CN1147297C

CN1147297C - 新型七叶亭衍生物及医药组合物

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Publication number: CN1147297C
Application number: CNB941022374A
Authority: CN
Inventors: �ɱ�Т; 渡边孝寿; ��һ; 新村浩一; 梅川清则
Original assignee: Kureha Corp
Current assignee: Kureha Corp
Priority date: 1993-03-02
Filing date: 1994-03-02
Publication date: 2004-04-28
Anticipated expiration: 2014-03-02
Also published as: KR0135723B1; EP0614896A1; NO940710L; EP0614896B1; AU660870B2; KR940021058A; CA2116617C; DE69415570T2; NO940710D0; CA2116617A1; CN1101259A; US5455268A; JPH06312925A; AU5643894A; DE69415570D1

Abstract

含有通式(I)所示化合物的医药组合物。在通式(I)中，R¹和R²各自独立地是氢原子、三甲基乙酰基、辛酰基、月桂酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、亚油酰基、二十二碳六烯酰基或苯甲酰基，R³是氢原子或甲基。该化合物是一种新型化合物。

Description

新型七叶亭衍生物及医药组合物

本发明涉及新型七叶亭(aesculetin)衍生物以及医药组合物，特别是涉及软骨保护剂。

在关节症中，有慢性关节风湿病，风湿热或变形性关节病等。其中以慢性关节风湿病及变形性关节病的患者居多，被认为是主要的关节病。在变形性关节病中，有先天性的或二次性的变形性关节病，和由于老化以致关节软骨退化变性而引起的一次性变形性关节病。一次性的变形性关节病，近年来随着老龄人口的增多而增加。

慢性关节风湿病和变形性关节病，其病因和病态有很大的差异。然而，它们的共通点是最终都会由于软骨破坏而使关节功能受到损害。

针对风湿性疾患、例如慢性关节风湿病、风湿热、全身性红斑狼疮或变形性关节病的第一选择药物是镇痛消炎剂，例如阿斯匹灵或消炎痛(吲哚美辛)。作为慢性关节病的治疗药，还可使用金制剂(例如Shiozol)、免疫调节剂、甾类化合物试剂，或D-青霉胺等。

然而，以前的上述镇痛消炎药剂对关节软骨的破坏没有效果，在使用软骨细胞进行的实验中，相反还常有恶化的情况产生。而且，也没有发现上述慢性关节病治疗药对关节软骨的破坏有抑制作用。

另一方面，已知七叶亭和4一甲基七叶亭具有降低胆甾醇、补强血管以及抗氧化作用(特公昭42-16626号公报)。还已知4一甲基七叶亭的碳原子数为6-25的羧酸二乙酯，特别是辛酸二乙酯、月桂酸二乙酯以及棕榈酸二乙酯对治疗皮肤病具有有效的消炎作用(FR2276819)。然而却不知道这些七叶亭和七叶亭衍生物对软骨破坏具有抑制作用。

本发明者们发现了七叶亭化合物，即七叶亭及七叶亭衍生物可以大大地抑制构成软骨基质的葡糖胺聚糖(以下称为GAG)减少，作为抑制关节软骨破坏的软骨保护剂是有效的，并完成了本发明。而且，具有上述活性的七叶亭衍生物的一部分也是新型化合物。

因此，本发明的目的在于提供一种作为有效成分含有七叶亭化合物的医药组合物，特别是软骨保护剂。

本发明的另一目的在于提供一种新型的七叶亭衍生物。

本发明涉及含有通式(I)所示化合物(以下称为本化合物(I))的医药组合物，特别是软骨保护剂。

(式中，R¹和R²各自独立地为氢原子，碳原子数为2-25的饱和或不饱和脂肪族酰基或苯酰基，R³是氢原子或碳原子数为1-4的低级烷基。)

另外，本发明还涉及通式(I′)表示的化合物或含该化合物的医药组合物。

其中R²¹和R²²分别独立地为氢原子、碳原子数2～25的饱和或不饱和的脂肪族酰基或苯甲酰基，R²³是氢原子或碳原子数1～4的低级烷基，条件是当R²³是氢原子且R²¹和R²²相同时，R²¹和R²²既不是氢原子也不是乙酰基，或当R²³是甲基且R²¹和R²²相同时，R²¹和R²²既不是氢原子也不是碳原子数6～25的饱和或不饱和脂肪族酰基。

本发明还涉及通式(II)表示的化合物(以下称为本化合物(II))。

(式中，R¹¹和R¹²各自独立地是氢原子，三甲基乙酰基、辛酰基、月桂酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、亚油酰基、二十二碳六烯酰基或苯甲酰基，R¹³是氢原子或甲基。)

作为新型化合物的本化合物(II)，由于被包含在具有软骨保护作用的本化合物(I)中，因而有关本化合物(I)的以下说明，在本文所述情况下，也适合于本化合物(II)。

本化合物(I)中，R¹和R²的优选例是氢原子、乙酰基、三甲基乙酰基、辛酰基、月桂酰基、棕桐酰基、硬脂酰基、亚油酰基、二十二碳六烯酰基和苯甲酰基；更优选的例子是本化合物(II)中的R¹¹和R¹²为氢原子、三甲基乙酰基、辛酰基、月桂酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、亚油酰基、二十二碳六烯酰基和苯甲酰基；本化合物(I)及(II)中更优选的例子是氢原子、三甲基乙酰基、硬脂酰基及苯酰基。R³的优选例子是氢原子和碳原子数为1-4的低级烷基，而更好的例子是本化合物(II)中的R¹³是氢原子或甲基。

作为本化合物(I)及(II)，例如可例举以下化合物。

七叶亭，

4-甲基七叶亭，

七叶亭6，7-双(乙酸酯)，

4-甲基七叶亭6，7-双(乙酸酯)，

七叶亭6，7-双(新戊酸酯)，

4-甲基七叶亭6，7-双(新戊酸酯)，

七叶亭6-单(新戊酸酯)，

4-甲基七叶亭6-单(新戊酸酯)，

七叶亭7-单(新戊酸酯)，

4-甲基七叶亭7-单(新戊酸酯)，

七叶亭6，7-双(辛酸酯)，

4-甲基七叶亭6，7-双(辛酸酯)，

七叶亭6，7-双(月桂酸酯)，

4-甲基七叶亭6，7-双(月桂酸酯)，

七叶亭6，7-双(棕榈酸酯)，

4-甲基七叶亭6，7-双(棕榈酸酯)，

七叶亭6，7-双(硬脂酸酯)

4-甲基七叶亭6，7-双(硬脂酸酯)

七叶亭6，7-双(亚油酸酯)，

4-甲基七叶亭6，7-双(亚油酸酯)，

七叶亭6，7-双(二十二碳六烯酸酯)，

4-甲基七叶亭6，7-双(二十二碳六烯酸酯)，

七叶亭6，7-双(苯甲酸酯)，

4-甲基七叶亭6，7-双(苯甲酸酯)

上述例举的化合物中，七叶亭6-单(新戊酸酯)、七叶亭6，7-双(新戊酸酯)、七叶亭6，7-双(硬脂酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(硬脂酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(二十二碳六烯酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(亚油酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(苯甲酸酯)属于本化合物(II)，是新型化合物。

七叶亭和4-甲基七叶亭作为药剂可从市场购得。例如，七叶亭可从东京化成工业株式会社购得，4-甲基七叶亭可从シグマアミカルカンパニ-购得。

七叶亭或4-甲基七叶亭的各种羧酸单酯或二酯，可以通过下述方法使七叶亭或4-烷基七叶亭和各种羧酸进行反应而制得。

1)使用适当的溶剂，在酸催化剂，例如盐酸、硫酸或磷酸等无机酸或者乙酸或P-甲苯磺酸等有机酸存在下，使七叶亭或4-烷基七叶亭进行反应。

2)在缩合剂，例如二环己基碳化二亚胺、N，N′-羰基二(2-甲基咪唑)、二苯乙烯酮-N-环己基亚胺、烷氧基乙炔、聚磷酸乙酯、亚硫酰氯、或草酰氯等存在下，在有机溶剂例如二甲基甲酰胺、丙酮、二噁烷、乙腈、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃或吡啶等中，使七叶亭或4-烷基七叶亭与羧酸反应。在普通冷却或室温下进行。

3)在碱性化合物例如三乙胺、吡啶、4-(N，N-二甲氨基)吡啶或二乙基甲基胺等存在下，使酸酐和七叶亭或4-烷基七叶亭反应。

4)在添加有例如三乙胺、吡啶、4-(N，N-二甲氨基)吡啶或二乙基甲基胺等碱性化合物的溶剂中或例如吡啶的碱性溶剂中，使卤氧化物(卤化酰：氯化物、溴化物等)和七叶亭或4-烷基七叶亭进行反应。

按照上述原料的使用比例，可以获得单酯或二酯。使用七叶亭或4-烷基七叶亭以及等摩尔量或小过剩量的羧酸、酸酐或卤氧化物时可得到单酯；使用大过剩量、通常摩尔比在2以上时则可得到二酯。

后者的情况下，往往得到二酯和单酯的混合物。这种情况下，可通过色谱法等普通的分离法容易地得到二酯和单酯。

作为反应产物的精制法，可以利用萃取，色谱法、重结晶或再沉淀法。精制品的结构可通过红外线吸收谱、紫外线吸收谱、核磁共振吸收谱、元素分析或质谱等来确认。

对本化合物(I)进行毒性调查。作为本化合物(I)的代表例，以750mg/kg(体重)的量，对雄小鼠连续4天进行腹腔内投药，没有死亡例，没有发现明显的毒性。本化合物(I)是极安全的化合物(参看后述实施例2)。

本化合物(I)，作为药效，对于培养的软骨细胞(家兔的肩、膝关节软骨细胞)来说，具有抑制软骨破坏的作用(参看后述实施例3)。

因此，化合物(I)作为软骨保护剂用来治疗伴随有关节软骨破坏的各种关节病是有效的。这种关节病的例子是慢性关节风湿病、变形性关节病、肩周关节炎、颈肩腕症候群、腰痛病等。

以本化合物(I)作为有效成分的软骨保护剂的制剂形态可以是普通形态。本化合物(I)可以单独使用，也可以将本化合物(I)和制剂上允许使用的载体或稀释剂的混合物作为制剂使用。制剂中有效成分的量为0.01-100重量％，优选0.1-70重量％。

本发明的软骨保护剂可以口服，或非口服形式投药。

本发明的软骨保护剂的投药量根据对象(动物或人)、年龄、个人差异或病情而不同，也有超出下述投药量范围的情况。然而，一般说来，以人作为对象时，本化合物(I)的口服投药量每1天为0.1-500mg/kg(体重)，优选0.5-200mg/kg(体重)。通常，1日的投药量分1次或2-4次投药。

实施例

以下通过实施例具体说明本发明，但这些实施例并不限定本发明的范围。在以下实施例中，TLC是薄层色谱法。

实施例(I)或(II)的合成

(1)七叶亭6，7-双(乙酸酯)的合成

在茄型烧瓶(50ml)中，加入七叶亭(东京化成；890mg、5mmol)和4-(N，N-二甲氨基)吡啶(1.528g、12.5mmol)后，添加二氯甲烷(10ml)使其形成悬浊液。在该悬浊液中，于10℃缓慢滴加乙酰氯(和光纯药；918mg、12.5mmol)。反应是放热反应。于10℃将反应液搅拌2小时，生成了白色沉淀。添加二氯甲烷(25ml)，沉淀完全溶解。

确认反应结束后，于反应液中添加蒸馏水(40ml)，用二氯甲烷(20ml×2)萃取。将集合的有机层用蒸馏水(20ml×1)洗涤，经硫酸钠干燥后，用旋转蒸发器蒸馏出溶剂，得到结晶性粗制产品(1.265g)。将粗制产品用乙醇重结晶，获得无色针状结晶的标题化合物(1.03g，收率78.6)。

熔点：133-133.5℃

TLC：Rf0.33(正己烷/乙酸乙酯1∶1)

¹H-NMR(CDCl₃，δppm)：

2.32(s，3H，Ac)、2.33(s，3H，Ac)、6.43(d

，1H，J＝9.62Hz，C3-H)、7.22(s，1H)、7.35

(s，1H)、7.64(d，1H，J＝9.62Hz，C4-H)

IR(KBr，υmax)：

1778s、1738s、1636m、1570m、1510m、1436

m、1378m、1218s、1128s

(2)4-甲基七叶亭6，7-双(乙酸酯)的合成

以4-甲基七叶亭(シグマ社制)作为原料，按与上述实施例1相同的方法合成标题化合物。获得黄色结晶的标题化合物。

¹H-NMR(CDCl₃，δppm)：7.33(s，3H)、7.40(s，3H)、6.32(s，1H)、7.24(s，1H)、7.44(s，1H)

(3)七叶亭6，7-双(硬酯酸酯)的合成

在茄型烧瓶(50ml)中，加入七叶亭(890mg、5mmol)和4-(N，N-二甲氨基)吡啶(1.528g、12.5mmol)后，添加二氯甲烷(20ml)使其形成悬浊液。在该悬浊液中，于10℃缓慢滴加硬脂酰氯(东京化成；3.787g，12.5mmol)。反应液变成乳浊状并固化。可是，当再次添加二氯甲烷(20ml)，反应液又变成了悬浊液。将该悬浊液于室温搅拌5小时。

确认反应结束后，将反应液注入冰水(20ml)中，用二氯甲烷(100ml×1)萃取。分离出的有机层用蒸馏水(20ml×1)洗涤，经硫酸钠干燥后，用旋转蒸发器蒸馏出溶剂、获得白色的精制产品(3.91g)。将粗制产品用二氯甲烷/正己烷重结晶，获得白色粉末状结晶的标题化合物(2.773g、收率78.0％)。

熔点：85-86℃

¹H-NMR(CDCl₃，δppm)：0.88(t，6H，CH₃)、1.26(m，56H，CH₂)、1.72(m，4H，CH₂)、2.55(q，4H，CH₂CO)、6.42(d，1H，C3-H)、7.21(s，1H，aromatic)、7.33(s，1H，aromatic)、7.63(d，1H，C4-H)

(4)4-甲基七叶亭6，7-双(硬脂酸酯)的合成

以4-甲基七叶亭作为原料，按与上述实施例1(3)同样的方法合成标题化合物。获得白色结晶的标题化合物。

熔点：121-122℃

¹H-NMR(DMSO，δppm)：0.85(t，6H，CH₃)、1.24(m，56H，CH₂)、1.48(m，2H，CH₂)、1.64(m，2H，CH₂)、2.18(m，2H，CH₂)、2.34(s，3H，C4-CH₃)、2.57(m，2H，CH₂)、6.18(s，1H，C3-H)、6.84(s，1H，aromatic)、7.42(s，1H，aromatic)

(5)4-甲基七叶亭6，7-双(亚油酸酯)的合成

用亚油酰氯(东京化成)代替硬脂酰氯，按与上述实施例1(4)同样的方法合成标题化合物、获得黄色油状之标题化合物。

¹H-NMR(CDCl₃，δppm)：0.90(t，6H)、1.2～1.4(m，32H)、1.4～2.0(m，4H)、2.0～2.2(m，8H)、2.4(s，1H)、2.8(t，4H)、5.3～5.5(m，8H)、6.3(s，1H)、7.2(s，1H)、7.4(s，1H)

(6)4-甲基七叶亭6，7-双(二十二碳六烯酸酯)的合成

用二十二碳六烯酰氯(东京化成；二十二碳-4，7，10，13，16，19-六烯酰氯)代替硬脂酰氯，按与上述实施例1(4)同样的方法合成标题化合物。获得黄色油状之标题化合物。

¹H-NMR(CDCl₃，δppm)：0.95(t，6H)、2.10(m，4H)、2.2(s，3H)、2.4～2.7(m，8H)、2.7～3.0(m，12H)、5.3～5.7(m，24H)、6.3(s，1H)、7.2(s，1H)、7.4(s，1H)

(7)七叶亭6，7-双(苯甲酸酯)的合成

在茄型烧瓶(50ml)中，加入七叶亭(890mg、5mmol)和4-(N，N-二甲氨基)吡啶(1.528g、12.5mmol)后，添加二氯甲烷(10ml)形成悬浊液。在该悬浊液中，于10℃缓慢滴加苯甲酰氯(东京化成；1.757g，12.5mmol)。马上生成白色沉淀，将反应液于室温搅拌4小时。

反应结束后，将反应液注入冰水(20ml)中，用二氯甲烷(20ml×3)萃取。将集中的有机层用蒸馏水(20ml×1)洗涤，经硫酸钠干燥后，用旋转蒸发器蒸馏出溶剂，获得结晶性粗制产品(2.136g)。将粗制产品用二氯甲烷/正己烷重结晶，获得白色粉末状结晶的标题化合物(1.899g，收率98.4％)

熔点：183-184.5℃

TLC：Rf0.69(正己烷/乙酸乙酯1∶1)

¹H-NMR(CDCl₃，δppm)：6.47(d，1H，J＝9.62Hz)、7.38(m，6H，aromatic)、7.44(s，1H)、7.56(s，1H)、7.71(d，1H，J＝9.62Hz)、8.04(m，4H，aromatic)IR(KBr，vmax)：1765s、1745s、1625w、1605w、1570w、1510m、1475m、1430m、1390m、1325w、1255s

(8)4-甲基七叶亭6，7-双(苯甲酸酯)的合成

在茄型烧瓶(50ml)中，加入4-甲基七叶亭(960mg、5mmol)和4-(N，N-二甲氨基)吡啶(2.445g、20mmol)后，添加二氯甲烷(10ml)形成悬浊液。在该悬浊液中，于10℃缓慢滴加苯甲酰氯(2.811g、20mmol)。立即生成白色沉淀，将反应液于室温搅拌4小时。

反应结束后，将反应液注入冰水(20ml)中，用二氯甲烷(20ml×3)萃取。将集中的有机层用蒸馏水(20ml×1)洗涤，经硫酸钠干燥后，用旋转蒸发器蒸馏出溶剂，获得结晶性的粗制产品(2.250g)将粗制产品用二氯甲烷/正己烷重结晶，获得白粉末状结晶的标题化合物(1.960g，收率98.0％)。

熔点：146-152℃

¹H-NMR(CDCl₃，δppm)：2.41(d，3H，J＝2.0Hz)、6.34(d，1H，J＝2.0Hz)、7.33～7.64(m，8H)、8.00(d，2H，J＝2.6Hz)、8.09(d，2H，J＝2.3Hz)

(9)七叶亭6，7-双(新戊酸酯)(I)和七叶亭6-单(新戊酸酯)(II)的合成

在茄型烧瓶(50ml)中，加入七叶亭(200mg、1.12mmol)和吡啶(3ml)。在该混合物中于0℃添加新戊酰氯(283.6mg、2.35mmol)后，于室温搅拌26小时。

用薄层色谱确认原料消失并有二种产物(Rf＝0.8及0.23，二氯甲烷/甲醇＝9∶1)后，将反应液注入冰水(10ml)中，用乙醚萃取。将集中的有机层用硫酸钠干燥后，减压浓缩，获得粗制产品。

将粗制产品用硅胶柱色谱法分离精制。用二氯甲烷洗脱，获得作为第1流出部分的标题化合物(I)(无色结晶，收率72％)和作为第2流出部分的标题化合物(II)(无色结晶、收率25％)。

标题化合物(I)

熔点：148-149℃

¹H-NMR(90MHz，CDCl₃，δppm)：1.35(s，18H)、6.40(d，1H，J＝10.3Hz)、7.15(s，1H)、7.29(s，1H)、7.64(d，1H，J＝10.3Hz)

标题化合物(II)

熔点：159-162℃

¹H-NMR(90MHz，CDCl₃，δppm)：1.39(s，9H)、6.26(d，1H，J＝9.5Hz)、6.98(s，1H)、7.18(s，1H)、7.60(d，1H，J＝9.5Hz)

实施例2：利用小鼠连续4日腹腔内投药的毒性试验

对6周龄的Crj：CD-1(ICR)雄小鼠(一组5只)，1日1次连续4日腹腔内投药，该药是将七叶亭或七叶亭6，7-双(新戊酸酯)悬浮在0.5％甲基纤维素水溶液中的悬浊液。投药量规定为750mg/kg。任何一种化合物都没有死亡例，也没有发现应特别提出的毒性。

对4-甲基七叶亭、七叶亭6，7-双(乙酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(乙酸酯)、七叶亭6，7-双(硬脂酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(硬脂酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(亚油酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(二十二碳六烯酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(苯甲酸酯)、七叶亭6，7-双(新戊酸酯)以及七叶亭6，7-单(新戊酸酯)也进行了同样的毒性试验，没有发现死亡例。

实施例3：培养软骨细胞中的软骨破坏抑制作用

(a)培养软骨细胞的配制

从家兔(Nea Zealand White Rabbit)(体重1-1.5kg，从北山ラベス购入)的肩、膝关节无菌地取出软骨。将它用PBS(-)(Ca²⁺、Mg²⁺游离)、ハンクス、及0.1％EDTA-PBS(-)充分洗涤后，切成约1mm方块。在其上添加含有0.1％EDTA的PBS(-)，在37℃的恒温槽中处理30分钟。再用胰蛋白酶(0.25％)溶液，于37℃处理1小时，去除粘附在软骨上的结合组织。然后，去除上清液后，将软骨置于含有牛胎儿血清(FBS)10％及胶原酶0.2％的Ham F-12培养基(ソディウム)中处理约2-2.5小时。

将这种胶原酶溶液离心分离(1500rpm)后，用含10％FBS的均质培养基(软骨培养基)洗2次，最后将软骨细胞调节成在软骨培养基中含细胞数为3×10⁵个/ml的细胞浓度。将该细胞液播种于每1ml有24个穴的板上，4日后达到合流(コンフルェント)后，在两周内供实验用。

(b)被验物质以及软骨破坏因子的添加

到此为止，去除软骨细胞培养中使用的软骨培养基；重新添加血清游离的S-Clone培养基800μl(含0.1％人血清白蛋白)，向其中添加各种浓度的被验物质100μl(最终浓度的10倍S-Clone培养液，DMSO浓度2.5％)，于二氧化碳(5％)和空气(95％)存在下培养2小时后，将软骨破坏因子PMA(フオルボ-ルミリステ-トアセテ-ト)(最终浓度0.1μg/ml)或インク-ロイキン1α(IL-1α)(最终浓度0.1μg/ml)添加到软骨细胞培养液中。

本发明的化合物：七叶亭(东京化成)、4-甲基七叶亭(シクマ社制)、4-甲基七叶亭6，7-双(乙酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(硬脂酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(亚油酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(二十二碳六烯酸酯)、七叶亭6，7-双(苯甲酸酯)、4-甲基七叶亭6，7-双(苯甲酸酯)、七叶亭6，7-双(乙酸酯)、七叶亭6，7-双(新戊酸酯以及七叶亭6-单(新戊酸酯)(以上是由实施例1合成的化合物)。

对比物质：消炎痛(indomethacin)(シグマ社制)

(c)GAG的定量

2天后，除去软骨培养细胞上清液后，在残留的软骨基质层上加0.03％木瓜蛋白酶溶液1ml，于65℃反应1小时，从基质层游离出GAG。用1，9-二甲基亚甲蓝法定量测定处理过的木瓜蛋白酶中的GAG含量(定量法：参看R、W·Farndale，Biochim.Biophys、Acta.，Vol.883，pp.173-177，1986.)。将软骨破坏因子无添加群(对比例)的软骨基质中GAG含量规定为100时，用下述公式求出各样品的GAG相对量。对比例的GAG含量达到合流(コンフルェント)后，根据直到供实验用时经过天数的不同，示出一个范围(10.9-99.9μg/ml)。

GAG相对量(％)＝(B/A)×100

式中，A是软骨破坏因子无添加群(对比例)的GAG含量，B是软骨破坏因子添加群或(软骨破坏因子+被验物质)添加群的GAG含量。

将结果示于表1中。表中GAG含量是平均值±标准误差(n＝3)的值。在各实验中，加入对比例群以及软骨破坏因子添加群。有意差的检定，相对于各实验的软骨破坏因子添加群，是用Student′st-test进行。检定结果表示如下。*：P＜0.05，**：P＜0.01，***：P＜0.001。

相对于软骨破坏因子无添加群(对比例)的GAG含量，由于添加了作为软骨破坏因子的PMA和IL-1α，从而导致GAG的减少。在这种条件下，确认了本化合物具有抑制GAG减少、抑制软骨破坏的作用。与此相反，作为先有技术镇痛消炎剂的消炎痛却见不到软骨破坏抑制作用，相反，却发现有促进软骨破坏的作用。

表1

样品名 GAG含量μg/ml (GAG相对量％)

对比例 72.1±3.20^*** (100)

1L-1α 37.8±2.21 (52.4)

+七叶亭

100μM 63.9±3.80^** (88.6)

对比例 58.8±2.60^*** (100)

PMA 37.9±1.37 (64.5)

+七叶亭

100μM 78.0±2.32^*** (133)

对比例 99.9±1.10^*** (100)

PMA 59.1±0.80 (59.2)

+4-甲基七叶亭

100μM 72.1±0.700^*** (72.2)

对比例 20.3±2.33^*** (100)

1L-1α 14.3±2.57 (70.4)

+4-甲基七叶亭

6，7-双(乙酸酯)

100μM 27.3±3.66^* (134)

对比例 39.7±0.55^** (100)

1L-1α 33.0±0.55 (83.1)

+4-甲基七叶亭

6，7-双(亚油酸酯)

100μM 37.3±0.73^** (94.0)

+4-甲基七叶亭

6，7-双(硬脂酸酯)

100μM 43.7±0.37^*** (110)

+4-甲基七叶亭

6，7-双(二十二碳六烯酸酯)

100μM 43.0±0.12^*** (108)

+4-甲基七叶亭

6，7-双(苯甲酸酯)

100μM 44.7±0.93^*** (113)

对比例 10.9±0.23^** (100)

1L-1α 8.71±0.23 (79.9)

+七叶亭

6，7-双(苯甲酸酯)

100μM 9.54±0.15^* (87.5)

对比例 24.3±3.33^*** (100)

PMA 11.3±1.76 (46.5)

+4-甲基七叶亭

6，7-双(乙酸酯)

100μM 25.4±3.84^** (105)

对比例 44.3±0.61^*** (100)

PMA 37.9±1.67 (85.6)

+4-甲基七叶亭

6，7-双(亚油酸酯)

100μM 42.3±0.82^* (95.5)

+4-甲基七叶亭

6，7-双(硬脂酸酯)

100μM 47.0±1.10^** (106)

+4-甲基七叶亭

6，7-双(二十二碳六烯酸酯)

100μM 47.6±0.49^** (108)

+4-甲基七叶亭

6，7-双(苯甲酸酯)

100μM 48.1±1.56^* (109)

对比例 24.0±0.44^*** (100)

1L-1α 16.0±0.68 (66.7)

+七叶亭

6，7-双(乙酸酯)

100μM 20.9±1.86 (87.1)

+七叶亭

6，7-双(新戊酸酯)

100μM 19.2±1.58 (80.0)

+七叶亭

6-单(新戊酸酯)

100μM 21.8±2.19^* (90.8)

对比例 28.0±0.7^*** (100)- PMA 15.4±0.5 (55.0)

+消炎痛

10 13.2±0.6^* (47.1)

33μM 11.7±0.8^** (41.8)

实施例4：制剂例(粒剂)

将七叶亭 20重量份，

乳糖 68重量份，

低取代羟丙基纤维素10重量份，

羟丙基纤维素 2重量份，均匀混合后，用润湿剂乙醇32重量份与其混匀。然后，进行湿式造粒，干燥后即获得粒剂。

如上所述，本化合物(I)对构成软骨基质的GAG减少具有很强的抑制作用，显示出软骨保护作用，而且无毒性。因此，本化合物(I)可用作软骨保护，对慢性关节病、变形性关节病、肩周关节炎、颈肩腕症候群、腰痛病的治疗极为有效。

以上以特定的实施方案说明了本发明，但本领域技术人员所知晓的各种变换方案均包括在本发明的范围内。

Claims

1.一种医药组合物，其特征是它含有以下通式(I′)所示的化合物：

式中，R²¹和R²²各自独立地是氢原子、碳原子数为2-25的饱和或不饱和的脂肪族酰基或苯甲酰基，R²³是氢原子或碳原子数1～4的烷基，

条件是当R²³是氢原子且R²¹和R²²相同时，R²¹和R²²既不为氢原子也不是乙酰基，或者R²³是甲基且R²¹和R²²相同时，R²¹和R²²不为氢原子，也不是碳原子数6～25的饱和或不饱和脂肪族酰基。

2.根据权利要求1中所述的医药组合物，其中，R²¹和R²²各自独立地是氢原子、乙酰基、三甲基乙酰基、辛酰基、月桂酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、亚油酰基、二十二碳六烯酰基或苯甲酰基，R²³是氢原子或碳原子数为1-4的低级烷基。

3.根据权利要求1中所述的医药组合物，它含有以下通式(II)所示的化合物

式中，R¹¹和R¹²各自独立地是氢原子、三甲基乙酰基、辛酰基、月桂酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、亚油酰基、二十二碳六烯酰基或苯甲酰基，R¹³是氢原子或甲基，

条件是当R¹³是氢原子且R¹¹和R¹²相同时，R¹¹和R¹²不是氢原子，或当R¹³是甲基且R¹¹和R¹²相同时，R¹¹和R¹²不是氢原子、辛酰基、月桂酰基、棕榈酰基。

4.根据权利要求3所述的医药组合物，其中，R¹¹和R¹²各自独立地是氢原子、三甲基乙酰基、硬脂酰基或苯甲酰基。

5.通式(I′)表示的化合物，

其中R²¹和R²²分别独立地为氢原子、碳原子数2～25的饱和或不饱和的脂肪族酰基或苯甲酰基，R²³是氢原子或碳原子数1～4的烷基，条件是当R²³是氢原子且R²¹和R²²相同时，R²¹和R²²既不是氢原子也不是乙酰基，或当R²³是甲基且R²¹和R²²相同时，R²¹和R²²既不是氢原子也不是碳原子数6～25的饱和或不饱和脂肪族酰基。

6.通式(II)表示的化合物

7.根据权利要求6所述的化合物，其中，R¹¹和R¹²各自分别是氢原子、三甲基乙酰基，硬脂酰基或苯甲酰基。

8.通式(I)所示化合物在制备关节病治疗剂中的用途，

式中，R¹和R²各自独立地是氢原子、碳原子数为2-25的饱和或不饱和脂肪族酰基或苯甲酰基，R³是氢原子或碳原子数1～4的烷基。

9.通式(I)的化合物在制备软骨保护剂中的用途，

其中R¹和R²各自独立地是氢原子、碳原子数2～25的饱和或不饱和脂肪族酰基或苯甲酰基，R³是氢原子或碳原子数1～4的烷基。