转化的转化体制备scFv。

dsFv是在H链可变区和L链可变区的适当位置导入Cys残基，将H链可变区和L链可变区利用二硫键稳定化得到的Fv片段。各链中的Cys残基的导入位置能够根据利用分子模拟预测的立体结构来确定。本发明中，例如，预测由上述抗体的H链可变区和L链可变区的氨基酸序列预测立体结构，构建基于该预测导入了突变的分别编码H链可变区和L链可变区的DNA，将其重组到适当的载体，由使用该载体进行了转化的转化体制备dsFv。

另外，也能够通过使用适当的接头连结scFv抗体、dcFv抗体等，或者融合链霉亲和素，将抗体片段多聚体化。

双特异性抗体

抗体可以为双特异性抗体。

作为双特异性抗体，可以列举将2分子的单克隆抗体通过化学交联得到的双特异性(mab)₂、将2分子的Fab片段通过化学交联得到的双特异性F(ab’)₂、quadroma、bsDb(bispecific diabody)、scBsDb(single-chain bispecific diabody)、scBsTaFv(single-chain bispecific tandem variable domain)、Bite(Bispecific T cell Engagerantibody)、DNL-F(ab)₃(docl-and-lock trivalent Fab)等(Shim,H.BispecificAntibodies and Antibody-Drug Comjugates for Cancer Therapy:TechnologicalConsiderations.Biomolecules 2020,10,360)。

医药组合物和制剂

包含本发明的癌性腹膜炎的治疗药的医药组合物和制剂也包括在本发明的范围内。

本发明的癌性腹膜炎的治疗药能够在用于癌性腹膜炎的处置中使用。

癌性腹膜炎是指癌转移到腹膜的病症。作为癌性腹膜炎，没有特别限定，能够列举合并有作为癌性腹膜炎起因的癌的癌性腹膜炎，更具体而言，可以列举合并有胃癌、胰腺癌、大肠癌、卵巢癌、胆道癌、肝癌、消化道间质肿瘤(GIST)或小肠癌的癌性腹膜炎。癌性腹膜炎中，癌细胞在腹腔内分散，在腹膜上大量产生砂粒状的肿瘤，积累腹水。

包含本发明的癌性腹膜炎的治疗药的医药组合物和制剂优选除了抗体还含有生理学上可接受的稀释剂或载体，也可以为与其它药剂的混合物。适当的载体包括生理盐水、磷酸缓冲生理盐水、磷酸缓冲生理盐水葡萄糖液和缓冲生理盐水，但不限定于这些。或者，抗体可以冻干(freeze dry)，在需要时添加如上所述的缓冲水溶液，由此再构使用。作为给药方式，能够列举通过腹腔内给药(腹腔内注射等)的非口服给药。

本发明的癌性腹膜炎的治疗药的给药量根据症状、年龄、体重等而不同，通常，口服给药时，作为抗体的量，对于成人，1日约0.01mg～1000mg，能够将其以1次或分成数次给药。另外，非口服给药时，能够以1次约0.01mg～3000mg在腹腔内给药。

通过以下的实施例对本发明进一步详细说明，但是本发明不限定于实施例。

实施例

在以下的实施例中，使用国际公开WO2014/073641号公报的段落0090和0091中记载的TfR436抗体。

以下表示TfR436抗体的CDR序列。

VH CDR1：SYGMH(序列编号1)

VH CDR2：VISYDGSNKYYADSVKG(序列编号2)

VH CDR3：DSNFWSGYYSPVDV(序列编号3)

VL CDR1：TRSSGSIASNSVQ(序列编号4)

VL CDR2：YEDTQRPS(序列编号5)

VL CDR3：QSYDSAYHWV(序列编号6)

以下表示TfR436抗体的VH序列和VL序列。

TfR436 VH(序列编号7)

DVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFPFKSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGEDTAVYYCARDSNFWSGYYSPVDVWGQGTTVTVSS

TfR436 VL(序列编号8)

NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIASNSVQWYQQRPGSAPITVIYEDTQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLQTEDEADYYCQSYDSAYHWVFGGGTKLAVL

实施例1：TfR436抗体的结合部位的鉴定

TfR436抗体与小鼠TfR不发生交叉反应，与仓鼠TfR显示交叉反应性。进行了TfR中的转铁蛋白(TF)结合部位(第569～760个氨基酸)的氨基酸序列的比对。在人TfR序列中，选取了与仓鼠相同、与小鼠不同的氨基酸。对所选取的氨基酸如图1所示那样进行了点突变，制作可溶性TfR突变片段。

(1)可溶性野生型TfR(sTfR)和TfR突变片段(MF1～MF7)的制作

全合成编码人TfR细胞外区域(第89～760位的氨基酸)、或图1所示的各个TfR突变片段(MF1～MF7)和AAARGGPEQKLISEED LNSAVDHHHHHH(序列编号10)的碱基序列。在表达载体pCAGGS(非专利文献2.：Niwa et al.1991)中重组入新霉素耐性基因和DHFR基因并在该载体的多克隆位点插入各种合成的基因，制作了pCAGGS-Neo-DHFR-sTFR-myc-his表达质粒。使用Expifectamine(Invitrogen)对Expi293细胞(Invitrogen)转染上述质粒，在37℃、8％CO₂、135rpm培养5天。此后通过离心回收培养上清，在AKTA prime(GE Healthcare)上连接HisTrapHP(GE Healthcare)柱，结合缓冲液使用20mM咪唑/DPBS，洗脱缓冲液使用500mM咪唑/DPBS，对sTfR或MF1～MF7进行精制。洗脱的蛋白质使用Zeba spin column(Thermoscientific)，更换为30mM HEPES、5％海藻糖、pH7.2的缓冲液。

(2)TfR436抗体的结合部位的鉴定

将上述精制得到的sTfR或MF1～MF7使用PBST(Phosphate Buffered Saline withTween20，TaKaRa)进行稀释，从600ng/mL开始以3倍稀释制备7个级别。此后，在Ni-NTAHisSorb Strips 96孔板(QIAGEN)以100μL/孔分注稀释液，置于振荡器上，在室温中使其反应。在1小时后用PBST Buffer清洗5次，将TfR436抗体(1ug/mL)以100μL/孔分注，置于振荡器上，在室温使其反应1小时。此后，用PBS-T Buffer清洗5次，以100μL/孔分注50000倍稀释的二次抗体F(ab’)₂Fragment Anti-Human IgG Fcγ(Jackson Immuno Research)，在室温中反应1小时。用PBST Buffer清洗5次后，以100μL/孔分注TMB Soluble Reagent(HighSensitivity)(Scy Tek)，以室温在暗处反应3分钟后，以100μL/孔添加TMB Stop Buffer(Scy Tek)，在振荡器上振荡1分钟，用分光光度计测定450n(ref.620nm)的吸光度。

结果如图2所示，可见TfR436抗体与TfR突变片段MF5的反应性降低，但是，没有发现与其它的突变片段的反应性降低。即，将TfR的第629个、第630个、第633个氨基酸取代为其它氨基酸时，TfR436抗体变得无法识别TfR。暗示第629～633个氨基酸是TfR436抗体的识别表位。

实施例2：TfR436抗体与比较用抗体对Tf-TfR结合抑制的比较

(1)比较用抗体A24的制作

专利文献US2008/0193453中记载了针对于人TfR的A24抗体。为了将TfR436抗体和该抗体进行比较，获得保藏的杂交瘤(Hybridoma)来生产抗体。具体而言，将杂交瘤在RPMI1640(GIBCO)、FBS10％的培养基中以细胞浓度为1～2×10⁵/mL的方式接种，在37℃的5％CO₂孵育箱中培养。扩大培养后，通过离心回收细胞，用PBS清洗2次后在无血清培养基cosmedium005(COSMOBIO)、0.5％Nutridoma-CS(Roche)中进一步扩大培养至成为550mL。在细胞汇合5天后通过离心回收培养上清。

将所回收的上清加载于蛋白A载体(Ab-Capcher ExTra：Protenova公司)，对与蛋白A结合的抗体用0.1M甘氨酸盐酸缓冲液(pH 2.7)洗脱，快速用1M Tris盐酸缓冲液(pH8.5)中和。此后，使用超滤盘(Merck Millipore)将缓冲液交换为PBS。

(2)TfR436抗体与其它公司抗体对Tf-TfR结合抑制的比较

将实施例1所记载的sTfR用PBST调整为5.0μg/mL，在MaxiSorp96孔板(Nunc)中以100μL/孔分注稀释液，在4℃静置一晩，进行固相化。在第二天舍弃固相液，以100％BlockACE(DS Pharma Biomedical)200μL/孔在室温静置，进行封闭。1小时后用PBST Buffer清洗5次后，以50μL/孔分注HRP标记的Tf(2ug/mL)，进一步以50μL/孔添加TfR436抗体、A24抗体(从10μg/mL起2倍稀释系列)或holo-Tf(Sigma)(从300μg/mL起2倍稀释系列)。在室温中反应1小时后，用PBST Buffer清洗5次，以100μL/孔分注TMB Soluble Reagent(HighSensitivity)，在室温暗处使其反应。25分钟后，以100μL/孔添加TMB Stop Buffer，在振荡器振荡1分钟，用分光光度计测定450nm(ref.620nm)的吸光度。

结果如图3所示，TfR436抗体以非常低的用量(100ng/mL)就完全抑制了Tf-TfR的结合。另一方面，A24抗体即使是10μg/mL的用量也无法完全抑制Tf-TfR的结合，仅能够以50％抑制Tf-TfR的结合。显示在Tf-TfR的结合抑制中，TfR436抗体是优异的。

实施例3：癌性腹膜炎患者样本中的TfR的表达(患者病理标本的免疫染色)

对于从胃癌原发的癌性腹膜炎患者收集的原发灶和腹膜种植灶的肿瘤组织中的TfR1的表达通过免疫染色进行研究。对肿瘤组织切片进行脱蜡处理，在pH6.0赋活缓冲液中利用121℃15分钟高压釜实施了抗原赋活。在0.3％H₂O₂水中进行了内源性过氧化物酶处理后，在4℃与一次抗体(0.4μg/mL Anti TFRC Rabbit，ATLAS ANTIBODIES，HPA028598)反应过夜。用PBS清洗之后，在室温中与聚合物试剂(Histofine Simple Stain MAX-PO MULTI，NICHIREI，424152)反应30分钟，用PBS清洗后，用DAB试剂(Histofine Simple Stain DAB，NICHIREI，415172)显色。用苏木精进行核染色后，进行脱水、透明、封片，作为免疫染色标本。

其结果如图4所示，在胃癌患者原发灶来源的肿瘤组织(图4A)和腹膜种植灶肿瘤组织(图4B)中均确认到TfR的表达。

实施例4：利用胃癌细胞株MKN45-Luc腹膜种植模型的抗肿瘤效果

使用胃癌细胞株MKN45-Luc腹膜种植模型研究TfR436抗体的抗肿瘤效果。

将MKN45-Luc细胞株(JCRB1379)在培养液(RPMI-1640，10％FBS，1％P/S)中培养。除去培养液，用PBS清洗1次之后，使用TrypLE Express剥离细胞。添加培养液，回收细胞，用PBS清洗1次后，再次悬浊于PBS中，使用0.4％台盼蓝进行细胞计数。计数后，用PBS调整为细胞浓度为1×10⁷/mL。将该细胞悬浊液1mL用结核菌素注射器吸起，安装二级针，以200μL/只移植到C.B-17/IcrHsd-Prkdc^scid小鼠(雌性，购入时6周龄)20只的腹腔。移植细胞数为2×10⁶个/只。

在移植3日后腹腔投予荧光素500μg，测定移植细胞的发光。使用移植小鼠20只之中利用发光检测确认了移植细胞存活的17只，根据发光强度实施分组(对照组8只、抗体给药组9只)。此后，以1周1次的间隔实施了合计4次的药剂的腹腔给药。对照组中投予PBS，抗体给药组中投予TfR436抗体15mg/kg。

试验期间进行小鼠的观察，实施生死判定。在移植后77日结束试验，根据小鼠的生存时间实施统计分析。其结果，TfR436抗体给药组与对照组相比，确认到Log-Rank(p＝0.0002)和Wilcoxon(p＝0.0004)的显著的存活延长效果(图5)。另外，在试验结束时存活的TfR436抗体给药组小鼠7只的腹腔中，确认到肿瘤的形成。将其收集并制作病理标本时，在肿瘤中确认到大范围的坏死，仅在肿瘤表面和血管周围的一点区域确认到保持增殖能力的肿瘤细胞残留(图6)。

实施例5：利用胰腺癌细胞株SUIT-2腹膜种植模型的抗肿瘤效果的研究

将SUIT-2细胞株(JCRB1094)在培养液(EMEM，10％FBS，1％P/S)中培养。除去培养液，用PBS清洗1次之后，使用TrypLE Express剥离细胞。添加培养液，回收细胞，用PBS清洗1次后，再次悬浊于PBS中，使用0.4％台盼蓝进行细胞计数。计数后，用PBS调整为细胞浓度为1×10⁷/mL。将该细胞悬浊液1mL用结核菌素注射器吸起，安装二级针，以200μL/只移植到C.B-17/IcrHsd-Prkdc^scid小鼠(雌性，购入时6周龄)30只的腹腔。移植细胞数为2×10⁶个/只。

本模型中由于移植后的细胞植活率为100％(根据预备试验的结果)，在细胞移植4日后根据体重实施了随机分组(对照组、抗体给药组、n＝10)。此后，以1周1次的间隔实施了合计2次的药剂的腹腔给药。对照组中投予PBS，抗体给药组中投予TfR436抗体15mg/kg。试验期间进行小鼠体重测定和观察，在对照组小鼠中，伴随腹膜种植肿瘤的增加确认到全身状态的恶化，在移植17日后结束试验。将两组小鼠安乐死之后，实施了腹水收集和腹腔中肿瘤的观察。对于腹水的重量，通过t检验实施了对照组和TfR436抗体给药组的比较。在图7中显示腹水重量的测定结果。其结果，在TfR436抗体给药组中确认到P＝0.0005的显著腹水重量的减少。另外，在腹腔中肿瘤的观察中，在对照组的肠系膜上确认到多个肿瘤形成，但是，在TfR436抗体给药组中，在4只确认到1～2个的肿瘤，而在6只中没有观察到明显的肿瘤形成。

实施例6：胰腺癌细胞株SUIT2腹膜种植模型的存活延长效果

将SUIT-2细胞株(JCRB1094)在培养液(EMEM，10％FBS，1％P/S)中培养。除去培养液，用PBS清洗1次之后，使用TrypLE Express剥离细胞。添加培养液，回收细胞，用PBS清洗1次后，再次悬浊于PBS中，使用0.4％台盼蓝进行细胞计数。计数后，用PBS调整为细胞浓度为1×10⁷/mL。将该细胞悬浊液1mL用结核菌素注射器吸起，安装二级针，以200μL/只移植到C.B-17/IcrHsd-Prkdc^scid小鼠(雌性，购入时7周龄)25只的腹腔。移植细胞数为2×10⁶个/只。

本模型中由于移植后的细胞植活率为100％(根据预备试验的结果)，在细胞移植4日后根据体重实施了随机分组(对照组、抗体给药组、n＝8)。此后，以1周1次的间隔实施了合计2次的药剂的腹腔给药。对照组中投予PBS，抗体给药组中投予TfR436抗体15mg/kg。从细胞移植至55日后进行小鼠体重测定和全身状态的观察。在确认到伴随肿瘤的增加的全身状态的恶化(过量的腹水潴留、贫血、衰弱)时使其安乐死，将从细胞移植至安乐死的天数作为生存期间。对于移植55日后的生存期间进行Log-Rank分析，其结果，相对于PBS群，在TfR436给药组中在腹腔给药组(p＝0.0003)、静脉给药组(p＝0.007)确认到显著的存活延长效果，腹腔给药的药效更优(图8)。

实施例7：患者样本的TfR表达分析

使用下表所示的癌患者的样本，通过与实施例3同样的方法，仅对腹膜种植肿瘤进行免疫染色而分析了TfR表达状态。判定基准示于表1。

[表1]

分	判定基准
		0	细胞膜上阳性染色少
1	细胞膜稍被染色
		2	存在弱～中程度的细胞膜染色
3	存在强的细胞膜染色

将结果示于表2和图9。

[表2]

序列表

<110> 株式会社英仙蛋白质科学

<110> 国立大学法人群马大学

<120> 癌性腹膜炎的治疗药

<130> F20827A-WO

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人

<400> 1

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人

<400> 2

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 14

<212> PRT

<213> 人

400> 3

Asp Ser Asn Phe Trp Ser Gly Tyr Tyr Ser Pro Val Asp Val

1 5 10

<210> 4

<211> 13

<212> PRT

<213> 人

<400> 4

Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn Ser Val Gln

1 5 10

<210> 5

<211> 8

<212> PRT

<213> 人

<400> 5

Tyr Glu Asp Thr Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 6

<211> 10

<212> PRT

<213> 人

<400> 6

Gln Ser Tyr Asp Ser Ala Tyr His Trp Val

1 5 10

<210> 7

<211> 123

<212> PRT

<213> 人

<400> 7

Asp Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Pro Phe Lys Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Ser Asn Phe Trp Ser Gly Tyr Tyr Ser Pro Val Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 8

<211> 111

<212> PRT

<213> 人

<400> 8

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn

20 25 30

Ser Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Ile Thr Val

35 40 45

Ile Tyr Glu Asp Thr Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Gln Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser

85 90 95

Ala Tyr His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Ala Val Leu

100 105 110

<210> 9

<211> 760

<212> PRT

<213> 人

<400> 9

Met Met Asp Gln Ala Arg Ser Ala Phe Ser Asn Leu Phe Gly Gly Glu

1 5 10 15

Pro Leu Ser Tyr Thr Arg Phe Ser Leu Ala Arg Gln Val Asp Gly Asp

20 25 30

Asn Ser His Val Glu Met Lys Leu Ala Val Asp Glu Glu Glu Asn Ala

35 40 45

Asp Asn Asn Thr Lys Ala Asn Val Thr Lys Pro Lys Arg Cys Ser Gly

50 55 60

Ser Ile Cys Tyr Gly Thr Ile Ala Val Ile Val Phe Phe Leu Ile Gly

65 70 75 80

Phe Met Ile Gly Tyr Leu Gly Tyr Cys Lys Gly Val Glu Pro Lys Thr

85 90 95

Glu Cys Glu Arg Leu Ala Gly Thr Glu Ser Pro Val Arg Glu Glu Pro

100 105 110

Gly Glu Asp Phe Pro Ala Ala Arg Arg Leu Tyr Trp Asp Asp Leu Lys

115 120 125

Arg Lys Leu Ser Glu Lys Leu Asp Ser Thr Asp Phe Thr Gly Thr Ile

130 135 140

Lys Leu Leu Asn Glu Asn Ser Tyr Val Pro Arg Glu Ala Gly Ser Gln

145 150 155 160

Lys Asp Glu Asn Leu Ala Leu Tyr Val Glu Asn Gln Phe Arg Glu Phe

165 170 175

Lys Leu Ser Lys Val Trp Arg Asp Gln His Phe Val Lys Ile Gln Val

180 185 190

Lys Asp Ser Ala Gln Asn Ser Val Ile Ile Val Asp Lys Asn Gly Arg

195 200 205

Leu Val Tyr Leu Val Glu Asn Pro Gly Gly Tyr Val Ala Tyr Ser Lys

210 215 220

Ala Ala Thr Val Thr Gly Lys Leu Val His Ala Asn Phe Gly Thr Lys

225 230 235 240

Lys Asp Phe Glu Asp Leu Tyr Thr Pro Val Asn Gly Ser Ile Val Ile

245 250 255

Val Arg Ala Gly Lys Ile Thr Phe Ala Glu Lys Val Ala Asn Ala Glu

260 265 270

Ser Leu Asn Ala Ile Gly Val Leu Ile Tyr Met Asp Gln Thr Lys Phe

275 280 285

Pro Ile Val Asn Ala Glu Leu Ser Phe Phe Gly His Ala His Leu Gly

290 295 300

Thr Gly Asp Pro Tyr Thr Pro Gly Phe Pro Ser Phe Asn His Thr Gln

305 310 315 320

Phe Pro Pro Ser Arg Ser Ser Gly Leu Pro Asn Ile Pro Val Gln Thr

325 330 335

Ile Ser Arg Ala Ala Ala Glu Lys Leu Phe Gly Asn Met Glu Gly Asp

340 345 350

Cys Pro Ser Asp Trp Lys Thr Asp Ser Thr Cys Arg Met Val Thr Ser

355 360 365

Glu Ser Lys Asn Val Lys Leu Thr Val Ser Asn Val Leu Lys Glu Ile

370 375 380

Lys Ile Leu Asn Ile Phe Gly Val Ile Lys Gly Phe Val Glu Pro Asp

385 390 395 400

His Tyr Val Val Val Gly Ala Gln Arg Asp Ala Trp Gly Pro Gly Ala

405 410 415

Ala Lys Ser Gly Val Gly Thr Ala Leu Leu Leu Lys Leu Ala Gln Met

420 425 430

Phe Ser Asp Met Val Leu Lys Asp Gly Phe Gln Pro Ser Arg Ser Ile

435 440 445

Ile Phe Ala Ser Trp Ser Ala Gly Asp Phe Gly Ser Val Gly Ala Thr

450 455 460

Glu Trp Leu Glu Gly Tyr Leu Ser Ser Leu His Leu Lys Ala Phe Thr

465 470 475 480

Tyr Ile Asn Leu Asp Lys Ala Val Leu Gly Thr Ser Asn Phe Lys Val

485 490 495

Ser Ala Ser Pro Leu Leu Tyr Thr Leu Ile Glu Lys Thr Met Gln Asn

500 505 510

Val Lys His Pro Val Thr Gly Gln Phe Leu Tyr Gln Asp Ser Asn Trp

515 520 525

Ala Ser Lys Val Glu Lys Leu Thr Leu Asp Asn Ala Ala Phe Pro Phe

530 535 540

Leu Ala Tyr Ser Gly Ile Pro Ala Val Ser Phe Cys Phe Cys Glu Asp

545 550 555 560

Thr Asp Tyr Pro Tyr Leu Gly Thr Thr Met Asp Thr Tyr Lys Glu Leu

565 570 575

Ile Glu Arg Ile Pro Glu Leu Asn Lys Val Ala Arg Ala Ala Ala Glu

580 585 590

Val Ala Gly Gln Phe Val Ile Lys Leu Thr His Asp Val Glu Leu Asn

595 600 605

Leu Asp Tyr Glu Arg Tyr Asn Ser Gln Leu Leu Ser Phe Val Arg Asp

610 615 620

Leu Asn Gln Tyr Arg Ala Asp Ile Lys Glu Met Gly Leu Ser Leu Gln

625 630 635 640

Trp Leu Tyr Ser Ala Arg Gly Asp Phe Phe Arg Ala Thr Ser Arg Leu

645 650 655

Thr Thr Asp Phe Gly Asn Ala Glu Lys Thr Asp Arg Phe Val Met Lys

660 665 670

Lys Leu Asn Asp Arg Val Met Arg Val Glu Tyr His Phe Leu Ser Pro

675 680 685

Tyr Val Ser Pro Lys Glu Ser Pro Phe Arg His Val Phe Trp Gly Ser

690 695 700

Gly Ser His Thr Leu Pro Ala Leu Leu Glu Asn Leu Lys Leu Arg Lys

705 710 715 720

Gln Asn Asn Gly Ala Phe Asn Glu Thr Leu Phe Arg Asn Gln Leu Ala

725 730 735

Leu Ala Thr Trp Thr Ile Gln Gly Ala Ala Asn Ala Leu Ser Gly Asp

740 745 750

Val Trp Asp Ile Asp Asn Glu Phe

755 760

<210> 10

<211> 28

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列描述: 重组标签

<400> 10

Ala Ala Ala Arg Gly Gly Pro Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp

1 5 10 15

Leu Asn Ser Ala Val Asp His His His His His His

20 25

Claims

1.一种癌性腹膜炎的治疗药，其特征在于：

含有识别转铁蛋白受体的抗体。

2.如权利要求1所述的癌性腹膜炎治疗药，其特征在于：

识别转铁蛋白受体的抗体是识别人转铁蛋白受体的抗体。

3.如权利要求2所述的癌性腹膜炎的治疗药，其特征在于：

识别人转铁蛋白受体的抗体是识别人转铁蛋白受体的第629个～第633个氨基酸的抗体。

4.如权利要求1～3中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其特征在于：所述抗体是重链第一互补决定区(VH CDR1)、重链第二互补决定区(VH CDR2)、重链第三互补决定区(VHCDR3)分别为序列编号1、2、3且轻链第一互补决定区(VL CDR1)、轻链第二互补决定区(VLCDR2)、轻链第三互补决定区(VL CDR3)分别为序列编号4、5、6的抗体。

5.如权利要求1～4中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其特征在于：所述抗体是重链具有序列编号7且轻链具有序列编号8的抗体。

6.如权利要求1～5中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其特征在于：抗体为人抗体或人源化抗体。

7.如权利要求1～6中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其特征在于：抗体为选自Fab、Fab'、F(ab')₂、单链抗体(scFv)、双特异性抗体、二硫键稳定性Fv抗体(dsFv)和包含CDR的肽的抗体片段。

8.如权利要求1～7中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其特征在于：癌性腹膜炎合并有作为癌性腹膜炎起因的癌。

9.如权利要求1～8中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其特征在于：癌性腹膜炎合并有胃癌、胰腺癌、大肠癌、卵巢癌、胆道癌、肝癌、消化道间质肿瘤(GIST)或小肠癌。

10.如权利要求1～9中任一项所述的癌性腹膜炎的治疗药，其特征在于：其为腹腔内给药的治疗药。