CN114699464B - 茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用 - Google Patents
茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114699464B CN114699464B CN202210289318.0A CN202210289318A CN114699464B CN 114699464 B CN114699464 B CN 114699464B CN 202210289318 A CN202210289318 A CN 202210289318A CN 114699464 B CN114699464 B CN 114699464B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tea
- exosomes
- liver
- supernatant
- centrifuging
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 title claims abstract description 112
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 112
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 title claims abstract description 30
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims abstract description 31
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 60
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 claims description 12
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 claims description 10
- 238000001085 differential centrifugation Methods 0.000 claims description 9
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 claims description 9
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 claims description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 7
- 235000009024 Ceanothus sanguineus Nutrition 0.000 claims description 6
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 claims description 6
- 240000003553 Leptospermum scoparium Species 0.000 claims description 6
- 235000015459 Lycium barbarum Nutrition 0.000 claims description 6
- 208000010002 alcoholic liver cirrhosis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 6
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 4
- 208000007082 Alcoholic Fatty Liver Diseases 0.000 claims description 3
- 208000018380 Chemical injury Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009208 Cirrhosis alcoholic Diseases 0.000 claims description 3
- 206010016262 Fatty liver alcoholic Diseases 0.000 claims description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026594 alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 3
- 229940100688 oral solution Drugs 0.000 claims description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims description 3
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 30
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 22
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 abstract description 21
- 239000003550 marker Substances 0.000 abstract description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 39
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 32
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 26
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 21
- 208000017096 leukoencephalopathy with calcifications and cysts Diseases 0.000 description 18
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 7
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 108010029483 alpha 1 Chain Collagen Type I Proteins 0.000 description 6
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 6
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 5
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 102100033601 Collagen alpha-1(I) chain Human genes 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000004024 hepatic stellate cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 4
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 description 3
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 3
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 3
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 3
- 244000273928 Zingiber officinale Species 0.000 description 3
- 235000006886 Zingiber officinale Nutrition 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003510 anti-fibrotic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 3
- 235000008397 ginger Nutrition 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 3
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 3
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 3
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 2
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 2
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 2
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 1
- 244000001582 Canarium odontophyllum Species 0.000 description 1
- 235000016299 Canarium odontophyllum Nutrition 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001289529 Fallopia multiflora Species 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 240000004534 Scutellaria baicalensis Species 0.000 description 1
- 235000017089 Scutellaria baicalensis Nutrition 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 241000830536 Tripterygium wilfordii Species 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000002300 anti-fibrosis Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000002737 cell proliferation kit Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000009194 climbing Effects 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000005137 deposition process Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000008622 extracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 206010019692 hepatic necrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007866 hepatic necrosis Effects 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- -1 oral solution Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 235000015398 thunder god vine Nutrition 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 229940126673 western medicines Drugs 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/82—Theaceae (Tea family), e.g. camellia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
- C12N2509/10—Mechanical dissociation
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Botany (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了一种茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝类疾病的药物中的应用。茶叶外泌体能够从基因水平和蛋白水平抑制纤维化标记基因的表达，从而抑制肝类疾病的发展。
Description
技术领域
本申请涉及基因工程与生命科学领域，具体地，涉及茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝纤维化药物中的应用。
背景技术
肝纤维化(Hepatic Fibrosis，HF)是指肝内的结缔组织增生异常，酒精、病毒和化学毒物等长期损伤肝脏，进而导致肝脏细胞受损伤后进行修复，形成程度不一的肝脏纤维化。HF的形成是由于各种致病因子在肝内作用，使结缔组织发生异常增生，导致了肝内的细胞外基质(Extra cellular Matrix，ECM)发生一个过度的病理沉积过程，称为肝纤维化，随着病情加重，肝内小叶结构进行改建，假小叶及结节生成，最终导致肝硬化。肝脏纤维化是发展至肝硬化的一个必经阶段，因此，如何阻断、预防肝纤维化的发生发展，具有十分重要的意义。
在正常情况下，肝脏通过细胞内外的信号传导精确地进行着功能和代谢活动，构成一个相对稳定的状态。然而在慢性肝病过程中，反复而持续的肝脏实质细胞炎症坏死，则会引起大量的纤维结缔组织增生，进而导致大量细胞外基质沉积下来，发生不可逆转的反应，最终形成肝纤维化。近年的科学研究表明，如果在肝纤维化早期能给予有效的对症治疗，则肝纤维化的状态是可以减缓甚至是逆转的。
西药在抗肝纤维化作用研究机制方面取得了很大的进展，但由于毒性反应大，因此用于临床的效果并不明显，所以在应用上面受到了很大的限制。中药在防治肝纤维化的治疗中具有明显的优势，从中药中提取纯化的中药有效成分活性单体在实验研究中均被证实具有明显抗肝纤维化作用。但是研究表明，大剂量的黄芩治疗肝纤维化，会加重肝纤维化程度。此外，雷公藤、何首乌等部分中药均被报道具有肝损伤作用。
已有研究发现茶叶中的茶多酚具有抗菌、防癌抗癌、降血脂、保护心脑血管、护肝和抗氧化等作用。虽然茶叶中有较多的代谢物质对肝脏具有保护作用，但是如何将茶叶中的活性成分更好的传递到肝细胞内，并影响肝细胞的行为，以及阐明茶叶活性成分调节肝细胞的分子机制，有待进一步的深入研究。
此外，植物外泌体对肝损伤具有一定的保护作用。将生姜来源囊泡给正常小鼠口服，发现主要在肝脏和肠系膜淋巴结中累积，作用于肝细胞时可抑制活性氧(ROS)产生。囊泡处理后的酒精性肝损伤小鼠肝脏中的脂滴减少，甘油三酯水平下降，肝脏的重量减轻，明显优于未给药模型组，表明生姜囊泡具有预防和治疗酒精性肝损伤的潜力。但是目前尚不清楚植物外泌体对肝纤维化是否具有调节作用。
发明内容
本公开的目的在于提供茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝类疾病的药物中的应用以及一种预防和/或治疗肝类疾病的药物，茶叶外泌体从基因水平和蛋白水平均可以抑制纤维化标记基因的表达，从而抑制肝类疾病的发展。
为了实现上述目的，一方面，本公开提供了茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝类疾病的药物中的应用。
根据本公开，其中，所述肝类疾病包括肝硬化、肝炎、肝纤维化和脂肪肝。
根据本公开，其中，所述肝类疾病包括化学性损伤肝纤维化、病毒性损伤肝纤维化、脂肪性肝炎、酒精性肝硬化和脂肪性肝硬化。
根据本公开，其中，所述化学性损伤肝纤维化包括四氯化碳诱导的肝纤维化。
根据本公开，其中，所述茶叶外泌体通过包括以下步骤的方法制备得到：将新鲜采摘的茶叶经过PBS缓冲液清洗干净，研磨成匀浆，经过差速离心处理，0.2～0.4μm滤膜过滤，得到茶叶外泌体。
差速离心法包括：将茶叶匀浆在100-3000g离心10-20min，收集上清；收集的上清液2-8℃，3000-8000g离心20-40min，收集上清；收集的上清液2-8℃，8000-12000g离心30-60min，收集上清；收集的上清液，50000-200000g离心60-180min，弃上清，使用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬沉淀；再次50000-200000g离心60-180min，弃上清，少量PBS重悬沉淀；之后使用滤膜过滤得到茶叶外泌体。
根据本公开，其中，所述茶叶为选自福鼎大白、梅占和/或老川茶树上的新芽和/或新叶。
另一方面，本公开提供了一种用于预防和/或治疗肝类疾病的药物，其中，所述药物包括有效量的茶叶外泌体和药学上可接受的载体。
根据本公开，其中，所述药物中，所述茶叶外泌体的含量为1-50μM。
根据本公开，其中，所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、混悬剂、口服溶液、粉针和注射剂中的至少一种。
根据本公开，其中，所述肝类疾病包括肝硬化、肝炎、肝纤维化和脂肪肝；所述肝类疾病包括化学性损伤肝纤维化、病毒性损伤肝纤维化、脂肪性肝炎、酒精性肝硬化和脂肪性肝硬化；所述化学性损伤肝纤维化包括四氯化碳诱导的肝纤维化。
通过上述技术方案，本公开提供了茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝类疾病的药物中的应用以及一种用于预防和/或治疗肝类疾病的药物，茶叶外泌体从基因水平和蛋白水平均可以抑制纤维化标记基因的表达，从而抑制肝类疾病的发展。
本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
图1是LCC茶树新芽及附近新叶中分离的外泌体的电子显微镜图和TEM图。
图2是FD茶树新芽及附近新叶中分离的外泌体的电子显微镜图和TEM图。
图3是MZ茶树新芽及附近新叶中分离的外泌体的电子显微镜图和TEM图。
图4是茶叶外泌体在肝星状细胞LX-2中的吞噬吸收情况。
图5是茶叶外泌体对非活化LX-2细胞增殖的影响。
图6是茶叶外泌体对活化LX-2细胞增殖的影响。
图7是茶叶外泌体对TGF-β1活化的LX-2细胞纤维化标记基因表达的影响。
图8是茶叶外泌体对非活化LX-2细胞纤维化标记基因表达的影响。
图9是茶叶外泌体对LX-2细胞迁移程度的影响。
图10是动物(C57BL/6J小鼠)实验的流程图解。
图11是茶叶外泌体对小鼠肝脏功能的影响。
图12是茶叶外泌体对肝脏组织学变化的影响。
图13是Western Blot法测定茶叶外泌体对肝脏组织中纤维化标记基因的表达水平的影响。
图14是免疫荧光分析法测定茶叶外泌体对小鼠肝脏中纤维化标记基因α-SMA表达的影响。
图15是免疫荧光分析法测定茶叶外泌体对小鼠肝脏中纤维化标记基因COL1A1表达的影响。
具体实施方式
以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
一方面，本公开提供了茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝类疾病的药物中的应用。
可选地，本公开所述的茶叶外泌体包括通过差速离心获得的茶叶囊泡或活性成分、经过表面修饰的茶叶外泌体和茶叶外泌体转染细胞后重新分泌的外泌体。
可选地，其中，所述肝类疾病包括肝硬化、肝炎、肝纤维化和脂肪肝。
可选地，其中，所述肝类疾病包括化学性损伤肝纤维化、病毒性损伤肝纤维化、脂肪性肝炎、酒精性肝硬化和脂肪性肝硬化。
可选地，其中，所述化学性损伤肝纤维化包括四氯化碳诱导的肝纤维化。
可选地，其中，所述茶叶外泌体通过包括以下步骤的方法制备得到：将新鲜采摘的茶叶经过PBS缓冲液清洗干净，研磨成匀浆，经过差速离心处理，0.2～0.4μm滤膜过滤，得到茶叶外泌体。
可选地，差速离心法处理茶叶匀浆的过程包括：将茶叶匀浆在100-3000g离心10-20min，收集上清；收集的上清液2-8℃，3000-8000g离心20-40min，收集上清；收集的上清液2-8℃，8000-12000g离心30-60min，收集上清；收集的上清液，50000-200000g离心60-180min，弃上清，使用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬沉淀；再次50000-200000g离心60-180min，弃上清，少量PBS重悬沉淀；之后使用滤膜过滤得到茶叶外泌体。
可选地，其中，所述茶叶为选自福鼎大白、梅占和/或老川茶树上的新芽和/或新叶。
另一方面，本公开提供了一种用于预防和/或治疗肝类疾病的药物，其中，所述药物包括有效量的茶叶外泌体和药学上可接受的载体。
可选地，其中，所述药物中，所述茶叶外泌体的含量为1-50μM。
可选地，其中，所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、混悬剂、口服溶液、粉针和注射剂中的至少一种。
可选地，其中，肝类疾病包括肝硬化、肝炎、肝纤维化和脂肪肝；所述肝类疾病包括化学性损伤肝纤维化、病毒性损伤肝纤维化、脂肪性肝炎、酒精性肝硬化和脂肪性肝硬化；所述化学性损伤肝纤维化包括四氯化碳诱导的肝纤维化。
以下通过实施例进一步详细说明本公开。实施例中所用到的原材料均可通过商购途径获得。
实施例1
本实施例从茶叶中分离具有囊泡结构的植物外泌体。
BCA试剂盒购自美国Thermo Fisher Scientific公司，透射电子显微镜(日本JEM-1400)由成都旭海润东生物科技有限公司提供，纳米颗粒跟踪分析仪(Particle Metrix)由德国Meerbusch公司生产，超速离心机(L-100XP)为美国Beckman公司生产。
新鲜采摘福鼎大白(简称FD)、梅占(简称MZ)和老川茶(简称LCC)三种茶树新芽及附近1-2片新叶，作为后续研究的三种茶叶。通过差速离心法分离三种茶叶中的外泌体，具体步骤为：茶叶经PBS清洗后，在研钵中研磨成匀浆，1000g离心10min，收集上清；收集的上清液4℃，3000g下离心20min，收集上清；收集的上清液在4℃，10000g下离心30min，收集上清；收集的上清液，100000g离心120min，弃上清，使用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬沉淀；再次100000g离心60min，弃上清，1mL PBS重悬沉淀，0.22μm滤膜过滤除菌。使用BCA(蛋白质定量)法测定茶叶外泌体中的总蛋白含量，通过纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)测定外泌体的粒径，使用透射电子显微镜(TEM)观察外泌体的形态和结构。
茶叶外泌体的分离及表征：通过差速离心法分离LCC、FD、MZ三种茶叶中的外泌体，电子显微镜观察发现茶叶外泌体含有典型的脂双层膜结构，大小约100nm，符合植物外泌体的特征(如图1A、图2A、图3A所示)。通过NTA测定LCC、FD、MZ三种茶叶外泌体的粒径，发现三种茶叶外泌体的粒径主要分布于50-200nm范围，与TEM观察结果一致(图1B、图2B、图3B)。
由此表明，通过上述方法能够从茶叶中分离出具有囊泡结构的植物外泌体。
实施例2
本实施例测定茶叶外泌体在人源肝脏星状细胞(LX-2)中的吸收情况。
实验用肝星状细胞购自上海中乔新舟生物科技有限公司，24孔细胞爬片(WHB-24-CS-10)购自上海卧宏生物科技有限公司，试剂DiI(CAS41085-99-8)购自美国AAT Bioquest公司，DAPI(BL105A)购自biosharp公司，荧光显微镜(Leica Microsystems)为德国Wetzlar公司生产。
DiI标记外泌体：将DiI粉末用DMSO配为工作浓度1mM的溶液，0.22μm滤膜过滤，避光保存。取30μg外泌体与1μM的DiI避光共孵育30min，PBS重悬。100000g离心2h，去除多余DiI染料。
DiI标记的外泌体与细胞共培养：将LX-2细胞接种至细胞爬片，细胞接种浓度为1×104个/孔。24h后，将DiI标记的外泌体以10μg/mL的浓度加入培养基中。24h后，共聚焦显微镜观察外泌体被LX-2细胞摄取情况。
荧光染色及共聚焦显微镜观察：将细胞爬片用PBS清洗2次，每次5min，动作轻柔，洗去细胞碎片。加入4％多聚甲醛固定30min，再用PBS清洗2次，每次5min，洗去残余多聚甲醛。晾干后，Triton X-100和PBS以1:1000配制，在室温下反应10min进行胞膜打孔，再次用PBS清洗，晾干。1mg/mL的DAPI以1:50配成工作液对细胞核进行染色，避光条件下孵育15min，PBS清洗2次，每次5min，洗去残余DAPI，取出爬片，滤纸吸去残留液体，使用含抗荧光淬灭剂的封片剂封片，共聚焦显微镜下观察并采集图像。
统计方法：采用SPSS 25软件对数据进行统计学分析，计量资料采用非参数检验，数据以式表示，组间多重比较分析采用One-way ANOVA结合LSD多重比较分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。
已有研究表明生姜来源的植物囊泡具有预防和治疗酒精性肝损伤的潜力。为了阐明茶叶外泌体对肝纤维化是否具有调节作用，本发明选择被广泛用于纤维化研究的肝星状细胞为细胞模型。
为了验证LCC、FD、MZ三种茶叶外泌体是否能被受体细胞摄取，用荧光染料DiI标记茶叶来源的外泌体，与LX-2细胞共培养24h，再用DAPI对细胞核进行染色，共聚焦显微镜观察三种DiI标记的外泌体在受体细胞中的定位情况。结果显示，在LX-2细胞内可观察到大量红色荧光，即DiI标记的外泌体，并且三种茶叶来源的外泌体主要定位在LX-2细胞的胞浆区域，表明本发明分离的三种茶叶外泌体均可被LX-2细胞摄取(图4A、图4B)。
实施例3
本实施例考察茶叶外泌体对人源肝脏星状细胞的纤维化的作用。
实验用肝星状细胞(LX-2)购自上海中乔新舟生物科技有限公司；TGF-β1购自美国RD公司。CCK8细胞增殖检测试剂盒(BS350B)购自biosharp公司。总RNA提取试剂盒(MiPureCell/Tissue miRNA Kit，RC201)、逆转录试剂盒(III RT SuperMix for qPCR，R323-01)和qPCR试剂盒(ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix，Q711-02/03)购自南京诺唯赞生物科技有限公司。α-SMA抗体(23660-1-AP)proteintech公司，COL1A1抗体(ab34710)购自abcom公司。
在LX-2细胞的对数增殖期，用胰蛋白酶消化并传代。以2×105个细胞/孔种植于48孔板或6孔板中。当细胞贴壁(大于6h)，根据要求实验分组设对照组(不做任何处理正常LX-2细胞)，PBS组(TGF-β1处理LX-2细胞)，LCC组(TGF-β1处理LX-2细胞后LCC外泌体治疗)，FD组(TGF-β1处理LX-2细胞后FD外泌体治疗)，MZ组(TGF-β1处理LX-2细胞后MZ外泌体治疗)。48小时后，根据说明书对48孔板细胞使用CCK8试剂盒检测细胞增殖情况，根据说明书对六孔板细胞进行总RNA提取和反转录成cDNA并通过荧光定量PCR分析LX-2中纤维化标记基因α-SMA和COL1A1的表达情况，通过免疫荧光分析LX-2中α-SMA的蛋白表达情况。逆转录引物由上海生工生物工程股份有限公司设计和合成(具体序列如表1所示)。
表1 实施例2中逆转录引物序列
| SEQ ID No | 名称 | 引物序列 |
| 1 | LP-hCollal | TGATGGGATTCCCTGGACCT |
| 2 | RP-hCollal | GGGCCTTGTTCACCTCTCTC |
| 3 | LP-hα-SMA | TTCATCGGGATGGAGTCTGCTGG |
| 4 | RP-hα-SMA | TCGGTCGGCAATGCCAGGGT |
| 5 | LP-hGAPDH | AAGGTCATCCATGACAACTTTGGC |
| 6 | RP-hGAPDH | ACAGTCTTCTGGGTGGCAGTGAT |
免疫荧光方法：在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；用4％的多聚甲醛固定爬片15min，PBS浸洗玻片3次，每次3min；吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBS 5min×4次洗去多余的DAPI；将盖玻片用PBS洗涤三次，并取出立于空气中进行干燥，用防荧光猝灭封片剂进行封片。
统计方法：采用SPSS 25软件对数据进行统计学分析，计量资料采用非参数检验，数据以式表示，组间多重比较分析采用One-way ANOVA结合LSD多重比较分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。
茶叶外泌体对细胞增殖的影响：为了阐明茶叶外泌体被LX-2细胞摄取后对肝纤维化是否具有调节作用，本发明分析茶叶外泌体对LX-2细胞增殖的影响，如图5所示，三种茶叶外泌体对LX-2细胞的增殖没有显著影响，对LX-2细胞没有毒性作用。
本发明通过TGF-β1激活LX-2从静止状态到纤维化状态，以模拟肝纤维化过程。如图6所示，用TGF-β1处理LX-2细胞后，能显著诱导其增殖，而在加入LCC、FD、MZ三种茶叶外泌体之后，LX-2细胞的增殖程度显著被削弱，说明茶叶外泌体能够部分抵消TGF-β1诱导的LX-2生长趋势。
茶叶外泌体对LX-2细胞纤维化标记基因表达的影响：为了检测茶叶外泌体是否具有一定的抗纤维化活性。本发明检测了LX-2细胞中纤维化标记基因的表达情况。如图7所示，TGF-β1处理LX-2细胞后，标记基因α-SMA和COL1A1均显著上调表达(前者上调约3.5倍，后者约2.3倍)，而茶叶外泌体存在时，两个标记基因的表达均呈下降趋势。其中外泌体LCC的下调作用最强。这表明茶叶外泌体可以显著减弱纤维化标记基因的表达，从而表明茶叶外泌体具有抗纤维化活性。
茶叶外泌体对LX-2细胞纤维化进程的影响：本发明通过免疫荧光染色分析α-SMA在LX-2细胞中的表达情况。TGF-β1处理LX-2后，α-SMA在细胞核周围的表达荧光显著增强并出现细长纤维丝，而使用LCC、FD、MZ三种茶叶外泌体处理后，α-SMA的荧光则有所减弱，同时纤维丝减少，其中LCC处理后的荧光减弱得最显著(图8)，表明茶叶外泌体从基因水平和蛋白水平均可以抑制纤维化标记基因的表达。
实施例4
本实施例考察茶叶外泌体对LX-2细胞迁移的影响作用。
培养LX-2细胞到基本铺满6孔板时，用枪头在培养孔中间制造划痕，更换培养基后，分别加入LCC、FD、MZ三种茶叶外泌体，24h后通过测量划痕面积分析茶叶外泌体对细胞迁移的影响情况。
LX-2细胞迁移能力的增强也与其纤维化进程密切相关。为了进一步阐明茶叶外泌体的抗纤维化活性，本发明使用划痕试验评估LX-2的迁移能力，如图9所示，茶叶外泌体LCC、FD显著减少了LX-2细胞的迁移程度。与对照相比，LCC减少约54％，FD减少约23％，MZ减少约12％。以上数据表明茶叶外泌体具有抑制LX-2细胞迁移的抗纤维化活性。
实施例5
本实施例考察茶叶外泌体对四氯化碳诱导的肝纤维化的作用。
实验动物：本发明所用实验动物为C57BL/6小鼠，4周龄，体重18-21g，雄性，由成都达硕实验动物有限公司提供。实验用四氯化碳(CCl4)、橄榄油购自上海易恩化学技术有限公司。
C57BL/6J小鼠25只，SPF级，分为正常对照组，CCl4模型组，LCC外泌体治疗组(LCC组)，FD外泌体治疗组(FD组)，MZ外泌体治疗组(MZ组)，每组5只。造模方式(图10)：对照组给予橄榄油腹腔注射，其余各组均给予1％CCl4橄榄油腹腔注射，2mL/kg，每周注射2次，共注射5周。从第3周起，对照组和模型组予以等体积的PBS溶液，茶叶外泌体治疗组分别给予LCC、FD、MZ三种外泌体灌胃治疗，1mg/kg，溶于PBS溶液，每日1次，共干预3周。第5周末结束后麻醉处死所有小鼠，留取血清及肝组织，检测血清肝功能、肝组织病理(H&E)以及纤维化标记基因α-SMA和COL1A1表达水平检测。
统计方法：采用SPSS 25软件对数据进行统计学分析，计量资料采用非参数检验，数据以式表示，组间多重比较分析采用One-way ANOVA结合LSD多重比较分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。
茶叶外泌体对血清学指标的影响：与对照组比较，模型组血清AST和ALT活性显著升高(P<0.01)；与模型组相比，茶叶外泌体治疗组血清AST、ALT活性显著降低(P<0.05，P<0.01)，具体见图11。
茶叶外泌体对肝脏组织学变化的影响：H&E染色显示，正常组小鼠肝小叶结构清晰，肝细胞索由中央静脉向四周放射排列；模型组小鼠肝细胞广泛坏死，正常肝小叶结构消失，纤维间隔见大量炎性细胞浸润，胶原沉积较严重，脂滴数量较丰富；与模型组相比，茶叶外泌体治疗组肝细胞坏死和炎症细胞浸润明显减少，脂滴数量较少(图12)。
茶叶外泌体对肝脏组织中纤维化标记基因变化的影响：茶叶外泌体对小鼠肝脏中纤维化标记基因α-SMA表达的影响的图解表示。通过免疫印迹和免疫荧光分析显示，与正常组小鼠相比，模型组小鼠肝细胞中纤维化标记基因α-SMA和COL1A1的蛋白表达水平显著升高，表明肝纤维化发生较为严重；与模型组相比，茶叶外泌体治疗组中纤维化标记基因α-SMA和COL1A1的蛋白表达水平显著降低，肝细胞的纤维化程度有所减轻，其中LCC治疗效果最为明显，标记基因的表达水平接近正常组小鼠(P>0.5)(图13-15)。
通过上述实验，可以表明茶叶外泌体对肝纤维化具有良好的治疗效果，可以用于制备治疗或预防肝纤维化的药物。
以上详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。
序列表
<110> 成都市第三人民医院
<120> 茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用
<130> 25001CDS
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tgatgggatt ccctggacct 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gggccttgtt cacctctctc 20
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ttcatcggga tggagtctgc tgg 23
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tcggtcggca atgccagggt 20
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
aaggtcatcc atgacaactt tggc 24
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
acagtcttct gggtggcagt gat 23
Claims (9)
1.茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝类疾病的药物中的应用；
所述茶叶外泌体通过包括以下步骤的方法制备得到：将新鲜采摘的茶叶经过PBS缓冲液清洗干净，研磨成匀浆，经过差速离心处理，0.2～0.4μm滤膜过滤，得到茶叶外泌体；
差速离心法包括：将茶叶匀浆在100-3000g离心10-20min，收集上清；收集的上清液2-8℃，3000-8000g离心20-40min，收集上清；收集的上清液2-8℃，8000-12000g离心30-60min，收集上清；收集的上清液，50000-200000g离心60-180min，弃上清，使用PBS重悬沉淀；再次50000-200000g离心60-180min，弃上清，使用PBS重悬沉淀；之后使用滤膜过滤得到茶叶外泌体。
2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述肝类疾病包括肝硬化、肝炎、肝纤维化和脂肪肝。
3.根据权利要求2所述的应用，其中，所述肝类疾病包括化学性损伤肝纤维化、病毒性损伤肝纤维化、脂肪性肝炎、酒精性肝硬化和脂肪性肝硬化。
4.根据权利要求3所述的应用，其中，所述化学性损伤肝纤维化包括四氯化碳诱导的肝纤维化。
5.根据权利要求1所述的应用，其中，所述茶叶为选自福鼎大白、梅占和/或老川茶树上的新芽和/或新叶。
6.一种用于预防和/或治疗肝类疾病的药物，其特征在于，所述药物包括有效量的茶叶外泌体和药学上可接受的载体；
其中，所述茶叶外泌体通过包括以下步骤的方法制备得到：将新鲜采摘的茶叶经过PBS缓冲液清洗干净，研磨成匀浆，经过差速离心处理，0.2～0.4μm滤膜过滤，得到茶叶外泌体；
所述差速离心法包括：将茶叶匀浆在100-3000g离心10-20min，收集上清；收集的上清液2-8℃，3000-8000g离心20-40min，收集上清；收集的上清液2-8℃，8000-12000g离心30-60min，收集上清；收集的上清液，50000-200000g离心60-180min，弃上清，使用PBS重悬沉淀；再次50000-200000g离心60-180min，弃上清，使用PBS重悬沉淀。
7.根据权利要求6所述的药物，其中，所述药物的剂型包括片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、混悬剂、口服溶液、粉针和注射剂中的至少一种。
8.根据权利要求6所述的药物，其中，所述药物中，所述茶叶外泌体的含量为1-50μM。
9.根据权利要求6所述的药物，其中，所述肝类疾病包括肝硬化、肝炎、肝纤维化和脂肪肝；
所述肝类疾病包括化学性损伤肝纤维化、病毒性损伤肝纤维化、脂肪性肝炎、酒精性肝硬化和脂肪性肝硬化；
所述化学性损伤肝纤维化包括四氯化碳诱导的肝纤维化。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210289318.0A CN114699464B (zh) | 2022-03-22 | 2022-03-22 | 茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210289318.0A CN114699464B (zh) | 2022-03-22 | 2022-03-22 | 茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114699464A CN114699464A (zh) | 2022-07-05 |
| CN114699464B true CN114699464B (zh) | 2024-01-23 |
Family
ID=82168359
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210289318.0A Active CN114699464B (zh) | 2022-03-22 | 2022-03-22 | 茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114699464B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20170103697A (ko) * | 2016-03-03 | 2017-09-13 | 고려대학교 산학협력단 | 엑소좀 또는 엑소좀 유래 리보핵산을 포함하는 간섬유증 예방 또는 치료용 조성물 |
| CN111297790A (zh) * | 2020-02-25 | 2020-06-19 | 暨南大学 | 茶叶外囊泡的应用 |
| KR102248258B1 (ko) * | 2020-05-04 | 2021-05-04 | 주식회사 바이오에프디엔씨 | 녹차 식물세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 조성물 |
| WO2021147924A1 (zh) * | 2020-01-20 | 2021-07-29 | 医微细胞生物技术(广州)有限公司 | 囊泡在制备用于治疗或预防肝脏疾病药物中的应用 |
-
2022
- 2022-03-22 CN CN202210289318.0A patent/CN114699464B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20170103697A (ko) * | 2016-03-03 | 2017-09-13 | 고려대학교 산학협력단 | 엑소좀 또는 엑소좀 유래 리보핵산을 포함하는 간섬유증 예방 또는 치료용 조성물 |
| WO2021147924A1 (zh) * | 2020-01-20 | 2021-07-29 | 医微细胞生物技术(广州)有限公司 | 囊泡在制备用于治疗或预防肝脏疾病药物中的应用 |
| CN111297790A (zh) * | 2020-02-25 | 2020-06-19 | 暨南大学 | 茶叶外囊泡的应用 |
| KR102248258B1 (ko) * | 2020-05-04 | 2021-05-04 | 주식회사 바이오에프디엔씨 | 녹차 식물세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피부개선용 조성물 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 刘家奇 ; 邵宛芳 ; 赵宝权 ; 堵源康 ; 秦庭发 ; 张可 ; 赵博 ; 侯艳 ; .普洱茶(熟茶)、铁观音、红茶对非酒精性脂肪肝辅助保护作用的研究.云南农业大学学报(自然科学).2013,(04),58-64. * |
| 叶倩伶 ; 龙富立 ; 毛德文 ; 王明刚 ; .外泌体参与肝脏疾病的研究进展.胃肠病学和肝病学杂志.2020,第29卷(第08期),949-954. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114699464A (zh) | 2022-07-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yang et al. | Paecilomyces cicadae-fermented Radix astragali activates podocyte autophagy by attenuating PI3K/AKT/mTOR pathways to protect against diabetic nephropathy in mice | |
| Li et al. | Pentamethylquercetin protects against diabetes-related cognitive deficits in diabetic Goto-Kakizaki rats | |
| Zhang et al. | The effect of total lignans from Fructus Arctii on Streptozotocin-induced diabetic retinopathy in Wistar rats | |
| CN114699464B (zh) | 茶叶外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用 | |
| You et al. | Exosomal MicroRNA profiling in vitreous humor derived from pathological myopia patients | |
| US20230057861A1 (en) | Use of corydalis saxicola bunting and formulation thereof in preparation of drug for treating non-alcoholic fatty liver diseases | |
| Huang et al. | Licochalcone B confers protective effects against LPS-Induced acute lung injury in cells and mice through the Keap1/Nrf2 pathway | |
| CN115590914B (zh) | 一种红大戟提取物及其在制备抗乳腺癌药物中的应用 | |
| CN111440776A (zh) | 一种新的NETosis抑制剂TcpC及应用 | |
| Olivos et al. | Entamoeba histolytica: mechanism of decrease of virulence of axenic cultures maintained for prolonged periods | |
| CN106520805A (zh) | 急性淋巴细胞白血病小鼠模型及建模方法 | |
| CN102631358A (zh) | 虎杖苷在制备糖尿病肾病治疗药物中的应用 | |
| CN107137404B (zh) | 甲基莲心碱在制备预防或治疗急性呼吸窘迫综合征药物中的应用 | |
| Xiong et al. | Astragaloside IV—mediated endothelial progenitor cell exosomes promote autophagy and inhibit apoptosis in hyperglycemic damaged endothelial cells via miR-21/PTEN axis | |
| CN114940487A (zh) | 一种人参碳点及其制备方法和用途 | |
| CN113116883A (zh) | 一种用于治疗白血病的化合物、药物及其应用 | |
| CN111870695A (zh) | 一种治疗白癜风的药物及应用 | |
| CN115120636B (zh) | 一种无花果乳浆提取物在制备治疗非小细胞肺癌药物中的应用 | |
| CN106214777B (zh) | 西北沼委陵菜抗hiv-1病毒有效部位及制法和应用 | |
| CN115844863B (zh) | 3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用 | |
| CN109602745A (zh) | 2-吲哚甲酰胺化合物在制备抗癌药物中的应用 | |
| CN109908129A (zh) | 千层纸素在制备抑制肺癌侵袭转移药物中的应用 | |
| CN117919315A (zh) | 一种花椒外泌体在制备防治炎症性肠病药物中的应用 | |
| Isogai et al. | Effect of an aldose reductase inhibitor on glomerular basement membrane anionic sites in streptozotocin-induced diabetic rats | |
| CN115634222B (zh) | 枳椇双黄酮a在制备具有抗肝纤维化作用的药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |