CN115109757B - 一株分泌新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一株分泌新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫检测技术领域。本发明提供的分泌新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株，所述的杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.45114，分类命名为单克隆细胞株。本发明提供的杂交瘤细胞株分泌的新生霉素单克隆抗体对对新生霉素有较好的检测灵敏度度(IC50值为6.9ng/mL)和特异性(对新生霉素类似物交叉率小于1％)。

Description

一株分泌新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一株分泌新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。
背景技术
新生霉素(Methaqualone)又名新生霉素钠，属于青霉素类抗生素，对革兰阴性细菌中脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌、百日咳杆菌、布氏杆菌、奇异变形杆菌、沙门菌等皆有抑制作用，但长期使用新生霉素会造成这些细菌产生耐药性。随着畜牧养殖业的迅速发展，由于新生霉素具有很好的抗菌效果且生产工艺简单，常被作为兽药用于畜禽养殖，但由于养殖人员对其不规范的使用，造成了其在动物性食品中大量残留，对人体产生了健康威胁，因此美国和加拿大对新生霉素在牛肉，鸡肉等动物性肌肉组织中的最大残留限量为1mg/kg。
目前关于新生霉素残留的测定方法主要包括高效液相色谱法、气相或液相色谱与质谱联用法以及薄层色谱法、动力学分光光度法等方法。但这些方法样品前处理复杂，检测周期长，而且需要专业的技术人员，因此在实际应用中这些方法检测效率不高。为了保障消费者的权益以及提高对市场中新生霉素过量残留的食品监督，建立一种针对新生霉素的高效、快速的检测方法具有重要意义。
由于酶联免疫方法(ELISA)的样本前处理简单、检测成本低、操作简便，因此适用于大量样本的现场快速检测，但是对于开发一种能够满足市场监管需求的间接竞争酶联免疫试剂盒或胶体金试纸条等快速检测方法，获得对新生霉素具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体则非常关键。
发明内容
为此，本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术中上述仪器针对新生霉素检测的不足。
为解决上述技术问题，本发明提供了一株分泌新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。本发明通过将新生霉素完全抗原免疫免疫动物，通过细胞融合，HAT选择性培养基培养，通过ic-ELISA筛选细胞上清，有限稀释法亚克隆，最终获得对新生霉素有较好特异性和灵敏度的单克隆抗体杂交瘤细胞株。
本发明的第一个目的是提供一株分泌新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述的杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45114，本发明所得的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株。
本发明的第二个目的是提供一株分泌新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤，
S1、将新生霉素、催化剂碳酸镁和溴丁酸乙酯溶于有机溶剂，55-65℃下反应20-28h，加入碱性溶液水解得到新生霉素半抗原；
S2、使用S1中所述新生霉素半抗原制备新生霉素完全抗原，将所得的新生霉素完全抗原制备成含抗原弗氏完全佐剂与含抗原弗氏不完全佐剂；
S3、对免疫动物进行首次免疫、加强免疫和冲刺免疫，首次免疫采用S2中所述含抗原弗氏完全佐剂，加强免疫采用S2中所述含抗原弗氏不完全佐剂，冲刺免疫采用生理盐水；
S4、取S3中冲刺免疫后的免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合，得到所述抗新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
在本发明的一个实施例中，新生霉素半抗原合成反应分为两步，第一步使用新生霉素和4-溴丁酸乙酯在碳酸镁作为催化剂的条件下，反应生成含有酯基的新生霉素半抗原；第二步是酯基在碱水解后生成含有羧基的新生霉素半抗原。
在本发明的一个实施例中，在S1中，还包括用酸性溶液调节pH至4，再进行萃取和干燥步骤。
在本发明的一个实施例中，所述酸性溶液为盐酸溶液。
在本发明的一个实施例中，所述酸性溶液的浓度为0.8-1.2mol/L。
在本发明的一个实施例中，所述萃取是使用乙酸乙酯萃取三次。
在本发明的一个实施例中，在S1中，所述有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。
在本发明的一个实施例中，在S1中，所述碱性溶液中的碱性溶剂为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
在本发明的一个实施例中，在S1中，所述碱性溶液的浓度为0.8-1.2mol/L。
在本发明的一个实施例中，在S1中，所述新生霉素、碳酸镁和溴丁酸乙酯的摩尔比为1：10：3。
在本发明的一个实施例中，在S1中，所述新生霉素半抗原结构式如下：
Figure BDA0003638773660000031
在本发明的一个实施例中，在S1中，所述新生霉素半抗原的制备方法具体包括如下步骤，称取200mg的新生霉素、270mg碳酸镁、126mg溴丁酸乙酯，溶于4mL的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，60℃下反应24h，反应完成后，加入1mol/L的氢氧化钠溶液碱水解1h，冷却至室温后，溶液呈棕黄色，再使用1mol/L的盐酸将反应液的PH调至4，油状物质析出，再使用乙酸乙酯萃取三次，收集有机相，氮气吹干即可获得含有羧基的新生霉素半抗原。
在本发明的一个实施例中，在S2中，所述新生霉素完全抗原的制备方法包括如下步骤，将所述新生霉素半抗原、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于溶剂中，反应得到混合液，后将混合液加入到载体蛋白溶液中进行反应，得到所述新生霉素完全抗原。
在本发明的一个实施例中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白(BSA)和/或钥孔血蓝蛋白(KLH)。
在本发明的一个实施例中，所述溶剂为N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。
在本发明的一个实施例中，在S2中，所述新生霉素完全抗原的制备方法具体包括如下步骤，新生霉素半抗原(2-NOV)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温搅拌反应5-8h，称为A液；称取载体蛋白，加入缓冲溶液，称为B液；搅拌下，缓慢将A液逐滴加至B液中，室温反应6-10h，得到混合液；通过透析纯化即得新生霉素完全抗原。
在本发明的一个实施例中，所述N,N-二甲基甲酰胺与所述缓冲溶液的体积比为4：5。
在本发明的一个实施例中，在S2中，所述含抗原弗氏完全佐剂是弗氏完全佐剂与新生霉素完全抗原的等体积混合的乳化液。
在本发明的一个实施例中，在S2中，所述含抗原弗氏不完全佐剂是弗氏不完全佐剂与新生霉素完全抗原的等体积混合的乳化液。
在本发明的一个实施例中，在S3中，整个免疫过程包括1次首次免疫、多次加强免疫和1次冲刺免疫。
在本发明的一个实施例中，在S3中，各次免疫之间间隔18-22天。
在本发明的一个实施例中，在S3中，整个免疫过程中首次免疫的剂量为95-105μg/只，加强免疫的剂量为45-55μg/只，冲刺免疫的剂量为20-30μg/只。
在本发明的一个实施例中，在S3中，所述首次免疫和加强免疫是通过背部皮下注射入免疫动物体内；所述冲刺免疫是通过腹腔注射入免疫动物体内。
在本发明的一个实施例中，在S3中，所述加强免疫过程中对免疫动物进行采血，通过间接竞争酶联免疫法(icELISA)检测血清效价和抑制率，筛选出血清中新生霉素抗体含量高的免疫动物。
在本发明的一个实施例中，所述采血是在每次免疫结束后第6-8天进行。
在本发明的一个实施例中，在S4中，细胞融合是将融合的细胞通过选择性培养基(HAT培养基)培养，利用间接ELISA检测阳性细胞孔，并进一步利用间接竞争酶联免疫法(ic-ELISA)测定阳性细胞孔的抑制效果，通过有限稀释法选择效价高、抑制效果最好的阳性细胞进行亚克隆，得到杂交瘤细胞株。
在本发明的一个实施例中，所述HAT培养基为RPMI-1640培养基。
在本发明的一个实施例中，所述亚克隆的次数为4-6次。
在本发明的一个实施例中，在S4中，所述细胞融合是通过聚乙二醇(PEG4000)法进行的。
在本发明的一个实施例中，在S4中，所述细胞融合是在冲刺免疫结束2-4天后进行。
本发明的第三个目的是提供一种所述杂交瘤细胞株在制备新生霉素单克隆抗体中的应用。
本发明的第四个目的是提供一种新生霉素单克隆抗体，所述新生霉素单克隆抗体由保藏编号为CGMCC No.45114的杂交瘤细胞株分泌得到。
在本发明的一个实施例中，向免疫动物腹腔注射石蜡油，再腹腔注射保藏编号为CGMCC No.45114的杂交瘤细胞株，注射后收集腹水，将腹水纯化，获得所述新生霉素单克隆抗体低温保存。
在本发明的一个实施例中，向8-10周龄BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射石蜡油1mL，7天后每只小鼠腹腔注射1×106保藏编号为CGMCC No.45114的杂交瘤细胞株，从第7天开始收集腹水，将腹水通过辛酸-硫酸铵法纯化，获得的新生霉素单克隆抗体置于-20℃保存。
本发明的第五个目的是提供一种组合物，所述组合物中含有所述的杂交瘤细胞株和/或所述的新生霉素单克隆抗体。
本发明的第六个目的是提供一种试剂盒，所述试剂盒中含有所述的杂交瘤细胞株、所述的新生霉素单克隆抗体和所述的组合物中的一种或多种。
本发明的第七个目的是提供一种试纸条，所述试纸条含有所述的杂交瘤细胞株、所述的新生霉素单克隆抗体、所述的组合物和所述的试剂盒中的一种或多种。
本发明的第八个目的是提供一种所述的杂交瘤细胞株、所述的新生霉素克隆抗体、所述的组合物、所述的试剂盒或所述的试纸条在检测新生霉素中的应用。
本发明的技术方案相比现有技术具有以下优点：
本发明所述的新生霉素单克隆抗体，对新生霉素有较好的检测灵敏度度(IC50值为6.9ng/mL)和特异性(对新生霉素类似物交叉率小于1％，交叉率＝(新生霉素的IC50/类似物的IC50)×100％)；本发明开发出一种新的合成新生霉素免疫原的方案，并具有开发出检测新生霉素的酶联免疫试剂盒以及胶体金快检试纸条的实际应用价值。
生物材料保藏
分泌新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株，所述杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45114，分类命名为单克隆细胞株。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：
图1为本发明新生霉素单克隆抗体对新生霉素的抑制标准曲线。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
(1)下述实施例中涉及的培养基如下：
RPMI-1640培养基(mg/L)：L-精氨酸290、L-门冬酰胺50、L-门冬氨酸20、L-胱氨酸二盐酸盐65.15、L-谷氨酸20、甘氨酸10、L-组氨酸15、L-羟脯氨酸20、L-异亮氨酸50、L-亮氨酸50、L-赖氨酸盐酸盐40、L-甲硫氨酸15、L-苯丙氨酸15、L-脯氨酸20、L-丝氨酸30、L-苏氨酸20、L-色氨酸5、L-酪氨酸23.19、L-缬氨酸20、对氨基苯甲酸1、硝酸钙100、无水硫酸镁48.84、无水磷酸二氢钠676.13、氯化钾400、氯化钠6000、葡萄糖2000、还原谷胱甘肽1、酚红5、L-谷氨酰胺300、生物素0.2、D-泛酸钙0.25、叶酸1、i-肌醇35、烟酰胺1、氯化胆碱3、盐酸吡哆醇1、核黄素0.2、盐酸硫胺素1、维生素B120.005、碳酸氢钠2000。
(2)下述实施例中涉及的试剂如下：
碳酸盐缓冲液(CBS)：称取Na2CO31.59g，NaHCO32.93g，分别溶于少量双蒸水后混合，加双蒸水至约800mL混匀，调pH值至9.6，加双蒸水定容至1000mL，4℃贮存备用；
磷酸盐缓冲液(PBS)：8.00g NaCl，0.2g KCl，0.2g KH2PO4，2.9g Na2HPO4·12H2O，溶于800mL纯水中，用NaOH或HCl调pH到7.2-7.4，用超纯水定容至1000mL；
洗涤液(PBST)：0.01mol/LpH 7.4的PBS溶液中加入0.5mL的Tween-20，用超纯水定容至1000mL(含0.05％Tween-20的PBS)；
抗体稀释液：含有0.1％明胶的洗涤液；
TMB显色液：A液：Na2HPO4·12H2O 18.43g，柠檬酸9.33g，纯水定容至1000mL；B液：60mg TMB溶于100mL乙二醇中。A、B液按体积比5：1混合即为TMB显色液，现用现混。
(3)下述实施例中涉及的检测方法如下：
新生霉素抑制率检测方法：通过棋盘试验选择ic-ELISA中最合适的抗原和抗体浓度。用碳酸盐缓冲液(CBS)将抗原稀释至1，0.3，0.1和0.03μg/mL，并用抗体稀释液将抗体稀释至1，0.3，0.1和0.03μg/mL。选择最佳工作点后，将新生霉素标准品稀释189，63，21，7，2.3，0.76，0.25和0ng/mL等浓度，按照ic-ELISA操作步骤，最后用OriginPro 8.5做图，获得新生霉素标准抑制曲线，计算IC50。
实施例
一株分泌新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法，具体包括以下步骤：
(1)新生霉素完全抗原的制备：
a、新生霉素半抗原2-NOV的衍生路线如下：
Figure BDA0003638773660000081
衍生步骤简述如下：
称取200mg的新生霉素、270mg碳酸镁、126mg溴丁酸乙酯，溶于4mL的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，60℃下反应24h，反应完成后，加入1mol/L的氢氧化钠溶液碱水解1h，冷却至室温后，溶液呈棕黄色，再使用1mol/L的盐酸将反应液的PH调至4，油状物质析出，再使用乙酸乙酯萃取三次，收集有机相，氮气吹干即可获得含有羧基的新生霉素半抗原。
b、称取9.6mg新生霉素半抗原(2-NOV)溶于800μLN,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入9.3mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和5.7mgN-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温持续搅拌反应，活化6h，得到活化液。另取5mg KLH，溶解于1mL碳酸盐缓冲液(0.1M CBS，pH 9.4)中；随后，将活化液逐滴加入到KLH溶液中，室温反应8h，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原得到新生霉素免疫原。
(2)新生霉素包被原的制备：
称取7mg新生霉素半抗原(2-NOV)，将其溶解在80μL DMF中，然后加入6.9mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，4.1mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温下搅拌反应6h；称取5mg OVA，溶解于1mL碳酸盐缓冲液(0.1M CBS，pH 9.4)；随后，将活化溶液逐滴加入到OVA溶液中，室温反应8h，通过透析纯化得到新生霉素包被原(2-NOV-OVA)。
(3)动物免疫：选择健康的6-8周龄的BALB/c小鼠进行免疫。首次免疫将得到的新生霉素免疫原与弗氏完全佐剂等量混合乳化后通过背部皮下多点方式免疫BALB/c小鼠，剂量为100μg/只。加强免疫采用新生霉素完全抗原与弗氏不完全佐剂等量混合乳化进行免疫，剂量为50μg/只。冲刺免疫使用生理盐水混合均匀后进行腹腔注射，各次免疫时间间隔为三周，冲刺免疫剂量为加强免疫剂量的一半，使用ic-ELISA测定小鼠血清效价和抑制，选择效价高抑制好的小鼠。
(4)细胞融合：在冲刺免疫三天后，按照常规PEG(聚乙二醇，分子量为4000)方法进行细胞融合，具体步骤如下：
a、断尾采血，颈椎脱臼法处死小鼠后，放入75％酒精中消毒，浸泡5min左右，无菌操作取出小鼠的脾脏，用注射器的胶头适度研磨并通过200目细胞筛网得到脾细胞悬液，收集，并离心(1200rpm，8min)，用RPMI-1640培养基洗涤脾细胞三次，最后一次离心后，将脾细胞稀释到一定体积，计数，备用；
b、收集SP2/0细胞：融合前7-10天，将SP2/0瘤细胞用含10％FBS(胎牛血清)RPMI-1640培养基在5％CO2培养箱中，融合前要求SP2/0瘤细胞数量达到(1-4)×107，保证融合前SP2/0瘤细胞处于对数生长期，融合时，收集瘤细胞，悬浮于RPMI-1640基础培养液中，进行细胞计数；
c、融合过程7min：第1min，将1mL的PEG 1500由慢到快滴加到细胞中；第2min，静置；第3min和第4min，在1min内滴加1mL RPMI-1640培养基；第5min和第6min，在1min内滴加2mL RPMI-1640培养基；第7min，每10s滴加1mL的RPMI-1640培养基；然后37℃温浴5min；离心(800rpm，10min)，弃上清，用含20％胎牛血清、2％的50×HAT的RPMI-1640筛选培养液重悬，按照200μL/孔加到96孔细胞板，置于37℃、5％CO2培养箱中培养；
(5)细胞筛选与细胞株建立：在细胞融合的第3天对融合细胞进行RPMI-1640筛选培养液半换液，第5天进行用含20％胎牛血清，1％的100×HT的RPMI-1640过渡培养液进行全换液，在第7天取细胞上清进行筛选。筛选过程分两步：第一步先用ic-ELISA法筛选出阳性细胞孔，第二步选用新生霉素为标准品，用ic-ELISA法对阳性细胞进行抑制效果测定；选择对新生霉素标准品有较好抑制的细胞孔，采用有限稀释法进行亚克隆，七天后用同样的方法进行检测；按上述方法进行五次亚克隆，最终获得新生霉素单克隆抗体细胞株。
测试例
(1)新生霉素单克隆抗体的制备与鉴定
取8-10周龄BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射无菌石蜡油1mL；7天后每只小鼠腹腔注射1×106新生霉素杂交瘤细胞，从第七天开始收集腹水，将腹水通过辛酸-饱和硫酸铵法进行抗体纯化；在PH偏酸的条件下，正辛酸可以沉淀腹水中除IgG免疫球蛋白外的其他杂蛋白，然后离心，弃沉淀；再用等量饱和度的硫酸铵溶液沉淀IgG型的单克隆抗体，离心，弃上清，用0.01M的PBS溶液(pH 7.4)溶解后，透析脱盐，最终得到纯化后的单克隆抗体置于-20℃保存。
使用间接竞争ELISA法，测定单克隆抗体对新生霉素的IC50为6.9ng/mL，并验证其对春雷霉素等的IC50及交叉反应率，对新生霉素类似物交叉率小于1％，其中，交叉率＝(新生霉素的IC50/类似物的IC50)×100％，根据交叉反应率数值，可以看出该抗体对新生霉素有较高的灵敏度和特异性，具体如表1所示。
表1所示为单克隆抗体对春雷霉素、康乐霉素、呋喃他酮、芹菜甙、井冈霉素、康乐霉素A和香豆霉素的IC50及交叉反应率：
表1
IC50(ng/mL) 交叉反应率
新生霉素 6.9 100％
春雷霉素 >1000 <1％
康乐霉素 >1000 <1％
呋喃他酮 >1000 <1％
芹菜甙 >1000 <1％
井冈霉素 >1000 <1％
康乐霉素A >1000 <1％
香豆霉素 >1000 <1％
(2)抗体应用
将杂交瘤细胞株通过体内腹水制备的单克隆抗体应用于新生霉素的添加回收试验，具体步骤如下：
a、包被：将包被原新生霉素包被原(2-NOV-OVA)用0.05M pH 9.6碳酸盐缓冲液(CBS)从0.3μg/mL倍比稀释，加入酶标板上，每孔100μL，37℃包被2h后，用PBST洗液洗板三次，每次3min，拍干备用；
b、封闭：洗板后用含0.2％明胶的CBS进行封闭，每孔200μL，37℃封闭2h，用PBST洗液洗板三次，每次3min，拍干备用；
c、加样：用磷酸盐缓冲液(PBS)分别配置0，0.25，0.76，2.3，7，21，63和189ng/mL的新生霉素标准溶液，将标准溶液以及待检测样品提取液，分别加入到已经封闭好的酶标板中，每孔50μL，再每孔加入50μL以1:32000稀释的抗新生霉素单克隆抗体，37℃反应30min后，洗板拍干；
d、添加二抗：用含0.1％明胶的PBS以1：3000稀释的HRP标记的羊抗鼠IgG二抗，每孔加入100μL，37℃反应30min后，洗板拍干；
e、显色和测定：每孔加入100μL的TMB显色液，37℃显色15min后，每孔加入50μL 2M的H2SO4终止液，450nm测吸光值；
新生霉素单克隆抗体对新生霉素的抑制标准曲线如图1所示，用ic-ELISA测定新生霉素单克隆抗体的IC50值为6.9ng/mL，说明该抗体对新生霉素有较好的灵敏度，可用于新生霉素的免疫分析检测。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (7)

1.一株分泌新生霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述的杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45114，本发明所得的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株。
2.权利要求1中所述杂交瘤细胞株在制备新生霉素单克隆抗体中的应用。
3.一种新生霉素单克隆抗体，其特征在于，所述新生霉素单克隆抗体由权利要求1中所述杂交瘤细胞株分泌得到。
4.一种组合物，其特征在于，所述组合物中含有权利要求1所述的杂交瘤细胞株和/或权利要求3所述的新生霉素单克隆抗体。
5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求1所述的杂交瘤细胞株、权利要求3所述的新生霉素单克隆抗体和权利要求4所述的组合物中的一种或多种。
6.一种试纸条，其特征在于，所述试纸条含有权利要求1所述的杂交瘤细胞株、权利要求3所述的新生霉素单克隆抗体和权利要求4所述的组合物中的一种或多种。
7.如权利要求1所述的杂交瘤细胞株、权利要求3所述的新生霉素克隆抗体、权利要求4所述的组合物、权利要求5所述的试剂盒或权利要求6所述的试纸条在检测新生霉素中的应用。
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