CN114634558B

CN114634558B - Ring1a蛋白及其编码基因及其在培育抗旱植物中的应用

Info

Publication number: CN114634558B
Application number: CN202011479022.2A
Authority: CN
Inventors: 王瑜; 巩志忠; 王亚琳
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2020-12-15
Filing date: 2020-12-15
Publication date: 2023-05-30
Anticipated expiration: 2040-12-15
Also published as: CN114634558A

Abstract

本发明公开了RING1A蛋白及其编码基因在培育抗旱植物中的应用。本发明提供的蛋白质，命名为RING1A蛋白，是序列表中序列1所示的蛋白质。编码RING1A蛋白的基因也属于本发明的保护范围，所述基因命名为RING1A基因。本发明还保护RING1A蛋白在调控植物抗旱性中的应用。本发明还保护一种培育转基因植物的方法，包括如下步骤：将RING1A基因导入受体植物中，得到抗旱性增高的转基因植物。本发明可用于对玉米进行改良，改善玉米的抗旱性，提高玉米的产量，并且具有育种快抗旱效果佳的优势。本发明对于抗旱植物育种具有重大的应用推广价值。

Description

RING1A蛋白及其编码基因及其在培育抗旱植物中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及RING1A蛋白及其编码基因及其在培育抗旱植物中的应用。

背景技术

全世界14多亿公顷的耕地面积中，6亿公顷位于干旱、半干旱地区，约占43％，由此造成的减产超过其它自然灾害的总和。在我国约有48％的土地处于干旱半干旱地带。

玉米是我国主要的粮食作物和饲料作物，常年种植面积2450万hm²左右。在旱地作物中，玉米不仅需水较多，而且对水分胁迫比较敏感。干旱是严重制约玉米产量的一个非生物因素，是造成我国及世界各地玉米产量低而不稳定的重要原因，一般可减产20％-30％。我国一半以上玉米种植在西北、西南、华北和东北地区依靠自然降水的旱地上，水分流失快且降水变率也很大,严重影响玉米的生长。玉米是我国重要的粮食作物，其抗旱性研究对解决我国的玉米产量问题意义重大。

发明内容

本发明的目的是提供RING1A蛋白及其编码基因及其在培育抗旱植物中的应用。

本发明保护RING1A蛋白在调控植物抗旱性中的应用。具体来说，所述调控为正调控，即RING1A蛋白含量增高使得植物的抗旱性增高。

本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：增加目的植物中RING1A蛋白的含量和/或活性，从而使植物抗旱性增高。

本发明还保护一种培育转基因植物的方法，包括如下步骤：将RING1A基因导入受体植物中，得到抗旱性增高的转基因植物。RING1A基因具体通过含有RING1A基因的重组载体导入受体植物。

本发明还保护RING1A蛋白。

本发明还保护RING1A基因。RING1A基因即编码RING1A蛋白的基因。

本发明还保护含有RING1A基因的重组载体、表达盒或重组菌。

本发明还保护RING1A基因或所述重组载体或所述表达盒或所述重组菌在培育抗旱性增高的转基因植物中的应用。

RING1A蛋白，获自玉米(Zea mays L.)，是如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：

(a1)序列表中序列1所示的蛋白质；

(a2)将序列表中序列1所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗旱性相关的由其衍生的蛋白质；

(a3)在(a1)所述蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；

(a4)来源于玉米且与(a1)具有98％以上同一性且与植物抗旱性相关的蛋白质。

标签具体如表1所示。

表1标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL
HA	9	YPYDVPDYA

具体来说，RING1A基因是如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)或(b5)的DNA分子：

(b1)编码区如序列表中序列3所示的DNA分子；

(b2)序列表中序列2中第734-6379位核苷酸所示的DNA分子；

(b3)序列表中序列2所示的DNA分子；

(b4)在严格条件下与(b1)或(b2)或(b3)限定的DNA分子杂交且编码所述蛋白质的DNA分子；

(b5)来源于玉米且与(b1)或(b2)或(b3)限定的DNA分子至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码所述蛋白质的DNA分子。

所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min。

可用现有的植物表达载体构建含有RING1A基因的重组载体。

构建重组表达载体时，可在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用。此外，构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物进行鉴定及筛选，可对所用表达载体进行加工，如加入在植物中表达可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因、具有抗性的抗生素标记物或是抗化学试剂标记基因等。从转基因安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以表型筛选转化植物。

所述植物表达载体具体可为pBCXUN载体。

所述重组载体具体可为将序列表的序列3所示的DNA分子插入pBCXUN载体中得到的重组质粒pBCXUN-RING1A。

所述植物为单子叶植物或双子叶植物。

所述植物为禾本科植物。

所述植物为玉蜀黍属植物。

所述植物为玉米。

所述植物为玉米B73。

由于玉米同一DNA段序列可产生不同转录本，翻译出不同蛋白质，该段序列产生的不同转录本以及翻译出的不同蛋白质均在本发明的保护范围内。

RING1A基因的转录本不止一个，其它形式的转录本相应的cDNA过表达后也可能抗干旱胁迫，均属于本发明保护的范围。

本发明可用于对玉米进行改良，改善玉米的抗旱性，提高玉米的产量，并且具有育种快抗旱效果佳的优势。本发明对于抗旱植物育种具有重大的应用推广价值。

附图说明

图1为干旱处理过程中部分植株的照片。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。玉米B73即玉米自交系B73(也称为玉米自交系b73)。

实施例1、RING1A蛋白及其编码基因的发现

从玉米B73中发现一个新蛋白，如序列表的序列1所示，命名为RING1A蛋白。

玉米B73的基因组DNA中，RING1A基因如序列表的序列2所示(7583bp)。序列2中，转录本的读码框为第734-6379位核苷酸，包括10个外显子。10个外显子依次为：读码框第1-181位核苷酸，第303-378位核苷酸，第2685-2743位核苷酸，第3102-3183位核苷酸，第3362-3482位核苷酸，第3559-3600位核苷酸，第4582-5109位核苷酸，第5189-5296位核苷酸，第5367-5540位核苷酸，第5614-5646位核苷酸。

实施例2、转基因植物的获得和抗旱性鉴定

一、构建重组质粒

将序列表的序列3所示的DNA分子插入pBCXUN载体中，得到重组质粒pBCXUN-RING1A，已进行测序验证。重组质粒pBCXUN-RING1A中，序列表的序列3所示的DNA分子的转录由Ubi启动子启动并由Nos终止子终止，从而表达RING1A蛋白。

pBCXUN载体是将pCXUN载体(GenBank:FJ905215.1，06-JUL-2009)的HYG基因(hptII，潮霉素抗性基因)替换为Bar基因(编码膦丝菌素乙酰转移酶)(GenBank:MG719235.1中的第284-835位核苷酸，02-OCT-2018)，保持pCXUN的其它核苷酸不变得到的表达载体。

二、RING1A基因过表达植物的获得

1、将重组质粒pBCXUN-RING1A导入农杆菌EHA105，得到重组农杆菌。

2、采用步骤1制备的重组农杆菌对玉米B73的胚性愈伤组织进行侵染，然后依次进行共培养、抗性筛选(抗性筛选采用除草剂草丁膦)，然后依次进行预分化、分化、生根，得到T₀代再生植株。

3、T₀代再生植株进行PCR鉴定，筛选获得转基因植株；将T₀代转基因植株自交，得到的种子即为T₁代种子，T₁代种子长成的植株即为T₁代植株；将T₁代植株自交，得到的种子即为T₂代种子，T₂代种子长成的植株即为T₂代植株；将T₂代植株自交，得到的种子即为T₃代种子，T₃代种子长成的植株即为T₃代植株。

4、将T₁代植株以及抽样的T₂代植株进行PCR鉴定。对于某一T₁代植株，如果该植株以及该植株自交得到的T₂代植株均为转基因植株，该植株的自交后代为纯合的转基因株系。获得两个纯合的转基因株系，分别为OE1株系和OE3株系。

步骤3和步骤4中PCR鉴定的方法如下：提取植株叶片的基因组DNA，采用UbiP-seq(对应于Ubi启动子中)和NosR-seq(对应于Nos终止子中)组成的引物对进行PCR扩增，如果得到特异性扩增产物，该植株为转基因植株。

UbiP-seq:TTTTAGCCCTGCCTTCATACGC；

NosR-seq:AGACCGGCAACAGGATTCAATC。

三、RING1A基因过表达植物的抗旱性鉴定

供试种子：OE1株系的T₃代种子、OE3株系的T₃代种子或玉米B73的种子。

1、将供试种子播种于装有营养土的小盆中，25℃培养7天。

2、完成步骤1后，将长势一致的幼苗移栽到装有2500g营养土的长方形大盆中，每个盆中，一半区域种植15株转基因植株，另一半区域种植15株玉米B73植株，正常浇水并培养7天。设置三次重复试验，每次重复试验5盆。

3、完成步骤2后，持续不浇水20天，此时可以观察到转基因植株和玉米B73植株表型差异明显。

4、完成步骤3后，恢复正常浇水并培养7天，然后统计存活率。

存活率即存活植株占总植株数量的百分比。

OE1株系植株的存活率为85％±3％，OE3株系植株的存活率为79±4％。玉米B73植株的存活率为41％±5％。

干旱处理过程中部分植株的照片见图1。转基因植株的长势优于玉米B73植株，叶片萎蔫程度小于玉米B73植株。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110> 中国农业大学

<120> RING1A蛋白及其编码基因及其在培育抗旱植物中的应用

<130> GNCYX203236

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 467

<212> PRT

<213> Zea mays L.

<400> 1

Met Pro Thr Gln Lys Arg Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser Pro Ser

1 5 10 15

Pro Ser Ala Ala Pro Gly Ala Gly Ser Pro Pro Pro Ser Ser Pro Pro

20 25 30

Leu Pro Thr Ala Glu Pro Ala Glu Lys Lys Pro Lys Leu Glu Val Asn

35 40 45

Gly Ser Ala Gly Ala Glu Ala Asn Gly Asn Ala Asn Asp Phe Gly Ala

50 55 60

Lys Glu Gly Thr Glu Val Glu Ala Ser Glu Ser Glu Ser Glu Asp Ala

65 70 75 80

Asp Ala Ala Lys Gln Glu Phe Val Pro Val Lys Leu Ser Asp Val Arg

85 90 95

Lys Glu Val Gln Cys Pro Ile Cys Leu Gly Ile Ile Arg Lys Thr Arg

100 105 110

Thr Val Met Glu Cys Leu His Arg Phe Cys Arg Glu Cys Ile Asp Lys

115 120 125

Ser Met Arg Leu Gly Asn Asn Glu Cys Pro Ala Cys Arg Thr His Cys

130 135 140

Ala Ser Arg Arg Ser Leu Arg Asp Asp Pro Asn Tyr Asp Ala Leu Ile

145 150 155 160

Ala Ala Leu Tyr Pro Asp Ile Asp Lys Tyr Glu Glu Glu Glu Leu Ala

165 170 175

Phe Asn Glu Glu Glu Asn Asp Arg Asn Lys Gln Ile Gln Ala Ser Ile

180 185 190

Ala Glu Ala Phe Arg Lys Gln Ser Glu Val Ile Gly Arg Lys Ser Thr

195 200 205

Ala Lys Ala Thr Ala Ala Ala Phe Val Arg Arg Ser Arg Arg Asn Ile

210 215 220

Arg Pro Asn Gly Gln Asn Thr Tyr Phe Arg Gly Arg Gly Lys Ala Ser

225 230 235 240

Ser Asp Asp Val Ala Leu Ala Cys Ser Glu Asp Glu Glu Asp Gly Asn

245 250 255

Gly Glu Ser Cys Ser Lys Glu Ala Ser Ser Ala Glu Glu Ser Ser Pro

260 265 270

Glu Lys Lys Gln Lys Arg Leu Pro Lys Trp Pro Thr Pro Arg Ser Ser

275 280 285

Pro Ala Arg Ala Cys Asn Asp Glu Val Ala Ser Asp Glu Lys Asp Asp

290 295 300

Val Gly Ile Ser Arg Glu Asn Phe Ser Thr Ser Pro Leu Arg Ala Trp

305 310 315 320

Gly Lys Asn Gly Thr Arg Ser Gln Thr Arg His Ser Ser Phe Ser Gly

325 330 335

Ser Asn Gly Arg Met Val Lys Gly Gly Arg Met Ile Lys Leu Val Glu

340 345 350

Cys Leu Arg Asn Ser Asp Asp Asn Glu Gly Glu Arg Asp Val His Leu

355 360 365

Cys Leu Leu Pro Leu Asp Gly Gln Thr Ala Pro Asn Leu Glu Lys Ser

370 375 380

Tyr Leu Cys Cys Gly Pro Thr Leu Ser Ile Lys Gln Leu Cys Gln Phe

385 390 395 400

Val Ala Ser Gln Thr Ser His Lys Asp Glu Glu Val Glu Met Tyr Ala

405 410 415

Leu Lys Pro Ser Cys Ser Lys Pro Val Ser Thr Asn Thr Cys Gly Pro

420 425 430

Asp Lys Ala Arg Leu Ala Gly Glu Glu Arg Leu Ser Asp Leu Arg Ser

435 440 445

Ser Phe Thr Phe Pro Asn Gly Val Leu Glu Leu Val Tyr Ala Ile Lys

450 455 460

Val Ala Asn

465

<210> 2

<211> 7583

<212> DNA

<213> Zea mays L.

<400> 2

aacaacgtcc cgctcaccca atgtgatgtt tggttaataa aatgtaatat aaataacaac 60

ggtaattatt tataatcgag tactagcggt aataaatttg aatagatccg tatcagtttt 120

ctagtgtgat atcttattac gattcttaaa caaatataat ttaacgttat aaattattca 180

ttacgttata aatatagaaa ctaaacgata ccaaagctcg ctcgttaaca ttccgtccgt 240

ggagctcgac cgacatgcat gtctggtacg acaaacaaga gaacaccctt ataattggaa 300

agtatccccg aaggcggctc cgctttgtct atactagtac taaacatgac taaaggtaat 360

aaatcatgat ccaaatattt ttttataatt tgtttaatat tttaattaat tttaattaaa 420

aataaataga aatatagtcg aaccttaatc tcatctttaa acttggtagc ataaaatttt 480

ttcattgcca accctacacg cgacacgtac gtacaacata gagagcgccg accgggcgcg 540

ggcgcgggcg cgacacgaac tcgccaacaa cccaaaccgg ctgcacccgc atctgcatcc 600

actcaaagcc aggaccagga gccgtagaaa aaccagccca agaggagaga gagagacctc 660

cgtgccagcc ccgccccacc tcgccgcctc tccacgcgac ctgctcgccg ctgccgccgg 720

cgccgcatca caaatgccca cccagaagcg cccgcctccg cctccgccac cctctccctc 780

cccctccgcg gcccctggcg ccggctcgcc ccctccctcg tctccgccgc tgccgacggc 840

cgagcccgcg gagaagaagc ccaagctgga ggtgaacggc agcgccggcg ccgaagccaa 900

cggcaacgcc aacggtgagc tctcgttcgt tcgccttgct accctttcca cgccgacggc 960

gttcttctcc tcgatcccca cgcgctgatt ctgttttcct ctccgccctc ccacgttgtt 1020

tggctttgct cgcagatttc ggcgcgaagg aggggacgga ggtggaggcg tcggagtctg 1080

agtcggagga tgcggacgcc gcaaaacagg agtacgtgct cggacactcg tcaaccgtcc 1140

tgttgctcgc tttgccgctc tcctttcccc gtcgtcgtgg ttcctgatgc gtgctccaga 1200

tgcggcacct ttaagcggct actcgcgcgc gcgtttgatc cttgtcattg tccctttttt 1260

cagctctcgt gcctgagccg agcccgtcgt tttttcctaa ttgactatgg ctggccgctg 1320

atttctggag gactttatgt gggaagggag gcgacgagcc atagttgtat agcgtagttt 1380

gccctatttt ctacttactt ctgagaagcg gtatctctga ttttcgccgg tagcaagcaa 1440

cacaagatgt gcatatgcaa gtgcttgctg tagcgatcat ctgtttcata tttcttatat 1500

atcttattag cagagccagg ctgcctaagg ggtatgaact ctgaggcagt cgtgaactgt 1560

gctaaagttc tcaatccctg ttagggatga cactgcagta ttttccatgc atatacgagt 1620

agaatgaagt tgcttaactg ctagttatat attgatcgtg ttccttgttt aagaaaaaac 1680

tgttgaccct gcctctctcc cgcaacaaat ttcagctcac acatcgtatc gtcctttgtt 1740

catcgctact gtgtaactga acatggagtg taactttcaa tgtggactgc atcatccatt 1800

tttttactgt ttaataaata aggatgctag ctgtaatgtc tgagctccat ccacttatta 1860

attgaaacgt gctttatgaa cttggaagcc tattcagaat tggtaggttg aagcttttgg 1920

gctttggcat actggtaaaa cccaccatcc ctacttaatt agagctttga actaaagtgt 1980

ttttaaatgc atacagcttt agtctaactt ctaatatgca cactgatgta ctgtagtttc 2040

tctgtgttag tgatgagtat tgtgatgagg ttagcgaaca ttagcctttc cttttgtact 2100

ctcttttctc tgtgttggtg atgagtattg ctgtatgcat ctctgttaca gtatatgtgt 2160

atggctcttg cctgattttg ttgttacaca accaaatgca gaggacaaaa gcaaatgaaa 2220

ccacaattga gtggttgttt gtaacattca tcttcaactt agcataggat gccaggataa 2280

tgccaggtca catggcatag gtctgatttt tcttgtcaga aatatcataa tgcaagctgc 2340

ctacttagga tttagatgga tcattcattc acagagaaag ggaaaaaaag gttaactctt 2400

tgatttttac ttgtaattgg ggttgagctt gagcaatgtt gtttgccttt ggacttcaga 2460

cgacagattt tacaatgtgt ttgcctagga tattaggttt cttgaagtgt ataagtggat 2520

tgtctacctt ctcccaataa cttaagtttt tgggttgaac cggtacattc actctaacat 2580

gggtatcaaa gccagaggtc tcaagttcaa atcctggtag aggcttcatt tgtgtctctg 2640

tccctttatt tccacgtttg tgccttcctc tctgactgca tgtgagtgag ggtgttaaag 2700

tgtataagtg gattgcctac tttctcccaa caacttaaag cttttgggtt gaactggtta 2760

gtgcgtccac tttaacaatg ttctcataat ttctatcaag ttgataaact atttgttcgc 2820

ttaagtcatt tttacatgca tgaactgaaa tgaaagccag atggagtgta tcaggcagga 2880

tacatgatta gtcctgaaca tacaacgaaa tagcctctac ttgagttgat taggtggctt 2940

aagtagcact cctccgttcc taggttcgac ttctgtggga gtgaatttta aggctggggt 3000

taagaaagtc ccctcatttg tcccacacta aagcctaggg gggttatggt tggtctggtc 3060

gtggtcgtga attttaaggc ttggtctggt cgtggttgtt ctcacatggg ctacaatgct 3120

gttgtatatg tgtggaggag gggttagggg ggtctcttag cttatgtgag gttgtcttta 3180

caatgcaatg cctacccctt gcagtccgag tttttttagt tctgaacata cagctccttt 3240

ctaagctcca tctgattctc aaattgcatc tttagcacca ccttgtgtaa gcatacatga 3300

tccattctag agtaatctag tgcttcacct cattttttaa attttattat attatgttca 3360

ttttctcttc ctttcccgcc cattatagcg ttttgacact tgcactgata cctgcaggtt 3420

tgtaccagta aaattatctg atgtacgcaa agaagtgcag tgtcccatat gcttaggtac 3480

ctacacaaat gcaaacaatg gataagaatt tccttgtcaa aaagataaga attttcttgg 3540

catgccatat attacgagct agaaccaatg gatggaacat attttagtca tgcttaacta 3600

aaactaactt tgttcattcc agtagtaaat aatggtttct gtgaagcttt tagttttcca 3660

ttttaaattt tgtagctttt tttagccaat atgtttttta acagaaagat gttgcttgcc 3720

gatataactc cttgtcaatt tcattcttga tgtcatacaa aaactctgta aacatgttgc 3780

ataattaaat atcaacttta atttactgat tgtggaacca tcttatgctg ctaggcatca 3840

tccggaagac tagaacagtt atggaatgcc tgcaccggtt ctgtagggaa tgcattgaca 3900

aatccatgcg acttgggtaa tatacaacta ttgtatgcca ttgtcattgt gtttttttgg 3960

tttctaagtt aagacttaca attctcttat ttttgttcta tattgtatcc catgcatcac 4020

tgcatgtttc tttgcatgta tatcccatgt tgagtagcac agtattgtta ctaacatatc 4080

cctttgccat aaaggaacaa cgagtgtcca gcgtgccgca cacactgtgc gagccggcgt 4140

tctttgagag atgatccgaa ttatgatgcc ttgattgcag ctctatatcc agatattgac 4200

aaatatgaag aagaggtatt gtatttggta tttgtttatt cacattaaga gattgatcct 4260

agtaaatgtt tctgcattgt cccatgtcca ggagctagcg ttcaacgaag aggagaatga 4320

ccgcaacaag caggtttttt tctatttctg tttgctgcta tcagtttttt cccttctcat 4380

tttaatataa tgatacgcaa aaaagacttg cctcggttat tccttcccta gaccctgctc 4440

atgtgggagt tgccgacact gggtctgtcc cttttttttc atgtgcatca gttgtgggct 4500

tgtggtgttc cgcaccaaat attctccatc aattttgaca tgatctctga acctgttaac 4560

ctgttttaaa agaatactgt gatatgattc cctggtagat ctcgtaggat agttttgtcc 4620

catgtgagcc tttcctacat tagcattttg tcaatgggta gtaggaaaga tcccagctaa 4680

atttcatttc taagggataa aatttggtca gctctgttac cccccccccc cggttttgct 4740

cctttcaaaa gaaaatgttt tgatgtgccc aagcatcaat agacaggtgc cctgcaatct 4800

cttggactaa gttgacatca tagcattgag caggttgttt gatccaactg cacttcttgc 4860

aaaagaataa taataagtta atgacagata acttcataaa gttcttcaaa aataaagaga 4920

atttcatgaa cgaaaaatga aatagaacaa ttattttcat gttaactttg ttagtggcag 4980

aaattcatta tattatttgg aactgtaatc tgtaaagcat gctcttcgtt ccaatgaata 5040

taaacttatg ttagctacat gaatagtgga ttcatgaaat taccaactat gtcctaccct 5100

ggctacaaag tggtgataag aaaccttttt ctccaagaac ccaggaactt tgttttgatg 5160

tctgtgcata tgcaaatgct cttgtattca agtctaacac ctataaagac ccgagctaat 5220

gattgacata tttgtatgca tctgcccttt tatttcctct gtctattttt acattgaact 5280

taagttcatt ttcctgatta atgtgcatgt gaagattcaa gcatccattg ctgaggcttt 5340

tcggaaacaa tcagaagtta ttgggcggaa gtctactgcc aaagctactg ctgctgcatt 5400

tgtaagaaga tcacgccgta acattcggcc taatgggcag aatacctatt tccgtggccg 5460

aggaaaagcc agttctgatg acgttgctct ggcctgttct gaagatgaag aggatggaaa 5520

cggtgaaagc tgtagcaaag aggcctcatc tgcggaggag agttccccag agaaaaagca 5580

gaaacgactg ccaaaatggc caacaccgcg ttcttcacct gcccgagcat gcaatgatga 5640

ggttgcttct gatgaaaagg atgatgtagg aatatccagg gaaaatttca gcacatctcc 5700

tctacgagca tggggaaaga atggcactcg cagtcagact cgccacagta gcttcagtgg 5760

ttcaaatggc aggatggtca agggtgggcg catgatcaag ttggttgagt gcttgcgaaa 5820

ttctgacgac aatgaaggcg aggtgaacac aaaagtgcac gtgatatgtt tccttgttta 5880

ttggagtgtt gcattgctta gttactaact ttatttgaca gcgtgatgta catctttgtc 5940

tgcttccact tgatggacaa acggcaccaa atctggagaa gtcatatctg tgttgcggcc 6000

caactctgtc catcaaacaa ctttgtcagg tcagtacttg ttgaaacact tgtgtccatc 6060

gtcagaaatc agaacttaca gacgaatgtc tctgtgtagt ttgtcgccag tcagacatct 6120

cacaaagatg aagaagttga gatgtatgcg ctgaagcctt cttgtagcaa gcctgtcagc 6180

actaatacat gcggtcctga caaagcaagg ctcgcagggg aggaacgcct ttcagacttg 6240

cgctcctcgt tcacatttcc taatggggtt ctggtgagat caaacactta gattatctga 6300

ttagacccgt tcacgtttat tctaaatgtt atactcttca tttcaggagc tggtgtatgc 6360

cataaaagtg gctaactaga tgctgagtga aggcccatta gttcaaatgg aagtgttttt 6420

tgtttataca tatcttcatc gtgatccctt gacgaaatga caggtttggg ctcttgaata 6480

caacttggaa ggaaaaaaaa cgttggggga gactagttgt tgtataatta gcttgtgaga 6540

tgtgagataa atgtgcgtac gttgtcaacg aatagtttca gaagagtcag attggcttcc 6600

acagttcacc tcgctgcaac ccaaaatctg gtctccactg ccggcatttg ggggaatttc 6660

tcggttgggt gaaggctgag ttatttcctc gagtggtcaa gttgttttac ttccacagtt 6720

caccagtttc agcttttgta attcatcggt tcatattctt caggcggcag ccagtccgtg 6780

ctgcgaacga cttcccagat acatgtaaca taaatcttat aaaaaatata tatgtaacag 6840

aaattacttt ttttgtcgtt tctttgtacg gcacaaggac agtcgtattt aaccttgagc 6900

tggttatacc agagtgttac tattttatta tatctgtact tatacaaact acaaggcaat 6960

gtattcttcc tttgcgaatg ttgttagcag gcagtttctt ccacacaaaa aaggtcgagt 7020

caacaatttt agaaaacaac gccgctacgc ccttgagaaa ctcgcatttt gcactgttta 7080

aaactgtgag atgctaggca ttacttctag ttaaaggata cacgctggtg ctgccctgag 7140

agtgtttcac gcgatctcag cgtcttacgc accgacgcgt gcgtgtgtgg taccgtctac 7200

acagcgtttc gtgcagttgg agccacgtcc accactgacc tgtctacctg tctcctccac 7260

cggcgacccg tcttctccca gcgacccgtc ttcttcgcgt ctgcgacacg ggctccgacg 7320

ggaacgcgcc ggcgtccgcg cttgaggacg gctgtcgtgc ctgcgggata ggggatcgct 7380

tcgtccacac gtgccccgac agtcgtgccg cgatatggac ggctcggacc tgggcctctg 7440

cgacacggcc tcccacggcg acgcgccggc gtccgcgcct gaggacggcc gtcgtgcctg 7500

cgagagagga gctggcttcg tccacgcctg ccccgggagt cgtgtcgcga cctggacggc 7560

tccgaccggg tcttccacga acg 7583

<210> 3

<211> 1404

<212> DNA

<213> Zea mays L.

<400> 3

atgcccaccc agaagcgccc gcctccgcct ccgccaccct ctccctcccc ctccgcggcc 60

cctggcgccg gctcgccccc tccctcgtct ccgccgctgc cgacggccga gcccgcggag 120

aagaagccca agctggaggt gaacggcagc gccggcgccg aagccaacgg caacgccaac 180

gatttcggcg cgaaggaggg gacggaggtg gaggcgtcgg agtctgagtc ggaggatgcg 240

gacgccgcaa aacaggagtt tgtaccagta aaattatctg atgtacgcaa agaagtgcag 300

tgtcccatat gcttaggcat catccggaag actagaacag ttatggaatg cctgcaccgg 360

ttctgtaggg aatgcattga caaatccatg cgacttggga acaacgagtg tccagcgtgc 420

cgcacacact gtgcgagccg gcgttctttg agagatgatc cgaattatga tgccttgatt 480

gcagctctat atccagatat tgacaaatat gaagaagagg agctagcgtt caacgaagag 540

gagaatgacc gcaacaagca gattcaagca tccattgctg aggcttttcg gaaacaatca 600

gaagttattg ggcggaagtc tactgccaaa gctactgctg ctgcatttgt aagaagatca 660

cgccgtaaca ttcggcctaa tgggcagaat acctatttcc gtggccgagg aaaagccagt 720

tctgatgacg ttgctctggc ctgttctgaa gatgaagagg atggaaacgg tgaaagctgt 780

agcaaagagg cctcatctgc ggaggagagt tccccagaga aaaagcagaa acgactgcca 840

aaatggccaa caccgcgttc ttcacctgcc cgagcatgca atgatgaggt tgcttctgat 900

gaaaaggatg atgtaggaat atccagggaa aatttcagca catctcctct acgagcatgg 960

ggaaagaatg gcactcgcag tcagactcgc cacagtagct tcagtggttc aaatggcagg 1020

atggtcaagg gtgggcgcat gatcaagttg gttgagtgct tgcgaaattc tgacgacaat 1080

gaaggcgagc gtgatgtaca tctttgtctg cttccacttg atggacaaac ggcaccaaat 1140

ctggagaagt catatctgtg ttgcggccca actctgtcca tcaaacaact ttgtcagttt 1200

gtcgccagtc agacatctca caaagatgaa gaagttgaga tgtatgcgct gaagccttct 1260

tgtagcaagc ctgtcagcac taatacatgc ggtcctgaca aagcaaggct cgcaggggag 1320

gaacgccttt cagacttgcg ctcctcgttc acatttccta atggggttct ggagctggtg 1380

tatgccataa aagtggctaa ctag 1404

Claims

1.RING1A蛋白在调控植物抗旱性中的应用；

所述RING1A蛋白是如下（a1）或（a2）：

（a1）序列表中序列1所示的蛋白质；

（a2）在（a1）所述蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；

所述调控为正调控，即所述RING1A蛋白含量增高使得植物的抗旱性增高；

所述植物为禾本科植物。

2.一种植物育种方法，包括如下步骤：增加目的植物中RING1A蛋白的含量，从而使植物抗旱性增高；所述RING1A蛋白为权利要求1中所述的RING1A蛋白；所述植物为禾本科植物。

3.一种培育转基因植物的方法，包括如下步骤：将编码RING1A蛋白的基因导入受体植物中，得到抗旱性增高的转基因植物；所述RING1A蛋白为权利要求1中所述的RING1A蛋白；所述植物为禾本科植物。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述编码RING1A蛋白的基因是如下（b1）或（b2）或（b3）的DNA分子：

（b1）编码区如序列表中序列3所示的DNA分子；

（b2）序列表中序列2中第734-6379位核苷酸所示的DNA分子；

（b3）序列表中序列2所示的DNA分子。

5.编码RING1A蛋白的基因或含有所述基因的重组载体或含有所述基因的表达盒的应用，为培育抗旱性增高的转基因植物；所述RING1A蛋白为权利要求1中所述的RING1A蛋白；所述植物为禾本科植物。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述基因是如下（b1）或（b2）或（b3）的DNA分子：

（b1）编码区如序列表中序列3所示的DNA分子；

（b2）序列表中序列2中第734-6379位核苷酸所示的DNA分子；

（b3）序列表中序列2所示的DNA分子。