CN114774366B - 一株分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用 - Google Patents
一株分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一株分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫检测技术领域。本发明所述的分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.45109，本发明所得的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株。本发明提供的交瘤细胞株分泌的氟吡呋喃酮单克隆抗体可以用于免疫分析检测，其在氟吡呋喃酮的检测中表现出了较好的检测灵敏度和特异性，IC50值为0.656ng/mL，对氟吡呋喃酮类似物交叉率小于1％。
Description
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一株分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。
背景技术
氟吡呋喃酮(flupyradifurone)是德国拜耳公司开发的一种新型丁烯酸内酯类杀虫剂，可作用于靶标害虫的中枢神经系统，该药剂可高选择性地作用于多种刺吸式口器害虫，速效性好、持效期长，且与常规新烟碱类杀虫剂无交互抗性，其最突出的特点是对蜜蜂等传粉昆虫低毒。
对于氟吡呋喃酮农药残留的检测，常采用高效液相色谱法、气相色谱法、气相或液相色谱质谱联用法。但这些方法存在样品前处理复杂和检测时间长等不足，不适用于大量样品的快速检测，为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对氟吡呋喃酮的高效、快速的检测方法。
酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的前处理简单、纯化步骤少、分析容量大、检测成本低而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测，因此在兽药残留分析中得到了广泛应用。而使用酶联免疫法检测氟吡呋喃酮的前提是得到对氟吡呋喃酮具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，因此，找到一种制备对氟吡呋喃酮具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体的方法十分关键。
发明内容
为此，本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术中样品前处理复杂和检测时间长等问题。
为解决上述技术问题，本发明提供了一株分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。此杂交瘤细胞株分泌的氟吡呋喃酮单克隆抗体对氟吡呋喃酮具有较好的特异性和检测灵敏度(IC50值为0.656ng/mL)，可以用于建立氟吡呋喃酮的免疫学检测方法，检测食品中氟吡呋喃酮的残留。
本发明的第一个目的是提供一株分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述的杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45109，本发明所得的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株。
本发明的第二个目的是提供一株分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤，
(1)使用氟吡呋喃酮半抗原制备氟吡呋喃酮完全抗原，将获得的氟吡呋喃酮完全抗原制备成含抗原弗氏完全佐剂与含抗原弗氏不完全佐剂；
(2)对免疫动物进行首次免疫、加强免疫和冲刺免疫，首次免疫采用步骤(1)中所述含抗原弗氏完全佐剂，加强免疫采用步骤(1)中所述含抗原弗氏不完全佐剂，冲刺免疫采用步骤(1)中所述氟吡呋喃酮完全抗原；
(3)取步骤(2)中冲刺免疫后的免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合，得到所述杂交瘤细胞株。
在本发明的一个实施例中，在步骤(1)中，所述氟吡呋喃酮半抗原结构式如下：
在本发明的一个实施例中，在步骤(1)中，所述氟吡呋喃酮完全抗原结构式如下：
在本发明的一个实施例中，在步骤(1)中，所述氟吡呋喃酮完全抗原的制备方法包括如下步骤，将所述氟吡呋喃酮半抗原、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于有机溶剂中，反应得到混合液，后将混合液加入到钥孔血蓝蛋白(KLH)溶液中进行反应，得到所述氟吡呋喃酮完全抗原。
在本发明的一个实施例中，所述有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。
在本发明的一个实施例中，所述钥孔血蓝蛋白KLH溶液是经过碳酸盐缓冲溶液CBS稀释得到。
在本发明的一个实施例中，在步骤(1)中，所述氟吡呋喃酮完全抗原的制备方法包括如下步骤，将所述氟吡呋喃酮半抗原、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，搅拌进行反应，得到氟吡呋喃酮半抗原溶液；将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于无水DMF后，加入到氟吡呋喃酮半抗原溶液中，搅拌进行反应，得到A液；将钥孔血蓝蛋白(KLH)用碳酸盐缓冲溶液(CBS)稀释，得到B液；将A液加入到B液中进行反应，得到反应液；用磷酸盐缓冲液(PBS)透析反应液，得到氟吡呋喃酮完全抗原。
在本发明的一个实施例中，在步骤(2)中，整个免疫过程包括1次首次免疫、3-5次加强免疫和1次冲刺免疫。
在本发明的一个实施例中，在步骤(2)中，整个免疫过程中首次免疫与加强免疫之间间隔28-31天，加强免疫之间间隔20-22天，加强免疫与冲刺免疫之间间隔18-21天。
在本发明的一个实施例中，在步骤(2)中，整个免疫过程中首次免疫的剂量为95-105μg/只，加强免疫的剂量为45-55μg/只，冲刺免疫的剂量为20-30μg/只。
在本发明的一个实施例中，在步骤(2)中，所述加强免疫过程中对免疫动物进行采血，通过间接ELISA检测免疫动物血清免疫效价和免疫抑制能力，筛选出血清中氟吡呋喃酮抗体含量高的获得免疫的免疫动物，将筛选出的免疫动物用含抗原弗氏不完全佐剂再进行最后一次加强免疫。
在本发明的一个实施例中，所述采血是在加强免疫过程结束后第6-8天进行。
在本发明的一个实施例中，在步骤(2)中，所述首次免疫和加强免疫是通过背部皮下注射入免疫动物体内。
在本发明的一个实施例中，在步骤(2)中，所述冲刺免疫通过腹腔注射入免疫动物体内。
在本发明的一个实施例中，在步骤(3)中，细胞融合是将融合的细胞通过培养基培养，利用间接ELISA检测阳性细胞孔，并进一步利用间接竞争ELISA法测定阳性细胞孔的抑制效果，通过有限稀释法对有最好抑制的阳性细胞孔进行亚克隆，得到杂交瘤细胞株。
在本发明的一个实施例中，所述培养基为RPMI-1640培养基。
在本发明的一个实施例中，所述亚克隆的次数为2-4次。
在本发明的一个实施例中，在步骤(3)中，所述细胞融合是通过聚乙二醇(PEG4000)法进行的。
在本发明的一个实施例中，在步骤(3)中，所述细胞融合是在冲刺免疫结束2-4天后进行。
在本发明的一个实施例中，一株分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，具体包括以下步骤，
(1)使用氟吡呋喃酮半抗原制备氟吡呋喃酮完全抗原，将获得的氟吡呋喃酮完全抗原制备成含抗原弗氏完全佐剂与含抗原弗氏不完全佐剂；
(2)将得到的含抗原弗氏佐剂通过背部皮下注射，注射进入免疫动物体内进行多次免疫，首次免疫采用含抗原弗氏完全佐剂，加强免疫采用含抗原弗氏不完全佐剂；
(3)将经过上述免疫过程的小鼠进行采血，通过间接ELISA检测小鼠血清免疫效价和免疫抑制能力，筛选出血清中氟吡呋喃酮抗体含量高的获得免疫的小鼠；
(4)将筛选出的小鼠用含抗原弗氏不完全佐剂再进行最后一次加强免疫，然后通过腹腔注射进行冲刺免疫，冲刺免疫采用不含弗氏佐剂的氟吡呋喃酮完全抗原进行；
(5)将进行冲刺免疫后的小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞融合，将融合的细胞通过培养基培养，利用间接ELISA检测阳性细胞孔，并进一步利用间接竞争ELISA法测定阳性细胞孔的抑制效果，通过有限稀释法对有最好抑制的阳性细胞孔进行亚克隆，最终筛选出获得能分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
本发明的第三个目的是提供所述杂交瘤细胞株在制备氟吡呋喃酮单克隆抗体中的应用。
本发明的第四个目的是提供一种氟吡呋喃酮单克隆抗体，所述氟吡呋喃酮单克隆抗体由保藏编号为CGMCC No.45109的杂交瘤细胞株分泌得到。
在本发明的一个实施例中，向免疫动物腹腔注射石蜡油，再腹腔注射保藏编号为CGMCC No.45109的杂交瘤细胞株，注射后收集腹水，将腹水纯化，获得所述氟吡呋喃酮单克隆抗体低温保存。
在本发明的一个实施例中，向8-10周龄BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射石蜡油1mL，7天后每只小鼠腹腔注射1×106保藏编号为CGMCC No.45109的杂交瘤细胞株，从第7天开始收集腹水，将腹水通过辛酸-硫酸铵法纯化，获得的氟吡呋喃酮单克隆抗体置于-20℃保存。
本发明的第五个目的是提供一种组合物，所述组合物中含有所述的杂交瘤细胞株和/或所述的氟吡呋喃酮单克隆抗体。
本发明的第六个目的是提供一种试剂盒，所述试剂盒中含有所述的杂交瘤细胞株、所述的氟吡呋喃酮单克隆抗体和所述的组合物中的一种或多种。
本发明的第七个目的是提供一种所述的杂交瘤细胞株、所述的氟吡呋喃酮克隆抗体、所述的组合物或所述的试剂盒在检测氟吡呋喃酮中的应用，尤其是应用于食品安全检测中氟吡呋喃酮残留的分析检测。
本发明的技术方案相比现有技术具有以下优点：
本发明提供的交瘤细胞株分泌的氟吡呋喃酮单克隆抗体可以用于免疫分析检测，其对氟吡呋喃酮有较好的检测灵敏度和特异性(IC50值为0.656ng/mL、对氟吡呋喃酮类似物交叉率小于1％，交叉率＝(氟吡呋喃酮的IC50/类似物的IC50)×100％。
生物材料保藏
分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株，所述杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45109，分类命名为单克隆细胞株。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：
图1为本发明氟吡呋喃酮单克隆抗体对氟吡呋喃酮的抑制标准曲线。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
(1)下述实施例中涉及的培养基如下：
RPMI-1640培养基(mg/L)：L-精氨酸290、L-门冬酰胺50、L-门冬氨酸20、L-胱氨酸二盐酸盐65.15、L-谷氨酸20、甘氨酸10、L-组氨酸15、L-羟脯氨酸20、L-异亮氨酸50、L-亮氨酸50、L-赖氨酸盐酸盐40、L-甲硫氨酸15、L-苯丙氨酸15、L-脯氨酸20、L-丝氨酸30、L-苏氨酸20、L-色氨酸5、L-酪氨酸23.19、L-缬氨酸20、对氨基苯甲酸1、硝酸钙100、无水硫酸镁48.84、无水磷酸二氢钠676.13、氯化钾400、氯化钠6000、葡萄糖2000、还原谷胱甘肽1、酚红5、L-谷氨酰胺300、生物素0.2、D-泛酸钙0.25、叶酸1、i-肌醇35、烟酰胺1、氯化胆碱3、盐酸吡哆醇1、核黄素0.2、盐酸硫胺素1、维生素B120.005、碳酸氢钠2000。
(2)下述实施例中涉及的试剂如下：
碳酸盐缓冲液(CBS)：称取Na2CO31.59 g，NaHCO32.93 g，分别溶于少量双蒸水后混合，加双蒸水至约800mL混匀，调pH值至9.6，加双蒸水定容至1000mL，4℃贮存备用；
磷酸盐缓冲液(PBS)：8.00g NaCl，0.2g KCl，0.2g KH2PO4，2.9gNa2HPO4·12H2O，溶于800mL纯水中，用NaOH或HCl调pH到7.2～7.4，定容至1000mL；
PBST：含0.05％吐温20的PBS；
抗体稀释液：PBS加入0.1％明胶；
TMB显色液：A液：Na2HPO4·12H2O 18.43g，柠檬酸9.33g，纯水定容至1000mL；B液：60mg TMB溶于100mL乙二醇中。A、B液按体积比5：1混合即为TMB显色液，现用现混。
(3)下述实施例中涉及的检测方法如下：
氟吡呋喃酮抑制率检测方法：通过棋盘试验选择ic-ELISA中最合适的抗原和抗体浓度。用碳酸盐缓冲液(CBS)将抗原稀释至0.03，0.1，0.3和1μg/mL，并用抗体稀释液将抗体稀释至0.03，0.1，0.3和1μg/mL。选择最佳工作点后，将氟吡呋喃酮标准品稀释0，0.04，0.12，0.37，1.11，3.33，10和30ng/mL等浓度，按照ic-ELISA操作步骤，最后用OriginPro8.5做图，获得氟吡呋喃酮标准抑制曲线，计算IC50。
实施例
一株分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法，具体包括以下步骤：
A、氟吡呋喃酮半抗原的合成
由于氟吡呋喃酮小分子不具有免疫原性，不能刺激小鼠产生免疫应答，进而产生抗体，因此需通过蛋白连接技术将氟吡呋喃酮偶联到蛋白上，使其获得免疫原性；蛋白偶联技术中常用的活泼基团有氨基，羧基，羟基，巯基等，鉴于氟吡呋喃酮分子结构中不含有氨基，羧基，羟基，因此需要在其结构上衍生出羧基。
本实施例衍生后的氟吡呋喃酮半抗原结构如下：
衍生过程包括如下：
取氟吡呋喃酮100mg于三角烧瓶中，用1mL DMSO溶解，再加入39mg KOH，另称取37mgβ-巯基丙酸，用1mL DMSO溶解，在搅拌状态下将β-巯基丙酸溶液缓慢滴加到三角烧瓶中，于油浴上使之缓慢升温至100℃，保温2h，撤去油浴，待产物自然冷却至室温后，加入5mL水，以6M HCl调节pH为3，用二氯甲烷萃取三次，吹干后即为氟吡呋喃酮半抗原。
B、氟吡呋喃酮完全抗原的合成
称取8.05mg氟吡呋喃酮半抗原(FPF-COOH)，5.18mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，溶解于300μLN,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，室温搅拌反应10min；再称取8.65mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，用100μLDMF充分溶解后，加入到FPF-COOH溶液中，室温搅拌反应4-6h(称为A液)。取6mg KLH，用0.01M碳酸盐缓冲液(CBS)稀释至3mg/mL(称为B液)，再逐滴将A液缓慢加入到B液中，室温反应过夜；然后用0.01M PBS溶液透析，除去未反应的小分子半抗原，得到完全抗原FPF-COOH-KLH，并通过紫外吸收扫描方法进行鉴定。
C、氟吡呋喃酮包被原的合成
将7.14mg氟吡呋喃酮半抗原(FPF-COOH)、4.6mgN-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶解于300μL无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，室温搅拌反应10min，得到氟吡呋喃酮半抗原(FPF-COOH)溶液；将7.65mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于100μL无水DMF后，加入到FPF-COOH溶液中，室温搅拌进行反应4-6h，得到A液；将6mg鸡卵白蛋白(OVA)用1mL浓度为0.01mmol/L的碳酸盐缓冲液(CBS)稀释，得到B液；将逐滴将A液缓慢加入到B液中进行反应，得到反应液；用PBS溶液透析反应液，除去未反应的小分子半抗原，得到包被原(FPF-COOH-OVA)。
D、分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备
(1)动物免疫的获得：将氟吡呋喃酮完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化后，对BALB/c小鼠进行颈背部皮下多点注射免疫(冲刺免疫除外)；首次免疫用弗氏完全佐剂，剂量为100μg/只；多次加强免疫用弗氏不完全佐剂且剂量减半即为50μg/只；冲刺免疫不用佐剂，直接用生理盐水稀释后腹腔注射，剂量再减半即为25μg/只；首次免疫与第二次加强免疫之间间隔一个月，多次加强免疫之间间隔21天，冲刺免疫与最后一次加强免疫之间间隔20天；通过间接竞争酶联免疫法(ic-ELISA)观测小鼠免疫效果即检测小鼠血清的效价和抑制。
(2)细胞融合：在冲刺免疫三天后，按照常规PEG(聚乙二醇，分子量为4000)方法进行细胞融合，具体步骤如下：
a、断尾取血，颈椎脱臼法处死小鼠后，立即放入75％酒精中消毒，浸泡5min左右，无菌操作取出小鼠的脾脏，用注射器的胶头适度研磨并通过200目细胞筛网得到脾细胞悬液，收集，离心(1200rpm，8min)，用RPMI-1640培养基洗涤脾细胞三次，最后一次离心后，将脾细胞稀释到一定体积，计数，备用；
b、收集SP2/0细胞：融合前7-10天，将SP2/0瘤细胞用含10％FBS(胎牛血清)RPMI-1640培养基在5％CO2培养箱中，融合前要求SP2/0瘤细胞数量达到(1-4)×107，保证融合前SP2/0瘤细胞处于对数生长期，融合时，收集瘤细胞，悬浮于RPMI-1640基础培养液中，进行细胞计数；
c、融合过程7min：第1min，将1mL的PEG 1500由慢到快滴加到细胞中；第2min，静置；第3min和第4min，在1min内滴加1mL RPMI-1640培养基；第5min和第6min，在1min内滴加2mL RPMI-1640培养基；第7min，每10s滴加1mL的RPMI-1640培养基；然后37℃温浴5min；离心(800rpm，8min)，弃上清，重悬入含20％胎牛血清、2％的50×HAT的RPMI-1640筛选培养液中，按照200μL/孔加到96孔细胞板，置于37℃、5％CO2培养箱中培养。
(3)细胞筛选与细胞株建立：在细胞融合的第3天对融合细胞进行RPMI-1640筛选培养液半换液，第5天进行用含20％胎牛血清，1％的100×HT的RPMI-1640过渡培养液进行全换液，在第7天取细胞上清进行筛选。
筛选分两步：第一步先用ic-ELISA法筛选出阳性细胞孔，第二步选用氟吡呋喃酮为标准品，用ic-ELISA法对阳性细胞进行抑制效果测定。
选择对氟吡呋喃酮标准品有较好抑制的细胞孔，采用有限稀释法进行亚克隆，七天后用同样的方法进行检测。
按上述方法进行三次亚克隆，最终获得氟吡呋喃酮单克隆抗体细胞株TZ1B1。
测试例
A、氟吡呋喃酮单克隆抗体的制备与鉴定
取8-10周龄BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射无菌石蜡油1mL；7天后每只小鼠腹腔注射1×106氟吡呋喃酮杂交瘤细胞，从第七天开始收集腹水，将腹水通过辛酸-饱和硫酸铵法进行抗体纯化；
在偏酸条件下，正辛酸可以沉淀腹水中除IgG免疫球蛋白外的其他杂蛋白，然后离心，弃沉淀；再用等量饱和度的硫酸铵溶液沉淀IgG型的单克隆抗体，离心，弃上清，用0.01M的PBS溶液(pH 7.4)溶解后，透析脱盐，最终得到纯化后的单克隆抗体置于-20℃保存。
使用间接竞争ELISA，测得氟吡呋喃酮单克隆抗体的IC50值为0.656ng/mL、对氟吡呋喃酮类似物交叉率小于1％，说明对氟吡呋喃酮有很好的灵敏度，可用于氟吡呋喃酮免疫分析检测。其中，交叉率＝(氟吡呋喃酮的IC50/类似物的IC50)×100％，氟吡呋喃酮类似物的IC50值和交叉率如表1所示：
表1
| 化合物 | IC50(ng/mL) | 交叉率(％) |
| 氟吡呋喃酮 | 0.656 | 100 |
| 噻虫啉 | ＞100 | ＜1 |
| 啶虫脒 | ＞100 | ＜1 |
| 吡虫啉 | ＞100 | ＜1 |
| 噻虫嗪 | ＞100 | ＜1 |
B、氟吡呋喃酮单克隆抗体的应用
将杂交瘤细胞株TZ1B1通过体内腹水制备的单克隆抗体应用于氟吡呋喃酮的ELISA添加回收试验，具体步骤如下：
(a)将用碳酸盐缓冲液(CBS)稀释好的浓度为0.3μg/mL的包被原包被96孔酶标板，每孔100μL，37℃包被2h后，用PBST洗液洗板三次，每次每孔200μL，每次3min，拍干；
(b)用含0.2％明胶的CBS进行封闭，每孔200μL，37℃封闭2h，用PBST洗液洗板三次，每次每孔200μL，每次3min，拍干；
(c)用磷酸盐缓冲液(PBS)分别配置0，0.04，0.12，0.37，1.11,3.33，10和30ng/mL的氟吡呋喃酮标准溶液，将标准溶液以及待检测样品提取液，分别加入到已经封闭好的酶标板中，每孔50μL，每个样品重复3个孔，再每孔加入50μL以1：32000稀释的抗氟吡呋喃酮单克隆抗体，37℃反应0.5h后，洗板拍干；
(d)每孔加入100μL用含0.1％明胶的PBS以1：3000稀释的HRP标记的羊抗鼠IgG二抗，37℃反应0.5h后，洗板拍干；
(e)每孔加入100μL的TMB显色液，37℃显色15min后，每孔加入50μL2M的H2SO4终止液，450nm测吸光值。
氟吡呋喃酮单克隆抗体对氟吡呋喃酮的抑制标准曲线如图1所示，用ic-ELISA测定氟吡呋喃酮单克隆抗体的IC50值为0.656ng/mL，说明该抗体对氟吡呋喃酮有较好的灵敏度，可用于氟吡呋喃酮的免疫分析检测。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (6)
1.一株分泌氟吡呋喃酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述的杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45109。
2.权利要求1中所述杂交瘤细胞株在制备氟吡呋喃酮单克隆抗体中的应用。
3.一种氟吡呋喃酮单克隆抗体，其特征在于，所述氟吡呋喃酮单克隆抗体由权利要求1中所述杂交瘤细胞株分泌得到。
4.一种组合物，其特征在于，所述组合物中含有权利要求3所述的氟吡呋喃酮单克隆抗体。
5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求3所述的氟吡呋喃酮单克隆抗体和权利要求4所述的组合物中的一种或多种。
6.权利要求3所述的氟吡呋喃酮克隆抗体、权利要求4所述的组合物或权利要求5所述的试剂盒在检测氟吡呋喃酮中的应用。
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