CN114755217A - 一种磁珠稀释液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种磁珠稀释液及其制备方法,所述磁珠稀释液包括以下组分:Proclin‑300、BND‑10以及chaps。本发明提供的磁珠稀释液,能够提升化学发光性能的同时,降低本底值,提高试剂灵敏度和线性范围,同时还能够保证试剂中磁珠的稳定性,延长磁珠储存有效期。
Description
技术领域
本发明涉及磁珠工作液技术领域,具体涉及一种磁珠稀释液及其制备方法。
背景技术
近年来,随着国内企业技术进步和化学发光生产规模扩大,化学发光免疫分析呈现出逐步取代酶联免疫分析的趋势,目前国内免疫诊断领域中化学发光的市场份额已超过50%。未来化学免疫分析技术将持续逐步取代酶联免疫。酶促化学发光免疫分析(CLEAIA)是用参与催化某一化学发光反应的酶来标记抗原或抗体,与待测样本中相应的抗体或抗原发生免疫反应后,以磁珠做为固相载体与抗体结合,形成固相包被抗体—待测抗原—酶标记抗体复合物后,经洗涤,加入底物(发光剂),酶催化和分解底物发光,通过检测化学发光反应的发光强度,计算被检物的浓度。目前常用的标记酶有碱性磷酸酶(ALP)和赖根过氧化物酶(HRP)。然而磁珠的存储是酶促化学发光中的一大难点,磁珠的性能往往能影响整个试剂的稳定性,从而对试剂的性能造成一定的影响。而不同的试剂的检测的对象不同,不同的抗体、抗原对磁珠、磁珠保存液的要求也有一些差异,其磁珠稀释液中防腐剂的选择尤为重要,如何制备出一种性能优异的磁珠稀释液是现在亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明的主要目的是提出一种磁珠稀释液及其制备方法,旨在提出一种磁珠稀释液,能够在提升化学发光性能的同时,降低了本底值,提高试剂灵敏度,线性范围,此外还能够保证试剂磁珠的稳定性,延长磁珠储存有效期。
为实现上述目的,本发明提出的一种磁珠稀释液包括以下组分:Proclin-300、BND-10以及chaps。
可选地,在所述磁珠稀释液中,所述Proclin-300体积百分比为0.045~0.055%、所述BND-10的体积百分比为0.05~0.15%、所述chaps的浓度为6~10mmol/L。
可选地,所述磁珠稀释液还包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、吐温-20、牛血清蛋白和超纯水。
可选地,所述磁珠稀释液中,每100ml的所述超纯水对应添加有50~100mmol的所述三羟甲基氨基甲烷、0.7~10g的所述氯化钠、5~15mmol的所述乙二胺四乙酸二钠、0.05~0.15g的所述吐温-20、1.5~3g的所述牛血清蛋白。
可选地,所述磁珠稀释液中,每100ml的所述超纯水对应添加有50mmol的所述三羟甲基氨基甲烷、0.9%的所述氯化钠、5mmol/L的所述乙二胺四乙酸二钠、0.1%的所述吐温-20、0.05%的所述Proclin-300、0.1%的所述BND-10、10mmol/L的所述chaps、1.5%的所述牛血清蛋白。
可选地,所述磁珠稀释液的PH值为7.4~7.6。
此外,本发明还提供了一种磁珠稀释液的制备方法,包括以下步骤:
将三羟甲基氨基甲烷、氯化钠和乙二胺四乙酸二钠添加到超纯水中,搅拌使溶解,获得第一混合液;
将吐温-20,Proclin-300,BND-10,chaps加入第一混合液中,搅拌均匀后,调节PH值至7.4~7.6之间,获得第二混合溶液;
将牛血清蛋白加入第二混合溶液中,搅拌均匀后过滤,获得磁珠稀释液。
本发明提供的磁珠稀释液,能够提升化学发光性能的同时,降低本底值,提高试剂灵敏度和线性范围,同时还能够保证试剂中磁珠的稳定性,延长磁珠储存有效期,其中,添加Proclin-300、BND-10与chaps到磁珠稀释液中,能够抑制磁珠稀释液中饭细菌的增长,避免磁珠稀释液被污染,进一步地,通过将Proclin-300、BND-10和chaps三者的结合,使得磁珠稀释液的本底值更低,发光值更加高,性能更好,稳定性更加好,成本更加低,更加便于运输和存储。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。
图1为本发明提供的实施例1制备的磁珠稀释液的菌落数量;
图2为本发明提供的对比例制备的磁珠稀释液的菌落数量;
图3为本发明提供的磁珠稀释液的制备方法的流程示意图。
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例,参照附图做进一步说明。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外,全文中出现的“和/或”的含义,包括三个并列的方案,以“A和/或B”为例,包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外,各个实施例之间的技术方案可以相互结合,但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础,当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在,也不在本发明要求的保护范围之内。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
近年来,随着国内企业技术进步和化学发光生产规模扩大,化学发光免疫分析呈现出逐步取代酶联免疫分析的趋势,目前国内免疫诊断领域中化学发光的市场份额已超过50%。未来化学免疫分析技术将持续逐步取代酶联免疫。酶促化学发光免疫分析(CLEAIA)是用参与催化某一化学发光反应的酶来标记抗原或抗体,与待测样本中相应的抗体或抗原发生免疫反应后,以磁珠做为固相载体与抗体结合,形成固相包被抗体—待测抗原—酶标记抗体复合物后,经洗涤,加入底物(发光剂),酶催化和分解底物发光,通过检测化学发光反应的发光强度,计算被检物的浓度。目前常用的标记酶有碱性磷酸酶(ALP)和赖根过氧化物酶(HRP)。然而磁珠的存储是酶促化学发光中的一大难点,磁珠的性能往往能影响整个试剂的稳定性,从而对试剂的性能造成一定的影响。而不同的试剂的检测的对象不同,不同的抗体、抗原对磁珠、磁珠保存液的要求也有一些差异,其磁珠稀释液中防腐剂的选择尤为重要,如何制备出一种性能优异的磁珠稀释液是现在亟待解决的技术问题。
鉴于此,本发明提供一种磁珠稀释液,通过该制备方法制备出来的磁珠稀释液性能优异,能够提升化学发光性能的同时,降低本底值,提高试剂灵敏度;所述磁珠稀释液,包括以下组分:
Proclin-300、BND-10以及chaps。
本发明提供的磁珠稀释液,能够提升化学发光性能的同时,降低本底值,提高试剂灵敏度和线性范围,同时还能够保证试剂中磁珠的稳定性,延长磁珠储存有效期,其中,添加Proclin-300、BND-10与chaps到磁珠稀释液中,能够抑制磁珠稀释液中饭细菌的增长,避免磁珠稀释液被污染,进一步地,通过将Proclin-300、BND-10和chaps三者的结合,使得磁珠稀释液的本底值更低,发光值更加高,性能更好,稳定性更加好,成本更加低,更加便于运输和存储。
更进一步地,将Proclin-300、BND-10与chaps三者联用,能够将工作浓度下调至万分之一,对于蛋白含量很高的液体都有优异的防腐性能。在本实施例中,在磁珠稀释液中,Proclin-300体积百分比为0.045~0.055%、BND-10的体积百分比为0.05~0.15%、chaps的浓度为6~10mmol/L。需要说明的是,在上述范围内,制备的所述磁珠稀释液的性能最佳,能够在提升所述磁珠稀释液的化学发光性能的同时,降低了本底值,提高试剂灵敏度和线性范围,此外还能够保证所述磁珠稀释液中磁珠的稳定性,延长磁珠储存有效期。
需要说明的是,所述磁珠稀释液还包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、吐温-20、牛血清蛋白和超纯水。
其中,通过加入牛血清蛋白,保护磁珠上的结合物,牛血清蛋白可模拟血清中的各种大蛋白或酶类,这些生物分子可在磁珠表面快速地形成一层蛋白冠,形成的蛋白冠一方面可降低免疫磁珠之间的相互吸引以及接触,降低抗体-抗体或抗体-牛血清蛋白之间的非特异性结合,保持磁珠稳定性。
通过加入乙二胺四乙酸二钠,增加磁珠悬浮液的稳定性,确保制备的磁珠悬浮液的稳定性延长磁珠储存有效期。
加入氯化钠和乙二胺四乙酸二钠的目的是为了作为缓冲溶液,用于模拟人体的渗透压,提高制备过程的稳定性,促进抗原-抗体的特异性结合,从而提高检测的灵敏度及准确度。
选择超纯水的目的是因为超纯水经过特殊处理之后,超纯水中只含有水分子,不存在其他的细菌病毒等有机物,也没有人体所需的矿物质微量元素,能够降低污染源的污染,避免细菌生长,确保制备出来的磁珠稀释液的性能。
进一步地,三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、吐温-20和牛血清蛋白的用量也会影响到制备的磁珠稀释液的性能,具体地,在本实施例中,每100ml的超纯水对应添加有50~100mmol的三羟甲基氨基甲烷、0.7~10g的氯化钠、5~15mmol的乙二胺四乙酸二钠、0.05~0.15g的吐温-20、1.5~3g的牛血清蛋白。
更进一步地,作为本实施中的一个优选实施例,磁珠稀释液中,每100ml的超纯水对应添加有50mmol的三羟甲基氨基甲烷、0.9%的氯化钠、5mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、0.1%的吐温-20、0.05%的Proclin-300、0.1%的BND-10、10mmol/L的chaps、1.5%的牛血清蛋白。需要说明的是,在上述范围内,制备的所述磁珠稀释液的性能最佳,能够在提升所述磁珠稀释液的化学发光性能的同时,降低了本底值,提高试剂灵敏度和线性范围,此外还能够保证所述磁珠稀释液中磁珠的稳定性,延长磁珠储存有效期。
进一步地,磁珠稀释液的PH值为7.4~7.6。在上述PH区间内,最适合抗原-抗体的特异性结合反应。
需要说明的是,本发明制备的磁珠稀释液中不含酶以及对抗体活性有影响的成分,可以应用于各种报备标记物的防腐液中,适应范围广。
此外本发明还提供了一种磁珠稀释液的制备方法,包括以下步骤:
步骤S10、将三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、乙二胺四乙酸二钠和牛血清蛋白添加到超纯水中,搅拌使溶解,获得第一混合液。
步骤S20、将吐温-20,Proclin-300、BND-10和chaps加入第一混合液中,搅拌均匀后,调节PH值至7.4~7.6之间,获得第二混合溶液;
步骤S30、将牛血清蛋白加入第二混合溶液中,搅拌均匀后过滤,获得磁珠稀释液。
以下结合具体实施例和附图对本发明的技术方案作进一步详细说明,应当理解,以下实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例1
(1)将0.6g的三羟甲基氨基甲烷、0.9g的氯化钠和0.168g的乙二胺四乙酸二钠加入100ml的超纯水中,搅拌直至所有物质完全溶解在超纯水中,获得第一混合液;
(2)将0.1ml的吐温-20、0.05ml的Proclin-300、0.1ml的BND-10和0.61488g的chaps加入第一混合液中,搅拌均匀直至chaps安全溶解后,调节PH值至7.5,获得第二混合液;
(3)将1.5g的牛血清蛋白加入第二混合液中,搅拌均匀直至牛血清蛋白完全溶解,过滤后获得磁珠稀释液。
对比例
(1)将0.6g的三羟甲基氨基甲烷、0.9g的氯化钠和0.168g的乙二胺四乙酸二钠加入100ml的超纯水中,搅拌直至所有物质完全溶解在超纯水中,获得第一混合液;
(2)将0.1ml的吐温-20和0.1ml的Proclin-300加入第一混合液中,搅拌均匀,获得第二混合液;
(3)将1.5g的牛血清蛋白加入第二混合液中,搅拌均匀直至牛血清蛋白完全溶解,过滤后获得磁珠稀释液。
性能测试
实施例2发光值的检测
将上述实施例1制备的磁珠稀释液与包被有IL-6抗体的甲苯磺酰基化磁珠配制成磁珠工作液,再将上述对比例制备的磁珠稀释液与包被有IL-6抗体的甲苯磺酰基化磁珠配制成磁珠工作液,然后将实施例1和对比例制备的磁珠工作液搭配深圳天辰医疗科技有限公司生产的白介素6(IL-6)测定试剂盒(化学发光法),使用深圳天辰医疗科技有限公司生产的CL2000全自动化学发光测定仪测试不同浓度的白介素6校准品的发光值,表1为实施例1发光值测试结果、表2为对比例发光值测试结果、表3为信号值偏差。
表1实施例1发光值测试结果
表2对比例发光值测试结果
表3信号值偏差
由表1、表2和表3可知,本发明实施例1制备的磁珠稀释液与对比例制备的磁珠稀释液相比较来说,本发明制备的磁珠稀释液的本底值更加低、发光性能更加好、信号值略高于对比例制备的磁珠稀释液、信噪比也更加高。
实施例3稳定性测试
将上述实施例1中制备的磁珠稀释液与甲苯磺酰基化磁珠配制成磁珠工作液,将工作液分成5等份,取其中的四份放置在37℃的烘箱内,分别在37℃加速1天、4天、7天和11天,在第11天时取出烘箱;取最后一份放在在2~8℃的冰箱中,然后使用深圳天辰医疗科技有限公司生产的CL2000全自动化学发光测定仪测试三份标准品,表4为测试结果。
表4测试结果
由表4可知本发明实施例1制备的磁珠稀释液在实验过程中在37℃存放11天与2-8℃存放的信号值差异不大,稳定性好。
实施例4细菌培养测试
将上述实施例1制备的磁珠稀释液与上述对比例制备的磁珠稀释液分别在2~8℃的条件下放置3个月,分别取样品做细胞培养,观察菌落数量,图1为实施例1制备的磁珠稀释液的菌落示意图,图2为对比例制备的磁珠稀释液的菌落示意图。
由图1和图2可知,本发明实施例1制备的磁珠稀释液的菌落数量明显少于对比例制备的磁珠稀释液的菌落数量;由此可知,本发明制备的磁珠稀释液具有良好的抑菌效果。
以上仅为本发明的优选实施例,并非因此限制本发明的专利范围,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (7)
1.一种磁珠稀释液,其特征在于,包括以下组分:Proclin-300、BND-10以及chaps。
2.如权利要求1所述的磁珠稀释液,其特征在于,在所述磁珠稀释液中,所述Proclin-300体积百分比为0.045~0.055%、所述BND-10的体积百分比为0.05~0.15%、所述chaps的浓度为6~10mmol/L。
3.如权利要求1所述的磁珠稀释液,其特征在于,所述磁珠稀释液还包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、乙二胺四乙酸二钠、吐温-20、牛血清蛋白和超纯水。
4.如权利要求3所述的磁珠稀释液,其特征在于,所述磁珠稀释液中,每100ml的所述超纯水对应添加有50~100mmol的所述三羟甲基氨基甲烷、0.7~10g的所述氯化钠、5~15mmol的所述乙二胺四乙酸二钠、0.05~0.15ml的所述吐温-20、1.5~3g的所述牛血清蛋白。
5.如权利要求4所述的磁珠稀释液,其特征在于,所述磁珠稀释液中,每100ml的所述超纯水对应添加有50mmol的所述三羟甲基氨基甲烷、0.9%的所述氯化钠、5mmol/L的所述乙二胺四乙酸二钠、0.1%的所述吐温-20、0.05%的所述Proclin-300、0.1%的所述BND-10、10mmol/L的所述chaps、1.5%的所述牛血清蛋白。
6.如权利要求1所述的磁珠稀释液,其特征在于,所述磁珠稀释液的PH值为7.4~7.6。
7.一种磁珠稀释液的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
将三羟甲基氨基甲烷、氯化钠和乙二胺四乙酸二钠添加到超纯水中,搅拌使溶解,获得第一混合液;
将吐温-20,Proclin-300,BND-10,chaps加入第一混合液中,搅拌均匀后,调节PH值至7.4~7.6之间,获得第二混合溶液;
将牛血清蛋白加入第二混合溶液中,搅拌均匀后过滤,获得磁珠稀释液。
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CN202210322242.7A CN114755217A (zh) | 2022-03-29 | 2022-03-29 | 一种磁珠稀释液及其制备方法 |
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