CN114774107A - 基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球的制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了基于双‑(二苯胺基‑苯基)‑苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球的制备方法和应用，属于分析检测领域，聚集诱导发光微球以双‑(二苯胺基‑苯基)‑苯并[c]硫代咪唑作为AIE分子并通过溶胀法制备，聚集诱导发光微球用于制备定量检测降钙素原免疫层析试纸条，免疫层析试纸条结构包括：PVC底板、硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫和吸水垫。聚集诱导发光微球标记的抗降钙素原标记抗体喷涂在结合垫；硝酸纤维素膜设有检测区(T线)和控制区(C线)，分别喷涂特异性标记抗体(包被抗体)和抗免疫球蛋白G抗体(二抗)。本发明与传统FITC荧光试纸条相比，灵敏度提高了14倍，具有操作简便、快速定量，便于携带，样品用量小等优点。
Description
技术领域
本发明属于医学分析检测技术领域，具体涉及基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球及其制备方法和应用。
背景技术
降钙素原(PCT)是降钙素(PCT)的前体物，是由116个氨基酸组成的糖蛋白，分子量约为13KD，包括59个氨基酸的N端、32肽的活性CT和21肽的下钙素。大量的研究资料表明，PCT的含量与感染所致的炎症反应综合征、脓毒症、脓毒性休克等全身感染情况的严重程度和预后具有明确的相关性。当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时，血浆中PCT的水平会明显升高。PCT反映了全身炎症反应的活跃程度，因此常被用于包括：(1)对细菌性炎症疾病及不明原因发烧的鉴别诊断；(2)对胆源性与细菌感染性胰腺炎的鉴别诊断；(3)对新生儿及儿童的细菌性与病毒性脑膜炎的鉴别诊断；(4)对急性器官排斥反应与移植后感染的鉴别诊断；(5)对伴有急性炎症性自身免疫疾病是否合并细菌感染的鉴别诊断；(6)对白细胞减少症患者细菌感染的诊断；(7)大手术后感染的常规诊断和监测；(8)监测多发性损伤病人的感染；(9)对泌尿系统感染的检测；(10)ICU病人的应用，作为系统性细菌感染及脓毒症的早期“预警”诊断以及对系统性细菌感染及脓毒症治疗过程的监测及判断预后等方面的临床监测。因此，开发一种快速，简便，廉价的快速检测方法实时定量检测PCT对于临床诊断和后期治疗确定方案具有重大意义。
免疫层析技术是一种基于抗原抗体特异性反应的检测方法，具有检测速度快、特异性好、操作简单和费用低等优点，相比于其它方法更能满足现场大批量检测的需求，因此近年来发展迅猛，被广泛应用于医学检验、食品安全和环境污染物监测等领域。传统免疫层析方法由于探针信号强度弱而致灵敏度不高，无法满足一些高灵敏的定量检测需求。荧光探针由于信号强度高，发光稳定，被广泛应用于体外诊断，生物成像等领域。聚集诱导发光微球是一种新型荧光探针，由于其聚集或固态荧光增强的性能解决了大部分传统荧光染料浓度淬灭的瓶颈问题，使得这种材料成为了近年来的热门研究方向。另外，AIE荧光纳米粒子也因其高发光、低毒性、组织穿透力强、光稳定性和生物相容性等优点，有望成为荧光标记探针的替代品。
发明内容
针对现有技术中的不足与难题，本发明旨在提供一种基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球及其制备方法和应用。
本发明通过以下技术方案予以实现：
本发明一方面提供一种基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球的制备方法，包括如下步骤：
(1)以双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑分子作为聚集诱导发光材料(AIE)溶解在四氢呋喃溶液中，为A液；
(2)将羧基表面的聚苯乙烯微球分散于十二烷基磺酸钠水溶液中，为B液；
(3)将A液加入丙酮中混匀，再一边搅拌一边加入B液，室温下磁力搅拌10-20h蒸发丙酮至少量，离心得到产物用超纯水洗涤，获得基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球悬浮分散于超纯水中。
进一步地，所述步骤(2)中的聚苯乙烯微球粒径为250-350nm；所述步骤(1)中AIE的分子结构式为：
进一步地，B液中聚苯乙烯微球与A液中AIE的质量比为1∶0.5-1.5，B液与丙酮的体积比为1∶3。
本发明还提供了上述方法制备的基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球的应用，所述聚集诱导发光微球用于制备定量检测降钙素原免疫层析试纸条。
进一步地，免疫层析试纸条包括PVC底板、硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫和吸水垫，所述结合垫上含有基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球制备成的探针。
进一步地，探针的制备步骤具体为：向PB缓冲液中加入基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球，再加入标记抗体，静电吸附15min后加入EDC(对乙基-N，N-二甲基丙基碳二亚胺)活化微球表面羧基，之后加入蛋白封闭剂封闭微球表面未与抗体结合的羧基，孵育后离心，弃去上清液，沉淀用复溶液复溶制备成探针；制备的探针溶液喷涂到结合垫上，干燥备用。
进一步地，PB缓冲液的pH为5.5-8.0；加入标记抗体后的抗体终浓度为1～100μg/mL；加入EDC后其终浓度为0.01～1mg/mL；加入封闭剂后封闭剂的终浓度为1.5～3％，且所述封闭剂选自酪蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、脱脂牛奶中的任意一种。
进一步地，离心的转速为12000-14000rpm，时间为10～30min；沉淀用AIE复溶液复溶为起始体积的1倍至1/10倍即可制成探针，于4℃保存备用。
进一步地，所述硝酸纤维素膜设有检测区和控制区，所述检测区和控制区内分别设有荧光条带，所述检测区的荧光条带上设有检测线，所述检测线使用包被抗体，所述控制区的荧光条带上设有控制线，所述控制线上使用二抗；所述硝酸纤维素膜的制备步骤如下：
①使用0.01～0.5M pH 6.0～8.0的PB溶液分别稀释包被抗体以及二抗的浓度为0.01～10.0mg/mL；
②将调整浓度后的包被抗体喷涂于硝酸纤维素膜上部，作为检测线，将二抗喷涂于硝酸纤维素膜下部，作为控制线；其中，检测线和控制线之间间隔一定距离，二者的喷膜量一致，均为0.25～0.74μL/cm；
③将喷涂有检测线和控制线的硝酸纤维素膜于37℃过夜烘干处理后，在室温干燥的环境下保存备用。
进一步地，免疫层析试纸条检测降钙素的过程具体为：经过处理后的检测样本加样到所述免疫层析试纸条上，加体积为50～200μL，反应时间为5～30min，通过读取试纸条的荧光数据后由内置标准曲计算检测样本浓度来实现定量检测，或者通过使用不同波长的手电筒对试纸条照射后观察检测线和控制线有无荧光来实现对检测样本的定性判断。
与现有技术相比，本发明将具有高发光强度的AIE纳米材料作为荧光标记物制备信号探针，建立高灵敏的聚集诱导发光荧光免疫分析方法，该方法操作简便，灵敏度高，为快速准确定量检测血清中降钙素原含量提供了可靠的检测工具。
附图说明
图1为本发明的免疫层析试纸条结构示意图；
图2为本发明夹心法荧光免疫层析试纸条检测原理图；
图3为本发明所合成的荧光聚苯乙烯纳米微球SEM图
图4为PCT标准曲线图。
图示说明：1-PVC底板，2-样品垫，3-结合垫，4-硝酸纤维膜，5-检测区，6-控制区，7-吸水垫，8-标记探针，9-包被抗体，10-二抗。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明作进一步地说明。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。
除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
以下实施例中所用的试验试剂耗材，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1聚集诱导发光微球的制备
将双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑分子作为聚集诱导发光材料(AIE)溶解在四氢呋喃溶液中，为A液，将羧基表面的聚苯乙烯微球分散于十二烷基磺酸钠水溶液中，为B液，首先将A液加入丙酮中混匀，再一边搅拌一边加入B液，室温下磁力搅拌10-20h蒸发丙酮至少量，离心得到产物用超纯水洗涤，获得基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的荧光聚苯乙烯纳米微球(即聚集诱导发光微球，其SEM图如图3所示)悬浮分散于超纯水中备用。
实施例1免疫层析试纸条的制备
1、硝酸纤维素膜的制备
PCT包被抗体包被到硝酸纤维素膜上：用PB 6.5稀释PCT包被抗体的浓度为1.8mg/mL，所得的溶液在膜上喷涂作为检测线；稀释二抗的浓度为1mg/mL，所得的溶液在膜上喷涂作为控制线，两线的喷量均为0.74μL/cm，检测线与膜顶边间隔10mm，两线中间间隔5mm，37℃烘干12小时，放置于干燥柜中保存备用。
2.结合垫的制备
向500μL PB 6.5缓冲液中加入10μg荧光聚苯乙烯纳米微球后再加入2μg标记抗体，静电吸附15min后加入4ug EDC活化微球表面羧基，孵育30min，重复3次后加入1.5％酪蛋白封闭微球表面未与抗体结合的羧基，孵育1h后12000r离心15min，弃去上清液，沉淀用100μL AIE复溶液复溶，制备成探针备用；按照3μL/cm体积喷涂到结合上，真空干燥2h，备用。
3.组装试纸条：
将PVC底板1、硝酸纤维素膜4、结合垫3、样品垫2、吸水垫7按照试纸条结构示意图1依次粘贴，即PVC底板中间区域粘贴喷涂有包被抗原和二抗的硝酸纤维素膜，下端搭接粘贴喷涂有探针的结合垫，结合垫上再粘贴样本垫，最后在上端搭接粘贴上吸水垫，组装好后用切刀裁切390mm的试纸条，装入塑料卡壳中，压紧后装入铝箔袋，加入干燥剂后，封口保存，室温环境保质期为12个月。
制备的免疫层析试纸条结构如图1所示，PVC底板1、硝酸纤维素膜4(NC膜)、结合垫3、样品垫2和吸水垫7，PVC底板1上从左至右依次搭接有样品垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4、吸水垫7；结合垫3含有荧光聚苯乙烯纳米微球标记的抗降钙素原的标记抗体8；荧光聚苯乙烯纳米微球通过溶胀法将AIE渗透入聚苯乙烯微球内部；硝酸纤维素膜4设有检测区和控制区，检测区和控制区内分别设有荧光条带，所述检测区5的荧光条带上设有检测线5，所述检测线5使用包被抗体9；所述控制区的荧光条带上设有控制线6，控制线6上设使用二抗10。
利用上述制备的免疫层析试纸条进行检测，检测原理如图2所示，当样品不存在大分子分析物时，结合垫3上的探针随着样本涌动至控制区，形成单一明亮的信号条带；当样本中存在检测分析物时，结合垫3上的探针捕获目标分析物，涌动至检测线5时被抗体捕获，剩余探针继续涌动至控制区被C线(控制线6)捕获，因而形成明亮的双线信号条带；样本中分析物的浓度可以根据检测线信号条带的强弱定量判读。
4.定量检测血清中的PCT
(1)标准曲线绘制：
阴性基质中加标，标准曲线中PCT浓度为：0、0.24、0.48、0.97、1.95、3.91、7.81、15.62、31.25ng/mL，计算R2为0.9906，线性回归方程式为：y＝0.0675x+0.1161。PCT标准曲线如图4所示。
(2)定量检测血清中的PCT
向试纸条加样孔中加入70μL稀释1000倍后的血清样本，反应15min后将试纸条插入荧光读取仪的检测窗口，显示器上显示检测线和控制线荧光数值，根据仪器中已经录入的标准曲线，即可计算出样本中PCT的含量，实现阳性样本的定量检测。
以上所述仅表达了本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形、改进及替代，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)以双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑分子作为聚集诱导发光材料(AIE)溶解在四氢呋喃溶液中，为A液；
(2)将羧基表面的聚苯乙烯微球分散于十二烷基磺酸钠水溶液中，为B液；
(3)将A液加入丙酮中混匀，再一边搅拌一边加入B液，室温下磁力搅拌10-20h蒸发丙酮至少量，离心得到产物用超纯水洗涤，获得基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球悬浮分散于超纯水中。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的聚苯乙烯微球粒径为250-350nm；所述步骤(1)中AIE的分子结构式为：
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：B液中聚苯乙烯微球与A液中AIE的质量比为1∶0.5-1.5，B液与丙酮的体积比为1∶3。
4.如权利要求1至3任一方法制备的基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球的应用，其特征在于：所述聚集诱导发光微球用于制备定量检测降钙素原免疫层析试纸条。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述免疫层析试纸条包括PVC底板、硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫和吸水垫，所述结合垫上喷涂有基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球制备成的探针。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述探针的制备步骤具体为：向PB缓冲液中加入基于双-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集诱导发光微球，再加入标记抗体，静电吸附15min后加入EDC活化微球表面羧基，之后加入蛋白封闭剂封闭微球表面未与抗体结合的羧基，孵育后离心，弃去上清液，沉淀用复溶液复溶制备成探针；制备的探针溶液喷涂到结合垫上，干燥备用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：PB缓冲液的pH为5.5-8.0；加入标记抗体后的抗体终浓度为1～100μg/mL；加入EDC后其终浓度为0.01～1mg/mL；加入封闭剂后封闭剂的终浓度为1.5～3％，且所述封闭剂选自酪蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、脱脂牛奶中的任意一种。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：离心的转速为12000-14000rpm，时间为10～30min；沉淀用AIE复溶液复溶为起始体积的1倍至1/10倍。
9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述硝酸纤维素膜设有检测区和控制区，所述检测区和控制区内分别设有荧光条带，所述检测区的荧光条带上设有检测线，所述检测线使用包被抗体，所述控制区的荧光条带上设有控制线，所述控制线上使用二抗；所述硝酸纤维素膜的制备步骤如下：
①使用0.01～0.5M pH 6.0～8.0的PB溶液分别稀释包被抗体以及二抗的浓度为0.01～10.0mg/mL；
②将调整浓度后的包被抗体喷涂于硝酸纤维素膜上部，作为检测线，将二抗喷涂于硝酸纤维素膜下部，作为控制线；其中，检测线和控制线之间间隔一定距离，二者的喷膜量一致，均为0.25～0.74μL/cm；
③将喷涂有检测线和控制线的硝酸纤维素膜于37℃过夜烘干处理后，在室温干燥的环境下保存备用。
10.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述免疫层析试纸条检测降钙素的过程具体为：经过处理后的检测样本加样到所述免疫层析试纸条上，加体积为50～200μL，反应时间为5～30min，通过读取试纸条的荧光数据后由内置标准曲计算检测样本浓度来实现定量检测，或者通过使用不同波长的手电筒对试纸条照射后观察检测线和控制线有无荧光来实现对检测样本的定性判断。
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Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150194555A1 (en) * | 2014-01-03 | 2015-07-09 | Nitto Denko Corporation | Packaged luminescent solar concentrator panel for providing high efficiency low cost solar harvesting |
| CN107607710A (zh) * | 2017-07-24 | 2018-01-19 | 深圳清华大学研究院 | 基于近红外ii区荧光微球的免疫荧光层析检测试纸条、检测系统以及检测方法 |
| CN109633144A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-04-16 | 南昌大学 | 一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条 |
| CN110780067A (zh) * | 2019-11-04 | 2020-02-11 | 南京欧凯生物科技有限公司 | 一种检测降钙素原的荧光免疫层析试纸及其制备方法 |
| CN110982512A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-04-10 | 复旦大学 | 多种近红外ii区荧光染料共掺荧光微球及其制备和应用 |
| CN113321758A (zh) * | 2021-03-08 | 2021-08-31 | 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院 | 一种羧基修饰的聚集诱导发光聚合物微球及其制备方法与应用 |
-
2022
- 2022-03-11 CN CN202210243910.7A patent/CN114774107A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150194555A1 (en) * | 2014-01-03 | 2015-07-09 | Nitto Denko Corporation | Packaged luminescent solar concentrator panel for providing high efficiency low cost solar harvesting |
| CN107607710A (zh) * | 2017-07-24 | 2018-01-19 | 深圳清华大学研究院 | 基于近红外ii区荧光微球的免疫荧光层析检测试纸条、检测系统以及检测方法 |
| CN109633144A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-04-16 | 南昌大学 | 一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条 |
| CN110982512A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-04-10 | 复旦大学 | 多种近红外ii区荧光染料共掺荧光微球及其制备和应用 |
| CN110780067A (zh) * | 2019-11-04 | 2020-02-11 | 南京欧凯生物科技有限公司 | 一种检测降钙素原的荧光免疫层析试纸及其制备方法 |
| CN113321758A (zh) * | 2021-03-08 | 2021-08-31 | 广东省大湾区华南理工大学聚集诱导发光高等研究院 | 一种羧基修饰的聚集诱导发光聚合物微球及其制备方法与应用 |
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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