CN114680337A - 瑞士乳杆菌在制备降血压发酵产品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物发酵领域，本发明公开了一种瑞士乳杆菌在制备降血压发酵产品中的应用。本发明发现乳是乳杆菌WHH2580在发酵后对血管紧张素转换酶ACE具有出色的抑制活性，并且其特点尤其在于在较低初始接种量条件下获得的发酵乳就具有很高的血管紧张素转换酶ACE抑制活性（94‑99%），并且进一步地，我们还发现，该菌株的ACE抑制活性非常稳定，利用该菌株发酵制得的发酵乳产品，经过不同消化酶和不同pH条件处理，其ACE抑制活性仍然保持较高的水平（86.5‑99%）。在常温下的长保质期内仍然具有很高的血管紧张素转换酶ACE抑制活性（90‑99%）。

Description

瑞士乳杆菌在制备降血压发酵产品中的应用

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，尤其涉及一种瑞士乳杆菌在制备降血压发酵产品中的应用。

背景技术

高血压前期(又称血压正常高值)是指血压在120～139/80～89mmHg的范围，由美国高血压预防、检测、评估与治疗联合委员会(the joint national committee onprevention，detection，and treatment ofhigh blood pressure，JNC)第七次报告(JNC7)在2003年5月首次提出。处于该期的人群罹患高血压的机会增加，而高血压是心脑血管病最重要的独立危险因素。研究发现，血压高值人群尚未发展至高血压阶段时已经开始出现血管的损害，表现为血管顺应性的下降，硬度增加。

调节血压的一种机制是肾素-血管紧张素系统，这是一种导致血管紧张素II形成的反应级联，血管紧张素II具有强的血管收缩作用并由此引起血压升高。抑制该级联中的一种关键酶：血管紧张素I转化酶(ACE)降低了血管紧张素II的形成并因此具有降低血压的作用。目前食源性ACE抑制肽己有较多研究，并通过检测对血管紧张素I转化酶(ACE)的抑制活性来反应ACE抑制肽的活力。

市售通过产生食源性ACE抑制肽的降血压发酵乳产品仅有国外少量：如芬兰维利奥Evolus和日本Calpis，皆是用瑞士乳杆菌菌株发酵。血压正常高值水平人群占总成年人群的比例不断增长，尤其是中青年，是我国高血压患病率持续升高和患病人数剧增的主要来源。这部分人群对酸奶的需求量大，但目前国内酸奶多以调节肠道和补钙为主。开发健康有效好喝的降压产品意义重大。WHH2580是本申请人杭州娃哈哈集团有限公司自主研发的一种瑞士乳杆菌，己通过研究证实WHH2580具有提高免疫力的作用，但目前尚未见该菌在维持机体健康血压水平方面的研究。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供瑞士乳杆菌WHH2580在制备维持机体健康血压水平功能发酵产品中的新用途；第二个目的在于提供一种降血压效果好且功效稳定性好的无糖酸奶及其制备方法。

本发明的具体技术方案为：

第一方面，本发明提供了一种瑞士乳杆菌在制备降血压发酵产品中的应用，所述瑞士乳杆菌命名为WHH2580，已于2019年10月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其微生物保藏编号为CGMCC No.18730，微生物分类命名为瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus。

上述菌株是发明人在前期工作中从新疆那拉提红山沟采集的酸奶中筛选得到。如背景技术部分所述，菌株WHH2580是本申请人自主研发的一种瑞士乳杆菌，前期已通过研究证实其具有提高免疫力的作用。在此后的研究中，我们又发现该菌株在发酵后对血管紧张素转换酶ACE具有出色的抑制活性，并且与现有报道的其他瑞士乳杆菌相比，其特点尤其在于在较低初始接种量条件下获得的发酵乳就具有很高的血管紧张素转换酶ACE抑制活性(94-99％)，并且进一步地，我们还发现，该菌株的ACE抑制活性非常稳定，利用该菌株发酵制得的发酵乳产品，经过不同消化酶和不同pH条件储存，其ACE抑制活性仍然保持较高的水平(86.5-99％)，说明可在人体肠胃环境中保持功效性。此外，该菌株在常温下的长保质期内仍然具有很高的血管紧张素转换酶ACE抑制活性(90-99％)。而目前尚未见该菌株在维持机体健康血压水平方面的研究。

第二方面，本发明提供了一种无糖酸奶，由下述质量百分数的原辅料制成：原料奶40-85％或乳粉5-15％、降血压功效成分0.01-10.00％、糖醇0-5.0％、淀粉0-5.0％、稳定剂0.01-1.00％、甜味剂0-0.050％、瑞士乳杆菌WHH2580菌粉0.005-0.01‰，水余量。

本发明利用菌株WHH2580在低接种量下发酵成功制备得到无糖酸奶。一方面，本发明所提供的无糖酸奶在经过不同条件处理后，其ACE抑制活性仍然保持较高的水平(86.5-99％)，且在长保质期内也可保证产品的功效性(90-99％)。另一方面，本发明酸奶中不仅含有发酵乳，还添加有降血压功效成分，提高了酸奶的功效，又具有独特的酸奶风味，可避免糖对人体血压的负担，更好地满足血压正常高值人群的健康需求。

作为优选，所述降血压功效成分包括莱菔子、桑叶、山楂、菊花、葛根、槐花、决明子、牡蛎、木瓜、佛手、核桃仁和昆布中的一种或几种。

作为优选，所述乳粉选择全脂乳粉、脱脂乳粉、乳清蛋白粉及全乳蛋白粉中的一种或几种。

作为优选，所述糖醇选自木糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇、山梨糖醇、异麦芽酮糖醇和乳糖醇中的一种或几种。

作为优选，所述淀粉选自物理淀粉、醋酸酯淀粉、辛烯基琥珀酸淀粉钠、羟丙基二淀粉磷酸酯、磷酸酯双淀粉、酸处理淀粉、氧化淀粉、氧化羟丙基淀粉、乙酰化二淀粉磷酸酯和乙酰化双淀粉己二酸酯中的一种或几种。

作为优选，所述稳定剂选自羧甲基纤维素钠、果胶、大豆多糖、琼脂、酪蛋白酸钠、海藻酸丙二醇酯、明胶、结冷胶、瓜尔胶和黄原胶中的一种或几种。

作为优选，所述甜味剂选自安赛蜜、阿斯巴甜、三氯蔗糖、甜菊糖苷、罗汉果糖苷、异麦芽酮糖、爱德万甜和纽甜中的一种或几种。

第三方面，本发明提供了一种无糖酸奶的制备方法，包括以下步骤：

1)均质及杀菌：对奶液进行预热、均质、杀菌、冷却，得杀菌冷却料液。

2)接种发酵：向步骤1)中所得杀菌冷却料液中加入瑞士乳杆菌WHH2580菌粉，发酵得酸奶基料。

3)胶液制备：取水预热，取稳定剂加入水中，剪切或搅拌，冷却得胶液。

4)二次配料：将步骤2)中所述酸奶基料冷却，随后搅拌破乳；加入步骤3)所得的胶液，加入降血压功效成分、糖醇、甜味剂和淀粉并混合搅拌，加水得料液。

5)二次均质：对步骤4)所得料液进行均质。

6)灌装及杀菌：将步骤5)中均质后的料液灌装、杀菌，得到成品。

作为优选，步骤1)中，所述奶液为原料奶或经溶奶、剪切、水合制得。

作为优选，步骤2)中，酸奶基料中活菌数要求≥1×10⁹CFU/mL。

作为优选，步骤2)中，所述瑞士乳杆菌菌粉的接种量5×10⁵CFU/mL-2×10⁶CFU/mL，发酵温度为34-45℃，发酵时间4-16h。

作为优选，步骤6)具体包括：将步骤5)中均质后的料液灌装、封口，通过巴氏杀菌并冷却；或经UHT杀菌并热灌装或无菌冷灌装至PET材质或复合纸材质包装容器中并封口，得到无糖酸奶。

与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：

(1)本发明所提供的瑞士乳杆菌WHH2580菌株具有优良发酵性能，发酵速度快。通过较低的初始接种量(5×10⁵CFU/mL-2×10⁶CFU/mL)获得的发酵乳具有高血管紧张素转换酶ACE抑制活性(94-99％)。

(2)本发明所提供的瑞士乳杆菌WHH2580发酵乳ACE抑制活性稳定，储存4个月，期间ACE抑制活性＞90％，可为多种降压产品的开发提供基础。

(3)本发明所提供的无糖酸奶经过不同pH和消化酶处理(模拟肠胃环境)后，其ACE抑制活性仍然保持较高的水平(86.5-99％)，因此可在人体内发挥降血压功效。此外该无糖酸奶在长保质期内也可保持产品的功效性。

(4)本发明提供的降血压的常温长保质期无糖酸奶，不仅含有发酵乳，还添加有降血压功效成分，提高了酸奶的功效，又具有独特的酸奶风味，避免了糖对人体血压的负担，更好的满足血压正常高值人群的健康需求。

(5)本发明所提供的无糖酸奶不添加蔗糖，可供各类人群日常饮用，特别是针对限制糖分摄取的血压正常高值人群和高血压人群，健康安全。

附图说明

图1为瑞士乳杆菌发酵乳储存期内ACE抑制活性变化情况；

图2为瑞士乳杆菌WHH2580不同初始接种量的发酵产酸情况；

图3为瑞士乳杆菌WHH2580在不同初始接种量不同发酵时间ACE抑制活性变化情况；

图4为WHH2580降血压无糖酸奶制备流程图；

图5为WHH2580降血压无糖酸奶通过不同pH和消化酶处理的ACEi％变化图；

图6为WHH2580降血压无糖酸奶不同温度储存ACEi％变化图；

图7为WHH2580降血压无糖酸奶不同储藏时间pH和酸度变化。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的描述。

总实施例

一种瑞士乳杆菌在制备降血压发酵产品中的应用，所述瑞士乳杆菌命名为WHH2580，已于2019年10月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其微生物保藏编号为CGMCC No.18730，微生物分类命名为瑞士乳杆菌Lactobacillushelveticus。

作为优选，所述发酵产品为无糖酸奶，由下述质量百分数的原辅料制成：原料奶40-85％或乳粉5-15％、降血压功效成分0.01-10.00％、糖醇0-5.0％、淀粉0-5.0％、稳定剂0.01-1.00％、甜味剂0-0.050％、瑞士乳杆菌WHH2580菌粉0.005-0.01‰，余量为水。

所述降血压功效成分包括莱菔子、桑叶、山楂、菊花、葛根、槐花、决明子、牡蛎、木瓜、佛手、核桃仁和昆布中的一种或几种。所述乳粉选择全脂乳粉、脱脂乳粉、乳清蛋白粉及全乳蛋白粉中的一种或几种；所述糖醇选自木糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇、山梨糖醇、异麦芽酮糖醇和乳糖醇中的一种或几种；所述淀粉选自物理淀粉、醋酸酯淀粉、辛烯基琥珀酸淀粉钠、羟丙基二淀粉磷酸酯、磷酸酯双淀粉、酸处理淀粉、氧化淀粉、氧化羟丙基淀粉、乙酰化二淀粉磷酸酯和乙酰化双淀粉己二酸酯中的一种或几种；所述稳定剂选自羧甲基纤维素钠、果胶、大豆多糖、琼脂、酪蛋白酸钠、海藻酸丙二醇酯、明胶、结冷胶、瓜尔胶和黄原胶中的一种或几种；所述甜味剂选自安赛蜜、阿斯巴甜、三氯蔗糖、甜菊糖苷、罗汉果糖苷、异麦芽酮糖、爱德万甜和纽甜中的一种或几种。

一种无糖酸奶的制备方法，包括以下步骤：

1)均质及杀菌：对奶液进行预热、均质、杀菌、冷却，得杀菌冷却料液。所述奶液为原料奶或经溶奶、剪切、水合制得。

2)接种发酵：向步骤1)中所得杀菌冷却料液中加入瑞士乳杆菌WHH2580菌粉，发酵得酸奶基料。接种量5×10⁵CFU/mL-2×10⁶CFU/mL，发酵温度为34-45℃，发酵时间4-16h；酸奶基料中活菌数要求≥1×10⁹CFU/mL。

3)胶液制备：取水预热，取稳定剂加入水中，剪切或搅拌，冷却得胶液。

4)二次配料：将步骤2)中所述酸奶基料冷却，随后搅拌破乳；加入步骤3)所得的胶液，加入降血压功效成分、糖醇、甜味剂和淀粉并混合搅拌，加水得料液。

5)二次均质：对步骤4)所得料液进行均质。

6)灌装及杀菌：将步骤5)中均质后的料液灌装、封口，通过巴氏杀菌并冷却；或经UHT杀菌并热灌装或无菌冷灌装至PET材质或复合纸材质包装容器中并封口，得到无糖酸奶。

实施例1：WHH2580发酵乳ACE抑制活性的测定

1.1 ACE抑制活性测定方法

ACE抑制肽体外筛选方法，是在一定条件下，ACE与血管紧张素I(ANGI)的模拟底物作用产生具有特异性吸收的物质，通过加入ACE抑制肽前后该物质吸收特性的差异变化来反应ACE抑制活性的大小。ACE抑制肽活性测定的关键是ACE活性的测定，即ACE抑制活性大小反应ACE抑制肽活性或含量。本发明是利用ACE酶解底物马尿酰组氨酰亮氨酸(N-Hip-His.Leu，HHL)生成的马尿酸和二肽(His.Leu，HL)来定量的，其中多以马尿酸的生成量定量。

1.1.1试剂配制

分别配制0.1mol/L硼酸-硼砂缓冲液、0.1U/mL ACE溶液、5mmol/L的HHL溶液。

1.1.2样品处理：

在1.5mL离心管中加入200L5mmol/L的HHL溶液和80 L的发酵乳上清液，对照加80-L的缓冲液，于37度水浴保温5min后，加入20 L ACE溶液，混匀后在37度水浴中保温30min，加入250 L 1mol/L的盐酸溶液以终止反应。通过高效液相色谱仪waterse2695色谱系统(D18SM7963A)采用外标法进行定量。平行实验3次，结果取平均值。

R＝(A-B)/A*100％

R：发酵乳样品对ACE的抑制率

A：空白对照品中马尿酸的浓度

B：添加发酵乳样品组中马尿酸的浓度

1.2发酵乳ACE抑制活性的测定由从新疆、青海、西藏等地传统发酵食品和一些市售菌粉中分离得到下表的10株瑞士乳杆菌。将这10株瑞士乳杆菌甘油管200μL接种至10mLMRS液体试管中，37℃培养24h。一代种子液200μL接种至10mL MRS液体试管中，37℃培养过夜。二代种子液1mL离心去上清，生理盐水洗一次，重悬至1mL生理盐水中。200μL重悬液接至10mL脱脂乳中(大约10⁷CFU/mL的接种量)，37℃发酵16h。破乳，取适量发酵乳高速低温离心后，取乳清。按上述1.1方法进行ACE抑制活性的测定。ACE抑制活性测定结果如下表。瑞士乳杆菌WHH2580的ACE抑制活性最高。

由上表数据可知，在发酵过程中，乳酸菌分泌的蛋白酶分解产生对血管紧张素转换酶ACE活性具有抑制作用的多肽，从而达到降血压的效果。不同乳酸菌其分泌的蛋白酶种类和活性不同，即使是同一种属不同菌株也有明显差异。发酵乳对ACE抑制活性的强弱与其所使用的乳酸菌的种类和菌株有密切关系。本发明对10株瑞士乳杆菌发酵乳的ACE抑制活性进行测定，ACE抑制活性差异较大，其中瑞士乳杆菌WHH2580发酵乳的ACE抑制活性最高，可达97.72％。

1.3发酵乳ACE抑制活性稳定性

将上述WHH2580发酵乳和WHH1889发酵乳95℃10min灭菌处理，分装成小样后置于保存。定期检测发酵乳的ACEi％。储存期间ACE抑制活性变化情况见图1。储存4个月WHH2580发酵乳的ACEi％均保持较高的水平(＞90％)，且明显高于WHH1889发酵乳。

实施例2：不同初始接种量下菌株WHH2580的发酵产酸情况

在乳粉基料中，初始接种量分别为2.5×10⁵CFU/mL、5×10⁵CFU/mL、1×10⁶CFU/mL、2.5×10⁶CFU/mL、5×10⁶CFU/mL，42℃发酵，追踪发酵曲线，见图2。初始接种量分别为1×10⁶CFU/mL、2.5×10⁶CFU/mL、5×10⁶CFU/mL，发酵速度快，4小时即可凝乳且后酸化均较稳定。发酵10h，产酸速率趋于一致。发酵乳奶香味浓郁，质地稠厚，无乳清析出。破乳后，结构细腻。发酵性能优良。

实施例3：菌株WHH2580在不同初始接种量不同发酵时间ACE抑制活性变化在乳粉基料中，发酵温度42℃，瑞士乳杆菌WHH2580和WHH1889初始接种量分别为2.5×10⁵CFU/mL、5×10⁵CFU/mL、1×10⁶CFU/mL、2.5×10⁶CFU/mL、5×10⁶CFU/mL，分别在发酵4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h和18h检测ACE抑制活性，两株菌检测结果见下表，其中WHH2580结果绘制成曲线图，见图3。在一定培养时间内，随着发酵时间的延长，发酵乳抑制ACE活性效应也随之增强，这说明发酵乳中ACE抑制肽是在培养发酵过程中产生的。相同发酵条件下，瑞士乳杆菌2580较瑞士乳杆菌1889有更强的蛋白水解活性，ACE抑制率更高。瑞士乳杆菌WHH2580初始接种量分别为1×10⁶CFU/mL、2.5×10⁶CFU/mL、5×10⁶CFU/mL，发酵10h，ACEi％趋于一致。初始接种量为1×10⁶CFU/mL，发酵10h，ACEi％高达90％以上。更优地，发酵14h，ACEi％高达96.6％。发酵乳奶香味浓郁，质地稠厚，无乳清析出。破乳后，结构细腻。发酵性能优良。

从这些数据可以看出，接种量为1×10⁶CFU/mL时，WHH2580发酵乳可产生大量活性ACE抑制肽，表现出非常高的ACE抑制活性，为产品的开发奠定基础。

实施例4：一种降血压无糖酸奶制备方法(制备流程见图4)，包括如下步骤：

1)奶液制备：称取300g超纯水加热至55℃，取配方量用量的脱脂乳粉，加入水中，剪切20分钟后，静置水合20分钟。

2)均质及杀菌：对步骤1)中所得的奶液预热至65℃后，进行均质。均质压力为5/20MPa。95℃下杀菌5分钟，冷却至42℃，得杀菌冷却料液。3)接种发酵：向步骤2)中所得的杀菌冷却料液中加入1×10⁶CFU/mL益生菌WHH2580，搅拌混匀，置于恒温培养箱中42度静置发酵10小时，活菌数要求≥1×10⁹CFU/mL，得酸奶基料。该酸奶基料ACEi％高达95.8％。

4)胶液制备：称取300g的超纯水预热至55℃，取配方量用量的稳定剂加入水中，剪切20分钟后，冷却至30℃以下，得胶液。

5)二次配料：将步骤3)中基料发酵后冷却至15度以下，随后搅拌破乳。加入步骤4)中冷却后的稳定剂，加入配方用量的降血压功效成分、糖醇、甜味剂、淀粉等混合搅拌，用超纯水定容至1000mL。

6)二次均质：对步骤5)中所得的料液进行均质，均质压力为0/5MPa。

7)灌装及杀菌：将步骤6)中均质后的料液灌装至HDPE材质包装容器中并封口，通过87℃、18min巴氏杀菌并冷却，得到降血压的常温长保质期无糖酸奶。

实施例5：降血压无糖酸奶通过不同消化酶处理的ACEi％变化降血压无糖酸奶离心得上清原液。上清原液分别用合适浓度的硫酸和氢氧化钠将pH调至2.5和8.0。1mL pH2.5上清加适量10mg/mL Pepsin，1mL pH8.0上清加适量1mg/mL Trypsinase，37℃水浴4h。分别检测ACE抑制率。检测结果见附图5。该款无糖酸奶通过上述pH和消化酶处理后，ACE抑制率>86.5％。

实施例6：降血压无糖酸奶不同储藏条件下ACE抑制活性变化降血压无糖酸奶分别置于4℃和室温保存，定期检测酸奶的ACEi％。储存4个月的ACE抑制活性变化情况见图6。降血压无糖酸奶置于室温保存，定期检测酸奶的pH、酸度。储存4个月的pH、酸度变化情况见图7。4℃和室温保存，酸奶ACEi％均保持较高的水平，储存4个月的ACE抑制活性仍大于90％。室温储存期间酸奶pH和酸度保持不变，且风味良好。该无糖酸奶对维持机体健康血压水平有一定的功效。

本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.瑞士乳杆菌在制备降血压发酵产品中的应用，其特征在于：所述瑞士乳杆菌命名为WHH2580，已于2019年10月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其微生物保藏编号为CGMCC No.18730，微生物分类命名为瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus。

2.一种无糖酸奶，其特征在于：由下述质量百分数的原辅料制成：原料奶40-85%或乳粉5-15%、降血压功效成分0.01-10.00%、糖醇0-5.0%、淀粉0-5.0%、稳定剂0-1.00%、甜味剂0-0.05%、瑞士乳杆菌菌粉0.005-0.01‰，水余量；

所述瑞士乳杆菌命名为WHH2580，已于2019年10月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其微生物保藏编号为CGMCC No.18730，微生物分类命名为瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus。

3.如权利要求2所述的种无糖酸奶，其特征在于：所述降血压功效成分包括莱菔子、桑叶、山楂、菊花、葛根、槐花、决明子、牡蛎、木瓜、佛手、核桃仁和昆布中的一种或几种。

4.如权利要求2所述的种无糖酸奶，其特征在于：所述乳粉选择全脂乳粉、脱脂乳粉、乳清蛋白粉及全乳蛋白粉中的一种或几种；

所述糖醇选自木糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇、山梨糖醇、异麦芽酮糖醇和乳糖醇中的一种或几种；

所述淀粉选自物理淀粉、醋酸酯淀粉、辛烯基琥珀酸淀粉钠、羟丙基二淀粉磷酸酯、磷酸酯双淀粉、酸处理淀粉、氧化淀粉、氧化羟丙基淀粉、乙酰化二淀粉磷酸酯和乙酰化双淀粉己二酸酯中的一种或几种；

所述稳定剂选自羧甲基纤维素钠、果胶、大豆多糖、琼脂、酪蛋白酸钠、海藻酸丙二醇酯、明胶、结冷胶、瓜尔胶和黄原胶中的一种或几种；

所述甜味剂选自安赛蜜、阿斯巴甜、三氯蔗糖、甜菊糖苷、罗汉果糖苷、异麦芽酮糖、爱德万甜和纽甜中的一种或几种。

5.一种如权利要求2-4之一所述无糖酸奶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）均质及杀菌：对奶液进行预热、均质、杀菌、冷却，得杀菌冷却料液；

2）接种发酵：向步骤1）所得杀菌冷却料液中加入瑞士乳杆菌菌粉，发酵得酸奶基料；

3）胶液制备：取水预热，取稳定剂加入水中，剪切或搅拌，冷却得胶液；

4）二次配料：将步骤2）中所述酸奶基料冷却，随后搅拌破乳；加入步骤3）所得的胶液，加入降血压功效成分、糖醇、甜味剂和淀粉并混合搅拌，加水得料液；

5）二次均质：对步骤4）所得料液进行均质；

6）灌装及杀菌：将步骤5）中均质后的料液灌装、杀菌，得到成品。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤2）中，所述瑞士乳杆菌菌粉的接种量5×10⁵CFU/mL-2×10⁶CFU/mL，发酵温度为34-45℃，发酵时间4-16h。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤2）中，发酵温度为34-45℃，发酵时间4-16h。

8.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤1）中，所述奶液为原料奶或乳粉经溶奶、剪切、水合制得。

9.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤2）中，酸奶基料中活菌数要求≥1×10⁹CFU/mL。

10.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤6）具体包括：将步骤5）中均质后的料液灌装、封口，通过巴氏杀菌并冷却；或经UHT杀菌并热灌装或无菌冷灌装至PET材质或复合纸材质包装容器中并封口，得到无糖酸奶。

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