CN114774195B - 一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法及美白活性评价方法及应用 - Google Patents
一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法及美白活性评价方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114774195B CN114774195B CN202210172734.2A CN202210172734A CN114774195B CN 114774195 B CN114774195 B CN 114774195B CN 202210172734 A CN202210172734 A CN 202210172734A CN 114774195 B CN114774195 B CN 114774195B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seed oil
- tobacco seed
- tobacco
- oil
- whitening
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 title claims abstract description 305
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 title claims abstract description 305
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 title claims abstract description 234
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 title claims abstract description 108
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title claims abstract description 56
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims abstract description 40
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims abstract description 40
- 238000000199 molecular distillation Methods 0.000 claims abstract description 36
- 239000000779 smoke Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229940119170 jojoba wax Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 114
- BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N hydroquinone O-beta-D-glucopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N 0.000 claims description 104
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 claims description 97
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 claims description 55
- 229960000271 arbutin Drugs 0.000 claims description 52
- BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N p-hydroxyphenyl beta-D-alloside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 52
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 26
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 25
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 25
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 25
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 25
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 22
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 21
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 18
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 17
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 17
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 17
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 16
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 claims description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 14
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 13
- 238000004821 distillation Methods 0.000 claims description 12
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000007731 hot pressing Methods 0.000 claims description 9
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 claims description 8
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 8
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 239000001307 helium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000010453 quartz Substances 0.000 claims description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 24
- 230000009471 action Effects 0.000 description 20
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 16
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 12
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 12
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 9
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 9
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 3
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 3
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 3
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000001319 headspace solid-phase micro-extraction Methods 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N octamethyltrisiloxane Chemical compound C[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)C CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 238000004987 plasma desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 238000002470 solid-phase micro-extraction Methods 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 2
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 2
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 2
- 235000019505 tobacco product Nutrition 0.000 description 2
- 241000208128 Nicotiana glauca Species 0.000 description 1
- 229920000180 alkyd Polymers 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B9/00—Essential oils; Perfumes
- C11B9/02—Recovery or refining of essential oils from raw materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/92—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof
- A61K8/922—Oils, fats or waxes; Derivatives thereof, e.g. hydrogenation products thereof of vegetable origin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B9/00—Essential oils; Perfumes
- C11B9/02—Recovery or refining of essential oils from raw materials
- C11B9/022—Refining
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B9/00—Essential oils; Perfumes
- C11B9/02—Recovery or refining of essential oils from raw materials
- C11B9/027—Recovery of volatiles by distillation or stripping
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/30—Control of physical parameters of the fluid carrier of temperature
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/32—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/59—Mixtures
- A61K2800/592—Mixtures of compounds complementing their respective functions
- A61K2800/5922—At least two compounds being classified in the same subclass of A61K8/18
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/32—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed
- G01N2030/324—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed speed, flow rate
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Manufacture Of Tobacco Products (AREA)
Abstract
本发明公开了一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法及美白活性评价方法及应用,该具有美白活性成分烟籽油的制备包括原料选取,将原料进行用热压榨获得烟籽初油;将烟籽初油经静置过滤后加入生物吸附剂,置于恒温摇床中振荡吸附反应6‑8h;待反应结束后,用微孔滤膜分离过滤除去生物吸附剂,获得烟籽油半成品;烟籽油半成品放入分子蒸馏仪中进行三次分子蒸馏,将三次分子蒸馏后的三个馏分烟籽油合并,即获得高纯度的具有美白活性成分的烟籽油。本发明将该烟籽油经美白活性评价合格后添加于荷荷巴油中作为美白精油,或将具有美白活性成分的烟籽油直接作为美白精油,发挥其美白活性。
Description
技术领域
本发明属于烟草产品技术领域,具体涉及一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法及美白活性评价方法及应用。
背景技术
烟籽是烟草的种子,长期以来,烟籽的应用主要集中于品种选育及工商业原料生产,因此,针对烟籽的研究工作主要围绕提高种子产质量展开。而有关烟籽多功能探索、原料及产品开发前景、市场应用范围等方面的研究工作十分稀少,技术缺口明显。同时,大田生产中,烟草种子繁殖系数高,烟籽产量远远超过工商业烟叶生产原料需求,富余烟籽量很大。技术不足和库存过剩,很大程度上限制了烟籽资源的利用。近年来,针对废弃烟叶、烟杆等资源进行利用研究的报道较多,但对烟籽综合利用的研究报道确很少。
烟籽富含脂肪油,是一种很好的脂肪油原料,油脂含量高达40%~50%,从烟籽中经物理压榨出的烟籽油在油脂化学工业上有多种用途,如在制皂工业中用于制备皂类制品,在制漆工业中作为原料制备醇酸树脂漆,但是经物理压榨出的烟籽油无法进行精细应用。烟籽作为烟草产品的一种,具备巨大的科研及应用潜力,因此,开发一种烟籽油并对其功能应用进行探索十分重要。
鉴于以上情况,有必要研究一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法及美白活性评价方法及应用用于解决上述技术问题。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法,本发明的第二个目的在于提供烟籽油的美白活性评价方法,本发明的第三个目的在于提供具有美白活性成分烟籽油的应用。
本发明的第一个目的是这样实现的,一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法,包括如下步骤:
(1)原料选取:采集成熟的烟草蒴果,晾晒至烟草蒴果干燥;将烟草蒴果进行脱粒后风选获得饱满烟草籽,将所述饱满烟草籽洗净后干燥至含水率降至8%~10%,备用;
(2)将步骤(1)中干燥后的饱满烟草籽经研磨后进行热压榨,获得热压榨后的烟籽初油;
(3)将步骤(2)中的烟籽初油静置18-24h后进行过滤,获得过滤后的烟籽初油;
(4)将步骤(3)中过滤后的烟籽初油中加入生物吸附剂,置于恒温摇床中振荡吸附反应6-8h;
(5)待步骤(4)反应结束后,用微孔滤膜分离过滤除去生物吸附剂,获得烟籽油半成品;
(6)将步骤(5)中的烟籽油半成品放入分子蒸馏仪中,在85-90℃、100Pa条件下进行第一次分子蒸馏,冷凝后获到第一馏分为一级轻组分的烟籽油L1;将第一次蒸馏剩余物在95-100℃、10Pa条件下继续进行第二次分子蒸馏,冷凝得到的第二馏分为二级轻组分的烟籽油L2;将第二次蒸馏剩余物在115-120℃、1Pa条件下继续进行三级分子蒸馏,冷凝后获得第三馏分为三级轻组分的烟籽油L3;
(7)将步骤(6)中的烟籽油L1、烟籽油L2和烟籽油L3合并,即获得具有美白活性成分的烟籽油。
优选地,步骤(2)中所述热压榨为将饱满烟草籽研磨至粒度为45-55目后,在195-205℃下进行压榨。
优选地,步骤(4)中所述生物吸附剂优选为酵母粉末,所述酵母粉末与烟籽初油的质量比为1:20。
优选地,步骤(5)中所述微孔滤膜的孔径为0.32μm。
优选地,步骤(6)中所述分子蒸馏仪的进料速度为50mL/h,转子转速为120r/min。
本发明的第二个目的是这样实现的,一种烟籽油的美白活性评价方法,包括以下步骤:
S1:将所述的具有美白活性成分的烟籽油进行GC-MS检测,检测出所述具有美白活性成分烟籽油中的脂肪酸含量和挥发性成分含量;
S2:以熊果苷为阳性对照,测定熊果苷对B16黑色素瘤细胞的抑制率及对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率;
S3:测定烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率及对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率;
S4:将步骤S2中熊果苷对B16黑色素瘤细胞的抑制率与步骤S3中烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率进行对比,将步骤S2中熊果苷对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率与步骤S3中烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率进行对比,确定烟籽油的美白活性能力;
S5:结合步骤S4中确定的烟籽油美白活性能力、步骤S1中的烟籽油脂肪酸含量和挥发性成分含量,对烟籽油的美白活性能力进行综合评价。
优选地,步骤S1中所述脂肪酸含量的GC-MS检测条件为:
GC检测条件:进样口温度240℃;载气为99.999%高纯氦气,流速为1mL/min,不分流进样;色谱柱型号为HP-5的30m×0.32mm×0.25μm石英毛细管柱,程序升温条件:柱温箱初始温度40℃,然后以1℃/min的速度增加到80℃;再以20℃/min的速率增加到250℃,保持10min;
MS检测条件:离子源为EI源,电子能量70eV,接口温度250℃,离子源温度230℃,质量扫描范围30-540m/z,溶剂延迟3min,全扫描模式。
优选地,步骤S2中所述熊果苷对B16黑色素瘤细胞的抑制率的测定方法与步骤S3中烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率的测定方法均为:将B16黑色素瘤细胞经培养后弃上清液,得细胞悬液;将细胞悬液种加入不同体积分数的烟籽油或熊果苷;培养不同时间后,加入MTT继续培养,弃上清液,加入DMSO震荡,测定490nm吸光值,根据吸光值计算细胞抑制率。
优选地,步骤S2中所述熊果苷对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率的测定方法与步骤S3中烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率的测定方法均为:将B16黑色素瘤细胞经培养后弃上清液,获得细胞悬液;在细胞悬液中加入不同体积分数的烟籽油或熊果苷,培养不同时间后,离心后弃上清,添加含DMSO的NaOH溶液,水浴孵育,待细胞完全溶解破碎后,取上清液摇床震动,测定405nm吸光值,根据吸光值计算黑色素合成抑制率。
本发明的第三个目的是这样实现的,一种具有美白活性成分烟籽油的应用,所述具有美白活性成分的烟籽油经美白活性评价合格后添加于荷荷巴油中作为美白精油,或将烟籽油直接作为美白精油。
与现有技术相比,本发明具有以下技术效果:
1、本发明通过先将烟草籽利用热压榨法榨取烟籽初油,再将经生物吸附剂吸附及微孔滤膜分离过滤后的烟籽油半成品进行三次分子蒸馏,使其美白活性成分富集,获得具有美白活性成分的功能性烟籽油。
2、本发明通过采用酵母粉作为生物吸附剂吸附,采用微孔滤膜分离过滤烟籽初油,能有效去除烟草籽热压榨时产生的重金属、盐分、色素及杂质等。
3、本发明通过将烟籽油半成品在不同温度和压强下进行三次分子蒸馏,通过严格控制蒸馏温度,不仅能有效保留烟籽油的美白活性成分,还能再次分离出烟籽油中的杂质成分,通过三次分子蒸馏获得了具有美白活性成分的高纯度功能性烟籽油。
4、本发明通过将烟籽油的美白活性进行综合评价,确定烟籽油具有美白活性成分;将经美白活性评价合格的烟籽油添加于荷荷巴油中作为美白精油,或将具有美白活性成分的烟籽油直接作为美白精油,发挥烟籽油的美白活性。
5、本发明不仅提高了烟草资源的利用率,还拓宽了烟籽油的用途及市场应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明,但不以任何方式对本发明加以限制,基于本发明教导所作的任何变换或替换,均属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例以香料烟中的保山4号品种为例。
1.1一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法,包括如下步骤:
(1)原料选取:采集成熟的保山4号烟草蒴果,晾晒至保山4号烟草蒴果干燥;将烟草蒴果进行脱粒后风选获得饱满的保山4号烟草籽,将所述饱满烟草籽洗净后干燥至含水率降至9%,备用;
(2)将干燥后的饱满保山4号烟草籽研磨至粒度为50目后,在200℃下进行热压榨,获得热压榨后的烟籽初油;
(3)将热压榨后的烟籽初油静置20h后进行过滤,过滤去除大颗粒杂质,获得过滤后的烟籽初油;
(4)将过滤后的烟籽初油中加入酵母粉末生物吸附剂,酵母粉末与烟籽初油的质量比为1:20,置于恒温摇床中振荡吸附反应7h;
(5)待步骤(4)反应结束后,用0.32μm微孔滤膜分离过滤除去酵母粉末生物吸附剂,获得烟籽油半成品;
(6)将烟籽油半成品放入分子蒸馏仪中,分子蒸馏仪的进料速度为50mL/h,转子转速为120r/min;在88℃、100Pa条件下进行第一次分子蒸馏,冷凝后获到第一馏分为一级轻组分的烟籽油L1;将第一次蒸馏剩余物在98℃、10Pa条件下继续进行第二次分子蒸馏,冷凝得到的第二馏分为二级轻组分的烟籽油L2;将第二次蒸馏剩余物在118℃、1Pa条件下继续进行三级分子蒸馏,冷凝后获得第三馏分为三级轻组分的烟籽油L3;
(7)将烟籽油L1、烟籽油L2和烟籽油L3合并,即获得具有美白活性成分的保山4号烟籽油。
1.2将具有美白活性成分的保山4号烟籽油进行GC-MS检测,测定出烟籽油中的脂肪酸含量和挥发性成分含量。
1.2.1脂肪酸含量的测定方法:采用顶空固相微萃取法(HS-SPME)萃取和富集保山4号烟籽油样品,萃取纤维头型号为50/30μm DVB/CAR/PDMS。萃取纤维每次使用之前,均需在240℃的GC-MS进样口老化3min。准确称取3mL具有美白活性成分的保山4号烟籽油加入到20mL的顶空瓶中立即密封,在40℃的条件下萃取20min。萃取完成后,取出固相微萃取纤维针,然后插入GC注射口进行解吸附(3min,240℃)及后续GC-MS分析。
具体的,GC检测条件为:进样口温度240℃;载气为99.999%高纯氦气,流速为1mL/min,不分流进样;色谱柱型号为HP-5的30m×0.32mm×0.25μm石英毛细管柱,程序升温条件:柱温箱初始温度40℃,然后以1℃/min的速度增加到80℃;再以20℃/min的速率增加到250℃,保持10min;
具体的,MS检测条件为:离子源为EI源,电子能量70eV,接口温度250℃,离子源温度230℃,质量扫描范围30-540m/z,溶剂延迟3min,全扫描模式。
具有美白活性成分的保山4号烟籽油的主要脂肪酸成分如表1所示。
表1
1.2.2挥发性成分含量的测定:
检测条件:以氮气为载气,流速为2mL/min,进样量为1μL,分流比为1:29.5,进样口温度和检测器温度分别为270℃和280℃;初始柱温100℃保持3min,以20℃/min升至170℃,保持10min,再以10℃/min升至200℃,保持5min,最后以2℃/min升至230℃,保持5min;其余与脂肪酸含量的测定方法一致。
具有美白活性成分的保山4号烟籽油的挥发性主要成分及占比如表2所示。
表2
1.3保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制结果
以熊果苷为阳性对照,测定熊果苷及保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率。
B16黑色素瘤细胞在含10%胎牛血清(FBS)、1%双抗(青霉素(100U/mL)、链霉素(100mg/mL)的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)中培养;培养条件:37℃、5%CO2、95%空气条件细胞培养箱。
待B16黑色素瘤细胞生长到对数期,使用胰蛋白酶溶液(含EDTA)消化细胞,调整细胞浓度为1×105个/ml,接种于96孔板中,每孔200μL。培养箱培养24h后弃上清,得细胞悬液;将细胞悬液中分别加入体积分数为1.25%、0.83%、0.63%、0.50%的烟籽油及31μg/ml的熊果苷,空白组加等体积DMEM培养基,每孔200μL、每组设5个复孔,分别培养48、72h后,每孔加100μL MTT,4h后小心吸去上清液,然后每孔加150μL的DMSO,震荡5~10min,使用酶标仪测定490nm吸光值,根据吸光值计算细胞抑制率。
细胞抑制率计算公式为:细胞抑制率(%)=(1-OD实验组/OD空白组)×100%。
熊果苷和保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制结果如表3所示。
*与对照相比,P<0.05;结果表示为平均值±SD。
表3
由表3可知,随着样品浓度和作用时间的增加,保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制增殖作用逐渐增加。作用时间72h时,0.83%、1.25%体积分数的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制增殖作用显著优于阳性对照(P<0.05),其中1.25%体积分数的保山4号烟籽油抑制增殖效果最佳,细胞存活率为81%左右。
1.4保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制结果
以熊果苷为阳性对照,测定熊果苷及保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率。
选择对数生长期的B16黑色素瘤细胞,用胰蛋白酶溶液(含EDTA)消化细胞,调整细胞浓度为1×105个/ml,接种于12孔板中,每孔1mL。培养箱培养24h后弃上清,分别加入体积分数为1.25%、0.83%、0.63%、0.50%的烟籽油及31μg/mL的熊果苷,空白组加等体积DMEM培养基,作用48、72h后,弃上清,PBS清洗2~3次,每孔加0.3mL胰蛋白酶消化细胞,之后收集细胞,每组取20μL计数;其余细胞悬液1000rmp/min离心3min后弃上清,添加1ml、1mol/mLNaOH溶液(含10%DMSO),80℃水浴锅孵育2h,待细胞完全溶解破碎后,取200μL上清液移到96孔板中,摇床震动5min,使用酶标仪测定405nm波长吸光值,计算黑色素合成抑制率。
黑色素合成抑制率的计算公式为:黑色素合成抑制率(%)=(1-样品OD值/实验组细胞存活率/空白孔OD值)×100%。
熊果苷和保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率如表4所示。
*与对照相比,P<0.05;结果表示为平均值±SD。
表4
由表4可知,随着样品浓度和作用时间的增加,保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用逐渐增加。相反,阳性对照对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用随着作用时间的增加而降低。作用时间72h时,不同体积分数的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用均优于阳性对照,其中1.25%体积分数的保山4号烟籽油抑制效果最佳,抑制率为9%左右。
以上结果表明,相比于熊果苷,保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的增殖及B16黑色素瘤细胞内黑色素的合成具有较强抑制率。
1.5具有美白活性成分的保山4号烟籽油的应用
结合1.2中测定出的保山4号烟籽油脂肪酸含量和挥发性成分含量、1.3中的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率及1.4中的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率,可知保山4号烟籽油具有较强的美白活性能力。保山4号籽油可按需要添加于荷荷巴油中作为美白精油,或将具有美白活性成分的保山4号烟籽油直接作为美白精油,使其具有较佳的美白活性能力。
实施例2
本实施例以野生烟中的Rustica品种为例。
2.1一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法,包括如下步骤:
(1)原料选取:采集成熟的Rustica烟草蒴果,晾晒至Rustica烟草蒴果干燥;将烟草蒴果进行脱粒后风选获得饱满的Rustica烟草籽,将所述饱满烟草籽洗净后干燥至含水率降至9%,备用;
(2)将干燥后的饱满Rustica烟草籽研磨至粒度为45目后,在195℃下进行热压榨,获得热压榨后的烟籽初油;
(3)将热压榨后的烟籽初油静置18h后进行过滤,过滤去除大颗粒杂质,获得过滤后的烟籽初油;
(4)将过滤后的烟籽初油中加入酵母粉末生物吸附剂,酵母粉末与烟籽初油的质量比为1:20,置于恒温摇床中振荡吸附反应6h;
(5)待步骤(4)反应结束后,用0.32μm微孔滤膜分离过滤除去酵母粉末生物吸附剂,获得烟籽油半成品;
(6)将烟籽油半成品放入分子蒸馏仪中,分子蒸馏仪的进料速度为50mL/h,转子转速为120r/min;在85℃、100Pa条件下进行第一次分子蒸馏,冷凝后获到第一馏分为一级轻组分的烟籽油L1;将第一次蒸馏剩余物在95℃、10Pa条件下继续进行第二次分子蒸馏,冷凝得到的第二馏分为二级轻组分的烟籽油L2;将第二次蒸馏剩余物在115℃、1Pa条件下继续进行三级分子蒸馏,冷凝后获得第三馏分为三级轻组分的烟籽油L3;
(7)将烟籽油L1、烟籽油L2和烟籽油L3合并,即获得具有美白活性成分的Rustica烟籽油。
2.2将具有美白活性成分的Rustica烟籽油进行GC-MS检测,测定出烟籽油中的脂肪酸含量和挥发性成分含量。
脂肪酸含量的测定方法与挥发性成分含量的测定方法与实施例1中的一致。
具有美白活性成分的Rustica烟籽油的主要脂肪酸成分如表5所示。
表5
具有美白活性成分的Rustica烟籽油的挥发性主要成分及占比如表6所示。
表6
2.3Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制结果
以熊果苷为阳性对照,测定熊果苷及Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率,其测定方法与实施例1中的一致。
熊果苷和Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制结果如表7所示。
*与对照相比,P<0.05;结果表示为平均值±SD。
表7
由表7可知,随着样品浓度和作用时间的增加,Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制增殖作用逐渐增加。作用时间72h时,不同体积分数的Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制增殖作用均显著优于阳性对照(P<0.05),其中1.25%体积分数的Rustica烟籽油抑制增殖效果最佳,细胞存活率为62%左右。
2.4Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制结果
以熊果苷为阳性对照,测定熊果苷及Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率,其测定方法与实施例1中的一致。
熊果苷和Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率如表8所示。
*与对照相比,P<0.05;结果表示为平均值±SD。
表8
由表8可知,随着样品浓度和作用时间的增加,Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用逐渐增加。相反,阳性对照对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用随着作用时间的增加而降低。作用时间72h时,0.50%、0.63%、0.83%、1.25%体积分数的Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用均显著优于阳性对照(P<0.05),其中1.25%体积分数的Rustica烟籽油抑制效果最佳,抑制率为13%左右。
以上结果表明,相比于熊果苷,Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞的增殖及B16黑色素瘤细胞内黑色素的合成具有较强抑制率。
2.5具有美白活性成分的Rustica烟籽油的应用
结合2.2中测定出的Rustica烟籽油脂肪酸含量和挥发性成分含量、2.3中的Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率及2.4中的Rustica烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率,可知Rustica烟籽油具有较强的美白活性能力。Rustica籽油可按需要添加于荷荷巴油中作为美白精油,或将具有美白活性成分的Rustica烟籽油直接作为美白精油,具有较佳的美白活性能力。
实施例3
3.1本实施例以香料烟中的保山4号品种为例,提供一种具有美白活性成分保山4号烟籽油的另一个制备方法,包括如下步骤:
(1)原料选取:采集成熟的保山4号烟草蒴果,晾晒至保山4号烟草蒴果干燥;将烟草蒴果进行脱粒后风选获得饱满的保山4号烟草籽,将所述饱满烟草籽洗净后干燥至含水率降至8%,备用;
(2)将干燥后的饱满保山4号烟草籽研磨至粒度为45目后,在195℃下进行热压榨,获得热压榨后的烟籽初油;
(3)将热压榨后的烟籽初油静置18h后进行过滤,过滤去除大颗粒杂质,获得过滤后的烟籽初油;
(4)将过滤后的烟籽初油中加入酵母粉末生物吸附剂,酵母粉末与烟籽初油的质量比为1:20,置于恒温摇床中振荡吸附反应6h;
(5)待步骤(4)反应结束后,用0.32μm微孔滤膜分离过滤除去酵母粉末生物吸附剂,获得烟籽油半成品;
(6)将烟籽油半成品放入分子蒸馏仪中,分子蒸馏仪的进料速度为50mL/h,转子转速为120r/min;在85℃、100Pa条件下进行第一次分子蒸馏,冷凝后获到第一馏分为一级轻组分的烟籽油L1;将第一次蒸馏剩余物在95℃、10Pa条件下继续进行第二次分子蒸馏,冷凝得到的第二馏分为二级轻组分的烟籽油L2;将第二次蒸馏剩余物在115℃、1Pa条件下继续进行三级分子蒸馏,冷凝后获得第三馏分为三级轻组分的烟籽油L3;
(7)将烟籽油L1、烟籽油L2和烟籽油L3合并,即获得具有美白活性成分的保山4号烟籽油。
3.2将具有美白活性成分的保山4号烟籽油进行GC-MS检测,测定出烟籽油中的脂肪酸含量和挥发性成分含量。
3.2.1脂肪酸含量的测定方法:采用顶空固相微萃取法(HS-SPME)萃取和富集保山4号烟籽油样品,萃取纤维头型号为50/30μm DVB/CAR/PDMS。萃取纤维每次使用之前,均需在240℃的GC-MS进样口老化3min。准确称取3mL具有美白活性成分的保山4号烟籽油加入到20mL的顶空瓶中立即密封,在40℃的条件下萃取20min。萃取完成后,取出固相微萃取纤维针,然后插入GC注射口进行解吸附(3min,240℃)及后续GC-MS分析。
具体的,GC检测条件为:进样口温度240℃;载气为99.999%高纯氦气,流速为1mL/min,不分流进样;色谱柱型号为HP-5的30m×0.32mm×0.25μm石英毛细管柱,程序升温条件:柱温箱初始温度40℃,然后以1℃/min的速度增加到80℃;再以20℃/min的速率增加到250℃,保持10min;
具体的,MS检测条件为:离子源为EI源,电子能量70eV,接口温度250℃,离子源温度230℃,质量扫描范围30-540m/z,溶剂延迟3min,全扫描模式。
具有美白活性成分的保山4号烟籽油的主要脂肪酸成分如表9所示。
表9
3.2.2挥发性成分含量的测定:
检测条件:以氮气为载气,流速为2mL/min,进样量为1μL,分流比为1:29.5,进样口温度和检测器温度分别为270℃和280℃;初始柱温100℃保持3min,以20℃/min升至170℃,保持10min,再以10℃/min升至200℃,保持5min,最后以2℃/min升至230℃,保持5min;其余与脂肪酸含量的测定方法一致。
具有美白活性成分的保山4号烟籽油的挥发性主要成分及占比如表10所示。
表10
3.3保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制结果
以熊果苷为阳性对照,测定熊果苷及保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率。
B16黑色素瘤细胞在含10%胎牛血清(FBS)、1%双抗(青霉素(100U/mL)、链霉素(100mg/mL)的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)中培养;培养条件:37℃、5%CO2、95%空气条件细胞培养箱。
待B16黑色素瘤细胞生长到对数期,使用胰蛋白酶溶液(含EDTA)消化细胞,调整细胞浓度为1×105个/ml,接种于96孔板中,每孔200μL。培养箱培养24h后弃上清,得细胞悬液;将细胞悬液中分别加入体积分数为1.25%、0.83%、0.63%、0.50%的烟籽油及31μg/ml的熊果苷,空白组加等体积DMEM培养基,每孔200μL、每组设5个复孔,分别培养48、72h后,每孔加100μL MTT,4h后小心吸去上清液,然后每孔加150μL的DMSO,震荡5~10min,使用酶标仪测定490nm吸光值,根据吸光值计算细胞抑制率。
细胞抑制率计算公式为:细胞抑制率(%)=(1-OD实验组/OD空白组)×100%。
熊果苷和保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制结果如表11所示。
*与对照相比,P<0.05;结果表示为平均值±SD。
表11
由表11可知,随着样品浓度和作用时间的增加,保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制增殖作用逐渐增加。作用时间72h时,0.83%、1.25%体积分数的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制增殖作用显著优于阳性对照(P<0.05),其中1.25%体积分数的保山4号烟籽油抑制增殖效果最佳,细胞存活率为81%左右。
3.4保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制结果
以熊果苷为阳性对照,测定熊果苷及保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率。
选择对数生长期的B16黑色素瘤细胞,用胰蛋白酶溶液(含EDTA)消化细胞,调整细胞浓度为1×105个/ml,接种于12孔板中,每孔1mL。培养箱培养24h后弃上清,分别加入体积分数为1.25%、0.83%、0.63%、0.50%的烟籽油及31μg/mL的熊果苷,空白组加等体积DMEM培养基,作用48、72h后,弃上清,PBS清洗2~3次,每孔加0.3mL胰蛋白酶消化细胞,之后收集细胞,每组取20μL计数;其余细胞悬液1000rmp/min离心3min后弃上清,添加1ml、1mol/mLNaOH溶液(含10%DMSO),80℃水浴锅孵育2h,待细胞完全溶解破碎后,取200μL上清液移到96孔板中,摇床震动5min,使用酶标仪测定405nm波长吸光值,计算黑色素合成抑制率。
黑色素合成抑制率的计算公式为:黑色素合成抑制率(%)=(1-样品OD值/实验组细胞存活率/空白孔OD值)×100%。
熊果苷和保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率如表12所示。
*与对照相比,P<0.05;结果表示为平均值±SD。
表12
由表12可知,随着样品浓度和作用时间的增加,保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用逐渐增加。相反,阳性对照对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用随着作用时间的增加而降低。作用时间72h时,不同体积分数的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用均优于阳性对照,其中1.25%体积分数的保山4号烟籽油抑制效果最佳,抑制率为9%左右。
以上结果表明,相比于熊果苷,保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的增殖及B16黑色素瘤细胞内黑色素的合成具有较强抑制率。
3.5具有美白活性成分的保山4号烟籽油的应用
结合3.2中测定出的保山4号烟籽油脂肪酸含量和挥发性成分含量、3.3中的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率及3.4中的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率,可知保山4号烟籽油具有较强的美白活性能力。保山4号籽油可按需要添加于荷荷巴油中作为美白精油,或将具有美白活性成分的保山4号烟籽油直接作为美白精油,使其具有较佳的美白活性能力。
实施例4
4.1本实施例以香料烟中的保山4号品种为例,提供一种具有美白活性成分保山4号烟籽油的另一个制备方法,包括如下步骤:
(1)原料选取:采集成熟的保山4号烟草蒴果,晾晒至保山4号烟草蒴果干燥;将烟草蒴果进行脱粒后风选获得饱满的保山4号烟草籽,将所述饱满烟草籽洗净后干燥至含水率降至10%,备用;
(2)将干燥后的饱满保山4号烟草籽研磨至粒度为55目后,在205℃下进行热压榨,获得热压榨后的烟籽初油;
(3)将热压榨后的烟籽初油静置24h后进行过滤,过滤去除大颗粒杂质,获得过滤后的烟籽初油;
(4)将过滤后的烟籽初油中加入酵母粉末生物吸附剂,酵母粉末与烟籽初油的质量比为1:20,置于恒温摇床中振荡吸附反应8h;
(5)待步骤(4)反应结束后,用0.32μm微孔滤膜分离过滤除去酵母粉末生物吸附剂,获得烟籽油半成品;
(6)将烟籽油半成品放入分子蒸馏仪中,分子蒸馏仪的进料速度为50mL/h,转子转速为120r/min;在90℃、100Pa条件下进行第一次分子蒸馏,冷凝后获到第一馏分为一级轻组分的烟籽油L1;将第一次蒸馏剩余物在100℃、10Pa条件下继续进行第二次分子蒸馏,冷凝得到的第二馏分为二级轻组分的烟籽油L2;将第二次蒸馏剩余物在120℃、1Pa条件下继续进行三级分子蒸馏,冷凝后获得第三馏分为三级轻组分的烟籽油L3;
(7)将烟籽油L1、烟籽油L2和烟籽油L3合并,即获得具有美白活性成分的保山4号烟籽油。
4.2将具有美白活性成分的保山4号烟籽油进行GC-MS检测,测定出烟籽油中的脂肪酸含量和挥发性成分含量。
4.2.1脂肪酸含量的测定方法:采用顶空固相微萃取法(HS-SPME)萃取和富集保山4号烟籽油样品,萃取纤维头型号为50/30μm DVB/CAR/PDMS。萃取纤维每次使用之前,均需在240℃的GC-MS进样口老化3min。准确称取3mL具有美白活性成分的保山4号烟籽油加入到20mL的顶空瓶中立即密封,在40℃的条件下萃取20min。萃取完成后,取出固相微萃取纤维针,然后插入GC注射口进行解吸附(3min,240℃)及后续GC-MS分析。
具体的,GC检测条件为:进样口温度240℃;载气为99.999%高纯氦气,流速为1mL/min,不分流进样;色谱柱型号为HP-5的30m×0.32mm×0.25μm石英毛细管柱,程序升温条件:柱温箱初始温度40℃,然后以1℃/min的速度增加到80℃;再以20℃/min的速率增加到250℃,保持10min;
具体的,MS检测条件为:离子源为EI源,电子能量70eV,接口温度250℃,离子源温度230℃,质量扫描范围30-540m/z,溶剂延迟3min,全扫描模式。
具有美白活性成分的保山4号烟籽油的主要脂肪酸成分如表13所示。
表13
4.2.2挥发性成分含量的测定:
检测条件:以氮气为载气,流速为2mL/min,进样量为1μL,分流比为1:29.5,进样口温度和检测器温度分别为270℃和280℃;初始柱温100℃保持3min,以20℃/min升至170℃,保持10min,再以10℃/min升至200℃,保持5min,最后以2℃/min升至230℃,保持5min;其余与脂肪酸含量的测定方法一致。
具有美白活性成分的保山4号烟籽油的挥发性主要成分及占比如表14所示。
表14
4.3保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制结果
以熊果苷为阳性对照,测定熊果苷及保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率。
B16黑色素瘤细胞在含10%胎牛血清(FBS)、1%双抗(青霉素(100U/mL)、链霉素(100mg/mL)的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)中培养;培养条件:37℃、5%CO2、95%空气条件细胞培养箱。
待B16黑色素瘤细胞生长到对数期,使用胰蛋白酶溶液(含EDTA)消化细胞,调整细胞浓度为1×105个/ml,接种于96孔板中,每孔200μL。培养箱培养24h后弃上清,得细胞悬液;将细胞悬液中分别加入体积分数为1.25%、0.83%、0.63%、0.50%的烟籽油及31μg/ml的熊果苷,空白组加等体积DMEM培养基,每孔200μL、每组设5个复孔,分别培养48、72h后,每孔加100μL MTT,4h后小心吸去上清液,然后每孔加150μL的DMSO,震荡5~10min,使用酶标仪测定490nm吸光值,根据吸光值计算细胞抑制率。
细胞抑制率计算公式为:细胞抑制率(%)=(1-OD实验组/OD空白组)×100%。
熊果苷和保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制结果如表15所示。
*与对照相比,P<0.05;结果表示为平均值±SD。
表15
由表15可知,随着样品浓度和作用时间的增加,保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制增殖作用逐渐增加。作用时间72h时,0.83%、1.25%体积分数的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制增殖作用显著优于阳性对照(P<0.05),其中1.25%体积分数的保山4号烟籽油抑制增殖效果最佳,细胞存活率为81%左右。
4.4保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制结果
以熊果苷为阳性对照,测定熊果苷及保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率。
选择对数生长期的B16黑色素瘤细胞,用胰蛋白酶溶液(含EDTA)消化细胞,调整细胞浓度为1×105个/ml,接种于12孔板中,每孔1mL。培养箱培养24h后弃上清,分别加入体积分数为1.25%、0.83%、0.63%、0.50%的烟籽油及31μg/mL的熊果苷,空白组加等体积DMEM培养基,作用48、72h后,弃上清,PBS清洗2~3次,每孔加0.3mL胰蛋白酶消化细胞,之后收集细胞,每组取20μL计数;其余细胞悬液1000rmp/min离心3min后弃上清,添加1ml、1mol/mLNaOH溶液(含10%DMSO),80℃水浴锅孵育2h,待细胞完全溶解破碎后,取200μL上清液移到96孔板中,摇床震动5min,使用酶标仪测定405nm波长吸光值,计算黑色素合成抑制率。
黑色素合成抑制率的计算公式为:黑色素合成抑制率(%)=(1-样品OD值/实验组细胞存活率/空白孔OD值)×100%。
熊果苷和保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率如表16所示。
*与对照相比,P<0.05;结果表示为平均值±SD。
表16
由表16可知,随着样品浓度和作用时间的增加,保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用逐渐增加。相反,阳性对照对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用随着作用时间的增加而降低。作用时间72h时,不同体积分数的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制作用均优于阳性对照,其中1.25%体积分数的保山4号烟籽油抑制效果最佳,抑制率为9%左右。
以上结果表明,相比于熊果苷,保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的增殖及B16黑色素瘤细胞内黑色素的合成具有较强抑制率。
4.5具有美白活性成分的保山4号烟籽油的应用
结合4.2中测定出的保山4号烟籽油脂肪酸含量和挥发性成分含量、4.3中的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率及4.4中的保山4号烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率,可知保山4号烟籽油具有较强的美白活性能力。保山4号籽油可按需要添加于荷荷巴油中作为美白精油,或将具有美白活性成分的保山4号烟籽油直接作为美白精油,使其具有较佳的美白活性能力。
所公开的实施例的上述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (8)
1.一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)原料选取:采集成熟的烟草蒴果,晾晒至烟草蒴果干燥;将烟草蒴果进行脱粒后风选获得饱满烟草籽,将所述饱满烟草籽洗净后干燥至含水率降至8%~10%,备用;
(2)将步骤(1)中干燥后的饱满烟草籽经研磨后进行热压榨,获得热压榨后的烟籽初油, 所述热压榨为将饱满烟草籽研磨至粒度为45-55目后,在195-205℃下进行压榨;
(3)将步骤(2)中的烟籽初油静置18-24h后进行过滤,获得过滤后的烟籽初油;
(4)将步骤(3)中过滤后的烟籽初油中加入生物吸附剂,置于恒温摇床中振荡吸附反应6-8h, 所述生物吸附剂为酵母粉末,所述酵母粉末与烟籽初油的质量比为1:20;
(5)待步骤(4)反应结束后,用微孔滤膜分离过滤除去生物吸附剂,获得烟籽油半成品;
(6)将步骤(5)中的烟籽油半成品放入分子蒸馏仪中,在85-90℃、100 Pa条件下进行第一次分子蒸馏,冷凝后获到第一馏分为一级轻组分的烟籽油L1;将第一次蒸馏剩余物在95-100℃、10 Pa条件下继续进行第二次分子蒸馏,冷凝得到的第二馏分为二级轻组分的烟籽油L2;将第二次蒸馏剩余物在115-120℃、1 Pa条件下继续进行三级分子蒸馏,冷凝后获得第三馏分为三级轻组分的烟籽油L3;
(7)将步骤(6)中的烟籽油L1、烟籽油L2和烟籽油L3合并,即获得具有美白活性成分的烟籽油。
2.根据权利要求1中所述的具有美白活性成分烟籽油的制备方法,其特征在于:步骤(5)中所述微孔滤膜的孔径为0.32μm。
3.根据权利要求1中所述的具有美白活性成分烟籽油的制备方法,其特征在于:步骤(6)中所述分子蒸馏仪的进料速度为50mL/h,转子转速为120r/min。
4.一种烟籽油的美白活性评价方法,其特征在于:包括以下步骤:
S1:将权利要求1-3任一项所述的具有美白活性成分的烟籽油进行GC-MS检测,检测出所述具有美白活性成分烟籽油中的脂肪酸含量和挥发性成分含量;
S2:以熊果苷为阳性对照,测定熊果苷对B16黑色素瘤细胞的抑制率及对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率;
S3:测定烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率及对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率;
S4:将步骤S2中熊果苷对B16黑色素瘤细胞的抑制率与步骤S3中烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率进行对比,将步骤S2中熊果苷对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率与步骤S3中烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率进行对比,确定烟籽油的美白活性能力;
S5:结合步骤S4中确定的烟籽油美白活性能力、步骤S1中的烟籽油脂肪酸含量和挥发性成分含量,对烟籽油的美白活性能力进行综合评价。
5.根据权利要求4中所述的烟籽油的美白活性评价方法,其特征在于:步骤S1中所述脂肪酸含量的GC-MS检测条件为:
GC检测条件:进样口温度240℃;载气为99.999%高纯氦气,流速为1 mL/min,不分流进样;色谱柱型号为HP-5的30m×0.32mm×0.25μm石英毛细管柱,程序升温条件:柱温箱初始温度40℃,然后以1℃/min的速度增加到80℃;再以20℃/min的速率增加到250℃,保持10min;
MS检测条件:离子源为EI源,电子能量70eV,接口温度250℃,离子源温度230℃,质量扫描范围30-540m/z,溶剂延迟3min,全扫描模式。
6.根据权利要求4中所述的烟籽油的美白活性评价方法,其特征在于:步骤S2中所述熊果苷对B16黑色素瘤细胞的抑制率的测定方法与步骤S3中烟籽油对B16黑色素瘤细胞的抑制率的测定方法均为:将B16黑色素瘤细胞经培养后弃上清液,得细胞悬液;将细胞悬液中加入不同体积分数的烟籽油或熊果苷;培养不同时间后,加入MTT继续培养,弃上清液,加入DMSO震荡,测定490nm吸光值,根据吸光值计算细胞抑制率。
7.根据权利要求4中所述的烟籽油的美白活性评价方法,其特征在于:步骤S2中所述熊果苷对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率的测定方法与步骤S3中烟籽油对B16黑色素瘤细胞内黑色素合成的抑制率的测定方法均为:将B16黑色素瘤细胞经培养后弃上清液,获得细胞悬液;在细胞悬液中加入不同体积分数的烟籽油或熊果苷,培养不同时间后,离心后弃上清,添加含DMSO的NaOH溶液,水浴孵育,待细胞完全溶解破碎后,取上清液摇床震动,测定405nm吸光值,根据吸光值计算黑色素合成抑制率。
8.一种由权利要求1-3任一项所述的制备方法制备得到的具有美白活性成分的烟籽油在制备美白产品中的应用,其特征在于:所述具有美白活性成分的烟籽油经权利要求4-7任一项所述的美白活性评价方法评价合格后,添加于荷荷巴油中作为美白精油,或直接作为美白精油。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210172734.2A CN114774195B (zh) | 2022-02-24 | 2022-02-24 | 一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法及美白活性评价方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210172734.2A CN114774195B (zh) | 2022-02-24 | 2022-02-24 | 一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法及美白活性评价方法及应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114774195A CN114774195A (zh) | 2022-07-22 |
CN114774195B true CN114774195B (zh) | 2023-09-26 |
Family
ID=82424086
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210172734.2A Active CN114774195B (zh) | 2022-02-24 | 2022-02-24 | 一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法及美白活性评价方法及应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114774195B (zh) |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20120036516A (ko) * | 2010-10-08 | 2012-04-18 | 주식회사 바이오랜드 | 브로콜리 종자 추출물을 함유하는 피부미백용 화장료 조성물 |
CN104726197A (zh) * | 2015-03-31 | 2015-06-24 | 川渝中烟工业有限责任公司 | 一种从香料烟废弃烟籽中提取烟籽油的方法 |
CN104804873A (zh) * | 2015-03-31 | 2015-07-29 | 川渝中烟工业有限责任公司 | 一种从香料烟废弃烟籽中提取的挥发油及其制备方法和应用 |
CN112266825A (zh) * | 2020-10-29 | 2021-01-26 | 青岛科技大学 | 一种复配精油、其制备方法及其在美白抗皱化妆品中的应用 |
CN113433256A (zh) * | 2021-07-05 | 2021-09-24 | 浙江工业大学 | 一种中药中美白活性成分的筛选方法 |
CN113862075A (zh) * | 2021-08-24 | 2021-12-31 | 玉溪中烟种子有限责任公司 | 一种提高烟籽油产量的方法 |
-
2022
- 2022-02-24 CN CN202210172734.2A patent/CN114774195B/zh active Active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20120036516A (ko) * | 2010-10-08 | 2012-04-18 | 주식회사 바이오랜드 | 브로콜리 종자 추출물을 함유하는 피부미백용 화장료 조성물 |
CN104726197A (zh) * | 2015-03-31 | 2015-06-24 | 川渝中烟工业有限责任公司 | 一种从香料烟废弃烟籽中提取烟籽油的方法 |
CN104804873A (zh) * | 2015-03-31 | 2015-07-29 | 川渝中烟工业有限责任公司 | 一种从香料烟废弃烟籽中提取的挥发油及其制备方法和应用 |
CN112266825A (zh) * | 2020-10-29 | 2021-01-26 | 青岛科技大学 | 一种复配精油、其制备方法及其在美白抗皱化妆品中的应用 |
CN113433256A (zh) * | 2021-07-05 | 2021-09-24 | 浙江工业大学 | 一种中药中美白活性成分的筛选方法 |
CN113862075A (zh) * | 2021-08-24 | 2021-12-31 | 玉溪中烟种子有限责任公司 | 一种提高烟籽油产量的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114774195A (zh) | 2022-07-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105852189B (zh) | 一种利用废次烟叶制备烟草浸膏的方法 | |
CN102161611B (zh) | 一种以烟草为原料制备角鲨烯的方法 | |
CN105158383B (zh) | 一种超声辅助索氏提取法提取烟草油分的方法 | |
CN109380761A (zh) | 一种提高低等级烟叶综合品质的方法 | |
CN114015508B (zh) | 一种高氨基酸含量香料、其制备方法和应用 | |
CN108142984B (zh) | 一种利用茶源金花菌发酵制备烟叶余料香料的方法 | |
CN113616611B (zh) | 一种含发酵虫草菌粉cs-4片剂的制备方法 | |
CN114774195B (zh) | 一种具有美白活性成分烟籽油的制备方法及美白活性评价方法及应用 | |
CN102499464A (zh) | 一种烟灰棒在造纸法再造烟叶中的应用方法 | |
CN106986322A (zh) | 一种含氮碳材料的制备方法及应用 | |
CN114525167B (zh) | 一种具有抗炎活性成分烟籽油的制备方法及抗炎活性评价方法及应用 | |
CN114480017B (zh) | 一种具有抗氧化活性成分烟籽油的制备方法及抗氧化活性评价方法及应用 | |
CN114532581B (zh) | 加拿大烟叶烟气特征酸性香味成分的制备方法及其应用 | |
CN101473880B (zh) | 一种从红茶中提取分离茶红素的方法 | |
CN109180618A (zh) | 一种穿心莲内酯的脱色工艺 | |
CN115043691B (zh) | 一种高温裂解反应制备烟草新植二烯的方法 | |
CN113856639A (zh) | 一种低次烟叶固相萃取吸附剂的制备方法及其应用 | |
CN109810014A (zh) | 一种枸杞子中二咖啡酰亚精胺类化合物选择性富集方法 | |
CN111213901A (zh) | 果香型酵母、筛选方法及在香烟中的应用 | |
CN102382866A (zh) | 脑苷脂的制备、纯化及含量检测方法 | |
CN110839944A (zh) | 一种利用红茶菌发酵的酸香烟草浸膏及制备方法 | |
CN108402512A (zh) | 一种电子烟液及其制备方法 | |
CN113564210B (zh) | 一种利用甘草内生真菌发酵工业大麻的方法 | |
CN107286152A (zh) | 一种高纯度黄连素的提取方法 | |
CN114045244B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及利用解淀粉芽孢杆菌制备酱甜香烟草的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |