CN114703153B - 一株血清2型禽腺病毒毒株以及疫苗和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物技术领域，公开了一株血清2型禽腺病毒毒株，保藏编号为：CCTCC No：V202236；保藏日期：2022年5月7日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心；该病毒滴度高、免疫原性好，采用其制备的灭活疫苗对鸡群能够提供有效的免疫保护。同时，本发明还公开了该毒株的用途和疫苗。

Description

一株血清2型禽腺病毒毒株以及疫苗和用途
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体为一株血清2型禽腺病毒毒株以及疫苗和用途。
背景技术
禽腺病毒是全球家禽和野禽常见的传染病病原。禽腺病毒分为Ⅰ亚群禽腺病毒、Ⅱ亚群禽腺病毒、Ⅲ亚群禽腺病毒三个亚群。Ⅰ亚群禽腺病毒即禽腺病毒属（Aviadenovirus）。根据国际病毒分类委员会（ICTV）第10次报告，禽腺病毒属有14个种（Species），包括禽腺病毒A-E种（Fowl aviadenovirus A-E），鸭腺病毒B种（Duck aviadenovirus B），隼腺病毒A种（Falcon aviadenovirus A），鹅腺病毒A种（Goose aviadenovirus A），鸽腺病毒A、B种（Pigeon aviadenovirus A-B），鹦鹉腺病毒B种（Psittacine aviadenovirus B），火鸡腺病毒A-C种（Turkey aviadenovirus A-C）。
禽腺病毒A~E种共有12个血清型（fowl adenovirus 1-8a，8b-11）。血清1型禽腺病毒（fowl adenovirus 1，FAdV-1）属于A种；血清5型禽腺病毒（fowl adenovirus 5，FAdV-5）属于B种；血清4型（fowl adenovirus 4，FAdV-4）和血清10型禽腺病毒（fowl adenovirus10，FAdV-10）属于C种；血清2型（fowl adenovirus 2，FAdV-2）、血清3型（fowl adenovirus3，FAdV-3）、血清9型（fowl adenovirus 9，FAdV-9）和血清11型禽腺病毒（fowl adenovirus11，FAdV-11）属于D种；血清6型（fowl adenovirus 6，FAdV-6）、血清7型（fowl adenovirus7，FAdV-7）、血清8a型（fowl adenovirus 8a，FAdV-8a）和血清8b型禽腺病毒（fowladenovirus 8b，FAdV-8b）属于E种。而鸭腺病毒2型（duck adenovirus 2，DAdV-2）和鸭腺病毒3型（duck adenovirus 3，DAdV-3）则都属于鸭腺病毒B种。鸭腺病毒2型于1977年分离自法国患病番鸭，感染鸭主要表现精神沉郁、下痢、消瘦等。鸭腺病毒2型与血清2型禽腺病毒属于完全不同的种，两个病毒具有完全不同感染宿主和发病特点。
肝炎-心包积液综合征（Hepatitis-hydropericardium syndrome，HHS），又叫心包积液综合征（Hydropericardium syndrome，HPS）。之前的研究报道，禽腺病毒12个血清型感染鸡均引起包涵体肝炎。血清4型、血清11型禽腺病毒感染鸡除了引起肝炎，还会引起心包积液（即引起肝炎-心包积液综合征或心包积液综合征）。具体可参考的文献如下：
CN202210046888.7公开了表达禽腺病毒血清8b型（FAdV-8b）纤突蛋白（Fiber）的禽腺病毒血清4型（FAdV-4）重组病毒及其构建方法和应用。所述重组病毒是利用FAdV-8b的Fiber基因替换FAdV-4 Fiber1基因得到，该重组病毒可用于制备防控鸡肝炎-心包积液综合征和/或鸡包涵体肝炎的二联疫苗。
CN201710505267.X公开了一种Ⅰ群血清4型禽腺病毒卵黄抗体的制备方法及其制品。本发明首先公开了一种Ⅰ群血清4型禽腺病毒卵黄抗体的制备方法，包括：(1)培养Ⅰ群血清4型禽腺病毒，制备灭活疫苗；(2)将灭活疫苗免疫产蛋鸡，收获鸡蛋，分离卵黄；(3)从卵黄中提取卵黄抗体，即得。该发明方法对卵黄抗体的提取效果好，不仅能够有效提高卵黄抗体除脂率，而且可以提高卵黄抗体的纯净度，减少杂蛋白，工艺简单。该发明进一步公开了所述方法制备得到的Ⅰ群血清4型禽腺病毒卵黄抗体。本发明制备的Ⅰ群血清4型禽腺病毒卵黄抗体，能够安全有效的预防Ⅰ群4型禽腺病毒引起的禽心包积液-肝炎综合征。
CN202111600154.0 公开了一种禽腺病毒4、8和11型三价疫苗及其制备方法和应用。所述禽腺病毒三价疫苗包括禽腺病毒4型疫苗株QYH2019-YN、禽腺病毒8型疫苗株QYH2020-HB和禽腺病毒11型疫苗株QYH2020-SY。该发明提供了一种禽腺病毒三价疫苗，由最新分离得到的禽腺病毒4型疫苗株、禽腺病毒8型疫苗株和禽腺病毒11型疫苗株制备得到，其对于4、8和11型禽腺病毒及其引起的鸡包涵体肝炎和心包积液-肝炎综合征具有有效的预防作用。
目前，国内外已经发现的血清2型禽腺病毒感染鸡只引起肝炎，没有发现血清2型禽腺病毒感染鸡引起心包积液综合征案例。近年来，国内外血清2型禽腺病毒感染鸡的病例报道逐渐增多。血清2型禽腺病毒对鸡群和养禽业有巨大威胁。
对于禽腺病毒引起的疾病，国内外主要以鸡胚或者禽源细胞培养禽腺病毒制备灭活疫苗进行防控。但是不同血清型禽腺病毒之间无交叉保护，目前已有的其它血清型的疫苗对血清2型禽腺病毒引起的疾病不能提供良好的保护。因此，急需开发血清2型禽腺病毒疫苗用于预防控制该病毒引起的疾病。
发明内容
本发明的目的在于提供一株血清2型禽腺病毒毒株及其用途，该病毒滴度高、免疫原性好，采用其制备的灭活疫苗对鸡群能够提供有效的免疫保护。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一株血清2型禽腺病毒毒株，保藏编号为：CCTCC No：V202236 ；保藏日期：2022年5月7日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心（简称：CCTCC），保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；邮编：430072。
在上述的血清2型禽腺病毒毒株中，其基因序列如SEQ ID NO：1所示。
此外本发明还公开了一种疫苗，含灭活的如上所述的血清2型禽腺病毒毒株。
上述的血清2型禽腺病毒毒株可用于制备用于预防血清2型禽腺病毒引起的鸡包涵体肝炎和肝炎-心包积液综合征的疫苗或抗体。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明通过对临床肝炎-心包积液综合征样本进行了病原的分离鉴定与纯化，得到了一株血清2型禽腺病毒毒株，经过透射电子显微镜观察、PCR试验、全基因序列测定和动物回归试验，确定所筛选的病毒为血清2型禽腺病毒毒株，与NCBI已知的血清2型禽腺病毒毒株（FAdV-2 GA/1358/1995株和FAdV-2 685株）ORF25 cds区非连续的特点不同，GX01株ORF25两个cds区是连续的。动物回归试验表明该毒株感染会引起鸡肝炎-心包积液综合征，鸡体重增长显著抑制，排毒持续期长，对生产造成严重影响。
本发明所提供的疫苗所使用的毒株是血清2型禽腺病毒GX01株，是适应细胞规模化培养，病毒滴度高、免疫原性好。其能预防GX01这个毒株，理论上能够预防所有的血清2型禽腺病毒。
本发明制备的禽腺病毒灭活疫苗安全性高、稳定性好。本发明研制的疫苗免疫试验鸡后未出现由疫苗引起的任何局部和全身不良反应。本发明中制备的灭活疫苗对鸡群能够提供有效的免疫保护，具有很好的商品化开发前景，为我国养鸡场对该病的综合防控提供基础。
此外NCBI上显示的血清2型禽腺病毒毒株全基因序列只有两个，FAdV-2 685毒株和 FAdV-2 SR48毒株。其中685毒株分离自英国。SR48毒株分离自日本，文献证实NCBI显示的FAdV-2 SR48毒株有错误，根据分类标准它实际是FAdV-11毒株。另外一株D种未确定血清型分离自美国的腺病毒GA/1358/1995毒株，通过遗传进化分析确定这株为FAdV-2。本案的FAdV-2 GX01毒株全基因序列是中国的第一株血清2型禽腺病毒全长序列，是世界的第三株血清2型禽腺病毒全长序列。
附图说明
图1为血清2型禽腺病毒GX01电镜图片；
图2为禽腺病毒PCR产物琼脂糖凝胶电泳；
图3为血清2型禽腺病毒GX01基因组特点；
图4为GX01株的DNA聚合酶氨基酸序列和hexon loop-1基因序列的遗传进化分析；
图5为GX01株攻毒鸡大体病变：肝脏出血性炎症和心包积液；
图6为GX01株攻毒鸡病理切片：肝脏炎性细胞浸润和脾脏大量淋巴细胞坏死；
图7为GX01株攻毒鸡体重变化：GX01感染严重抑制鸡体重增长；
图8为GX01株攻毒鸡排毒检测：血清2型禽腺病毒能够在鸡体内增殖，排毒持续期长。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1病毒株GX01的分离和鉴定
流行病学调查
2020年7月广西某肉鸡场，20日龄鸡出现了一种肝炎-心包积液综合征的传染性疾病。对病死的鸡进行剖检，主要的病理变化表现为肝脏广泛出血性肝炎，心脏包膜内有心包积液。经临床调查和实验室检测，初步诊断为Ⅰ亚群禽腺病毒即禽腺病毒引起的肝炎-心包积液综合征。遂将有典型症状发病鸡的肝脏、心脏等病料组织采集后置于﹣80℃冰箱保存备用。
病毒的分离
在无菌环境取病死鸡的肝脏经研磨后，用按1:5的比例加入灭菌生理盐水制成悬液；反复冻融3次后，4℃ 12000r/min离心10min，取上清；加入青霉素和链霉素各1000IU/ml，经0.22μm的微孔滤器过滤，保存备用。将上述制备的样本处理后得到的过滤液接种生长至大约80%左右的单层LMH细胞，5% CO2培养箱37 °C吸附1h后，弃去吸附液，灭菌PBS洗涤两遍，补加含2%胎牛血清的DMEM/F-12维持液。观察细胞病变，待细胞病变达80%，收集细胞液，﹣80℃保存。
血清2型禽腺病毒的鉴定
透射电镜鉴定
生长在T75细胞培养瓶中的细胞接毒，待细胞病变达到50%，倒出培养液，用细胞刮刮下细胞，而后带培养液一起低速离心，1200转/分钟，离心10分钟使细胞沉淀成团，离心完后倒出培养液，沿壁缓慢加满电镜固定液（2.5%中性戊二醛）。4℃下固定15分钟或以上。将病毒颗粒用60μl PBS重悬，用1％的磷钨酸负染30s，在透射电镜下观察病毒颗粒结构。电镜下可观察到LMH细胞核中有大量腺病毒粒子，有些病毒粒子呈晶格状排列（图1）。
鉴定
核酸提取
取200μl融液离心后的病毒液上清，使用天隆生物科技有限公司RNA/DNA核酸提取纯化试剂盒（天隆，货号T180H）按照说明书操作步骤提取病毒核酸。
PCR/RT-PCR扩增
分别用禽腺病毒（FAdV）、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎（IBV）、禽白血病病毒(ALV)和禽呼肠孤病毒(ARV)引物进行PCR或者RT-PCR检测。
PCR/RT-PCR扩增结果
PCR/RT-PCR产物经1.0％琼脂糖凝胶电泳。电泳结果显示扩增出了禽腺病毒特异性目的片段，片段大小为728bp，与预期片段大小相符(图2)；未扩增出其它病原片段。PCR结果表明试验中分离并检测到了禽腺病毒，病毒液HA试验均为0，表明不含有血凝性外源病毒污染(禽流感病毒、新城疫病毒)。PCR/RT-PCR对鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎（IBV）、禽白血病病毒(ALV)和禽呼肠孤病毒(ARV)检测均为阴性证明禽腺病毒毒中不含有其它外源病毒污染。
病毒基因组的扩增及序列分析
用分段设计引物扩增病毒基因组序列，扩增的片段头尾之间有50-300bp重叠区域，通过扩增、测序、拼接，最终获得血清2型禽腺病毒基因组全长。从GenBank下载已知禽腺病毒毒株的序列，利用DNASTAR软件包中的MegAlign进行与其他禽腺病毒毒株序列进行同源性分析。利用MEGA 7.0软件，利用最大释然法将本发明分离得到的血清2型禽腺病毒GX01株分别构建DNA聚合酶氨基酸和hexon loop-1基因的构建进化树。结果表明，本发明分离到的血清2型禽腺病毒GX01株病毒基因组全长43，663 bp，G+C含量为53%。全基因组序列包含36个ORFs (图3)。我们目前的研究获得中国首株FAdV-2全基因组序列GX01（NCBI序列号ON014843），此FAdV-2与NCBI已知全长的血清2型禽腺病毒毒株（FAdV-2 GA/1358/1995株和FAdV-2 685株）ORF25 cds区非连续的特点不同，GX01株ORF25两个cds区是连续的(图3)。根据国际病毒分类委员会(ICTV)的物种划分标准，禽腺病毒的种的划分依赖于DNA聚合酶氨基酸序列的遗传距离分析，DNA聚合酶氨基酸序列的进化树结果显示GX01属于FAdV-D(图4)。禽腺病毒hexon loop-1基因是区分FAdVs血清型的基因，禽腺病毒hexon loop-1基因的进化树结果表明GX01与FAdV-2 685株的亲缘关系最近(图4)。但是 GX01与FAdV-2 685株hexon loop-1基因相比有碱基突变和缺失，基因同源性97.7%，属于相同的血清型不同的毒株。血清2型禽腺病毒GX01株（Fowl aviadenovirus D Fowl Adenovirus 2）的序列如SEQID NO：1所示。
本发明分离的血清2型禽腺病毒GX01株与其它D种禽腺病毒毒株核苷酸和氨基酸序列同源性比对如下表1。
表1 GX01株与D种腺病毒其它毒株的基因和氨基酸序列比较
Figure 909660DEST_PATH_IMAGE002
前期国内外发现的血清2型禽腺病毒对鸡不致病或只引起鸡肝炎病，GX01株是国内外首次发现的既能引起肝炎也能引起心包积液的血清2型禽腺病毒毒株。临床感染和实验室感染血清2型禽腺病毒GX01株的鸡，均表现出肝炎-心包积液综合征，这说明本发明分离到的血清2型禽腺病毒发生了明显改变，尤其是对鸡的致病力以及对鸡引起的临床症状上差异明显。
实施例2 病毒株GX01的特性考察
病毒含量测定
将GX01株病毒液用灭菌PBS作10倍倍比稀释，取10-1、 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10十个稀释度，分别接种96孔细胞板上的单层LMH细胞，每个稀释度接种8孔，每孔接种0.1ml，置37℃ 5% CO2培养箱，3-5d后观察细胞病变，接种细胞出现典型病变则判为感染，按照Reed-Muench方法计算 TCID50。每0.1ml病毒含量应≥106.0TCID50。
鸡回归试验
病毒对SPF鸡致病力
将0.3ml(≥106.0TCID50) GX01株病毒液经静脉分别接种3日龄和10日龄SPF鸡各10只，对照组各10只分别接种观察21日，所有的鸡均感染。感染后的鸡表现出(1)羽毛蓬松、采食减少、扎堆、精神萎靡等症状；(2)攻毒后21天，感染鸡虽然未发生死亡，但是剖检见明显的肝脏出血、肿胀等肝炎症状，心包膜内有淡黄色心包积液（图5）；（3）病理切片显示肝脏小叶及静脉周围可见几处炎性细胞灶性浸润，局部肝窦淤血扩张；肝细胞中有包涵体。脾脏红白髓大量淋巴细胞坏死，核固缩深染或碎裂溶解（图6）。动物回归试验首次证实我们分离的血清2型禽腺病毒GX01株可以引起肝炎-心包积液综合征。
病毒攻毒后对体重的影响
GX01株攻毒后每周称量攻毒组和对照组鸡的体重，称重至第三周。结果显示3日龄攻毒组比3日龄对照组的鸡在攻毒后1、2、3周体重显著下降，到第三周攻毒组平均体重159.15g，对照组平均体重245.63g。10日龄攻毒组比10日龄对照组的鸡在攻毒后1、2、3周体重也显著下降，到第三周攻毒组平均体重261.90g，对照组平均体重334.69g（图7）。体重结果表明血清2型腺病毒GX01株感染显著抑制鸡的体重增长，严重影响鸡的生产性能。
病毒攻毒后鸡的泄殖腔排毒
攻毒后采集1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、10d、14d、21d泄殖腔试纸，荧光定量绝对定量方法检测泄殖腔排毒的病毒拷贝数。结果显示3日龄攻毒组攻毒后1d即可检测到泄殖腔开始排毒126拷贝。3日龄攻毒组排毒从1d开始急剧上升，到5d达到排毒高峰，病毒拷贝数高达5.42×106，随后病毒拷贝数开始逐渐下降，到攻毒后21d，排毒病毒拷贝数仍然有264。10日龄攻毒组攻毒后1d也可检测到泄殖腔开始排毒193拷贝。10日龄攻毒组排毒从3d开始急剧上升，到4d达到排毒高峰，病毒拷贝数高达1.82×106，随后病毒拷贝数开始逐渐下降，到攻毒后21d，排毒病毒拷贝数仍然有126（图8，需要说明的是，在图8中，3日龄对照组和10日龄对照组在横坐标处基本重合，在图8中无法区分）。检测泄殖腔排毒结果表明，血清2型禽腺病毒在体内具有良好的增殖能力，排毒量高，并且排毒持续期长，一旦感染对环境和周围健康鸡有很大威胁。
实施例3 灭活疫苗的制备和检验
GX01株病毒液的灭活
取本发明GX01株病毒液接种LMH细胞，每天观察细胞病变，待病变至大约80%，收获病毒液，反复冻融3次。取病毒液缓慢加入甲醛溶液，使病毒液中甲醛的终浓度为0.1％，随后置37℃摇床内，200rpm振荡灭活24h后，置于4℃保存。
半成品检验
病毒含量测定
按照实施例2 病毒株GX01的特性考察 病毒含量测定中描述的方法测定TCID50，最终病毒滴度不低于106.0TCID50/0.1ml。
无菌检验
取灭活后的病毒液， 按现行《中国兽药典》附录进行无菌检验，确认无菌污染。
灭活检验
取1ml灭活后的病毒液分别接种3瓶LMH细胞，另取一瓶LMH细胞作为空白对照，37℃，CO2培养箱培养，每日观察并记录细胞病变情况，连续观察7天。将培养物反复冻融三次后再盲传2代，设置未接毒的细胞作为空白对照，37℃，CO2培养箱培养，观察7天，记录有无细胞病变。结果显示接种灭活后病毒液的细胞和空白对照细胞一样均没有病变，表明病毒灭活彻底。
疫苗的制备
取制备好的彻底灭活的抗原液，按照1：2(V/V)加入Montanide TM ISA71VG佐剂(法国SEPPIC公司)，置于乳化罐内，8000rpm/min剪切10分钟，制备成灭活疫苗。
疫苗的安全试验
20只3日龄SPF鸡随机分为两组，一组肌肉注射0.4ml灭活疫苗；另一组以相同的方式注射 0.4ml生理盐水，作为空白对照。免疫后连续观察21日，每日观察各组鸡的采食饮水、精神状态以及检查各组鸡注射部位是否出现红肿等局部注射反应。
结果显示在免疫后各组鸡的采食饮水、精神状态均正常，各组鸡注射部位疫苗吸收完全，没有红肿等局部反应，结果表明疫苗安全无害。
实施例4 灭活疫苗的免疫攻毒保护性检验
将血清2型禽腺病毒GX01株毒种制成油乳剂灭活疫苗(抗原含量≥106.0TCID50/0.1ml)。30只3日龄SPF鸡随机分为三组，第一组肌肉注射0.2ml灭活疫苗；第二组和第三组均肌肉注射0.2ml 生理盐水，作为空白对照。免疫免疫后3周，第一组免疫组和第二组对照组分别静脉注射接种FAdV-2病毒0.3ml(病毒含量≥106.0TCID50/0.1ml)；第三组接种0.3ml 生理盐水，作为不免疫不攻毒对照。攻毒后的三周每周测鸡的体重，三周后处死所有鸡观察病变情况。结果表明第一组免疫攻毒组的鸡和第三组不免疫不攻毒对照组的鸡的体重无差异，第一组和第三组的鸡的体重显著高于第二组不免疫攻毒组的体重。处死后的，第一组的鸡和第三组对照组的鸡均没有心包积液和肝炎症状，第二组的鸡有明显肝炎和心包积液症状。说明本发明的毒株作为抗原制备的灭活疫苗具有良好的免疫原性，能为FAdV-2病毒攻毒提供很好的保护。
实施例5 灭活疫苗的免疫持续期测定
将血清2型禽腺病毒GX01株毒种制成油乳剂灭活疫苗(抗原含量≥106.0TCID50/0.1ml)。20只3日龄SPF鸡随机分为两组，一组肌肉注射0.2ml灭活疫苗；另一组以相同的方式注射生理盐水0.2ml，作为空白对照。免疫后0-6周，每周所有试验鸡采血，分离血清，ELISA测定抗体。结果表明此灭活疫苗免疫鸡能刺激起高水平血清抗体，免疫鸡的血清抗体均为阳性，对照鸡抗体水平均应为阴性。说明本发明的毒株作为抗原制备的灭活疫苗能刺激机体产生抗体，有良好的免疫原性。
序列表
<110> 广东省农业科学院动物卫生研究所
<120> 一株血清2型禽腺病毒毒株以及疫苗和用途
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 43663
<212> DNA
<213> 血清2型禽腺病毒(GX01)
<400> 1
catcatctat atatacctac atgaatgaca ctgctgtcac ctcgcactac cgctcccgcc 60
cgctagatgg caaaattgct ctaccaatgt ctttccgtgt tacaaagtcc ggactgggcg 120
cggcgaatac gtgccgggcg tggcgcggag ccgactttct ggcgccggga gccataaatg 180
ggcgttccct tgcgtgcgga attgcttagg gacagtccca atggcctggg agcggtccag 240
aaagcgatta gtttttgcgt aggcacgcga aagctatttt taccgcaatg acttccttat 300
ttgtttacaa ccgcctccgc ctgtgtgtaa tttaaaattt gtacataccg ttccgatcgc 360
cgtacttggg cttggaacgc ggacttcgag tctctaaatt gatttatggt gtctgaatca 420
gcgctttttg tgccacgttg tgcgttctcc gttgaccttt gaaaaggcgc gtggtatttc 480
tcggtgtgtt tttcgggcgg attacgcgtt acgtgatcgt tttatggcgg gctccgggcg 540
tataacagtg gagcggctga tcgtcagagc acggatgagc gagcagccgg actcaccgcc 600
ggagctctat ccgtctctcc tggttctgcg ggtgaacccg gttccccgta ctccgttcgt 660
tttggacatc agccgtttgc ccgtggtgcc ggagcgcatt ttgctgcacg actttccgaa 720
cggaccctgg tcggaaacga tttggtacgg gaagatcact cagcgggagc tgaaccaggc 780
gctagagtct atcgtggacg tgctttaggt aatttcctcc gttctttttc ccgtttaggt 840
gaggagatgt ctttcgattc cggttgcccc ccgactccac cggtaaagct gctgttcaag 900
aagcattccc cgtttgccgt gacgccccag cgtgctacct cgggggctgc cggttacgac 960
ttgtgcagct cggcggacgt ggtggtgccg ccgaagagcc ggtctctcat tccgaccgac 1020
ctttcttttc aattcccccc gggcgtgtac gggcgcatag ccccccgttc gggcttggcc 1080
gtaaagtttt ttatcgatgt gggagccggt gttatcgata gcgattaccg gggcatcgtt 1140
agcgtcctcc ttttcaattt ttcggatcac aatttcaacg tccgtcgcgg cgatcgcatc 1200
gctcagttaa ttttggagcg tcatttgacg cccgacttgg aagagcgatc gggtttagac 1260
gagacggcca ggggtgcagc cggtttcggc tccaccggcg gttttgatac aggggtatgt 1320
ccctcctcct tttcgtagga attggccgag agcgaagcgg cggacgaagt ggatttcgcc 1380
gttcaactgg cggccgctct cgaggcagat aacgaggcta ctgcgggttg cttctgcgaa 1440
gccgactccg ggaaaaacac ctgttctctg tgttcttgga actgtatcat tctttaggta 1500
tgattgtttc tgtttggacc ctcgttgtag agctcgttaa cgcttgggat cgtttgtgtg 1560
gtcgtcgggc ttaccgctat tacgcggatc gcgaactgtt gtggcaagtg cacgagagtc 1620
tgcggtccgc cttggagaag acggtcggcg tcggaagagg cttggcccgc atcggcgatg 1680
gtgaaaacgg gtatttcgga ggaggcggcg aagctgttcg cgacaattga cgacatgtcg 1740
atcgaagatt ggttcctcgt tttcgtagtg ctcttcgcta ttctgtcttt tctgtggggg 1800
atgttcttgg ggttgctttg cgggccaggc gatttggatt tcgcgggtta ctggggactg 1860
gtatttccgt gtttgtaacg cgagggttcc ttaataaatg tctttttcgt agcgttaatt 1920
ccgcgtttgg gttttgcttt ttgcagacag gatgtcgggc tcgagggatc gctattggtc 1980
cttggtcgaa tctctgataa atagagggat cgtgacccgt cagcagtggt atttcaacga 2040
ccgctccgag tacgggtatt acacgaagcg ctacagaggc gcgatgaaat tgtccaactt 2100
gttccgcgac gtgcgtcgtc acatgttctg gacaaaatgt ttggctgact acatgttgac 2160
ccccgaaacc gactttcttc aaatcgagga gaatccgttt tattcggtgt tttcgaaaaa 2220
cggctacgat cccgctctcg tgggctcgat gctgctggct tgggccgcgc ggcaatcgaa 2280
gcgcaatacc gtttggatta ggggagcgcc cgtgacggga gctccttact tggctgaagc 2340
gatcgcttac tgctgcccgt tgatgacgtg cgtcgattgg cgcaacaagc agaatccttt 2400
tgagaagggg ttcgagtctt tgctgttttg gtgggacggc gggcacgtgc cgcaccgttg 2460
cgtggccttg tgtcgccagg tgtttagggg cgaaaacgtc atgtttcccc gggaagacgg 2520
tcaaatgagc gaattggtgc gtacgcccgt gttgttgtac tctgaacacg acgcttgtcg 2580
cacgttagtc aagtggggcg tgttcagtga tgagttttct gacggtttac gtaattccat 2640
gtattgttta gacttgtctg cgcccatgga aggcgctcag tgcgtcactt gtgccgacgc 2700
tcgcgcgttt tttacgtggg cttacccgcg acgcatggat tttgactgtt tttgagcgcg 2760
tgtgacgcgt gtttcgtgtt tgccaataaa gactcagagc gcatttgact gtgactgatg 2820
ctttttattg ttaaatttca acgggaaagc ttgcaaaacg gatagcatat gacgactagc 2880
ctaaagggga aggtttcgag gttgtcctgg acgcgacgac aacagcgcat taagctgttg 2940
ttaccgtagg agggagtgat gaatatctcg taaccgcctc gtatgcggga taaggcgtaa 3000
ttattgcgga cggcgcggtg ggtcagcaag tcgtgcagag gggccagagg gttcaggatg 3060
tagtcgagtc gtcccgtatc gtcgtcgggg gcggtggaga tgagtaagag gttgaaattg 3120
gtgatgttaa cgagaggata ggggttgttc gcacgctctt cctcaaagta ctcgcacact 3180
ttatccaacc agtatgtgca cacgactttg ctcgctgctt gacacatgag gctgtaggga 3240
ttggtgcagg tgcaatcgta tcggatttga ggcaaggggg attgctgctc gaggtcttcg 3300
gtaacggacc agaatttatt gtacagacga cagcgcgccc tgcatttggg catgctgtat 3360
tcgggcagta tttcttcgaa ggagacggtg tctttcctgg ggaacggaaa catgcgttct 3420
ccgtgaagaa actctaagaa aaagatgtca agagcgaggt gagcgggtgc ttccagctgg 3480
gcttctttgc attctagcgt gagagagtgc acgctgtcct gcggaaagag agaaaattac 3540
aggaacacgg tgatgacggg gtacgggaac ttttgcatga gtctcaggaa gcacggtatg 3600
agtgtgtaat ccctgtgcga ccgcggtaac gcgatgcgaa tgtgtccgtc gaccacttct 3660
atcttggcga agggtttgga ggaatacacg aataggttga tgacgccgtc gatgatttcg 3720
atgggaggtc tgccgtgaca tcggaagcag tgcgtgcaac gttttcggac gtattggtcg 3780
aaatggatgg gaaacgggtt ttccgcgatg gggtacgcgg tgagtttggc gtgccactcc 3840
atggtgagtg tggcggctag ggactgacaa aagagcgaga gcggctcctc gcactcgcat 3900
acgtagctcg cgacccattc tcccatccat ttccgacctc cgtcctctac gtcggctaat 3960
aggttgctaa ttttaaagga ggactggaac ggcctcagcc tgaacggcag ggattcgggg 4020
gtaaagtagg gctctgaccg atagggatac atggatcttc cgcataggaa acgcagtaga 4080
tccggatcga aaagggccaa ggccgacacg acccgcaggg gcgaggggaa ttttacggag 4140
tagacgtgtt cgcaggtgtc accgaggttg tcgctgtccc atcttatgtg aaaagtggac 4200
gaataacgag agggagacga gatctgcaaa gaaaagaaag ttttattggg ggataacttt 4260
tttcagtatt cgggagagta gcccgcgcaa gtctgacaaa gcctgttttc gcgcttgcag 4320
tgcatgaccg ccgcgcaagg tacggttctg gaggtcgacg cgacaaagtc ttttaattct 4380
ctgcgggggt tgtggcagac gggggtgagc tcttggggag ccgtgaggaa caggatggtc 4440
gagtttctgc acaggaacga acaggcgata gagacgtcgg tgcaatggat gagcatttgg 4500
ggcgctctga cgaatacggg gcgaccggcg atgtagcagg tgcccgaatt gccctccata 4560
aagtgtagcg cgagcgtgga cggggctctg tcgacgaagg gcacgcagta gagcgacgtg 4620
tgttgggcga cgttggctat ccgctctatg tcgttgagat cgctatctga gatagccatg 4680
gggaagcagg aggcgaggac gttgtacagc agcttggcgt tggcgaggcg tcctccgcac 4740
aggatgagcg tattgatctc tccgttgagc caccgtttga tggtgagggc gcacagagcc 4800
gcgtcgtacc cctctttttc gagcagctga tggaaccagt tctcttcggg attgtagaaa 4860
gcgagtctga gggactcggg ttcctcgtag ggcagttggg cgtagagaga tctggagttt 4920
ccgaatcttt ctcggagggc ccctaggacg tattcccgct cgtccggtct gagggtgtac 4980
tggtcgtagg cgggcatctg gtcccactga gatcggtgag cgatgccgtc tcggaaaagc 5040
cgttcgatga gcgcgtccat ctgcgacgcc gacctgttgg tctcctgaga gtagcgggaa 5100
ggagtctttt tgttcggatc gggtgtgggc ggagtttctg ggacgtaagg aaagccggag 5160
aagtcgtctt cgtcgtcctc cgtgcgcctc ttctgcgacg ggggcggcga ggagggagag 5220
ggactacgat gttccgcttt ccgcttactc tggaagagag aggatatgat caaacttctg 5280
cttgcaggag taacacgggg gatcgatcca ggcggtggag cagagcactc cgaaatcgtt 5340
tttgcagtca aaatcgcgtt ccccttcgtg ctcgcgtatc tgcctcaggt attgcacgag 5400
ctcgctggtg aggaaggaga ttccgtcgtc gttggcggtt tcgaactgga tgatgaggtg 5460
gtacttggga ttggtgggta gttggtctgg gcgcggcagc ttgttgagtc gcacgacgca 5520
cttcacttct tcgatttcga cgagttcgcc ctgatgcgag acgttgaaag ccctgcccct 5580
gagcatttcg ttgacgagtg ggtttttaaa ggggtactcg tgatgcaggg gcgggaagta 5640
gatgagttta gtgacgtctc gcacgggaac gtactggtcg aaatcgaagt tgttgacgtg 5700
cgcggtcagg acgcagtgga acatgcgcaa gatagagttg gtaaaggtgt ctgcgcaggt 5760
ggaggagtcg cccacaatgt agagaacgtt gagagtgtcg tgcaagcgcg aaagcgtgta 5820
gtcgctgagc cagcgaccga gcatgtagct tagggtgacg agattgaacc cttccctttc 5880
cgcgaatctt gcgagatgcc tgctggtttc tatggtgaag gggccgctag ggctattgag 5940
tagggtttgg tagaggctaa agttgcagta gattttcctg gcttcgtgga gaagcagttt 6000
tccctgcaga cctactccgt atcgagcgaa ttgctccgga tccctgagac gccattctcc 6060
ttcggtgaaa atgagtctct tttggagctg gtaggcgagt tcgcccggat tttcgggagc 6120
gttcgaccgc ttattggaac ccgtttgcct cgacctgcga ctctggaggg gaagacaggg 6180
gttcgaagac ggttagttta gggcgcttgg cgagcatgtt tttgcgagcc tctgcgaatc 6240
gtatgatgag cttggaggct ctgaagaatt tttcctgcac gttgatgtta aggggcagga 6300
tggcgtaccg ctgatcgagc acgcaccagc ggaacgagtc ggagacgggg tcgggggagt 6360
aagtgagcca gctgaacttt tggttctgct ggagaaaagc gaagtaggct ttgagtaaca 6420
cgaccagttc tttgctgatg ttgtgggcgt aagagtagag aaagcgcgag aactgaaatt 6480
gggggatgtg gcaagagagg atgtgtattt tggcgttgac cttaagggtc ggcacgtttc 6540
ctatggcggt gcgcggcgcg agattgtgga gaaccacgaa aacgtagaaa gcggtacagt 6600
tagcggaacg agcgaagagc ttagagggga gagcgtgaaa gagcacggag acgctagacc 6660
cggagcagag tttatccatg cactcgtcca tgacgatggc cagcggtccc tgccgggacg 6720
cgttgacgta tacgttgtcc gggtgttcga tgttgaggtt ttcgggcgag gttgcttcct 6780
cgtacgtcat ttctacgaac tccggtcgga aggtgcaggt tctgggcgcg aaggttccgt 6840
cctccttgca gtcgtagttg gattccagaa gttgtaggtt ccaagccgtt tgttccaccg 6900
gcgggatcat attcttctcc ggcgtcacaa agataaccgt ttccgggatc ggctgcagca 6960
tatcgcagga gatcaacgct ctgagcagat ggctcttgcc cgatcccgtc gggccgtaga 7020
tgacgccgat gacgggctgt cggcccatgt tgagcgacgg tagttgtccg tcgacgaggt 7080
accgactgtc ttcctgttct tgccgttcca cggctagctg tatttctagg aacttgtcgt 7140
ccactccccc gagactgtaa aagtcgtcga agctgggaaa tttctgttcg cgaaagagat 7200
gtggggctag gtccgccgct ccttcgtacc agcccgttac ccgtttgtag aactcgcctg 7260
cccgtagata ctcttcctct cggtagcgcc atgttttcct ctttttatta gcgacggccc 7320
cggcctccgc tccgctcatg ggtctccgag gagatccaaa atttcgtcac agtcctcgat 7380
agagagcgac cggtctggga cgtcgaactc gtccgagtcc tctccgtcgt cctcgggagc 7440
gatccgtgcg gccgccgccg ccgcgagcag cctgaggggg gctagaggtt cttcgtggcc 7500
caccgggggc actctccgga cttcgtcggc ggttctcggg ttgggatgtt cggtgtcgta 7560
ggggtataga aagtccccgt ggcgatactg cgtgaggtcc ttccagggtc tcaggactct 7620
ggtgagctgt tcgttgtgga tggtgaacgg atcgtatcgg ctcaccttgt tgaggagcgt 7680
ggttttgaag atggtcctgc gcgtgtgaag ctcgggaatg gcgctgaccg cgccgtacga 7740
ctggtcttcg tgcctctgcc agcagcgttc cagcgtgtcg tatataagct ccgcctgtct 7800
gtgtcccttg gagcgtattt ttccgcttcc cacgtgaccg cactcggggt cgagacagac 7860
ggcgtctttg agtccgtaga gcttgggggc gaggaaaatg gcttcggagc tgtacgtgtc 7920
gccgccgcac cgcttgcact tgatgtcgca gtcgcaggcc cagtagagcg ccgggttctc 7980
cgggtcgaac gtgagccgtg tgtgcgggcc cttgatgcgg tgcgcgcccc tctccttcat 8040
gcgccgatac cccgactcgg tgacgaagag gctgtcggtg tccccgtaga gggtctgggg 8100
gtccctttgg agtaggtgtg tccccctatc gggtccgtgc aggatttcgc accactcgct 8160
gaagaaggcg cgcgaccatc ccaatacgaa gcaggcgatt tgcgtggcgt atctcttatt 8220
ttcgaccatt ttgtctaaat tttccagatg tagaacggtc aacgcttcgg ggggagcgtc 8280
gagcaaccgc atgggtttga aaacggtctc gttggcggtg gcgtagtggg cgtggtcatc 8340
ctcggctata taagggggcg cgtcgagcgc ttcctgcagt tggtgatcga cttccgccag 8400
ggacgcttcg cgagcggtaa gtgcgttttc gagcttactg gtactctcgc cttcgctctc 8460
ttccgtttcc tcctcctcca gctcttcgtt ttcttcttct gctgtccgtg tcgggggttt 8520
ccggtcaaag tactgacgca gttgatgatg tctgaaggcg tcgggggtgc tttcggggca 8580
gacgaccgtg cccgctagcg agtcgtggtt gagcaatgtc acgtgacgca cgatttgagt 8640
gccttcgtag atgccccgcc tgtcgtcctc cgtgaggtcc tgttcgaaga ggatgcgcgt 8700
ggtgtccatg ttggtggcga aggcgccgta gagggcgttg cttagcattt tcgagatgga 8760
ccgcataact tcgtttttgt ctcgatccgc tttctctttg gccgcgatgt ttttgctgac 8820
gtattcagcg cagacggttt tccaagcggg gaacacgatg ttcatgtcgt cgtggagggc 8880
cgtgaccgcc catcctcggt tgtgcaacgt gaggatgtct atgacggtga tgacctcgtc 8940
gtacagcgct tcgttggtcc acacgaggcg cccacctcgc ctggagcaaa tgggaggcag 9000
cgtgtctaag tgttccgcgg gcggaggata agcctcgact tttaggatgc acggtttgat 9060
tcggttgtcg aagtagctga tgggtcgttc ggaactcatg agctcgttga gctcgtcgac 9120
gtgtttggca gtgaatttgg ggtccaaggg catgccgtgg ggcatggggt gggtgagggc 9180
ggaggcgtac atgccgcaga tgtcgaaaac gtatacggga tgtctgtacg gacctagcac 9240
gctgggataa caccgccccc ctcgcaacgc ttgccgtatg tatttgaaca tgggacggtg 9300
cggggcgtat atttcggcga cgtactcggg ggagggaagc ctcttttttc tttttttggt 9360
gtttttgttt gcgcttgcgc actcgacgtc gtgtacgtcg gcgtcgtgag ggttcccctt 9420
gatgtcgttt ttcctgagcg cgacttttct tttgtacttg gaaggggggc gctcgaccgt 9480
gctcgcgcgt tcctgctctt cgacgtacgc ggtgaaggta agttgcttcc aaaaggcgtg 9540
ggtgttgctg ggaatggtgg ggcgcaggaa aatgttaaag tcgccgtgca tgccgagttc 9600
gtctttgaag tacttgtcgt aactgtcgta caaggtgaga gctaatttct gcgtgaccct 9660
tacgtcttgc atgcagtact cgaggcacgc ctgcacgatg tcgtacggac gacccgggtg 9720
ctcctgtcgc catagcgcct tctgttcggc gatgacagaa ggatcctccc agtatctcgc 9780
gacggggaac ccgtcggagt cttgttcgta accgccgatg gagacgtgtt cgttgacggc 9840
ttcgtagggg cactcgcctt tggagagctc tagggcgtac gcggcggcgg ctttggagag 9900
tttggctccg ctggtgagct gcaacgtgtc gcgtaccatg aatcgcacga agacggtgcg 9960
ggagtcgctg ggcgcgacga ctcctcgcgc ccacctgtga agccgcgtgg ggtccttttt 10020
atcgtagttg gggttgggca ggtggaagag gacgtcgtta aagaggaggc ggcctacgcg 10080
cggcatgaag aagcggtcgc accgacacgc ctgcggaaag acgtcgcgcc gttccacgag 10140
ttcggtggcg agcaagagct cgtcgaactt gcagatgttg tgtccgagca cgacgatgtg 10200
aacgttgtta aagtcgtcgg gcagtttgag aggttcggta ggtttgtcga acagttcgta 10260
ggggatgtcg tagcgggaaa ggtatttgcc ttcgctcatg agcttgctga cgtagtctcc 10320
gttggctcga cagtacctgt ccacgagatc tctggcgaag tgttgttgca aacgggaccg 10380
gtaggcgcgg aaccgccggg caacgaagcc gggccgcgtg tctagccagt agaagccctc 10440
ttgtaaagtt tttacttccg ggtcaacgag cgccaggtcc gtggccgcgc gcacgacgtc 10500
gggatcgccc gtgagcatga aacacaacat aaaggggtgc atacgttttc ctttattttc 10560
gaagacggta tacgtctcga tgtcgtaggt gagaaagagt tgcttacagt ggggttgctg 10620
agcggggcat gcgaaacgca cgtgttgcca caggtcgcat ccgaattttt ggaccgtgtg 10680
gtagaaaaag gcggaccgcc tttcgttgca cgtgtgattg cgcacccagt ggcgtccgca 10740
ggcgggacag gtttgcacgg ccgtgcggct gagtatccaa acccagtcgc cgttctggtc 10800
ttgggtgacc agcatggggg gaagaaccgg atctccccgt tccgcgacgc gtttgacgtg 10860
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gaagctaggg gaccgcatag agagcctggc caatggggtg ctttggaatc cggatatccc 38160
gccccaactc ttcaactgca tttctattcg ctcatgggga tcacatggga agcgcgtcat 38220
attcaaaggc cacacccacc ggatgttcca cgcccagctt aggatccgta gcaccgcccc 38280
cgttactagg aaacaggccg gaagcctact cctcagccta tcacagaggc tcctgtgttt 38340
ccccgcccgc tataataccc accccctcgt gatgcaattg ggggtggagt ctaatgccat 38400
gggacttcct atatattcca agagggccct cgagatggcg ctcaatagca tgcgggtgcg 38460
cattgcgcct aacagccacc aggtggcgcc acctgaaata ggaaagacct gtacggtgaa 38520
gcccctcaaa gaagtggaga ccctccagca gggggtcttc agtaccaccg atctaaaaag 38580
agcacttcca gaatggactt ttcgccgact ttttaacgaa actccctata tttgtggctg 38640
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cagagccccg cccaccgaag gacggaagga cccgcccact ctccaagacc tcgcccggct 38760
gggcgtggtc gaaaactgcc tcaagatgag gaggcggggc ataagcccta ggcaccaccc 38820
ctactttcaa taaaccaatc agaacagagc acttgactcc tcctatttgt gggcggggct 38880
atgggtacgg tatagagcgc cccctggcgg ccgtgggccg ccactgcacc cgcgccggac 38940
ttagtctctg gcgcgggccg gtcaatcatt aacccggcgc ccagcacggg cgccccctgc 39000
cggccggaga cagacactgc gtgtctgccg agctccccct ggcggccgag ggccgccact 39060
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acgggcgccc cctgccggcc ggagacagac actgcgtgtc tgccgagctc cccctggcgg 39180
ccgagggccg ccactgcacc cgcgccggac ttagtctctg acaccgcatt tactttcaac 39240
acctttttta tttcagcaca ccgaaatctc gtccgtgtaa accttgtccc caaacctcag 39300
tcccgtacat cgaacccatc cacatatatc tcgaacagct ccagtgctta caagatattt 39360
ccctactcga taattaggat cttgacacca cttattcaaa tacatccgga accactgtcc 39420
gtctggaact tgacttctgt agaactcctc acgaaagtag cgcttcattg ctctagaaca 39480
cttatacaaa tgtttatctc tcaggtcgaa catcgtgagg caaatcaaca gcgtcaaatg 39540
acaagcacaa gaaccgcccg gctgaagccc gacgcagtaa cccataggat gcccgacacc 39600
aatgttagct tcttcgtggt acggatacca cagctccttg atgtcttgaa ctagcttcca 39660
gaagatggca tcgtgcatac accacggagg tacggcaaca ccaaacacca cgtacaaagg 39720
catctcccga cgctctgcaa ttacaactag catcagaaat acatccagca gctatttgaa 39780
aataacagga tctcacccaa aaagaaaaaa tacttacccg aaaccaccag gaaatccccc 39840
ttacgtgata atccggatct cgctgacgct caaggaagcc gccttaaata ccgctcctta 39900
tctctcttcg attacctaag ttacgcccat tgcttatcgc gtaagatacg cccttccaca 39960
tcagcacgga atgtgctgac aagcttaccg cgcccgtttt taatatccgt taattagtaa 40020
cttaggtgaa tcaccaacca cctgccggca tatatctaca cccttgatac ggcggcatcc 40080
attgaagtcg accgccacca tggagtcaac taccgtatcc tcgattctgc tcctatcctt 40140
cttcgtatct tccatcgaat cctatccgct cctgcataac ttcacggcgc tcacgggatc 40200
cgtgcttact cttccctaca gaggacataa ccgacccttt aaattcaaat ggcgccttac 40260
agaccggact aaagtagcaa tctcggatcc tagcaccggc atcacctacc cgtcgggtcc 40320
actcaaagga agagtacatc taaacggcag cgccctcatc gttacatccc tacaactaag 40380
tgacaccggt acctatacaa tcctctcaga ggacaacaca ggaactgaag tcggatactc 40440
ttattacgtc gaagtcagag gtacagaact tcccctcctt ttttctaaat gatatcccgt 40500
tccctctttt ttttttctta ccctagctta ttcttcctag aaccgatgca agctcccacc 40560
atctatacgg atcgctccaa tgactcatct gccatacgcc tcacatgccg agcttccaac 40620
aatctccacc gtaacatcac ataccactgg aaaacagact taatacagac aactaactcg 40680
tctcgatcta tcatcttaaa catcgaagac tatatatccg tcacctgcac ggtcactgat 40740
ggagtcagca aaaacagcat cacgattatg gttccgttga gaggtaatgc ggtttcccgt 40800
tatctcccta tactatgtaa tcatgtccac gcctctaacc cgtatcttta cagcagatgc 40860
ttctacatct acgccttacg gtttgcatcc cactatcatt ttcatgagcg tcctctgcat 40920
aatcctcatc accgcaatta ccgtctactt tgtgaagaag cattgctgcg ataagcaata 40980
taaaataact tgcattaacc cttaccggga atgcttcggc ggcgccggtc tcgtttaaat 41040
aaaaatcaat atatatataa tctctgcttc ctatgattaa atggatatta agtcaagtgg 41100
tgtcagattc ggaaacgatt caggaaaggg aaacgattca ggaaatgatt ttagaaatca 41160
tcattatcaa aaataaatga tttatttata agatcatgat tgatacggat tgaatcagca 41220
gccatcaaat aaaatcacat gatagaatca cagtttaatc aatcgaaatc accgcgcaag 41280
atatggacag tcacgttctc ctctgatgtc ctatccatag attcgctgtc cgtagaatca 41340
gaggtgcaga gcatccgccg aaaccagaaa gttatcgcta ccatcagcaa taacaacata 41400
attaacgcga tcggcagcca cactggaaac tcgccggtct gattggatac cagtccgccg 41460
ccggtcttat aagtggtctc ctcgatcttc tgatcctcct gagtcaaacc aggaattacc 41520
accacataaa atccggtctt tgaatcctgt tgtaagtcta gcgtattagt atacagtccc 41580
gaatcggcag gtgttacgtc tctaatagta acgcaattgg atgtggcatt gtaatgtgtg 41640
cggctcttat agttaggata cattatgggg ttacccatag ctttataaag ctgtaatacg 41700
aacacggtag acgcgtgctc gttagaggac tgaaactccc actccgttat agaagcagag 41760
ctagcatcct tcccacacat gcgtaactcg ccaccttcca aaactaatat acggctcatg 41820
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agtccaggtt ctttaaccct cggaatcaca aatgccgccc tctccatctt attgcaattg 42060
ggggacgggg aatgatacca gaggatcata gtatggtccc tgcactctcc tgtccgtaga 42120
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gcaacggact tcatgacgaa tgcaggaacc agccagcagc agcaggtaga aggtgcgagt 42240
actcgaggca ggcgggaata acaccgcacg ctttccacct cgcttaaata cacatcccaa 42300
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cagttcggct tatcacgtac acacccataa ccttcgcacc cacaaatcgc acagtcagcg 42420
ccataaggaa gtcataaagt taacctttga ttgctctgtc atcataaaaa acgctgagca 42480
aacggaaacg cccaagtaca aatctctctt ccgccacgcc ctcgttaatc aataactagt 42540
aaccgataca tatataccca ctccgttcca tcacacctac actaccttct ctccgcacag 42600
agaaacacct tgatccttac tcctccaaat ccgcttgacc gcattcgaca tgaattcggt 42660
aagtaccgaa ccttttttct aagcctatga ttttgtcgcg tttgatttta atacctcacc 42720
cctttttcct caaaaaggtt tcgtgcttaa tgcttcttct atgcctcacc cttccgagca 42780
ttgatccgct tcccatcacc ccttcctcta aacccgctac cgactccgcc tggaccggca 42840
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tgagcgagga ctgttggttc gaaaatgcca gcggcgatta ccaaccccta ccctgggaac 42960
cgaaagagga aacggtttcc gatcagagcc ctctcaccgc aaccgacccc atccgtgacc 43020
gagcccccgt tatcatccag tcccagtacc gcgcttctaa cggccctacc agtaaagaac 43080
acacttctac tatcgcagcc atctcgaccg cagtgggcat cacggtcctc gtcatcctgg 43140
ccctcgtagc ctactttacc aagtacccca aaccgagacc gcccagatcc atctacatag 43200
gagtagctcc acccgatatg gaactgaagg aaatataata ccatccgccc ttaaccctac 43260
ctttccatga gtcagtattt tcaataaagt ttattgcagt attaattccg tggtttccgc 43320
gttctttctg tcgcgcggga caaagtccgt tccgatcagg aagtccgata tacgtaattc 43380
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aattcgcaga ttctaaaatc ggcattcctg caccagcgat aataaatcac gcccacgata 43560
cgccccatcg ctcttatcac acggtctctg ctgccatcta gcgggcggga gcggtagtgc 43620
gaggtgacag cagtgtcatt catgtaggta tatatagatg atg 43663

Claims (3)

1.一株血清2型禽腺病毒（Fowl Adenovirus 2）毒株，其特征在于，保藏编号为：CCTCCNo：V202236 ；保藏日期：2022年5月7日，保藏单位：武汉大学中国典型培养物保藏中心；其基因序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种疫苗，其特征在于，含灭活的如权利要求1所述的血清2型禽腺病毒毒株。
3.一种如权利要求1所述的血清2型禽腺病毒毒株的用途，其特征在于，用于制备用于预防血清2型禽腺病毒引起的鸡包涵体肝炎和肝炎-心包积液综合征的疫苗或抗体。
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