CN115844863B - 3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用 - Google Patents
3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115844863B CN115844863B CN202211513854.0A CN202211513854A CN115844863B CN 115844863 B CN115844863 B CN 115844863B CN 202211513854 A CN202211513854 A CN 202211513854A CN 115844863 B CN115844863 B CN 115844863B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hydroxy
- cervical cancer
- morinda
- quinone
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 52
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 34
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 title claims abstract description 34
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 34
- 241000157491 Morinda Species 0.000 title claims abstract description 29
- 235000017524 noni Nutrition 0.000 title claims abstract description 29
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 6
- -1 adsorption carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 claims 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 20
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 12
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 abstract description 11
- 102000010400 1-phosphatidylinositol-3-kinase activity proteins Human genes 0.000 abstract description 9
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 abstract description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 abstract description 4
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 abstract description 2
- 238000013043 cell viability test Methods 0.000 abstract description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 abstract description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 82
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 102000012406 Carcinoembryonic Antigen Human genes 0.000 description 7
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 101100243447 Arabidopsis thaliana PER53 gene Proteins 0.000 description 5
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 5
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 5
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 5
- 101001056180 Homo sapiens Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Proteins 0.000 description 5
- 102100026539 Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Human genes 0.000 description 5
- 101150080074 TP53 gene Proteins 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 5
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 4
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 3
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 3
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 3
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- IPDMWUNUULAXLU-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1-methoxy-9,10-dioxo-2-anthracenecarboxaldehyde Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C=C(O)C(C=O)=C2OC IPDMWUNUULAXLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BGEBZHIAGXMEMV-UHFFFAOYSA-N 5-methoxypsoralen Chemical compound O1C(=O)C=CC2=C1C=C1OC=CC1=C2OC BGEBZHIAGXMEMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000434018 Euphorbia pekinensis Species 0.000 description 2
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 2
- 101000911513 Homo sapiens Uncharacterized protein FAM215A Proteins 0.000 description 2
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 2
- 102100026728 Uncharacterized protein FAM215A Human genes 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N curcumin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)CC(=O)\C=C\C=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 229940096998 ursolic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- WCGUUGGRBIKTOS-GPOJBZKASA-N (3beta)-3-hydroxyurs-12-en-28-oic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C)[C@H](C)[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C WCGUUGGRBIKTOS-GPOJBZKASA-N 0.000 description 1
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 1
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 1
- DBMJZOMNXBSRED-UHFFFAOYSA-N Bergamottin Natural products O1C(=O)C=CC2=C1C=C1OC=CC1=C2OCC=C(C)CCC=C(C)C DBMJZOMNXBSRED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010007247 Carbuncle Diseases 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000096284 Gynochthodes officinalis Species 0.000 description 1
- 206010048612 Hydrothorax Diseases 0.000 description 1
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 1
- 240000003396 Knoxia roxburghii Species 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N Resveratrol Natural products OC1=CC=CC(C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)=C1 QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001107098 Rubiaceae Species 0.000 description 1
- LUKBXSAWLPMMSZ-OWOJBTEDSA-N Trans-resveratrol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1\C=C\C1=CC(O)=CC(O)=C1 LUKBXSAWLPMMSZ-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 229940124532 absorption promoter Drugs 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000005775 apoptotic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- KGZDKFWCIPZMRK-UHFFFAOYSA-N bergapten Natural products COC1C2=C(Cc3ccoc13)C=CC(=O)O2 KGZDKFWCIPZMRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002045 bergapten Drugs 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 238000010293 colony formation assay Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 229940109262 curcumin Drugs 0.000 description 1
- 235000012754 curcumin Nutrition 0.000 description 1
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 description 1
- VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N diferuloylmethane Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C=CC(=O)CC(=O)C=CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000007227 lymph node tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- PQIOSYKVBBWRRI-UHFFFAOYSA-N methylphosphonyl difluoride Chemical group CP(F)(F)=O PQIOSYKVBBWRRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006950 reactive oxygen species formation Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 229940016667 resveratrol Drugs 0.000 description 1
- 235000021283 resveratrol Nutrition 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- PLSAJKYPRJGMHO-UHFFFAOYSA-N ursolic acid Natural products CC1CCC2(CCC3(C)C(C=CC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC34C)C2C1C)C(=O)O PLSAJKYPRJGMHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
本发明公开了3‑羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用。本发明首次提供了3‑羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物方面的良好应用，体外实验表明浓度为10‑80μM/L的3‑羟基巴戟醌可明显抑制宫颈癌HeLa细胞增殖，促进凋亡；细胞活力试验表明3‑羟基巴戟醌对正常细胞的毒性低，表明3‑羟基巴戟醌有良好的药物前景，可以开发成治疗宫颈癌的药物，为临床宫颈癌提供了一种新思路。另外，本发明通过研究发现3‑羟基巴戟醌还能够通过PI3K/AKT/NF‑κB信号通路抑制宫颈癌细胞的增殖，这对了解宫颈癌的发病机制，制定新的治疗策略具有十分重要的意义，为宫颈癌提供一个潜在的治疗方案。
Description
技术领域
本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用。
背景技术
癌症负担和癌症死亡率正在增加，其中宫颈癌是全世界妇女中第四常见的癌症。宫颈癌的治疗主要包括手术，放疗，化疗和靶向治疗。尽管最近取得了突破，但由于有限的治疗选择，在复发性转移性宫颈癌的病例中的存活率仍然很低，因此迫切需要更有效的治疗。在过去30年中，大约61%的生物活性天然化合物已用于癌症治疗。基于天然的化合物构成癌症药物发现的重要研究领域，基于其安全性和有效性，许多化合物在许多癌症中显示出治疗潜力。例如，姜黄素、白藜芦醇、紫杉醇是治疗癌症的有效的天然抗癌剂。因此，天然药物化学需要进行深入研究，以找到更安全，更有效的治疗疾病的化合物。
肿瘤的治疗原理基于传统中药中的“扶正祛邪”。“祛邪”即消除侵袭机体的致病因素，如诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，抑制血管生成，诱导肿瘤细胞分化。红大戟(Knoxia roxburghii (Spreng.) M. A. Rau)为茜草科多年生草本植物，在中国西部和西南部的高海拔地区，云南和广西很普遍。2020年版《中国药典》记载红大戟具有泻水逐饮，消肿散结的功效，主要用于治疗胸腹积水、痈肿疮毒、瘰疬痰核等病症。
其中，3-羟基巴戟醌是质量控制的标志，是红大戟的有效成分。目前已有报道从红大戟中分离出的熊果酸、2α，3α，24-三羟基-12-烯-28-熊果酸、damnacanthal及Bergapten等具有抗肿瘤作用。3-羟基巴戟醌对癌细胞的作用尚未见报道。
本发明旨在提供3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用。
发明内容
本发明的第一目的是提供3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用，本发明的另一目的是提供一种抗宫颈癌药物。
本发明的第一目的是这样实现的，3-羟基巴戟醌的应用为在制备抗宫颈癌药物中的应用，其结构式如下：
。
本发明的第二目的是这样实现的，一种抗宫颈癌药物，所述药物以3-羟基巴戟醌为主要活性成分或活性成分之一。
本发明的有益效果为：
本发明首次提供了3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物方面的良好应用，体外实验表明浓度为10-80μM/L 的3-羟基巴戟醌可明显抑制宫颈癌HeLa细胞增殖，促进凋亡；且细胞活力试验表明3-羟基巴戟醌对正常细胞无毒性，表明3-羟基巴戟醌有良好的药物前景，可以开发成治疗宫颈癌的药物，为临床宫颈癌提供了一种新思路。
另外，本发明通过研究发现3-羟基巴戟醌还能够通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路抑制宫颈癌细胞的增殖，这对了解宫颈癌的发病机制，制定新的治疗策略具有十分重要的意义，为宫颈癌提供一个潜在的治疗方案。
附图说明
图1为用3-羟基巴戟醌处理24小时的HeLa细胞活力图；
图2为用3-羟基巴戟醌处理24小时的L02细胞（人正常肝细胞）活力图；
图3为用3-羟基巴戟醌处理24小时的HeLa细胞的群落形成实验图；
图4为3-羟基巴戟醌处理对癌细胞迁移能力影响的伤口愈合实验；其中，A为3-羟基巴戟醌处理24小时后，在倒置显微镜下观察伤口面积；B为伤口面积（μm2），数据代表三个独立实验的平均值±SD（注：与对照组相比，“*”p< 0.05，“**”表示p< 0.01，“***”表示p<0.001）；
图5为3-羟基巴戟醌诱导HeLa细胞凋亡；其中，A为用3-羟基巴戟醌处理24小时的HeLa细胞的凋亡图；B为凋亡细胞的百分比。数据代表三个独立实验的平均值±SD（注：与对照组相比，“*”p< 0.05，“**”表示p< 0.01，“***”表示p< 0.001）；
图6为在Hoechst 33258染色后，通过荧光显微镜观察到的细胞核；
图7为3-羟基巴戟醌诱导HeLa细胞的ΔΨm塌陷，其中，A为HeLa细胞的Rh123荧光强度的流式细胞仪分析；B为ΔΨm数据显示图；C为通过荧光显微镜评估Rh123的荧光强度。数据代表三个独立实验的平均值±SD（注：与对照组相比，“*”p< 0.05，“**”表示p< 0.01，“***”表示p< 0.001）；
图8为3-羟基巴戟醌诱导HeLa细胞的细胞内ROS生成；其中，A为通过DCFH-DA荧光的流式细胞仪分析来评估ROS的产生；B为ROS生成数据图，数据代表三个独立实验的平均值±SD（注：与对照组相比，“*”p< 0.05，“**”表示p< 0.01，“***”表示p< 0.001）；
图9为Western blot（蛋白质印记分析法）分析3-羟基巴戟醌对HeLa细胞中凋亡相关蛋白水平的影响；其中，A为3-羟基巴戟醌对HeLa细胞中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、EGFR、MCL-1、NF-κB、p-NF-κB、Caspase 3、P53、细胞色素C和CEA疾病标志物表达水平的影响；B为p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、EGFR和MCL-1的密度定量；C为CEA的密度定量；D为P-NF-κB/NF-κB、Caspase 3、P53和细胞色素C的密度定量。数据代表三个独立实验的平均值±SD（注：与对照组相比，“*”p< 0.05，“**”表示p< 0.01，“***”表示p< 0.001）。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明作进一步说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
本发明提供了3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用，其结构式如下：
。
所述宫颈癌细胞株为HeLa细胞。
3-羟基巴戟醌的使用浓度为10-80μM/L。
本发明还提供了一种抗宫颈癌药物，所述药物以3-羟基巴戟醌为主要活性成分或活性成分之一。
所述抗宫颈癌药物还含有一种或至少两种药学上可以接受的载体。
所述载体为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂。
以下通过体外细胞试验检测3-羟基巴戟醌对宫颈癌HeLa细胞的抑制效果。
检测例1 细胞活力实验
方法：采用CCK-8法检测实施例1得到的3-羟基巴戟醌对人体HeLa细胞（人宫颈癌下拨啊）和L02细胞（人体正常肝细胞）的毒性。
将实施例1制备的3-羟基巴戟醌溶解在二甲亚砜(DMSO)中，用培养基分别配置0、10、20、40、80、160 μmol/L的药物浓度。将HeLa和L02细胞系(1×104个细胞/孔)均在96孔板中进行培养。24 h后去除培养基，用无菌PBS清洗细胞。在37℃下，用0、10、20、40、80、160 μmol/L的3-羟基巴戟醌处理细胞24 h。移除混合物后，孵化2 h，用100 μL无菌PBS清洗细胞两次。接着，每个孔中加入100 μL含有10% CCK-8的培养液，在37℃下培养2 h。测量450 nm下的吸光值。并计算细胞活力，同时以求得半数抑制浓度(IC50)。细胞存活率(%)＝(OD450实验组/OD450对照组)×100％。
试验结果：由图1和图2可知，3-羟基巴戟醌对HeLa细胞有明显的生长抑制效果，对于实验中的正常细胞L02则没有表现出毒性，说明3-羟基巴戟醌具有良好的肿瘤细胞选择性和相对的安全性。
检测例2 细胞集落形成实验
将HeLa细胞均匀地接种在6孔板中（1×102个细胞/孔），并在37℃、5%CO2的恒温无菌培养箱中培养过夜。用0、10、20、40和80 μmol/L的3-羟基巴戟醌处理24小时后，在无3-羟基巴戟醌条件下再培养2周。当出现群落时，用PBS洗涤细胞两次，用75%的乙醇固定15分钟。群落（>50个细胞）用结晶紫染色，然后在显微镜下计数。
试验结果如图3所示，3-羟基巴戟醌在10-80μmol/L浓度内以剂量依赖性方式抑制HeLa细胞集落形成，在80 μ mol/L时观察到的抑制作用最大。
检测例3 细胞伤口愈合实验
将HeLa细胞接种到6孔板中（2×105个细胞/孔）。在100%融合时，用1毫升的移液枪枪头划伤细胞单层，并用PBS清洗以去除细胞碎片。用0、10、20、40和80 μmol/L的3-羟基巴戟醌处理24小时后，用显微镜拍摄伤口的图像（图4A），并测量伤口的宽度（图4B）。
试验结果：从图4可知3-羟基巴戟醌对HeLa细胞迁移的抑制。孵育24 h后，对照组划痕处由于细胞团致密生长而逐渐开始闭合，而3-羟基巴戟醌处理的细胞生长受到明显抑制，呈剂量依赖性。3-羟基巴戟醌处理组和对照组的细胞形态也有明显差异。对照组细胞呈梭形、半透明，质地均匀，密度适中，分布均匀。3-羟基巴戟醌处理组细胞体积、密度下降，出现颗粒；这些结果表明3-羟基巴戟醌改变了HeLa细胞的形态并抑制了其生长。
检测例4 细胞凋亡检测试验
根据制造商的说明，使用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒用流式细胞仪检测细胞凋亡。简而言之，将HeLa细胞接种到6孔板中（2×105个细胞/孔），用0、10、20、40和80 μmol/L的3-羟基巴戟醌处理24小时。随后，用不含EDTA的胰蛋白酶消化细胞，用预冷的PBS洗涤两次，100×g离心5分钟收集细胞。接下来，将细胞悬浮在1×结合缓冲液中，并与5毫升Annexin V-FITC试剂和5毫升PI溶液在室温下黑暗中孵育10分钟。使用BD FACSAria™III流式细胞仪检测染色的细胞，然后用FlowJo V10进行分析。
试验结果如图5所示，从图5A中可以看出，对照细胞的膜联蛋白V和PI均为阴性，表明细胞是存活的。给药3-羟基巴戟醌后，发生凋亡的细胞数量呈剂量依赖性显著增加(图5B)。HeLa细胞凋亡率分别从8.94%提高到55.25%、68.40%、70.56%和77.71%，说明3-羟基巴戟醌有效引发了HeLa细胞凋亡。
检测例5 Hoechst 33258染色
将HeLa细胞接种在6孔板中（2×105个细胞/孔），在37℃、5%CO2的恒温无菌培养箱中培养过夜。用0、10、20、40和80 μmol/L的3-羟基巴戟醌处理24小时后，用75%的乙醇固定细胞10分钟，然后用PBS洗两次。然后用Hoechst 33258在室温下黑暗中染色15分钟。用PBS清洗后，用荧光显微镜在激发波长为350nm，发射波长为460nm的条件下观察细胞核。
试验结果如图6所示，从图中可以看出，3-羟基巴戟醌诱导HeLa细胞核出现染色质浓缩、DNA断裂等典型的形态改变。此外，荧光强度随着3-羟基巴戟醌处理而增加，表明3-羟基巴戟醌诱导细胞死亡呈剂量依赖性。
检测例6 3-羟基巴戟醌诱导HeLa细胞的ΔΨm塌陷
将HeLa细胞接种在6孔板中（2×105个细胞/孔），并在37℃、5%CO2的恒温无菌培养箱中培养过夜。用0、10、20、40和80 μmol/L的3-羟基巴戟醌处理24小时后，在37℃下用Rh123对HeLa细胞染色30分钟，然后用PBS洗三次。使用BD FACSAria™ III流式细胞仪检测被染色的细胞，然后用FlowJo V10进行分析。3-羟基巴戟醌对ΔΨM的影响也通过荧光显微镜评估。
试验结果如图7所示，从图7C中可以看出，与对照组比较，3-羟基巴戟醌处理24h诱导HeLa细胞Rh123荧光强度逐渐降低，且呈浓度依赖性。流式细胞术检测给药0、10、20、40和80 μmol/L3-羟基巴戟醌的HeLa细胞中Rh123的平均荧光强度分别为4.83、4.05、3.385、2.25和2.20（图7B）。这些变化证实3-羟基巴戟醌降低了HeLa细胞的ΔΨm，表明线粒体凋亡途径参与了3-羟基巴戟醌诱导的细胞凋亡。
检测例7 3-羟基巴戟醌诱导HeLa细胞的细胞内ROS生成
将HeLa细胞接种在6孔板中（2×105个细胞/孔），并在37℃、5%CO2的恒温无菌培养箱中培养过夜。用0、10、20、40和80 μmol/L的3-羟基巴戟醌处理24小时后，用DCFH-DA在37℃下对细胞进行染色30分钟。将细胞重新悬浮在PBS中，通过BD FACSAria™ III流式细胞仪测量细胞内的荧光强度来量化ROS的产生，然后用FlowJo V10进行分析（图8）。
试验结果如图8所示，从图中可以看出与对照组比较，HeLa细胞经3-H处理24 h后，DCF荧光强度显著升高。3-羟基巴戟醌的影响呈剂量依赖性。在给药0、10、20、40和80 μmol/L 3-H的HeLa细胞中，DCFH-DA的平均荧光强度分别为3.26、3.78、4.80、5.91和6.87。这些发现表明，3-羟基巴戟醌诱导HeLa细胞产生细胞内ROS。
检测例8 Western blot（蛋白质印记分析法）分析3-羟基巴戟醌对HeLa细胞中凋亡相关蛋白水平的影响
将HeLa细胞接种在6孔板中（2×105个细胞/孔），并在37℃、5%CO2的恒温无菌培养箱中培养过夜。用0、10、20、40和80 μmol/L的3-羟基巴戟醌处理24小时后，收集细胞，用PBS清洗，并用RIPA缓冲液裂解。使用BCA蛋白质测定试剂盒对蛋白质浓度进行测量。等量的蛋白质通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离，并转移到聚丙烯二氟（PVDF）膜上（用5%的脱脂牛奶阻断2小时后，将膜在4℃的摇床中与p-PI3K（1：1000）、PI3K（1:1,000）、p-AKT（1：1000）、AKT（1:1,000）、EGFR（1:1,000）、MCL-1（1。 1:1,000）、CEA（1:1,000）、p- NF-κB（1:1,000）、NF-κB（1:1,000）、P53（1:1,000）、Caspase 3（1:1,000）和Cytochrome C（1:1,000）12-16小时（（β-actin用1:3,000）。加入TBST并放在摇床上，然后将膜洗三次，每次5分钟。在室温下与第二抗体（1:8,000）孵育1小时。使用化学发光凝胶成像系统检测目标蛋白，用ImageJ软件对印迹进行可视化。
实验结果：从图9中可知，在3-羟基巴戟醌处理的HeLa细胞中Caspase 3、P53和细胞色素C的水平上调，而p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、EGFR、MCL-1、P-NF-κ B/NF-κ B和癌胚抗原 (CEA) 疾病标志物下调，表明3-羟基巴戟醌对HeLa细胞的抗癌作用是通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路介导的。
综上可知，3-羟基巴戟醌以剂量依赖性方式抑制HeLa细胞集落形成，在80 μ mol/L时观察到的抑制作用最大。3-羟基巴戟醌以剂量依赖性方式诱导细胞凋亡，降低了HeLa细胞的ΔΨm，诱导HeLa细胞中细胞内ROS的生成。在3-羟基巴戟醌处理的HeLa细胞中Caspase3、P53和细胞色素C的水平上调，而p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、EGFR、MCL-1、P-NF-κ B/NF-κ B和癌胚抗原 (CEA) 疾病标志物下调，表明3-羟基巴戟醌对HeLa细胞的抗癌作用是通过PI3K/AKT/ NF-κB信号通路介导的，为进一步了解3-羟基巴戟醌抗癌作用的分子机制提供了新的基础。
Claims (3)
1.一种以3-羟基巴戟醌作为唯一活性成分在制备抗宫颈癌药物中的应用，其结构式如下：
。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗宫颈癌药物还含有一种或至少两种药学上可以接受的载体。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述载体为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211513854.0A CN115844863B (zh) | 2022-11-29 | 2022-11-29 | 3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211513854.0A CN115844863B (zh) | 2022-11-29 | 2022-11-29 | 3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115844863A CN115844863A (zh) | 2023-03-28 |
| CN115844863B true CN115844863B (zh) | 2024-01-30 |
Family
ID=85667939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211513854.0A Active CN115844863B (zh) | 2022-11-29 | 2022-11-29 | 3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115844863B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103655674A (zh) * | 2012-09-11 | 2014-03-26 | 清华大学深圳研究生院 | 乳浆大戟提取物及其制备方法和应用 |
-
2022
- 2022-11-29 CN CN202211513854.0A patent/CN115844863B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103655674A (zh) * | 2012-09-11 | 2014-03-26 | 清华大学深圳研究生院 | 乳浆大戟提取物及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Extracts of Knoxia roxburghii (Spreng.) M. A. Rau Induce Apoptosis in Human MCF-7 Breast Cancer Cells via Mitochondrial Pathways;Xiao-Jiao Chen等人;Molecules(第27期);6435 * |
| 红大戟中的蒽醌类化学成分;赵峰;王素娟;吴秀丽;于洋;岳正刚;刘波;林生;朱承根;杨永春;石建功;;中国中药杂志(21);2980-2986 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115844863A (zh) | 2023-03-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| He et al. | Zinc oxide nanoparticles inhibit osteosarcoma metastasis by downregulating β-catenin via HIF-1α/BNIP3/LC3B-mediated mitophagy pathway | |
| Lv et al. | Curcumin induces apoptosis in breast cancer cells and inhibits tumor growth in vitro and in vivo | |
| Bai et al. | Curcumin induces mitochondrial apoptosis in human hepatoma cells through BCLAF1-mediated modulation of PI3K/AKT/GSK-3β signaling | |
| He et al. | Liquiritin (LT) exhibits suppressive effects against the growth of human cervical cancer cells through activating Caspase-3 in vitro and xenograft mice in vivo | |
| Li et al. | Curcumol Inhibits Lung Adenocarcinoma Growth and Metastasis via Inactivation of PI3K/AKT and Wnt/β-Catenin Pathway | |
| JP2015212298A (ja) | 抗癌性抽出物及び化合物 | |
| Maleki et al. | Silibinin exerts anti-cancer activity on human ovarian cancer cells by increasing apoptosis and inhibiting epithelial-mesenchymal transition (EMT) | |
| Yang et al. | Oridonin suppresses human gastric cancer growth in vitro and in vivo via inhibition of VEGF, integrin β3, and PCNA | |
| CN109745326B (zh) | 一种包含吉非替尼和组蛋白去乙酰酶抑制剂的药物组合物，其脂质体制剂及其制药用途 | |
| Wang et al. | Ethanolic extract of Traditional Chinese Medicine (TCM) gamboge inhibits colon cancer via the Wnt/beta-catenin signaling pathway in an orthotopic mouse model | |
| Wang et al. | Induction of apoptosis and inhibition of cell migration and tube-like formation by dihydroartemisinin in murine lymphatic endothelial cells | |
| Fang et al. | In vitro and in vivo anti-malignant melanoma activity of Alocasia cucullata via modulation of the phosphatase and tensin homolog/phosphoinositide 3-kinase/AKT pathway | |
| Xu et al. | Nobiletin inhibits viability of human renal carcinoma cells via the JAK2/STAT3 and PI3K/Akt pathway | |
| US20210263039A1 (en) | Application of niemann-pick c1 protein in diagnosis and treatment of cancer | |
| CN115844863B (zh) | 3-羟基巴戟醌在制备抗宫颈癌药物中的应用 | |
| CN110559272B (zh) | 一种抗乳腺癌纳米药物及其制备方法 | |
| CN115590914B (zh) | 一种红大戟提取物及其在制备抗乳腺癌药物中的应用 | |
| CN108714149A (zh) | 地榆活性成分在制备抗肿瘤的药物中的用途 | |
| Yang et al. | Niclosamide induces colorectal cancer apoptosis, impairs metastasis and reduces immunosuppressive cells in vivo | |
| Liu et al. | Sildenafil Inhibits the Growth and Epithelial-to-mesenchymal Transition of Cervical Cancer via the TGF-β1/Smad2/3 Pathway | |
| CN111840412A (zh) | 茶褐素在制备抗黑色素瘤药物中的应用 | |
| CN102652773B (zh) | 药物组合物及其制备方法 | |
| CN102688300A (zh) | 药物组合物及其用途 | |
| CN109381470B (zh) | 通关藤中c21甾体皂化合物及其用途 | |
| Sun et al. | G-4 inhibits triple negative breast cancer by inducing cell apoptosis and promoting LCN2-dependent ferroptosis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |